CN110301432A - 一种新的细胞冻存方法 - Google Patents

一种新的细胞冻存方法 Download PDF

Info

Publication number
CN110301432A
CN110301432A CN201910674185.7A CN201910674185A CN110301432A CN 110301432 A CN110301432 A CN 110301432A CN 201910674185 A CN201910674185 A CN 201910674185A CN 110301432 A CN110301432 A CN 110301432A
Authority
CN
China
Prior art keywords
cell
pbmc
frozen
transferred
stock solution
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Pending
Application number
CN201910674185.7A
Other languages
English (en)
Inventor
王金涛
向洋
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Shanghai Xuanfeng Biotechnology Co Ltd
Original Assignee
Shanghai Xuanfeng Biotechnology Co Ltd
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Shanghai Xuanfeng Biotechnology Co Ltd filed Critical Shanghai Xuanfeng Biotechnology Co Ltd
Priority to CN201910674185.7A priority Critical patent/CN110301432A/zh
Publication of CN110301432A publication Critical patent/CN110301432A/zh
Pending legal-status Critical Current

Links

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
    • A01N—PRESERVATION OF BODIES OF HUMANS OR ANIMALS OR PLANTS OR PARTS THEREOF; BIOCIDES, e.g. AS DISINFECTANTS, AS PESTICIDES OR AS HERBICIDES; PEST REPELLANTS OR ATTRACTANTS; PLANT GROWTH REGULATORS
    • A01N1/00—Preservation of bodies of humans or animals, or parts thereof
    • A01N1/02—Preservation of living parts
    • A01N1/0205—Chemical aspects
    • A01N1/021—Preservation or perfusion media, liquids, solids or gases used in the preservation of cells, tissue, organs or bodily fluids
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
    • A01N—PRESERVATION OF BODIES OF HUMANS OR ANIMALS OR PLANTS OR PARTS THEREOF; BIOCIDES, e.g. AS DISINFECTANTS, AS PESTICIDES OR AS HERBICIDES; PEST REPELLANTS OR ATTRACTANTS; PLANT GROWTH REGULATORS
    • A01N1/00—Preservation of bodies of humans or animals, or parts thereof
    • A01N1/02—Preservation of living parts
    • A01N1/0205—Chemical aspects
    • A01N1/021—Preservation or perfusion media, liquids, solids or gases used in the preservation of cells, tissue, organs or bodily fluids
    • A01N1/0221—Freeze-process protecting agents, i.e. substances protecting cells from effects of the physical process, e.g. cryoprotectants, osmolarity regulators like oncotic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
    • A01N—PRESERVATION OF BODIES OF HUMANS OR ANIMALS OR PLANTS OR PARTS THEREOF; BIOCIDES, e.g. AS DISINFECTANTS, AS PESTICIDES OR AS HERBICIDES; PEST REPELLANTS OR ATTRACTANTS; PLANT GROWTH REGULATORS
    • A01N1/00—Preservation of bodies of humans or animals, or parts thereof
    • A01N1/02—Preservation of living parts
    • A01N1/0205—Chemical aspects
    • A01N1/021—Preservation or perfusion media, liquids, solids or gases used in the preservation of cells, tissue, organs or bodily fluids
    • A01N1/0226—Physiologically active agents, i.e. substances affecting physiological processes of cells and tissue to be preserved, e.g. anti-oxidants or nutrients

Landscapes

  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Dentistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Environmental Sciences (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Physiology (AREA)
  • Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
  • Agricultural Chemicals And Associated Chemicals (AREA)

Abstract

本发明提供了一种新的细胞冻存方法，包括以下步骤：配置细胞冻存液；将配置好的冻存液使用滤头过滤除菌，置于4℃的储存环境中预冷待用；对需要进行冻存的细胞进行计数；对PBMC进行分离，并将分离好的PBMC使用PBS洗涤两遍，取400g洗涤后的溶液离心5分钟，弃去上清；使用冻存液充分悬浮细胞至期望浓度，然后分装至冻存管；将冻存管置于程序降温盒中，然后将降温盒转移到超低温冰箱中；三小时后，将细胞转移到液氮中，整个转移过程应在液氮环境下进行。本发明所包含的冻存方法使复苏后的PBMC中，NK细胞的活力大幅提高，可以为下游的实验提供优质的细胞。有很大的学术意义。

