CN110713536A - 可结合sftsv的多肽、其核酸编码序列及应用 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及一种可结合SFTSV的多肽,包括3个互补决定区CDR1‑3,CDR1序列为或包括SEQ ID NO:1所示序列,CDR2序列为或包括SEQ ID NO:2所示序列,CDR3序列为或包括SEQ ID NO:3所示序列之一。本发明针对高致死率但缺乏有效疫苗和特异性抗病毒药物的SFTS进行纳米抗体药物开发和诊断试剂盒研发,通过制备GN蛋白、免疫双峰骆驼、利用噬菌体库展示纳米单抗的平台技术等,筛选到特异性结合GN的纳米抗体VHH,鉴定了其CDR序列,并构建了人源化抗体SNB;同时利用人源化小鼠模型体内评估SNB在治疗SFTSV感染的疗效。本发明为SFTS的临床治疗提供潜在的纳米抗体新药,同时为SFTS的诊断提供相应的检测试剂盒。
Description
优先权申明
本申请要求本申请人于2019年7月23日提交的国际申请号为PCT/CN2019/097350的PCT申请的优先权,通过引用并入本文中。
技术领域
本发明涉及生物医药领域。更特别地,涉及一种可结合SFTSV的多肽,所述的多肽在制备SFTSV检测剂或SFTSV治疗药物中的应用。
背景技术
发热伴血小板减少综合征(Severe fever with thrombocytopenia syndrome,SFTS)是一种由新型布尼亚病毒(Severe fever with thrombocytopenia syndrome virus,SFTSV)引起的急性传染病,主要通过蜱虫叮咬或急性病人的血液、黏膜接触传播,临床主要表现为发热、血小板减少、白细胞减少以及包括胃肠道、肝脏、肾脏在内的多器官功能异常。自2009年首次在湖北和河南报道SFTS以来,我国已有16个省份发布了病例报告,截止2014年的确诊病例数已超过3500例,且近年来发病率不断升高;同时,在韩国、日本、阿拉伯和美国均有SFTS病例报道,提示该病的流行区域正在扩大。目前报道的SFTS死亡率在6.3%-30%之间;而韩国和日本在2016年公布的死亡率分别高达35.4%和50%。然而,临床至今缺乏针对SFTS的特异性治疗药物,只能进行广谱抗病毒治疗和对症下药,这为SFTS的预防及控制带来极大困难。
特异性中和抗体在抗病毒治疗方面有着很好的临床疗效,如呼吸道合胞病毒单抗Palivizumab和狂犬病毒抗血清等。已有研究指出,针对SFTSV表面糖蛋白(GlycoproteinN,GN)的中和抗体对病人生存率起着重要作用。而我们前期的研究结果也显示,血清含抗GN抗体的SFTS病人均康复良好,而血清中不含GN抗体的SFTS病人其死亡率高达66.7%。这些研究提示,靶向GN的中和抗体治疗将是对抗SFTSV行之有效的方法。
1993年,一种来源于骆驼科的新型天然抗体被发现。该抗体天然缺失轻链而只由重链组成,其重链包含两个恒定区(CH2和CH3)、一个铰链区和一个重链可变区(Variableheavy chain domain,VHH,即抗原结合位点),该重链可变区的相对分子质量约为13KDa,仅为常规抗体的1/10,且分子高度和直径均在纳米级别,是目前可获得的最小的功能性抗体片段,因此又被称为纳米单抗(Nanobody,Nb)。因纳米单抗稳定性高(90℃条件下仍不会降解)、亲和力高、与人源抗体同源性超过80%、毒性和免疫原性均较低等特点,最近纳米单抗被广泛用于免疫诊断试剂盒研发、影像学研发以及针对肿瘤、炎症、传染病和神经系统疾病等领域的抗体药物研发。
目前已知抗GN的SFTS中和抗体是2013年通过噬菌体展示SFTS病人抗体库筛选得到的Mab4-5,其IC50为2μg/ml-44.2μg/ml。中和抗体的IC50越低越好,能极大节约抗体的使用量从而节省生产成本,同时也能延长抗体在体内维持有效浓度的时间。我们前期对SFTS病人血清的抗体效价做了检测,发现针对GN蛋白的抗血清仅为100左右的稀释倍数,这提示我们,以低抗体滴度的SFTS病人血清构建抗体库可能限制了高效中和抗体的筛选。因此我们期望通过新的技术手段,获得更为高效稳定的、IC50更低的SFTSV特异性中和抗体。
发明内容
