CN110290800A - 缀合生物分子、医药组合物及方法 - Google Patents

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李婉芬
陈怡如
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Abstract

本文中公开包含与抗体或其抗原结合片段复合的药物的抗体药物缀合物(ADC's)，该抗体或其抗原结合片段与Globo系列抗原结合，并公开该些抗体药物缀合物的使用方法。使用方法包括但不限于癌症治疗与检测。本文中公开的抗体可与特定癌细胞表面结合。本文中公开的抗体例示性结合标的包括上皮癌(carcinoma)，如恶性肉瘤(sarcoma)、皮肤癌、血癌、淋巴癌、脑癌、胶质母细胞瘤(glioblastoma)、肺癌、乳癌、口腔癌、头颈癌、鼻咽癌、食道癌、胃癌、肝癌、胆管癌、胆囊癌、膀胱癌、胰脏癌、肠癌、大肠直肠癌、肾脏癌、子宫颈癌、子宫内膜癌、卵巢癌、睾丸癌、颊癌、口咽癌、喉癌及前列腺癌等。

Description

缀合生物分子、医药组合物及方法
【发明领域】
本文中公开的技术系针对抗体-药物缀合物(ADC’s)组合物与使用该组合物治疗癌症的方法。本文中亦公开使用抗体-药物缀合物治疗与疾病状态相关的哺乳动物细胞的方法。本文中公开的技术系关于与Globo系列抗原(Globo H、SSEA-3及SSEA-4)结合的抗体与其结合片段，包括包含前述抗体及/或结合片段的医药组合物。本文中进一步提供对受试者施用有效量的抗体-药物缀合物以抑制癌症细胞增殖的方法
【发明背景】
许多表面碳水化合物皆表达于恶性肿瘤中。举例而言，碳水化合物抗原Globo H(Fucα1→2Galβ1→3GalNAcβ1→3Galα1→4Galβ1→4Glc)以神经酰胺键结的糖脂质形态存在，并于1984年首次分离自乳癌MCF-7细胞(Bremer E G,et al.(1984)J Biol Chem 259:14773-14777)。先前研究也显示，在乳癌细胞与乳癌干细胞上观察到Globo H与阶段特异性胚胎抗原3(Galβ1→3GalNAcβ1→3Galα1→4Galβ1→4Glcβ1)(SSEA-3，又称Gb5)(WW Changet al.(2008)Proc Natl Acad Sci USA,105(33):11667-11672)。此外，阶段特异性胚胎抗原4(SSEA-4)(Neu5Acα2→3Galβ1→3GalNAcβ1→3Galα1→4Galβ1→4Glcβ1)系一般常用于多功能人类干细胞上的细胞表面标记，亦用于分离间质干细胞(mesenchymal stem cells)及富集神经前驱细胞(neural progenitor cells)(Kannagi R et al.(1983)EMBO J,2:2355-2361)。上述研究支持了Globo系列抗原(Globo H、SSEA-3及SSEA-4)属癌症疗法所针对的特定目标，亦可用以引导治疗剂有效针对癌症细胞进行治疗。因此，辨识与癌症相关及/或可预测癌症的聚糖标记，并发展能与此类聚糖标记反应的抗体-药物缀合物，以用于检测及治疗多种癌症，即为颇受重视之要务。可使用不同联结剂将针对Globo系列抗原的特异性抗体与治疗剂结合，以将Globo系列抗原设计为一抗体-药物缀合物。
利用抗体-药物缀合物局部施用细胞毒性剂(cytotoxic agent)或细胞生长抑制剂(cytostatic agent)，例如在癌症治疗中用以杀死癌症细胞或抑制其增殖的药物(Syrigos and Epenetos(1999)Anticancer Research 19:605-614；Niculescu-Duvaz and(1997)Adv.Drg.Del.Rev.26:151-172；美国专利第4975278号)，理论上可使药物基团被输送到特定肿瘤部位，并于细胞内累积。而对全身施用此类未缀合药剂时，可能会带来能破坏普通细胞与欲消除的肿瘤细胞的偏高毒性(参考Baldwin et al.,1986,Lancet pp.(Mar.15,1986):603-05；Thorpe,1985,"Antibody Carriers Of Cytotoxic Agents InCancer Therapy:A Review,"in Monoclonal Antibodies'84:Biological And ClinicalApplications,A.Pinchera et al.(ed.s),pp.475-506)，因此，一般期待药物能造成最小毒性并达到最大效果。研究指出，使用多克隆抗体和单克隆抗体皆有助于达成前述目标(Rowland et al.,1986,Cancer Immunol.Immunother.21:183-87)。此类方法中所使用的药物包括daunomycin(唐霉素注射剂)、doxorubicin(艾霉素注射剂)、methotrexate(灭杀除癌锭)、vindesine(长春地辛)(Rowland et al.,1986,supra)。某些细胞毒性药物在和大型抗体或蛋白质受体的配体结合时，会变得无活性或活性较低。
奥瑞斯他丁肽(auristatin peptides)，如奥瑞斯他丁E(auristatin E)与单甲基奥瑞斯他丁(monomethylauristatin,MMAE)，其为dolastatin的合成类似物，先前系与以下种类抗体缀合结合：(i)嵌合单克隆抗体cBR96(对上皮癌Lewis Y抗原具特异性)；(ii)cAC10抗体，其对血液肿瘤所表达的CD30抗原具特异性(Klussman,et al.(2004),Bioconjugate Chemistry 15(4):765-773；Doronina et al.(2003)NatureBiotechnology 21(7):778-784；"Monomethylvaline Compounds Capable ofConjugation to Ligands"；Francisco et al.(2003))；(iii)抗CD20抗体，例如(莫须瘤注射剂)(WO 04/032828)，用于治疗表达CD20抗原的肿瘤及免疫疾病；(iv)抗EphB2抗体2H9及抗IL-8抗体，用于治疗大肠直肠癌(Mao,et al.(2004)CancerResearch 64(3):781-788)；(v)E-selectin抗体(Bhaskar et al.(2003)Cancer Res.63:6387-6394)；及(vi)其他抗CD30抗体(WO 03/043583)。
【发明概述】
本文中所公开的技术内容系基于以下发现：Globo系列抗原会在多种癌症细胞上不正常表达，但在普通细胞上则否。表达Globo系列抗原的癌细胞可包括但不限于恶性肉瘤(sarcoma)、皮肤癌、血癌、淋巴癌、脑癌、肺癌、乳癌、口腔癌、头颈癌、鼻咽癌、食道癌、胃癌、肝癌、胆管癌、胆囊癌、膀胱癌、胰脏癌、大肠癌、大肠直肠癌、肾脏癌、子宫颈癌、子宫内膜癌、卵巢癌、睾丸癌、颊癌、口咽癌、喉癌及前列腺癌。
根据本发明的一方面，提供一种对Globo系列抗原具特异性的抗体或其结合片段。
在某些实施例中，该抗体可为抗Globo H抗体。
在某些实施例中，该抗Globo H抗体可为OBI-888。示例性OBI抗体888如US2017/0101462(WO2017/062792)专利所述，其全部内容以引用方式并入本文中。
在某些实施例中，该抗体可为抗SSEA-4抗体。
在某些实施例中，该抗SSEA-4抗体可为OBI-898。示例性OBI抗体898如US 2017/283488(WO2017/172990)专利所述，其全部内容以引用方式并入本文中。
根据本发明的一方面，提供一种抗体药物缀合物，其包含与细胞毒性剂缀合的抗体，该细胞毒性剂种类如化疗制剂、药物、生长抑制剂、毒素(如经酵素活化的细菌源、真菌源、植物源、动物源毒素，或其片段)或放射性同位素(如放射性缀合物)。在某些实施例中，本文中公开一种对Globo系列抗原具特异性的抗体药物缀合物。
在某些实施例中，该药物可为单甲基奥瑞斯他丁(MMAE)。
根据本发明的一方面，提供一种抑制癌细胞增殖的方法，其包含对有需要的受试者施用有效量的示例性抗体药物缀合物(OBI-999)，其中癌细胞增殖会被抑制。
在某些实施例中，本发明提供一种治疗受试者体内癌症的方法，该方法包含对有需要的受试者施用本文所述的有效量的示例性抗体药物缀合物(OBI-999)。
在所公开的组合物中，抗体药物缀合物或任何其他相关成分皆具备免疫有效量。就各抗体药物缀合物而言，其最佳免疫有效量应由实验结果决定(并考虑病患及/或治疗类型的特性)。一般而言，此有效量为每公斤体重含0.01μg至250mg的抗体，该抗体对Globo系列抗原具特异性。在某些实施例中，医疗组合物的治疗有效量(如有效剂量)可介于大约0.001μg/kg与大约250mg/kg之间、0.01μg/kg至100mg/kg之间，或0.1μg/kg至50mg/kg之间，或者大约或至少为0.001、0.002、0.003、0.004、0.005、0.006、0.007、0.008、0.009；0.01、0.02、0.03、0.04、0.05、0.06、0.07、0.08、0.09；0.1、0.2、0.3、0.4、0.5、0.6、0.7、0.8、0.9、1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、45、46、47、48、49、50、51、52、53、54、55、56、57、58、59、60、61、62、63、64、65、66、67、68、69、70、71、72、73、74、75、76、77、78、79、80、81、82、83、84、85、86、87、88、89、90、91、92、93、94、95、96、97、98、99、100、125、150、175、200、225或250g/kg病患体重或μg/kg病患体重，或任何介于上述任两数字间之范围，或者介于其他明显且本发明所属技术领域中具通常知识者未经过度实验而可理解的其他范围。本发明所属技术领域中具通常知识者将理解，能影响有效治疗受试者所需剂量及时间的特定因素，包括但不限于该疾病或病症的严重程度、先前接受的治疗、该受试者的整体健康状况或年龄，以及其他当下存在的疾病。
