CN110720039A - Lag-3阳性肿瘤的治疗 - Google Patents

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Abstract

本发明提供一种治疗人类患者中肿瘤的方法，所述方法包括(i)鉴定患者为患有LAG‑3阳性肿瘤并且(ii)向患者施用PD‑1途径抑制剂、PD1途径抑制剂和免疫检查点抑制剂组合、LAG‑3抑制剂和PD‑1途径抑制剂组合或抗CTLA4抗体。在一些实施方案中，该方法还包括鉴定患者为患有LAG‑3阳性PD‑L1阳性肿瘤。在一些实施方案中，LAG‑3抑制剂是抗‑LAG‑3抗体并且PD‑1途径抑制剂是抗‑PD‑1抗体。本发明的方法可以改善用PD‑1途径抑制剂、PD1途径抑制剂和免疫检查点抑制剂组合或LAG‑3抑制剂和PD‑1途径抑制剂组合治疗的反应率。

Description

LAG-3阳性肿瘤的治疗
相关申请的交叉引用
本申请要求2017年5月30日提交的美国临时申请号62/512,648；2017年6月1日提交的美国临时申请号62/513,813；2017年9月7日提交的美国临时申请号62/555,176；和2017年11月6日提交的美国临时申请号62/582,178的优先权，所述文献通过引用方式完整并入本文。
技术领域
本文公开的发明涉及用PD-1途径抑制剂、PD1途径抑制剂和免疫检查点抑制剂组合、LAG-3抑制剂和PD-1途径抑制组合剂或抗-CTLA-4抗体的组合治疗人类患者中LAG-3阳性恶性肿瘤的方法。
发明背景
淋巴细胞活化基因3(LAG-3或CD223)是一种I型跨膜蛋白，其在活化的CD4+和CD8+T细胞以及NK和树突状细胞的子集的细胞表面上表达(Triebel F.等人，J.Exp.Med.1990；171：1393-1405；Workman CJ等人，J.Immunol.2009；182(4)：1885-91)。LAG-3与CD4密切相关，而CD4是T辅助细胞激活的辅助受体。这两种分子均具有4个细胞外Ig样结构域，并需要结合其配体(主要组织相容性复合体(MHC)II类)以发挥其功能活性。与CD4不同，LAG-3仅在活化的T细胞的细胞表面表达，并且其从细胞表面的切割终止了LAG-3信号传导。LAG-3还能被发现是可溶性蛋白，但它不结合II类MHC，且可溶性LAG-3的功能尚不清楚。
据报道，LAG-3在促进调节性T细胞(Treg)活性和下调T细胞活化和增殖中起重要作用(Workman CJ等人，J.Immunol.2005；174：688-695)。天然的和诱导的Treg都表达增加的LAG-3，这是其最大抑制功能所必需的(Camisaschi C.等人，J.Immunol.2010；184：6545-6551和Huang CT等人，Immunity.2004；21：503-513)。此外，LAG-3在CD4+效应器T细胞上的异位表达降低了它们的增殖能力，并赋予它们对抗第三方T细胞的调节潜力(Huang C.T.，等人，Immunity.2004；21：503-513)。最近的研究还显示，在耗竭的淋巴细胞性脉络膜脑膜炎病毒(LCMV)-特异性CD8+T细胞上的高LAG-3表达导致它们无响应状态，并限制了CD8+T细胞的抗肿瘤响应(Blackburn SD等人，Nat.Immunol.2009；10：29-37和Grosso JF等人，J.Clin.Invest.2007；117：3383-3392)。实际上，在两个鼠模型中LAG-3通过对CD8+T细胞的直接作用维持了对自身和肿瘤抗原的耐受性(Grosso J.F.等人，J.Clin.Invest.2007；117：3383-3392)。
然而，在肿瘤形成和肿瘤复发背景下观察到的免疫耐受性似乎由多种T细胞负向调节受体的共表达介导，并非单纯来自LAG-3。来自慢性病毒性感染模型(Blackburn S D等人,Nat.Immunol.2009；10:29-37；Grosso J F等人,J.Clin.Invest.2007；117:3383-3392和Lyford-Pike S等人,Cancer Res.2013；73(6):1733-41)、敲除小鼠(Woo S R等人,Cancer Res.2012；72:917-927；Okazaki T等人,J.Exp Med.2011；208:395-407和BettiniM.等人,J.Immunol.2011；187:3493-3498)、肿瘤复发模型(Goding S R等人,J.Immunol.2013；190(9):4899-4909)以及更有限程度地，来自人类癌症患者(Goding S R等人,J.Immunol.2013；190(9):4899-4909；Matsuzaki J等人,Proc.Natl.Acad.Sci.,USA.2010；107:7875-7880和Gandhi M K等人,Blood.2006；108:2280-2289)的数据支持这样的模型，其中连续暴露于抗原的T细胞通过称作“耗竭”的过程，变得逐渐失活。耗竭的T细胞的特征在于表达T细胞负向调节受体，优势地表达细胞毒T淋巴细胞抗原-4(CTLA-4)、程序性细胞死亡1(PD-1)和LAG-3，所述受体的作用是限制细胞增殖、产生细胞因子和杀伤靶细胞和/或增加Treg活性的能力。但是，尚未充分表征在肿瘤形成和复发中这些分子表达的时序和顺序。
PD-1是细胞表面信号传导受体，其在T细胞活化和耐受的调节中起关键作用(KeirME等人，Annu.Rev.Immunol.2008；26：677-704)。它是一种I型跨膜蛋白，并与BTLA、CTLA-4，ICOS和CD28一起构成T细胞共刺激受体的CD28家族。PD-1主要在活化的T细胞、B细胞和髓样细胞上表达(Dong H.等人，Nat.Med.1999；5：1365-1369)。它还在自然杀伤(NK)细胞上表达(Terme M.等人，Cancer Res.2011；71：5393-5399)。PD-1与其配体PD-L1和PD-L2的结合导致近端细胞内免疫受体酪氨酸抑制域中的酪氨酸残基磷酸化，随后募集磷酸酶SHP-2，最终导致下调T细胞的活化。PD-1的一项重要作用是在感染后的炎症反应时限制外周组织中T细胞的活性，从而限制自身免疫的发展(Pardoll DM，Nat.Rev.Cancer 2012；12：252-264)。这种负调节作用的证据来自以下发现：PD-1缺陷的小鼠发展为狼疮样自身免疫性疾病，包括关节炎和肾炎，以及心肌病(Nishimura H.，等人，Immunity，1999；11：141-151；和Nishimura H.等人，Science，2001；291：319-322)。在肿瘤环境中，结果是在肿瘤微环境内免疫抵抗的发展。PD-1在浸润肿瘤的淋巴细胞上高度表达，并且其配体在许多不同肿瘤的细胞表面上被上调(Dong H.等人，Nat.Med.2002；8：793-800)。多种鼠类癌症模型表明，配体与PD-1的结合可导致免疫逃逸。另外，阻断该相互作用导致抗肿瘤活性(Topalian S.L.等人，NEJM 2012；366(26)：2443-2454；Hamid O.等人，NEJM 2013；369：134-144)。此外，已经显示，在临床前模型中，抑制PD-1/PD-L1相互作用介导了有效的抗肿瘤活性(美国专利号8,008,449和7,943,743)。
最近，几种免疫检查点途径抑制剂已经开始提供治疗癌症的新免疫治疗方案，包括开发与细胞毒T淋巴细胞抗原-4(CTLA-4)结合并抑制其的抗体分子(Ab)(伊匹木单抗)以治疗晚期黑素瘤患者、开发与程序性死亡-1(PD-1)受体特异性结合并阻断抑制性PD-1/PD-1配体途径的抗体如纳武单抗(nivolumab)和派姆单抗(pembrolizumab)(前称lambrolizumab；USAN理事会声明，(2013)派姆单抗：USAN理事会2013年11月27日采纳的非专有性药品声明(ZZ-165))和开发特异性结合LAG-3并能够刺激免疫应答的抗体分子(BMS-986016)(如美国专利号9,505,839中所述)。
个体化医疗新兴领域的前景是，药物基因组学进展将日益地用来针对限定的子人群并最终针对个体患者定制治疗剂，旨在增强疗效并最大限度减少不良作用。最近的成功例如包括开发甲磺酸伊马替尼
Figure BDA0002298562630000022
(一种抑制bcr-abl酪氨酸激酶的蛋白质酪氨酸激酶抑制剂)以治疗费城染色体阳性慢性髓性白血病(CML)；开发克唑替尼以治疗5％表达突变体间变性淋巴瘤激酶(ALK)基因的晚期非小细胞肺癌患者；和开发威罗菲尼
Figure BDA0002298562630000024
(一种在约半数黑素瘤肿瘤中表达的突变型B-RAF蛋白的抑制剂(V600E-BRAF))。但是，不同于临床开发靶向选择癌症群体中存在的离散性激活性突变的小分子药物，癌症免疫治疗中的特殊挑战是鉴定能够实现患者选择并指导治疗期间管理的预测性生物标记。因此，本发明的目的是提供用于治疗肿瘤的改进方法。
发明概述
本文公开的一个本发明方面涉及一种在人类患者中选择恶性肿瘤供PD-1途径抑制剂、LAG-3抑制剂、PD1途径抑制剂和免疫检查点抑制剂组合或LAG-3抑制剂和PD-1途径抑制剂组合治疗的方法。在一些实施方案中，该方法包括检测肿瘤中的LAG-3表达。在一些实施方案中，该方法包括检测肿瘤中的LAG-3表达和PD-L1表达。本文还公开了治疗人类患者中LAG-3阳性肿瘤方法，所述方法包括施用LAG-3抑制剂和PD-1途径抑制剂。
本文公开的一个本发明方面涉及选择人类患者中的恶性肿瘤用于免疫治疗的方法，所述方法包括：确定肿瘤样品中的LAG-3表达水平；并且如果肿瘤是LAG-3阳性肿瘤，则选择肿瘤用于免疫治疗。本文公开的另一个本发明方面涉及一种鉴定人类患者中的恶性肿瘤为符合免疫治疗资格的方法，所述方法包括：确定肿瘤样品中的LAG-3表达水平；并且如果肿瘤是LAG-3阳性肿瘤，则鉴定肿瘤为符合免疫治疗资格。本文公开的另一个本发明方面涉及一种鉴定人类患者中可能对免疫治疗有反应的恶性肿瘤的方法，所述方法包括：确定肿瘤样品中的LAG-3表达水平；并且如果肿瘤是LAG-3阳性肿瘤，则鉴定肿瘤为可能对治疗有反应。本文公开的另一个本发明方面涉及一种将人类患者中的恶性肿瘤划分为可能对免疫治疗有反应的方法，所述方法包括：确定肿瘤样品中的LAG-3表达水平；并且如果肿瘤是LAG-3阳性肿瘤，则将肿瘤划分为可能对免疫治疗有反应。在一些实施方案中，本文公开的方法还包括确定肿瘤样品中的PD-L1表达水平。在一些实施方案中，免疫治疗包括使肿瘤与治疗有效量的LAG-3抑制剂和PD-1途径抑制剂接触。在一些实施方案中，免疫治疗包括使肿瘤与治疗有效量的LAG-3抑制剂接触。在一些实施方案中，免疫治疗包括使肿瘤与治疗有效量的PD-1途径抑制剂接触。在一些实施方案中，免疫治疗包括使肿瘤与治疗有效量的PD-1途径抑制剂和免疫检查点抑制剂接触。在一些实施方案中，本文公开的方法包括使肿瘤与治疗有效量的LAG-3抑制剂和PD-1途径抑制剂接触。在一些实施方案中，本文公开的方法包括使肿瘤与治疗有效量的LAG-3抑制剂接触。在一些实施方案中，本文公开的方法包括使肿瘤与治疗有效量的PD-1途径抑制剂接触。在一些实施方案中，本文公开的方法包括使肿瘤与治疗有效量的PD-1途径抑制剂和免疫检查点抑制剂接触。在一些实施方案中，本文公开的方法包括向患者施用治疗有效量的LAG-3抑制剂和PD-1途径抑制剂。在一些实施方案中，本文公开的方法包括向患者施用治疗有效量的LAG-3抑制剂。在一些实施方案中，本文公开的方法包括向患者施用治疗有效量的PD-1途径抑制剂。在一些实施方案中，本文公开的方法包括向患者施用治疗有效量的PD-1途径抑制剂和免疫检查点抑制剂。
本文公开的另一个本发明方面涉及一种鉴定可能对免疫治疗有反应的恶性肿瘤患者的方法，所述方法包括：确定肿瘤样品中的LAG-3表达水平；并且如果肿瘤是LAG-3阳性肿瘤，则鉴定该患者可能对治疗有反应。本文公开的另一个本发明方面涉及一种选择恶性肿瘤患者用于免疫治疗的方法，所述方法包括：确定肿瘤样品中的LAG-3表达水平；并且如果肿瘤是LAG-3阳性肿瘤，则选择该患者用于免疫治疗。在一些实施方案中，本文公开的方法还包括确定肿瘤样品中的PD-L1表达水平。在一些实施方案中，本文公开的方法包括向患者施用治疗有效量的LAG-3抑制剂和PD-1途径抑制剂。在一些实施方案中，本文公开的方法包括向患者施用治疗有效量的LAG-3抑制剂。在一些实施方案中，本文公开的方法包括向患者施用治疗有效量的PD-1途径抑制剂。在一些实施方案中，本文公开的方法包括向患者施用治疗有效量的PD-1途径抑制剂和免疫检查点抑制剂。
本文公开的另一个本发明方面涉及一种治疗人类患者中恶性肿瘤的方法，所述方法包括：向患者施用治疗有效量的LAG-3抑制剂和PD-1途径抑制剂；其中基于患者的肿瘤样品中的LAG-3表达，预测患者对LAG-3抑制剂和PD-1途径抑制剂治疗反应。本文公开的另一个本发明方面涉及一种治疗人类患者中恶性肿瘤的方法，所述方法包括：向患者施用治疗有效量的LAG-3抑制剂；其中基于患者的肿瘤样品中的LAG-3表达情况，预测患者对LAG-3抑制剂治疗反应。本文公开的另一个本发明方面涉及一种治疗人类患者中恶性肿瘤的方法，所述方法包括：向患者施用治疗有效量的PD-1途径抑制剂；其中基于患者的肿瘤样品中的LAG-3表达，预测患者对PD-1途径抑制剂治疗反应。本文公开的另一个本发明方面涉及一种治疗人类患者中恶性肿瘤的方法，所述方法包括：向患者施用治疗有效量的PD-1途径抑制剂和免疫检查点抑制剂；其中基于患者的肿瘤样品中的LAG-3表达，预测患者对PD-1途径抑制剂和免疫检查点抑制剂治疗反应。在一些实施方案中，基于患者的肿瘤样品中的LAG-3和PD-L1表达，预测患者对治疗反应。
本文公开的另一个本发明方面涉及一种治疗有需要的人类患者中恶性肿瘤的方法，所述方法包括：确定肿瘤样品中的LAG-3表达水平；并且如果肿瘤是LAG-3阳性肿瘤，则向患者施用治疗有效量的LAG-3抑制剂和PD-1途径抑制剂。本文公开的另一个本发明方面涉及一种治疗有需要的人类患者中恶性肿瘤的方法，所述方法包括：确定肿瘤样品中的LAG-3表达水平；并且如果肿瘤是LAG-3阳性肿瘤，则向患者施用治疗有效量的LAG-3抑制剂。本文公开的另一个本发明方面涉及一种治疗有需要的人类患者中恶性肿瘤的方法，所述方法包括：确定肿瘤样品中的LAG-3表达水平；并且如果肿瘤是LAG-3阳性肿瘤，则向患者施用治疗有效量的PD-1途径抑制剂。本文公开的另一个本发明方面涉及一种治疗有需要的人类患者中恶性肿瘤的方法，所述方法包括：确定肿瘤样品中的LAG-3表达水平；并且如果肿瘤是LAG-3阳性肿瘤，则向患者施用治疗有效量的PD-1途径抑制剂和免疫检查点抑制剂。在一些实施方案中，本文公开的方法还包括确定肿瘤样品中的PD-L1表达水平。
本文公开的另一个本发明方面涉及一种用于治疗有需要的人类患者中恶性肿瘤的方法，所述方法包括向患者施用治疗有效量的LAG-3抑制剂和PD-1途径抑制剂，其中在施用之前，鉴定患者为患有LAG-3阳性恶性肿瘤。本文公开的另一个本发明方面涉及一种用于治疗有需要的人类患者中恶性肿瘤的方法，所述方法包括向患者施用治疗有效量的LAG-3抑制剂，其中在施用之前，鉴定患者为患有LAG-3阳性恶性肿瘤。本文公开的另一个本发明方面涉及一种用于治疗有需要的人类患者中恶性肿瘤的方法，所述方法包括向患者施用治疗有效量的PD-1途径抑制剂，其中在施用之前，鉴定患者为患有LAG-3阳性恶性肿瘤。本文公开的另一个本发明方面涉及一种用于治疗有需要的人类患者中恶性肿瘤的方法，所述方法包括向患者施用治疗有效量的PD-1途径抑制剂和免疫检查点抑制剂，其中在施用之前，鉴定患者为患有LAG-3阳性恶性肿瘤。在一些实施方案中，在施用之前，鉴定患者为患有LAG-3阳性、PD-L1阳性恶性肿瘤。在一些实施方案中，在施用之前，鉴定患者为患有LAG-3阳性、PD-L1阴性恶性肿瘤。
本文公开的另一个本发明方面涉及一种用于治疗有需要的人类患者中恶性肿瘤的方法，所述方法包括：鉴定患者为患有LAG-3阳性恶性肿瘤；并且向患者施用治疗有效量的LAG-3抑制剂和PD-1途径抑制剂。本文公开的另一个本发明方面涉及一种用于治疗有需要的人类患者中恶性肿瘤的方法，所述方法包括：鉴定患者为患有LAG-3阳性恶性肿瘤；并且向患者施用治疗有效量的LAG-3抑制剂。本文公开的另一个本发明方面涉及一种用于治疗有需要的人类患者中恶性肿瘤的方法，所述方法包括：鉴定患者为患有LAG-3阳性恶性肿瘤；并且向患者施用治疗有效量的PD-1途径抑制剂。本文公开的另一个本发明方面涉及一种用于治疗有需要的人类患者中恶性肿瘤的方法，所述方法包括：鉴定患者为患有LAG-3阳性恶性肿瘤；并且向患者施用治疗有效量的PD-1途径抑制剂和免疫检查点抑制剂。在一些实施方案中，本文公开的方法还包括鉴定患者为患有LAG-3阳性PD-L1阳性恶性肿瘤。在一些实施方案中，本文公开的方法还包括鉴定患者为患有LAG-3阳性PD-L1阴性恶性肿瘤。
本文公开的另一个本发明方面涉及一种用于延长罹患恶性肿瘤的人类患者中无进展生存期超过12个月的方法，所述方法包括向患者施用LAG-3抑制剂和PD-1途径抑制剂，其中在施用之前，鉴定患者为患有LAG-3阳性恶性肿瘤并且其中患者展示无进展生存超过12个月。本文公开的另一个本发明方面涉及一种用于延长罹患恶性肿瘤的人类患者中无进展生存期超过12个月的方法，所述方法包括向患者施用LAG-3抑制剂，其中在施用之前，鉴定患者为患有LAG-3阳性恶性肿瘤并且其中患者展示无进展生存超过12个月。本文公开的另一个本发明方面涉及一种用于延长罹患恶性肿瘤的人类患者中无进展生存期超过12个月的方法，所述方法包括向患者施用PD-1途径抑制剂，其中在施用之前，鉴定患者为患有LAG-3阳性恶性肿瘤并且其中患者展示无进展生存超过12个月。本文公开的另一个本发明方面涉及一种用于延长罹患恶性肿瘤的人类患者中无进展生存期超过12个月的方法，所述方法包括向患者施用PD-1途径抑制剂和免疫检查点抑制剂，其中在施用之前，鉴定患者为患有LAG-3阳性恶性肿瘤并且其中患者展示无进展生存超过12个月。在一些实施方案中，在施用之前，鉴定患者为患有LAG-3阳性、PD-L1阳性恶性肿瘤。在一些实施方案中，在施用之前，鉴定患者为患有LAG-3阳性、PD-L1阴性恶性肿瘤。在一些实施方案中，在施用后，延长患者的无进展生存超过约13个月、约14个月、约15个月、约16个月、约17个月、约18个月、约2年、约3年、约4年、约5年、约6年、约7年、约8年、约9年或约10年。在某些实施方案中，延长患者的无进展生存超过14个月。
本文公开的另一个本发明方面涉及一种用于减少罹患恶性肿瘤的人类患者中肿瘤大小至少10％的方法，所述方法包括向患者施用治疗有效量的LAG-3抑制剂和PD-1途径抑制剂，其中在施用之前，鉴定患者为患有LAG-3阳性恶性肿瘤并且其中与施用之前的肿瘤大小相比，施用减少肿瘤大小至少约10％、约20％、约30％、约40％、约50％、约60％、约70％、约80％、约90％或100％。本文公开的另一个本发明方面涉及一种用于减少罹患恶性肿瘤的人类患者中肿瘤大小至少10％的方法，包括向患者施用治疗有效量的LAG-3抑制剂，其中在施用之前，鉴定患者为患有LAG-3阳性恶性肿瘤并且其中与施用之前的肿瘤大小相比，施用减少肿瘤大小至少约10％、约20％、约30％、约40％、约50％、约60％、约70％、约80％、约90％或100％。本文公开的另一个本发明方面涉及一种用于减少罹患恶性肿瘤的人类患者中肿瘤大小至少达10％的方法，所述方法包括向患者施用治疗有效量的PD-1途径抑制剂，其中在施用之前，鉴定患者为患有LAG-3阳性恶性肿瘤并且其中与施用之前的肿瘤大小相比，施用减少肿瘤大小至少约10％、约20％、约30％、约40％、约50％、约60％、约70％、约80％、约90％或100％。本文公开的另一个本发明方面涉及一种用于减少罹患恶性肿瘤的人类患者中肿瘤大小至少10％的方法，所述方法包括向患者施用治疗有效量的PD-1途径抑制剂和免疫检查点抑制剂，其中在施用之前，鉴定患者为患有LAG-3阳性恶性肿瘤并且其中与施用之前的肿瘤大小相比，施用减少肿瘤大小至少约10％、约20％、约30％、约40％、约50％、约60％、约70％、约80％、约90％或100％。在一些实施方案中，在施用之前，鉴定患者为患有LAG-3阳性、PD-L1阳性恶性肿瘤。在一些实施方案中，在施用之前，鉴定患者为患有LAG-3阳性、PD-L1阴性恶性肿瘤。在一些实施方案中，本文公开的方法还包括在施用之前，鉴定患者为患有LAG-3阳性恶性肿瘤。在一些实施方案中，本文公开的方法还包括在施用之前，鉴定患者为患有LAG-3阳性PD-L1阳性恶性肿瘤。在一些实施方案中，本文公开的方法还包括在施用之前，鉴定患者为患有LAG-3阳性PD-L1阴性恶性肿瘤。在一些实施方案中，患者经历(i)无进展生存延长超过12个月，(ii)与施用之前的肿瘤大小相比，肿瘤大小减少至少约10％、约20％、约30％、约40％或约50％，或(iii)这两者。
本文公开的另一个本发明方面涉及一种用于增加其中每位均罹患恶性肿瘤的人类患者群体中癌症治疗的客观反应率到高于50％的方法，针对癌症治疗，所述方法包括向患者施用治疗有效量的LAG-3抑制剂和PD-1途径抑制剂，其中在施用之前，鉴定每位患者为患有LAG-3阳性恶性肿瘤并且其中客观反应率高于55％、60％、65％、70％或75％。本文公开的另一个本发明方面涉及一种用于增加其中每位均罹患恶性肿瘤的人类患者群体中癌症治疗的客观反应率到高于50％的方法，针对癌症治疗，所述方法包括向患者施用治疗有效量的LAG-3抑制剂，其中在施用之前，鉴定每位患者为患有LAG-3阳性恶性肿瘤并且其中客观反应率高于55％、60％、65％、70％或75％。本文公开的另一个本发明方面涉及一种用于增加其中每位均罹患恶性肿瘤的人类患者群体中癌症治疗的客观反应率到高于50％的方法，针对癌症治疗，所述方法包括向患者施用治疗有效量的PD-1途径抑制剂，其中在施用之前，鉴定每位患者为患有LAG-3阳性恶性肿瘤并且其中客观反应率高于55％、60％、65％、70％或75％。本文公开的另一个本发明方面涉及一种用于增加其中每位均罹患恶性肿瘤的人类患者群体中癌症治疗的客观反应率到高于50％的方法，针对癌症治疗，所述方法包括向患者施用治疗有效量的PD-1途径抑制剂和免疫检查点抑制剂，其中在施用之前，鉴定每位患者为患有LAG-3阳性恶性肿瘤并且其中客观反应率高于55％、60％、65％、70％或75％。在一些实施方案中，在施用之前，鉴定每位患者为患有LAG-3阳性PD-L1阳性恶性肿瘤。在一些实施方案中，在施用之前，鉴定每位患者为患有LAG-3阳性PD-L1阴性恶性肿瘤。
本文公开的另一个本发明方面涉及一种用于针对癌症治疗增加其中每位均罹患恶性肿瘤的人类患者群体中疾病控制率到高于50％的方法，包括向患者施用治疗有效量的LAG-3抑制剂和PD-1途径抑制剂，其中在施用之前，鉴定每位患者为患有LAG-3阳性恶性肿瘤并且其中客观反应率高于55％、60％、65％、70％或75％。本文公开的另一个本发明方面涉及一种用于针对癌症治疗增加其中每位均罹患恶性肿瘤的人类患者群体中疾病控制率到高于50％的方法，包括向患者施用治疗有效量的LAG-3抑制剂，其中在施用之前，鉴定每位患者为患有LAG-3阳性恶性肿瘤并且其中客观反应率高于55％、60％、65％、70％或75％。本文公开的另一个本发明方面涉及一种用于针对癌症治疗增加其中每位均罹患恶性肿瘤的人类患者群体中的疾病控制率到高于50％的方法，包括向患者施用治疗有效量的PD-1途径抑制剂，其中在施用之前，鉴定每位患者为患有LAG-3阳性恶性肿瘤并且其中客观反应率高于55％、60％、65％、70％或75％。本文公开的另一个本发明方面涉及一种用于针对癌症治疗增加其中每位均罹患恶性肿瘤的人类患者群体中的疾病控制率到高于50％的方法，包括向患者施用治疗有效量的PD-1途径抑制剂和免疫检查点抑制剂，其中在施用之前，鉴定每位患者为患有LAG-3阳性恶性肿瘤并且其中客观反应率高于55％、60％、65％、70％或75％。在一些实施方案中，在施用之前，鉴定每位患者为患有LAG-3阳性PD-L1阳性恶性肿瘤。在一些实施方案中，在施用之前，鉴定每位患者为患有LAG-3阳性PD-L1阴性恶性肿瘤。在一些实施方案中，中位反应持续时间是≥3个月、≥6个月、≥12个月或≥18个月。
在一些实施方案中，本文公开的方法还包括在施用之前，鉴定患者群体的每位患者为患有LAG-3阳性恶性肿瘤。在一些实施方案中，本文公开的方法还包括在施用之前，鉴定患者群体的每位患者为患有LAG-3阳性PD-L1阳性恶性肿瘤。在一些实施方案中，本文公开的方法还包括在施用之前，鉴定患者群体的每位患者为患有LAG-3阳性PD-L1阴性恶性肿瘤。在一些实施方案中，患者群体的每位患者进一步表征为(i)无进展生存延长超过12个月，(ii)与施用之前的肿瘤大小相比，肿瘤大小减少至少约10％、约20％、约30％、约40％或约50％或(iii)这两者。在一些实施方案中，患者群体包含至少约100、200、300、400、500、600、700、800、900或1000名患有LAG-3阳性恶性肿瘤的患者。
本文公开的另一个本发明方面涉及一种用于选择适于联合疗法的人类患者的方法，所述方法包括：鉴定患者为患有LAG-3阳性恶性肿瘤；并且医嘱医疗保健提供者向患者施用治疗有效量的LAG-3抑制剂和PD-1途径抑制剂。本文公开的另一个本发明方面涉及一种用于选择适于联合疗法的人类患者的方法，所述方法包括：鉴定患者为患有LAG-3阳性恶性肿瘤；并且医嘱医疗保健提供者向患者施用治疗有效量的LAG-3抑制剂。本文公开的另一个本发明方面涉及一种用于选择适于联合疗法的人类患者的方法，所述方法包括：鉴定患者为患有LAG-3阳性恶性肿瘤；并且医嘱医疗保健提供者向患者施用治疗有效量的PD-1途径抑制剂。本文公开的另一个本发明方面涉及一种用于选择适于联合疗法的人类患者的方法，所述方法包括：鉴定患者为患有LAG-3阳性恶性肿瘤；并且医嘱医疗保健提供者向患者施用治疗有效量的PD-1途径抑制剂和免疫检查点抑制剂。在一些实施方案中，本文公开的方法还包括鉴定患者为患有LAG-3阳性PD-L1阳性恶性肿瘤。在一些实施方案中，本文公开的方法还包括鉴定患者为患有LAG-3阳性PD-L1阴性恶性肿瘤。在一些实施方案中，施用治疗恶性肿瘤。
在一些实施方案中，鉴定患者为患有LAG-3阳性恶性肿瘤包括确定恶性肿瘤中的LAG-3表达。在一些实施方案中，鉴定患者为患有LAG-3阳性PD-L1阳性恶性肿瘤包括确定恶性肿瘤中的PD-L1表达。在一些实施方案中，鉴定患者为患有LAG-3阳性PD-L1阴性恶性肿瘤包括确定恶性肿瘤中的PD-L1表达。在一些实施方案中，通过查看能够确定LAG-3表达的测定法的结果，确定LAG-3表达。在一些实施方案中，通过查看能够检测LAG-3表达的免疫组织化学测定的结果，确定LAG-3表达。在一些实施方案中，通过查看能够确定PD-L1表达的测定法的结果，确定PD-L1表达。在一些实施方案中，通过查看能够检测PD-L1表达的免疫组织化学测定的结果，确定PD-L1表达。
在某些实施方案中，LAG-3阳性肿瘤包含至少约1％、至少约2％、至少约3％、至少约4％、至少约5％、至少约7％、至少约10％、至少约15％、至少约20％、至少约25％、至少约30％、至少约40％、至少约50％、至少约60％、至少约70％、至少约80％、至少约90％或100％表达LAG-3的细胞。在某些实施方案中，LAG-3阳性肿瘤包含至少约1％表达LAG-3的细胞。在某些实施方案中，LAG-3阳性肿瘤包含至少约5％表达LAG-3的细胞。在一些实施方案中，表达LAG-3的细胞包括肿瘤浸润型淋巴细胞。在某些实施方案中，表达LAG-3的细胞是总体数目的细胞。在其他实施方案中，细胞在细胞表面上表达LAG-3。
在一些实施方案中，恶性肿瘤选自肝癌、骨癌、胰腺癌、皮肤癌、口腔癌、头或颈癌、乳腺癌、肺癌(包括小细胞和非小细胞肺癌)、皮肤或眼内恶性黑素瘤、肾癌、子宫癌、卵巢癌、结直肠癌、结肠癌、直肠癌、肛区癌、胃癌、睾丸癌、子宫癌、输卵管癌、子宫内膜癌、子宫颈癌、阴道癌、外阴癌、非霍奇金淋巴瘤、食道癌、小肠癌、内分泌系统癌、甲状腺癌、甲状旁腺癌、肾上腺癌、软组织肉瘤、尿道癌、阴茎癌、儿童癌、淋巴细胞淋巴瘤、膀胱癌、肾或输尿管癌、肾盂癌、中枢神经系统(CNS)肿瘤、原发性CNS淋巴瘤、肿瘤血管生成、脊髓轴肿瘤、脑干胶质瘤、垂体腺瘤、Kaposi肉瘤、表皮样癌、鳞状细胞癌、环境所致癌(包括石棉诱导的那些癌症)、血液学恶性病，例如包括多发性骨髓瘤、B细胞淋巴瘤、霍奇金淋巴瘤/原发性纵隔B细胞淋巴瘤、非霍奇金淋巴瘤、急性髓样淋巴瘤、慢性髓性白血病、慢性淋巴样白血病、滤泡淋巴瘤、弥漫性大B细胞淋巴瘤、Burkitt淋巴瘤、免疫母细胞大细胞淋巴瘤、前体B淋巴母细胞淋巴瘤、套细胞淋巴瘤、急性淋巴母细胞性白血病、蕈样肉芽肿病、退行性大细胞淋巴瘤、T细胞淋巴瘤和前体T-淋巴母细胞淋巴瘤及其任意组合。
在一些实施方案中，恶性肿瘤选自黑素瘤、非小细胞肺癌(NSCLC)、人乳头瘤病毒(HPV)相关的肿瘤和胃腺癌。
在一些实施方案中，恶性肿瘤是NSCLC、病毒相关的癌相关肿瘤或胃腺癌。
在一些实施方案中，恶性肿瘤是黑素瘤、胃癌、胃食管结合部癌、非小细胞肺癌、膀胱癌、头颈鳞状细胞癌或肾细胞癌。
在一些实施方案中，恶性肿瘤是肺癌、黑素瘤、头颈鳞状细胞癌、肾癌、胃癌或肝细胞癌。
在一些实施方案中，LAG-3阳性恶性肿瘤是包含约1％或更多表达LAG-3的细胞的黑素瘤肿瘤。
在一些实施方案中，LAG-3阳性恶性肿瘤是包含约1％或更多表达LAG-3的细胞的胃癌肿瘤。
在一些实施方案中，恶性肿瘤抵抗免疫检查点抑制剂治疗。在一些实施方案中，恶性肿瘤抵抗用抗-PD-1抗体治疗。在一些实施方案中，恶性肿瘤抵抗用抗PD-L1抗体治疗。
本文公开的另一个本发明方面涉及一种用于治疗人类患者中黑素瘤的方法，所述方法包括：鉴定患者为患有LAG-3阳性黑素瘤；并且向患者施用治疗有效量的LAG-3抑制剂和PD-1途径抑制剂。在一些实施方案中，鉴定患者为患有LAG-3阳性黑素瘤包括确定黑素瘤肿瘤中的LAG-3表达。在一些实施方案中，通过查看能够确定LAG-3表达的测定法的结果，确定LAG-3表达。在一些实施方案中，通过能够检测LAG-3表达的免疫组织化学测定确定LAG-3表达。在一些实施方案中，本文公开的方法还包括鉴定患者为患有LAG-3阳性PD-L1阳性恶性肿瘤。在一些实施方案中，本文公开的方法还包括鉴定患者为患有LAG-3阳性PD-L1阴性恶性肿瘤。
本文公开的另一个本发明方面涉及一种用于治疗有需要的人类患者中黑素瘤的方法，所述方法包括向患者施用治疗有效量的LAG-3抑制剂和PD-1途径抑制剂，其中在施用之前，鉴定患者为患有LAG-3阳性黑素瘤。本文公开的另一个本发明方面涉及一种用于延长罹患黑素瘤的人类患者中无进展生存期到超过12个月的方法，所述方法包括向患者施用LAG-3抑制剂和PD-1途径抑制剂，其中在施用之前，鉴定患者为患有LAG-3阳性黑素瘤并且其中患者展示无进展生存超过12个月。在一些实施方案中，在施用之前，鉴定患者为患有LAG-3阳性、PD-L1阳性黑素瘤。在一些实施方案中，在施用之前，鉴定患者为患有LAG-3阳性、PD-L1阴性黑素瘤。
本文公开的另一个本发明方面涉及一种用于增加其中每位罹患黑素瘤的人类患者群体中癌症治疗的客观反应率到高于15％的方法，所述方法包括向患者施用治疗有效量的LAG-3抑制剂和PD-1途径抑制剂，其中在施用之前，鉴定每位患者为患有LAG-3阳性黑素瘤并且其中客观反应率高于15％。本文公开的另一个本发明方面涉及一种用于增加其中每位罹患黑素瘤的人类患者群体中癌症治疗的疾病控制率到高于70％的方法，所述方法包括向患者施用治疗有效量的LAG-3抑制剂和PD-1途径抑制剂，其中在施用之前，鉴定每位患者为患有LAG-3阳性黑素瘤并且其中客观反应率高于70％。在一些实施方案中，本文公开的方法还包括在施用之前，鉴定患者群体的每位患者为患有LAG-3阳性黑素瘤。在一些实施方案中，中位反应持续时间是≥3个月、≥6个月、≥12个月或≥18个月。在一些实施方案中，在施用之前，鉴定每位患者为患有LAG-3阳性PD-L1阳性黑素瘤。在一些实施方案中，在施用之前，鉴定每位患者为患有LAG-3阳性PD-L1阴性黑素瘤。
在一些实施方案中，黑素瘤抵抗免疫检查点抑制剂治疗。在一些实施方案中，黑素瘤抵抗用抗-PD-1抗体或抗PD-L1抗体治疗。
在一些实施方案中，确定LAG-3和/或PD-L1表达水平包括了提供从患者获得的供试组织样品，所述供试组织样品包含肿瘤细胞和/或肿瘤浸润型免疫细胞。在一些实施方案中，供试组织样品是肿瘤活检。在一些实施方案中，供试组织样品是福尔马林固定石蜡包埋(FFPE)的样品。
在一些实施方案中，确定过程包括检测供试组织样品中的LAG-3和/或PD-L1蛋白或RNA表达。
在一些实施方案中，通过分别能够检测供试组织样品中LAG-3和/或PD-L1蛋白水平的测定法检测LAG-3和/或PD-L1表达。
在一些实施方案中，通过免疫组织化学测定检测LAG-3和/或PD-L1表达。在一些实施方案中，免疫组织化学测定是单重分析(设计成检测/测量单一分析物(例如，抗原/抗体对)的存在的测定)。在一些实施方案中，免疫组织化学测定是多重测定(设计成同时或依次检测/测量多种分析物的测定)。在一些实施方案中，免疫组织化学测定包括使肿瘤样品与17B4、SP346、11E3、874501或EPR4392(2)抗人LAG-3单克隆抗体接触。在一些实施方案中，免疫组织化学测定包括使肿瘤样品与包含重链可变区和轻链可变区的抗-LAG-3抗体接触，所述重链可变区和轻链可变区分别包含SEQ ID NOs:3和5中所述的序列。
在一些实施方案中，免疫组织化学测定使用黑色或棕色生色原。在一些实施方案中，免疫组织化学测定使用红色生色原。在一些实施方案中，免疫组织化学测定使用蓝色生色原。在一些实施方案中，免疫组织化学测定使用绿色生色原。在一些实施方案中，免疫组织化学测定使用紫生色原。在某些实施方案中，免疫组织化学测定使用黄色生色原。
在一些实施方案中，在低放大率(例如，4倍或10倍)对免疫组织化学测定评分。在一些实施方案中，低放大率是约20倍。
在一些实施方案中，在高放大率对免疫组织化学测定评分。在一些实施方案中，高放大率是约40倍或更大(60倍、100倍)。
在一些实施方案中，通过图像分析软件对免疫组织化学测定评分。在一些实施方案中，由病理学家手工对免疫组织化学测定评分。
在一些实施方案中，对免疫组织化学测定评分包括评估供试组织样品中表达LAG-3的细胞的比例和/或评估供试组织样品中表达PD-L1的细胞的比例。在一些实施方案中，对免疫组织化学测定评分包括评估供试组织样品中表达LAG-3的肿瘤细胞的比例和/或评估供试组织样品中表达PD-L1的肿瘤细胞的比例。在一些实施方案中，对免疫组织化学测定评分包括评估供试组织样品中表达LAG-3的免疫细胞的比例和/或评估供试组织样品中表达PD-L1的免疫细胞的比例。在一些实施方案中，对免疫组织化学测定评分包括评估供试组织样品中表达LAG-3的T细胞的比例和/或评估供试组织样品中表达PD-L1的T细胞的比例。在一些实施方案中，对免疫组织化学测定评分包括评估供试组织样品中表达LAG-3的CD8+T细胞的比例和/或评估供试组织样品中表达PD-L1的CD8+T细胞的比例。在一些实施方案中，对免疫组织化学测定评分包括评估供试组织样品中表达LAG-3的CD4+T细胞的比例和/或评估供试组织样品中表达PD-L1的CD4+T细胞的比例。在一些实施方案中，对免疫组织化学测定评分包括评估供试组织样品中表达LAG-3的FOXP3+T细胞的比例和/或评估供试组织样品中表达PD-L1的FOXP3+T细胞的比例。