本发明通过用抗原免疫骆驼,获取骆驼源纳米单抗及其VHH,用于诊断和治疗急性感染的SFTS病人。基于这些研究,本发明提供了一种可结合SFTSV的多肽,包括3个互补决定区CDR1-3,CDR1序列为或包括SEQ ID NO:1所示序列,CDR2序列为或包括SEQ ID NO:2所示序列,CDR3序列为或包括SEQ ID NO:3所示序列。
在一个具体实施方案中,所述多肽还包括4个框架区FR1-4,所述FR1-4与所述CDR1-3交错排列。例如,可将FR1-4序列设计为如SEQ ID NO:4-7所示,但本发明的范围不限于此。抗体的特异性识别和结合能力主要由CDR区序列决定,FR序列影响不大,可根据物种来设计,这是本领域公知的。例如,可设计人源、鼠源或骆驼源的FR区序列来连接上述CDR,从而一个可结合SFTSV的多肽或结构域。
在一个优选实施方案中,所述多肽为单克隆抗体。
在一个优选实施方案中,所述多肽为VHH。
在一个优选实施方案中,所述多肽为骆驼源的VHH或人源化的VHH。
本发明还提供了上述多肽在制备SFTSV检测剂或SFTSV治疗药物中的应用。
本发明还提供了上述多肽的核酸编码序列。
在一个实施方案中,所述核酸编码序列为DNA编码序列或RNA编码序列。
在一个具体实施方案中,所述核酸编码序列存在于基因表达框中。
本发明还提供了包含上述核酸编码序列的表达框的表达载体。
在一个优选实施方案中,所述表达载体为病毒载体。
在一个优选实施方案中,所述表达载体为腺相关病毒表达载体(AAV载体)。
本发明还提供了上述核酸编码序列和表达载体在SFTSV治疗药物中的应用。
本发明针对高致死率但缺乏有效疫苗和特异性抗病毒药物的SFTS进行纳米抗体药物开发和诊断试剂盒研发,通过制备GN蛋白、免疫双峰骆驼、利用噬菌体库展示纳米单抗的平台技术等,筛选到特异性结合GN的纳米抗体VHH,鉴定了其CDR序列,并构建了人源化的VHH-huFc1(SNB);同时利用人源化小鼠模型体内评估SNB在治疗SFTSV感染的疗效。本发明为SFTS的临床治疗提供潜在的纳米抗体新药,同时为SFTS的诊断提供相应的检测试剂盒。
附图说明
图1为sGN第3和4次免疫骆驼一周后的抗血清效价检测曲线;
图2为不同稀释度的第4次免疫骆驼一周后的抗血清抑制SFTSV病毒体外感染Vero细胞的曲线,以免疫前的血清为对照;
图3为sGN-VHH噬菌体抗体文库为模板扩增的PCR产物的电泳图;
图4为sGN-VHH噬菌体抗体文库的淘选鉴定,其中,A为噬菌体文库针对sGN蛋白淘选后ELISA检测统计图;B为从第二轮(2nd)和第三轮(3rd)淘选后的噬菌体抗体文库各挑选96个克隆进行噬菌体ELISA检测统计图;
图5为原核表达的VHH抗体的ELISA检测统计图,每个点代表一个克隆,纵坐标为针对sGN的OD450/空白对照的OD450,比值大于5.0定义为阳性;
图6为阳性VHH抗体中和SFTSV病毒感染实验统计图,一个点代表一个克隆,Y轴为针对不同病毒的相对抑制率;
图7为ELISA检测不同纯化浓度的SNB与sGN蛋白的结合,不同的颜色代表不同的克隆号。
图8为在不同浓度的抗体存在的环境下进行病毒感染得到的荧光染色照片,荧光点代表SFTSV病毒,无病毒感染的细胞作为无感染对照(No infection control),不加抗体的病毒感染细胞为感染对照(infection control);
图9为根据图7统计的荧光点得到的抗体对SFTSV病毒抑制率图;
图10为不同小鼠攻毒后的相对抑制率统计图,相对抑制率为1-第9天病毒载量/第6天病毒载量,以人免疫球蛋白为对照(Hu-IgG);
图11为SNB双抗夹心ELISA检测sGN蛋白统计图,其中,分别用SNB01(A)、SNB02(B)和SNB37(C)为检测抗体;D为包被抗体SNB01,检测抗体SNB37的双抗体夹心ELISA检测不同浓度的sGN的OD450统计曲线。
图12为包被抗体SNB01,检测抗体SNB37的双抗体夹心ELISA检测不同浓度的SFTSV病毒的OD450统计曲线。
具体实施方式
1.免疫原的制备
我们依据NCBI网站上HB29 SFTSV的GN蛋白序列和基因序列信息,分析并设计了可有效诱导骆驼产生针对GN蛋白的特异性抗体的多肽sGN,在C端连接His-tag(sGN-his)或兔Fc(sGN-rFc)用于后续纯化及检测。
2.骆驼免疫与抗血清的获得