在某些实施例中，该癌症选自由恶性肉瘤、皮肤癌、血癌、淋巴癌、脑癌、胶质母细胞瘤、肺癌、乳癌、口腔癌、头颈癌、鼻咽癌、食道癌、胃癌、肝癌、胆管癌、胆囊癌、膀胱癌、胰脏癌、大肠癌、大肠直肠癌、肾脏癌、子宫颈癌、子宫内膜癌、卵巢癌、睾丸癌、颊癌、口咽癌、喉癌及前列腺癌组成的群组。
本发明的一或多个实施例的具体细节，可参照以下详细说明。本发明的其他特点或优点在参照以下图式、说明书中多个实施例及所附的申请专利范围后，将变得明显。
【附图简述】
在参照说明书所附图式并搭配实施方式说明后，即可更全面理解本发明内容。附图详述的实施例仅为实施本发明的示例性，不应被理解为本发明仅限于详述的实施例。
图1为使用疏水性交互作用层析测定OBI-888(图1A)及抗体药物缀合物(OBI-999)(图1B)的结果图。
图2为使用粒径筛析层析法测定OBI-888(图2A)及抗体药物缀合物(OBI-999)(图2B)的结果图。
图3为使用十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)分析OBI-888及抗体药物缀合物(OBI-999)的结果图。泳道M：Novex Sharp标准蛋白质；泳道1：配方缓冲液中的原生抗体OBI-888；泳道2：反应缓冲液中的原生抗体OBI-888。泳道3：抗体药物缀合物(OBI-999)。
图4为经植入MCF-7的雌裸小鼠(nu/nu)体内肿瘤的生长曲线。每周对小鼠施用10mg/kg试验物质一次，为期两周(图4A)，或以较低剂量每周对小鼠施用3、1及0.3mg/kg，为期六周(图4B)。T/C值≤42％时，代表相较于对照组，试验物质对实验组具备显著抗肿瘤活性(#)。使用双因子变异数分析再进行Bonferroni事后检定，以比较对照组及施用试验物质的实验组。p<0.05时两组有显著差异。
图5为经植入MCF-7的雌裸小鼠(nu/nu)体重变化曲线。每周对小鼠施用10mg/kg试验物质一次，为期两周(图5A)，或以较低剂量每周对小鼠施用3、1及0.3mg/kg，为期六周(图5B)。T/C值≤42％时，代表相较于对照组，试验物质对实验组具备显著抗肿瘤活性(#)。使用双因子变异数分析再进行Bonferroni事后检定，以比较对照组及施用试验物质的实验组。p<0.05时两组有显著差异。
图6为经植入MCF-7后罹患肿瘤的雌裸小鼠(nu/nu)，试验物质为10mL/kg溶媒(25mM柠檬酸钠、pH6.5+100mM NaCl)，每周经静脉注射一次，为期六周。
图7为经植入MCF-7后罹患肿瘤的雌裸小鼠(nu/nu)，试验物质为10mL/kg溶媒(25mM柠檬酸钠、pH6.5+100mM NaCl)，每周经静脉注射一次，为期两周。
图8为经植入MCF-7后罹患肿瘤的雌裸小鼠(nu/nu)，试验物质为10mg/kg抗体药物缀合物(OBI-999)，每周经静脉注射一次，为期两周。
图9为经植入MCF-7后罹患肿瘤的雌裸小鼠(nu/nu)，试验物质为0.3mg/kg抗体药物缀合物(OBI-999)，每周经静脉注射一次，为期六周。
图10为经植入MCF-7后罹患肿瘤的雌裸小鼠(nu/nu)，试验物质为1mg/kg抗体药物缀合物(OBI-999)，每周经静脉注射一次，为期六周。
图11为经植入MCF-7后罹患肿瘤的雌裸小鼠(nu/nu)，试验物质为3mg/kg抗体药物缀合物(OBI-999)，每周经静脉注射一次，为期六周。
图12为经植入MCF-7后罹患肿瘤的雌裸小鼠(nu/nu)，试验物质为10mg/kg的OBI-888，每周经静脉注射一次，为期两周。
图13为经植入MCF-7后罹患肿瘤的雌裸小鼠(nu/nu)，试验物质为0.3mg/kg的OBI-888，每周经静脉注射一次，为期六周。
图14为经植入MCF-7后罹患肿瘤的雌裸小鼠(nu/nu)，试验物质为1mg/kg的OBI-888，每周经静脉注射一次，为期六周。
图15为经植入MCF-7后罹患肿瘤的雌裸小鼠(nu/nu)，试验物质为3mg/kg的OBI-888，每周经静脉注射一次，为期六周。
图16为经植入MCF-7后罹患肿瘤的雌裸小鼠(nu/nu)，试验物质为0.057mg/kg的MMAE，每周经静脉注射一次，为期两周。
图17为经植入NCI-N87的雌裸小鼠(nu/nu)体内的肿瘤生长曲线。施用溶媒及试验物质的方式如前述实验设计。T/C值≤42％时，代表相较于对照组，试验物质对实验组具备显著抗肿瘤活性(#)。使用双因子变异数分析再进行Bonferroni事后检定，以比较对照组及施用试验物质的实验组。p<0.05时两组有显著差异。
图18为经植入NCI-N87的雌裸小鼠(nu/nu)体重变化曲线。施用溶媒及试验物质的方式如前述实验设计。每周测量并纪录小鼠体重两次，至第100天为止。
图19为经植入NCI-N87后罹患肿瘤的雌裸小鼠(nu/nu)，试验物质为10mL/kg溶媒(25mM柠檬酸钠、pH6.5+100mM NaCl)，每周经静脉注射一次，为期四周；以及10mL/kg溶媒(PBS，pH 7.4)，每周经腹腔注射一次，为期四周。
图20为经植入NCI-N87后罹患肿瘤的雌裸小鼠(nu/nu)，试验物质为1mg/kg抗体药物缀合物(OBI-999)，每周经静脉注射一次，为期四周。
图21为经植入NCI-N87后罹患肿瘤的雌裸小鼠(nu/nu)，试验物质为3mg/kg抗体药物缀合物(OBI-999)，每周经静脉注射一次，为期四周。
图22为经植入NCI-N87后罹患肿瘤的雌裸小鼠(nu/nu)，试验物质为10mg/kg抗体药物缀合物(OBI-999)，每周经静脉注射一次，为期四周。
图23为经植入NCI-N87后罹患肿瘤的雌裸小鼠(nu/nu)，试验物质为10mg/kg的OBI-888，每周经静脉注射一次，为期四周。
图24为经植入NCI-N87后罹患肿瘤的雌裸小鼠(nu/nu)，试验物质为3mg/kg抗体药物缀合物OBI-910(抗CD30的抗体药物缀合物)，每周经静脉注射一次，为期四周。
图25为经植入NCI-N87后罹患肿瘤的雌裸小鼠(nu/nu)，试验物质为0.191mg/kg的MMAE，每周经腹腔注射一次，为期四周；以及10mg/kg的OBI-888，每周经静脉注射一次，为期四周。
图26为经植入NCI-N87后罹患肿瘤的雌裸小鼠(nu/nu)，试验物质为0.191mg/kg的MMAE，每周经腹腔注射一次，为期四周。
图27为经植入NCI-H526的雌裸小鼠(nu/nu)体内的肿瘤生长曲线。施用溶媒及试验物质的方式如前述实验设计。T/C值≤42％时，代表相较于对照组，试验物质对实验组具备显著抗肿瘤活性(#)。使用双因子变异数分析再进行Bonferroni事后检定，以比较对照组及施用试验物质的实验组。p<0.05时两组有显著差异。
图28为经植入NCI-H526的雌裸小鼠(nu/nu)体重变化曲线。施用溶媒及试验物质的方式如前述实验设计。每周测量并纪录小鼠体重两次，至第45天为止。
图29为经植入NCI-H526后罹患肿瘤的雌裸小鼠(nu/nu)，试验物质为10mL/kg溶媒(25mM柠檬酸钠、pH6.5+100mM NaCl)，每周经静脉注射一次，为期四周；以及10mL/kg溶媒(PBS，pH 7.4)，每周经腹腔注射一次，为期四周。
图30为经植入NCI-H526后罹患肿瘤的雌裸小鼠(nu/nu)，试验物质为1mg/kg抗体药物缀合物(OBI-999)，每周经静脉注射一次，为期四周。
图31为经植入NCI-H526后罹患肿瘤的雌裸小鼠(nu/nu)，试验物质为10mg/kg抗体药物缀合物(OBI-999)，每周经静脉注射一次，为期四周。
图32为经植入NCI-H526后罹患肿瘤的雌裸小鼠(nu/nu)，试验物质为0.191mg/kg的MMAE，每周经腹腔注射一次，为期四周；以及10mg/kg的OBI-888，每周经静脉注射一次，为期四周。
图33为经植入NCI-H526后罹患肿瘤的雌裸小鼠(nu/nu)，试验物质为0.191mg/kg的MMAE，每周经腹腔注射一次，为期四周。
图34为不同的BALB/c雄裸小鼠实验组肿瘤生长曲线，小鼠体内皆已形成胰腺癌肿瘤。施用溶媒及试验物质的方式如前述实验设计。数据点代表实验组平均值。误差线代表平均值标准误差(SEM)。
图35为不同的BALB/c雄裸小鼠实验组体重变化曲线，小鼠体内皆已形成胰腺癌肿瘤。施用溶媒及试验物质的方式如前述实验设计。数据点代表实验组平均体重。误差线代表平均值标准误差(SEM)。
图36显示不同的BALB/c雄裸小鼠实验组中小鼠体内已形成胰腺癌肿瘤的情形。
【发明详述】
根据前述，本文中提供数种抗体药物缀合物实施方法与组合物，该些方法及组合物皆针对用于检测、治疗多种癌症的标记物。本文中开发并公开一种抗体药物缀合物，其包含与抗Globo系列抗原缀合结合的抗体或抗体结合片段，且其实施方式包括但不限于癌症治疗与检测。本文中所述的抗体药物缀合物可与多种的表达Globo系列抗原的癌细胞结合，以使癌症检测及治疗更容易进行。该些抗体的目标细胞包括上皮癌细胞，如于皮肤、血液、淋巴结、大脑、肺脏、口腔、食道、胃、肝脏、胆囊、胰脏、直肠、肾脏、子宫颈、卵巢、前列腺中出现的上皮癌细胞。
定义
除非另外说明，否则实施本发明时将采用传统分子生物学、微生物学、DNA重组及免疫学技术，以上技术皆属习知技术，且皆于先前文献中详细说明，可见Sambrook,Fritschand Maniatis编着的Molecular Cloning A Laboratory Manual,2nd Ed.,(Cold SpringHarbor Laboratory Press,1989)；DNA Cloning,Volumes I and II(D.N.Glover ed.,1985)；Culture Of Animal Cells(R.I.Freshney,Alan R.Liss,Inc.,1987)；ImmobilizedCells And Enzymes(IRL Press,1986)；B.Perbal所著的A Practical Guide ToMolecular Cloning(1984)；the treatise,Methods In Enzymology(Academic Press,Inc.,N.Y.)；Gene Transfer Vectors For Mammalian Cells(J.H.Miller and M.P.Caloseds.,1987,Cold Spring Harbor Laboratory)；Methods In Enzymology,Vols.154 and155(Wu et al.eds.)；Immunochemical Methods In Cell And Molecular Biology(Mayerand Walker,eds.,Academic Press,London,1987)；Antibodies:A Laboratory Manual,byHarlow and Lane s(Cold Spring Harbor Laboratory Press,1988)；及Handbook OfExperimental Immunology,Volumes I-IV(D.M.Weir and C.C.Blackwell,eds.,1986)。