在一些实施方案中，将具有部分膜/胞质LAG-3定位的细胞评定为表达LAG-3的细胞。在一些实施方案中，将具有点样LAG-3定位的细胞评定为表达LAG-3的细胞。在一些实施方案中，将具有完整膜/胞质LAG-3定位的细胞评定为表达LAG-3的细胞。在一些实施方案中，将具有任何LAG-3定位模式的细胞评定为表达LAG-3的细胞。
在一些实施方案中，免疫组织化学测定是还包括检测肿瘤细胞的MHC II类表达的多重测定。在一些实施方案中，对免疫组织化学测定评分包括评估供试组织样品中表达MHCII类的细胞的比例。在一些实施方案中，对免疫组织化学测定评分包括评估供试组织样品中表达MHC II的非免疫细胞的比例。
在一些实施方案中，通过流式细胞术检测LAG-3和/或PD-L1蛋白表达。在一些实施方案中，从患者获得的供试组织样品包含肿瘤浸润型免疫细胞。在一些实施方案中，恶性肿瘤是血液恶性肿瘤并且组织样品包含循环型淋巴细胞。在一些实施方案中，流式细胞术是多重测定。在一些实施方案中，流式细胞术包括检测标记物表达，所述标记物包括LAG-3、PD-L1、CD4、CD8、FOXP3、MHC II类及其任意组合。
在一些实施方案中，对流式细胞术评分包括评估供试组织样品中表达LAG-3的T细胞的比例。在一些实施方案中，对流式细胞术评分包括评估供试组织样品中表达LAG-3的CD8+T细胞的比例。在一些实施方案中，对流式细胞术评分包括评估供试组织样品中表达LAG-3的CD4+T细胞的比例。在一些实施方案中，对流式细胞术评分包括评估供试组织样品中表达LAG-3的FOXP3+T细胞的比例。
在一些实施方案中，通过分别能够检测肿瘤样品中LAG-3和/或PD-L1 RNA水平的测定法检测LAG-3和/或PD-L1表达。在一些实施方案中，通过基于RT-PCR的测定法检测LAG-3和/或PD-L1表达。在一些实施方案中，评定基于RT-PCR的测定法包括相对于预定水平，评估供试组织样品中LAG-3和/或PD-L1 RNA表达的水平。
在一些实施方案中，LAG-3抑制剂是抗-LAG-3抗体或其抗原结合片段。在一些实施方案中，抗-LAG-3抗体是双特异性抗体。
在一些实施方案中，抗-LAG-3抗体或其抗原结合片段包含(a)重链可变区CDR1，其包含在SEQ ID NO:7中所述的序列；(b)重链可变区CDR2，其包含在SEQ ID NO:8中所述的序列；(c)重链可变区CDR3，其包含在SEQ ID NO:9中所述的序列；(d)轻链可变区CDR1，其包含在SEQ ID NO:10中所述的序列；(e)轻链可变区CDR2，其包含在SEQ ID NO:11中所述的序列；和(f)轻链可变区CDR3，其包含在SEQ ID NO:12中所述的序列。
在一些实施方案中，抗-LAG-3抗体或其抗原结合片段包含重链可变区和轻链可变区，所述重链可变区和轻链可变区分别包含SEQ ID NO:3和5中所述的序列。
在一些实施方案中，抗-LAG-3抗体是MK-4280(28G-10)、REGN3767、GSK2837781、IMP731(H5L7BW)、BAP050、IMP-701(LAG-525)、IMP321、FS-118、Sym022、TSR-033、MGD013、FS118或GSK2831781。
在一些实施方案中，PD-1途径抑制剂是抗-PD-1抗体或其抗原结合片段。在一些实施方案中，抗-PD-1抗体或其抗原结合片段包含(a)重链可变区CDR1，其包含在SEQ ID NO:23中所述的序列；(b)重链可变区CDR2，其包含在SEQ ID NO:24中所述的序列；(c)重链可变区CDR3，其包含在SEQ ID NO:25中所述的序列；(d)轻链可变区CDR1，其包含在SEQ ID NO:26中所述的序列；(e)轻链可变区CDR2，其包含在SEQ ID NO:27中所述的序列；和(f)轻链可变区CDR3，其包含在SEQ ID NO:28中所述的序列。
在一些实施方案中，抗-PD-1抗体或其抗原结合片段包含重链可变区和轻链可变区，所述重链可变区和轻链可变区分别包含SEQ ID NO:19和21中所述的序列。
在一些实施方案中，抗-PD-1抗体或其抗原结合片段包含重链和轻链，所述重链和轻链分别包含SEQ ID NO:17和18中所述的序列。
在一些实施方案中，抗-PD-1抗体是派姆单抗(pembrolizumab)(KEYTRUDA；MK-3475)、pidilizumab(CT-011)或纳武单抗(nivolumab)(OPDIVO；BMS-936558)。
在一些实施方案中，PD-1途径抑制剂是抗PD-L1抗体或其抗原结合片段。在一些实施方案中，抗PD-L1抗体是阿特朱单抗(atezolizumab)(Tecentriq或RG7446)、德瓦鲁单抗(durvalumab)(Imfinzi或MEDI4736)、阿维鲁单抗(avelumab)(Bavencio)或BMS-936559。
在一些实施方案中，PD-1途径抑制剂是抗PD-L2抗体或其抗原结合片段。
在一些实施方案中，免疫检查点抑制剂是CTLA-4拮抗剂、CD80拮抗剂、CD86拮抗剂、Tim-3拮抗剂、TIGIT拮抗剂、CD20拮抗剂、CD96拮抗剂、IDO1拮抗剂、STING拮抗剂、GARP拮抗剂、CD40拮抗剂、A2aR拮抗剂、CEACAM1(CD66a)拮抗剂、CEA拮抗剂、CD47拮抗剂、PVRIG拮抗剂、TDO拮抗剂、VISTA拮抗剂或KIR拮抗剂。
在一些实施方案中，该方法包括至少一个施用周期，其中所述周期是八周期间，其中对于至少一个周期的每者，将四剂抗-LAG-3抗体按3、20、80、160或240mg的剂量施用。
在一些实施方案中，该方法包括至少一个施用周期，其中所述周期是八周期间，其中对于至少一个周期的每者，将四剂抗-PD-1抗体按80或240mg的剂量施用。
在一些实施方案中，该方法包括至少一个施用周期，其中所述周期是八周期间，其中对于至少一个周期的每者，将四剂抗PD-L1抗体按3、20、80、160或240mg的剂量施用。
在一些实施方案中，该方法包括包括至少一个施用周期，其中所述周期是八周期间，其中对于至少一个周期的每者，将四剂抗-LAG-3抗体按3、20、80、160或240mg的剂量施用并且将四剂抗-PD-1抗体是按80或240mg的剂量施用。
在一些实施方案中，将抗-LAG-3抗体和抗-PD-1抗体按以下剂量施用：(a)3mg抗-LAG-3抗体和80mg抗-PD-1抗体；(b)3mg抗-LAG-3抗体和240mg抗-PD-1抗体；(c)20mg抗-LAG-3抗体和240mg抗-PD-1抗体；(d)80mg抗-LAG-3抗体和160mg抗-PD-1抗体；(e)80mg抗-LAG-3抗体和240mg抗-PD-1抗体；(f)160mg抗-LAG-3抗体和240mg抗-PD-1抗体，或(g)240mg抗-LAG-3抗体和240mg抗-PD-1抗体。
在一些实施方案中，将抗-LAG-3抗体和抗-PD-1抗体按80mg抗-LAG-3抗体和160mg抗-PD-1抗体的剂量施用。
在一些实施方案中，将抗-LAG-3抗体和抗-PD-1抗体按80mg抗-LAG-3抗体和240mg抗-PD-1抗体的剂量施用。
在一些实施方案中，将抗-LAG-3抗体和抗-PD-1抗体按160mg抗-LAG-3抗体和240mg抗-PD-1抗体的剂量施用。
在一些实施方案中，配制抗PD-1和抗-LAG-3抗体或其抗原结合片段供静脉内施用。
在一些实施方案中，将抗PD-1和抗-LAG-3抗体或其抗原结合片段配制在一起。在一些实施方案中，将抗PD-1和抗-LAG-3抗体或其抗原结合片段分开配制。
在一些实施方案中，治疗由多达12个周期组成。
在一些实施方案中，将抗-PD-1抗体或其抗原结合片段在每个周期的第1、第15、第29和第43天施用。
在一些实施方案中，抗-LAG-3抗体或其抗原结合片段在每个周期的第1、第15、第29和第43天施用。
在一些实施方案中，在施用抗-LAG-3抗体或其抗原结合片段之前，施用抗-PD-1抗体或其抗原结合片段。在一些实施方案中，在施用抗-PD-1抗体或其抗原结合片段之前约30分钟内，施用抗-LAG-3抗体或其抗原结合片段。在一些实施方案中，在施用抗-LAG-3抗体或其抗原结合片段之后，施用抗-PD-1抗体或其抗原结合片段。在一些实施方案中，在施用抗-LAG-3抗体或其抗原结合片段之前，施用抗-PD-1抗体或其抗原结合片段。在一些实施方案中，将抗-PD-1抗体或其抗原结合片段与抗-LAG-3抗体或其抗原结合片段同时施用。
在一些实施方案中，将抗-LAG-3抗体或其抗原结合片段和PD-1途径抑制剂作为一线治疗施用。在一些实施方案中，将抗-LAG-3抗体或其抗原结合片段和PD-1途径抑制剂作为二线治疗施用。
在一些实施方案中，本文公开的方法还包括施用至少一种额外的治疗剂。在一些实施方案中，至少一种额外的治疗剂是化疗剂。在一些实施方案中，至少一种额外的治疗剂是免疫检查点抑制剂。
在一些实施方案中，该方法产生至少一个治疗效果，所述治疗效果选自肿瘤的大小减少、转移性病灶的数目随时间推移减少、完全反应、部分反应和稳定疾病。
在一些实施方案中，抗-LAG-3抗体或其抗原结合片段和PD-1途径抑制剂的施用活化患者的T细胞。在一些实施方案中，抗-LAG-3抗体或其抗原结合片段和PD-1途径抑制剂的施用诱导患者的T细胞表达活化标记物。
在一些实施方案中，抗-LAG-3抗体或其抗原结合片段的施用导致占据患者的T细胞上至少约10％、至少约20％、至少约30％、至少约40％、至少约50％、至少约60％、至少约70％、至少约80％、至少约90％、至少约95％或约100％的LAG-3受体。在一些实施方案中，T细胞是CD8+T细胞。在一些实施方案中，T细胞是肿瘤浸润型T细胞。
在一些实施方案中，PD-1途径抑制剂包含抗-PD-1抗体或其抗原结合片段。
本文公开的另一个本发明方面涉及一种治疗罹患恶性肿瘤的患者的试剂盒，所述试剂盒包含：剂量范围从约0.1至约10mg/kg体重的抗-LAG-3抗体或其抗原结合片段；剂量范围从约0.1至约10mg/kg体重的抗-PD-1抗体或其抗原结合片段；和在本文所公开的的任何方法中使用抗-LAG-3抗体和抗-PD-1抗体或其抗原结合片段的说明。
本文公开的另一个本发明方面涉及一种治疗罹患恶性肿瘤的患者的试剂盒，所述试剂盒包含：剂量范围从约0.1至约10mg/kg体重的抗PD1抗体或其抗原结合片段；免疫检查点抑制剂的剂量；和在本文所公开的的任何方法中使用抗-PD-1抗体或其抗原结合片段和免疫检查点抑制剂的说明。
本文公开的另一个本发明方面涉及一种治疗罹患恶性肿瘤的患者的试剂盒，所述试剂盒包含：剂量范围从约0.1至约10mg/kg体重的抗-LAG-3抗体或其抗原结合片段；和在本文所公开的的任何方法中使用抗-LAG-3抗体或其抗原结合片段的说明。
本文公开的另一个本发明方面涉及一种治疗罹患恶性肿瘤的患者的试剂盒，所述试剂盒包含：剂量范围从0.1至10mg/kg体重的抗-PD-1抗体或抗原结合片段；和在本文所公开的的任何方法中使用抗-PD-1抗体或其抗原结合片段的说明。
本发明的一个方面涉及一种鉴定抵抗PD-1拮抗剂治疗的患者的方法，所述方法包括确定LAG-3表达水平，其中相对于PD-1拮抗剂治疗之前的LAG-3表达水平，PD-1拮抗剂治疗后增加的LAG-3表达水平表示患者抵抗PD-1拮抗剂疗法。本发明的另一个方面涉及一种鉴定面临变得抵抗PD-1拮抗剂治疗的风险的患者的方法，所述方法包括确定LAG-3表达水平，其中相对于PD-1拮抗剂治疗之前的LAG-3表达水平，PD-1拮抗剂治疗后增加的LAG-3表达水平表示患者面临变得抵抗PD-1拮抗剂疗法的风险。本发明的一些方面涉及一种鉴定可能对LAG-3疗法有反应的患者的方法，所述方法包括确定患者中的LAG-3表达水平，其中相对于PD-1拮抗剂治疗之前的LAG-3表达水平，PD-1拮抗剂治疗后增加的LAG-3表达水平表示患者可能对LAG-3疗法有反应。本发明的某些方面涉及一种选择患者供LAG-3疗法治疗的方法，所述方法包括确定患者中的LAG-3表达水平，其中相对于PD-1拮抗剂治疗之前的LAG-3表达水平，PD-1拮抗剂治疗后增加的LAG-3表达水平表示患者可能对LAG-3疗法有反应。在一个实施方案中，PD-1拮抗剂是PD-1抑制剂。在某些实施方案中，PD-1拮抗剂是PD-1抗体。在一些实施方案中，LAG-3疗法是LAG-3抑制剂。在具体的实施方案中，LAG-3疗法是抗-LAG-3抗体。在一个实施方案中，其中LAG-3疗法是联合疗法。在一个实施方案中，LAG-3联合治疗是抗-LAG-3抗体和抗-PD-1抗体的组合。
附图简述
图1.单重LAG-3免疫组织化学(IHC)样品中观察到的染色模式。
图2.在单重LAG-3IHC测定的样品中作为总肿瘤细胞比率的LAG-3+细胞频率分布。
图3A-B.(图3A)研究设计和终点。(图3B)在黑色素既往IO治疗扩大队列中患者的关键合格性标准。
图4.基线人口统计数据和疾病特征。
图5.既往治疗。
图6.前40份经历过IO治疗的黑素瘤的LAG-3表达状态。
图7.接受既往抗PD1/PD-L1疗法时进展的黑素瘤患者的依据研究者评估的反应。
图8.LAG-3表达针对反应而富集。
图9.依据LAG-3表达的反应深度和持续时间。
图10.无进展生存持续时间。
图11.基于基线特征的反应(研究者评估)。
图12.胃肿瘤样品的LAG-3表达状态。在单重IHC测定中使用1％截值，评定48％(10/21份)的样品为LAG-3阳性。
图13.对抗-LAG-3和抗-PD-1抗体组合治疗有反应的胃癌患者中目标病灶大小的变化。对治疗有反应的患者当中LAG-3阳性肿瘤富集。根据RECIST确定肿瘤反应。在这项研究中的患者先前尚未暴露于抗PD-1/PD-L1治疗。
图14.如通过单重IHC测定所确定的头颈鳞状细胞癌(SCCHN)、肾癌、肝细胞癌(HCC)和NSCLC肿瘤样品的LAG-3表达状态。
图15A和B.图15A.着色的黑素瘤切片。在漂白或不漂白情况下用苏木精复染胞核。图15B.在先前漂白或无先前漂白情况下着色的黑素瘤LAG-3IHC。用苏木精复染胞核。
图16.研究设计和终点更新。
图17.基线人口统计数据和疾病特征更新。
图18.既往疗法更新。
图19.BMS-986016和纳武单抗联合疗法的抗肿瘤活性更新。
图20.依据基线特征和LAG-3表达的反应更新。
图21.依据LAG-3和PD-L1表达的最佳目标病灶大小变化更新。
图22.依据LAG-3和PD-L1表达的反应深度和持续时间更新。
图23.正在进行的临床随访更新。
图24.LAG-3和PD-1在T细胞耗竭中的作用和与纳武单抗组合的建议的临床用途。
图25.依据黑素瘤肿瘤标本中总体有核细胞的IHC染色的LAG-3表达模式。
图26A-F.LAG-3与免疫和炎性生物标记物的关联：(A)LAG-3与CD8、(B)LAG-3与FOXP3、(C)LAG-3与CD163、(D)LAG-3与CD68、(E)LAG-3与PD-L1、(F)LAG-3与MHC II。
图27.包含<1％或≤1％MHC II阳性肿瘤细胞的肿瘤中LAG-3阳性肿瘤浸润型淋巴细胞(TIL)的比率。
图28A-C.在(A)尿路上皮癌、(B)NSCLC和(C)全部肿瘤类型中炎症簇和生物标记物表达之间的关系。
图29A-C.不均一性MHC II肿瘤细胞表达和LAG-3+TIL。(A)尿路上皮癌中MHC II高的肿瘤细胞区域和MHC II低的肿瘤细胞区域内LAG-3+TIL数目。(B-C)尿路上皮癌样品和胃癌样品中MHC II高的肿瘤细胞区域和MHC II低的肿瘤细胞区域内LAG-3+TIL细胞的比率。
图30A和B.筛查时和在纳武单抗单一疗法第2–第4周时的LAG-3mRNA水平。
发明详述
在一个方面，本发明涉及一种治疗人类患者中恶性肿瘤的改进方法。特别地，本发明显示与包含患有LAG-3阳性肿瘤和LAG-3阴性肿瘤的患者的群体相比，施用与抗-PD-1抗体组合的抗-LAG-3抗体在患有LAG-3阳性恶性肿瘤的患者的群体中实现了令人惊讶地的治疗结局改善。因此，在一个方面，本文所述的发明涉及一种用于鉴定患有LAG-3阳性肿瘤(例如，黑素瘤)的患者的方法。在另一个方面，本文所述的发明涉及一种通过施用LAG-3抑制剂(例如，抗-LAG-3抗体)和PD-1途径抑制剂(例如，抗-PD-1抗体)组合治疗LAG-3阳性恶性肿瘤的方法。
在另一个方面，本文所述的发明涉及一种通过施用PD-1途径抑制剂(例如，抗-PD-1抗体)或PD-1途径抑制剂和免疫检查点抑制剂组合治疗LAG-3阳性恶性肿瘤的方法。
在另一个方面，本文所述的发明涉及一种通过施用抗CTLA4抗体治疗LAG-3阳性恶性肿瘤的方法。
1.定义
为了可以更轻易地理解本公开，首先定义某些术语。如本申请中所用，除非如本文另外明确规定，否则，以下每个术语应当具有下文所述的含义。本申请通篇范围内阐述额外的定义。
“抗体”(Ab)应包括但不限于糖蛋白免疫球蛋白，其特异性结合抗原并包含通过二硫键相互连接的至少两条重(H)链和两条轻(L)链，或其抗原结合部分。每个H链包含重链可变区(本文缩写为VH)和重链恒定区。重链恒定区包含三个恒定结构域，CH1、CH2和CH3。每条轻链包含轻链可变区(本文中缩写为VL)和轻链恒定区。轻链恒定区包含一个恒定结构域CL。VH和VL区可以进一步细分为高变区，称为互补决定区(CDR)，散布在更保守的称为框架区(FR)的区域内。每个VH和VL包含三个CDR和四个FR，按照以下顺序从氨基末端到羧基末端排列：FR1、CDR1、FR2、CDR2、FR3、CDR3、FR4。重链和轻链的可变区含有与抗原相互作用的结合结构域。抗体的恒定区可以介导免疫球蛋白与宿主组织或因子的结合，包括免疫系统的各种细胞(例如效应细胞)和经典补体系统的第一组分(C1q)。重链可以具有或不具有C末端赖氨酸。除非本文另有说明，否则可变区中的氨基酸使用Kabat编号系统编号，而恒定区中的氨基酸使用EU系统编号。
免疫球蛋白可以源自任何通常已知的同种型，包括但不限于IgA、分泌型IgA、IgG和IgM。IgG亚类也是本领域技术人员众所周知的，包括但不限于人IgG1、IgG2、IgG3和IgG4。“同种型”是指由重链恒定区基因编码的抗体类别或亚类(例如，IgM或IgG1)。术语“抗体”包括例如单克隆和多克隆抗体；嵌合和人源化抗体；人或非人抗体；全合成抗体；和单链抗体。可以通过重组方法将非人类抗体人源化以降低其在人体中的免疫原性。在没有明确说明的地方，除非上下文另有说明，否则术语“抗体”包括单特异性、双特异性或多特异性抗体，以及单链抗体。在实施方案中，抗体是双特异性抗体。在其他实施方案中，抗体是单特异性抗体。
如本文所用，“IgG抗体”具有天然存在的IgG抗体的结构，即，其具有与相同亚类的天然存在的IgG抗体相同数目的重链和轻链和二硫键。例如，抗ICOS的IgG1、IgG2、IgG3或IgG4抗体由两条重链(HC)和两条轻链(LC)组成，其中所述两条重链和轻链通过相同数量和位置的二硫键连接，所述二硫键分别在天然存在的IgG1、IgG2、IgG3和IgG4抗体中发生(除非已对抗体进行了突变以修饰二硫键)。
“分离的抗体”是指基本上不含具有不同抗原特异性的其他抗体的抗体(例如，与PD-1特异性结合的分离的抗体基本上不含与PD-1以外的抗原特异性结合的抗体)。然而，与PD-1特异性结合的分离的抗体可能与其他抗原(例如来自不同物种的PD-1分子)具有交叉反应性。此外，分离的抗体可以基本上不含其他细胞物质和/或化学物质。
抗体可以是已被改变的抗体(例如通过突变、缺失、取代、与非抗体部分的缀合)。例如，抗体可以包括一种或多种改变抗体的特性(例如功能特性)的变体氨基酸(与天然存在的抗体相比)。例如，本领域已知许多这样的改变，其影响例如半衰期、效应器功能和/或患者对抗体的免疫应答。术语抗体还包括人工多肽构建体，其包含至少一个来自抗体的抗原结合位点。
术语“单克隆抗体”(“mAb”)是指单一分子组成的抗体分子的非天然存在的制备物，即其一级序列基本相同且表现出对特定表位的单一结合特异性和亲和力的抗体分子。mAb是分离的抗体的实例。MAb可以通过杂交瘤、重组、转基因或本领域技术人员已知的其他技术产生。
“人抗体”(HuMAb)是指具有可变区的抗体，其中框架区和CDR区均源自人种系免疫球蛋白序列。此外，如果抗体含有恒定区，则恒定区也衍生自人种系免疫球蛋白序列。本发明的人抗体可包括不由人种系免疫球蛋白序列编码的氨基酸残基(例如，通过体外随机或位点特异性诱变或通过体内体细胞突变引入的突变)。然而，如本文所用，术语“人抗体”不旨在包括其中衍生自另一种哺乳动物物种(例如小鼠)的种系的CDR序列已经移植到人框架序列上的抗体。术语“人抗体”和“完全人抗体”同义使用。
“人源化抗体”是指其中非人抗体的CDR结构域以外的一些、大多数或所有氨基酸被衍生自人免疫球蛋白的相应氨基酸替换的抗体。在人源化形式的抗体的一个实施方案中，CDR结构域之外的一些、大多数或所有氨基酸已被来自人免疫球蛋白的氨基酸替换，而一个或多个CDR区域内的一些、大多数或所有氨基酸未改变。氨基酸的少量添加、缺失、插入、取代或修饰是允许的，只要它们不消除抗体结合特定抗原的能力即可。“人源化”抗体保留了与原始抗体相似的抗原特异性。
“嵌合抗体”是指其中可变区衍生自一个物种并且恒定区衍生自另一物种的抗体，例如其中可变区衍生自小鼠抗体而恒定区衍生自人抗体的抗体。
“抗抗原”抗体是指与所述抗原特异性结合的抗体。例如，抗-PD-1抗体特异性结合PD-1，而抗-LAG-3抗体特异性结合LAG-3。
抗体的“抗原结合部分”(也称为“抗原结合片段”)是指抗体的一个或多个片段，其保留特异性结合由整个抗体结合的抗原的能力。已经显示，抗体的抗原结合功能可以通过全长抗体的片段或部分来执行。抗体，例如本文所述的抗LAG-3抗体的术语“抗原结合部分”或“抗原结合片段”所涵盖的结合片段的实例包括：
(1)Fab片段(木瓜蛋白酶切割的片段)或类似的由VL、VH、LC和CH1结构域组成的单价片段；
(2)F(ab′)2片段(胃蛋白酶切割的片段)或类似的二价片段，其包含两个通过铰链区的二硫键连接的Fab片段；
(3)由VH和CH1结构域组成的Fd片段；
(4)由抗体单臂的VL和VH结构域组成的Fv片段，
(5)单结构域抗体(dAb)片段(Ward等人，(1989)Nature 341：544-46)，其由VH结构域组成；
(6)双-单结构域抗体，其由通过铰链连接的两个VH结构域组成(双亲和性重靶向抗体(DART))；
(7)双重可变结构域免疫球蛋白；
(8)分离的互补决定区(CDR)；和
(9)两个或更多个分离的CDR的组合，所述CDR可任选地通过合成接头连接。此外，尽管Fv片段的两个结构域VL和VH由不同的基因编码，然而它们可以使用重组方法通过合成的接头连接起来，从而使它们成为一条蛋白链，其中VL和VH区配对以形成单价分子(称为单链Fv(scFv)；参见例如Bird等人(1988)Science 242：423-426；和Huston等人(1988)Proc.Natl.Acad.Sci.USA 85：5879-5883)。这样的单链抗体也包含在抗体的术语“抗原结合部分”或“抗原结合片段”之内。这些抗体片段是使用本领域技术人员已知的常规技术获得的，并且以与完整抗体相同的方式筛选片段的效用。抗原结合部分可通过重组DNA技术或通过完整的免疫球蛋白的酶促或化学裂解产生。
术语“LAG-3”、“LAG3”或“淋巴细胞活化基因-3”是指淋巴细胞活化基因-3。本文所用的术语LAG-3包括人LAG-3(hLAG-3)、hLAG-3的变体、同工型和物种同源物，以及与hLAG-3具有至少一个共同表位的类似物。本文使用的术语LAG-3包括变体、同工型、同源物、直系同源物和旁系同源物。例如，在某些情况下，对人LAG-3蛋白具有特异性的抗体可与人类以外的种类的LAG-3蛋白发生交叉反应。在其他实施方案中，对人LAG-3蛋白特异的抗体可以对人LAG-3蛋白完全特异，并且可不表现出物种或其他类型的交叉反应性，或者可以与来自某些其他物种，但不是所有其他物种的LAG-3交叉反应(例如，与猴LAG-3而非小鼠LAG-3交叉反应)。术语“人LAG-3”是指人序列LAG-3，例如具有Genbank登录号NP 002277的人LAG-3的完整氨基酸序列(SEQ ID NO:13)。术语“小鼠LAG-3”是指小鼠序列LAG-3，例如具有Genbank登录号NP_032505的小鼠LAG-3的完整氨基酸序列。LAG-3在本领域中也称为例如CD223。人LAG-3序列与Genbank登录号NP_002277的人LAG-3的不同之处可能在于，例如具有保守突变或非保守区的突变，并且LAG-3具有与Genbank登录号NP_002277基本相同的生物学功能。例如，人LAG-3的生物学功能是在LAG-3的细胞外结构域中具有被本文公开的抗体特异性结合的表位，或者人LAG-3的生物学功能是与MHC II类分子结合。
特定的人LAG-3序列的氨基酸序列通常与GenBank登录号NP_002277的人LAG-3的氨基酸序列至少90％相同，并且包含与其他物种(例如鼠类)的LAG-3氨基酸序列相比时鉴定为人序列的氨基酸残基。在某些情况下，人LAG-3的氨基酸序列可以与GenBank登录号NP_002277的LAG-3至少95％、或甚至至少96％、97％、98％或99％相同。在某些实施方案中，人LAG-3序列与GenBank登录号NP_002277的LAG-3序列显示不超过10个氨基酸差异。在某些实施方案中，人LAG-3可与GenBank登录号NP_002277的LAG-3序列显示不超过5个，或甚至不超过4、3、2或1个氨基酸差异。可以如本文所述确定同一性百分比。
如本文所用，术语“程序性死亡1”、“程序性细胞死亡1”、“蛋白PD-1”、“PD-1”、“PD1”、“PDCD1”、“hPD-1”和“hPD-1”可互换使用，包括人PD-1的变体、同工型、物种同源物、以及具有至少一个与PD-1共同表位的类似物。完整的PD-1序列可以在GenBank登录号U64863(SEQ ID NO：29)下找到。
蛋白质程序性死亡1(PD-1)是CD28受体家族的抑制成员，该家族还包括CD28、CTLA-4、ICOS和BTLA。PD-1在活化的B细胞、T细胞和髓样细胞上表达(Agata等人，同上；Okazaki等人(2002)Curr.Opin.Immunol.14：391779-82；Bennett等人(2003)J Immunol170：711-8)。发现了该家族的最初成员CD28和ICOS通过加入单克隆抗体后增强T细胞增殖的功能作用(Hutloff等人，Nature(1999)；397：263-266；Hansen等人，Immunogenics(1980)；10：247-260)。通过筛选凋亡细胞中的差异表达发现了PD-1(Ishida等人，EMBO J(1992)；11：3887-95)。通过分别筛选细胞毒性T淋巴细胞和TH1细胞中的差异表达，发现了该家族的其他成员CTLA-4和BTLA。CD28、ICOS和CTLA-4均具有未配对的半胱氨酸残基，可进行同型二聚化。相反，PD-1被建议以单体形式存在，缺乏在其他CD28家族成员中未配对的半胱氨酸残基特征。
PD-1基因是55kDa的I型跨膜蛋白，其是Ig基因超家族的一部分(Agata等人(1996)Int Immunol 8：765-72)。PD-1包含膜近端免疫受体酪氨酸抑制基序(ITIM)和膜远端基于酪氨酸的开关基序(ITSM)(Thomas，ML(1995)J Exp Med 181：1953-6；Vivier，E和Daeron，M(1997)Immunol Today 18：286-91)。尽管PD-1在结构上与CTLA-4相似，但PD-1缺乏对于B7-1和B7-2结合至关重要的MYPPPY基序(SEQ ID NO：32)。已经鉴定出PD-1的两个配体PD-L1和PD-L2，它们已经显示出在与PD-1结合后下调T细胞活化(Freeman等人(2000)J Exp Med192：1027-34；和Latchman等人(2001)Nat Immunol 2：261-8；Carter等人(2002)Eur JImmunol 32：634-43)。PD-L1和PD-L2都是与PD-1结合但不与其他CD28家族成员结合的B7同源物。PD-L1在多种人类癌症中丰富(Dong等人(2002)Nat.Med.8：787-9)。PD-1和PD-L1之间的相互作用导致肿瘤浸润的淋巴细胞减少、T细胞受体介导的增殖减少以及癌细胞的免疫逃避(Dong等(2003)J.Mol.Med.81：281-7；Blank等人(2005)CancerImmunol.Immunother.54：307-314；Konishi等人(2004)Clin.Cancer Res.10：5094-100)。可以通过抑制PD-1与PD-L1的局部相互作用来逆转免疫抑制作用，并且当PD-1与PD-L2的相互作用也被阻断时，这种效果是叠加的(Iwai等人(2002)Proc.Nat’l.Acad.Sci.USA 99：12293-7；Brown等人(2003)J.Immunol.170：1257-66)。
与PD-1是CD28家族的抑制成员一致，PD-1缺陷的动物发展出各种自身免疫表型，包括自身免疫性心肌病和具有关节炎和肾炎的狼疮样综合征(Nishimura等人(1999)Immunity 11：141-51；Nishimura等人，(2001)Science 291：319-22)。另外，已经发现PD-1在自身免疫性脑脊髓炎、系统性红斑狼疮、移植物抗宿主病(GVHD)、I型糖尿病和类风湿性关节炎中起作用(Salama等人(2003)J Exp Med 198：71-78；Prokunina和Alarcon-Riquelme(2004)Hum Mol Genet 13：R143；Nielsen等人(2004)Lupus 13：510)。在鼠B细胞肿瘤系中，PD-1的ITSM被证明对于阻断BCR介导的Ca2+-通量和酪氨酸磷酸化下游效应子分子至关重要(Okazaki等人，(2001)PNAS 98：13866-71)。
“程序性死亡配体-1(PD-L1)”是PD-1的两个细胞表面糖蛋白配体之一(另一个是PD-L2)，其与PD-1结合后下调T细胞活化和细胞因子分泌。本文所用的术语“PD-L1”包括人PD-L1(hPD-L1)、hPD-L1的变体、同工型和物种同源物，以及与hPD-L1具有至少一个共同表位的类似物。完整的hPD-L1序列可在GenBank登录号Q9NZQ7下找到。
本文所用的术语“程序性死亡配体-2”和“PD-L2”包括人PD-L2(hPD-L2)、hPD-L2的变体、同工型和物种同源物，以及与hPD-L2具有至少一个共同表位的类似物。完整的hPD-L2序列可在GenBank登录号Q9BQ51下找到。
本文所用的“患者”包括患有癌症(例如，黑素瘤)的任何患者。术语“个体”和“患者”在本文可互换使用。
“施用”是指使用本领域技术人员已知的任何各种方法和递送系统将包含治疗剂的组合物物理引入个体。用于本文所公开的制剂的施用途径包括静脉内、肌肉内、皮下、腹膜内、脊柱或其他肠胃外施用途径，例如通过注射或输注。本文所用的短语“肠胃外施用”是指除肠内和局部给药以外的施用方式，通常通过注射施用，包括但不限于静脉内、肌肉内、动脉内、鞘内、淋巴管内、病灶内、囊内、眶内、心内、皮内、腹膜内、经气管、皮下、表皮内、关节内、包膜下、蛛网膜下、脊柱内、硬膜外和胸骨内注射和输注、以及体内电穿孔。在一些实施方案中，制剂通过非肠胃外途径施用，在一些实施方案中，口服。其他非肠胃外途径包括局部、表皮或粘膜施用途径，例如鼻内、阴道、直肠、舌下或局部施用。还可以例如一次、多次和/或历经一个或多个延长的时段执行施用。
个体的“治疗”或“疗法”指对个体进行的任何类型干预或过程或向其施用活性物质，目的在于逆转、减轻、缓解、抑制、减慢或阻止症状、并发症或病状，或者与疾病相关的生物化学指标的的发作、进展、形成、严重程度或复发。
如本文所用，“有效治疗”指产生有益作用(例如，改善疾病或病症的至少一种症状)的治疗。有益作用可以采取超过基线改善的形式，即，超过在启动根据本方法疗法前所做测量或观察的改善。有益作用还可以采取实体瘤标记物的有害进展中止、延缓、迟滞或稳定的形式。有效的治疗可以指减轻实体瘤的至少一种症状。这类有效治疗可以例如减少患者疼痛、减少病灶尺寸和/或数目，可以减少或防止肿瘤转移，和/或可以减慢肿瘤生长。
术语“有效量”指提供所需生物学结果、治疗结果和/或预防结果的活性剂的量。这种结果可以是一个或多个疾病体征、症状或病因减少、改善、缓和、减弱、延迟和/或减轻，或是生物系统的任何其他所需改变。提到实体瘤时，有效量包括足以造成肿瘤收缩和/或肿瘤生长速率下降(如抑制肿瘤生长)或防止或延迟其他不利细胞增殖的量。在一些实施方案中，有效量是足以延迟肿瘤形成的量。在一些实施方案中，有效量是足以防止或延迟肿瘤复发的量。可以在一次或多次施用中施用有效量。有效量药物或组合物可以：(i)减少癌细胞的数目；(ii)缩减肿瘤大小；(iii)某个程度抑制、迟滞、减慢癌细胞向外周器官浸润和可以终止癌细胞向外周器官浸润；(iv)抑制(即，某种程度减慢肿瘤转移并且可以终止肿瘤转移；(v)抑制肿瘤生长；(vi)防止或延迟肿瘤出现和/或复发；和/或(vii)某种程度减轻一种或多种与癌症相关的症状。在一个实例中，“有效量”是这样的抗-LAG-3抗体量和抗-PD-1抗体量，在联用中，在临床上被证明所述量影响癌症显著减少或癌症(如晚期实体瘤)进展延缓。如本文所用，术语“固定剂量”、“平剂量(flat dose)”和“平固定剂量(flat-fixeddose)”互换使用并且指不考虑患者体重或体表面积(BSA)情况下向患者施用的剂量。固定剂量或平剂量因此不作为mg/kg剂量提供，而作为活性剂(例如，抗-LAG-3抗体和/或抗-PD-1抗体)的绝对量提供。
如本文所用，术语“无进展生存”，可以缩写为PFS，指在治疗实体瘤(即，黑素瘤)治疗期间和之后患者带病生活但疾病未加重的时长。
如本文所用，“给药间隔时间”意指在正向个体施用本文公开的制剂的多个剂量之间流逝的时间量。给药间隔时间因此可以作为范围表示。
如本文所用的术语“给药频率”指在给定时间内施用本文所公开制剂的剂量的频率。给药频率可以作为给出时间的剂量数目表示，例如，一周一次或两周内一次。
就本发明的组合物而言，术语“固定剂量”的使用意指，在单一组合物中两种或更多种不同抗体按照彼此特定(固定)的比率存在于该组合物中。在一些实施方案中，固定剂量基于抗体重量(例如，mg)。在某些实施方案中，固定剂量基于抗体浓度(例如，mg/ml)。在一些实施方案中，该比率是至少约1:1、约1:2、约1:3、约1:4、约1:5、约1:6、约1:7、约1:8、约1:9、约1:10、约1:15、约1:20、约1:30、约1:40、约1:50、约1:60、约1:70、约1:80、约1:90、约1:100、约1:120、约1:140、约1:160、约1:180、约1:200、约200:1、约180:1、约160:1、约140:1、约120:1、约100:1、约90:1、约80:1、约70:1、约60:1、约50:1、约40:1、约30:1、约20:1、约15:1、约10:1、约9:1、约8:1、约7:1、约6:1、约5:1、约4:1、约3:1或约2:1mg第一抗体/mg第二抗体。例如，第一抗体和第二抗体的3:1比率可以意指，小瓶可以含有约240mg第一抗体和80mg第二抗体或约3mg/ml第一抗体和1mg/ml第二抗体。
就本发明的组合物而言，术语“平剂量”的使用意指不考虑患者体重或体表面积(BSA)情况下向患者施用的剂量。平剂量因此不作为mg/kg剂量提供，而作为活性剂(例如，抗-LAG-3抗体和/或抗-PD-1抗体)的绝对量提供。例如，60kg的人和100kg的人将接受相同剂量的组合物(例如，在含有240mg抗-PD-1抗体和80mg抗-LAG-3抗体二者的单一固定给药制剂小瓶中的240mg抗-PD-1抗体和80mg抗-LAG-3抗体(或含有120mg抗-PD-1抗体和40mg抗-LAG-3抗体的两个固定给药制剂小瓶等))。