用250μg sGN-rFc蛋白与250μl弗氏完全佐剂的乳化混合物对双峰骆驼进行初免,在第14天、28天、42天用sGN-rFc蛋白与250μl弗氏不完全佐剂加强免疫3次,第2次和第3次免疫1周后,采血检测抗血清滴度;第4次免疫1周后,采血200ml用于噬菌体抗体库的构建。
抗血清效价通过ELISA检测,用浓度为0.5μg/ml的GN蛋白包被检测板,每孔加入梯度稀释的抗血清或者纯化的抗体100μl(对照为免疫前骆驼血清),37℃孵育1.5h,洗涤2次,每孔加入1:10000稀释的辣根过氧化物酶标记的Goat anti-Llamma IgG(H+L)二抗,37℃孵育1h,洗涤4-6次后,加100μl TMB底物,37℃孵育10min,50μl 0.2M的H2SO4中止反应,测定OD450nm。ELISA检测血清效价规定为在OD450是空白对照的2.1倍以上并且大于0.2的最高稀释倍数。
结果如图1所示,3免和4免的抗血清效价分别为2.19×106和4.61×106。由此可见,该抗原可诱导骆驼产生特异性针对GN蛋白的高滴度抗血清。
为了进一步验证该高滴度的骆驼抗血清是否能有效阻止SFTSV病毒感染,进行病毒感染的中和实验。将不同稀释浓度的抗血清和免疫前血清分别与SFTSV病毒共同孵育60min,随后转移到Vero细胞,48h后通过对sGN蛋白的细胞免疫荧光染色来判断SFTSV的感染。中和实验结果显示,sGN诱导的抗血清抑制90%SFTSV感染的ID90为540倍稀释度以上(图2)。综上所述,sGN诱导了高滴度抗血清,同时该抗血清具有高效抑制SFTSV病毒感染的能力。
3.VHH噬菌体库构建及淘选
收集200ml免疫后骆驼的外周血,利用淋巴细胞分离液(GE Ficoll-Paque Plus)分离获得骆驼的PBMC,根据TRIzol操作手册,提取RNA,并利用oligo(dT)反转为cDNA,通过引物扩增,以及分子克隆等技术,将骆驼的VHH基因克隆至phagemid质粒,转化TG1细菌,得到VHH噬菌体库。为了进一步鉴定sGN-VHH噬菌体库是否构建成功,通过PCR扩增免疫sGN骆驼的VHH目的基因,可以看出目的条带为500bp,大小符合预期(图3),说明该sGN-VHH噬菌体抗体文库里含有VHH基因。挑选50个克隆进行测序,测序结果显示,所测序列没有完全一致的重复序列;比对结果显示,差异序列大多在CDR结合区。经检测,该构建了一个sGN-VHH噬菌体抗体文库的库容为2.0×109,阳性率为100%,序列多样性(Diversity)为100%,有效插入率(In frame rate)大于95%。
在M13KO7辅助噬菌体的帮助下,用VHH-phagemid转化的细菌,进行噬菌体抗体库的复苏,并用PEG/NaCl进行沉淀。将包被有50μg/ml的sGN-His蛋白进行三次富集噬菌体抗体库。将富集的噬菌体,洗脱、转化、涂板、挑取单克隆进行噬菌体与sGN蛋白ELISA的结合鉴定,将结合读值>1.0的克隆进行测序,并克隆至表达载体pVAX1,转染293F细胞表达生产纳米单抗。
淘选后的文库与GN蛋白进行结合检测。噬菌体ELISA结果显示,没有富集前的sGN-VHH噬菌体文库与sGN蛋白的结合读值为0.57,经过一轮、二轮、三轮富集后的噬菌体文库读值分别为0.98、2.2、3.0(图4A)。为了进一步验证富集后的文库中结合sGN-VHH蛋白的阳性噬菌体率,从第2轮和第3轮富集后的文库里各挑选了96个克隆进行单个噬菌体ELISA检测。结果显示,第2轮文库里,24.5%的单个噬菌体克隆为阳性,第3轮文库里67%的噬菌体克隆克隆为阳性,而且结合的平均读值在3.0左右(图4B),通过sGN蛋白淘选成功的富集了高结合力的sGN-VHH噬菌体文库。
4.VHH原核表达文库的构建及VHH表达
对上述二轮和三轮淘选富集后的2nd-sGN-VHH和3rd-sGN-VHH噬菌体抗体文库进行PCR扩增;获取并纯化抗体库中所有VHH的基因片段,将VHH的基因片段克隆至原核表达载体,转化SS320菌株,构建VHH的原核表达抗体库;将原核表达抗体库涂布平板,过夜培养,次日随机挑选单克隆菌落1000个,使用IPTG诱导表达抗体上清,对抗体上清与sGN蛋白进行ELISA结合检测。
结果显示,有细菌上清与sGN蛋白结合,同时不与空白对照结合,sGN结合的读值/空白对照的读值大于5.0(图5)。进一步的实验证实,这142个VHH抗体以及从VHH抗体得到的CDR均可特异性地结合SFTSV病毒。