本文中使用的“聚糖”(glycan)一词，系指多糖(polysaccharide)或寡糖(oligosaccharide)。本文中亦使用聚糖一词指称碳水化合物缀合物(glycoconjugate)的糖部位，例如糖蛋白(glycoprotein)、糖脂质(glycolipid)、糖肽(glycopeptide)、糖蛋白组(glycoproteome)、肽聚糖(peptidoglycan)、脂多糖(lipopolysaccharide)或蛋白聚糖(proteoglycan)。聚糖通常仅包含单糖(monosaccharides)之间的O-糖苷键。举例而言，纤维素系由β(1,4)键结的D-葡萄糖(β-1,4-linked D-glucose)组成的聚糖(精确而言系葡聚糖(glucan))，而甲壳素(chitin)系由β(1,4)键结的N-乙酰基-D-葡萄糖胺(β-1,4-linkedN-acetyl-D-glucosamine)组成的聚糖。聚糖可为由单糖残基组成的同元或异质聚合物，亦可为直链型或支链型。聚糖容易附着于蛋白质上，形成糖蛋白和蛋白聚糖。一般而言，聚糖位于细胞外层表面。O-键结与N-键结聚糖在真核生物中十分常见，不过也可见于原核生物中，惟比例较前者低。N-键结聚糖容易与sequon序列中天冬酰胺(asparagine)上官能基团的氮结合。Sequon序列系Asn-X-Ser或Asn-X-Thr序列，其中X为除脯氨酸(proline)外的任何氨基酸。
本文所使用的“抗原”一词，系定义为任何能引发免疫反应的物质。
本文所使用的“免疫原性”(immunogenicity)一词，系指免疫原(immunogen)、抗原或疫苗所具备的激发免疫反应的能力。
本文所使用的“抗原表位”(epitope)一词，定义为抗原分子上用以接触抗体的抗原结合位置或T细胞受体的部位。
本文所使用的“疫苗”一词系指包含抗原的制剂，该抗原包含死菌或减毒的致病生物整体(whole disease-causing organisms)或该些生物的成分，如蛋白质、肽或多糖，其可用于制造免疫性以抵抗该些生物带来的疾病。疫苗制剂可为天然、人工合成，或衍生自DNA重组技术。
本文所使用的“抗原特异性”(antigen specific)一词，系指一细胞群的特性，在提供特定抗原或抗原的片段时，会导致特定细胞增殖。
本文所使用的“特异性结合”(specifically binding)一词，系指可互相结合结构(如抗体与抗原)间的交互作用。在不同实例中，特异性结合程度可用亲和力常数表示，如约10-6莫耳/升、约10-7莫耳/升、约10-8莫耳/升或更低。
本文所使用的“实质相似”、“实质相同”、“等同”或“实质等同”等词，系指两数值(如与一分子相关之一数值，以及与参考/对照组分子相关的另一数值)高度相似，本发明所属技术领域中具有通常知识者可认定此两数值几无差异，或认定以前述数值(如解离常数Kd、抗病毒效果等)测定生物特性时，此数值差异不具生物及/或统计显著性。举例而言，此二数值的差异作为一参考/对照组分子的函数值，可小于大约50％、小于大约40％、小于大约30％、小于大约20％及/或小于大约10％。
本文所使用的“实质减少”或“实质不同”等词，系指两数值(如与一分子相关之一数值，以及与一参考/对照组分子相关的另一数值)高度相异，本发明所属技术领域中具有通常知识者可认定以前述数值(如解离常数Kd)测定生物特性时，此数值差异具统计显著性。举例而言，此二数值的差异可大于大约10％、大于大约20％、大于大约30％、大于大约40％及/或大于大约50％，亦作为一参考/对照组分子的函数值。
本文所使用的“结合亲和力”(binding affinity)一词，系指分子(如抗体)上的单一结合部位与其结合对象(如抗原)间的非共价键交互作用总和强度。除非另外说明，否则本文中使用的“结合亲和力”一词系指“内在结合亲和力”(intrinsic binding affinity)，即结合组合成分间(如抗体与抗原)的一对一交互作用。分子X相对于其结合对象Y的亲和力，可以解离常数Kd表示。亲和力可透过习知方法测定，包括本文中所述的方法。一般而言，低亲和力抗体会与抗原缓慢结合，且容易与的解离，而高亲和力抗体则会与抗原快速结合，且能长时间维持结合状态。习知技术已包含多种测定结合亲和力的方法，其中任一方法皆可用于达成本发明的目的。特定数种示例性实施例如下述。
“抗体(Abs)”与“免疫球蛋白(Igs)”皆为具同样结构特性的糖蛋白。抗体具备结合特异性，会与特定抗原结合，而免疫球蛋白则同时包括抗体与其他不具抗原特异性之类抗体分子。以后者为例，其多肽结构由淋巴系统及骨髓瘤(myeloma)生成，由淋巴系统制造时产量低，而由骨髓瘤制造时产量高。
此处的“抗体”与“免疫球蛋白”二词系属广义用法，可相互替代使用，且包括单克隆抗体(如长度完整或结构完整的单克隆抗体)、多克隆抗体、单价(monovalent)及多价(multivalent)抗体、多特异性抗体(如可表现出预期生物活性的双特异性抗体)，同时可包含特定抗体片段(如本文所详述)。抗体可为嵌合、人源、仿人化及/或经亲和力熟成。
抗体的“可变区域”(variable region)或“可变域”(variable domain)系指该抗体重链或轻链的氨端域(amino-terminal domain)。一般而言，该些区域皆为抗体上变异最大的区域，且包含抗原结合位置。
“可变”一词，系指可变域中特定部分序列会与抗体其他部分呈现高度差异，且该些特定部分亦参与各抗体与其目标抗原结合的专一结合反应。然而，各抗体可变域具备的可变程度仍互有差距。轻链与重链可变域中三个称为互补性决定区(complementarity-determining regions,CDRs)或高度变异区(hypervariable regions)的片段，为可变程度最高的区域。可变域中较为稳定的部分称为框架(framework,FR)。天然重链与轻链的可变域各自包含四块框架区，主要呈现β折迭态(beta-sheet configuration)，彼此由三个互补性决定区相互连接，互补性决定区又形成环状连接结构，在某些情况下亦会形成β折迭结构的一部分。框架区使各链上的互补性决定区彼此紧邻，并与其他链上的互补性决定区一同形成抗体的抗原结合位置(见Kabat et al.,Sequences of Proteins of ImmunologicalInterest,Fifth Edition,National Institute of Health,Bethesda,Md.(1991))。恒定域(constant domains)不直接参与抗体与抗原结合反应，但会表现出不同效应物功能(effector functions)，例如抗体会参与抗体依赖型细胞毒杀作用(antibody-dependentcellular toxicity)。
使用木瓜蛋白酶(papain)分解抗体后，会产生两个完全相同、各自具备一抗原结合位置的抗原结合片段，称为“Fab”片段，同时亦会产生另一“Fc”片段，此命名呼应该片段易于结晶(crystallize)的能力。使用胃蛋白酶(pepsin)分解抗体后，则产生一F(ab’)2片段，该片段具备两个抗原结合位置，且仍可与抗原进行交联反应。
“Fv”为最小抗体片段，其中包含完整抗原辨识与结合位置。在双链Fv类(two-chain Fv species)片段上，抗原辨识与结合区包含由重链与轻链可变域组成的双体，此二可变域以非共价键紧密结合。在单链Fv类(single-chain Fv species)片段上，重链与轻链可变域可经由弹性肽接头(peptide linker)以共价键彼此相连，最后使各轻链与重链处于类似双链Fv类片段上的“双体”结构，于彼此的间产生链接。在此方面中，每一可变域的三块互补性决定区于彼此之间进行交互作用，以于轻链可变域-重链可变域双体结构表面上划定抗原结合位置。该六块互补性决定区会一同赋予该抗体抗原结合特异性。然而，各单一可变域(或半个Fv片段，其中仅包含三块具抗原特异性的互补性决定区)皆具备辨识与结合抗原的能力，惟其亲和力较整体结合位置低。
该Fab片段亦包含该轻链的恒定域及该重链的第一恒定域(CH1)。Fab'片段与Fab片段的差异，在于前者为于后者重链第一恒定域羧基端添加残基，如来自抗体铰链区(hinge region)的一或多个半胱氨酸(cysteines)。本文使用的Fab'-SH一词用以指称恒定域的半胱氨酸残基具有自由硫醇基(free thiol group)的Fab'片段。F(ab')2抗体片段最初产生时，其形式为一对Fab'片段，其间具有作为铰链的半胱氨酸。其他经化学耦合的抗体片段亦属习知。
脊椎生物的抗体(免疫球蛋白)中的轻链可分为两大类，一为κ(kappa)类，二为λ(lambda)类，分类方式依恒定域氨基酸序列而定。
就重链恒定域的氨基酸序列而言，可将抗体(免疫球蛋白)分为五大类型，包括IgA、IgD、IgE、IgG及IgM，而其中几类则可再分出子类(同型)，如IgG1、IgG2、IgG3、IgG4、IgA1、IgA2。对应不同免疫球蛋白分类的重链恒定域则分别称为α、δ、ε、γ及μ。各子类型结构及各类免疫球蛋白的三维样态属习知技术，并见于诸多文献中，如Abbas et al.Cellular andMol.Immunology,4th ed.(2000)。抗体可为大型融合分子的一部分，该分子由该抗体与一或多个其他蛋白质或肽分子以共价键或非共价键结合而成。
本文所使用的“完整长度抗体”、“完好抗体”、“完整抗体”等词可替代使用，皆指形态实质完整的抗体，而非如以下所定义的抗体片段。该些词汇尤其指具有包含Fc区的重链的抗体。