Description

一种新的细胞冻存方法
技术领域
本发明涉及生物技术领域，具体为一种新的细胞冻存方法。
背景技术
细胞的冻存是保存细胞的主要方法，将细胞冻存后保存在液氮中，可以使细胞暂时性的脱离生长状态而将其细胞特性保存起来。在需要的时候再复苏细胞用于实验。而且适度地保存一定量的细胞，可以防止因正在培养的细胞被污染或其他意外事件而使细胞丢种，起到了细胞保种的作用。除此之外，还可以利用细胞冻存的形式来购买、寄赠、交换和运送某些细胞。但是不同的细胞的冷冻条件是不一样的，其复苏结果也各不相同，许多细胞复苏后细胞活性较低。
发明内容
本发明所解决的技术问题在于提供一种新的细胞冻存方法，以解决上述背景技术中的问题。
本发明所解决的技术问题采用以下技术方案来实现：一种新的细胞冻存方法，包括以下步骤：
步骤1、配置细胞冻存液，所述细胞冻存液包括：DMSO 7.5％，维生素C 109mg/L，海藻多糖72mg/L，香菇多糖45mg/L，人血清白蛋白500mg/L，高糖DMEM 92.5％；
步骤2、将步骤1中配置好的冻存液使用滤头过滤除菌，置于4℃的储存环境中预冷待用；
步骤3、对需要进行冻存的细胞进行计数；
步骤4、对PBMC进行分离，并将分离好的PBMC使用PBS洗涤两遍，取400g洗涤后的溶液离心5分钟，弃去上清；
步骤5、使用步骤2中的冻存液充分悬浮细胞至期望浓度，然后分装至冻存管；
步骤6、将冻存管置于程序降温盒中，然后将降温盒转移到超低温冰箱中；
步骤7、三小时后，将细胞转移到液氮中，整个转移过程应在液氮环境下进行。
优选的，所述步骤2中的滤头为0.22μm的滤头。
优选的，所述步骤4中的对PBMC进行分离的分离方法为：将人外周血转入离心管中离心；吸取灰黄层，向其中加入生理盐水稀释；将加入生理盐水稀释得到的产物送入含有淋巴细胞分离液的离心管中，其中加入生理盐水稀释到的产物位于淋巴细胞分离液上层；离心分离，吸取中间白膜层，洗涤，离心弃上清，得到分离的PBMC。
与已公开技术相比，本发明存在以下优点：本发明所包含的冻存方法使复苏后的PBMC中，NK细胞的活力大幅提高，可以为下游的实验提供优质的细胞。有很大的学术意义。
具体实施方式
为了使本发明的技术手段、创作特征、工作流程、使用方法达成目的与功效易于明白了解，下面将结合本发明实施例，对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。
实施例1
一种新的细胞冻存方法，包括以下步骤：
步骤1、配置细胞冻存液，所述细胞冻存液包括：DMSO 7.5％，维生素C 109mg/L，海藻多糖72mg/L，香菇多糖45mg/L，人血清白蛋白500mg/L，高糖DMEM 92.5％；
步骤2、将步骤1中配置好的冻存液使用滤头过滤除菌，置于4℃的储存环境中预冷待用；
步骤3、对需要进行冻存的细胞进行计数；
步骤4、对PBMC进行分离，并将分离好的PBMC使用PBS洗涤两遍，取400g洗涤后的溶液离心5分钟，弃去上清；
步骤5、使用步骤2中的冻存液充分悬浮细胞至期望浓度，然后分装至冻存管；
步骤6、将冻存管置于程序降温盒中，然后将降温盒转移到超低温冰箱中；
步骤7、三小时后，将细胞转移到液氮中，整个转移过程应在液氮环境下进行。
实施例2
一种新的细胞冻存方法，包括以下步骤：
步骤1、配置细胞冻存液，所述细胞冻存液包括：DMSO 7.5％，维生素C 109mg/L，海藻多糖72mg/L，香菇多糖45mg/L，人血清白蛋白500mg/L，高糖DMEM 92.5％；
步骤2、将步骤1中配置好的冻存液使用滤头过滤除菌，置于4℃的储存环境中预冷待用；
步骤3、对需要进行冻存的细胞进行计数；
步骤4、对PBMC进行分离，并将分离好的PBMC使用PBS洗涤两遍，取400g洗涤后的溶液离心5分钟，弃去上清；
步骤5、使用步骤2中的冻存液充分悬浮细胞至期望浓度，然后分装至冻存管；
步骤6、将冻存管置于程序降温盒中，然后将降温盒转移到超低温冰箱中；
步骤7、三小时后，将细胞转移到液氮中，整个转移过程应在液氮环境下进行。
优选的，所述步骤2中的滤头为0.22μm的滤头。
优选的，所述步骤4中的对PBMC进行分离的分离方法为：将人外周血转入离心管中离心；吸取灰黄层，向其中加入生理盐水稀释；将加入生理盐水稀释得到的产物送入含有淋巴细胞分离液的离心管中，其中加入生理盐水稀释到的产物位于淋巴细胞分离液上层；离心分离，吸取中间白膜层，洗涤，离心弃上清，得到分离的PBMC。
与已公开技术相比，本发明存在以下优点：本发明所包含的冻存方法使复苏后的PBMC中，NK细胞的活力大幅提高，可以为下游的实验提供优质的细胞。有很大的学术意义。
以上显示和描述了本发明的基本原理、主要特征及本发明的优点。本行业的技术人员应该了解，本发明不受上述实施例的限制，上述实施例和说明书中描述的只是说明本发明的原理，在不脱离本发明精神和范围的前提下，本发明还会有各种变化和改进，这些变化和改进都落入要求保护的本发明范围内。本发明的要求保护范围由所附的权利要求书及其等效物界定。