如本文提到的术语“基于体重的剂量”意指基于患者体重计算向患者施用的剂量。例如，当体重60kg的患者需要3mg/kg抗-LAG-3抗体与3mg/kg抗-PD-1抗体组合时，可以从抗LAG3抗体和抗-PD-1抗体的1:1比率固定给药制剂马上抽取适宜量的抗-LAG-3抗体(即，180mg)和抗-PD-1抗体(即，180mg)。
如本文所用的术语“约一周一次”、“约每周一次”、“约每两周一次”或任何其他相似的给药间隔时间术语意指近似数字，并且“约一周一次”或“约每周一次”可以包括每七天±二天，即，每五天至每九天。“一周一次”的给药频率因此可以是每五天、每六天、每七天、每八天或每九天。“约每两周一次”可以包括每十四天±三天，即，每十一天至每十七天。相似的近似值例如适用于约每三周一次、约每四周一次、约每五周一次、约每六周一次和约每十二周一次。在一些实施方案中，给药间隔时间约每六周一次或约每十二周一次意指第一剂量可以在第一周中的任何一天施用，并且随后下一个剂量可以分别在第六或第十二周中的任何一天施用。在其他实施方案中，给药间隔时间约每六周一次或约每十二周一次意指第一剂量在第一周的特定一天(例如，周一)施用，并且随后下一个剂量分别在第六或第十二周的同一天(即，周一)施用。
“癌症”指宽泛类别的多种疾病，其特征在于身体内异常细胞失控生长。失调的细胞分裂和生长导致形成恶性肿瘤，所述恶性肿瘤侵入临近组织并且还可以通过淋巴系统或血流转移到身体远端部分。“癌症”或“癌组织”可以包括肿瘤。
如本文所用的术语“肿瘤”指因细胞过度生长或增殖产生的任何组织团块，或为良性(非癌)或为恶性(癌性的)，包括癌前病灶。
涉及LAG-3表达的术语“LAG-3阳性”或“LAG-3表达阳性”指在包含肿瘤细胞和肿瘤浸润型炎性细胞的供试组织样品中细胞的比例，其高于将组织样品评定为表达LAG-3的。在一些实施方案中，对于通过免疫组织化学(IHC)测定的LAG-3表达，LAG-3阳性肿瘤或LAG-3表达阳性肿瘤意指，至少约0.01％、至少约0.5％、至少约1％、至少约2％、至少约3％、至少约4％、至少约5％、至少约6％、至少约7％、至少约8％、至少约9％、至少约10％、至少约15％、至少约20％、至少约25％、至少约30％、至少约40％、至少约50％、至少约60％、至少约70％、至少约80％、至少约90％或100％总数的细胞表达LAG-3。在其他实施方案中，对于通过免疫组织化学(IHC)或流式细胞术分析的LAG-3表达，LAG-3阳性肿瘤或LAG-3表达阳性肿瘤意指，至少约0.01％、至少约0.5％、至少约1％、至少约2％、至少约3％、至少约4％、至少约5％、至少约6％、至少约7％、至少约8％、至少约9％、至少约10％、至少约15％、至少约20％、至少约25％、至少约30％、至少约40％、至少约50％、至少约60％、至少约70％、至少约80％、至少约90％或100％总数的肿瘤浸润型炎性细胞(例如，T细胞、CD8+T细胞、CD4+T细胞、FOXP3+细胞)表达LAG-3。LAG-3阳性肿瘤或LAG-3表达阳性肿瘤也可以在本文中表述为表达LAG-3的肿瘤。在一些实施方案中，LAG-3阳性肿瘤或LAG-3表达阳性肿瘤意指，至少约0.1％到至少约20％总数的细胞表达LAG-3。在一些实施方案中，LAG-3阳性肿瘤或LAG-3表达阳性肿瘤意指，至少约0.1％到至少约20％总数的肿瘤浸润型炎性细胞(例如，T细胞、CD8+T细胞、CD4+T细胞、FOXP3+细胞)表达LAG-3。在某些实施方案中，LAG-3阳性肿瘤或LAG-3表达阳性肿瘤意指，至少约0.1％到至少约10％总数的细胞表达LAG-3。在某些实施方案中，LAG-3阳性肿瘤或LAG-3表达阳性肿瘤意指，至少约0.1％到至少约10％总数的肿瘤浸润型炎性细胞(例如，T细胞、CD8+T细胞、CD4+T细胞、FOXP3+细胞)表达LAG-3。在一些实施方案中，LAG-3阳性或LAG-3表达阳性肿瘤意指，至少约1％总数的细胞在细胞表面上表达LAG-3。在一些实施方案中，LAG-3阳性或LAG-3表达阳性肿瘤意指，至少约1％总数的肿瘤浸润型炎性细胞(例如，T细胞、CD8+T细胞、CD4+T细胞、FOXP3+细胞)在细胞表面上表达LAG-3。在其他实施方案中，LAG-3阳性或LAG-3表达阳性肿瘤意指，至少约5％总数的细胞在细胞表面上表达LAG-3。在其他实施方案中，LAG-3阳性或LAG-3表达阳性肿瘤意指，至少约5％总数的肿瘤浸润型炎性细胞(例如，T细胞、CD8+T细胞、CD4+T细胞、FOXP3+细胞)在细胞表面上表达LAG-3。在一个具体实施方案中，LAG-3阳性或LAG-3表达阳性肿瘤意指，至少约1％或1-5％范围内总数的细胞在细胞表面上表达LAG-3。在一个具体实施方案中，LAG-3阳性或LAG-3表达阳性肿瘤意指，至少约1％或1-5％范围内总数的肿瘤浸润型炎性细胞(例如，T细胞、CD8+T细胞、CD4+T细胞、FOXP3+细胞)在细胞表面上表达LAG-3。
“LAG-3阴性”或“LAG-3表达阴性”指缺少可检测量的LAG-3表达。在一些实施方案中，对于通过IHC测定的LAG-3表达，LAG-3阴性肿瘤或LAG-3表达阴性肿瘤意指小于0.01％总数的细胞表达可检测水平的LAG-3。在一些实施方案中，对于通过IHC或流式细胞术分析的LAG-3表达，LAG-3阴性肿瘤或LAG-3表达阴性肿瘤意指小于0.01％总数的肿瘤浸润型炎性细胞(例如，T细胞、CD8+T细胞、CD4+T细胞、FOXP3+细胞)表达可检测水平的LAG-3。在一些实施方案中，对于通过IHC测定的LAG-3表达，LAG-3阴性肿瘤或LAG-3表达阴性肿瘤意指小于1％总数的细胞表达可检测水平的LAG-3。在一些实施方案中，对于通过IHC或流式细胞术分析的LAG-3表达，LAG-3阴性肿瘤或LAG-3表达阴性肿瘤意指小于1％总数的肿瘤浸润型炎性细胞(例如，T细胞、CD8+T细胞、CD4+T细胞、FOXP3+细胞)表达可检测水平的LAG-3。在一些实施方案中，LAG-3阴性肿瘤或LAG-3表达阴性肿瘤意指零(0)个细胞表达可检测水平的LAG-3。在一些实施方案中，LAG-3阴性或LAG-3表达阴性肿瘤是除LAG-3阳性或LAG-3表达阳性肿瘤之外的任何肿瘤。
涉及细胞表面PD-L1表达的术语“PD-L1阳性”或“PD-L1表达阳性”指在包含肿瘤细胞和肿瘤浸润型炎性细胞的供试组织样品中的细胞比例，其高于将该样品评定为表达细胞表面PD-L1的。对于通过免疫组织化学(IHC)测定(例如，用mAb 28-8)的细胞表面表达，PD-L1阳性肿瘤或PD-L1表达阳性肿瘤意指，至少约0.01％、至少约0.5％、至少约1％、至少约2％、至少约3％、至少约4％、至少约5％、至少约6％、至少约7％、至少约8％、至少约9％、至少约10％、至少约15％、至少约20％、至少约25％或至少约30％总数的细胞表达PD-L1。PD-L1阳性肿瘤或PD-L1表达阳性肿瘤也可以在本文中表述为表达PD-L1的肿瘤。在其他实施方案中，PD-L1阳性肿瘤或PD-L1表达阳性肿瘤意指，至少约0.1％到至少约20％总数的细胞表达PD-L1。在某些实施方案中，PD-L1阳性肿瘤或PD-L1表达阳性肿瘤意指，至少约0.1％到至少约10％总数的细胞表达PD-L1。在一些实施方案中，PD-L1阳性或PD-L1表达阳性肿瘤意指，至少约1％总数的细胞在细胞表面上表达PD-L1。在其他实施方案中，PD-L1阳性或PD-L1表达阳性肿瘤意指，至少约5％总数的细胞在细胞表面上表达PD-L1。在一个具体实施方案中，PD-L1阳性或PD-L1表达阳性肿瘤意指，至少约1％或1-5％范围内总数的细胞在细胞表面上表达PD-L1。
涉及细胞表面PD-L1表达的术语“PD-L1阴性”或“PD-L1表达阴性”指在包含肿瘤细胞和肿瘤浸润型炎性细胞的供试组织样品中不呈PD-L1阳性或不呈PD-L1表达阳性的细胞的比例。
“免疫反应”指免疫系统细胞(例如，T淋巴细胞、B淋巴细胞、天然杀伤(NK)细胞、巨噬细胞、嗜酸性粒细胞、肥大细胞、树突细胞和中性粒细胞)和由这些细胞中任意者或肝脏产生的可溶性大分子(包括抗体、细胞因子和补体)的作用，所述作用导致选择性靶向、结合、损伤、摧毁和/或从脊椎动物的身体消除正在入侵的病原体、遭病原体感染的细胞或组织、癌性细胞或其他异常细胞或在自身免疫性或病理炎症情况下正常的人细胞或组织。
“肿瘤浸润型炎性细胞”是通常参与个体中炎症反应并浸润肿瘤组织的任何类型细胞。这类细胞包括肿瘤浸润型淋巴细胞(TIL)、巨噬细胞、单核细胞、嗜酸性粒细胞、组织细胞和树突细胞。
在本文中使用的术语“和/或”将被视为两个指定的特征或组分中的每个具有或不具有另一个的具体公开。因此，在本文中在诸如“A和/或B”之类的短语中使用的术语“和/或”旨在包括“A和B”，“A或B”，“A”(单独)和“B”(单独)。同样地，在诸如“A、B和/或C”的短语中使用的术语“和/或”旨在涵盖以下方面中的每个：A、B和C；A、B或C；A或C；A或B；B或C；A和C；A和B；B和C；A(单独)；B(单独)；和C(单独)。
应当理解，无论在何处用语言“包括”来描述方面，都还提供了根据“由...组成”和/或“基本上由...组成”描述的类似方面。
术语“约”或“基本上由......组成”是指在本领域普通技术人员确定的特定值或组成的可接受误差范围内的值或组成，其部分取决于如何测量或确定数值或组成，即，测量系统的局限性。例如，“约”或“基本上由......组成”可以表示本领域实践中1个或多于1个标准偏差之内。或者，“约”或“基本上由......组成”可以表示高达10％或20％(即±10％或±20％)的范围。例如，约3mg可包括2.7mg至3.3mg(对于10％)或2.4mg至3.6mg(对于20％)之间的任何数字。此外，特别是关于生物系统或过程，该术语可以表示高达一个数量级或高达5倍的值。当在本申请和权利要求中提供特定值或组成时，除非另有说明，否则应当假定“约”或“基本上包括”的含义在该特定值或组成的可接受的误差范围内。
如本文所述，任何浓度范围、百分比范围、比率范围或整数范围应理解为包括所述范围内的任何整数的值，并且在适当时，除非另有说明，否则包括其分数(例如整数的十分之一和百分之一)。
除非另外定义，否则本文中所用的全部技术术语和科学术语具有与本公开所涉及领域的普通技术人员通常所理解的相同含义。例如，Concise Dictionary of Biomedicineand Molecular Biology,Juo,Pei-Show,第2版,2002,CRC Press；The Dictionary ofCell and Molecular Biology,第5版,2013,Academic Press；和Oxford Dictionary OfBiochemistry And Molecular Biology,2006,Oxford University Press，为技术人员提供了本公开中所用诸多术语的通用词典。
单位、前缀和符号按其国际单位制(SI)接受的形式表示。数值范围包括界定该范围的数值。本文提供的小标题不是对本公开的各个方面的限制，其中可以通过参考作为一个整体的说明书来获得本公开。因此，通过完整参考本说明书，更完整地描述下文立即定义的术语。
本发明的多个方面在以下子部分进一步详细描述。
2.发明方法
在一个方面，本发明涉及一种用于治疗有需求的个体中LAG-3阳性恶性肿瘤(例如，黑素瘤)的方法。在LAG-3阳性恶性肿瘤(例如，黑素瘤)患者群体中，LAG-3抑制剂(例如，抗-LAG-3抗体)和PD-1途径抑制剂(例如，抗-PD-1抗体)联合治疗导致比患有混合型LAG-3-阴性恶性肿瘤和LAG-3阳性恶性肿瘤的一般患者群体更好的治疗结局(例如，客观反应率和病情控制率)。为了改善治疗恶性肿瘤，在一个方面，本发明提供了鉴定患者为患有LAG-3阳性肿瘤并且提供了LAG-3抑制剂(例如，抗-LAG-3抗体)和PD-1途径抑制剂(例如，抗-PD-1抗体)的免疫治疗。
在另一个方面，本发明涉及鉴定患者为患有LAG-3阳性肿瘤并且通过施用PD-1途径抑制剂(例如，抗-PD-1抗体)或PD-1途径抑制剂和免疫检查点抑制剂的组合治疗LAG-3阳性肿瘤。在一个实施方案中，本发明包括一种鉴定患者为患有LAG-3阳性肿瘤并通过施用抗-PD-1抗体治疗LAG-3阳性肿瘤的方法。在一个实施方案中，本发明包括一种鉴定患者为患有LAG-3阳性肿瘤并通过施用抗PD-L1抗体治疗LAG-3阳性肿瘤的方法。
在另一个方面，本发明涉及鉴定患者为患有LAG-3阳性肿瘤并且通过施用抗-CTLA-4抗体治疗LAG-3阳性肿瘤。
在一个实施方案中，本发明包括一种选择人类患者中的恶性肿瘤用于免疫治疗的方法，所述方法包括：(a)确定肿瘤样品中的LAG-3表达水平；并且(b)如果肿瘤是LAG-3阳性肿瘤，则选择肿瘤供免疫治疗。在一个实施方案中，本发明包括一种鉴定人类患者中恶性肿瘤为符合免疫治疗资格的方法，所述方法包括：(a)确定肿瘤样品中的LAG-3表达水平；并且(b)如果肿瘤是LAG-3阳性肿瘤，则鉴定肿瘤为符合免疫治疗资格。在一个实施方案中，本发明包括一种鉴定人类患者中可能对免疫治疗有反应的恶性肿瘤的方法，所述方法包括：(a)确定肿瘤样品中的LAG-3表达水平；并且(b)如果肿瘤是LAG-3阳性肿瘤，则鉴定肿瘤为可能对治疗有反应。在一个实施方案中，本发明包括一种鉴定人类患者中可能对免疫治疗有反应的恶性肿瘤的方法，所述方法包括：(a)确定肿瘤样品中的LAG-3表达水平；并且(b)如果肿瘤是LAG-3阳性肿瘤，则鉴定肿瘤为可能对治疗有反应。在一个实施方案中，本发明包括一种将人类患者中恶性肿瘤划分为可能对免疫治疗有反应的方法，所述方法包括：(a)确定肿瘤样品中的LAG-3表达水平；并且(b)如果肿瘤是LAG-3阳性肿瘤，则将肿瘤划分为可能对免疫治疗有反应。在一些实施方案中，免疫治疗包括使肿瘤与治疗有效量的LAG-3抑制剂和PD-1途径抑制剂接触。在一些实施方案中，免疫治疗包括使肿瘤与治疗有效量的LAG-3抑制剂接触。在一些实施方案中，免疫治疗包括使肿瘤与治疗有效量的PD-1途径抑制剂接触。在一些实施方案中，免疫治疗包括使肿瘤与治疗有效量的抗-PD-1抗体接触。在一些实施方案中，免疫治疗包括使肿瘤与治疗有效量的抗PD-L1抗体接触。在一些实施方案中，免疫治疗包括使肿瘤与治疗有效量的抗-CTLA-4抗体接触。在一些实施方案中，免疫治疗包括使肿瘤与治疗有效量的PD-1途径抑制剂和免疫检查点抑制剂接触。在一些实施方案中，该方法包括使肿瘤与治疗有效量的LAG-3抑制剂和PD-1途径抑制剂接触。在一些实施方案中，该方法包括使肿瘤与治疗有效量的LAG-3抑制剂接触。在一些实施方案中，该方法包括使肿瘤与治疗有效量的PD-1途径抑制剂接触。在一些实施方案中，该方法包括使肿瘤与治疗有效量的抗-PD-1抗体接触。在一些实施方案中，该方法包括使肿瘤与治疗有效量的抗PD-L1抗体接触。在一些实施方案中，该方法包括使肿瘤与治疗有效量的抗-CTLA-4抗体接触。在一些实施方案中，该方法包括使肿瘤与治疗有效量的PD-1途径抑制剂和免疫检查点抑制剂接触。在一些实施方案中，该方法包括向患者施用治疗有效量的LAG-3抑制剂和PD-1途径抑制剂。在一些实施方案中，该方法包括向患者施用治疗有效量的LAG-3抑制剂。在一些实施方案中，该方法包括向患者施用治疗有效量的PD-1途径抑制剂。在一些实施方案中，该方法包括向患者施用治疗有效量的抗-CTLA-4抗体。在一些实施方案中，该方法包括向患者施用治疗有效量的PD-1途径抑制剂和免疫检查点抑制剂。在一些实施方案中，LAG-3抑制剂是抗-LAG-3抗体并且PD-1途径抑制剂是抗-PD-1抗体。在某些实施方案中，本发明的任何方法还包括确定肿瘤样品中的PD-L1表达。
在一个实施方案中，本发明包括一种鉴定可能对免疫治疗有反应的恶性肿瘤患者的方法，所述方法包括：(a)确定肿瘤样品中的LAG-3表达水平；并且(b)如果肿瘤是LAG-3阳性肿瘤，则鉴定该患者可能对治疗有反应。在一个实施方案中，本发明包括一种选择恶性肿瘤患者用于免疫治疗的方法，所述方法包括：(a)确定肿瘤样品中的LAG-3表达水平；并且(b)如果肿瘤是LAG-3阳性肿瘤，则选择该患者供免疫治疗。在一些实施方案中，免疫治疗包括使肿瘤与治疗有效量的LAG-3抑制剂和PD-1途径抑制剂接触。在一些实施方案中，免疫治疗包括使肿瘤与治疗有效量的LAG-3抑制剂接触。在一些实施方案中，免疫治疗包括使肿瘤与治疗有效量的PD-1途径抑制剂接触。在一些实施方案中，免疫治疗包括使肿瘤与治疗有效量的抗-PD-1抗体接触。在一些实施方案中，免疫治疗包括使肿瘤与治疗有效量的抗PD-L1抗体接触。在一些实施方案中，免疫治疗包括使肿瘤与治疗有效量的抗-CTLA-4抗体接触。在一些实施方案中，免疫治疗包括使肿瘤与治疗有效量的PD-1途径抑制剂和免疫检查点抑制剂接触。在一些实施方案中，该方法包括使肿瘤与治疗有效量的LAG-3抑制剂和PD-1途径抑制剂接触。在一些实施方案中，该方法包括使肿瘤与治疗有效量的LAG-3抑制剂接触。在一些实施方案中，该方法包括使肿瘤与治疗有效量的PD-1途径抑制剂接触。在一些实施方案中，该方法包括使肿瘤与治疗有效量的抗-PD-1抗体接触。在一些实施方案中，该方法包括使肿瘤与治疗有效量的抗PD-L1抗体接触。在一些实施方案中，该方法包括使肿瘤与治疗有效量的抗-CTLA-4抗体接触。在一些实施方案中，该方法包括使肿瘤与治疗有效量的PD-1途径抑制剂和免疫检查点抑制剂接触。在一些实施方案中，该方法包括向患者施用治疗有效量的LAG-3抑制剂和PD-1途径抑制剂。在一些实施方案中，该方法包括向患者施用治疗有效量的LAG-3抑制剂。在一些实施方案中，该方法包括向患者施用治疗有效量的PD-1途径抑制剂。在一些实施方案中，该方法包括向患者施用治疗有效量的抗-CTLA-4抗体。在一些实施方案中，该方法包括向患者施用治疗有效量的PD-1途径抑制剂和免疫检查点抑制剂。在一些实施方案中，LAG-3抑制剂是抗-LAG-3抗体并且PD-1途径抑制剂是抗-PD-1抗体。在某些实施方案中，本发明的任何方法还包括确定肿瘤样品中的PD-L1表达。
在一个实施方案中，本发明包括一种治疗人类患者中恶性肿瘤的方法，所述方法包括：向患者施用本文公开的免疫治疗；其中基于患者的肿瘤样品中的LAG-3表达或基于LAG-3和PD-L1表达，预测患者对LAG-3抑制剂和PD-1途径抑制剂治疗有反应。在一些实施方案中，LAG-3抑制剂是抗-LAG-3抗体并且PD-1途径抑制剂是抗-PD-1抗体。
在一个实施方案中，本发明包括一种治疗有需要的人类患者中恶性肿瘤的方法，所述方法包括：(a)确定肿瘤样品中的LAG-3表达水平或LAG-3和PD-L1表达水平；并且(b)如果肿瘤是LAG-3阳性肿瘤或LAG-3阳性PD-L1阳性肿瘤，则向患者施用治疗有效量的LAG-3抑制剂。在一个实施方案中，本发明包括一种用于治疗有需要的人类患者中恶性肿瘤的方法，所述方法包括：(a)鉴定患者为患有LAG-3阳性恶性肿瘤或LAG-3阳性PD-L1阳性恶性肿瘤；并且(b)向患者施用治疗有效量的LAG-3抑制剂。在一个实施方案中，本发明包括一种用于治疗有需要的人类患者中恶性肿瘤的方法，所述方法包括向患者施用治疗有效量的LAG-3抑制剂，其中在施用之前，鉴定患者为患有LAG-3阳性恶性肿瘤或LAG-3阳性PD-L1阳性恶性肿瘤。在一些实施方案中，LAG-3阳性肿瘤是LAG-3阳性PD-L1阴性肿瘤。在一些实施方案中，LAG-3阳性恶性肿瘤是LAG-3阳性PD-L1阴性恶性肿瘤。在一些实施方案中，LAG-3抑制剂是抗-LAG-3抗体。
在一个实施方案中，本发明包括一种治疗有需要的人类患者中恶性肿瘤的方法，所述方法包括：(a)确定肿瘤样品中的LAG-3表达水平或LAG-3和PD-L1表达水平；并且(b)如果肿瘤是LAG-3阳性肿瘤或LAG-3阳性PD-L1阳性肿瘤，则向患者施用治疗有效量的PD-1途径抑制剂。在一个实施方案中，本发明包括一种用于治疗有需要的人类患者中恶性肿瘤的方法，所述方法包括：(a)鉴定患者为患有LAG-3阳性恶性肿瘤或LAG-3阳性PD-L1阳性恶性肿瘤；并且(b)向患者施用治疗有效量的PD-1途径抑制剂。在一个实施方案中，本发明包括一种用于治疗有需要的人类患者中恶性肿瘤的方法，所述方法包括向患者施用治疗有效量的PD-1途径抑制剂，其中在施用之前，鉴定患者为患有LAG-3阳性恶性肿瘤或LAG-3阳性PD-L1阳性恶性肿瘤。在一些实施方案中，PD-1途径抑制剂是抗-PD-1抗体。在一些实施方案中，PD-1途径抑制剂是抗PD-L1抗体。在一些实施方案中，LAG-3阳性肿瘤是LAG-3阳性PD-L1阴性肿瘤。在一些实施方案中，LAG-3阳性恶性肿瘤是LAG-3阳性PD-L1阴性恶性肿瘤。
在一个实施方案中，本发明包括一种治疗有需要的人类患者中恶性肿瘤的方法，所述方法包括：(a)确定肿瘤样品中的LAG-3表达水平或LAG-3和PD-L1表达水平；并且(b)如果肿瘤是LAG-3阳性肿瘤或LAG-3阳性PD-L1阳性肿瘤，则向患者施用治疗有效量的抗-CTLA-4抗体。在一个实施方案中，本发明包括一种用于治疗有需要的人类患者中恶性肿瘤的方法，所述方法包括：(a)鉴定患者为患有LAG-3阳性恶性肿瘤或LAG-3阳性PD-L1阳性恶性肿瘤；并且(b)向患者施用治疗有效量的抗-CTLA-4抗体。在一个实施方案中，本发明包括一种用于治疗有需要的人类患者中恶性肿瘤的方法，所述方法包括向患者施用治疗有效量的抗-CTLA-4抗体，其中在施用之前，鉴定患者为患有LAG-3阳性恶性肿瘤或LAG-3阳性PD-L1阳性恶性肿瘤。在一些实施方案中，LAG-3阳性肿瘤是LAG-3阳性PD-L1阴性肿瘤。在一些实施方案中，LAG-3阳性恶性肿瘤是LAG-3阳性PD-L1阴性恶性肿瘤。
在一个实施方案中，本发明包括一种治疗有需要的人类患者中恶性肿瘤的方法，所述方法包括：(a)确定肿瘤样品中的LAG-3表达水平或LAG-3和PD-L1表达水平；并且(b)如果肿瘤是LAG-3阳性肿瘤或LAG-3阳性PD-L1阳性肿瘤，则向患者施用治疗有效量的LAG-3抑制剂和PD-1途径抑制剂。在一个实施方案中，本发明包括一种用于治疗有需要的人类患者中恶性肿瘤的方法，所述方法包括：(a)鉴定患者为患有LAG-3阳性恶性肿瘤或LAG-3阳性PD-L1阳性恶性肿瘤；并且(b)向患者施用治疗有效量的LAG-3抑制剂和PD-1途径抑制剂。在一个实施方案中，本发明包括一种用于治疗有需要的人类患者中恶性肿瘤的方法，所述方法包括向患者施用治疗有效量的LAG-3抑制剂和PD-1途径抑制剂，其中在施用之前，鉴定患者为患有LAG-3阳性恶性肿瘤或LAG-3阳性PD-L1阳性恶性肿瘤。在一些实施方案中，LAG-3阳性肿瘤是LAG-3阳性PD-L1阴性肿瘤。在一些实施方案中，LAG-3阳性恶性肿瘤是LAG-3阳性PD-L1阴性恶性肿瘤。在一些实施方案中，LAG-3抑制剂是抗-LAG-3抗体并且PD-1途径抑制剂是抗PD-L1抗体。在一些实施方案中，LAG-3抑制剂是抗-LAG-3抗体并且PD-1途径抑制剂是抗-PD-1抗体。
在一个实施方案中，本发明包括一种治疗有需要的人类患者中恶性肿瘤的方法，所述方法包括：(a)确定肿瘤样品中的LAG-3表达水平或LAG-3和PD-L1表达水平；并且(b)如果肿瘤是LAG-3阳性肿瘤或LAG-3阳性PD-L1阳性肿瘤，则向患者施用治疗有效量的PD1途径抑制剂和免疫检查点抑制剂。在一个实施方案中，本发明包括一种用于治疗有需要的人类患者中恶性肿瘤的方法，所述方法包括：(a)鉴定患者为患有LAG-3阳性恶性肿瘤或LAG-3阳性PD-L1阳性恶性肿瘤；并且(b)向患者施用治疗有效量的PD1途径抑制剂和免疫检查点抑制剂。在一个实施方案中，本发明包括一种用于治疗有需要的人类患者中恶性肿瘤的方法，所述方法包括向患者施用治疗有效量的PD1途径抑制剂和免疫检查点抑制剂，其中在施用之前，鉴定患者为患有LAG-3阳性恶性肿瘤或LAG-3阳性PD-L1阳性恶性肿瘤。在一些实施方案中，LAG-3阳性肿瘤是LAG-3阳性PD-L1阴性肿瘤。在一些实施方案中，LAG-3阳性恶性肿瘤是LAG-3阳性PD-L1阴性恶性肿瘤。在一些实施方案中，PD-1途径抑制剂是抗PD-L1抗体。在一些实施方案中，PD-1途径抑制剂是抗-PD-1抗体。
在另一个实施方案中，本发明包括一种用于治疗有需要的人类患者中恶性肿瘤的方法，所述方法包括向患者施用本文公开的免疫治疗，其中在施用之前，鉴定患者为患有LAG-3阳性恶性肿瘤或LAG-3阳性PD-L1阳性恶性肿瘤。在一些实施方案中，LAG-3阳性恶性肿瘤是LAG-3阳性PD-L1阴性恶性肿瘤。在一些实施方案中，免疫治疗包括施用治疗有效量的LAG-3抑制剂和PD-1途径抑制剂。在一些实施方案中，免疫治疗包括施用治疗有效量的LAG-3抑制剂。在一些实施方案中，免疫治疗包括施用治疗有效量的PD-1途径抑制剂。在一些实施方案中，免疫治疗包括施用治疗有效量的抗-CTLA-4抗体。在一些实施方案中，免疫治疗包括施用治疗有效量的PD-1途径抑制剂和免疫检查点抑制剂。在一些实施方案中，LAG-3抑制剂是抗-LAG-3抗体并且PD-1途径抑制剂是抗PD-L1抗体。在一些实施方案中，LAG-3抑制剂是抗-LAG-3抗体并且PD-1途径抑制剂是抗-PD-1抗体。
在某些实施方案中，本发明包括用于延长罹患恶性肿瘤的人类患者中无进展生存期超过12个月的方法，所述方法包括向患者施用本文公开的免疫治疗，其中在施用之前，鉴定患者为患有LAG-3阳性恶性肿瘤或LAG-3阳性PD-L1阳性恶性肿瘤并且其中患者展示无进展生存超过12个月。在一些实施方案中，LAG-3阳性恶性肿瘤是LAG-3阳性PD-L1阴性恶性肿瘤。在一些实施方案中，施用后，可以延长患者的无进展生存期超过约13个月、约14个月、约15个月、约16个月、约17个月、约18个月、约2年、约3年、约4年、约5年、约6年、约7年、约8年、约9年或约10年。在一些实施方案中，免疫治疗包括施用治疗有效量的LAG-3抑制剂和PD-1途径抑制剂。在一些实施方案中，免疫治疗包括施用治疗有效量的LAG-3抑制剂。在一些实施方案中，免疫治疗包括施用治疗有效量的PD-1途径抑制剂。在一些实施方案中，免疫治疗包括施用治疗有效量的抗-CTLA-4抗体。在一些实施方案中，免疫治疗包括施用治疗有效量的PD-1途径抑制剂和免疫检查点抑制剂。在一些实施方案中，LAG-3抑制剂是抗-LAG-3抗体并且PD-1途径抑制剂是抗-PD-1抗体。在一些实施方案中，LAG-3抑制剂是抗-LAG-3抗体并且PD-1途径抑制剂是抗PD-L1抗体。
在另外的实施方案中，本发明是包括一种用于减少罹患恶性肿瘤的人类患者中肿瘤大小至少达10％的方法，所述方法包括向患者施用本文公开的免疫治疗，其中在施用之前，鉴定患者为患有LAG-3阳性恶性肿瘤(例如，黑素瘤)或LAG-3阳性PD-L1阳性恶性肿瘤并且其中与施用之前的肿瘤大小相比，施用减少肿瘤大小至少约10％、约20％、约30％、约40％、约50％、约60％、约70％、约80％、约90％或100％。在一些实施方案中，该方法包括在施用之前，鉴定患者为患有LAG-3阳性恶性肿瘤或LAG-3阳性PD-L1阳性恶性肿瘤。在一些实施方案中，LAG-3阳性恶性肿瘤是LAG-3阳性PD-L1阴性恶性肿瘤。在一些实施方案中，免疫治疗包括施用治疗有效量的LAG-3抑制剂和PD-1途径抑制剂。在一些实施方案中，免疫治疗包括施用治疗有效量的LAG-3抑制剂。在一些实施方案中，免疫治疗包括施用治疗有效量的PD-1途径抑制剂。在一些实施方案中，免疫治疗包括施用治疗有效量的抗-PD-1抗体。在一些实施方案中，免疫治疗包括施用治疗有效量的抗PD-L1抗体。在一些实施方案中，免疫治疗包括施用治疗有效量的抗-CTLA-4抗体。在一些实施方案中，免疫治疗包括施用治疗有效量的PD-1途径抑制剂和免疫检查点抑制剂。在一些实施方案中，LAG-3抑制剂是抗-LAG-3抗体并且PD-1途径抑制剂是抗-PD-1抗体。在一些实施方案中，LAG-3抑制剂是抗-LAG-3抗体并且PD-1途径抑制剂是抗PD-L1抗体。
本发明还可以包括一种在患者中预防复发和/或引起缓解的方法，所述方法包括向患者施用本文公开的免疫治疗，其中在施用之前，鉴定患者为患有LAG-3阳性恶性肿瘤(例如，黑素瘤)或LAG-3阳性PD-L1阳性恶性肿瘤。在一些实施方案中，本发明的方法包括(i)鉴定患者为患有LAG-3阳性恶性肿瘤或LAG-3阳性PD-L1阳性恶性肿瘤；(ii)向患者施用本文公开的免疫治疗。在一些实施方案中，免疫治疗包括施用治疗有效量的LAG-3抑制剂和PD-1途径抑制剂。在一些实施方案中，LAG-3阳性恶性肿瘤是LAG-3阳性PD-L1阴性恶性肿瘤。在一些实施方案中，免疫治疗包括施用治疗有效量的LAG-3抑制剂。在一些实施方案中，免疫治疗包括施用治疗有效量的PD-1途径抑制剂。在一些实施方案中，免疫治疗包括施用治疗有效量的抗-PD-1抗体。在一些实施方案中，免疫治疗包括施用治疗有效量的抗PD-L1抗体。在一些实施方案中，免疫治疗包括施用治疗有效量的抗-CTLA-4抗体。在一些实施方案中，免疫治疗包括施用治疗有效量的PD-1途径抑制剂和免疫检查点抑制剂。在一些实施方案中，LAG-3抑制剂是抗-LAG-3抗体并且PD-1途径抑制剂是抗-PD-1抗体。在一些实施方案中，LAG-3抑制剂是抗-LAG-3抗体并且PD-1途径抑制剂是抗PD-L1抗体。
在某些实施方案中，本发明包括一种用于增加癌症治疗中患者群体中客观反应率到高于55％的方法，其中患者群体的每位患者均罹患恶性肿瘤，所述方法包括向患者施用本文公开的免疫治疗，其中在施用之前，鉴定每位患者为患有LAG-3阳性恶性肿瘤(例如，黑素瘤)或LAG-3阳性PD-L1阳性恶性肿瘤并且其中客观反应率高于55％、60％、65％、70％或75％。在一些实施方案中，该方法包括在施用之前，鉴定患者为患有LAG-3阳性恶性肿瘤或LAG-3阳性PD-L1阳性恶性肿瘤。在一些实施方案中，LAG-3阳性恶性肿瘤是LAG-3阳性PD-L1阴性恶性肿瘤。在一些实施方案中，免疫治疗包括施用治疗有效量的LAG-3抑制剂和PD-1途径抑制剂。在一些实施方案中，免疫治疗包括施用治疗有效量的LAG-3抑制剂和抗-PD-1抗体。在一些实施方案中，免疫治疗包括施用治疗有效量的LAG-3抑制剂和抗PD-L1抗体。在一些实施方案中，免疫治疗包括施用治疗有效量的LAG-3抑制剂。在一些实施方案中，免疫治疗包括施用治疗有效量的PD-1途径抑制剂。在一些实施方案中，免疫治疗包括施用治疗有效量的抗-CTLA-4抗体。在一些实施方案中，免疫治疗包括施用治疗有效量的PD-1途径抑制剂和免疫检查点抑制剂。在一些实施方案中，LAG-3抑制剂是抗-LAG-3抗体并且PD-1途径抑制剂是抗-PD-1抗体。在一些实施方案中，LAG-3抑制剂是抗-LAG-3抗体并且PD-1途径抑制剂是抗PD-L1抗体。
在某些实施方案中，本发明包括一种用于增加癌症治疗中患者群体中疾病控制率到高于55％的方法，其中患者群体的每位患者均罹患恶性肿瘤，所述方法包括向患者施用本文公开的免疫治疗，其中在施用之前，鉴定每位患者为患有LAG-3阳性恶性肿瘤(例如，黑素瘤)或LAG-3阳性PD-L1阳性恶性肿瘤并且其中疾病控制率高于55％、60％、65％、70％或75％。在一些实施方案中，该方法包括在施用之前，鉴定患者为患有LAG-3阳性恶性肿瘤或LAG-3阳性PD-L1阳性恶性肿瘤。在一些实施方案中，LAG-3阳性恶性肿瘤是LAG-3阳性PD-L1阴性恶性肿瘤。在一些实施方案中，免疫治疗包括施用治疗有效量的LAG-3抑制剂和PD-1途径抑制剂。在一些实施方案中，免疫治疗包括施用治疗有效量的LAG-3抑制剂。在一些实施方案中，免疫治疗包括施用治疗有效量的PD-1途径抑制剂。在一些实施方案中，免疫治疗包括施用治疗有效量的抗-PD-1抗体。在一些实施方案中，免疫治疗包括施用治疗有效量的抗PD-L1抗体。在一些实施方案中，免疫治疗包括施用治疗有效量的抗-CTLA-4抗体。在一些实施方案中，免疫治疗包括施用治疗有效量的PD-1途径抑制剂和免疫检查点抑制剂。在一些实施方案中，LAG-3抑制剂是抗-LAG-3抗体并且PD-1途径抑制剂是抗-PD-1抗体。在一些实施方案中，LAG-3抑制剂是抗-LAG-3抗体并且PD-1途径抑制剂是抗PD-L1抗体。
在其他实施方案中，该方法中的每位患者均经历(i)无进展生存期延长超过12个月，(ii)与施用之前的肿瘤大小相比，肿瘤大小减少至少约10％、约20％、约30％、约40％或约50％或(iii)这两者。在一些实施方案中，患者群体可以是至少100名患有LAG-3阳性恶性肿瘤(例如，黑素瘤)或LAG-3阳性PD-L1阳性恶性肿瘤的患者。在一些实施方案中，患者群体可以是至少200、300、400、500、600、700、800、900或1000名患有LAG-3阳性恶性肿瘤或LAG-3阳性PD-L1阳性恶性肿瘤的患者。在一些实施方案中，LAG-3阳性恶性肿瘤是LAG-3阳性PD-L1阴性恶性肿瘤。
在其他实施方案中，本发明提供一种用于选择适于联合疗法的人类患者的方法，所述方法包括：(a)鉴定患者为患有LAG-3阳性恶性肿瘤或LAG-3阳性PD-L1阳性恶性肿瘤；并且(b)医嘱医疗保健提供者向患者施用本文公开的免疫治疗。在一些实施方案中，LAG-3阳性恶性肿瘤是LAG-3阳性PD-L1阴性恶性肿瘤。该方法还可以包括施用本文公开的免疫治疗。在一些实施方案中，免疫治疗包括施用治疗有效量的LAG-3抑制剂和PD-1途径抑制剂。在一些实施方案中，免疫治疗包括施用治疗有效量的LAG-3抑制剂。在一些实施方案中，免疫治疗包括施用治疗有效量的PD-1途径抑制剂。在一些实施方案中，免疫治疗包括向患者施用治疗有效量的抗-PD-1抗体。在一些实施方案中，免疫治疗包括向患者施用治疗有效量的抗PD-L1抗体。在一些实施方案中，免疫治疗包括施用治疗有效量的抗-CTLA-4抗体。在一些实施方案中，免疫治疗包括施用治疗有效量的PD-1途径抑制剂和免疫检查点抑制剂。在一些实施方案中，LAG-3抑制剂是抗-LAG-3抗体并且PD-1途径抑制剂是抗-PD-1抗体。在一些实施方案中，LAG-3抑制剂是抗-LAG-3抗体并且PD-1途径抑制剂是抗PD-L1抗体。在一些实施方案中，施用过程治疗了恶性肿瘤。
作为施用本文公开的免疫治疗的结果，本发明的方法可以治疗恶性肿瘤、缩减肿瘤大小、防止肿瘤生长、从患者消除肿瘤、防止肿瘤复发、在患者中引起缓解或其任意组合。在某些实施方案中，施用本文公开的免疫治疗引起完全反应。在其他实施方案中，施用本文公开的免疫治疗引起部分反应。在一些实施方案中，免疫治疗包括施用治疗有效量的LAG-3抑制剂和PD-1途径抑制剂。在一些实施方案中，免疫治疗包括施用治疗有效量的LAG-3抑制剂。在一些实施方案中，免疫治疗包括施用治疗有效量的PD-1途径抑制剂。在一些实施方案中，免疫治疗包括向患者施用治疗有效量的抗-PD-1抗体。在一些实施方案中，免疫治疗包括向患者施用治疗有效量的抗PD-L1抗体。在一些实施方案中，免疫治疗包括向患者施用治疗有效量的抗-CTLA-4抗体。在一些实施方案中，免疫治疗包括施用治疗有效量的PD-1途径抑制剂和免疫检查点抑制剂。在一些实施方案中，LAG-3抑制剂是抗-LAG-3抗体并且PD-1途径抑制剂是抗-PD-1抗体。在一些实施方案中，LAG-3抑制剂是抗-LAG-3抗体并且PD-1途径抑制剂是抗PD-L1抗体。
在一些实施方案中，LAG-3阳性肿瘤包含至少约1％、至少约2％、至少约3％、至少约4％、至少约5％、至少约7％、至少约10％、至少约15％、至少约20％、至少约25％、至少约30％、至少约40％、至少约50％、至少约60％、至少约70％、至少约80％、至少约90％或100％表达LAG-3的细胞。在一些实施方案中，表达LAG-3的细胞包括肿瘤浸润型淋巴细胞。
在一些实施方案中，鉴定包括确定恶性肿瘤中的LAG-3表达。
在一些实施方案中，通过收到能够确定LAG-3表达的测定法的结果，确定LAG-3表达。
在某些实施方案中，本发明的任何方法还包括确定肿瘤样品中的PD-L1表达。