“抗体片段”仅包含完好抗体的一部分，其保留该部分存在于完好抗体中的至少一部分、几乎全部或全部的片段功能。在某一实施例中，抗体片段包含该完好抗体的抗原结合位置，且因此保留抗原结合能力。在另一实施例中，抗体片段(如包含该Fc区的抗体片段)保留了该部分存在于完好抗体中的至少一项Fc区基本生物功能，例如Fc受体结合(FcRnbinding)、抗体半生期调节、抗体依赖型细胞毒杀作用(ADCC)、补体结合等功能。在某一实施例中，抗体片段为单价抗体，其于活体内的半生期与完好抗体实质相似。举例而言，该抗体片段可包含抗原结合臂，而该结合臂与赋予该片段活体内稳定性的Fc序列连接。
本文所使用的“单克隆抗体”一词，系指取自一实质同质抗体群的抗体，除自然产生的微量基因变异种类外，包含于该抗体群的个别抗体皆无二致。因此，“单克隆”一词意指该抗体并非由不同的抗体相混而成。一般而言，单克隆抗体包括一抗体，此抗体包含与目标结合的多肽序列，其中与目标结合的多肽序列自一方法取得，该方法包括自复数个多肽序列中，挑选能与单一目标结合的多肽序列。举例而言，该挑选方法可为自复数个克隆挑选一特殊克隆，该复数个克隆可为一群融合瘤克隆(hybridoma clones)、噬菌体克隆(phageclones)或重组DNA克隆。应了解，经挑选的目标结合序列可被进一步修改，以达到提高与目标结合的亲和力、将该目标结合序列人源化、提升细胞培养产量、降低该序列于活体内实验(in vivo)的免疫原性、制造多特异性抗体等目的。同时应了解，包含该经修改目标结合序列的抗体，亦属于本文所述的单克隆抗体。制备单克隆抗体与制备多克隆抗体不同，后者一般包含针对不同表位(detetminants(epitopes))的不同抗体，而前者则包含针对单一抗原表位的单克隆抗体。单克隆抗体制程除具特异性外，另一优点为不受其他免疫球蛋白污染。“单克隆”一词意指该抗体取自一同构型抗体群，不应被理解为需要透过特定方法生成该抗体。举例而言，本文中所使用的单克隆抗体，可透过许多技术产制而成，例如融合瘤方法(见Kohler et al.,Nature,256:495(1975)；Harlow et al.,Antibodies:A LaboratoryManual,(Cold Spring Harbor Laboratory Press,2nd ed.1988)；Hammerling et al.,in:Monoclonal Antibodies and T-Cell hybridomas 563-681(Elsevier,N.Y.,1981))、重组DNA方法(见美国专利第4,816,567号)、噬菌体呈现技术(见Clackson et al.,Nature,352:624-628(1991)；Marks et al.,J.Mol.Biol.222:581-597(1992)；Sidhu et al.,J.Mol.Biol.338(2):299-310(2004)；Lee et al.,J.Mol.Biol.340(5):1073-1093(2004)；Fellouse,Proc.Natl.Acad.Sci.USA 101(34):12467-12472(2004)；及Lee et al.,J.Immunol.Methods 284(1-2):119-132(2004))，以及于动物体内制备人类抗体或类人抗体的技术，前述动物包含部分或全部人类免疫球蛋白基因座(human immunoglobulinloci)或编码人类免疫球蛋白序列的基因(见国际专利第WO98/24893号；第WO96/34096号；第WO96/33735号；第WO91/10741号；Jakobovits et al.,Proc.Natl.Acad.Sci.USA 90:2551(1993)；Jakobovits et al.,Nature 362:255-258(1993)；Bruggemann et al.,Yearin Immunol.7:33(1993)；美国专利第5,545,807号；第5,545,806号；第5,569,825号；第5,625,126号；第5,633,425号；第5,661,016号；Marks et al.,Bio.Technology 10:779-783(1992)；Lonberg et al.,Nature 368:856-859(1994)；Morrison,Nature 368:812-813(1994)；Fishwild et al.,Nature Biotechnol.14:845-851(1996)；Neuberger,NatureBiotechnol.14:826(1996)及Lonberg and Huszar,Intern.Rev.Immunol.13:65-93(1995))。
本文的单克隆抗体特别包括“嵌合”(chimeric)抗体，此类抗体重链及/或轻链的一部分，与衍生自特定物种的抗体或属于一特定抗体类型或子类型的对应序列完全相同或者同源。至于重/轻链上其他部分，则与衍生自另一特定物种的抗体或属于另一特定抗体类型或子类型的对应序列完全相同或者同源。只要该些嵌合抗体的片段表现出预期生物活性，嵌合抗体也包含前述抗体的片段(见美国专利第4,816,567号；及Morrison et al.,Proc.Natl.Acad.Sci.USA 81:6851-6855(1984))。
本文中的抗体亦可包括衍生自本文中抗体、且经嵌合或人源化的单克隆抗体。
该些抗体可具备完整长度，或包含具抗原结合位置抗体的一个(或多个)片段，包括但不限于Fab、F(ab')2、Fab'、F(ab)'、Fv、单链Fv(scFv)、双价单链Fv(bi-scFv)、三价单链Fv(tri-scFv)、Fd、dAb片段(见Ward et al.,Nature,341:544-546(1989))、互补性决定区、双链抗体(diabodies)、三链抗体(triabodies)、四链抗体(tetrabodies)、线性抗体(linear antibodies)、单链抗体分子，以及由抗体片段形成的多特异性抗体。本文中亦包含使用重组技术或合成接头连接抗体片段所生成的单链抗体。见Bird et al.Science,1988,242:423-426.Huston et al,Proc.Natl.Acad.Sci.USA,1988,85:5879-5883。
本文中的抗体或其上的抗原结合部分可为单一特异性、双特异性或多特异性。
本文中涵盖的所有同型抗体，包括IgG(如IgGl、IgG2、IgG3、IgG4)、IgM、IgA(IgAl、IgA2)、IgD或IgE(本文中涵盖其所有类型或子类型)。本文中的抗体或抗原结合部分可为哺乳动物(如老鼠或人类)抗体或抗原结合部分。此类抗体的轻链可为κ型或λ型。
因此，本发明的抗癌抗体包含非鼠源的一重链或轻链可变域、一重链或轻链恒定域、一框架区或任何前述部分的结合，较佳为人源，可并入本发明的抗体中。
抗体具备的重链可变域及轻链可变域，与自参考抗体产生抗体的重链可变域及轻链可变域至少大约70％、至少大约75％、至少大约80％、至少大约81％、至少大约82％、至少大约83％、至少大约84％、至少大约85％、至少大约86％、至少大约87％、至少大约88％、至少大约89％、至少大约90％、至少大约91％、至少大约92％、至少大约93％、至少大约94％、至少大约95％、至少大约96％、至少大约97％、至少大约98％、至少大约99％或至少大约100％同源。此类抗体亦可与Globo系列抗原(如Globo H、SSEA-3或SSEA-4)结合。同源性可以氨基酸或核苷酸序列呈现。
该些抗体或抗原结合部分可为肽。此类肽可包括肽的变异物、类似物、异种同源物(orthologs)、同源物及衍生物，其表现生物活性，如碳水化合物抗原的结合反应。该些肽可包含一或多个氨基酸类似物(包括，如非天然氨基酸、于不相关的生物系统中天然存在的氨基酸、来自哺乳动物的经改造的氨基酸等)、含经取代键结的肽，以及其他习知的修饰物。
本发明所涵盖的范围，亦包括特定氨基酸经取代、删除或插入的抗体或其抗原结合部分。在某一示例性实施例中，前述改变不会替肽的生物特性(如结合亲和力)带来实质影响。在另一示例性实施例中，抗体可于框架区中具备氨基酸取代物，以改善抗体对抗原的结合亲和力。在又另一示例性实施例中，经选定的少量受者框架残基(acceptor frameworkresidues)可被对应的供者氨基酸(donor amino acids)取代。供者框架可为成熟或性腺人类抗体框架序列或共通序列(consensus sequence)。关于产制不表现性状氨基酸取代的原则方法，可见Bowie et al.,Science,247:1306-1310(1990)、Cunningham et al,Science,244:1081-1085(1989)、Ausubel(ed.),Current Protocols in Molecular Biology,JohnWiley and Sons,Inc.(1994)、T.Maniatis,E.F.Fritsch and J.Sambrook,MolecularCloning:A Laboratory Manual,Cold Spring Harbor laboratory,Cold Spring Harbor,N.Y.(1989)、Pearson,Methods Mol.Biol.243:307-31(1994)、Gonnet et al.,Science256:1443-45(1992)。