为了进一步验证该序列是否能很好的抑制SFTSV病毒感染,将122个VHH抗体的细菌上清通过处理后与SFTSV病毒共孵,测试抗体是否能抑制SFTSV病毒感染。中和实验结果显示(图6),有23个抗体能达到50%以上的抑制效果。
5.VHH-huFc(SNB)真核表达
通过分子克隆技术,将上述23个纳米单抗VHH基因融合人的Fc基因并插入在pVAX1真核表达载体,构建形成Nb-huFc-pVAX1表达质粒。将构建好的Nb-huFc-pVAX1,转染293F细胞,表达生产Nb-huFc(SNB),并利用Protein G纯化。收集纯化的VHH-huFc1(SNB)抗体进行ELISA测定,部分抗体有很好的结合能力(图7)。其中SNB02的CDR1序列如SEQ ID NO:1所示,CDR2序列如SEQ ID NO:2所示,CDR3序列如SEQ ID NO:3所示。
通过BIAcore x100仪器,根据氨基偶联试剂盒说明书,偶联4000RU的sGN蛋白至CM5芯片上;乙醇胺封闭偶联好的芯片。抗体梯度稀释为不同的浓度。Bioevaluationversion 4.0软件设置检测程序:抗体浓度从低浓度到高浓度检测,每个浓度做2个重复检测;结合时间设为180秒,流速为30μl/min;解离时间设为180秒,流速为30μl/min;pH2.510mM的甘氨酸将流速设为30μl/min,时间为30秒,活化、重生芯片表面;PBS平衡5秒,流速为30μl/min。分析实验数据,获得结合、解离和亲和常数。结果如表1所示,大部分的抗体的亲和力能达到10-9(Nano mole级),其中有两个抗体SNB02和SNB07能达到10-10(Pico mole级)。由此可见,我们获得了具有高亲和力的VHH-huFc1(SNB)抗体。
表1 SNB亲和力的总结。
Clone ID | ka(1/Ms) | kd(1/s) | KD(M) |
SNB01 | 4.05E+04 | 6.91E-05 | 1.70589E-09 |
SNB02 | 1.88E+07 | 3.91E-03 | 2.08391E-10 |
SNB07 | 8.66E+04 | 3.86E-05 | 4.45398E-10 |
SNB28 | 1.05E+05 | 2.97E-04 | 2.8361E-09 |
SNB29 | 7.39E+03 | 5.56E-05 | 7.51393E-09 |
SNB37 | 3.74E+04 | 1.09E-04 | 2.92338E-09 |
注:ka为结合常数,kd为解离常数,KD为亲和力。
6.SNB中和SFTSV感染Vero细胞
选取VHH-huFc1中的SNB02和SNB16进行体外中和实验。将抗体梯度稀释为不同的浓度,与SFTSV病毒一起,于5%CO2 37℃下共孵育1个小时,添加1.5x 104个Vero细胞,5%CO2 37℃温箱培养48小时后,移除细胞上清,添加4%多聚甲醛固定15min后,经过洗涤封闭后,添加抗GN的兔多克隆血清(1:1000稀释),4℃过夜,PBST洗涤后,添加50μl抗兔的二抗(Alexa Fluor 488Anti-Rabbit IgG(H+L),Code:111-545-144,Jackson ImmunoResearchLaboratories,1:1000稀释)室温孵育40min,接着进行DAPI 10min染色,洗涤后,荧光显微镜拍照观察,统计绿色斑点和荧光强度计算中和抑制率与中和滴度,抑制率=[1-(样品组的荧光强度均值-细胞对照组CC的荧光强度均值)/(对照处理组的荧光强度均值-细胞对照组CC的荧光强度均值)]×100%。中和滴度(ID50或ND50)表述为50%抑制率时的稀释度的倍数。
结果如图8和9所示,SNB02具有很好的中和活性,当抗体浓度在9μg/ml时,抑制率能达到83.5%。利用人源化小鼠模型来评估SNB02的疗效。
7.SNB治疗SFTS体内感染