Claims (3)

1.一种新的细胞冻存方法，其特征在于，包括以下步骤：
步骤1、配置细胞冻存液，所述细胞冻存液包括：DMSO7.5％，维生素C 109mg/L，海藻多糖72mg/L，香菇多糖45mg/L，人血清白蛋白500mg/L，高糖DMEM92.5％；
步骤2、将步骤1中配置好的冻存液使用滤头过滤除菌，置于4℃的储存环境中预冷待用；
步骤3、对需要进行冻存的细胞进行计数；
步骤4、对PBMC进行分离，并将分离好的PBMC使用PBS洗涤两遍，取400g洗涤后的溶液离心5分钟，弃去上清；
步骤5、使用步骤2中的冻存液充分悬浮细胞至期望浓度，然后分装至冻存管；
步骤6、将冻存管置于程序降温盒中，然后将降温盒转移到超低温冰箱中；
步骤7、三小时后，将细胞转移到液氮中，整个转移过程应在液氮环境下进行。
2.根据权利要求1所述的一种新的细胞冻存方法，其特征在于：所述步骤2中的滤头为0.22μm的滤头。
3.根据权利要求1所述的一种新的细胞冻存方法，其特征在于：所述步骤4中的对PBMC进行分离的分离方法为：将人外周血转入离心管中离心；吸取灰黄层，向其中加入生理盐水稀释；将加入生理盐水稀释得到的产物送入含有淋巴细胞分离液的离心管中，其中加入生理盐水稀释到的产物位于淋巴细胞分离液上层；离心分离，吸取中间白膜层，洗涤，离心弃上清，得到分离的PBMC。
CN201910674185.7A 2019-07-25 2019-07-25 一种新的细胞冻存方法 Pending CN110301432A (zh)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201910674185.7A CN110301432A (zh) 2019-07-25 2019-07-25 一种新的细胞冻存方法

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201910674185.7A CN110301432A (zh) 2019-07-25 2019-07-25 一种新的细胞冻存方法

Publications (1)

Publication Number Publication Date
CN110301432A true CN110301432A (zh) 2019-10-08

Family

ID=68080791

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN201910674185.7A Pending CN110301432A (zh) 2019-07-25 2019-07-25 一种新的细胞冻存方法

Country Status (1)

Country Link
CN (1) CN110301432A (zh)

Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN111248193A (zh) * 2020-04-18 2020-06-09 李刚 一种人羊膜间充质干细胞冻存液及其冻存方法