该抗体或其抗原结合部分，可衍生化或键结至与另一官能分子。举例而言，抗体可透过功能性连接(如化学耦合、基因融合、非共价键交互作用等)至一或多个其他分子结构，如另一抗体、可侦测制剂(detectable agent)、细胞毒性毒杀制剂(cytotoxic agent)、医药制剂、可以媒介与其他分子(如链霉亲和素核心区(streptavidin core region)或聚组氨酸标签(polyhistidine tag))链接的蛋白质或肽、氨基酸链接分子、讯号序列(signalsequences)、免疫原性载体(immunogenic carriers)或对蛋白质纯化有帮助的配体(ligand)，如谷胱甘肽S转移酶(glutathione-S-transferase)、组氨酸标签及金黄色葡萄球菌A蛋白(staphylococcal protein A)。其中一种衍生蛋白系由二或多个蛋白(属同类型或不同类型)交联而成。合适的交联剂包括异质双功能性(heterobifunctional)交联剂，其具备以适当分隔物(如马来酰亚胺苯甲酸琥珀酰亚胺酯(m-maleimidobenzoyl-N-hydroxysuccinimide ester))分隔的两个不同反应基，或包括同质双功能性(homobifunctional)交联剂(如双琥珀酰亚胺辛二酸酯(disuccinimidyl suberate))。该些接头可自Pierce Chemical Company,Rockford,111取得。可衍生(或标示)蛋白质的有用的可侦测制剂，包括荧光化合物、多种酶、辅基(prosthetic groups)、发光材料、生物发光材料及放射性材料。示例性荧光可侦测制剂包括且不限于荧光素(fluorescein)、荧光异硫氰酸盐(fluorescein isothiocyanate)、罗丹明(rhodamine)及藻红蛋白(phycoerythrin)。蛋白质或抗体亦可透过可侦测酶而衍生化，可侦测酶种类如碱性磷酸酶(alkaline phosphatase)、辣根过氧化物酶(horseradish peroxidase)、β半乳糖苷酶(beta-galactosidase)、乙酰胆碱酯酵素(acetylcholinesterase)、葡萄糖氧化酶(glucose oxidase)与类似物。蛋白质亦可透过辅基(如链霉亲和素(streptavidin)/生物素(biotin)及抗生物素蛋白(avidin)/生物素)而衍生化。
编码本文中所述抗体或其抗原结合部分的功能活性变异物的核酸，亦涵盖于本申请案范围内。该些核酸分子可与编码本文中任一抗体或其抗原结合部分的核酸在中严格度(stringency)、高严格度或极高严格度条件下杂交。实施杂交反应的指南，可见于CurrentProtocols in Molecular Biology,John Wiley&Sons,N.Y.6.3.1-6.3.6,1989，其全部内容以引用方式并入本文中。本文所述的特定混成条件包括以下：(1)中严格度混成条件：于大约45℃下施以6X SSC缓冲液，再于60℃下以0.2X SSC缓冲液、0.1％十二烷基硫酸钠(SDS)清洗一或多次；(2)高严格度混成条件：于大约45℃下施以6 X SSC缓冲液，再于65℃下以0.2 X SSC缓冲液、0.1％SDS清洗一或多次(3)极高严格度混成条件：于65℃下施以0.5M磷酸钠(sodium phosphate)、7％SDS，再于65℃下以0.2 X SSC缓冲液、1％SDS清洗一或多次。
编码本文中所述抗体或其抗原结合部分的核酸，可嵌入于表达载体中，而该表达载体可于合适表达系统中表达，再将表达出的抗体或其抗原结合部分分离或纯化。视情况而定，编码本文中抗体或其抗原结合部分的核酸可于无细胞翻译系统(cell-freetranslation system)中进行翻译。见美国专利第4,816,567号，及Queen et al,Proc NatlAcad Sci USA,86:10029-10033(1989)。
本文中所述抗体或其抗原结合部分可透过宿主细胞制备而成，而该宿主细胞系以编码目标抗体轻链与重链(或其部分)的DNA而转型。抗体可自培养物上清液及/或细胞以标准技术分离并纯化取得。举例而言，宿主细胞可以编码抗体轻链、重链或前述两者的DNA而完成转型。DNA重组技术亦可用于移除某些或所有编码非结合反应必要元素的轻链、重链或前述两者的DNA，如稳定区。
本文中所述的核酸可于各种合适细胞中表达，其包括原核与真核细胞，如细菌细胞(例如大肠杆菌)、酵母菌细胞、植物细胞、昆虫细胞及哺乳动物细胞。许多哺乳动物克隆为本发明所属技术领域中所习知，且包含可自美国典型菌种保存中心(American TypeCulture Collection,ATCC)取得之不死克隆。该些细胞包括且不限于所有源于哺乳动物或类哺乳动物之克隆，包括但不限于猴肾细胞(COS，如COS-1、COS-7)、HEK293细胞、幼仓鼠肾细胞(BHK，如BHK21)、中国仓鼠卵巢细胞(CHO)、NSO细胞、PerC6细胞、BSC-1细胞、人类肝细胞癌细胞(如Hep G2)、SP2/0细胞、HeLa细胞、Madin-Darby牛肾细胞(Madin-Darby bovinekidney,MDBK)、骨髓癌细胞及淋巴癌细胞的母细胞、衍生物及/或其基因改造变异物。经基因改造之变异物包含如经糖链图谱(glycan profile)改造及/或具位置特异性嵌入位置(site-specific integration site)之衍生物。
本文中亦提供包含本文中所述核酸的细胞。该细胞可为融合瘤或经转染的细胞(transfectant)。
或者，本文中所述的抗体或其抗原结合部分可由本发明所属技术领域中所习知之固相流程(solid phase procedures)技术合成。见Solid Phase Peptide Synthesis:APractical Approach by E.Atherton and R.C.Sheppard,published by IRL at OxfordUniversity Press(1989)、Methods in Molecular Biology,Vol.35:Peptide SynthesisProtocols(ed.M.W.Pennington and B.M.Dunn),chapter 7.Solid Phase PeptideSynthesis,2nd Ed.,Pierce Chemical Co.,Rockford,IL(1984)、G.Barany andR.B.Merrifield,The Peptides:Analysis,Synthesis,Biology,editors E.Gross andJ.Meienhofer,Vol.1 and Vol.2,Academic Press,New York,(1980),pp.3-254、M.Bodansky,Principles of Peptide Synthesis,Springer-Verlag,Berlin(1984)。
“人源化”(humanized)形式的非人(如鼠科)抗体属于嵌合抗体，其中包含衍生自非人免疫球蛋白之最小序列。在某一实施例中，人源化抗体为人类免疫球蛋白(受者抗体)，其中该受者抗体之高变域残基会被非人物种(供者抗体)之高变域残基取代，该非人物种可为具目标结合特异性、亲和力及/或能力之小鼠、大鼠、兔子或非人灵长类动物。在某些实例中，该人类免疫球蛋白之框架残基会被对应的非人残基取代。此外，人源化抗体可能包含不属于该受者抗体或该供者抗体之残基。以上进行之修饰，目的皆为进一步改善抗体表达。一般而言，该人源化抗体实质上会包含至少一组、通常两组之完整可变域，其中整体或实质上整体的可变域环会对应至非人免疫球蛋白之可变域环，且其中整体或实质上整体的框架具备人类免疫球蛋白序列。该人源化抗体会选择性包含至少一部分的免疫蛋白恒定域(Fc)，一般为人类免疫球蛋白之恒定域。更多详细说明，可参考Jones et al.,Nature 321:522-525(1986)；Riechmann et al.,Nature 332:323-329(1988)；and Presta,Curr.Op.Struct.Biol.2:593-596(1992).See also the following review articlesand references cited therein:Vaswani and Hamilton,Ann.Allergy,Asthma&Immunol.1:105-115(1998)；Harris,Biochem.Soc.Transactions 23:1035-1038(1995)；Hurle and Gross,Curr.Op.Biotech.5:428-433(1994)。
本文所使用的“高变域”(hypervariable region、HVR或HV)一词，系指抗体可变域中序列出现高度变异及/或形成结构定义环(structurally defined loops)之区域。一般而言，抗体包含六个高变域，三个位于重链可变域(H1、H2、H3)，另三个位于轻链可变域(L1、L2、L3)。本文使用并涵盖多种高变域之叙述。Kabat互补性决定区系依据序列可变性而标定，且为最广泛使用的类型(见Kabat et al.,Sequences of Proteins of ImmunologicalInterest,5th Ed.Public Health Service,National Institutes of Health,Bethesda,Md.(1991))。不过，Chothia则认为环状结构(structural loop)处为可变域(见Chothiaand Lesk J.Mol.Biol.196:901-917(1987))。
“框架”(framework)或“框架”残基为可变域残基，但非本文定义之高变域残基。
本文所使用的“Kabat可变域残基编号”或“Kabat氨基酸位置编号”及其变异物等词，系指用于Kabat et al.,Sequences of Proteins of Immunological Interest,5thEd.Public Health Service,National Institutes of Health,Bethesda,Md.(1991)所汇整的抗体重链或轻链可变域之编号系统。透过此编号系统，可使真实存在之线性氨基酸序列于该可变域之框架或高变域长度缩短或纳入新片段，而包含较少或额外的氨基酸。举例而言，重链可变域可于H2之52号残基后包括单独插入氨基酸(Kabat所称之52a号残基)，及于重链框架82号残基后包括多个插入残基(如Kabat所称之82a、82b、82c号等残基)。针对一抗体使用Kabat残基编号法时，可以“标准”Kabat编号序列与该抗体序列同源性区域进行比对，以决定编号方式。
“单链Fv”抗体片段包含抗体重链及轻链可变域，其中该些区域以单一多肽链呈现。一般而言，单链Fv多肽进一步于重链及轻链可变域之间包含一多肽接头，该接头可使该单链Fv形成期望之结合抗原的结构。单链Fv相关评论可参考Pluckthun所著之ThePharmacology of Monoclonal Antibodies,vol.113,Rosenburg and Moore eds.,Springer-Verlag,New York,pp.269-315(1994)。