ImmunodeficientNOD.Cg-PrkdcscidIl2rgtm1Wjl/SzJ(NCG)小鼠购自南京大学模式动物所,与NSG小鼠类似,该小鼠在SCID小鼠基础上缺失了IL2受体基因,导致体内没有小鼠T细胞,B细胞以及极少量的NK细胞。1.0-15x 107PBMC腹腔注射进4-6周的NCG小鼠体内;三周后,采血流式检测人T细胞,通过染色人的CD45+、CD3+、CD4+和CD8+。人CD45阳性细胞的比例到达5%以上,判定为小鼠人源化成功。接种2x 107TCID50的SFTSV病毒,感染后第3和6天,分别进行一次抗体治疗,即,腹腔注射400μg SNB02抗体/小鼠(抗体的量为大约20mg/kg小鼠)。每次抗体治疗前和第9天进行采血,检测小鼠血液中的病毒载量,从而判定小鼠是否成功的感染了SFTS病毒以及SNB抗体是否能控制SFTSV感染小鼠,以人IgG为对照。结果如图11所示,完成治疗三天后(第9天),检测小鼠体内的病毒载量,接受SNB02治疗的9只小鼠,7只小鼠体内的病毒载量均得到了很好的抑制,而接受Hu-IgG治疗的对照组小鼠,体内SFTS病毒在大量繁殖,两组病毒抑制率对比分析,SNB02有显著性的的控制SFTS病毒感染(图10)。
8.使用AAV病毒载体装载的SNB02进行体内实验
腺相关病毒载体(AAV)源于非致病的野生型腺相关病毒,由于其安全性好、宿主细胞范围广(分裂和非分裂细胞)、免疫源性低,在体内表达外源基因时间长等特点,被视为最有前途的基因转移载体之一,在世界范围内的基因治疗和疫苗研究中得到广泛应用。
AAV Helper-Free病毒包装系统购于Cell Biolabs,San Diego USA。将上述SNB02的DNA编码序列通过分子克隆技术插入到pAAV-MCS质粒;通过测序证明构建成功后,将构建好的质粒pAAV-Ab与pHelper和pAAV-DJ质粒按照质量比1:1:1的方式使用PEI转染试剂共转染AAV-293T细胞。转染后分别于48、72、96和120小时收集上清,并用5xPEG8000(sigma)进行浓缩,最后用1.37g/ml氯化铯进行纯化。纯化的AAV溶解于PBS里,进行鉴定和分装后保存于-80℃。
将上述人源化小鼠接种2x 107TCID50的SFTSV病毒,感染后第3天采血以及接受AAV-SNB02(1x1011 gc/100μl)肌肉注射,并在第6、9和12天采血,检测病毒载量,以AAV-GFP为对照组。结果显示,注射了AAV-SNB02的小鼠体内的SFTSV病毒载量均很低,而对照组小鼠体内的SFTSV病毒大量繁殖。
9.双抗夹心ELISA
用不同浓度的SNB抗体包被检测板,每孔100μl,37℃孵育2h,洗涤2-4次,10%牛血清封闭,每孔200μl,37℃孵育1h,洗涤2-4次,每孔加入梯度稀释的蛋白,病毒或者样品100μl,37℃孵育1.5h,洗涤2次,每孔加入1:200-1:10000稀释的辣根过氧化物酶标记的SNB抗体100μl,37℃孵育1h,洗涤4-6次后,加100μl TMB底物,37℃孵育10min,50μl 0.2M的H2SO4中止反应,测定OD450nm。ELISA检测的阳性样品规定为在OD450是空白对照(即不包被检测原,图中标记为Neg)的2.1倍以上并且其光密度值大于0.2的最高稀释倍数。
结果显示,当包被抗体为SNB02或SNB07,检测抗体为SNB01时,该组合能够识别sGN蛋白和阴性对照蛋白(图11A);当检测抗体为SNB02时,ELISA检测背景很高(图11B);当检测抗体为SNB37,包被抗体为SNB01、SNB02和SNB07时,ELISA能识别sGN蛋白和阴性对照蛋白(图11C)。SNB抗体可以应用于双抗体夹心ELISA检测sGN试剂盒的开发,其中SNB01与SNB37的双抗组合其检测灵敏度为3.9ng/ml(图11D)。测量该组合检测SFTSV真病毒的灵敏度为3.75x 106gc/ml(图12),说明该试剂盒不仅能检出SFTSV的真病毒,还能检出低至10^6拷贝数的SFTSV真病毒。由此可见,该纳米抗体双抗夹心检测试剂盒能应用在SFTSV病毒感染检测。
以上所述仅为本发明的较佳实施例,并不用以限制本发明,凡在本发明的精神和原则之内,所作的任何修改、等同替换、改进等,均应包含在本发明的保护范围之内。
序列表
<110> 源道隆(苏州)医学科技有限公司
<120> 可结合SFTSV的多肽、其核酸编码序列及应用
<150> PCT/CN2019/097350
<151> 2019-07-23
<160> 7