Citations (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN104082277A (zh) * 2014-07-25 2014-10-08 成都清科生物科技有限公司 一种人外周血单个核细胞的冻存保护剂及保存方法
CN105123671A (zh) * 2015-07-24 2015-12-09 广州赛莱拉干细胞科技股份有限公司 一种细胞冻存液、应用及免疫细胞冻存方法
CN105211052A (zh) * 2015-10-29 2016-01-06 广州赛莱拉干细胞科技股份有限公司 一种培养后的nkt细胞的冻存液及其制备方法
CN105462922A (zh) * 2015-12-31 2016-04-06 广州赛莱拉干细胞科技股份有限公司 一种增加免疫细胞得率的方法
CN106085954A (zh) * 2016-06-24 2016-11-09 安徽未名细胞治疗有限公司 一种大量人外周血pbmc快速分离方法
CN107912419A (zh) * 2017-10-11 2018-04-17 重庆金时代生物技术有限公司 一种人外周血单个核细胞的冻存液及冻存方法

Patent Citations (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN104082277A (zh) * 2014-07-25 2014-10-08 成都清科生物科技有限公司 一种人外周血单个核细胞的冻存保护剂及保存方法
CN105123671A (zh) * 2015-07-24 2015-12-09 广州赛莱拉干细胞科技股份有限公司 一种细胞冻存液、应用及免疫细胞冻存方法
CN105211052A (zh) * 2015-10-29 2016-01-06 广州赛莱拉干细胞科技股份有限公司 一种培养后的nkt细胞的冻存液及其制备方法
CN105462922A (zh) * 2015-12-31 2016-04-06 广州赛莱拉干细胞科技股份有限公司 一种增加免疫细胞得率的方法
CN106085954A (zh) * 2016-06-24 2016-11-09 安徽未名细胞治疗有限公司 一种大量人外周血pbmc快速分离方法
CN107912419A (zh) * 2017-10-11 2018-04-17 重庆金时代生物技术有限公司 一种人外周血单个核细胞的冻存液及冻存方法

Cited By (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN111248193A (zh) * 2020-04-18 2020-06-09 李刚 一种人羊膜间充质干细胞冻存液及其冻存方法
CN111248193B (zh) * 2020-04-18 2020-10-27 瑞因细胞工程科技(广州)有限公司 一种人羊膜间充质干细胞冻存液及其冻存方法

Similar Documents

Publication Publication Date Title
US10829740B2 (en) Biologic composition and method of manufacture
CN102334472B (zh) 一种脐带保存液及其制备方法
CN110447636A (zh) 一种外周血单个核细胞的冻存液、冻存方法及复苏方法
CN108849854B (zh) 一种外周血单个核细胞冻存方法
JP2016508501A5 (zh)
CN107034180A (zh) 一种精子洗涤液及其制备方法
CN110301432A (zh) 一种新的细胞冻存方法
CN101638637A (zh) 人类骨髓、脐带血、外周血细胞处理试剂盒及细胞处理方法
CN102206273A (zh) 一种从猪血中提取免疫球蛋白g的方法
CN107034186A (zh) 一种从人脐带血中分离纯化干细胞的方法
US11077147B2 (en) Acellular biologic composition and method of manufacture
CN108355170A (zh) 一种浓缩纳米脂肪及其制备方法、应用
CN106119230A (zh) 一种循环双水相体系分离纯化菠萝蛋白酶的方法
CN104558156A (zh) 一种从血浆中提取人血白蛋白提高得率的方法
CN113558042A (zh) 一种外泌体的保存方法
CN110731434A (zh) 一种蔗汁过膜前预处理系统及工艺
CN109182254A (zh) 一种水牛睾丸精子细胞分离和鉴定方法
CN105504046A (zh) 一种人纤维蛋白原的制备方法
CN102809595A (zh) 分离豚鼠心室肌细胞记录Nav1.5钠通道电流的方法
Gulliksson et al. A system for the supply of platelets suspended in a storage medium including buffy-coat-derived platelet concentrates in combination with “split” apheresis platelets
CN111961646B (zh) 一种不添加沉降剂的脐血干细胞富集方法
CN105670991A (zh) 人类骨髓细胞处理试剂盒及细胞处理方法
CN104086672A (zh) 一种粗品肝素钠的生产方法
CN103756957A (zh) 一种从胎盘中洗脱内皮祖细胞的方法
CN113943692A (zh) 一种从干细胞中提取外泌体的提取方法

Legal Events

Date Code Title Description
PB01 Publication
PB01 Publication
SE01 Entry into force of request for substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
RJ01 Rejection of invention patent application after publication

Application publication date: 20191008

RJ01 Rejection of invention patent application after publication