“双链抗体”一词系指具备两个抗原结合位置之小型抗体片段，该些片段包含在同一条多肽链(重链-轻链)上与某轻链可变域连接之重链可变域。透过利用一过短而无法使位于同一条链上的两个可变域进行配对之接头，便能强制使该些区域与另一链上的互补区域组合，并生成两个抗原结合位置。关于双链抗体之详细描述可参考欧洲专利第EP 404,097号、国际专利第WO93/1161号以及Hollinger et al.,Proc.Natl.Acad.Sci.USA 90:6444-6448(1993)。
“人类抗体”系为具备氨基酸序列的抗体，其中该氨基酸序列与人类所产生抗体的氨基酸序列相对应及/或该氨基酸序列系以任何本文中公开的制造人类抗体之任何技术所制造。前述人类抗体之定义，特别排除包含非人抗原结合残基之人源化抗体。
“亲和力成熟”的抗体，系于一或多个高变域内具有一或多个变异的抗体，与未经过变异的亲代抗体相比，经过变异后该抗体对抗原之亲和力提升。在某一实施例中，亲和力成熟抗体对目标抗原之亲和力为10-9莫耳，或甚至为10-12莫耳。亲和力成熟抗体由本发明所属技术领域中习知流程所制备。Marks et al.Bio/Technology 10:779-783(1992)以重链与轻链可变域改组解释亲和力成熟过程。互补性决定区及/或框架残基之随机突变相关描述，可见Barbas et al.Proc Nat.Acad.Sci.USA 91:3809-3813(1994)；Schier etal.Gene 169:147-155(1995)；Yelton et al.J.Immunol.155:1994-2004(1995)；Jacksonet al.,J.Immunol.154(7):3310-9(1995)；及Hawkins et al.,J.Mol.Biol.226:889-896(1992)。
“阻断”(blocking)抗体或“拮抗”(antagonist)抗体，系抑制或减少所结合抗原生物活性的抗体。特定阻断抗体或拮抗抗体会实质或完全抑制该抗原之生物活性。
本文所使用的“激动性抗体”(agnoist antibody)一词，系指仿真目标多肽所具备之至少一种功能活性的抗体。
“病症(disorder)”系指能因施用本文中所述的抗体而改善之任何状态。此异常包括慢性与急性病症或疾病，包括使哺乳动物容易陷入所谓病症之病态条件。有待治疗的病症包括但不限于癌症。
本文所使用的“细胞增殖病症”及“增殖病症”等词，系指与某种程度异常的细胞增殖现象有关之病症。在某一实施例中，该细胞增殖病症为癌症。
本文所使用的“肿瘤”一词，系指无论恶性或良性之所有赘生(neoplastic)细胞的生长及增殖现象，及指所有癌前期(pre-cancerous)及癌症型(cancerous)细胞与组织。本文所使用的“癌症”、“癌症型”、“细胞增殖病症”、“增殖病症”及“肿瘤”等词并非互斥。
“癌症”及“癌症型”系指或描述哺乳动物体内之生理现象，其特征一般为细胞生长/增殖不受控制。癌症种类包括但不限于上皮瘤、淋巴瘤(如何杰金(Hodgkin's)及非何杰金淋巴瘤)、胚细胞瘤(blastoma)、恶性肉瘤及血癌。此类特定癌症种类还包括鳞状细胞癌(squamous cell cancer)、小细胞肺癌、肺腺癌(adenocarcinoma of the lung)、肺鳞状上皮细胞癌(squamous carcinoma of the lung)、腹膜(peritoneum)、肝细胞癌、胃肠道癌(gastrointestinal cancer)、胰脏癌、胶质母细胞瘤、子宫颈癌、卵巢癌、肝脏癌、膀胱癌、肝癌(hepatoma)、乳癌、肠癌、结肠直肠癌、子宫内膜癌(endometrial carcinoma)或子宫癌(uterine carcinoma)、唾液腺癌、肾脏癌、肝脏癌、前列腺癌、外阴癌(vulval cancer)、甲状腺癌、肝癌(hepatic carcinoma)、血癌与其他淋巴增殖病症(lymphoproliferativedisorders)，以及多种类型之头颈癌。
本文所使用的“治疗”一词，系指施用临床介入以达改变被治疗个体或细胞自然发展进程之目的，而治疗亦可为预防疾病或于临床症状出现时施用。预期之治疗效果包括预防疾病发作或复发、减轻症状、使任何该疾病直接或间接导致之病理状况消失、预防或减轻发炎及/或组织/器官伤害、降低疾病恶化速率、改善或缓和患病状态，以及使病患复原或改善预后情况。在某些实施例中，本发明的抗体用于延缓疾病或病症之发展速率。
本文中之“个体”或“受试者”为脊椎动物。在特定实施例中，该脊椎动物为哺乳动物，包括但不限于农场动物(如牛)、竞赛用动物、宠物(如猫、狗及马)、灵长类动物、小鼠及大鼠。在特定实施例中，该脊椎动物为人类。
用于治疗之“哺乳动物”系指任何属于哺乳类之动物，包括人类、家庭或农场豢养之动物，以及动物园动物、竞赛用动物或宠物动物，如狗、马、猫、牛等。在特定实施例中，该哺乳动物为人类。
“有效量”系指能在剂量上及所需时间内持续有效之剂量，用以达到预期之治疗及预后成果。
本文中所述的物质/分子之“治疗有效量”可随不同因素改变，包括个体之患病状态、年龄、性别及体重，以及该物质/分子于该个体体内引起预期反应之能力。治疗有效量亦指其正向治疗效果高过该物质/分子具备之任何毒性或损坏效果。“预防有效量”系指能在剂量上及所需时间内持续有效之剂量，用以达到预期之预防结果。在一般但非必然情况下，由于预防剂量会在患病前或患病初期施用于受试者体内，故该预防有效量会低于该治疗有效量。
“组合物”系指组合疗法，其中该抗体药物缀合物及/或其他生物或化学药物共同施用时(即共同施用及/或共同配方之情形)，无论为依序或同时施用、于治疗周期内同一日或不同日施用，皆可形成具备高度疗效、超越加成疗效之增效作用。
“癌症”及“癌症型”系指或描述哺乳动物体内之一生理现象，其特征一般为细胞生长/增殖不受控制。“肿瘤”包含一或多个癌症细胞。癌症种类包括但不限于上皮瘤、淋巴瘤、胚细胞瘤、恶性肉瘤及血癌或淋巴恶性瘤。
本文所使用的“细胞毒性剂”一词，系指能抑制或遏止细胞功能及/或破坏细胞之物质。该词意图包括放射性同位素(如砈-211、碘-131、碘-125、钇-90、铼-186、铼-188、钐-153、铋-212、磷-32、碳-60，及镏-117、锶-89、钐(钐-153)之放射性同位素)、化疗制剂及毒素，例如小分子毒素或经酵素活化之细菌、真菌、植物或动物源毒素，包括合成类似物或其衍生物。
“光动力疗法(photodynamic therapy,PDT)”，或称光化学疗法，为一种透过光与光敏感化学物质之光疗法，搭配氧分子共同使用使细胞死亡(即光毒性)。光动力疗法可用来治疗多种之临床症状，包括湿性老年黄斑部病变(wet age-related maculardegeneration)、银屑病(psoriasis)、动脉粥状硬化(atherosclerotic)，而用来治疗带状疱疹等病毒性症状亦具备一定疗效。此疗法亦可用来治疗恶性肿瘤，包括头颈癌、肺癌、膀胱癌、皮肤癌及摄护腺癌(参考Wang,SS et al.Cancer Journal.8(2):154–63.2002)。该“光动力疗法制剂”选自福得灵(Photofrin)、他拉泊芬钠注射液(Laserphyrin)、氨基酮戊酸(Aminolevulinic acid(ALA))、硅钛菁4(Silicon Phthalocyanine Pc 4)、m-四羟甲基氯化膦(m-tetrahydroxyphenylchlorin(mTHPC))、二氢卟吩e6(chlorin e6(Ce6))、Allumera、氨基乙酰丙酸(Levulan)、替莫泊芬注射剂(Foscan)、Metvix、Hexvix、光克洛(Photochlor)、Photosens、Photrex、Lumacan、Visonac、Amphinex、维视达冻晶注射剂(Verteporfin)、Purlytin、ATMPn、锌钛菁(Zinc phthalocyanine(ZnPc))、原紫质(Protoporphyrin IX(PpIX))、焦脱镁叶绿酸盐-a(Pyropheophorbide-a(PPa))或脱镁叶绿酸盐-a(Pheophorbide a(PhA))。
“化疗制剂”为能有效治疗癌症之化学化合物。示例性化疗制剂种类包括单甲基奥瑞斯他丁E(MMAE)、单甲基奥瑞斯他丁F(MMAF)、mertansine(又称DM1)、蒽环霉素(anthracycline)、吡咯苯二氮平(pyrrolobenzodiazepine)、α-amanitin、tubulysin、苯二氮平(benzodiazepine)、得舒缓膜衣锭(erlotinib,Genetech/OSIPharm.)、万科注射剂(Millenium Pharm.)、法洛德注射液(Astrazeneca)、纾癌特胶囊(SU11248,Pfizer)、复乳纳膜衣锭(Novartis)、基利克膜衣锭(Novartis)、PTK787/ZK222584(Novartis)、益乐铂注射液(Sanofi)、亚叶酸(leucovorin)、斥消灵锭(Sirolimus,Wyeth)、泰嘉锭膜衣锭(GSK572016,GlaxoSmithKline)、lonafarnib(SCH 66336)、sorafenib(蕾莎瓦膜衣锭BAY43-9006,Bayer Labs.)