<170> SIPOSequenceListing 1.0
<210> 1
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<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 1
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1 5
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<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
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<213> 人工序列(Artificial Sequence)
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Tyr
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<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 4
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1 5 10 15
Thr Leu Arg Leu Ser Cys Thr Ala Ser
20 25
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<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
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Met Gly Trp Tyr Arg Gln Gly Pro Gly Asn Glu Cys Glu Met Val Ala
1 5 10 15
Tyr
<210> 6
<211> 36
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 6
Ala Asp Ser Thr Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Gln Asp Asn Ala Lys
1 5 10 15
His Thr Leu Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Lys Pro Glu Asp Thr Gly
20 25 30
Val Tyr Tyr Cys
35
<210> 7
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 7
Gly Gln Gly Thr Arg Val Thr Val Ser Ser
1 5 10
Claims (10)
1.一种可结合SFTSV的多肽,其特征在于,包括3个互补决定区CDR1-3,CDR1序列为或包括SEQ ID NO:1所示序列,CDR2序列为或包括SEQ ID NO:2所示序列之一,CDR3序列为或包括SEQ ID NO:3所示序列之一。
2.根据权利要求1所述的多肽,其特征在于,所述多肽还包括4个框架区FR1-4,所述FR1-4与所述CDR1-3按顺序交错排列。
3.根据权利要求2所述的多肽,其特征在于,所述多肽为单克隆抗体。
4.根据权利要求2所述的多肽,其特征在于,所述多肽为VHH。
5.根据权利要求4所述的多肽,其特征在于,所述多肽为骆驼源的VHH或人源化的VHH。
6.权利要求1-5中任一项所述的多肽在制备SFTSV检测剂或SFTSV治疗药物中的应用。
7.一种核酸编码序列,其特征在于,编码权利要求1-5中任一项所述的多肽。
8.权利要求7所述的核酸编码序列在制备SFTSV治疗药物中的应用。
9.一种表达载体,其特征在于,包含权利要求7所述的核酸编码序列的表达框。
10.根据权利要求9所述的表达载体,其特征在于,所述表达载体为AAV载体。
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