在某些实施方案中，本发明的任何方法还包括在施用之前，鉴定患者为患有PD-L1阳性恶性肿瘤。在某些实施方案中，本发明的任何方法还包括在施用之前，鉴定患者为患有PD-L1阴性恶性肿瘤。
在某些实施方案中，本发明的任何方法还包括确定恶性肿瘤中的PD-L1表达。
在本发明的任何方法的某些实施方案中，在施用之前，鉴定患者为患有PD-L1阳性恶性肿瘤。在本发明的任何方法的某些实施方案中，在施用之前，鉴定患者为患有PD-L1阴性恶性肿瘤。
已经在PCT/US2016/029878中公开了用于确定肿瘤样品中PD-L1表达的方法、用于鉴定患者为患有PD-L1阳性恶性肿瘤的方法和用于确定恶性肿瘤中PD-L1表达的方法。
在某些实施方案中，本发明的方法包括用PD-1途径抑制剂和LAG-3抑制剂的组合治疗有需求的不可切除性或转移性黑素瘤人类患者的方法，其中患者先前用抗PD-1抑制剂和/或抗PD-L1抑制剂治疗过。在某些实施方案中，PD-1途径抑制剂是抗-PD-1抗体。在具体的实施方案中，抗-PD-1抗体是纳武单抗。在一些实施方案中，LAG-3抑制剂是抗-LAG-3抗体。在某些实施方案中，LAG-3抗体是BMS-986016。在实施方案中，黑素瘤是表达LAG-3的肿瘤。在具体的实施方案中，黑素瘤是表达LAG-3的肿瘤，LAG-3表达≥1％。
测量LAG-3表达
在某些实施方案中，为本发明方法鉴定适于LAG-3抑制剂/PD-1途径抑制剂联合疗法、PD-1途径抑制剂(例如，抗-PD-1抗体)疗法或抗-CTLA-4抗体疗法的患者，包括测量或评估样品(例如，包含肿瘤细胞和肿瘤浸润型炎性细胞的恶性肿瘤供试组织样品)中的LAG-3表达。短语“肿瘤表达LAG-3”、“LAG-3表达肿瘤”，“LAG-3阳性肿瘤”和“LAG-3表达阳性肿瘤”在本文中互换地使用并且涵盖包含表达LAG-3的肿瘤浸润型淋巴细胞的肿瘤。本文他处提供短语的含义。可以通过施用的任何方法实现测量或评估LAG-3表达的方法。
为了评估LAG-3表达，在一个实施方案中，供试组织样品从需要该疗法的患者获得。在一些实施方案中，供试组织样品包括但不限于任何临床相关的组织样品，如肿瘤活检、芯取活检组织样品、细针抽吸物或体液(如血液、血浆、血清、淋巴液、腹水、囊液或尿)样品。在一些实施方案中，供试组织样品来自原发肿瘤。在一些实施方案中，供试组织样品来自转移灶。在一些实施方案中，在多个时间点，例如，治疗前、治疗期间和/或治疗后，从个体取得供试组织样品。在一些实施方案中，供试组织样品取自个体中的不同位置，例如，来自原发肿瘤的样品和来自远端位置的转移灶的样品。
在一些实施方案中，供试组织样品是石蜡包埋的固定的组织样品。在一些实施方案中，供试组织样品是福尔马林固定石蜡包埋(FFPE)的组织样品。在一些实施方案中，供试组织样品是新鲜组织(例如，肿瘤)样品。在一些实施方案中，供试组织样品是冷冻的组织样品。在一些实施方案中，供试组织样品是新鲜的冷冻(FF)组织(例如，肿瘤)样品。在一些实施方案中，供试组织样品是从流体分离的细胞。在一些实施方案中，供试组织样品包含循环型肿瘤细胞(CTC)。在一些实施方案中，供试组织样品包含肿瘤浸润型淋巴细胞(TIL)。在一些实施方案中，供试组织样品包含肿瘤细胞和肿瘤浸润型淋巴细胞(TIL)。在一些实施方案中，供试组织样品包含循环型淋巴细胞。在一些实施方案中，供试组织样品是归档组织样品。在一些实施方案中，供试组织样品是诊断、治疗和/或结局史已知的归档组织样品。在一些实施方案中，样品是组织块。在一些实施方案中，供试组织样品是分散的细胞。在一些实施方案中，样本量是约1个细胞至约1x 106个细胞或更多。在一些实施方案中，样本量是约1个细胞至约1x 105个细胞。在一些实施方案中，样本量是约1个细胞至约10,000个细胞。在一些实施方案中，样本量是约1个细胞至约1,000个细胞。在一些实施方案中，样本量是约1个细胞至约100个细胞。在一些实施方案中，样本量是约1个细胞至约10个细胞。在一些实施方案中，样本量是单个细胞。
在另一个实施方案中，可以在不获得供试组织样品的情况下实现对LAG-3表达的评估。在一些实施方案中，选择合适的患者包括(i)任选地提供从具有该组织的癌症患者获得的供试组织样品，所述供试组织样品包含肿瘤细胞和/或肿瘤浸润型炎性细胞；和(ii)基于以下评估，即，供试组织样品中表达LAG-3的细胞的比例高于预定阈值水平，评估供试组织样品中在细胞表面上表达LAG-3的细胞的比例。
然而，在包括测量供试组织样品中LAG-3表达的任何方法中，应当理解包括提供从患者获得的供试组织样品的步骤是任选的步骤。即，在某些实施方案中，该方法包括这个步骤，并且在其他实施方案中，这个步骤未包纳入该方法中。还应当理解，在某些实施方案中，通过分析LAG-3表达的变换性方法(transformative method)，例如通过进行逆转录酶-聚合酶链反应(RT-PCR)测定或IHC测定，进行了鉴定供试组织样品中表达LAG-3的细胞或确定其数目或比例的“测量”或“评估”步骤。在某些其他实施方案中，不涉及变换性步骤并且例如通过查看来自实验室的检验结果报告，评估LAG-3表达。在一些实施方案中，通过查看来自实验室的免疫组织化学测定结果，评估LAG-3表达。在某些实施方案中，至多到并包括评估LAG-3表达的方法的步骤提供了中间结果，其中可以将所述中间结果提供给医师或其他医疗保健提供者，用于选择LAG-3抑制剂和PD-1途径抑制剂联合疗法的合适候选人。在某些实施方案中，至多到并包括评估LAG-3表达的方法的步骤提供了中间结果，其中可以将所述中间结果提供给医师或其他医疗保健提供者，用于选择PD-1途径抑制剂(例如，抗-PD-1抗体)疗法的合适候选人。在某些实施方案中，至多到并包括评估LAG-3表达的方法的步骤提供了中间结果，其中可以将所述中间结果提供给医师或其他医疗保健提供者，用于选择抗-CTLA-4抗体疗法的合适候选人。在某些实施方案中，提供中间结果的步骤由医疗执业者或依据医疗执业者指令行事的某个人执行。在其他实施方案中，这些步骤由独立的实验室或由独立人员如实验室技师执行。
在本发明的任何方法的某些实施方案中，通过执行检测LAG-3RNA存在的测定法，评估表达LAG-3的细胞的比例。在其他实施方案中，通过RT-PCR、原位杂交或RNA酶保护法检测LAG-3RNA的存在。在一些实施方案中，通过基于RT-PCR的测定法检测LAG-3RNA的存在。在一些实施方案中，评定基于RT-PCR的测定法包括相对于预定水平，评估供试组织样品中LAG-3RNA表达的水平。
在其他实施方案中，通过执行检测LAG-3多肽存在的测定法，评估表达LAG-3的细胞的比例。在其他实施方案中，通过IHC、酶联免疫吸附测定(ELISA)、体内成像或流式细胞术检测LAG-3多肽的存在。在一些实施方案中，通过IHC测定LAG-3表达。在全部这些方法的其他实施方案中，例如使用，IHC或体内成像，分析LAG-3的细胞表面表达。
在实施方案中，测量的生物标记物是LAG-3、CD4、CD8、FOXP3、CD163、CD68及其任意组合。在实施方案中，使用本文公开的任何检测方法，测量生物标记物。在其他实施方案中，通过流式细胞术评估供试组织样品中表达LAG-3的细胞的比例。在一些实施方案中，通过流式细胞术分析的供试组织样品包含肿瘤浸润型免疫细胞。在一些实施方案中，恶性肿瘤是血液恶性肿瘤并且通过流式细胞术分析的组织样品包含外周血细胞。在一些实施方案中，流式细胞术是多重测定。在一些实施方案中，对流式细胞术评分包括检测标记物表达，所述标记物包括LAG-3、CD4、CD8、FOXP3及其任意组合。在一些实施方案中，将LAG-3、CD4、CD8和FOXP3作为单一标记物检测。在一些实施方案中，对流式细胞术评分包括评估供试组织样品中表达LAG-3的T细胞的比例。在一些实施方案中，对流式细胞术评分包括评估供试组织样品中表达LAG-3的CD8+T细胞的比例。在一些实施方案中，对流式细胞术评分包括评估供试组织样品中表达LAG-3的CD4+T细胞的比例。在一些实施方案中，对流式细胞术评分包括评估供试组织样品中表达LAG-3的FOXP3+T细胞的比例。在一些实施方案中，对流式细胞术评分包括检测标记物表达，所述标记物包括CD163和/或CD68。在一些实施方案中，对流式细胞术评分包括评估供试组织样品中表达CD163和/或CD68的T细胞的比例。
在本发明的任何方法的某些实施方案中，通过执行检测LAG-3多肽存在的测定法，评估供试组织样品中表达LAG-3的细胞的比例。在一些实施方案中，通过免疫组织化学测定，检测LAG-3多肽的存在。在一些实施方案中，供试组织样品是肿瘤活检样品。在一些实施方案中，供试组织样品是福尔马林固定石蜡包埋(FFPE)的样品。
在一些实施方案中，免疫组织化学测定是单重测定。在一些实施方案中，免疫组织化学测定是多重测定。在一些实施方案中，多重免疫组织化学测定能够检测CD4、CD8、FOXP3、CD163、CD68或其任意组合的存在。
在一些实施方案中，免疫组织化学测定包括使肿瘤样品与17B4小鼠抗人LAG-3IgG1单克隆抗体接触。在一些实施方案中，免疫组织化学测定包括使肿瘤样品与包含重链可变区和轻链可变区的抗-LAG-3抗体接触，所述重链可变区和轻链可变区包含SEQ IDNOs:3和5中分别所述的序列。在一些实施方案中，免疫组织化学测定包括使肿瘤样品与SP346兔抗人LAG-3IgG单克隆抗体接触。在一些实施方案中，免疫组织化学测定包括使肿瘤样品与11E3(Novusbio)、874501(Novusbio)、或EPR4392(2)(Abcam)抗人LAG-3单克隆抗体接触。
例如，在黑素瘤肿瘤样品中，黑色素可能通过使组织学特征模糊并通过免疫组织化学(IHC)期间干扰和/或掩盖染色，干扰组织学分析。可以通过将样品漂白，移除黑色素。例如，参见Shen和Wu,Appl Immunohistochem Mol Morphol,23(4):303–307(2015)；Orchard和Calonje,Am J Dermatopathol,20(4):357-61(1998)。在一些实施方案中，免疫组织化学测定包括在样品与抗-LAG-3抗体接触之前，将黑色素漂白。参见，例如图15。在一些实施方案中，黑色素漂白包括使样品接触于稀的过氧化氢(0.1至30％v/v)、三氯异氰尿酸(TCCA)、高锰酸钾/草酸，或用于组织样品去色素沉着(即，从中移除黑色素)的其他传统氧化方法。
在一些实施方案中，免疫组织化学测定使用黑色或棕色生色原。在一些实施方案中，免疫组织化学测定使用红色生色原。在一些实施方案中，免疫组织化学测定使用蓝色生色原。在一些实施方案中，免疫组织化学测定使用绿色生色原。在一些实施方案中，免疫组织化学测定使用紫生色原。在一些实施方案中，免疫组织化学测定使用黄色生色原。
在一些实施方案中，在低放大率对免疫组织化学测定评分。在一些实施方案中，低放大率是约20倍。在一些实施方案中，在高放大率对免疫组织化学测定评分。在一些实施方案中，高放大率是约40倍。
在一些实施方案中，通过图像分析软件对免疫组织化学测定评分。在一些实施方案中，通过病理学家目视免疫评分，对免疫组织化学测定评分。在一些实施方案中，手工地对免疫组织化学测定评分。
在一些实施方案中，对免疫组织化学测定评分包括评估供试组织样品中表达LAG-3的细胞的比例。在一些实施方案中，对免疫组织化学测定评分包括评估供试组织样品中表达LAG-3的免疫细胞的比例。在一些实施方案中，对免疫组织化学测定评分包括评估供试组织样品中表达LAG-3的T细胞的比例。在一些实施方案中，对免疫组织化学测定评分包括评估供试组织样品中表达LAG-3的CD8+T细胞的比例。在一些实施方案中，对免疫组织化学测定评分包括评估供试组织样品中表达LAG-3的CD4+T细胞的比例。在一些实施方案中，对免疫组织化学测定评分包括评估供试组织样品中表达LAG-3的FOXP3+T细胞的比例。
LAG-3多肽定位包括部分膜/胞质定位、点样定位、核周和完整膜/胞质定位。在一些实施方案中，评定具有部分膜/胞质LAG-3定位的细胞。在一些实施方案中，评定具有点样LAG-3定位的细胞。在一些实施方案中，评定具有完整膜/胞质LAG-3定位的细胞。在一些实施方案中，评定具有核周LAG-3定位的细胞。在一些实施方案中，评定具有任何LAG-3定位模式的细胞。
在一些实施方案中，免疫组织化学测定是还包括检测肿瘤细胞的MHC II类表达的多重测定。在一些实施方案中，对免疫组织化学测定评分包括评估供试组织样品中表达MHCII类的细胞的比例。在一些实施方案中，对免疫组织化学测定评分包括评估供试组织样品中表达MHC II类的非免疫细胞的比例。在一些实施方案中，表达MHC II的细胞的分布在肿瘤样品中是不均一的。在一些实施方案中，对免疫组织化学测定评分包括在包含高密度表达MHC II类的细胞的肿瘤样品区域内评估表达MHC II类的细胞的比例。
在一些实施方案中，免疫组织化学测定是多重测定，所述多重测定还包括检测肿瘤浸润型淋巴细胞(TIL)的CD163和/或CD68表达。在一些实施方案中，对免疫组织化学测定评分包括评估供试组织样品中表达CD163和/或CD68的TIL的比例。。
成像技术提供了癌症研究和治疗中的重要工具。分子成像系统(包括正电子发射断层扫描(PET)、单光子发射计算机断层扫描(SPECT)、荧光反射成像(FRI)、荧光介导断层扫描(FMT)、生物发光成像(BLI)、激光扫描共焦显微术(LSCM)和多光子显微术(MPM))最近的发展可能将预示这些技术在癌症研究中更大的用途。这些分子成像系统中的一些允许临床医生不仅可以看到肿瘤定位在身体中的什么位置，还可显示影响肿瘤行为和/或对治疗药物的反应性的特定分子、细胞和生物过程的表达和活性(Condeelis和Weissleder,ColdSpring Harb.Perspect.Biol.2(12):a003848(2010))。抗体特异性连同PET的灵敏度和分辨率使得immunoPET成像对监测和测定组织样品中抗原的表达尤具吸引力(McCabe和Wu,Cancer Biother.Radiopharm.25(3):253-61(2010)；Olafsen等,Protein Eng.Des.Sel.23(4):243-9(2010))。在任意本发明的方法的某些实施方案中，通过immunoPET成像测定LAG-3表达。在某些实施方案中，使用锆-89放射标记的抗-LAG-3抗体，进行免疫PET。在任意本发明的方法的某些实施方案中，通过进行测定来确定测试组织样品中细胞表面LAG-3多肽的存在来评估测试组织样品中表达LAG-3的细胞的比例。在某些实施方案中，该测试组织样品是FFPE组织样品。在其他实施方案中，通过IHC测定法来测定LAG-3多肽的存在。在其他实施方案中，用自动化方法进行IHC测定法。在一些实施方案中，用抗LAG-3mAb结合LAG-3多肽来进行IHC测定法。
通过自动化IHC测定LAG-3表达
在本发明方法的一个实施方案中，用自动化IHC方法来测定FFPE组织样品中LAG-3表达。本公开提供用于检测测试组织样品中人LAG-3抗原的存在或定量人LAG-3抗原的水平或样品中表达该抗原的细胞的比例的方法，该方法包括使测试样品和阴性对照样品与特异性结合人LAG-3的mAb在允许抗体或其部分和人LAG-3之间形成复合物的条件下接触。在某些实施方案中，该测试样品和对照组织样品是FFPE样品。然后检测复合物的形成，其中测试样品和阴性对照样品之间复合物形成的差异指示样品中人LAG-3抗原的存在。用多种方法来定量LAG-3表达。
在一个具体实施方案中，该自动化IHC方法包括：(a)在自动染色仪中脱蜡和再水化封固的组织切片；(b)在自动染色器中修复抗原；(c)在自动染色仪上设置试剂；和(d)运行自动染色仪以包括中和组织样品中的内源性过氧化物酶的步骤；封闭载片上的非特异性蛋白结合位点；用第一Ab孵育载片；用一抗后封闭剂孵育；与一抗后检测剂(postprimaryantibody detection agent)(如可以缀合或可以不缀合于检测用酶的另一种抗体)温育；与聚合物-酶检测试剂温育；添加生色原底物和显色；和苏木精复染。在一些实施方案中，修复抗原包括使用任何基于热的抗原修复装置。
在一些实施方案中，为了评估肿瘤组织样品中的LAG-3表达，病理学家在显微镜下检查每个视野中LAG-3+肿瘤细胞的数目，心里估计阳性细胞的百分数，然后将它们平均以得出最终百分数。不同染色强度定义为0/阴性、1+/弱、2+/中、和3+/强。通常，百分数值首先分配至0和3+桶(buckets)，然后考虑中间1+和2+强度。对于高异质性组织，将样品分区，每个区分开评分，然后组合为单个组的百分数值。从每个区域确定不同染色强度的阴性和阳性细胞的百分数，给出每个区的中位数值。给出每个染色强度类别的组织的最终百分数值：阴性、1+、2+和3+。所有染色强度的总和需为100％。
在一些实施方案中，还在肿瘤浸润炎性细胞如巨噬细胞和淋巴细胞中评估染色。评估巨噬细胞和淋巴细胞的LAG-3染色，仅将所有样品记录为每个细胞类别阳性或阴性。还按照肿瘤免疫细胞指定外侧/内侧表征染色。“内侧”意指免疫细胞在肿瘤组织内和/或在肿瘤区域的边界上而在肿瘤细胞间无物理嵌入。“外侧”意指与肿瘤无物理结合，免疫细胞见于与结缔组织或任何相关邻近组织结合的外周(periphery)。
在这些评分方法的某些实施方案中，由两名或更多独立操作的病理学家评分样品，然后合并评分。在某些其他实施方案中，用适当的软件评分阳性和阴性细胞的鉴定。
用组织评分(histoscore)(H评分)作为IHC数据的更具定量性的测量。组织评分计算如下：
组织评分＝[(％肿瘤x 1(低强度))+(％肿瘤x 2(中强度))+(％肿瘤x 3(高强度)]
为了确定组织评分，病理学家估计样品内每个强度类别中染色细胞的百分数。因为大多数生物标志物的表达是异质性的，组织评分是总体表达的更真实呈现。最终组织评分范围为0(最低评分，无表达)至300(最高评分，强烈和包含性表达)。
3.LAG-3抑制剂
在一个方面，本发明的特征在于治疗恶性肿瘤时使用LAG-3抑制剂的方法。如本文所用，LAG-3抑制剂包括但不限于LAG-3结合剂和可溶性LAG-3多肽。LAG-3结合剂包括与LAG-3特异性结合的抗体。
在一些实施方案中，LAG-3抑制剂是LAG-3结合剂，例如抗-LAG-3抗体。在一些实施方案中，LAG-3抑制剂是可溶性LAG-3多肽，例如，能够与MHC II类结合的LAG-3-Fc融合多肽。
可以使用本领域熟知的方法生成适用于本发明中的抗人LAG-3抗体(或从其中衍生的VH/VL结构域)。备选地，可以使用本领域公认的抗-LAG-3抗体。在某些实施方案中，LAG-3抑制剂包括抗-LAG-3双特异性抗体。在一些实施方案中，抗-LAG-3抗体结合LAG-3和PD-1。
在一些实施方案中，抗-LAG-3抗体是包含重链和轻链的BMS-986016，所述重链和轻链包含SEQ ID NOs:1和2中分别所示的序列，或其抗原结合片段及变体，如PCT/US13/48999中所述。
在其他实施方案中，抗体具有BMS-986016的重链CDR和轻链CDR或可变区。因此，在一个实施方案中，抗体包含BMS-986016的VH区的CDR1、CDR2和CDR3结构域，所述VH区具有SEQ ID NO:3中所述的序列，和BMS-986016的VL区的CDR1、CDR2和CDR3结构域，所述VL区具有SEQ ID NO:5中所述的序列。在另一个实施方案中，抗体包含这样的CDR1、CDR2和CDR3结构域，其包含SEQ ID NOs:7、8和9中分别所述的序列，和这样的CDR1、CDR2和CDR3结构域，其包含SEQ ID NOs:10、11和12中分别所述的序列。在另一个实施方案中，抗体包含这样的VH区和/或VL区，其包含SEQ ID NO:3和/或SEQ ID NO:5中分别所述的氨基酸序列。在另一个实施方案中，抗体包含SEQ ID NO:4和/或SEQ ID NO:6中分别所述的核酸序列编码的重链可变区(VH)和/或轻链可变区(VL)。在另一个实施方案中，抗体与上文提到的抗体竞争结合和/或结合于LAG-3上与上文提到的抗体相同的表位。在另一个实施方案中，抗体结合人LAG-3的表位，所述表位包含氨基酸序列PGHPLAPG(SEQ ID NO:14)。在另一个实施方案中，抗体结合人LAG-3的表位，所述表位包含氨基酸序列HPAAPSSW(SEQ ID NO:15)或PAAPSSWG(SEQ ID NO:16)。
在另一个实施方案中，抗体与上文提到的抗体具有至少约90％的可变区氨基酸序列同一性(例如，与SEQ ID NO:3或SEQ ID NO:5具有至少约90％、95％或99％可变区同一性)。
在一些实施方案中，本领域公认的抗-LAG-3抗体可以用于本发明的治疗方法中。例如，可以使用在US2011/0150892A1中描述并称作单克隆抗体25F7(也称作“25F7”和“LAG-3.1”)的抗人LAG-3抗体。可以使用本领域公认的其他抗-LAG-3抗体包括在US 2011/007023中描述的IMP731(H5L7BW)、在WO2016028672中描述的MK-4280(28G-10)、在Journal forImmunoTherapy of Cancer,(2016)第4卷，增刊1摘要编号：P195中描述的REGN3767、在WO2017/019894中描述的BAP050、IMP-701(LAG-525)、Sym022、TSR-033、MGD013、BI754111、FS118、AVA-017和GSK2831781。可以在例如以下中找到可用于要求保护的发明中的这些抗体和其他抗-LAG-3抗体：WO2016/028672、WO2017/106129、WO2017/062888、WO2009/044273、WO2018/069500、WO2016/126858、WO2014/179664、WO2016/200782、WO2015/200119、WO2017/019846、WO2017/198741、WO2017/220555、WO2017/220569、WO2018/071500、WO2017/015560、WO2017/025498、WO2017/087589、WO2017/087901、WO2018/083087、WO2017/149143、WO2017/219995、US2017/0260271、WO2017/086367、WO2017/086419、WO2018/034227和WO2014/140180。在一个实施方案中，LAG-3抑制剂是IMP321(eftilagimodα)。这些参考文献的每一份的内容通过引用的方式完整并入本文。
还可以使用与上文参考的本领域公认的任何抗体竞争结合于LAG-3的抗体。
在某些实施方案中，抗-LAG-3抗体用来确定LAG-3表达。在一些实施方案中，在福尔马林固定、石蜡包埋(FFPE)的组织标本中对其与LAG-3结合的能力选择抗-LAG-3抗体。在其他实施方案中，抗-LAG-3抗体能够与冷冻组织中的LAG-3的结合。在其他实施方案中，抗-LAG-3抗体能够区分膜结合型、胞质和/或可溶性形式的LAG-3。
在一些实施方案中，根据本文所述的方法可用于测定、检测和/或定量LAG-3表达的抗-LAG-3抗体是17B4小鼠IgG1抗人LAG-3单克隆抗体或其抗原结合片段。参见，例如J.Matsuzaki等人,PNAS 107,7875(2010)。
4.PD-1途径抑制剂
在一个方面，本发明的特征在于治疗恶性肿瘤时使用PD-1抑制剂的方法。如本文所用，“PD-1途径抑制剂”包括但不限于PD-1结合剂、PD-L1结合剂和PD-L2结合剂。PD-1结合剂包括与PD-1特异性结合的抗体。PD-L1和PD-L2结合剂包括与PD-L1和/或PD-L2特异性结合的抗体以及与PD-L1和/或PD-L2结合的可溶性PD-1多肽。
在一些实施方案中，PD-1途径抑制剂是PD-1结合剂，例如抗-PD-1抗体。在一些实施方案中，PD-1途径抑制剂是PD-L1结合剂，例如，抗PD-L1抗体。在一些实施方案中，PD-1途径抑制剂是PD-L2结合剂，例如抗PD-L2抗体。在其他实施方案中，PD-L1结合剂是可溶性PD-1多肽，例如，能够与PD-L1结合的PD-1-Fc融合多肽。在其他实施方案中，PD-L2结合剂是可溶性PD-1多肽，例如，能够与PD-L2结合的PD-1-Fc融合多肽。
可以使用本领域熟知的方法生成适用于本发明中的抗人-PD-1抗体(或从中衍生的VH和/或VL结构域)。备选地，可以使用本领域公认的抗-PD-1抗体。例如，可以使用在WO2006/121168中描述的单克隆抗体5C4(在本文中称作纳武单抗或BMS-936558)、17D8、2D3、4H1、4A11、7D3和5F4。其他已知的PD-1抗体包括在WO 2008/156712中描述的lambrolizumab(MK-3475)和在WO 2012/145493中描述的AMP-514。其他已知的PD-1抗体和其他PD-1抑制剂包括例如在WO 2009/014708、WO 03/099196、WO 2009/114335和WO2011/161699中描述的那些，所述文献通过引用的方式并入本文。在一个实施方案中，抗-PD-1抗体是REGN2810。在一个实施方案中，抗-PD-1抗体是PDR001。另一种已知的抗-PD-1抗体是pidilizumab(CT-011)。
在一个实施方案中，抗-PD-1抗体是纳武单抗。纳武单抗(也称作
Figure BDA0002298562630000341
；以前命名为5C4、BMS-936558、MDX-1106或ONO-4538)是全人IgG4(S228P)PD-1免疫检查点抑制抗体，其选择性地防止与PD-1配体(PD-L1和PD-L2)的相互作用，因而阻断抗肿瘤T细胞功能下调(美国专利号8,008,449；Wang等人,Cancer Immunol Res.2(9):846-56(2014))。在另一个实施方案中，抗-PD-1抗体或其片段与纳武单抗交叉竞争。在其他实施方案中，抗-PD-1抗体或其片段结合与纳武单抗相同的表位。在某些实施方案中，抗-PD-1抗体具有与纳武单抗相同的CDR。
在一些实施方案中，抗-PD-1抗体包含重链和轻链，所述重链和轻链包含SEQ IDNOs:17和18中分别所示的序列，或其抗原结合片段及变体。
在其他实施方案中，抗体具有纳武单抗的重链CDR和轻链CDR或可变区。因此，在一个实施方案中，抗体包含纳武单抗的VH的CDR1、CDR2和CDR3结构域，所述VH具有SEQ ID NO:19中所述的序列，和纳武单抗的VL的CDR1、CDR2和CDR3结构域，所述VL具有SEQ ID NO:21中所述的序列。在另一个实施方案中，抗体包含这样的CDR1、CDR2和CDR3结构域，其包含SEQID NOs:23、24和25中分别所述的序列，和这样的CDR1、CDR2和CDR3结构域，其包含SEQ IDNOs:26、27和28中分别所述的序列。在另一个实施方案中，抗体包含这样的VH区和/或VL区，其包含SEQ ID NO:19和/或SEQ ID NO:21中分别所述的氨基酸序列。在另一个实施方案中，抗体包含SEQ ID NO:20和/或SEQ ID NO:22中分别所述的核酸序列编码的重链可变区(VH)和/或轻链可变区(VL)。在另一个实施方案中，抗体与上文提到的抗体竞争结合和/或结合于PD-1上与上文提到的抗体相同的表位。在另一个实施方案中，抗体与上文提到的抗体具有至少约90％的可变区氨基酸序列同一性(例如，与SEQ ID NO:19或SEQ ID NO:21具有至少约90％、95％或99％可变区同一性)。
以高亲和力与PD-1特异性结合的人单克隆抗体(HuMAbs)已经在美国专利号8,008,449和8,779,105中公开。已经例如在美国专利号6,808,710、7,488,802、8,168,757和8,354,509和PCT公开号WO 2012/145493中描述其他抗PD-1mAb，所述文献通过引用的方式并入本文。在一些实施方案中，抗-PD-1抗体已经展示显示出以下一个或多个特征：(a)以1x10-7M或更小的KD与人PD-1结合，如通过使用Biacore生物传感器系统的表面等离子体共振法所测定；(b)基本上与人CD28、CTLA-4或ICOS不结合；(c)在混合淋巴细胞反应(MLR)测定法中增加T细胞增殖；(d)在MLR测定法中增加干扰素-γ产生；(e)在MLR测定法中增加IL-2分泌；(f)与人PD-1和食蟹猴PD-1结合；(g)抑制PD-L1和/或PD-L2与PD-1结合；(h)刺激抗原特异性记忆应答；(i)刺激抗体应答；和(j)在体内抑制肿瘤细胞生长。可用于本发明的抗-PD-1抗体包括与人PD-1特异性结合并显示出至少一个、至少两个、至少三个、至少四个、或至少五个前述特征的mAb。已经在美国专利号8,008,449、8,779,105、6,808,710、7,488,802、8,168,757和8,354,509和PCT公开号WO 2012/145493中公开了显示这些特征中一者或多者的抗-PD-1抗体，所述文献通过引用的方式并入本文。在另一个实施方案中，抗-PD-1抗体是派姆单抗。派姆单抗是针对人细胞表面受体PD-1(程序性死亡-1或程序性细胞死亡-1)的人源化单克隆IgG4(S228P)抗体。例如在美国专利号8,354,509和8,900,587中描述了派姆单抗，所述文献通过引用的方式并入本文。
在一些实施方案中，抗-PD-1抗体或其片段与派姆单抗交叉竞争。在一些实施方案中，抗-PD-1抗体或其片段结合与派姆单抗相同的表位。在某些实施方案中，抗-PD-1抗体具有与派姆单抗相同的CDR。在另一个实施方案中，抗-PD-1抗体是派姆单抗。派姆单抗(也称作lambrolizumab和MK-3475)是针对人细胞表面受体PD-1(程序性死亡-1或程序性细胞死亡-1)的人源化单克隆IgG4抗体。例如在美国专利号8,354,509和8,900,587中描述了派姆单抗；还参见http://www.cancer.gov/drugdictionary？cdrid＝695789(最后访问时间：2014年12月14日)。派姆单抗已经由FDA批准用于治疗复发性或难治性黑素瘤。
在其他实施方案中，抗-PD-1抗体或其片段与MEDI0608交叉竞争。另外的实施方案中，抗-PD-1抗体或其片段结合与MEDI0608相同的表位。在某些实施方案中，抗-PD-1抗体具有与MEDI0608相同的CDR。在其他实施方案中，抗-PD-1抗体是MEDI0608(前称AMP-514)，其是单克隆抗体。例如在美国专利号8,609,089B2中或在http://www.cancer.gov/drugdictionary？cdrid＝756047(最后访问时间：2014年12月14日)描述了MEDI0608。
在某些实施方案中，第一种抗体是抗PD-1拮抗剂。PD-1拮抗剂的一个实例抗是AMP-224，其为B7-DC Fc融合蛋白。美国公开号2013/0017199或http://www.cancer.gov/publications/dictionaries/cancer-drug？cdrid＝700595中(最后访问时间：2015年7月8日)中讨论了AMP-224。
在其他实施方案中，抗-PD-1抗体或其片段与BGB-A317交叉竞争。在一些实施方案中，抗-PD-1抗体或其片段结合与BGB-A317相同的表位。在某些实施方案中，抗-PD-1抗体具有与BGB-A317相同的CDR。在某些实施方案中，抗-PD-1抗体是BGB-A317，其是人源化单克隆抗体。美国公开号2015/0079109中描述了BGB-A317。
在一些实施方案中，抗体是pidilizumab(CT-011)，其是先前据报道与PD-1结合但认为与不同靶结合的抗体。在美国专利号8,686,119B2或WO 2013/014668A1中描述了pidilizumab。
在某些实施方案中，与纳武单抗交叉竞争结合人PD-1或与纳武单抗的相同人PD-1表位区域结合的抗体是mAb。为了施用至人类个体，这些交叉竞争性抗体可以是嵌合抗体或人源化或人抗体。可以通过本领域熟知的方法制备并分离这类嵌合、人源化或人mAb。
已经例如在以下描述其他抗PD-1单克隆抗体：美国专利号6,808,710、7,488,802、8,168,757和8,354,509、美国公开号2016/0272708、和PCT公开号WO 2012/145493、WO2008/156712、WO 2015/112900、WO 2012/145493、WO 2015/112800、WO 2014/206107、WO2015/35606、WO 2015/085847、WO 2014/179664、WO 2017/020291、WO 2017/020858、WO2016/197367、WO 2017/024515、WO 2017/025051、WO 2017/123557、WO 2016/106159、WO2014/194302、WO 2017/040790、WO 2017/133540、WO 2017/132827、WO 2017/024465、WO2017/025016、WO 2017/106061、WO 2017/19846、WO 2017/024465、WO 2017/025016、WO2017/132825和WO 2017/133540，所述每篇文献均通过引用的方式完整并入。
在一些实施方案中，抗-PD-1抗体选自纳武单抗(又称作
Figure BDA0002298562630000361
5C4、BMS-936558、MDX-1106和ONO-4538)、派姆单抗(Merck；又称作
Figure BDA0002298562630000362
lambrolizumab和MK-3475；参见WO2008/156712)、PDR001(Novartis；参见WO 2015/112900)、MEDI-0680(AstraZeneca；又称作AMP-514；参见WO 2012/145493)、cemiplimab(Regeneron；又称作REGN-2810；参见WO 2015/112800)、JS001(TAIZHOU JUNSHI PHARMA；参见Si-Yang Liu等人,J.Hematol.Oncol.10:136(2017))、BGB-A317(Beigene；参见WO 2015/35606和US2015/0079109)、INCSHR1210(Jiangsu Hengrui Medicine；又称作SHR-1210；参见WO2015/085847；Si-Yang Liu等人,J.Hematol.Oncol.10:136(2017))、TSR-042(TesaroBiopharmaceutical；又称作ANB011；参见WO2014/179664)、GLS-010(Wuxi/Harbin GloriaPharmaceuticals；又称作WBP3055；参见Si-Yang Liu等人,J.Hematol.Oncol.10:136(2017))、AM-0001(Armo)、STI-1110(Sorrento Therapeutics；参见WO 2014/194302)、AGEN2034(Agenus；参见WO 2017/040790)、MGA012(Macrogenics；参见WO 2017/19846)和IBI308(Innovent；参见WO 2017/024465、WO 2017/025016、WO 2017/132825和WO 2017/133540)。
可用于所公开的发明的组合物的抗-PD-1抗体还包含以上抗体的抗原结合部分。已经充分显示，抗体的抗原结合功能可以由全长抗体的片段执行。涵盖于术语抗体的“抗原结合部分”范围内的结合片段的实例包括(i)Fab片段，一种由VL、VH、CL和CH1结构域组成的单价片段；(ii)F(ab')2片段，一种包含由二硫键在铰链区连接的两个Fab片段的双价片段；(iii)由VH和CH1结构域组成的Fd片段；和(iv)由抗体单臂的VL和VH结构域组成的Fv片段。