及艾瑞莎膜衣锭(Astrazeneca)、AG1478、AG1571(SU 5271；SUGEN)、烯烃基化剂如thiotepa及环磷酰胺烷基磺酸盐例如busulfan(补束克注射剂)、二丙胺磺酯(improsulfan)和呱泊舒凡(piposulfan)；氮丙啶例如苄多巴(benzodopa)、卡巴醌(carboquone)、美妥多巴(meturedopa)及乌瑞多巴(uredopa)；次乙亚胺(ethylenimine)及甲基三聚氰胺(methylamelamine)，包括六甲蜜胺(altretamine)、曲他胺(triethylenemelamine)、三乙烯磷酰胺(triethylenephosphoramide)、三乙烯硫代磷酰胺(triethylenethiophosphoramide)及三甲基蜜胺(trimethylolomelamine)；多聚乙酰(尤其bullatacin及bullatacinone)；喜树碱(包括合成类似物托普乐肯(topotecan))；bryostatin；callystatin；CC-1065(包括其阿多来新(adozelesin)、卡折来新(carzelesin)及比折来新(bizelesin)合成类似物)；隐花素(cryptophycin)(尤其隐花素1及隐花素8)；海兔毒素(dolastatin)；多卡霉素(duocarmycin)(包括合成类似物KW-2189及CB1-TM1)；红葱甲素(eleutherobin)；pancratistatin；sarcodictyin；海绵抑素(spongistatin)；氮芥类如苯丁酸氮芥(chlorambucil)、萘氮芥(chlornaphazine)、胆磷酰胺(cholophosphamide)、雌莫司汀(estramustine)、异环磷酰胺(ifosfamide)、氮芥(mechlorethamine)、氧氮芥盐酸盐(mechlorethamine oxide hydrochloride)、美法仑(melphalan)、新恩比兴(novembichin)、苯乙酰胆固醇氮芥(phenesterine)、松龙苯芥(prednimustine)、三芥环磷酰胺(trofosfamide)、尿嘧啶芥(uracil mustard)；亚硝基脲(nitrosurea)如亚硝基脲氮芥(carmustine)、氯脲霉素(chlorozotocin)、福莫司汀(fotemustine)、洛莫司汀(lomustine)、尼莫司汀(nimustine)和雷诺司汀(ranimustine)；抗生素如烯二炔类抗生素(如卡奇霉素(calicheamicin)，尤其卡奇霉素γlI和卡奇霉素ωIl，参考Agnew Chem Intl.Ed.Engl.(1994)33:183-186)；蒽环类抗生素(dynemicin)，包括dynemicin A；双膦酸盐类，如氯膦酸盐(clodronate)；埃斯波霉素(esperamicin)；以及新制癌素(neocarzinostatin)发色团与相关之色蛋白烯二炔类抗生素发色团)、阿克拉霉素(aclacinomycin)、放线菌素(actinomycin)、氨茴霉素(authramycin)、偶氮丝氨酸(azaserine)、博来霉素(bleomycin)、放线菌素C(cactinomycin)、卡拉比星(carabicin)、洋红霉素(carminomycin)、嗜癌霉素(carzinophilin)、色霉素(chromomycin)、放线菌素D(dactinomycin)、唐霉素(daunorubicin)、地托比星(detorubicin)、6-二氮-5-氧-L-正亮氨酸(6-diazo-5-oxo-L-norleucine)、多柔比星(doxorubicin)(包括吗啉代多柔比星(morpholino-doxorubicin)、氰基吗啉代多柔比星(cyanomorpholino-doxorubicin)、2-吡咯代多柔比星及脱氧多柔比星(2-pyrrolino-doxorubicin anddeoxydoxorubicin))、表柔比星(epirubicin)、依索比星(esorubicin)、伊达比星(idarubicin)、麻西罗霉素(marcellomycin)、丝裂霉素类(mitomycins)如丝裂霉素C、霉酚酸(mycophenolic acid)、诺拉霉素(nogalamycin)、橄榄霉素(olivomycin)、培洛霉素(peplomycin)、泊非霉素(potfiromycin)、嘌呤霉素(puromycin)、三铁阿霉素(quelamycin)、罗多比星(rodorubicin)、链黑菌素(streptonigrin)、链佐星(streptozocin)、杀结核菌素(tubercidin)、乌苯美司(ubenimex)、净司他丁(zinostatin)、佐柔比星(zorubicin)；抗代谢物类，如甲氨蝶呤(methotrexate)及5-氟尿嘧啶(5-FU)；叶酸类似物，如二甲叶酸(denopterin)、蝶罗呤(pteropterin)、三甲曲沙(trimetrexate)；嘌呤类似物，如氟达拉滨(fludarabine)、6-巯嘌呤(6-mercaptopurine)、硫咪嘌呤(thiamiprine)、硫鸟嘌呤(thioguanine)；嘧啶类似物，如安西他滨(ancitabine)、阿扎胞苷(azacitidine)、6-氮尿苷(6-azauridine)、卡莫氟(carmofur)、阿糖胞苷(cytarabine)、双脱氧尿苷(dideoxyuridine)、脱氧氟尿苷(doxifluridine)、依诺他滨(enocitabine)、氟尿苷(floxuridine)；雄激素类，如卡鲁睪酮(calusterone)、丙酸屈他雄酮(dromostanolone propionate)、表硫雄醇(epitiostanol)、美雄烷(mepitiostane)、睪内酯(testolactone)；抗肾上腺类，如氨鲁米特(aminoglutethimide)、米托坦(mitotane)、曲洛司坦(trilostane)；叶酸补充剂，如亚叶酸(folinic acid)；醋葡醛内酯(aceglatone)；醛磷酰胺糖苷(aldophosphamide glycoside)；胺基乙酰丙酸(aminolevulinic acid)；恩尿嘧啶(eniluracil)；安吖啶(amsacrine)；bestrabucil；比生群(bisantrene)；依达曲沙(edatraxate)；地磷酰胺(defofamide)；地美可辛(demecolcine)；亚胺醌(diaziquone)；elformithine；依利醋铵(elliptinium acetate)；埃坡霉素(epothilone)；依托格鲁(etoglucid)；硝酸镓；羟脲(hydroxyurea)；香菇多糖(lentinan)；氯尼达明(lonidamine)；美登木素生物碱类(maytansinoids)，如美登素(maytansine)及安丝菌素(ansamitocin)；米托胍腙(mitoguazone)；米托蒽醌(mitoxantrone)；莫哌达醇(mopidamol)；根瘤菌剂(nitraerine)；喷司他丁(pentostatin)；蛋氨氮芥(phenamet)；吡柔比星(pirarubicin)；洛索蒽醌(losoxantrone)；鬼臼酸(podophyllinic acid)；2-乙基酰胼(2-ethylhydrazide)；丙卡巴胼(procarbazine)；多糖复合物(JHS Natural Products,Eugene,OR)；雷佐生(razoxane)；根霉素(rhizoxin)；西佐非兰(sizofiran)；螺旋锗(spirogermanium)；细交链孢菌酮酸(tenuazonic acid)；三亚胺醌(triaziquone)；2,2',2”-三氯三乙胺；单端孢菌素类(trichothecenes)(尤其T-2毒素、疣孢菌素A(verracurin A)、杆孢菌素A(roridin A)及蛇行菌素(anguidine))；胺基甲酸乙酯(urethan)；长春地辛(vindesine)；达卡巴仁(dacarbazine)；甘露莫司汀(mannomustine)；二溴甘露醇(mitobronitol)；二溴卫矛醇(mitolactol)；哌泊溴烷(pipobroman)；gacytosine；阿拉伯糖苷(arabinoside,"Ara-C")；环磷酰胺(cyclophosphamide)；thiotepa；类紫杉醇类(taxoids)，如汰癌胜注射液(paclitaxel)(Bristol-Myers Squibb Oncology,Princeton,N.J.)、聚氧乙烯蓖麻油(Cremophor)、清蛋白改造奈米颗粒剂型汰癌胜注射液(AmericanPharmaceutical Partners,Schaumberg,Illinois)及克癌易注射剂(doxetaxel)(Rhone-Poulenc Rorer,Antony,France)；苯丁酸氮芥(chlorambucil)；吉西他滨(gemcitabine)；6-硫鸟嘌呤(6-thioguanine)；巯基嘌呤(mercaptopurine)；甲氨蝶呤(methotrexate)；钼类似物，如顺钼(cisplatin)、奥沙利铂(oxaliplatin)及卡铂(carboplatin)；长春碱(vinblastine)；铂(platinum)；依托泊苷(etoposide)(VP-16)；异环磷酰胺(ifosfamide)；米托蒽醌(mitoxantrone)；长春新碱(vincristine)；长春瑞滨(vinorelbine)；双羟蒽醌注射液(novantrone)；替尼泊苷(teniposide)；依达曲沙(edatrexate)；唐霉素注射剂(daunomycin)；氨喋呤(aminopterin)；截瘤达锭(xeloda)；吉利康注射液(ibandronate)；CPT-11；拓扑异构酶抑制剂RFS 2000(topoisomerase inhibitor RFS 2000)；二氟甲基鸟氨酸(difluoromethylornithine,DMFO)；类视黄酸类(retinoids)，如视黄酸(retinoicacid)；截瘤达(capecitabine,XELODA,)；及任何上述物质之医药上可接受盐、酸或衍生物。