可用于所公开方法中的抗-PD-1抗体还包括分离的抗体，所述分离的抗体与人PD-1特异性结合并且与本文公开的任何抗-PD-1抗体(例如，纳武单抗)交叉竞争结合人PD-1(例如，参见美国专利号8,008,449和8,779,105；WO 2013/173223)。在一些实施方案中，抗-PD-1抗体结合与本文所述的任何抗-PD-1抗体(例如，纳武单抗)相同的表位。抗体交叉竞争结合某抗原的能力表示，这些单克隆抗体与该抗原的相同表位区域结合并且空间上阻碍其他交叉竞争性抗体与这个特定表位区域结合。因为它们与PD-1的相同表位区域结合，预期这些交叉竞争性抗体具有非常类似于那些参考抗体(例如，纳武单抗)的功能特性。可以基于这类交叉竞争性抗体在标准PD-1结合测定法(如Biacore分析、ELISA测定或流式细胞术)中与纳武单抗交叉竞争的能力，轻易鉴定这些抗体(例如，参见WO 2013/173223)。
适用于所公开方法中的抗-PD-1抗体是这样的抗体，它们以高特异性和高亲和力与PD-1结合、阻断对PD-L1和或PD-L2的结合并且抑制PD-1信号传导途径的免疫抑制作用。在本文所公开的任何组合物或方法中，抗PD-1“抗体”包括这样的抗原结合部分或片段，其与PD-1受体结合并且在抑制配体结合及上调免疫系统方面显示与全抗体相似的功能特性。在某些实施方案中，抗-PD-1抗体或其抗原结合部分与纳武单抗交叉竞争结合人PD-1。在其他实施方案中，抗-PD-1抗体或其抗原结合部分是嵌合、人源化或人单克隆抗体或其部分。在某些实施方案中，抗体是人源化抗体。在其他实施方案中，抗体是人抗体。可以使用IgG1、IgG2、IgG3或IgG4同种型抗体。
在某些实施方案中，抗-PD-1抗体或其抗原结合部分包含是人IgG1或IgG4同种型的重链恒定区。在某些其他实施方案中，抗-PD-1抗体或其抗原结合部分的IgG4重链恒定区的序列含有S228P突变，所述突变用正常情况在IgG1同种型抗体的相应位置处存在的脯氨酸残基替换铰链区中的丝氨酸残基。纳武单抗中存在的这个突变防止与内源IgG4抗体交换Fab臂，同时保留低亲和力以激活与野生型IgG4抗体缔合的Fc受体(Wang等人,2014CancerImmunol Res.2(9):846-56)。在另外的其他实施方案中，抗体包含轻链恒定区，其是人κ或λ恒定区。在其他实施方案中，抗-PD-1抗体或其抗原结合部分是mAb或其抗原结合部分。在本文所述的包括施用抗-PD-1抗体的任何治疗方法的某些实施方案中，抗-PD-1抗体是纳武单抗。在其他实施方案中，抗-PD-1抗体是派姆单抗(pembrolizumab)。在其他实施方案中，抗-PD-1抗体选自美国专利号8,008,449中描述的人抗体17D8、2D3、4H1、4A11、7D3和5F4。在另外的实施方案中，抗-PD-1抗体是MEDI0608(前称AMP-514)、AMP-224或BGB-A317。
在实施方案中，抗-PD-1抗体是双特异性抗体。在实施方案中，抗-PD-1抗体是结合PD-1和LAG-3两者的双特异性抗体。
5.抗PD-L1抗体
在某些实施方案中，本申请涵盖抗PD-L1抗体作为PD-1途径抑制剂的用途。在一个实施方案中，抗PD-L1抗体抑制PD-L1受体(即，PD-1)与其配体PD-L1的结合。
可以使用本领域熟知的方法生成适用于本发明中的抗人-PD-L1抗体(或从其中衍生的VH和/或VL结构域)。备选地，可以使用本领域公认的抗PD-L1抗体。例如，可以使用美国专利号7,943,743中公开的人抗PD-L1抗体。这类抗PD-L1抗体包括3G10、12A4(也称作BMS-936559)、10A5、5F8、10H10、1B12、7H1、11E6、12B7和13G4。在一些实施方案中，抗PD-L1抗体是阿特朱单抗(Tecentriq或RG7446)(参见，例如Herbst等人(2013)J ClinOncol 31(suppl):3000.摘要；美国专利号8,217,149)、德瓦鲁单抗(Durvalumab)(Imfinzi或MEDI4736)(Khleif(2013)，引自：Proceedings from the European Cancer Congress2013；2013年9月27日-10月1日；阿姆斯特丹，荷兰，摘要802)、阿维鲁单抗(Avelumab)(Bavencio)。可以使用的其他本领域公认的抗PD-L1抗体包括例如在美国专利号7,635,757和8,217,149、美国专利公开号2009/0317368以及PCT公开号WO 2011/066389和WO 2012/145493中公开的那些，其通过引用并入本文。也可以使用与这些本领域公认的抗体或抑制剂竞争结合PD-L1的抗体。可用于本文的方法的抗PD-L1抗体的实例包括美国专利号9,580,507中公开的抗体。已证明美国专利号9,580,507公开的抗PD-L1人单克隆抗体表现出以下一种或多种特征：(a)以1x 10-7M或更小的KD结合人PD-L1，如使用Biacore生物传感器系统通过表面等离子共振确定；(b)在混合淋巴细胞反应(MLR)分析中增加T细胞增殖；(c)在MLR分析中增加γ-干扰素的产生；(d)在MLR分析中增加IL-2的分泌；(e)刺激抗体反应；(f)逆转T调节细胞对T细胞效应细胞和/或树突状细胞的作用。可用于本发明的抗PD-L1抗体包括与人PD-L1特异性结合并表现出至少一种上述特征、在一些实施方案中至少五种上述特征的单克隆抗体。
在某些实施方案中，抗PD-L1抗体是BMS-936559(以前为12A4或MDX-1105)(参见例如美国专利号7,943,743；WO 2013/173223)。在其他实施方案中，抗PD-L1抗体是MPDL3280A(也称为RG7446和阿特珠单抗)(参见例如Herbst等人，2013J Clin Oncol 31(增刊)：3000；美国专利号8,217,149)，MEDI4736(Khleif，2013年，在2013年欧洲癌症大会的论文集中；2013年9月27日至10月1日；荷兰阿姆斯特丹，摘要802)或MSB0010718C(也称为阿维鲁单抗(Avelumab)；参见US 2014/0341917)。在某些实施方案中，与上述PD-L1抗体交叉竞争结合人PD-L1或结合人PD-L1相同表位区域的抗体是mAb。为了施用于人类个体，这些相互竞争的抗体可以是嵌合抗体，或者可以是人源化或人抗体。此类嵌合的、人源化的或人的mAb可以通过本领域众所周知的方法来制备和分离。在某些实施方案中，抗PD-L1抗体选自BMS-936559(也称为12A4、MDX-1105；参见例如美国专利号7,943,743和WO 2013/173223、阿特珠单抗(Roche；也称为
Figure BDA0002298562630000381
MPDL3280A，RG7446；参见US 8,217,149；也参见Herbst等人(2013)J Clin Oncol 31(增刊)：3000)、度伐鲁单抗(阿斯利康；也称为IMFINZITM，MEDI-4736；参见WO2011/066389)、阿维鲁单抗(辉瑞；也称为
Figure BDA0002298562630000382
MSB-0010718C；参见WO 2013/079174)、STI-1014(Sorrento；参见WO2013/181634)、CX-072(Cytomx；参见WO2016/149201)、KN035(3D Med/Alphamab；参见Zhang等人，Cell Discov.7:3(2017年3月)、LY3300054(礼来公司，参见例如WO 2017/034916)以及CK-301(CheckpointTherapeutics；参见Gorelik等人，AACR:Abstract 4606(2016年4月))。
在某些实施方案中，PD-L1抗体是阿特珠单抗阿特珠单抗是一种完全人源化的IgG1单克隆抗PD-L1抗体。
在某些实施方案中，PD-L1抗体是度伐鲁单抗(IMFINZITM)。度伐鲁单抗是人IgG1κ单克隆抗PD-L1抗体。
在某些实施方案中，PD-L1抗体是阿维鲁单抗
Figure BDA0002298562630000384
阿维鲁单抗是一种人类IgG1λ单克隆抗PD-L1抗体。
在其他实施方案中，抗PD-L1单克隆抗体选自28-8、28-1、28-12、29-8、5H1及其任意组合。
可用于公开的方法中的抗PD-L1抗体还包括分离的抗体，其与人PD-L1特异性结合并且与本文公开的任何抗PD-L1抗体例如阿特珠单抗、度伐鲁单抗和/或阿维鲁单抗交叉竞争结合人PD-L1。在一些实施方案中，抗PD-L1抗体结合与本文所述的任何抗PD-L1抗体例如阿特珠单抗、度伐鲁单抗和/或阿维鲁单抗相同的表位。抗体交叉竞争结合抗原的能力表明这些抗体与抗原的相同表位区域结合，并且在空间上阻碍其他交叉竞争抗体与该特定表位区域的结合。这些交叉竞争抗体由于其与PD-L1的相同表位区域的结合而具有与参照抗体例如阿特珠单抗和/或阿维鲁单抗非常相似的功能特性。可以在标准的PD-L1结合测定例如Biacore分析、ELISA测定或流式细胞术中，根据与阿特珠单抗和/或阿维鲁单抗交叉竞争的能力来轻松鉴定交叉竞争性抗体(参见，例如WO 2013/173223)。
在某些实施方案中，与阿特珠单抗、度伐鲁单抗和/或阿维鲁单抗交叉竞争人PD-L1抗体或者结合与阿特珠单抗、度伐鲁单抗和/或阿维鲁单抗的人PD-L1抗体的相同表位区的抗体是单克隆抗体。为了施用于人类个体，这些交叉竞争抗体是嵌合抗体、工程抗体或人源化或人抗体。可以通过本领域众所周知的方法来制备和分离所述嵌合的、工程的、人源化的或人的单克隆抗体。
可用于所公开的发明的方法中的抗PD-L1抗体还包括上述抗体的抗原结合部分。已经充分证明，抗体的抗原结合功能可以通过全长抗体的片段来实现。
适用于所公开的方法或组合物中的抗PD-L1抗体是与PD-L1以高特异性和亲和力结合，阻断PD-1的结合并抑制PD-1信号通路的免疫抑制作用的抗体。在本文公开的任何组合物或方法中，抗PD-L1“抗体”包括与PD-L1结合并在抑制受体结合和上调免疫系统方面表现出与完整抗体相似的功能特性的抗原结合部分或片段。在某些实施方案中，抗PD-L1抗体或其抗原结合部分与阿特珠单抗、度伐鲁单抗和/或阿维鲁单抗交叉竞争结合人PD-L1。
可用于本发明的抗PD-L1抗体包括从具有本文公开的VH和/或VL序列中一者或多者的抗体开始进行工程化的抗体，所述的工程化抗体可以具有从起始抗体起改变的特性。可以通过如上文对工程化本发明修饰的抗-PD-1抗体所述的多种修饰，工程化抗PD-L1抗体。
6.抗-CTLA-4抗体
在某些实施方案中，本申请涵盖抗-CTLA-4抗体的用途。在一个实施方案中，抗-CTLA-4抗体结合于并抑制CTLA-4。在一些实施方案中，抗-CTLA-4抗体是伊匹木单抗(YERVOY)、曲美木单抗(ticilimumab；CP-675,206)、AGEN-1884或ATOR-1015。
7.免疫检查点抑制剂
在一个方面，本发明的特征在于治疗恶性肿瘤时使用与免疫检查点抑制剂组合的PD-1抑制剂。可以使用本领域公认的任何免疫检查点抑制剂。
在某些实施方案中，免疫检查点抑制剂是CTLA-4拮抗剂、CD80拮抗剂、CD86拮抗剂、Tim-3拮抗剂、TIGIT拮抗剂、CD20拮抗剂、CD96拮抗剂、IDO1拮抗剂、STING拮抗剂、GARP拮抗剂、CD40拮抗剂、A2aR拮抗剂、CEACAM1(CD66a)拮抗剂、CEA拮抗剂、CD47拮抗剂、PVRIG拮抗剂、TDO拮抗剂、VISTA拮抗剂或KIR拮抗剂。
在一个实施方案中，免疫检查点抑制剂是CTLA-4拮抗剂。在某些实施方案中，CTLA-4拮抗剂是抗-CTLA-4抗体或其抗原结合片段。在一些实施方案中，抗-CTLA-4抗体是伊匹木单抗(YERVOY)、曲美木单抗(ticilimumab；CP-675,206)、AGEN-1884或ATOR-1015。
在一个实施方案中，CTLA-4拮抗剂是可溶性CTLA-4多肽。在一个实施方案中，可溶性CTLA-4多肽是阿巴西普(abatacept)(Orencia)、贝拉西普(belatacept)(Nulojix)、RG2077或RG-1046。在另一个实施方案中，CTLA-4拮抗剂是基于细胞的疗法。在一些实施方案中，CTLA-4拮抗剂是抗CTLA-4mAb RNA/GITRL RNA转染的自体树突细胞疫苗或抗CTLA-4mAb RNA转染的自体树突细胞疫苗。
在一个实施方案中，免疫检查点抑制剂是KIR拮抗剂。在某些实施方案中，KIR拮抗剂是抗KIR抗体或其抗原结合片段。在一些实施方案中，抗KIR抗体是lirilumab(1-7F9、BMS-986015、IPH 2101)或IPH4102。
在一个实施方案中，免疫检查点抑制剂是TIGIT拮抗剂。在一个实施方案中，TIGIT拮抗剂是抗TIGIT抗体或其抗原结合片段。在某些实施方案中，抗TIGIT抗体是BMS-986207、AB 154、COM902(CGEN-15137)或OMP-313M32。
在一个实施方案中，免疫检查点抑制剂是Tim-3拮抗剂。在某些实施方案中，Tim-3拮抗剂是抗Tim-3抗体或其抗原结合片段。在一些实施方案中，抗Tim-3抗体是TSR-022或LY3321367。
在一个实施方案中，免疫检查点抑制剂是IDO1拮抗剂。在另一个实施方案中，IDO1拮抗剂是吲哚莫德(indoximod)(NLG8189；1-甲基-D-TRP)、艾卡哚司他(epacadostat)(INCB-024360、INCB-24360)、KHK2455、PF-06840003、navoximod(RG6078、GDC-0919、NLG919)、BMS-986205(F001287)或吡咯烷-2,5-二酮衍生物。
在一个实施方案中，免疫检查点抑制剂是STING拮抗剂。在某些实施方案中，STING拮抗剂是2’或3’-单氟取代的环状二核苷酸；2’3’-二氟取代的混合键2’,5’–3’,5’环状二核苷酸；2'-氟取代的双-3’,5’环状二核苷酸；2’,2”-二F-Rp,Rp,双-3’,5’环状二核苷酸；或氟化环状二核苷酸。
在一个实施方案中，免疫检查点抑制剂是CD20拮抗剂。在一些实施方案中，CD20拮抗剂是抗CD20抗体或其抗原结合片段。在一个实施方案中，抗CD20抗体是利妥昔单抗(RITUXAN；IDEC-102；IDEC-C2B8)、ABP 798、奥法木单抗(ofatumumab)或阿托珠单抗(obinutuzumab)。
在一个实施方案中，免疫检查点抑制剂是CD80拮抗剂。在某些实施方案中，CD80拮抗剂是抗CD80抗体或其抗原结合片段。在一个实施方案中，抗CD80抗体是加利昔单抗(galiximab)或AV1142742。
在一个实施方案中，免疫检查点抑制剂是GARP拮抗剂。在一些实施方案中，GARP拮抗剂是抗GARP抗体或其抗原结合片段。在某些实施方案中，抗GARP抗体是ARGX-115。
在一个实施方案中，免疫检查点抑制剂是CD40拮抗剂。在某些实施方案中，CD40拮抗剂是抗CD40抗体或其抗原结合片段。在一些实施方案中，抗CD40抗体是BMS3h-56、鲁卡木单抗(lucatumumab)(HCD122和CHIR-12.12)、CHIR-5.9或达西珠单抗(dacetuzumab)(huS2C6、PRO 64553、RG 3636、SGN 14、SGN-40)。在另一个实施方案中，CD40拮抗剂是可溶性CD40配体(CD40-L)。在一个实施方案中，可溶性CD40配体是融合多肽。在一个实施方案中，可溶性CD40配体是CD40-L/FC2或单聚CD40-L。
在一个实施方案中，免疫检查点抑制剂是A2aR拮抗剂。在一些实施方案中，A2aR拮抗剂是小分子。在某些实施方案中，A2aR拮抗剂是CPI-444、PBF-509、伊曲茶碱(KW-6002)、瑞德南特(preladenant)(SCH420814)、tozadenant(SYN115)、vipadenant(BIIB014)、HTL-1071、ST1535、SCH412348、SCH442416、SCH58261、ZM241385或AZD4635。
在一个实施方案中，免疫检查点抑制剂是CEACAM1拮抗剂。在一些实施方案中，CEACAM1拮抗剂是抗CEACAM1抗体或其抗原结合片段。在一个实施方案中，抗CEACAM1抗体是CM-24(MK-6018)。
在一个实施方案中，免疫检查点抑制剂是CEA拮抗剂。在一个实施方案中，CEA拮抗剂是抗CEA抗体或其抗原结合片段。在某些实施方案中，抗CEA抗体是cergutuzumabamunaleukin(RG7813,RO-6895882)或RG7802(RO6958688)。
在一个实施方案中，免疫检查点抑制剂是CD47拮抗剂。在一些实施方案中，CD47拮抗剂是抗CD47抗体或其抗原结合片段。在某些实施方案中，抗CD47抗体是HuF9-G4、CC-90002、TTI-621、ALX148、NI-1701、NI-1801、SRF231或Effi-DEM。
在一个实施方案中，免疫检查点抑制剂是PVRIG拮抗剂。在某些实施方案中，PVRIG拮抗剂是抗PVRIG抗体或其抗原结合片段。在一个实施方案中，抗PVRIG抗体是COM701(CGEN-15029)。
在一个实施方案中，免疫检查点抑制剂是TDO拮抗剂。在一个实施方案中，TDO拮抗剂是4-(吲哚-3-基)-吡唑衍生物、3-吲哚取代的衍生物或3-(吲哚-3-基)-吡啶衍生物。在另一个实施方案中，免疫检查点抑制剂是双重IDO和TDO拮抗剂。在一个实施方案中，双重IDO和TDO拮抗剂是小分子。
在一个实施方案中，免疫检查点抑制剂是VISTA拮抗剂。在一些实施方案中，VISTA拮抗剂是CA-170或JNJ-61610588。
8.药物组合物
一般配制适于施用人类患者的药物组合物用于肠胃外施用，例如，配制在液态载体中，或适于复溶成液态溶液剂或混悬剂用于静脉内施用。
通常，这类组合物一般包含可药用载体。如本文所用，术语“可药用”意指由政府监管机构批准或者列于美国药典或另一部普遍认可的药典中，用于动物中，尤其用于人类中。术语“载体”指与化合物一起施用的稀释剂、辅助剂、赋形剂或溶媒。这类药用载体可以是无菌液体，如水和油，包括石油来源、动物来源、植物来源或合成来源的那些油，如花生油、大豆油、矿物油、芝麻油、甘油、聚乙二醇、乙二醇蓖麻醇酸酯等。可以使用水或水溶液盐水和右旋糖水溶液和甘油溶液作为载体，特别地用于可注射溶液剂(例如，包含抗-LAG-3和/或抗-PD-1抗体)。可以配制用于肠胃外施用的液态组合物，以通过注射或连续输注施用。注射或输注施用途径包括静脉内、腹膜内、肌内、鞘内和皮下。在一个实施方案中，(例如，在分立的制剂中或一起(在相同制剂中或在分立的制剂中))静脉内施用抗-LAG-3和/或抗-PD-1抗体。
9.患者群体
本文提供使用本文公开的免疫治疗，例如，LAG-3抑制剂(例如，抗-LAG-3抗体)、PD-1途径抑制剂(例如，抗-PD-1抗体)、抗-CTLA-4抗体、或LAG-3抑制剂(例如，抗-LAG-3抗体)和PD-1途径抑制剂(例如，抗-PD-1抗体)的组合，治疗人类患者中恶性肿瘤(例如，晚期难治性实体瘤和血液学恶性肿瘤)的临床方法。
可以使用本发明方法治疗的癌和/或恶性肿瘤的实例包括肝癌、肝细胞癌(HCC)、骨癌、胰腺癌、皮肤癌、口腔癌、头或颈癌、乳腺癌、肺癌、小细胞肺癌、NSCLC、皮肤或眼内恶性黑素瘤、肾癌、子宫癌、卵巢癌、结直肠癌、结肠癌、直肠癌、肛区癌、胃癌、睾丸癌、子宫癌、输卵管癌、子宫内膜癌、子宫颈癌、阴道癌、外阴癌、头颈鳞状细胞癌(SCCHN)、非霍奇金淋巴瘤、食道癌、小肠癌、内分泌系统癌、甲状腺癌、甲状旁腺癌、肾上腺癌、软组织肉瘤、尿道癌、阴茎癌、儿童实体瘤、淋巴细胞淋巴瘤、膀胱癌、肾或输尿管癌、肾盂癌、中枢神经系统(CNS)肿瘤、原发性CNS淋巴瘤、肿瘤血管生成、脊髓轴肿瘤、脑干胶质瘤、垂体腺瘤、Kaposi肉瘤、表皮样癌、鳞状细胞癌、环境所致癌(包括石棉诱导的那些癌症)、血液学恶性病，例如包括多发性骨髓瘤、B细胞淋巴瘤、霍奇金淋巴瘤/原发性纵隔B细胞淋巴瘤、非霍奇金淋巴瘤、急性髓样淋巴瘤、慢性髓性白血病、慢性淋巴样白血病、滤泡淋巴瘤、弥漫性大B细胞淋巴瘤、Burkitt淋巴瘤、免疫母细胞大细胞淋巴瘤、前体B淋巴母细胞淋巴瘤、套细胞淋巴瘤、急性淋巴母细胞性白血病、蕈样肉芽肿病、退行性大细胞淋巴瘤、T细胞淋巴瘤和前体T-淋巴母细胞淋巴瘤及所述癌的任何组合。本发明还适用于治疗转移性癌症。在实施方案中，癌症是肾细胞癌(RCC)、胃/胃食管结合部癌、非小细胞肺癌(NSCLC)、黑素瘤、头颈鳞状细胞癌(SCCHN)、肝细胞癌或尿路上皮癌。
在某些实施方案中，黑素瘤是不可切除性或转移性黑素瘤。在实施方案中，该患者经抗PD-1或抗PD-L1抗体先前治疗过。在某些实施方案中，肿瘤是表达LAG-3的肿瘤。在具体的实施方案中，肿瘤是LAG-3表达≥1％的表达LAG-3的肿瘤。
在一个实施方案中，人类患者罹患不可切除的转移性黑素瘤并且先前经抗PD-1或抗PD-L1转移性抑制剂治疗过。在一个具体实施方案中，人类患者罹患不可切除的转移性黑素瘤并且经先前抗PD-1或抗PD-L1转移性抑制剂治疗过，并且肿瘤是表达LAG-3的肿瘤。在一个实施方案中，人类患者罹患不可切除的转移性黑素瘤并且先前经抗PD-1或抗PD-L1转移性抑制剂治疗过，并且肿瘤是表达LAG-3的肿瘤。在某个实施方案中，人类患者罹患不可切除的转移性黑素瘤并且先前经抗PD-1或抗PD-L1转移性抑制剂治疗过，并且肿瘤是LAG-3表达≥1％的表达LAG-3的肿瘤。
在一个实施方案中，人类患者罹患抵抗免疫检查点抑制剂治疗的恶性肿瘤。在另一个实施方案中，患者罹患抵抗PD-1抑制剂治疗的恶性肿瘤。在另一个实施方案中，患者罹患抵抗用抗-PD-1抗体治疗的恶性肿瘤。在另一个实施方案中，患者罹患抵抗用抗PD-L1抗体治疗的恶性肿瘤。在一些实施方案中，恶性肿瘤是胃癌、肾癌、HCC、SCCHN或NSCLC。
在一个实施方案中，人类患者罹患黑素瘤。在另一个实施方案中，患者罹患抵抗免疫检查点抑制剂治疗的黑素瘤。在另一个实施方案中，患者罹患抵抗PD-1抑制剂治疗的黑素瘤。在另一个实施方案中，患者罹患抵抗用抗-PD-1抗体治疗的黑素瘤。在另一个实施方案中，患者罹患抵抗用抗PD-L1抗体治疗的黑素瘤。
在一个实施方案中，人类患者罹患黑素瘤、胃癌、肾癌、HCC、SCCHN或NSCLC。在一个实施方案中，人类患者罹患黑素瘤。
在一个实施方案中，人类患者罹患NSCLC或病毒相关的癌症(例如，人乳头瘤病毒(HPV)相关的肿瘤)或胃腺癌。在一个具体实施方案中，HPV相关的肿瘤是HPV+头颈癌(HNC)。在另一个具体实施方案中，胃腺癌与Epstein-Barr病毒(EBV)病毒感染相关。
可以在治疗之前、其期间或之后，针对一个或多个上述临床属性检验或选择患者。
根据本文所述的方法，可以检验恶性肿瘤以确定LAG-3表达。在一些实施方案中，根据本文所公开的方法治疗的恶性肿瘤是LAG-3阳性肿瘤。在一些实施方案中，恶性肿瘤是LAG-3阳性黑素瘤。在另一个实施方案中，恶性肿瘤是LAG-3阳性胃癌、肾癌、HCC、SCCHN或NSCLC。
在一些实施方案中，LAG-3阳性黑素瘤肿瘤中细胞总数的至少约0.5％、至少约0.75％、至少约1％、至少约1.25％、至少约1.5％、至少约1.75％、至少约2％、至少约3％的细胞表达LAG-3。
在一些实施方案中，恶性肿瘤的细胞总数的至少约0.5％、至少约1％、至少约2％、至少约3％、至少约4％、至少约5％、至少约6％、至少约7％、至少约8％、至少约9％、至少约10％、至少约15％、至少约20％、至少约25％或至少约30％表达LAG-3。在一些实施方案中，恶性肿瘤是黑素瘤、胃癌、肾癌、HCC、SCCHN或NSCLC。
根据本文所述的方法，可以检验恶性肿瘤以确定LAG-3和PD-L1表达。在一些实施方案中，根据本文所公开的方法治疗的恶性肿瘤是LAG-3阳性PD-L1阳性肿瘤。在一些实施方案中，恶性肿瘤是LAG-3阳性PD-L1阳性黑素瘤。在另一个实施方案中，恶性肿瘤是LAG-3阳性PD-L1阳性胃癌、肾癌、HCC、SCCHN或NSCLC。
在一些实施方案中，根据本文所公开的方法治疗的恶性肿瘤是LAG-3阳性PD-L1阴性肿瘤。在一些实施方案中，恶性肿瘤是LAG-3阳性PD-L1阴性黑素瘤。在另一个实施方案中，恶性肿瘤是LAG-3阳性PD-L1阴性胃癌、肾癌、HCC、SCCHN或NSCLC。
10.免疫治疗
在一个方面，本文提供的免疫治疗涉及施用LAG-3抑制剂(例如，抗-LAG-3抗体)和另一种阻断抑制性免疫受体(例如，与其天然配体结合时抑制/中和活性(如细胞毒活性)的受体)的抗体，尤其抗-PD-1抗体或抗PD-L1抗体，以治疗患有恶性肿瘤(例如，晚期难治性实体瘤或血液学恶性肿瘤)的个体。在另一个方面，本文提供的免疫治疗涉及施用抗-PD-1抗体或抗PD-L1抗体以治疗患有恶性肿瘤(例如，晚期难治性实体瘤或血液学恶性肿瘤)的个体。在另一个方面，本文提供的免疫治疗涉及施用抗-CTLA-4抗体以治疗患有恶性肿瘤(例如，晚期难治性实体瘤或血液学恶性肿瘤)的个体。
在一个实施方案中，本发明根据限定的临床剂量方案提供处于组合的抗-LAG-3抗体和抗-PD-1抗体，以治疗患有恶性肿瘤(例如，晚期难治性实体瘤)的个体。在一个具体实施方案中，抗-LAG-3抗体是BMS-986016。在另一个实施方案中，抗-PD-1抗体是BMS-936558。在另一个实施方案中，调节剂量方案以提供最佳的所需反应(例如，有效反应)。
在另一个实施方案中，本发明根据限定的临床剂量方案提供处于组合的抗-LAG-3抗体和抗PD-L1抗体，以治疗患有恶性肿瘤(例如，晚期难治性实体瘤)的个体。在一个具体实施方案中，抗-LAG-3抗体是BMS-986016。在另一个实施方案中，抗PD-L1抗体是BMS-936559。在另一个实施方案中，调节剂量方案以提供最佳的所需反应(例如，有效反应)。
在另一个方面，本发明根据限定的临床剂量方案提供抗-LAG-3抗体，以治疗患有恶性肿瘤(例如，晚期难治性实体瘤)的个体。在一个具体实施方案中，抗-LAG-3抗体是BMS-986016。在另一个实施方案中，调节剂量方案以提供最佳的所需反应(例如，有效反应)。
在另一个方面，本发明根据限定的临床剂量方案提供抗-PD-1抗体，以治疗患有恶性肿瘤(例如，晚期难治性实体瘤)的个体。在一个具体实施方案中，抗-PD-1抗体是BMS-936558。在另一个实施方案中，调节剂量方案以提供最佳的所需反应(例如，有效反应)。
在另一个方面，本发明根据限定的临床剂量方案提供抗PD-L1抗体，以治疗患有恶性肿瘤(例如，晚期难治性实体瘤)的个体。在一个具体实施方案中，抗PD-L1抗体是BMS-936559。在另一个实施方案中，调节剂量方案以提供最佳的所需反应(例如，有效反应)。
在另一个方面，本发明根据限定的临床剂量方案提供抗-CTLA-4抗体，以治疗患有恶性肿瘤(例如，晚期难治性实体瘤)的个体。在一个具体实施方案中，抗CTLA4抗体是伊匹木单抗(YERVOY)。在一个具体实施方案中，抗CTLA4抗体是曲美木单抗(ticilimumab；CP-675,206)、AGEN-1884或ATOR-1015。在另一个实施方案中，调节剂量方案以提供最佳的所需反应(例如，有效反应)。
在另一个方面，本文提供的免疫治疗涉及施用抗-PD-1抗体和免疫检查点抑制剂以治疗患有恶性肿瘤(例如，晚期难治性实体瘤或血液学恶性肿瘤)的个体。在一个实施方案中，抗-PD-1抗体是BMS-936558。在一个实施方案中，免疫检查点抑制剂是CTLA-4拮抗剂、CD80拮抗剂、CD86拮抗剂、Tim-3拮抗剂、TIGIT拮抗剂、CD20拮抗剂、CD96拮抗剂、IDO1拮抗剂、STING拮抗剂、GARP拮抗剂、CD40拮抗剂、A2aR拮抗剂、CEACAM1(CD66a)拮抗剂、CEA拮抗剂、CD47拮抗剂、PVRIG拮抗剂、TDO拮抗剂、VISTA拮抗剂或KIR拮抗剂。
在另一个方面，本文提供的免疫治疗涉及施用抗PD-L1抗体和免疫检查点抑制剂以治疗患有恶性肿瘤(例如，晚期难治性实体瘤或血液学恶性肿瘤)的个体。在一个实施方案中，抗PD-L1抗体是BMS-936559。在一个实施方案中，免疫检查点抑制剂是CTLA-4拮抗剂、CD80拮抗剂、CD86拮抗剂、Tim-3拮抗剂、TIGIT拮抗剂、CD20拮抗剂、CD96拮抗剂、IDO1拮抗剂、STING拮抗剂、GARP拮抗剂、CD40拮抗剂、A2aR拮抗剂、CEACAM1(CD66a)拮抗剂、CEA拮抗剂、CD47拮抗剂、PVRIG拮抗剂、TDO拮抗剂、VISTA拮抗剂或KIR拮抗剂。
如本文所用，辅助或联合施用(共施用)包括同时施用处于相同或不同剂型的化合物，或分开施用化合物(例如，依次施用)。因此，例如，抗-LAG-3和抗-PD-1抗体可以在单一制剂中同时施用。备选地，可以为分开施用配制抗-LAG-3和抗-PD-1抗体，并且将它们同步或依次施用(例如，将一种抗体在施用第二种抗体前约30分钟内施用)。
例如，可以首先施用抗-PD-1抗体，接着(例如，紧接着)施用抗-LAG-3抗体，或反之亦然。在一个实施方案中，在施用抗-LAG-3抗体之前施用抗-PD-1抗体。在另一个实施方案中，在施用抗-LAG-3抗体后施用抗-PD-1抗体。在另一个实施方案中，同步施用抗-LAG-3抗体和抗-PD-1抗体。这种同步或依次施用优选地导致两种抗体同时存在于受治患者中。
11.治疗方案
在一个方面，治疗人类患者中恶性肿瘤的合适治疗方案包括向患者施用有效量的LAG3抑制剂(例如，抗-LAG-3抗体)。
在一些实施方案中，治疗人类患者中恶性肿瘤的合适治疗方案例如包括向患者施用有效量的抗-LAG-3抗体，如这样一种抗-LAG-3抗体，其包含具有SEQ ID NO:3中所述序列的重链可变区的CDR1、CDR2和CDR3结构域和具有SEQ ID NO:5中所述序列的轻链可变区的CDR1、CDR2和CDR3结构域，其中该方法包括至少一个施用周期，其中所述周期是八周时间，其中对于至少一个周期的每者，将至少四剂量的抗-LAG-3抗体按约1、3、10、20、50、80、100、130、150、16、180、200、240或280mg的平剂量施用。在另一个实施方案中，将四剂量的抗-LAG-3抗体按0.01、0.03、0.25、0.1、0.3、1或3、5、8或10mg/kg体重的剂量施用。
在一个方面，治疗人类患者中恶性肿瘤的合适治疗方案包括向患者施用有效量的PD1途径抑制剂(例如，抗PD1抗体)。
在一些实施方案中，治疗人类患者中恶性肿瘤的合适治疗方案例如包括向患者施用有效量的抗-PD-1抗体，如这样一种抗-PD-1抗体，其包含具有SEQ ID NO:19中所述序列的重链可变区的CDR1、CDR2和CDR3结构域和具有SEQ ID NO:21中所述序列的轻链可变区的CDR1、CDR2和CDR3结构域，其中所述方法包括至少一个施用周期，其中该周期是八周时间，其中对于至少一个周期的每者，将至少四剂量的抗-PD-1抗体按约50、80、100、130、150、180、200、240或280mg的平剂量施用。在另一个实施方案中，按0.1、0.3、1、3、5、8或10mg/kg体重的剂量，施用四剂量的抗-PD-1抗体。
在一个方面，治疗人类患者中恶性肿瘤的合适治疗方案包括向患者施用有效量的抗-CTLA-4抗体。
在一些实施方案中，治疗人类患者中恶性肿瘤的合适治疗方案例如包括向患者施用有效量的抗-CTLA-4抗体，其中所述方法包括至少一个施用周期，其中该周期是八周时间，其中对于至少一个周期的每者，将至少四剂量的抗-CTLA-4抗体按约50、80、100、130、150、180、200、240或280mg的平剂量施用。在另一个实施方案中，按0.1、0.3、1、3、5、8或10mg/kg体重的剂量，施用四剂量的抗-CTLA-4抗体。
在一个方面，治疗人类患者中恶性肿瘤的合适治疗方案包括向患者施用有效量的LAG3抑制剂(例如，抗-LAG-3抗体)和PD-1途径抑制剂(例如，抗-PD-1抗体)的每一者。
在一些实施方案中，治疗人类患者中恶性肿瘤的合适治疗方案包括例如向患者施用有效量的以下每一者：
(a)抗-LAG-3抗体，如这样一种抗-LAG-3抗体，其包含具有SEQ ID NO:3中所述序列的重链可变区的CDR1、CDR2和CDR3结构域和具有SEQ ID NO:5中所述序列的轻链可变区的CDR1、CDR2和CDR3结构域，
(b)抗-PD-1抗体，如这样一种抗-PD-1抗体，其包含具有SEQ ID NO:19中所述序列的重链可变区的CDR1、CDR2和CDR3结构域和具有SEQ ID NO:21中所述序列的轻链可变区的CDR1、CDR2和CDR3结构域，
其中该方法包括至少一个施用周期，其中所述周期是八周时间，其中对于至少一个周期的每者，将至少四剂量的抗-LAG-3抗体按约1、3、10、20、50、80、100、130、150、16、180、200、240或280mg的平剂量施用并且将至少四剂量的抗-PD-1抗体按约50、80、100、130、150、180、200、240或280mg的平剂量施用。在另一个实施方案中，将四剂量的抗-LAG-3抗体按0.01、0.03、0.25、0.1、0.3、1或3、5、8或10mg/kg体重的剂量施用并且将四剂量的抗-PD-1抗体按0.1、0.3、1、3、5、8或10mg/kg体重的剂量施用。
在一个实施方案中，抗-LAG-3抗体和抗-PD-1抗体按以下剂量施用：
(a)3mg抗-LAG-3抗体和80mg抗-PD-1抗体；
(b)3mg抗-LAG-3抗体和240mg抗-PD-1抗体；
(c)20mg抗-LAG-3抗体和240mg抗-PD-1抗体；
(d)80mg抗-LAG-3抗体和160mg抗-PD-1抗体；
(e)80mg抗-LAG-3抗体和240mg抗-PD-1抗体；
(f)160mg抗-LAG-3抗体和240mg抗-PD-1抗体；或(g)240mg抗-LAG-3抗体和240mg抗-PD-1抗体。
在一个实施方案中，将抗-LAG-3抗体和抗-PD-1抗体按20mg抗-LAG-3抗体和80mg抗-PD-1抗体的剂量施用。在一个实施方案中，肿瘤是肺癌。
在一个实施方案中，将抗-LAG-3抗体和抗-PD-1抗体按20mg抗-LAG-3抗体和240mg抗-PD-1抗体的剂量施用。
在一个实施方案中，将抗-LAG-3抗体和抗-PD-1抗体按80mg抗-LAG-3抗体和240mg抗-PD-1抗体的剂量施用。在一个实施方案中，肿瘤是黑素瘤(例如，经历过抗PD1/PD-L1抗体治疗的黑素瘤或一线黑素瘤治疗)、RCC(例如，IO初治RCC)、NSCLC(例如，经历过抗PD1/PD-L1抗体治疗的NSCLC)、胃癌(例如，IO初治胃癌)、HCC(例如，IO初治HCC)、NSCLC(例如，NSCLC一线治疗)或SCCHN(例如，IO初治SCCHN)。
在一个实施方案中，将抗-LAG-3抗体和抗-PD-1抗体按240mg抗-LAG-3抗体和240mg抗-PD-1抗体的剂量施用。
在一个实施方案中，将抗-LAG-3抗体和抗-PD-1抗体按160mg抗-LAG-3抗体和240mg抗-PD-1抗体的剂量施用。在一个实施方案中，肿瘤是黑素瘤(例如，经历过抗PD1/PD-L1抗体治疗的黑素瘤或一线黑素瘤治疗)、RCC(例如，IO初治RCC)、NSCLC(例如，经历过抗PD1/PD-L1抗体治疗的NSCLC)、胃癌(例如，IO初治胃癌)、HCC(例如，IO初治HCC)、NSCLC(例如，NSCLC一线治疗)或SCCHN(例如，IO初治SCCHN)。在另一个实施方案中，肿瘤是霍奇金淋巴瘤(例如，既往IO治疗过的霍奇金淋巴瘤)；DLBCL、PD-1/PD-L1初治霍奇金淋巴瘤或PD-1/PD-L1进展的/难治性霍奇金淋巴瘤。
在另一个实施方案中，抗-LAG-3抗体和抗-PD-1抗体按以下剂量施用：
(a)0.3mg/kg抗-LAG-3抗体和1mg/kg抗-PD-1抗体；
(b)0.3mg/kg抗-LAG-3抗体和3mg/kg抗-PD-1抗体；
(c)0.25mg/kg抗-LAG-3抗体和3mg/kg抗-PD-1抗体；
(d)1mg/kg抗-LAG-3抗体和3mg/kg抗-PD-1抗体；或
(e)3mg/kg抗-LAG-3抗体和3mg/kg抗-PD-1抗体。
在一个实施方案中，根据体重计算抗-LAG-3和/或抗-PD-1抗体的剂量，例如，mg/kg体重。在另一个实施方案中，抗-LAG-3和/或抗-PD-1抗体的剂量是平固定剂量。在另一个实施方案中，抗-LAG-3和/或抗-PD-1抗体的剂量随时间推移变动。例如，抗-LAG-3抗体和/或抗-PD-1抗体可以初始按高剂量施用并且可以随时间推移减少。在另一个实施方案中，抗-LAG-3抗体和/或抗-PD-1抗体初始按低剂量施用并随时间推移增加。
在另一个实施方案中，对于每剂量，施用的抗-LAG-3和/或抗-PD-1抗体的量恒定。在另一个实施方案中，施用的抗体的量随每剂量变动。例如，抗体的维持(或后续)剂量可以较高或与首次施用的负荷剂量相同。在另一个实施方案中，抗体的维持剂量可以较低或与负荷剂量相同。
在另一个实施方案中，配制抗-LAG-3和/或抗-PD-1抗体用于静脉内施用。在一个实施方案中，将抗-PD-1抗体在每个周期的第1、第15、第29和第43天施用。在另一个实施方案中，将抗-LAG-3抗体在每个周期的第1、第15、第29和第43天施用。
在其他实施方案中，按以下方式施用抗-LAG-3和/或抗-PD-1抗体：每周约一次、约每二或三周一次、每月约一次或只要观察到临床获益或直至存在完全反应、确认的进展经或不可管理的毒性为止。
在另一个实施方案中，施用周期是八周，如需要，这可以重复。在另一个实施方案中，治疗由多达12个周期组成。
在另一个实施方案中，每八周周期施用4剂量的抗-PD-1抗体。在另一个实施方案中，每八周周期施用4剂量的抗-LAG-3抗体。
在另一个实施方案中，抗-PD-1抗体和抗-LAG-3抗体作为一线治疗施用(例如，初始或首次治疗)。在另一个实施方案中，抗-PD-1抗体和抗-LAG-3抗体作为二线治疗施用(例如，在初始或首次治疗后，包括在复发后和/或首次治疗已经失败的情况下)。
在一个实施方案中，本发明提供一种治疗患有不可切除性或转移性黑素瘤的人类患者的方法，所述方法包括：向患者施用治疗有效量的LAG-3抑制剂和PD-1途径抑制剂；其中患者先前已经用PD-1抑制剂治疗过。在一些实施方案中，本发明提供一种治疗患有不可切除性或转移性黑素瘤的人类患者的方法，所述方法包括：向患者施用治疗有效量的LAG-3抑制剂和PD-1途径抑制剂；其中患者先前已经用PD-L1抑制剂治疗过。在某些实施方案中，本发明涉及一种治疗患有不可切除性或转移性黑素瘤的人类患者的方法，所述方法包括：向患者施用治疗有效量的LAG-3抑制剂和PD-1途径抑制剂；其中患者先前已经用PD-1抑制剂治疗过，并且其中黑素瘤表达LAG-3。在一个实施方案中，本发明涉及一种治疗患有不可切除性或转移性黑素瘤的人类患者的方法，所述方法包括：向患者施用治疗有效量的LAG-3抑制剂和PD-1途径抑制剂；其中患者先前已经用PD-L1抑制剂治疗过，并且其中黑素瘤表达LAG-3。在一个实施方案中，本发明提供一种治疗患有黑素瘤的人类患者的方法，所述黑素瘤在接受PD-1途径抑制剂或PD-L1途径抑制剂治疗的同时或之后进展，所述方法包括：向患者施用治疗有效量的LAG-3抑制剂和PD-1途径抑制剂；其中患者先前已经用抗PD-1抑制剂治疗过。在一些实施方案中，本发明提供一种治疗患有黑素瘤的人类患者的方法，所述黑素瘤在接受PD-1途径抑制剂或PD-L1途径抑制剂治疗的同时或之后进展，所述方法包括：向患者施用治疗有效量的LAG-3抑制剂和PD-1途径抑制剂；其中患者先前已经用抗PD-L1抑制剂治疗过。在某些实施方案中，本发明提供一种治疗患有黑素瘤的人类患者的方法，所述黑素瘤在接受PD-1途径抑制剂或PD-L1途径抑制剂治疗的同时或之后进展，所述方法包括：向患者施用治疗有效量的LAG-3抑制剂和PD-1途径抑制剂；其中患者先前已经用抗PD-1抑制剂治疗过，并且其中黑素瘤表达LAG-3。在一个实施方案中，本发明提供一种治疗患有黑素瘤的人类患者的方法，所述黑素瘤在接受PD-1途径抑制剂或PD-L1途径抑制剂治疗的同时或之后进展，所述方法包括：向患者施用治疗有效量的LAG-3抑制剂和PD-1途径抑制剂；其中患者先前已经用抗PD-L1抑制剂治疗过，并且其中黑素瘤表达LAG-3。在一些实施方案中，黑素瘤的LAG-3表达≥1％。在具体的实施方案中，施用的PD-1途径抑制剂是抗-PD-1抗体。在一个实施方案中，PD-1抗体是纳武单抗。在某些实施方案中，LAG-3抑制剂是LAG-3抗体。在一个实施方案中，LAG-3抗体是BMS-986016。在一个实施方案中，施用的PD-1途径抑制剂是抗PD-L1抗体。
在一个实施方案中，抗-LAG-3抗体是BMS-986016并且抗-PD-1抗体是纳武单抗。在一个实施方案中，抗-LAG-3抗体是MK-4280并且抗-PD-1抗体是派姆单抗。在一个实施方案中，抗-LAG-3抗体是REGN3767并且抗-PD-1抗体是REGN2810。在一个实施方案中，抗-LAG-3抗体是LAG525(国际公开号WO2015/138920)并且抗-PD-1抗体是PDR001。
在另一个方面，本发明的特征在于任何前述的实施方案，其中将抗-PD-1抗体替换为抗PD-L1或抗PD-L2抗体或与之组合。
在另一个方面，本发明的特征在于任何前述的实施方案，其中抗-LAG-3抗体或其抗原结合片段和PD-1途径抑制剂(例如，抗-PD-1抗体)的施用活化患者的T细胞。在一些实施方案中，抗-LAG-3抗体或其抗原结合片段和PD-1途径抑制剂(例如，抗-PD-1抗体)的施用诱导患者的T细胞表达活化标记物。可以使用流式细胞术，通过分析患者样品(例如，外周淋巴细胞或肿瘤浸润型淋巴细胞)检测患者的T细胞表达活化标记物。
在另一个方面，本发明的特征在于任何前述的实施方案，其中抗-LAG-3抗体或其抗原结合片段的施用导致占据患者的T细胞上至少约10％、至少约20％、至少约30％、至少约40％、至少约50％、至少约60％、至少约70％、至少约80％、至少约90％、至少约95％或约100％的LAG-3受体。在一些实施方案中，T细胞是CD8+T细胞。在一些实施方案中，T细胞是肿瘤浸润型T细胞。
在另一个方面，本发明的特征在于任何前述的实施方案，其中治疗方案还包括施用至少一种额外的治疗剂。在一些实施方案中，至少一种额外的治疗剂是化疗剂。在一些实施方案中，至少一种额外的治疗剂是免疫检查点抑制剂。
12.结局
相对于目标病灶，对疗法的反应可以包括：
Figure BDA0002298562630000481
相对于非目标病灶，对疗法的反应可以包括：
Figure BDA0002298562630000491
根据本文所公开的方法治疗的患者优选地出现至少一个癌症体征的改善。在一个实施方案中，依据可度量肿瘤病灶的量和/或大小减少，度量改善。在另一个实施方案中，可以在胸部X光片或CT或MRI片上测量病灶。在另一个实施方案中，细胞学或组织学可以用来评价对疗法的反应性。
在一个实施方案中，受治疗的患者显示完全反应(CR)、部分反应(PR)、稳定疾病(SD)、免疫相关的完全反应(irCR)、免疫相关的部分反应(irPR)或免疫相关的稳定疾病(irSD)。在另一个实施方案中，受治疗的患者出现肿瘤收缩和/或生长速率下降，即，阻抑肿瘤生长。在另一个实施方案中，减少或抑制不想要的细胞增殖。在又一个实施方案中，可以出现以下一种或多种情况：可以减少癌细胞的数目；可以减少肿瘤大小；可以抑制、迟滞、减慢或终止癌细胞向外周器官浸润；可以减慢或抑制肿瘤转移；可以抑制肿瘤生长；可以防止或延迟肿瘤复发；可以缓解一个或多个与癌症相关的症状到某个程度。
在其他实施方案中，根据本文提供的任何方法施用有效量的抗-LAG-3抗体、抗-PD-1抗体、抗PD-L1抗体、抗-CTLA-4抗体、抗-LAG-3抗体和抗-PD-1抗体的组合、或抗-PD-1抗体和免疫检查点抑制剂的组合，产生了至少一个治疗作用，所述治疗作用选自选自肿瘤的大小减少，出现的转移性病灶的数目随时间推移减少、完全反应、部分反应或稳定疾病。
在另外的实施方案中，这些治疗方法产生的临床获益率(CBR＝CR+PR+SD≥6个月)比不包括以下步骤的治疗方法所实现的临床获益率更好：(i)确定治疗前肿瘤样品中的LAG-3表达水平，(ii)选择LAG-3阳性肿瘤用于治疗，(iii)治疗已经在治疗之前被鉴定为LAG-3阳性的肿瘤，或(iv)它们的任意组合。在其他实施方案中，相比不包括以下步骤的治疗方法，临床获益率改善是约20％20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％或更大：(i)确定治疗前肿瘤样品中的LAG-3表达水平，(ii)选择LAG-3阳性肿瘤用于治疗，(iii)治疗已经在治疗之前被鉴定为LAG-3阳性的肿瘤，或(iv)它们的任意组合。
在另外的实施方案中，治疗方法产生至少约15％、至少约20％、至少约25％、至少约30％、至少约40％、至少约50％、至少约60％、至少约70％、至少约80％、至少约90％或约100％的客观反应率(ORR＝CR+PR)。在一个实施方案中，治疗方法产生至少约15％的客观反应率，其中恶性肿瘤是抵抗用抗PD-1或抗PD-L1抗体治疗的LAG-3阳性黑素瘤。在一些实施方案中，中位反应持续时间≥3个月、≥6个月、≥12个月或≥18个月。在一个实施方案中，中位反应持续时间≥6个月。在一些实施方案中，反应持续时间≥6个月的患者的频率是至少约30％、至少约40％、至少约50％、至少约60％、至少约70％、至少约80％、至少约90％或100％。
在另外的实施方案中，这些治疗方法产生的客观反应率(ORR＝CR+PR)比不包括以下步骤的治疗方法所实现的客观反应率更好：(i)确定治疗前肿瘤样品中的LAG-3表达水平，(ii)选择LAG-3阳性肿瘤用于治疗，(iii)治疗已经在治疗之前被鉴定为LAG-3阳性的肿瘤，或(iv)它们的任意组合。在其他实施方案中，相比不包括以下步骤的治疗方法，客观反应率改善是约20％20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％或更大：(i)确定治疗前肿瘤样品中的LAG-3表达水平，(ii)选择LAG-3阳性肿瘤用于治疗，(iii)治疗已经在治疗之前被鉴定为LAG-3阳性的肿瘤，或(iv)它们的任意组合。在一些实施方案中，中位反应持续时间≥3个月、≥6个月、≥12个月或≥18个月。在一个实施方案中，中位反应持续时间≥6个月。
在另外的实施方案中，治疗方法产生至少约20％、至少约30％、至少约40％、至少约50％、至少约60％、至少约70％、至少约80％、至少约90％或约100％的疾病控制率(DRR＝CR+PR+SD)。在一个实施方案中，治疗方法产生至少约70％的疾病控制率，其中恶性肿瘤是抵抗用抗PD-1或抗PD-L1抗体治疗的LAG-3阳性黑素瘤。在一些实施方案中，中位反应持续时间是≥3个月、≥6个月、≥12个月或≥18个月。在一个实施方案中，中位反应持续时间≥6个月。在一些实施方案中，反应持续时间≥6个月的患者的频率是至少约30％、至少约40％、至少约50％、至少约60％、至少约70％、至少约80％、至少约90％或100％。
在另外的实施方案中，这些治疗方法产生的疾病控制率(DRR＝CR+PR+SD)比不包括以下步骤的治疗方法所实现的疾病控制率更好：(i)确定治疗前肿瘤样品中的LAG-3表达水平，(ii)选择LAG-3阳性肿瘤用于治疗，(iii)治疗已经在治疗之前被鉴定为LAG-3阳性的肿瘤，或(iv)它们的任意组合。在其他实施方案中，相比不包括以下步骤的治疗方法，疾病控制率改善是约20％20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％或更大：(i)确定治疗前肿瘤样品中的LAG-3表达水平，(ii)选择LAG-3阳性肿瘤用于治疗，(iii)治疗已经在治疗之前被鉴定为LAG-3阳性的肿瘤，或(iv)它们的任意组合。在一些实施方案中，中位反应持续时间是≥3个月、≥6个月、≥12个月或≥18个月。在一个实施方案中，中位反应持续时间≥6个月。
13.试剂盒和单位剂型
诊断试剂盒也属于本发明的范围，所述诊断试剂盒包含抗-LAG-3抗体以测定作为生物标记物的LAG-3表达，旨在筛选患者用于免疫治疗或预测免疫治疗的疗效。试剂盒一般包含标签，所述标签指示试剂盒内容物的预期用途和使用说明。术语“标签”包括在试剂盒上或随试剂盒一起提供或另外伴随试剂盒的任何书面资料或记录的资料。在诊断试剂盒的某些实施方案中，用于测定、检测和/或定量LAG-3表达的第一抗-LAG-3抗体随至少一种治疗LAG-3阳性肿瘤的治疗性抗体(例如，第二抗-LAG-3抗体、抗-PD-1抗体、抗PD-L1抗体、和/或抗-CTLA-4抗体)一起共包装。在一些实施方案中，试剂盒还包含用于测定、检测和/或定量作为生物标记物的PD-L1表达以预测免疫治疗的疗效的抗PD-L1抗体。在一个实施方案中，免疫治疗包括向患者施用治疗有效量的LAG-3抑制剂(例如，抗-LAG-3抗体)和PD-1途径抑制剂(例如，抗PD1抗体或抗PD-L1抗体)。在一个实施方案中，免疫治疗包括向患者施用治疗有效量的LAG-3抑制剂(例如，抗-LAG-3抗体)。在一个实施方案中，免疫治疗包括向患者施用治疗有效量的PD-1途径抑制剂(例如，抗PD1抗体或抗PD-L1抗体)。在一个实施方案中，免疫治疗包括向患者施用治疗有效量的抗PD1抗体。在一个实施方案中，免疫治疗包括向患者施用治疗有效量的抗-CTLA-4抗体。在一个实施方案中，免疫治疗包括向患者施用治疗有效量的PD-1途径抑制剂(例如，抗PD1抗体或抗PD-L1抗体)和免疫检查点抑制剂。
在某些实施方案中，诊断试剂盒包含用测定、检测和/或定量LAG-3表达的抗人LAG-3单克隆抗体。参见，例如J.Matsuzaki等人,PNAS 107,7875(2010)。
本文中还提供以适应于前述方法中使用的治疗有效量包含药物组合物的治疗用试剂盒，所述药物组合物含有抗-LAG-3抗体(如BMS-986016)和抗-PD-1抗体(如纳武单抗)和可药用载体。在治疗用试剂盒的某些实施方案中，抗-LAG-3抗体以单位剂型随抗-PD-1抗体一起共包装。试剂盒任选地还可以包括说明，例如，其包含施用方案，以允许实施者(例如，医师、护士或患者)向患有癌症(例如，实体瘤)的患者施用含于其中的组合物。试剂盒还可以包含注射器。
任选地，诊断用和/或治疗用试剂盒包含单剂量药物组合物的多个包装，所述包装各自含有有效量的抗-LAG-3或抗-PD-1抗体，供根据上文提供的方法单次施用。还可以在试剂盒中包含为施用药物组合物必需的仪器或装置。例如，试剂盒可以提供一个或多个含有某种量的抗-LAG-3或抗-PD-1抗体的预充式注射器。
在一个实施方案中，本发明提供一种用于治疗罹患恶性肿瘤的患者的试剂盒，所述试剂盒例如包含：
(a)某剂量的抗-LAG-3抗体，如这样一种抗-LAG-3抗体，其包含具有SEQ ID NO:3中所述序列的重链可变区的CDR1、CDR2和CDR3结构域和具有SEQ ID NO:5中所述序列的轻链可变区的CDR1、CDR2和CDR3结构域；
(b)某剂量的抗-PD-1抗体，如这样一种抗-PD-1抗体，其包含具有SEQ ID NO:19中所述序列的重链可变区的CDR1、CDR2和CDR3结构域和具有SEQ ID NO:21中所述序列的轻链可变区的CDR1、CDR2和CDR3结构域；和
(c)在本文所述的方法中使用抗-LAG-3抗体和抗-PD-1抗体的说明。
在一个实施方案中，本发明提供一种用于治疗罹患恶性肿瘤的患者的试剂盒，所述试剂盒例如包含：
(a)某剂量的抗-LAG-3抗体，如这样一种抗-LAG-3抗体，其包含具有SEQ ID NO:3中所述序列的重链可变区的CDR1、CDR2和CDR3结构域和具有SEQ ID NO:5中所述序列的轻链可变区的CDR1、CDR2和CDR3结构域；和
(b)在本文所述的方法中使用抗-LAG-3抗体的说明。
在一个实施方案中，本发明提供一种用于治疗罹患恶性肿瘤的患者的试剂盒，所述试剂盒例如包含：
(a)某剂量的抗-PD-1抗体，如这样一种抗-PD-1抗体，其包含具有SEQ ID NO:19中所述序列的重链可变区的CDR1、CDR2和CDR3结构域和具有SEQ ID NO:21中所述序列的轻链可变区的CDR1、CDR2和CDR3结构域；和
(b)在本文所述的方法中使用抗-PD-1抗体的说明。
在一个实施方案中，本发明提供一种用于治疗罹患恶性肿瘤的患者的试剂盒，所述试剂盒例如包含：
(a)某剂量的抗PD-L1抗体，如BMS-936559；和
(b)在本文所述的方法中使用抗PD-L1抗体的说明。
在一个实施方案中，本发明提供一种用于治疗罹患恶性肿瘤的患者的试剂盒，所述试剂盒例如包含：
(a)某剂量的抗-CTLA-4抗体，如伊匹木单抗(YERVOY)；和
(b)在本文所述的方法中使用抗-CTLA-4抗体的说明。
在一个实施方案中，本发明提供一种用于治疗罹患恶性肿瘤的患者的试剂盒，所述试剂盒例如包含：
(a)某剂量的抗-LAG-3抗体，如这样一种抗-LAG-3抗体，其包含具有SEQ ID NO:3中所述序列的重链可变区的CDR1、CDR2和CDR3结构域和具有SEQ ID NO:5中所述序列的轻链可变区的CDR1、CDR2和CDR3结构域；
(b)某剂量的免疫检查点抑制剂；和
(c)在本文所述的方法中使用抗-PD-1抗体和免疫检查点抑制剂的说明。
在一些实施方案中，恶性肿瘤是LAG-3阳性肿瘤。在一些实施方案中，恶性肿瘤是LAG-3/PD-L1阳性肿瘤。在一些实施方案中，恶性肿瘤是LAG-3阳性/PD-L1阴性肿瘤。
在一些实施方案中，恶性肿瘤是黑素瘤。
本发明由不应当解释为进一步起限制作用的以下实施例进一步说明。
实施例
实施例1
用于在福尔马林固定石蜡包埋的人组织中通过DAB生色原单染免疫组织化学自动化检 测LAG3(小鼠克隆17B4)和通过图像分析进行评价的测定法优化和验证
这项研究的目的是使用来自LS Biosciences的市售抗体(小鼠克隆17B4)，验证淋巴细胞活化基因-3(LAG3)的免疫组织化学测定用于福尔马林固定、石蜡包埋(FFPE)的人组织中。
免疫组织化学(IHC)指在组织切片的细胞中定位蛋白质或其他分子的过程。免疫组织化学染色广泛用于诊断癌症并且最近已用来帮助预测患者是否可能对靶向化疗剂有反应。与许多其他分析技术如蛋白质印迹法或ELISA相反，IHC保留组织标本内部蛋白质表达的空间定位。这项技术涉及使用在细胞背景下特异性结合靶的抗体(第一抗体)和随后利用结合的抗体在目标区域沉积染料。
测试系统。在残余、去身份识别或匿名化的人样品上进行FFPE验证。用于灵敏度检验和分析的组织包括40份膀胱尿路上皮癌、41份胃/GEJ癌、41份HNSCC、41份黑素瘤，41份NSCLC和43份RCC。为LAG3 IHC选择的阳性对照和阴性对照是扁桃体组织。扁桃体组织含有呈LAG3阳性和阴性的细胞特征。
供试品。LAG3小鼠克隆17B4抗体购自LS Biosciences(西雅图，WA)并储存在-20℃。小鼠IgG同种型对照抗体购自BD Pharmingen(San Jose,CA)并储存在2-8℃。
免疫组织化学。根据标准实验室技术进行免疫组织化学。
预处理。使用市售试剂，在Leica Bond Rx(Leica Biosystems,Buffalo Grove,IL)上在室温(RT)，使用自动化检测执行LAG3(小鼠克隆17B4)的IHC分析的程序。将标本按4微米厚度切片，封装在带正电荷的玻璃载片上、干燥、烘烤、脱石蜡和离线再水化。随后将组织置于自动染色器上并且使用表位修复液1(目录号AR9961，Leica)在100℃接受20分钟预处理，继而用结合洗涤缓冲液(目录号#AR9590，Leica)在室温漂洗。
DAB生色原测定。将组织与过氧化物封闭液(目录号DS9800，Leica)温育5分钟，继而在结合洗涤缓冲液中淋洗3次。将组织与无血清的蛋白质封闭液(目录号#X0909,Dako,Carpinteria,CA)温育5分钟，继而与结合第一抗体稀释剂(目录号AR9352，Leica)中稀释的第一抗体或同种型阴性对照试剂温育30分钟并且在结合洗涤缓冲液中淋洗3次。将组织与Post Primary(Bond Polymer Refine检测试剂盒，目录号DS9800,Leica)温育8分钟，继而在结合洗涤缓冲液中淋洗3次，每次2分钟。将组织与Polymer(Bond Polymer Refine检测试剂盒)温育8分钟，继而在结合洗涤缓冲液中淋洗3次，每次2分钟，以及蒸馏水中淋洗2次。将组织与DAB(Bond Polymer Refine检测试剂盒)温育10分钟，继而在蒸馏水中淋洗4次。
红色生色原测定。将组织与3％过氧化氢温育5分钟，继而在结合洗涤缓冲液中淋洗3次。将组织与无血清的蛋白质封闭液温育5分钟，继而与结合第一抗体稀释剂中稀释的第一抗体或同种型阴性对照试剂温育30分钟并且在结合洗涤缓冲液中淋洗3次。将组织与Post Primary AP(目录号DS9390,Bond Polymer Refine Red检测试剂盒,Leica)温育20分钟，继而在结合洗涤缓冲液中淋洗3次，每次2分钟。将组织与Polymer AP(Bond PolymerRefine Red检测试剂盒)温育30分钟，继而在结合洗涤缓冲液中淋洗3次，每次2分钟，以及蒸馏水中淋洗2次。将组织与Red Refine(Bond Polymer Refine Red检测试剂盒)温育10分钟，继而在蒸馏水中淋洗4次。
将处理后组织与苏木精(Bond Polymer Refine检测试剂盒)温育5分钟，继而在蒸馏水中淋洗和结合洗涤缓冲液中淋洗。根据标准程序，使用自动化玻璃盖玻片机(Leica)，实现离线盖玻片封装。
使用Aperio Turbo AT系统(Aperio,Vista,CA)，扫描切片以产生完整载片图像。为本报告提供每种染液20倍JPEG图像。
图像分析。通过图像分析用来自Aperio的Nuclear v9算法评价了使用DAB生色原或红色生色原，以LAG3(小鼠克隆17B4)着染的组织。ROI包括附带间插间质的肿瘤组织的区域。从分析中排除的区域包括正常组织、较大的间质区域、坏死组织、tar(如果可能)和染色伪影。
选择胞核算法，原因是小细胞(如免疫细胞)中的浓重胞质染色经常使胞核中的苏木精模糊。胞质和膜算法需要可视化胞核中的苏木精以定量细胞。胞核算法具有称作“填充孔”的特征，如果存在苏木精，其将会填充淋巴细胞的中央部分并将其记录为一个细胞。
病理学家目视免疫评分。在图像分析的QC期间，还由病理学家评定动态范围内样品子集。病理学家目视免疫评分目的是在图像分析评分未产生如委员会认证的病理学家所认定的准确结果的情况下，提供备份结果。图像分析失败的原因可以包括但不限于：1)复染浅；2)组织破碎；3)NSCLC组织中存在tar；4)血铁黄素染色；或5)存在妨碍评估的黑色素。病理学家目视免疫评分是注释的区域内部(以模拟算法)的阳性免疫细胞百分数。
LAG3 IHC测定验证-灵敏度。使用优化的LAG3(小鼠克隆17B4)IHC测定对247份FFPE人类组织(40份膀胱尿路上皮癌、41份胃/GEJ癌、41份HNSCC、41份黑素瘤、41份NSCLC、43份RCC组织)进行灵敏度分析，以展示该分析在6种适应症内的动态范围。依据1个ROI(肿瘤+间插间质)的图像分析评价全部标本，并且还依据病理学家目视免疫评分评价组织子集(6种适应症内各自10个)。
平均而言，LAG-3(小鼠克隆17B4)表达在黑素瘤中最高(3.54％)，继而是膀胱尿路上皮癌(2.58％)、NSCLC(1.68％)、HNSCC(1.47％)、胃/GEJ癌(1.27％)和RCC(1.24％)。阳性范围从0.01％至25.57％，平均数为1.95％并且中位数为0.84％。使用阈值为2％展示了192份阴性组织和55份阳性组织(12份膀胱尿路上皮癌、6份胃/GEJ癌、7份HNSCC、18份黑素瘤、8份NSCLC和4份RCC)。
图1显示使用单重IHC在肿瘤样品中观察到的抗-LAG-3染色模式。观察到的染色模式包括部分膜/胞质定位、点样定位和完整膜/胞质定位。
图2显示如通过单重LAG-3IHC检测到的作为跨多种肿瘤的总肿瘤细胞比率的LAG-3阳性细胞频率分布。
实施例2
先前经抗PD1/PD-L1疗法治疗过的黑素瘤患者中与纳武单抗组合的抗淋巴细胞活化基 因-3(抗-LAG-3；BMS-986016)的初始疗效：
同时阻断阴性T细胞调节物LAG-3和PD-1可以协同地发挥恢复T细胞活化和增强抗肿瘤免疫力的作用。来自一项BMS-986016(靶向LAG-3的全人IgG4 mAb)±纳武单抗(靶向PD-1的全人IgG4 mAb)1/2a期研究的数据显示，该组合在患有难治或既往抗–PD-1/PD-L1疗法期间复发的黑素瘤患者中耐受良好并且显示有前景的抗肿瘤活性(NCT01968109；Ascierto等人,J Clin Oncol.2017；35(suppl)[摘要9520])。下文是接受既往抗PD-1/PD-L1疗法时进展的晚期黑素瘤患者中的疗效数据。
这是一项I/IIa期、开放标签、剂量递增和队列扩大研究，其在晚期实体肿瘤患者中评价单独或联合纳武单抗施用的BMS-986016的安全性、耐受性和疗效。患者静脉内接受研究疗法，每两周一次直至十二个8周治疗周期为止。用于扩大的联用剂量是BMS-98601680mg+纳武单抗240mg。
图3和图17中显示研究设计和终点。
图3中显示在黑色素既往IO治疗扩大队列中患者的关键合格性标准。
结果。自2017年4月7日数据截止起，治疗了212位患者，包括55位接受既往抗PD1/PD-L1疗法(黑素瘤既往IO治疗)时进展的黑素瘤患者。212位患者中，在数据截止时61％仍接受治疗。83名停止治疗的患者中，主要原因疾病进展(86％)。黑素瘤既往IO治疗队列中，67％的患者具有无脑转移的M1C疾病，15％的患者具有≥2×正常值上限(ULN)的乳酸脱氢酶(LDH)，并且20％具有肝转移。图4。
黑素瘤既往IO治疗队列中的患者接受深度预治疗。图5。55位患者中，76％接受过≥2次既往治疗；40％的患者具有作为既往抗PD1/PD-L1治疗最佳反应的进展疾病(PD)。
图6显示前40份经历过IO的黑素瘤样品的LAG-3表达状态。在单重IHC测定中使用≥1％截值，评定40％(16/40份)的样品为LAG-3阳性。
黑素瘤既往IO治疗队列中的疗效。全部可评价疗效的患者(n＝48；接受既往抗PD-1/PD-L1疗法时均进展)的中位随访持续时间是14周(范围，4.1–41周)。图7中显示依据研究者评估的反应。总反应率(ORR)是13％并且6位患者具有PR(其中2位具有作为既往抗PD1/PD-L1疗法的最佳反应的PD)。15位患者具有肿瘤负荷距基线降低；7位患者中观察到降低>30％(图8)。如图8中所示，LAG-3表达针对反应而富集。图9显示LEG-3≥1％、LAG-3<1％和LAG-3未知的患者的反应深度和持续时间。
图10显示无进展生存持续时间。48位可评价患者当中，在数据截止时46％(22/48位)患者仍接受治疗，无进展。
如图11中所示，相对于LAG-3表达<1％的患者(7.1％)，LAG-3表达≥1％的患者的ORR几乎升高3倍(20％)。PD-L1表达似乎相对于反应而言不富集。
图16-图23中显示来自临床试验的更新结果。自2017年8月，治疗了262位患者，包括68位接受既往抗PD1/PD-L1疗法(黑素瘤既往IO治疗)时进展的黑素瘤患者。图17中显示更新的基线人口统计数据和疾病特征。黑素瘤既往IO治疗队列当中，68％的患者具有无脑转移的M1C病情，13％的患者具有≥2×正常值上限(ULN)的乳酸脱氢酶(LDH)，并且25％具有肝转移。
图18显示黑素瘤既往IO治疗队列的更新既往治疗史。68位患者中，77％接受过≥2次既往治疗；46％的患者具有作为既往抗PD1/PD-L1治疗的最佳反应的进展疾病(PD)。大部分患者(57％)还接受过既往抗CTLA-4疗法。46％的患者对既往抗PD-1/PD-L1疗法具有PD最佳反应。
图19显示黑素瘤既往IO治疗队列的更新疗效数据。ORR是11.5％并且DCR是49％。LAG-3表达(≥1％)似乎相对于反应而言富集。中位反应持续时间未达到(范围，0.1+–39.3+)。
图20显示在黑素瘤既往IO治疗队列中观察到的依据基线特征和LAG-3表达的反应。无论是否有PD-L1表达，LAG-3表达(≥1％)相对于反应而言富集。
图21和图22分别显示了在黑素瘤既往IO治疗队列中观察到的依据LAG-3和PD-L1表达的目标病灶大小最佳变化和依据LAG-3和PD-L1表达的反应深度和持续时间地。在LAG-3表达≥1％的患者中更可能反应。PD-L1表达似乎相对于反应而言不富集。
图23显示无进展生存持续时间。61位可评价患者当中，在数据截止时34％(21/61位)患者尚未进展。33位LAG-3≥1％的可评价患者当中，在数据截止时55％(18/33位)患者尚未进展。20位LAG-3<1％的可评价患者当中，在数据截止时5％(1/20位)患者尚未进展。
实施例3
抗-LAG-3和抗PD-1单克隆抗体联用1/2a期研究中几种晚期实体瘤之间的初步疗效和 生物标记物富集
LAG-3是负向调节T细胞活化的跨膜受体。通过LAG-3和其他T细胞抑制性受体(包括程序性死亡-1(PD-1))的信号传导可以导致T细胞耗竭并且是肿瘤的免疫逃逸机制。同时阻断LAG-3和PD-1可以协同地发挥恢复T细胞活化和增强抗肿瘤免疫力的作用。在1/2a期研究中，BMS-986016(靶向LAG-3的IgG4 mAb)±纳武单抗(靶向PD-1的IgG 4mAb)展示了耐受性、外周T细胞活化作用和初步临床活性(NCT01968109；Lipson等人J ImmunotherCancer.2016；4(suppl):173[摘要P232])。在全体参与者群体和生物标记物富集群体中跨几个晚期实体瘤扩大队列评价BMS-986016+纳武单抗的疗效。
用BMS-986016 80mg+纳武单抗240mg Q2W按56天周期，治疗全部患者(自2017年4月7日起，n＝204)直至疾病进展、确认完全反应、完成12个周期或过高毒性。大部分队列聚焦于进行至少1种其他既往疗法时/之后进展的免疫肿瘤学初治患者并且纳入患有晚期胃/胃食管结合部癌、头颈鳞状细胞癌、肝细胞癌、肾细胞癌和NSCLC的患者。一个其他队列纳入在接受既往抗PD-1/PD-L1作为其最新近疗法时/之后进展的NSCLC患者。基于肿瘤活检样品中的PD-L1和LAG-3免疫组织化学评分，描述生物标记物限定的患者子集。
图12显示免疫肿瘤学初治胃肿瘤样品的LAG-3表达状态。在单重IHC测定中使用≥1％截值，评定48％(10/21份)的样品为LAG-3阳性。
图13显示对抗-LAG-3和抗-PD-1抗体组合治疗有反应的免疫肿瘤学初治胃癌患者中目标病灶大小的变化。对治疗有反应的患者当中LAG-3阳性肿瘤富集。根据RECIST确定肿瘤反应。所示的患者组先前尚未暴露于抗PD-1/PD-L1治疗。
图14显示如通过单重IHC测定所确定的免疫肿瘤学初治的SCCHN、肾癌，HCC和NSCLC肿瘤样品的LAG-3表达状态。
实施例4
LAG-3的多肿瘤剖析及与免疫细胞表型的关联
LAG-3负向调节T细胞活化。Sierro S等人,Expert Opin Ther Targets.15:91–101(2011)；Grosso JF等人,J Clin Invest.117:3383–3392(2007)。LAG-3和程序性死亡-1(PD-1)受体在肿瘤浸润型淋巴细胞(TIL)上过量表达及共表达。Goding SR等人,JImmunol.190:4899–4909(2013)。LAG-3和PD-1过量表达可能限制对抗PD-1疗法的治疗反应并且导致肿瘤进展。Ascierto P等人，Poster 9520，呈献于第53届美国临床肿瘤学会年度会议；2017年6月2日–6日；芝加哥，IL；Wherry,Nat Immunol.12(6):492–9(2011)；Woo SR等人,Cancer Res.72:917–927(2012)，Huang CT等人,Immunity.21:503–513(2004)。BMS-986016是靶向LAG-3，从而阻断与其配体主要组织相容性复合体II类(MHC II)结合的全人IgG4抗体(图24)。Huard B等人,Proc Natl Acad Sci U S A.94:5744–5749(1997)。与纳武单抗(抗PD-1)组合的BMS-986016可以在接受抗PD-1单一疗法时其疾病进展的患者中恢复T细胞活化及肿瘤反应。Ascierto P等人Poster 9520，呈献于第53届美国临床肿瘤学会年度会议；2017年6月2日–6日；芝加哥，IL。这种双重抑制作用还可以在先前未经抗PD-1疗法治疗的患者中增强反应的持久性。BMS-986016和纳武单抗分别对LAG-3和PD-1的同时阻断导致外周T细胞活化并且在晚期实体肿瘤患者中显示临床活性和可管理的安全性。AsciertoP等人海报9520，呈献于第53届美国临床肿瘤学会年度会议；2017年6月2日–6日；芝加哥，IL；Lipson E等人J Immunother Cancer.4(suppl 1):173(2016)。为了进一步理解LAG-3和标记物抗性之间跨肿瘤的关联，已经全面剖析商业溯源的肿瘤标本以研究并表征炎性生物标记物背景下LAG-3和MHC II的表达。
方法
定量免疫组织化学(IHC)剖析来自患有肾细胞癌(RCC)、胃癌、非小细胞肺癌(NSCLC)、黑素瘤、头颈鳞状细胞癌(SCCHN)和尿路上皮癌的患者的实体瘤标本。使用LeicaBond Rx或Dako Link 48平台，通过IHC针对LAG-3、CD8、FOXP3、CD68、CD163、PD-L1和MHC II染色载片切片。对于免疫细胞标记物(LAG-3、CD8、FOXP3、CD68、CD163)，使用Aperio图像分析软件，通过界定肿瘤微环境下表达生物标记物的总有核细胞的比例，确定阳性百分数。手工评定肿瘤细胞上依据IHC的MHC II和PD-L1表达。对IHC数据进行无监督聚类(Ward法)以确定LAG-3和其他免疫生物标记物之间的关联。为了确定MHC II+和LAG-3+共定位，对MHCII高的(>70％MHC II+)或MHC II低(<10％MHC II+)的肿瘤细胞区域评估LAG-3染色的细胞数目(各自针对阳性区域和阴性区域的三个20×视野的平均数)。
mRNA分析在患有RCC和黑素瘤的患者中，通过Affymetrix(RCC)的差异性基因表达分析或来自筛查时和免疫治疗启动后2–4周所采集的肿瘤活检样品中的RNA测序(黑素瘤)数据，确定LAG-3mRNA水平的变化。
统计分析依据Spearman相关性r评估LAG-3表达和其他免疫生物标记物之间的相关性。实施Mann–Whitney检验以评估统计差异。使用纳入治疗组和时间作为因素的广义线性模型，进行差异性基因表达分析。
结果
肿瘤中的LAG-3表达对于跨6个不同实体瘤类型分析的肿瘤标本(n＝245：RCC，43份；胃癌，41份；NSCLC，41份；黑素瘤，40份；SCCHN，40份；尿路上皮癌，40份)，观察到一系列的低至高LAG-3表达(总有核细胞的0.01％至33％)。LAG-3表达可以定位至淋巴细胞的核周、膜或胞质区域，如通过IHC染色所示(图25)。
LAG-3与免疫和炎性生物标记物的关联观察到LAG-3表达与CD8、FOXP3、CD163和CD68(n＝237：RCC，43份；胃癌，39份；NSCLC，39份；黑素瘤，39份；SCCHN，40份；尿路上皮癌，37份)的中度相关性(图26A–D，r＝0.49–0.65)；未观察到LAG-3与PD-L1和MHC II肿瘤表达的相关性(图26E和26F，r＝0.28–0.30)。频繁观察到肿瘤细胞中的MHC II表达(≥1％)，范围从低55％(黑素瘤)至高82％(胃癌)。
肿瘤细胞中MHC II表达≥1％的肿瘤显示LAG-3+TIL的频率的明显增加(图27，n＝241：RCC，43份；胃癌，40份；NSCLC，40份；黑素瘤，38份；SCCHN，40份；尿路上皮癌，40份)。
在6个分析的肿瘤类型中，依据肿瘤类型对样品的无监督聚簇揭示了具有一系列从低到高炎症的肿瘤聚簇(图28A中的实施例，尿路上皮癌，n＝37；和图28B，胃癌，n＝39)。
频繁在炎症高的肿瘤中观察到增加MHC II肿瘤表达，不过在炎症水平较低的肿瘤中还观察到这种增加(图28A中的实施例，尿路上皮癌)。对肿瘤细胞MHC II表达阳性染色的那些标本当中，一些肿瘤类型中MHC II表达水平与LAG-3+TIL水平相关(图28A和29B中的实施例，尿路上皮癌和胃癌)。大部分具有高MHC II表达的肿瘤具有低PD-L1表达(图28C，n＝229：RCC，43份；胃癌，39份；NSCLC，38份；黑素瘤，33份；SCCHN，39份；尿路上皮癌，37份)。
不均一性MHC II肿瘤细胞表达和LAG-3+TIL。在受检肿瘤标本的子集中(n＝6)，观察到不均一的MHC II肿瘤细胞表达，范围从低(<10％)到高(>70％)(图29A，尿路上皮癌，n＝4；胃癌n＝2)。在这种子集中，相对于MHC II表达低，在MHC II表达高的肿瘤区域中观察到LAG-3+TIL数目显著升高(图29A-C)。
抗PD-1单一疗法期间LAG-3mRNA水平的变化在分析来自转移性黑素瘤患者(NCT01621490/CheckMate 038)或转移性RCC患者(NCT01358721/CheckMate 009)的组织样品时，在筛选和纳武单抗治疗第2–第4周之间观察到LAG-3mRNA水平显著升高(图30)。
LAG-3表达与肿瘤微环境下的细胞炎症相关，如通过IHC所示。跨分析的6个肿瘤类型频繁观察到肿瘤细胞表达MHC II；免疫细胞中的LAG-3表达在肿瘤细胞内表达MHC II的肿瘤中富集。在各个肿瘤标本内部，相比MHC II低/阴性肿瘤区域，在MHC II高/阳性肿瘤区域中观察到较高频率的LAG-3+TIL，这增加以下可能性：肿瘤细胞中LAG-3和MHC II表达的共定位可能充当某些肿瘤中LAG-3检查点激活的机制。纳武单抗可以诱导LAG-3表达的这些发现和观察，支持在抗PD-1疗法治疗后疾病进展的患者中使用LAG-3作为BMS-986016疗法的预测性生物标记。
序列
SEQ ID NO:1重链氨基酸序列；抗-LAG-3mAb(BMS-986016)
QVQLQQWGAGLLKPSETLSLTCAVYGGSFSDYYWNWIRQPPGKGLEWIGEINHRGSTNSNPSLKSRVTLSLDTSKNQFSLKLRSVTAADTAVYYCAFGYSDYEYNWFDPWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTKTYTCNVDHKPSNTKVDKRVESKYGPPCPPCPAPEFLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSQEEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSRLTVDKSRWQEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSLGK
SEQ ID NO:2轻链氨基酸序列；抗-LAG-3mAb(BMS-986016)
EIVLTQSPATLSLSPGERATLSCRASQSISSYLAWYQQKPGQAPRLLIYDASNRATGIPARFSGSGSGTDFTLTISSLEPEDFAVYYCQQRSNWPLTFGQGTNLEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC
SEQ ID NO:3重链可变区(VH)氨基酸序列；抗-LAG-3mAb(BMS-986016)
QVQLQQWGAGLLKPSETLSLTCAVYGGSFSDYYWNWIRQPPGKGLEWIGEINHRGSTNSNPSLKSRVTLSLDTSKNQFSLKLRSVTAADTAVYYCAFGYSDYEYNWFDPWGQGTLVTVSS
SEQ ID NO:4重链可变区(VH)核苷酸序列；抗-LAG-3mAb(BMS-986016)
caggtgcagctacagcagtggggcgcaggactgttgaagccttcggagaccctgtccctcacctgcgctgtctatggtgggtccttcagtgattactactggaactggatccgccagcccccagggaaggggctggagtggattggggaaatcaatcatcgtggaagcaccaactccaacccgtccctcaagagtcgagtcaccctatcactagacacgtccaagaaccagttctccctgaagctgaggtctgtgaccgccgcggacacggctgtgtattactgtgcgtttggatatagtgactacgagtacaactggttcgacccctggggccagggaaccctggtcaccgtctcctca
SEQ ID NO:5轻链可变区(VL)氨基酸序列；抗-LAG-3mAb(BMS-986016)
EIVLTQSPATLSLSPGERATLSCRASQSISSYLAWYQQKPGQAPRLLIYDASNRATGIPARFSGSGSGTDFTLTISSLEPEDFAVYYCQQRSNWPLTFGQGTNLEIK
SEQ ID NO:6轻链可变区(VL)核苷酸序列；抗-LAG-3mAb(BMS-986016)
gaaattgtgttgacacagtctccagccaccctgtctttgtctccaggggaaagagccaccctctcctgcagggccagtcagagtattagcagctacttagcctggtaccaacagaaacctggccaggctcccaggctcctcatctatgatgcatccaacagggccactggcatcccagccaggttcagtggcagtgggtctgggacagacttcactctcaccatcagcagcctagagcctgaagattttgcagtttattactgtcagcagcgtagcaactggcctctcacttttggccaggggaccaacctggagatcaaa
SEQ ID NO:7重链CDR1氨基酸序列；抗-LAG-3mAb(BMS-986016)
DYYWN
SEQ ID NO:8重链CDR2氨基酸序列；抗-LAG-3mAb(BMS-986016)
EINHRGSTNSNPSLKS
SEQ ID NO:9重链CDR3氨基酸序列；抗-LAG-3mAb(BMS-986016)
GYSDYEYNWFDP
SEQ ID NO:10轻链CDR1氨基酸序列；抗-LAG-3mAb(BMS-986016)
RASQSISSYLA
SEQ ID NO:11轻链CDR2氨基酸序列；抗-LAG-3mAb(BMS-986016)
DASNRAT
SEQ ID NO:12轻链CDR3氨基酸序列；抗-LAG-3mAb(BMS-986016)
QQRSNWPLT
SEQ ID NO:13Human LAG-3氨基酸序列
MWEAQFLGLLFLQPLWVAPVKPLQPGAEVPVVWAQEGAPAQLPCSPTIPLQDLSLLRRAGVTWQHQPDSGPPAAAPGHPLAPGPHPAAPSSWGPRPRRYTVLSVGPGGLRSGRLPLQPRVQLDERGRQRGDFSLWLRPARRADAGEYRAAVHLRDRALSCRLRLRLGQASMTASPPGSLRASDWVILNCSFSRPDRPASVHWFRNRGQGRVPVRESPHHHLAESFLFLPQVSPMDSGPWGCILTYRDGFNVSIMYNLTVLGLEPPTPLTVYAGAGSRVGLPCRLPAGVGTRSFLTAKWTPPGGGPDLLVTGDNGDFTLRLEDVSQAQAGTYTCHIHLQEQQLNATVTLAIITVTPKSFGSPGSLGKLLCEVTPVSGQERFVWSSLDTPSQRSFSGPWLEAQEAQLLSQPWQCQLYQGERLLGAAVYFTELSSPGAQRSGRAPGALPAGHLLLFLTLGVLSLLLLVTGAFGFHLWRRQWRPRRFSALEQGIHPPQAQSKIEELEQEPEPEPEPEPEPEPEPEPEQL
SEQ ID NO:14LAG-3表位
PGHPLAPG
SEQ ID NO:15LAG-3表位
HPAAPSSW
SEQ ID NO:16LAG-3表位
PAAPSSWG
SEQ ID NO:17重链氨基酸序列；抗-PD-1mAb(BMS936558)
QVQLVESGGGVVQPGRSLRLDCKASGITFSNSGMHWVRQAPGKGLEWVAVIWYDGSKRYYADSVKGRFTISRDNSKNTLFLQMNSLRAEDTAVYYCATNDDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTKTYTCNVDHKPSNTKVDKRVESKYGPPCPPCPAPEFLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSQEEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSRLTVDKSRWQEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSLGK
SEQ ID NO:18轻链氨基酸序列；抗-PD-1mAb(BMS936558)
EIVLTQSPATLSLSPGERATLSCRASQSVSSYLAWYQQKPGQAPRLLIYDASNRATGIPARFSGSGSGTDFTLTISSLEPEDFAVYYCQQSSNWPRTFGQGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC
SEQ ID NO:19重链可变区(VH)氨基酸序列；抗-PD-1mAb(BMS936558)
QVQLVESGGGVVQPGRSLRLDCKASGITFSNSGMHWVRQAPGKGLEWVAVIWYDGSKRYYADSVKGRFTISRDNSKNTLFLQMNSLRAEDTAVYYCATNDDYWGQGTLVTVSS
SEQ ID NO:20重链可变区(VH)核苷酸序列；抗-PD-1mAb(BMS936558)
caggtgcagctggtggagtctgggggaggcgtggtccagcctgggaggtccctgagactcgactgtaaagcgtctggaatcaccttcagtaactctggcatgcactgggtccgccaggctccaggcaaggggctggagtgggtggcagttatttggtatgatggaagtaaaagatactatgcagactccgtgaagggccgattcaccatctccagagacaattccaagaacacgctgtttctgcaaatgaacagcctgagagccgaggacacggctgtgtattactgtgcgacaaacgacgactactggggccagggaaccctggtcaccgtctcctca
SEQ ID NO:21轻链可变区(VL)氨基酸序列；抗-PD-1mAb(BMS936558)
EIVLTQSPATLSLSPGERATLSCRASQSVSSYLAWYQQKPGQAPRLLIYDASNRATGIPARFSGSGSGTDFTLTISSLEPEDFAVYYCQQSSNWPRTFGQGTKVEIK
SEQ ID NO:22轻链可变区(VL)核苷酸序列；抗-PD-1mAb(BMS936558)
gaaattgtgttgacacagtctccagccaccctgtctttgtctccaggggaaagagccaccctctcctgcagggccagtcagagtgttagtagttacttagcctggtaccaacagaaacctggccaggctcccaggctcctcatctatgatgcatccaacagggccactggcatcccagccaggttcagtggcagtgggtctgggacagacttcactctcaccatcagcagcctagagcctgaagattttgcagtttattactgtcagcagagtagcaactggcctcggacgttcggccaagggaccaaggtggaaatcaaa
SEQ ID NO:23重链CDR1氨基酸序列；抗-PD-1mAb(BMS936558)
NSGMH
SEQ ID NO:24重链CDR2氨基酸序列；抗-PD-1mAb(BMS936558)
VIWYDGSKRYYADSVKG
SEQ ID NO:25重链CDR3氨基酸序列；抗-PD-1mAb(BMS936558)
NDDY
SEQ ID NO:26轻链CDR1氨基酸序列；抗-PD-1mAb(BMS936558)
RASQSVSSYLA
SEQ ID NO:27轻链CDR2氨基酸序列；抗-PD-1mAb(BMS936558)
DASNRAT
SEQ ID NO:28轻链CDR3氨基酸序列；抗-PD-1mAb(BMS936558)
QQSSNWPRT
SEQ ID NO:29完全人PD-1序列
agtttcccttccgctcacctccgcctgagcagtggagaaggcggcactctggtggggctgctccaggcatgcagatcccacaggcgccctggccagtcgtctgggcggtgctacaactgggctggcggccaggatggttcttagactccccagacaggccctggaacccccccaccttcttcccagccctgctcgtggtgaccgaaggggacaacgccaccttcacctgcagcttctccaacacatcggagagcttcgtgctaaactggtaccgcatgagccccagcaaccagacggacaagctggccgccttccccgaggaccgcagccagcccggccaggactgccgcttccgtgtcacacaactgcccaacgggcgtgacttccacatgagcgtggtcagggcccggcgcaatgacagcggcacctacctctgtggggccatctccctggcccccaaggcgcagatcaaagagagcctgcgggcagagctcagggtgacagagagaagggcagaagtgcccacagcccaccccagcccctcacccaggccagccggccagttccaaaccctggtggttggtgtcgtgggcggcctgctgggcagcctggtgctgctagtctgggtcctggccgtcatctgctcccgggccgcacgagggacaataggagccaggcgcaccggccagcccctgaaggaggacccctcagccgtgcctgtgttctctgtggactatggggagctggatttccagtggcgagagaagaccccggagccccccgtgccctgtgtccctgagcagacggagtatgccaccattgtctttcctagcggaatgggcacctcatcccccgcccgcaggggctcagccgacggccctcggagtgcccagccactgaggcctgaggatggacactgctcttggcccctctgaccggcttccttggccaccagtgttctgcagaccctccaccatgagcccgggtcagcgcatttcctcaggagaagcaggcagggtgcaggccattgcaggccgtccaggggctgagctgcctgggggcgaccggggctccagcctgcacctgcaccaggcacagccccaccacaggactcatgtctcaatgcccacagtgagcccaggcagcaggtgtcaccgtcccctacagggagggccagatgcagtcactgcttcaggtcctgccagcacagagctgcctgcgtccagctccctgaatctctgctgctgctgctgctgctgctgctgctgcctgcggcccggggctgaaggcgccgtggccctgcctgacgccccggagcctcctgcctgaacttgggggctggttggagatggccttggagcagccaaggtgcccctggcagtggcatcccgaaacgccctggacgcagggcccaagactgggcacaggagtgggaggtacatggggctggggactccccaggagttatctgctccctgcaggcctagagaagtttcagggaaggtcagaagagctcctggctgtggtgggcagggcaggaaacccctcccacctttacacatgcccaggcagcacctcaggccctttgtggggcagggaagctgaggcagtaagcgggcaggcagagctggaggcctttcaggccagccagcactctggcctcctgccgccgcattccaccccagcccctcacaccactcgggagagggacatcctacggtcccaaggtcaggagggcagggctggggttgactcaggcccctcccagctgtggccacctgggtgttgggagggcagaagtgcaggcacctagggccccccatgtgcccaccctgggagctctccttggaacccattcctgaaattatttaaaggggttggccgggctcccaccagggcctgggtgggaaggtacaggcgttcccccggggcctagtacccccgcgtggcctatccactcctcacatccacacactgcacccccactcctggggcagggccaccagcatccaggcggccagcaggcacctgagtggctgggacaagggatcccccttccctgtggttctattatattataattataattaaatatgagagcatgct
SEQ ID NO:30重链核苷酸序列；抗-LAG-3mAb(BMS-986016)
caggtgcagctacagcagtggggcgcaggactgttgaagccttcggagaccctgtccctcacctgcgctgtctatggtgggtccttcagtgattactactggaactggatccgccagcccccagggaaggggctggagtggattggggaaatcaatcatcgtggaagcaccaactccaacccgtccctcaagagtcgagtcaccctatcactagacacgtccaagaaccagttctccctgaagctgaggtctgtgaccgccgcggacacggctgtgtattactgtgcgtttggatatagtgactacgagtacaactggttcgacccctggggccagggaaccctggtcaccgtctcctcagctagcaccaagggcccatccgtcttccccctggcgccctgctccaggagcacctccgagagcacagccgccctgggctgcctggtcaaggactacttccccgaaccggtgacggtgtcgtggaactcaggcgccctgaccagcggcgtgcacaccttcccggctgtcctacagtcctcaggactctactccctcagcagcgtggtgaccgtgccctccagcagcttgggcacgaagacctacacctgcaacgtagatcacaagcccagcaacaccaaggtggacaagagagttgagtccaaatatggtcccccatgcccaccatgcccagcacctgagttcctggggggaccatcagtcttcctgttccccccaaaacccaaggacactctcatgatctcccggacccctgaggtcacgtgcgtggtggtggacgtgagccaggaagaccccgaggtccagttcaactggtacgtggatggcgtggaggtgcataatgccaagacaaagccgcgggaggagcagttcaacagcacgtaccgtgtggtcagcgtcctcaccgtcctgcaccaggactggctgaacggcaaggagtacaagtgcaaggtctccaacaaaggcctcccgtcctccatcgagaaaaccatctccaaagccaaagggcagccccgagagccacaggtgtacaccctgcccccatcccaggaggagatgaccaagaaccaggtcagcctgacctgcctggtcaaaggcttctaccccagcgacatcgccgtggagtgggagagcaatgggcagccggagaacaactacaagaccacgcctcccgtgctggactccgacggctccttcttcctctacagcaggctaaccgtggacaagagcaggtggcaggaggggaatgtcttctcatgctccgtgatgcatgaggctctgcacaaccactacacacagaagagcctctccctgtctctgggtaaatga
SEQ ID NO:31轻链核苷酸序列；抗-LAG-3mAb(BMS-986016)
gaaattgtgttgacacagtctccagccaccctgtctttgtctccaggggaaagagccaccctctcctgcagggccagtcagagtattagcagctacttagcctggtaccaacagaaacctggccaggctcccaggctcctcatctatgatgcatccaacagggccactggcatcccagccaggttcagtggcagtgggtctgggacagacttcactctcaccatcagcagcctagagcctgaagattttgcagtttattactgtcagcagcgtagcaactggcctctcacttttggccaggggaccaacctggagatcaaacgtacggtggctgcaccatctgtcttcatcttcccgccatctgatgagcagttgaaatctggaactgcctctgttgtgtgcctgctgaataacttctatcccagagaggccaaagtacagtggaaggtggataacgccctccaatcgggtaactcccaggagagtgtcacagagcaggacagcaaggacagcacctacagcctcagcagcaccctgacgctgagcaaagcagactacgagaaacacaaagtctacgcctgcgaagtcacccatcagggcctgagctcgcccgtcacaaagagcttcaacaggggagagtgttag
SEQ ID NO:32基序
MYPPPY
Figure IDA0002298562680000011
Figure IDA0002298562680000021
Figure IDA0002298562680000031
Figure IDA0002298562680000041
Figure IDA0002298562680000051
Figure IDA0002298562680000061
Figure IDA0002298562680000071
Figure IDA0002298562680000081
Figure IDA0002298562680000091
Figure IDA0002298562680000101
Figure IDA0002298562680000111
Figure IDA0002298562680000131
Figure IDA0002298562680000141

Claims (251)

1.一种选择人类患者中的恶性肿瘤用于免疫治疗的方法，包括：
(a)确定肿瘤样品中的LAG-3表达水平；和
(b)如果肿瘤是LAG-3阳性肿瘤，则选择所述肿瘤用于免疫治疗。
2.鉴定人类患者中的恶性肿瘤为符合免疫治疗资格的方法，包括：
(a)确定肿瘤样品中的LAG-3表达水平；和
(b)如果肿瘤是LAG-3阳性肿瘤，则鉴定肿瘤为符合免疫治疗资格。
3.鉴定人类患者中可能对免疫治疗有反应的恶性肿瘤的方法，所述方法包括：
(a)确定肿瘤样品中的LAG-3表达水平；和
(b)如果肿瘤是LAG-3阳性肿瘤，则鉴定肿瘤为可能对治疗有反应。
4.将人类患者中的恶性肿瘤划分为可能对免疫治疗有反应的方法，所述方法包括：
(a)确定肿瘤样品中的LAG-3表达水平；和
(b)如果肿瘤是LAG-3阳性肿瘤，则将肿瘤划分为可能对免疫治疗有反应。
5.根据权利要求1至4中任一项所述的方法，还包括确定肿瘤样品中的PD-L1表达水平。
6.根据权利要求1至5中任一项所述的方法，其中免疫治疗包括使肿瘤与治疗有效量的LAG-3抑制剂和PD-1途径抑制剂接触。
7.根据权利要求1至5中任一项所述的方法，其中免疫治疗包括使肿瘤与治疗有效量的LAG-3抑制剂接触。
8.根据权利要求1至5中任一项所述的方法，其中免疫治疗包括使肿瘤与治疗有效量的PD-1途径抑制剂接触。
9.根据权利要求1至5中任一项所述的方法，其中免疫治疗包括使肿瘤与治疗有效量的抗-CTLA-4抗体接触。
10.根据权利要求1至5中任一项所述的方法，其中免疫治疗包括使肿瘤与治疗有效量的PD-1途径抑制剂和免疫检查点抑制剂接触。
11.根据权利要求1至5中任一项所述的方法，包括使肿瘤与治疗有效量的LAG-3抑制剂和PD-1途径抑制剂接触。
12.根据权利要求1至5中任一项所述的方法，包括使肿瘤与治疗有效量的LAG-3抑制剂接触。
13.根据权利要求1至5中任一项所述的方法，包括使肿瘤与治疗有效量的PD-1途径抑制剂接触。
14.根据权利要求1至5中任一项所述的方法，包括使肿瘤与治疗有效量的抗-CTLA-4抗体接触。
15.根据权利要求1至5中任一项所述的方法，包括使肿瘤与治疗有效量的PD-1途径抑制剂和免疫检查点抑制剂接触。
16.根据权利要求1至5中任一项所述的方法，包括向患者施用治疗有效量的LAG-3抑制剂和PD-1途径抑制剂。
17.根据权利要求1至5中任一项所述的方法，包括向患者施用治疗有效量的LAG-3抑制剂。
18.根据权利要求1至5中任一项所述的方法，包括向患者施用治疗有效量的PD-1途径抑制剂。
19.根据权利要求1至5中任一项所述的方法，包括向患者施用治疗有效量的抗-CTLA-4抗体。
20.根据权利要求1至5中任一项所述的方法，包括向患者施用治疗有效量的PD-1途径抑制剂和免疫检查点抑制剂。
21.鉴定可能对免疫治疗有反应的恶性肿瘤患者的方法，所述方法包括：
(a)确定肿瘤样品中的LAG-3表达水平；并且
(b)如果肿瘤是LAG-3阳性肿瘤，则鉴定患者可能对治疗有反应。
22.选择恶性肿瘤患者用于免疫治疗的方法，所述方法包括：
(a)确定肿瘤样品中的LAG-3表达水平；和
(b)如果肿瘤是LAG-3阳性肿瘤，则选择所述患者用于免疫治疗。
23.根据权利要求21或权利要求22所述的方法，还包括确定肿瘤样品中的PD-L1表达水平。
24.根据权利要求21至23中任一项所述的方法，包括向患者施用治疗有效量的LAG-3抑制剂和PD-1途径抑制剂。
25.根据权利要求21至23中任一项所述的方法，包括向患者施用治疗有效量的LAG-3抑制剂。
26.根据权利要求21至23中任一项所述的方法，包括向患者施用治疗有效量的PD-1途径抑制剂。
27.根据权利要求21至23中任一项所述的方法，包括向患者施用治疗有效量的抗-CTLA-4抗体。
28.根据权利要求21至23中任一项所述的方法，包括向患者施用治疗有效量的PD-1途径抑制剂和免疫检查点抑制剂。
29.治疗人类患者中恶性肿瘤的方法，包括：向患者施用治疗有效量的LAG-3抑制剂和PD-1途径抑制剂；其中基于患者的肿瘤样品中的LAG-3表达，预测患者对LAG-3抑制剂和PD-1途径抑制剂治疗反应。
30.治疗人类患者中恶性肿瘤的方法，包括：向患者施用治疗有效量的LAG-3抑制剂；其中基于患者的肿瘤样品中的LAG-3表达情况，预测患者对LAG-3抑制剂治疗反应。
31.治疗人类患者中恶性肿瘤的方法，包括：向患者施用治疗有效量的PD-1途径抑制剂；其中基于患者的肿瘤样品中的LAG-3表达，预测患者对PD-1途径抑制剂治疗反应。
32.治疗人类患者中恶性肿瘤的方法，包括：向患者施用治疗有效量的抗-CTLA-4抗体；其中基于患者的肿瘤样品中的LAG-3表达，预测患者对抗-CTLA-4抗体治疗反应。
33.治疗人类患者中恶性肿瘤的方法，包括：向患者施用治疗有效量的PD-1途径抑制剂和免疫检查点抑制剂；其中基于患者的肿瘤样品中的LAG-3表达，预测患者对PD-1途径抑制剂和免疫检查点抑制剂治疗反应。
34.根据权利要求29至33中任一项所述的方法，其中基于患者的肿瘤样品中的LAG-3和PD-L1表达，预测患者对治疗反应。
35.治疗有需要的人类患者中恶性肿瘤的方法，包括：
(a)确定肿瘤样品中的LAG-3表达水平；和
(b)如果肿瘤是LAG-3阳性肿瘤，则向患者施用治疗有效量的LAG-3抑制剂和PD-1途径抑制剂。
36.治疗有需要的人类患者中恶性肿瘤的方法，包括：
(a)确定肿瘤样品中的LAG-3表达水平；和
(b)如果肿瘤是LAG-3阳性肿瘤，则向患者施用治疗有效量的LAG-3抑制剂。
37.治疗有需要的人类患者中恶性肿瘤的方法，包括：
(a)确定肿瘤样品中的LAG-3表达水平；和
(b)如果肿瘤是LAG-3阳性肿瘤，则向患者施用治疗有效量的PD-1途径抑制剂。
38.治疗有需要的人类患者中恶性肿瘤的方法，包括：
(a)确定肿瘤样品中的LAG-3表达水平；和
(b)如果肿瘤是LAG-3阳性肿瘤，则向患者施用治疗有效量的抗-CTLA-4抗体。
39.治疗有需要的人类患者中恶性肿瘤的方法，包括：
(a)确定肿瘤样品中的LAG-3表达水平；和
(b)如果肿瘤是LAG-3阳性肿瘤，则向患者施用治疗有效量的PD-1途径抑制剂和免疫检查点抑制剂。
40.根据权利要求35至39中任一项所述的方法，还包括确定肿瘤样品中的PD-L1表达水平。
41.用于治疗有需要的人类患者中恶性肿瘤的方法，包括向患者施用治疗有效量的LAG-3抑制剂和PD-1途径抑制剂，其中在施用之前，鉴定患者为患有LAG-3阳性恶性肿瘤。
42.用于治疗有需要的人类患者中恶性肿瘤的方法，包括向患者施用治疗有效量的LAG-3抑制剂，其中在施用之前，鉴定患者为患有LAG-3阳性恶性肿瘤。
43.用于治疗有需要的人类患者中恶性肿瘤的方法，包括向患者施用治疗有效量的PD-1途径抑制剂，其中在施用之前，鉴定患者为患有LAG-3阳性恶性肿瘤。
44.用于治疗有需要的人类患者中恶性肿瘤的方法，包括向患者施用治疗有效量的抗-CTLA-4抗体，其中在施用之前，鉴定患者为患有LAG-3阳性恶性肿瘤。
45.用于治疗有需要的人类患者中恶性肿瘤的方法，包括向患者施用治疗有效量的PD-1途径抑制剂和免疫检查点抑制剂，其中在施用之前，鉴定患者为患有LAG-3阳性恶性肿瘤。
46.根据权利要求41至45中任一项所述的方法，其中在施用之前，鉴定患者为患有LAG-3阳性PD-L1阳性恶性肿瘤。
47.根据权利要求41至45中任一项所述的方法，其中在施用之前，鉴定患者为患有LAG-3阳性PD-L1阴性恶性肿瘤。
48.用于治疗有需要的人类患者中恶性肿瘤的方法，包括：
(a)鉴定患者为患有LAG-3阳性恶性肿瘤；并且
(b)向患者施用治疗有效量的LAG-3抑制剂和PD-1途径抑制剂。
49.用于治疗有需要的人类患者中恶性肿瘤的方法，包括：
(a)鉴定患者为患有LAG-3阳性恶性肿瘤；并且
(b)向患者施用治疗有效量的LAG-3抑制剂。
50.用于治疗有需要的人类患者中恶性肿瘤的方法，包括：
(a)鉴定患者为患有LAG-3阳性恶性肿瘤；并且
(b)向患者施用治疗有效量的PD-1途径抑制剂。
51.用于治疗有需要的人类患者中恶性肿瘤的方法，包括：
(a)鉴定患者为患有LAG-3阳性恶性肿瘤；并且
(b)向患者施用治疗有效量的抗-CTLA-4抗体。
52.用于治疗有需要的人类患者中恶性肿瘤的方法，包括：
(a)鉴定患者为患有LAG-3阳性恶性肿瘤；并且
(b)向患者施用治疗有效量的PD-1途径抑制剂和免疫检查点抑制剂。
53.根据权利要求48至52中任一项所述的方法，还包括鉴定患者为患有LAG-3阳性、PD-L1阳性恶性肿瘤。
54.根据权利要求48至52中任一项所述的方法，还包括鉴定患者为患有LAG-3阳性、PD-L1阴性恶性肿瘤。
55.用于延长罹患恶性肿瘤的人类患者中无进展生存期超过12个月的方法，包括向患者施用LAG-3抑制剂和PD-1途径抑制剂，其中在施用之前，鉴定患者为患有LAG-3阳性恶性肿瘤并且其中患者展示无进展生存超过12个月。
56.用于延长罹患恶性肿瘤的人类患者中无进展生存期超过12个月的方法，包括向患者施用LAG-3抑制剂，其中在施用之前，鉴定患者为患有LAG-3阳性恶性肿瘤并且其中患者展示无进展生存超过12个月。
57.用于延长罹患恶性肿瘤的人类患者中无进展生存期超过12个月的方法，包括向患者施用PD-1途径抑制剂，其中在施用之前，鉴定患者为患有LAG-3阳性恶性肿瘤并且其中患者展示无进展生存超过12个月。
58.用于延长罹患恶性肿瘤的人类患者中无进展生存期超过12个月的方法，包括向患者施用抗-CTLA-4抗体，其中在施用之前，鉴定患者为患有LAG-3阳性恶性肿瘤并且其中患者展示无进展生存超过12个月。
59.用于延长罹患恶性肿瘤的人类患者中无进展生存期超过12个月的方法，包括向患者施用PD-1途径抑制剂和免疫检查点抑制剂，其中在施用之前，鉴定患者为患有LAG-3阳性恶性肿瘤并且其中患者展示无进展生存超过12个月。
60.根据权利要求55至59中任一项所述的方法，其中在施用之前，鉴定患者为患有LAG-3阳性、PD-L1阳性恶性肿瘤。
61.根据权利要求55至59中任一项所述的方法，其中在施用之前，鉴定患者为患有LAG-3阳性、PD-L1阴性恶性肿瘤。
62.根据权利要求55至61中任一项所述的方法，其中在施用后，延长患者的无进展生存超过约13个月、约14个月、约15个月、约16个月、约17个月、约18个月、约2年、约3年、约4年、约5年、约6年、约7年、约8年、约9年或约10年。
63.根据权利要求62所述的方法，其中延长患者的无进展生存期超过14个月。
64.用于减少罹患恶性肿瘤的人类患者中肿瘤大小至少10％的方法，包括向患者施用治疗有效量的LAG-3抑制剂和PD-1途径抑制剂，其中在施用之前，鉴定患者为患有LAG-3阳性恶性肿瘤并且其中与施用之前的肿瘤大小相比，施用减少肿瘤大小至少约10％、约20％、约30％、约40％、约50％、约60％、约70％、约80％、约90％或100％。
65.用于减少罹患恶性肿瘤的人类患者中肿瘤大小至少10％的方法，包括向患者施用治疗有效量的LAG-3抑制剂，其中在施用之前，鉴定患者为患有LAG-3阳性恶性肿瘤并且其中与施用之前的肿瘤大小相比，施用减少肿瘤大小至少约10％、约20％、约30％、约40％、约50％、约60％、约70％、约80％、约90％或100％。
66.用于减少罹患恶性肿瘤的人类患者中肿瘤大小至少达10％的方法，包括向患者施用治疗有效量的PD-1途径抑制剂，其中在施用之前，鉴定患者为患有LAG-3阳性恶性肿瘤并且其中与施用之前的肿瘤大小相比，施用减少肿瘤大小至少约10％、约20％、约30％、约40％、约50％、约60％、约70％、约80％、约90％或100％。
67.用于减少罹患恶性肿瘤的人类患者中肿瘤大小至少10％的方法，包括向患者施用治疗有效量的抗-CTLA-4抗体，其中在施用之前，鉴定患者为患有LAG-3阳性恶性肿瘤并且其中与施用之前的肿瘤大小相比，施用减少肿瘤大小至少约10％、约20％、约30％、约40％、约50％、约60％、约70％、约80％、约90％或100％。
68.用于减少罹患恶性肿瘤的人类患者中肿瘤大小至少10％的方法，包括向患者施用治疗有效量的PD-1途径抑制剂和免疫检查点抑制剂，其中在施用之前，鉴定患者为患有LAG-3阳性恶性肿瘤并且其中与施用之前的肿瘤大小相比，施用减少肿瘤大小至少约10％、约20％、约30％、约40％、约50％、约60％、约70％、约80％、约90％或100％。
69.根据权利要求64至68中任一项所述的方法，其中在施用之前，鉴定患者为患有LAG-3阳性、PD-L1阳性恶性肿瘤。
70.根据权利要求64至68中任一项所述的方法，其中在施用之前，鉴定患者为患有LAG-3阳性、PD-L1阴性恶性肿瘤。
71.根据权利要求55至70中任一项所述的方法，还包括在施用之前，鉴定患者为患有LAG-3阳性恶性肿瘤。
72.根据权利要求55至71中任一项所述的方法，还包括在施用之前，鉴定患者为患有LAG-3阳性、PD-L1阳性恶性肿瘤。
73.根据权利要求55至71中任一项所述的方法，还包括在施用之前，鉴定患者为患有LAG-3阳性、PD-L1阴性恶性肿瘤。
74.根据权利要求55至73中任一项所述的方法，其中患者经历(i)无进展生存延长超过12个月，(ii)与施用之前的肿瘤大小相比，肿瘤大小减少至少约10％、约20％、约30％、约40％或约50％或(iii)这两者。
75.用于增加其中每位均罹患恶性肿瘤的人类患者群体中癌症治疗的客观反应率到高于约50％的方法，包括向患者施用治疗有效量的LAG-3抑制剂和PD-1途径抑制剂，其中在施用之前，鉴定每位患者为患有LAG-3阳性恶性肿瘤并且其中客观反应率高于约55％、约60％、约65％、约70％或约75％。
76.用于增加其中每位均罹患恶性肿瘤的人类患者群体中癌症治疗的客观反应率到高于约50％的方法，包括向患者施用治疗有效量的LAG-3抑制剂，其中在施用之前，鉴定每位患者为患有LAG-3阳性恶性肿瘤并且其中客观反应率高于约55％、约60％、约65％、约70％或约75％。
77.用于增加其中每位均罹患恶性肿瘤的人类患者群体中癌症治疗的客观反应率到高于约50％的方法，包括向患者施用治疗有效量的PD-1途径抑制剂，其中在施用之前，鉴定每位患者为患有LAG-3阳性恶性肿瘤并且其中客观反应率高于约55％、约60％、约65％、约70％或约75％。
78.用于增加其中每位均罹患恶性肿瘤的人类患者群体中癌症治疗的客观反应率到高于约50％的方法，包括向患者施用治疗有效量的抗-CTLA-4抗体，其中在施用之前，鉴定每位患者为患有LAG-3阳性恶性肿瘤并且其中客观反应率高于约55％、约60％、约65％、约70％或约75％。
79.用于增加其中每位均罹患恶性肿瘤的人类患者群体中癌症治疗的客观反应率到高于约50％的方法，包括向患者施用治疗有效量的PD-1途径抑制剂和免疫检查点抑制剂，其中在施用之前，鉴定每位患者为患有LAG-3阳性恶性肿瘤并且其中客观反应率高于约55％、约60％、约65％、约70％或约75％。
80.用于增加其中每位均罹患恶性肿瘤的人类患者群体中癌症治疗的疾病控制率到高于约50％的方法，包括向患者施用治疗有效量的LAG-3抑制剂和PD-1途径抑制剂，其中在施用之前，鉴定每位患者为患有LAG-3阳性恶性肿瘤并且其中客观反应率高于约55％、约60％、约65％、约70％或约75％。
81.用于增加其中每位均罹患恶性肿瘤的人类患者群体中癌症治疗的疾病控制率到高于约50％的方法，包括向患者施用治疗有效量的LAG-3抑制剂，其中在施用之前，鉴定每位患者为患有LAG-3阳性恶性肿瘤并且其中客观反应率高于约55％、约60％、约65％、约70％或约75％。
82.用于增加其中每位均罹患恶性肿瘤的人类患者群体中癌症治疗的疾病控制率到高于约50％的方法，包括向患者施用治疗有效量的PD-1途径抑制剂，其中在施用之前，鉴定每位患者为患有LAG-3阳性恶性肿瘤并且其中客观反应率高于约55％、约60％、约65％、约70％或约75％。
83.用于增加其中每位均罹患恶性肿瘤的人类患者群体中癌症治疗的疾病控制率到高于约50％的方法，包括向患者施用治疗有效量的抗-CTLA-4抗体，其中在施用之前，鉴定每位患者为患有LAG-3阳性恶性肿瘤并且其中客观反应率高于约55％、约60％、约65％、约70％或约75％。
84.用于增加其中每位均罹患恶性肿瘤的人类患者群体中癌症治疗的疾病控制率到高于约50％的方法，包括向患者施用治疗有效量的PD-1途径抑制剂和免疫检查点抑制剂，其中在施用之前，鉴定每位患者为患有LAG-3阳性恶性肿瘤并且其中客观反应率高于约55％、约60％、约65％、约70％或约75％。
85.根据权利要求75至84中任一项所述的方法，其中在施用之前，鉴定每位患者为患有LAG-3阳性PD-L1阳性恶性肿瘤。
86.根据权利要求75至84中任一项所述的方法，其中在施用之前，鉴定每位患者为患有LAG-3阳性PD-L1阴性恶性肿瘤。
87.根据权利要求75至86中任一项所述的方法，其中中位反应持续时间是≥3个月、≥6个月、≥12个月或≥18个月。
88.根据权利要求75至87中任一项所述的方法，还包括在施用之前，鉴定患者群体的每位患者为患有LAG-3阳性恶性肿瘤。
89.根据权利要求75至88中任一项所述的方法，还包括在施用之前，鉴定患者群体的每位患者为患有LAG-3阳性PD-L1阳性恶性肿瘤。
90.根据权利要求75至88中任一项所述的方法，还包括在施用之前，鉴定患者群体的每位患者为患有LAG-3阳性PD-L1阴性恶性肿瘤。
91.根据权利要求75至90中任一项所述的方法，其中患者群体的每位患者进一步表征为(i)无进展生存延长超过12个月，(ii)与施用之前的肿瘤大小相比，肿瘤大小减少至少约10％、约20％、约30％、约40％或约50％或(iii)这两者。
92.根据权利要求75至91中任一项所述的方法，其中患者群体包含至少约100、200、300、400、500、600、700、800、900或1000名患有LAG-3阳性恶性肿瘤的患者。
93.用于选择适于联合疗法的人类患者的方法，包括：
(a)鉴定患者为患有LAG-3阳性恶性肿瘤；并且
(b)医嘱医疗保健提供者向患者施用治疗有效量的LAG-3抑制剂和PD-1途径抑制剂。
94.用于选择适于联合疗法的人类患者的方法，包括：
(a)鉴定患者为患有LAG-3阳性恶性肿瘤；并且
(b)医嘱医疗保健提供者向患者施用治疗有效量的LAG-3抑制剂。
95.用于选择适于联合疗法的人类患者的方法，包括：
(a)鉴定患者为患有LAG-3阳性恶性肿瘤；并且
(b)医嘱医疗保健提供者向患者施用治疗有效量的PD-1途径抑制剂。
96.用于选择适于联合疗法的人类患者的方法，包括：
(a)鉴定患者为患有LAG-3阳性恶性肿瘤；并且
(b)医嘱医疗保健提供者向患者施用治疗有效量的抗-CTLA-4抗体。
97.用于选择适于联合疗法的人类患者的方法，包括：
(a)鉴定患者为患有LAG-3阳性恶性肿瘤；并且
(b)医嘱医疗保健提供者向患者施用治疗有效量的PD-1途径抑制剂和免疫检查点抑制剂。
98.根据权利要求93至97中任一项所述的方法，还包括鉴定患者为患有LAG-3阳性、PD-L1阳性恶性肿瘤。
99.根据权利要求93至97中任一项所述的方法，还包括鉴定患者为患有LAG-3阳性、PD-L1阴性恶性肿瘤。
100.根据权利要求93至99中任一项所述的方法，其中施用治疗了恶性肿瘤。
101.根据权利要求93至100中任一项所述的方法，其中鉴定患者为患有LAG-3阳性恶性肿瘤包括确定恶性肿瘤中的LAG-3表达。
102.根据权利要求93至101中任一项所述的方法，其中鉴定患者为患有LAG-3阳性PD-L1阳性恶性肿瘤包括确定恶性肿瘤中的PD-L1表达。
103.根据权利要求93至101中任一项所述的方法，其中鉴定患者为患有LAG-3阳性PD-L1阴性恶性肿瘤包括确定恶性肿瘤中的PD-L1表达。
104.根据权利要求93至103中任一项所述的方法，其中通过查看能够确定LAG-3表达的测定法的结果，确定LAG-3表达。
105.根据权利要求93至103中任一项所述的方法，其中通过查看能够检测LAG-3表达的免疫组织化学测定的结果，确定LAG-3表达。
106.根据权利要求93至105中任一项所述的方法，其中通过查看能够确定PD-L1表达的测定法的结果，确定PD-L1表达。
107.根据权利要求93至105中任一项所述的方法，其中通过查看能够检测PD-L1表达的免疫组织化学测定的结果，确定PD-L1表达。
108.根据权利要求1至107中任一项所述的方法，其中LAG-3阳性肿瘤包含至少约1％、至少约2％、至少约3％、至少约4％、至少约5％、至少约7％、至少约10％、至少约15％、至少约20％、至少约25％、至少约30％、至少约40％、至少约50％、至少约60％、至少约70％、至少约80％、至少约90％或100％表达LAG-3的细胞。
109.根据权利要求1至107中任一项所述的方法，其中LAG-3阳性肿瘤包含至少约1％表达LAG-3的细胞。
110.根据权利要求1至107中任一项所述的方法，其中LAG-3阳性肿瘤包含至少约5％表达LAG-3的细胞。
111.根据权利要求108至110中任一项所述的方法，其中表达LAG-3的细胞包括肿瘤浸润型淋巴细胞。
112.根据权利要求中任一项所述的方法109-110，其中表达LAG-3的细胞是总体数目的细胞。
113.根据权利要求中任一项所述的方法109-112，其中细胞在细胞表面上表达LAG-3。
114.根据权利要求1至113中任一项所述的方法，其中恶性肿瘤选自肝癌、骨癌、胰腺癌、皮肤癌、口腔癌、头或颈癌、乳腺癌、肺癌(包括小细胞和非小细胞肺癌)、皮肤或眼内恶性黑素瘤、肾癌、子宫癌、卵巢癌、结直肠癌、结肠癌、直肠癌、肛区癌、胃癌、睾丸癌、子宫癌、输卵管癌、子宫内膜癌、子宫颈癌、阴道癌、外阴癌、非霍奇金淋巴瘤、食道癌、小肠癌、内分泌系统癌、甲状腺癌、甲状旁腺癌、肾上腺癌、软组织肉瘤、尿道癌、阴茎癌、儿童癌、淋巴细胞淋巴瘤、膀胱癌、肾或输尿管癌、肾盂癌、中枢神经系统(CNS)肿瘤、原发性CNS淋巴瘤、肿瘤血管生成、脊髓轴肿瘤、脑干胶质瘤、垂体腺瘤、Kaposi肉瘤、表皮样癌、鳞状细胞癌、环境所致癌(包括石棉诱导的那些癌症)、血液学恶性病，例如包括多发性骨髓瘤、B细胞淋巴瘤、霍奇金淋巴瘤/原发性纵隔B细胞淋巴瘤、非霍奇金淋巴瘤、急性髓样淋巴瘤、慢性髓性白血病、慢性淋巴样白血病、滤泡淋巴瘤、弥漫性大B细胞淋巴瘤、Burkitt淋巴瘤、免疫母细胞大细胞淋巴瘤、前体B淋巴母细胞淋巴瘤、套细胞淋巴瘤、急性淋巴母细胞性白血病、蕈样肉芽肿病、退行性大细胞淋巴瘤、T细胞淋巴瘤和前体T-淋巴母细胞淋巴瘤及其任意组合。
115.根据权利要求1至113中任一项所述的方法，其中恶性肿瘤选自黑素瘤、非小细胞肺癌(NSCLC)、人乳头瘤病毒(HPV)相关的肿瘤和胃腺癌。
116.根据权利要求1至113中任一项所述的方法，其中恶性肿瘤是非小细胞肺癌(NSCLC)、病毒相关的癌相关肿瘤或胃腺癌。
117.根据权利要求1至113中任一项所述的方法，其中恶性肿瘤是黑素瘤、胃癌、胃食管结合部癌、非小细胞肺癌、膀胱癌、头颈鳞状细胞癌或肾细胞癌。
118.根据权利要求1至113中任一项所述的方法，其中恶性肿瘤是肺癌、黑素瘤、头颈鳞状细胞癌、肾癌、胃癌或肝细胞癌。
119.根据权利要求1至113中任一项所述的方法，其中LAG-3阳性恶性肿瘤是包含约1％或更多表达LAG-3的细胞的黑素瘤肿瘤。
120.根据权利要求1至113中任一项所述的方法，其中LAG-3阳性恶性肿瘤是包含约1％或更多表达LAG-3的细胞的胃癌肿瘤。
121.根据权利要求1至120中任一项所述的方法，其中恶性肿瘤抵抗免疫检查点抑制剂治疗。
122.根据权利要求1至121中任一项所述的方法，其中恶性肿瘤抵抗用抗-PD-1抗体治疗。
123.根据权利要求1至122中任一项所述的方法，其中恶性肿瘤抵抗用抗PD-L1抗体治疗。
124.用于治疗人类患者中黑素瘤的方法，包括：
(a)鉴定患者为患有LAG-3阳性黑素瘤；并且
(b)向患者施用治疗有效量的LAG-3抑制剂和PD-1途径抑制剂。
125.根据权利要求124所述的方法，其中鉴定患者为患有LAG-3阳性黑素瘤包括确定黑素瘤肿瘤中的LAG-3表达。
126.根据权利要求125所述的方法，其中通过查看能够确定LAG-3表达的测定法的结果，确定LAG-3表达。
127.根据权利要求125所述的方法，其中通过能够检测LAG-3表达的免疫组织化学测定确定LAG-3表达。
128.根据权利要求124至127中任一项所述的方法，还包括鉴定患者为患有LAG-3阳性PD-L1阳性恶性肿瘤。
129.根据权利要求124至127中任一项所述的方法，还包括鉴定患者为患有LAG-3阳性PD-L1阴性恶性肿瘤。
130.用于治疗有需要的人类患者中黑素瘤的方法，包括向患者施用治疗有效量的LAG-3抑制剂和PD-1途径抑制剂，其中在施用之前，鉴定患者为患有LAG-3阳性黑素瘤。
131.用于延长罹患黑素瘤的人类患者中无进展生存期到超过12个月的方法，包括向患者施用LAG-3抑制剂和PD-1途径抑制剂，其中在施用之前，鉴定患者为患有LAG-3阳性黑素瘤并且其中患者展示无进展生存超过12个月。
132.根据权利要求130或权利要求131所述的方法，其中在施用之前，鉴定患者为患有LAG-3阳性、PD-L1阳性黑素瘤。
133.根据权利要求130或权利要求131所述的方法，其中在施用之前，鉴定患者为患有LAG-3阳性、PD-L1阴性黑素瘤。
134.用于增加其中每位罹患黑素瘤的人类患者群体中癌症治疗的客观反应率到高于15％的方法，包括向患者施用治疗有效量的LAG-3抑制剂和PD-1途径抑制剂，其中在施用之前，鉴定每位患者为患有LAG-3阳性黑素瘤并且其中客观反应率高于15％。
135.用于增加其中每位罹患黑素瘤的人类患者群体中癌症治疗的疾病控制率到高于70％的方法，包括向患者施用治疗有效量的LAG-3抑制剂和PD-1途径抑制剂，其中在施用之前，鉴定每位患者为患有LAG-3阳性黑素瘤并且其中客观反应率高于70％。
136.根据权利要求134或权利要求135所述的方法，还包括在施用之前，鉴定患者群体的每位患者为患有LAG-3阳性黑素瘤。
137.根据权利要求134至136中任一项所述的方法，其中中位反应持续时间是≥3个月、≥6个月、≥12个月或≥18个月。
138.根据权利要求134至137中任一项所述的方法，其中在施用之前，鉴定每位患者为患有LAG-3阳性、PD-L1阳性黑素瘤。
139.根据权利要求134至137中任一项所述的方法，其中在施用之前，鉴定每位患者为患有LAG-3阳性、PD-L1阴性黑素瘤。
140.根据权利要求124至139中任一项所述的方法，其中黑素瘤抵抗免疫检查点抑制剂治疗。
141.根据权利要求124至140中任一项所述的方法，其中黑素瘤抵抗用抗-PD-1抗体或抗PD-L1抗体治疗。
142.根据权利要求1至141中任一项所述的方法，其中确定LAG-3和/或PD-L1表达水平包括了提供从患者获得的供试组织样品，供试组织样品包含肿瘤细胞和/或肿瘤浸润型免疫细胞。
143.根据权利要求142所述的方法，其中供试组织样品是肿瘤活检。
144.根据权利要求142或权利要求143所述的方法，其中供试组织样品是福尔马林固定石蜡包埋(FFPE)的样品。
145.根据权利要求1至144中任一项所述的方法，其中确定包括检测供试组织样品中的LAG-3和/或PD-L1蛋白或RNA表达。
146.根据权利要求145所述的方法，其中通过分别能够检测供试组织样品中LAG-3和/或PD-L1蛋白水平的测定法检测LAG-3和/或PD-L1表达。
147.根据权利要求142所述的方法，其中通过免疫组织化学测定检测LAG-3和/或PD-L1表达。
148.根据权利要求147所述的方法，其中免疫组织化学测定是单重分析。
149.根据权利要求147所述的方法，其中免疫组织化学测定是多重测定。
150.根据权利要求147至149中任一项所述的方法，其中免疫组织化学测定包括使肿瘤样品与17B4、SP346、11E3、874501或EPR4392(2)抗人LAG-3单克隆抗体接触。
151.根据权利要求147至149中任一项所述的方法，其中免疫组织化学测定包括使肿瘤样品与包含重链可变区和轻链可变区的抗-LAG-3抗体接触，所述重链可变区和轻链可变区分别包含SEQ ID NOs:3和5中所述的序列。
152.根据权利要求145至151中任一项所述的方法，其中免疫组织化学测定使用黑色或棕色生色原。
153.根据权利要求145至151中任一项所述的方法，其中免疫组织化学测定使用红色生色原。
154.根据权利要求145至151中任一项所述的方法，其中免疫组织化学测定使用蓝色生色原。
155.根据权利要求145至151中任一项所述的方法，其中免疫组织化学测定使用绿色生色原。
156.根据权利要求145至151中任一项所述的方法，其中免疫组织化学测定使用紫生色原。
157.根据权利要求145至156中任一项所述的方法，其中在低放大率下对免疫组织化学测定评分。
158.根据权利要求145所述的方法，其中低放大率是约20倍。
159.根据权利要求145至156中任一项所述的方法，其中在高放大率下对免疫组织化学测定评分。
160.根据权利要求159所述的方法，其中高放大率是约40倍。
161.根据权利要求145至160中任一项所述的方法，其中通过图像分析软件对免疫组织化学测定评分。
162.根据权利要求145至160中任一项所述的方法，其中依据病理学家目视免疫分数对免疫组织化学测定评分。
163.根据权利要求145至160中任一项所述的方法，其中手工对免疫组织化学测定评分。
164.根据权利要求145至163中任一项所述的方法，其中对免疫组织化学测定评分包括评估供试组织样品中表达LAG-3的细胞的比例和/或评估供试组织样品中表达PD-L1的细胞的比例。
165.根据权利要求145至163中任一项所述的方法，其中对免疫组织化学测定评分包括评估供试组织样品中表达LAG-3的肿瘤细胞的比例和/或评估供试组织样品中表达PD-L1的肿瘤细胞的比例。
166.根据权利要求145至163中任一项所述的方法，其中对免疫组织化学测定评分包括评估供试组织样品中表达LAG-3的免疫细胞的比例和/或评估供试组织样品中表达PD-L1的免疫细胞的比例。
167.根据权利要求145至163中任一项所述的方法，其中对免疫组织化学测定评分包括评估供试组织样品中表达LAG-3的T细胞的比例和/或评估供试组织样品中表达PD-L1的T细胞的比例。
168.根据权利要求145至163中任一项所述的方法，其中对免疫组织化学测定评分包括评估供试组织样品中表达LAG-3的CD8+T细胞的比例和/或评估供试组织样品中表达PD-L1的CD8+T细胞的比例。
169.根据权利要求145至163中任一项所述的方法，其中对免疫组织化学测定评分包括评估供试组织样品中表达LAG-3的CD4+T细胞的比例和/或评估供试组织样品中表达PD-L1的CD4+T细胞的比例。
170.根据权利要求145至163中任一项所述的方法，其中对免疫组织化学测定评分包括评估供试组织样品中表达LAG-3的FOXP3+T细胞的比例和/或评估供试组织样品中表达PD-L1的FOXP3+T细胞的比例。
171.根据权利要求145至170中任一项所述的方法，其中将具有部分膜/胞质LAG-3定位的细胞评定为表达LAG-3的细胞。
172.根据权利要求145至170中任一项所述的方法，其中将具有点样LAG-3定位的细胞评定为表达LAG-3的细胞。
173.根据权利要求145至170中任一项所述的方法，其中将具有完整膜/胞质LAG-3定位的细胞评定为表达LAG-3的细胞。
174.根据权利要求145至170中任一项所述的方法，其中将具有任何LAG-3定位模式的细胞评定为表达LAG-3的细胞。
175.根据权利要求145至174中任一项所述的方法，其中免疫组织化学测定是还包括检测肿瘤细胞的MHC II类表达的多重测定。
176.根据权利要求145至175中任一项所述的方法，其中对免疫组织化学测定评分包括评估供试组织样品中表达MHC II类的细胞的比例。
177.根据权利要求145至175中任一项所述的方法，其中对免疫组织化学测定评分包括评估供试组织样品中表达MHC II的非免疫细胞的比例。
178.根据权利要求144所述的方法，其中通过流式细胞术检测LAG-3和/或PD-L1蛋白表达。
179.根据权利要求178所述的方法，其中从患者获得的供试组织样品包含肿瘤浸润型免疫细胞。
180.根据权利要求179所述的方法，其中恶性肿瘤是血液恶性肿瘤并且组织样品包含循环型淋巴细胞。
181.根据权利要求178至180中任一项所述的方法，其中流式细胞术是多重测定。
182.根据权利要求181所述的方法，其中流式细胞术包括检测标记物表达，所述标记物包括LAG-3、PD-L1、CD4、CD8、FOXP3及其任意组合。
183.根据权利要求182所述的方法，其中对流式细胞术评分包括评估供试组织样品中表达LAG-3的T细胞的比例。
184.根据权利要求182所述的方法，其中对流式细胞术评分包括评估供试组织样品中表达LAG-3的CD8+T细胞的比例。
185.根据权利要求182所述的方法，其中对流式细胞术评分包括评估供试组织样品中表达LAG-3的CD4+T细胞的比例。
186.根据权利要求182所述的方法，其中对流式细胞术评分包括评估供试组织样品中表达LAG-3的FOXP3+T细胞的比例。
187.根据权利要求143所述的方法，其中通过分别能够检测肿瘤样品中LAG-3和/或PD-L1RNA水平的测定法检测LAG-3和/或PD-L1表达。
188.根据权利要求187所述的方法，其中通过基于RT-PCR的测定法检测LAG-3和/或PD-L1表达。
189.根据权利要求134所述的方法，其中对基于RT-PCR的测定法评分包括相对于预定水平，评估供试组织样品中LAG-3和/或PD-L1 RNA表达的水平。
190.根据权利要求1至189中任一项所述的方法，其中LAG-3抑制剂是抗-LAG-3抗体或其抗原结合片段。
191.根据权利要求190所述的方法，其中抗-LAG-3抗体是双特异性抗体。
192.根据权利要求190或191所述的方法，其中抗-LAG-3抗体或其抗原结合片段包含(a)重链可变区CDR1，其包含在SEQ ID NO:7中所述的序列；(b)重链可变区CDR2，其包含在SEQ ID NO:8中所述的序列；(c)重链可变区CDR3，其包含在SEQ ID NO:9中所述的序列；(d)轻链可变区CDR1，其包含在SEQ ID NO:10中所述的序列；(e)轻链可变区CDR2，其包含在SEQID NO:11中所述的序列；和(f)轻链可变区CDR3，其包含在SEQ ID NO:12中所述的序列。
193.根据权利要求190至192中任一项所述的方法，其中抗-LAG-3抗体或其抗原结合片段包含重链可变区和轻链可变区，所述重链可变区和轻链可变区分别包含SEQ ID NOs:3和5中所述的序列。
194.根据权利要求190所述的方法，其中抗-LAG-3抗体是MK-4280(28G-10)、REGN3767、GSK2837781、IMP731(H5L7BW)、BAP050、IMP-701(LAG-525)、IMP321、FS-118、Sym022、TSR-033、MGD013、FS118或GSK2831781。
195.根据权利要求1至194中任一项所述的方法，其中PD-1途径抑制剂是抗-PD-1抗体或其抗原结合片段。
196.根据权利要求195所述的方法，其中抗-PD-1抗体或其抗原结合片段包含(a)重链可变区CDR1，其包含在SEQ ID NO:23中所述的序列；(b)重链可变区CDR2，其包含在SEQ IDNO:24中所述的序列；(c)重链可变区CDR3，其包含在SEQ ID NO:25中所述的序列；(d)轻链可变区CDR1，其包含在SEQ ID NO:26中所述的序列；(e)轻链可变区CDR2，其包含在SEQ IDNO:27中所述的序列；和(f)轻链可变区CDR3，其包含在SEQ ID NO:28中所述的序列。
197.根据权利要求196所述的方法，其中抗-PD-1抗体或其抗原结合片段包含重链可变区和轻链可变区，所述重链可变区和轻链可变区分别包含SEQ ID NOs:19和21中所述的序列。
198.根据权利要求197所述的方法，其中抗-PD-1抗体或其抗原结合片段包含重链和轻链，所述重链和轻链分别包含SEQ ID NOs:17和18中所述的序列。
199.根据权利要求195所述的方法，其中抗-PD-1抗体是派姆单抗(pembrolizumab)(KEYTRUDA；MK-3475)、pidilizumab(CT-011)或纳武单抗(nivolumab)(OPDIVO；BMS-936558)。
200.根据权利要求1至194中任一项所述的方法，其中PD-1途径抑制剂是抗PD-L1抗体或其抗原结合片段。
201.根据权利要求200所述的方法，其中抗PD-L1抗体是阿特朱单抗(atezolizumab)(Tecentriq或RG7446)、德瓦鲁单抗(durvalumab)(Imfinzi或MEDI4736)、阿维鲁单抗(avelumab)(Bavencio)或BMS-936559。
202.根据权利要求1至194中任一项所述的方法，其中PD-1途径抑制剂是抗PD-L2抗体或其抗原结合片段。
203.根据权利要求1至194中任一项所述的方法，其中抗-CTLA-4抗体是伊匹木单抗或其抗原结合片段。
204.根据权利要求1至194中任一项所述的方法，其中免疫检查点抑制剂是CTLA-4拮抗剂、CD80拮抗剂、CD86拮抗剂、Tim-3拮抗剂、TIGIT拮抗剂、CD20拮抗剂、CD96拮抗剂、IDO1拮抗剂、STING拮抗剂、GARP拮抗剂、CD40拮抗剂、A2aR拮抗剂、CEACAM1(CD66a)拮抗剂、CEA拮抗剂、CD47拮抗剂、PVRIG拮抗剂、TDO拮抗剂、VISTA拮抗剂或KIR拮抗剂。
205.根据权利要求190至204中任一项所述的方法，其中所述方法包括至少一个施用周期，其中所述周期是八周期间，其中对于至少一个周期的每者，将四剂抗-LAG-3抗体按3、20、80、160或240mg的剂量施用。
206.根据权利要求190至205中任一项所述的方法，其中所述方法包括至少一个施用周期，其中所述周期是八周期间，其中对于至少一个周期的每者，将四剂抗-PD-1抗体按80或240mg的剂量施用。
207.根据权利要求190至205中任一项所述的方法，其中所述方法包括至少一个施用周期，其中所述周期是八周期间，其中对于至少一个周期的每者，将四剂抗PD-L1抗体按3、20、80、160或240mg的剂量施用。
208.根据权利要求190至207中任一项所述的方法，其中所述方法包括至少一个施用周期，其中所述周期是八周期间，其中对于至少一个周期的每者，将四剂抗-CTLA-4抗体按3、20、80、160或240mg的剂量施用。
209.根据权利要求190至208中任一项所述的方法，其中所述方法包括至少一个施用周期，其中所述周期是八周期间，其中对于至少一个周期的每者，将四剂抗-LAG-3抗体按3、20、80、160或240mg的剂量施用并且将四剂抗-PD-1抗体是按80或240mg的剂量施用。
210.根据权利要求190至209中任一项所述的方法，其中将抗-LAG-3抗体和抗-PD-1抗体按以下剂量施用：(a)3mg抗-LAG-3抗体和80mg抗-PD-1抗体；(b)3mg抗-LAG-3抗体和240mg抗-PD-1抗体；(c)20mg抗-LAG-3抗体和240mg抗-PD-1抗体；(d)80mg抗-LAG-3抗体和160mg抗-PD-1抗体；(e)80mg抗-LAG-3抗体和240mg抗-PD-1抗体；(f)160mg抗-LAG-3抗体和240mg抗-PD-1抗体，或(g)240mg抗-LAG-3抗体和240mg抗-PD-1抗体。
211.根据权利要求210所述的方法，其中将抗-LAG-3抗体和抗-PD-1抗体按80mg抗-LAG-3抗体和160mg抗-PD-1抗体的剂量施用。
212.根据权利要求210所述的方法，其中将抗-LAG-3抗体和抗-PD-1抗体按80mg抗-LAG-3抗体和240mg抗-PD-1抗体的剂量施用。
213.根据权利要求210所述的方法，其中将抗-LAG-3抗体和抗-PD-1抗体按160mg抗-LAG-3抗体和240mg抗-PD-1抗体的剂量施用。
214.根据权利要求190至213中任一项所述的方法，其中配制抗PD-1和抗-LAG-3抗体或其抗原结合片段供静脉内施用。
215.根据权利要求190至214中任一项所述的方法，其中将抗PD-1和抗-LAG-3抗体或其抗原结合片段配制在一起。
216.根据权利要求190至214中任一项所述的方法，其中将抗PD-1和抗-LAG-3抗体或其抗原结合片段分开配制。
217.根据权利要求205至216中任一项所述的方法，其中治疗由多达12个周期组成。
218.根据权利要求205至217中任一项所述的方法，其中将抗-PD-1抗体或其抗原结合片段在每个周期的第1、第15、第29和第43天施用。
219.根据权利要求205至217中任一项所述的方法，其中将抗-LAG-3抗体或其抗原结合片段在每个周期的第1、第15、第29和第43天施用。
220.根据权利要求205至217中任一项所述的方法，其中将抗-CTLA-4抗体或其抗原结合片段在每个周期的第1、第15、第29和第43天施用。
221.根据权利要求205至217中任一项所述的方法，其中在施用抗-LAG-3抗体或其抗原结合片段之前，施用抗-PD-1抗体或其抗原结合片段。
222.根据权利要求190至221中任一项所述的方法，其中在施用抗-PD-1抗体或其抗原结合片段之前约30分钟内，施用抗-LAG-3抗体或其抗原结合片段。
223.根据权利要求190至222中任一项所述的方法，其中在施用抗-LAG-3抗体或其抗原结合片段之后，施用抗-PD-1抗体或其抗原结合片段。
224.根据权利要求190至222中任一项所述的方法，其中在施用抗-LAG-3抗体或其抗原结合片段之前，施用抗-PD-1抗体或其抗原结合片段。
225.根据权利要求190至222中任一项所述的方法，其中将抗-PD-1抗体或其抗原结合片段与抗-LAG-3抗体或其抗原结合片段同时施用。
226.根据权利要求190至225中任一项所述的方法，其中将抗-LAG-3抗体或其抗原结合片段和PD-1途径抑制剂作为一线治疗施用。
227.根据权利要求190至225中任一项所述的方法，其中将抗-LAG-3抗体或其抗原结合片段和PD-1途径抑制剂作为二线治疗施用。
228.根据权利要求190至227中任一项所述的方法，还包括施用至少一种额外的治疗剂。
229.根据权利要求228所述的方法，其中至少一种额外的治疗剂是化疗剂。
230.根据权利要求229所述的方法，其中至少一种额外的治疗剂是免疫检查点抑制剂。
231.根据权利要求1至230中任一项所述的方法，其中方法产生至少一个治疗效果，所述治疗效果选自肿瘤的大小减少、转移性病灶的数目随时间推移减少、完全反应、部分反应和稳定疾病。
232.根据权利要求1至231中任一项所述的方法，其中抗-LAG-3抗体或其抗原结合片段和PD-1途径抑制剂的施用活化患者的T细胞。
233.根据权利要求1至232中任一项所述的方法，其中抗-LAG-3抗体或其抗原结合片段和PD-1途径抑制剂的施用诱导患者的T细胞表达活化标记物。
234.根据权利要求1至233中任一项所述的方法，其中抗-LAG-3抗体或其抗原结合片段的施用导致占据患者的T细胞上至少约10％、至少约20％、至少约30％、至少约40％、至少约50％、至少约60％、至少约70％、至少约80％、至少约90％、至少约95％或约100％的LAG-3受体。
235.根据权利要求234所述的方法，其中T细胞是CD8+T细胞。
236.根据权利要求234所述的方法，其中T细胞是肿瘤浸润型T细胞。
237.根据权利要求219至224中任一项所述的方法，其中PD-1途径抑制剂包含抗-PD-1抗体或其抗原结合片段。
238.用于治疗罹患恶性肿瘤的患者的试剂盒，所述试剂盒包含：
(a)剂量范围从约0.1至约10mg/kg体重的抗-LAG-3抗体或其抗原结合片段；
(b)剂量范围从约0.1至约10mg/kg体重的抗-PD-1抗体或其抗原结合片段；和
(c)在根据权利要求1至237中任一项所述的方法中使用抗-LAG-3抗体和抗-PD-1抗体或其抗原结合片段的说明。
239.用于治疗罹患恶性肿瘤的患者的试剂盒，所述试剂盒包含：
(a)剂量范围从约0.1至约10mg/kg体重的抗PD1抗体；
(b)免疫检查点抑制剂的剂量；和
(c)在根据权利要求1至237中任一项所述的方法中使用抗-PD-1抗体或其抗原结合片段和免疫检查点抑制的说明。
240.用于治疗罹患恶性肿瘤的患者的试剂盒，所述试剂盒包含：
(a)剂量范围从约0.1至约10mg/kg体重的抗-LAG-3抗体或其抗原结合片段；和
(b)在根据权利要求1至237中任一项所述的方法中使用抗-LAG-3抗体或其抗原结合片段的说明。
241.用于治疗罹患恶性肿瘤的患者的试剂盒，所述试剂盒包含：
(a)剂量范围从0.1至10mg/kg体重的抗-PD-1抗体或其抗原结合片段；和
(b)在根据权利要求1至237中任一项所述的方法中使用抗-PD-1抗体或其抗原结合片段的说明。
242.鉴定抵抗PD-1拮抗剂治疗的患者的方法，所述方法包括确定LAG-3表达水平，其中相对于PD-1拮抗剂治疗之前的LAG-3表达水平，PD-1拮抗剂治疗后增加的LAG-3表达水平表示患者抵抗PD-1拮抗剂疗法。
243.鉴定面临变得抵抗PD-1拮抗剂治疗的风险的患者的方法，所述方法包括确定LAG-3表达水平，其中相对于PD-1拮抗剂治疗之前的LAG-3表达水平，PD-1拮抗剂治疗后增加的LAG-3表达水平表示患者面临变得抵抗PD-1拮抗剂疗法的风险。
244.鉴定可能对LAG-3疗法有反应的患者的方法，所述方法包括确定患者中的LAG-3表达水平，其中相对于PD-1拮抗剂治疗之前的LAG-3表达水平，PD-1拮抗剂治疗后增加的LAG-3表达水平表示患者可能对LAG-3疗法有反应。
245.选择患者供LAG-3疗法治疗的方法，所述方法包括确定患者中的LAG-3表达水平，其中相对于PD-1拮抗剂治疗之前的LAG-3表达水平，PD-1拮抗剂治疗后增加的LAG-3表达水平表示患者可能对LAG-3疗法有反应。
246.根据权利要求242-245中任一项所述的方法，其中PD-1拮抗剂是PD-1抑制剂。
247.根据权利要求242-245中任一项所述的方法，其中PD-1拮抗剂是PD-1抗体或其抗原结合片段。
248.根据权利要求244-245中任一项所述的方法，其中LAG-3疗法是LAG-3抑制剂。
249.根据权利要求244、245或248中任一项所述的方法，其中LAG-3疗法是抗-LAG-3抗体或其抗原结合片段。
250.根据权利要求244或245中任一项所述的方法，其中LAG-3治疗是联合疗法。
251.根据权利要求250所述的方法，其中LAG-3联合疗法是抗-LAG-3抗体或其抗原结合片段和抗-PD-1抗体或其抗原结合片段的组合。
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