此处“化疗制剂”之定义亦包括：(i)抗激素制剂，其可调控或抑制激素对肿瘤造成之作用，例如抗雌激素剂及选择性雌激素受体调节剂(selective estrogen receptormodulators,SERMs)，包括tamoxifen(包括诺瓦得士锭tamoxifen)、raloxifene(钙稳膜衣锭)、droloxifene、4-hydroxytamoxifen、trioxifene、keoxifene、LY117018、onapristone及FARESTON toremifene(弗瑞斯锭)；(ii)芳香环酶抑制剂(aromatese inhibitor)，其可抑制芳香环酶，以达到调控肾上腺中雌激素产量之效果，包括4(5)-咪唑(4(5)-imidazoles)、aminoglutethimide、麦格斯口服悬液剂(megestrolacetate)、诺曼癌素糖衣锭(exemestane)、formestanie、fadrozole、(vorozole)、letrozole(复乳纳膜衣锭)及安美达锭(anastrozole)；(iii)抗雄激素剂，如flutamide(护腺宁锭)、nilutamide、bicalutamide(可苏多锭)、leuprolide(柳菩林注射液)、goserelin(诺雷德持续性注射剂)；以及troxacitabine(α-1,3-二氧戊环核苷胞嘧啶类似物(α-1,3-dioxolanenucleoside cytosine analog))；(iv)芳香环酶抑制剂；(v)蛋白激酶抑制剂(proteinkinase inhibitor)；(vi)脂质激酶抑制剂(lipid kinase inhibitor)；(vii)反义寡核苷酸(antisense oligonucleotide)，尤其为细胞异常增殖时，可抑制相关基因传输讯息之反义寡核苷酸，如蛋白激酶C-α、RALF及H-Ras基因；(viii)核酶，如血管内皮生长因子蛋白质抑制剂(如核酶)及HER2抑制剂；(ix)疫苗，如基因疗法疫苗，例如 rIL-2(普留净注射剂)、拓朴异构酶1抑制剂； rmRH；(x)抗血管新生制剂，如bevacizumab(癌思停注射剂Genentech)；及(xi)前述任一之医药上可接受的盐类、酸类或衍生物。
蛋白激酶抑制剂包括酪氨酸激酶抑制剂，可某种程度抑制如ErbB受体等酪氨酸激酶之活性。示例性酪氨酸激酶抑制剂包括针对EGFR之药物，如：(i)与EGFR结合的抗体，包括MAb 579(ATCC CRL HB 8506)、MAb 455(ATCC CRL HB8507)、MAb 225(ATCC CRL 8508)、MAb528(ATCC CRL 8509)(可参考美国专利第4,943,533号，Mendelsohn et al.)及其变异种类，如嵌合抗体225(C225或Cetuxim尔必得舒注射液(ERBITUX)，Imclone)及重构人类抗体225(H225)(WO 96/40210,Imclone Systems Inc.)；与第二型突变EGFR结合的抗体(美国专利第5,212,290号)；与EGFR结合之人源化及嵌合抗体(美国专利第5,891,996号)；及与EGFR结合之人类抗体，如ABX-EGF(WO 98/50433)；(ii)与的细胞毒性剂缀合之抗EGFR抗体(EP659439A2)；及与EGFR结合之小分子，包括ZD1839或Gefitinib(艾瑞莎膜衣锭IRESSATM；Astra Zeneca)、Erlotinib HCl(CP-358774，得舒缓膜衣锭TARCEVATM；Genentech/OSI)及AG1478、AG1571(SU 5271；Sugen)，吡啶并嘧啶(pyridopyrimidines)、嘧啶并嘧啶(pyrimidopyrimidines)、吡咯并嘧啶(pyrrolopyrimidines)，例如CGP 59326、CGP 60261及CGP 62706，以及吡唑啉酮嘧啶(pyrazolopyrimidines)、4-(苯胺)-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶，姜黄色素(二阿魏酰甲烷，4,5-(4-氟苯胺基)苯邻二甲酰亚胺)，含硝基噻吩基团之tyrphostines；PD-0183805(Warner-Lamber)；反义分子(例如与ErbB编码核酸结合之分子)；喹喔啉(美国专利第5,804,396号)；tryphostins(美国专利第5,804,396号)；ZD6474(Astra Zeneca)；PTK-787(Novartis/Schering AG)；泛-ErbB抑制剂例如CI-1033(Pfizer)；Affinitac(ISIS 3521；Isis/Lilly)；Imatinib mesylate(Gleevac；Novartis)；PKI 166(Novartis)；GW2016(Glaxo SmithKline)；CI-1033(Pfizer)；EKB-569(Wyeth)；Semaxanib(Sugen)；ZD6474(AstraZeneca)；PTK-787(Novartis/Schering AG)；INC-1C11(Imclone)；或于以下专利中所述：美国专利第5,804,396号；WO 99/09016(AmericanCyanamid)；WO 98/43960(American Cyanamid)；WO 97/38983(Warner Lambert)；WO 99/06378(Warner Lambert)；WO 99/06396(Warner Lambert)；WO 96/30347(Pfizer,Inc)；WO96/33978(Zeneca)；WO 96/3397(Zeneca)；及WO 96/33980(Zeneca)。
“抗血管新生制剂”(anti-angiogenic agent)指能阻断或某种程度上干扰血管生成之化合物。举例来说，抗血管新生因子可为会与生长因子结合或与促进血管新生之生长因子受体结合之小分子或抗体。抗血管新生制剂之示例性为会与血管内皮生长因子结合的抗体，如bevacizumab(癌思停注射剂(AVASTIN)，Genentech)。
“细胞激素”(cytokine)为一通称词，系指由一细胞群所释放、可作用于另一细胞以进行细胞间调节之蛋白质。细胞激素之示例性为淋巴激素、单核激素及传统之多肽激素。细胞激素包括生长激素，如人类生长激素、N-甲硫氨酰人类生长激素及牛生长激素；副甲状腺素；甲状腺素；胰岛素；胰岛素原；松弛素；松弛素原；糖蛋白激素，如促滤泡激素(FSH)、促甲状腺素(TSH)及黄体生成素(LH)；肝生长激素；纤维细胞生长因子；催乳素；胎盘催乳激素；肿瘤坏死因子-α与-β；穆勒氏管抑制物质；小鼠促性腺激素相关肽；抑制素；活化素；血管内皮生长因子；整联蛋白；血小板生成素(TPO)；神经生长因子，如NGF-β；血小板生长因子；转化生长因子(TGF)，如TGF-α及TGF-β；类胰岛素生长因子-I及-II；促红血球生成素(EPO)；骨诱导生长因子(osteoinductive factor)；干扰素，如干扰素-α、-β及-γ；聚落刺激因子(CSF)，如巨噬细胞-CSF(M-CSF)；粒细胞-巨噬细胞-CSF(GM-CSF)；及粒细胞-CSF(G-CSF)；白细胞介素(IL)，如IL-1、IL-1α、IL-2、IL-3、IL-4、IL-5、IL-6、IL-7、IL-8、IL-9、IL-10、IL-11、IL-12；肿瘤坏死因子，如TNF-α或TNF-β；及其他多肽因子，包括LIF及工具组配体(kit ligand,KL)。本文使用的细胞激素一词，系包括天然或源于重组细胞培养物之蛋白质，以及具原生序列细胞激素之生物活性等价物。
本发明使用的“前体药物”(prodrug)一词，系指医药上具活性物质之前驱物或衍生物形式，而相较于母药，该前驱物或衍生物对肿瘤细胞较无细胞毒性力，且可经酵素活化或转换为活性更强之母药形式。相关参考数据如Wilman,“Prodrugs in CancerChemotherapy”Biochemical Society Transactions,14,pp.375-382,615th MeetingBelfast(1986)and Stella et al.,“Prodrugs:A Chemical Approach to Targeted DrugDelivery,”Directed Drug Delivery,Borchardt et al.,(ed.),pp.247-267,HumanaPress(1985)。本发明的前体药物包括但不限于含磷酸盐前体药物、含硫代磷酸盐前体药物、含肽前体药物、经D-氨基酸修饰之前体药物、糖基化前体药物、含β-内酰胺前体药物、含可选择性被取代的苯氧基乙酰胺之前体药物，或者含可选择性被取代的苯基乙酰胺之前体药物、5-氟胞嘧啶以及其他5-氟尿嘧啶前体药物，其可被转化为活性更强的细胞毒性药物。用于本发明中的可衍生为前体药物形式的细胞毒性药物，其示例性包括但不限于上述之化疗制剂。
“脂质体”为不同类型的脂质、磷脂质及/或界面活性剂组成之囊泡，对哺乳动物而言，脂质体有助于运送药物(如本文中公开的抗ErbB2抗体或任选之化疗制剂)。脂质体成分通常具双层排列形式，类似生物膜上之脂质排列形式。
本文所使用的“医药上可接受的盐类”一词，系指自抗体药物缀合物生成之医药上可接受有机或无机盐。此类盐之示例性包括但不限于硫酸盐、柠檬酸盐、乙酸盐、草酸盐、亚硫酸盐、酸式磷酸盐、异烟酸、水杨酸盐、酸式柠檬酸盐、酒石酸盐、油酸盐、单宁酸盐、泛酸盐、酒石酸氢盐、抗坏血酸盐、琥珀酸盐、马来酸盐、龙胆酸盐、延胡索酸盐、葡萄糖酸盐、葡萄糖醛酸盐、糖酸盐、蚁酸盐、苯甲酸盐、谷氨酸盐、甲磺酸盐、乙磺酸盐、苯磺酸盐、对甲苯磺酸盐及双羟萘酸盐(即1,1'-亚甲基-二-(2-羟基-3-萘甲酸盐))。医药上可接受的盐可包含另一分子，如乙酸离子、琥珀酸离子或其他反离子。该反离子可为任何能稳定母化合物上电荷之有机或无机基团。此外，就结构上而言，医药上可接受的盐可具有大于一个带电原子。当带电原子属于该医药上可接受盐之一部份时，可具有多个离子。因此，医药上可接受的盐可具有一或多个带电原子及/或一或多个反离子。
“医药上可接受的溶质”系指一或多个溶剂分子与抗体药物缀合物结合之情形。能形成医药上可接受溶质之溶剂，其示例性包括但不限于水、异丙醇、乙醇、甲醇、二甲基亚砜(DMSO)、乙酸乙酯、醋酸及乙醇胺。
示例性抗体药物缀合物之特性
本发明中之化合物包括能提供抗癌活性功效之化合物。该些化合物尤其包括与药物基团缀合(即透过接头以共价键相连)的抗体，其中该药物未与抗体缀合时具备细胞毒性或抑制细胞生长效果。因此，该药物基团之生物活性会由与抗体缀合情形调节。本发明的抗体药物缀合物可选择性针对肿瘤组织生成具有效剂量的细胞毒性剂，因此药物作用选择性会提高，也就是可使有效剂量降低。
抗体药物缀合物可以化学式(I)表示：
Ab-(L-D)n (I)
或为医药上可接受的盐类或其溶质，其中：
Ab为与Globo系列抗原结合的抗体，或与一或多个肿瘤相关抗原或细胞表面受体结合的抗体；n为药物与抗体连结比例(drug-to-antibody ratio,DAR)，数值范围为1到8。
抗体药物缀合物包含透过接头以共价键和一或多个单甲基奥瑞斯他丁(MMAE)基团相连的抗体。抗体药物缀合物可以化学式(I)表示：
Ab-(L-D)n (I)
其中一或多个单甲基奥瑞斯他丁(MMAE)基团(D)透过L与抗体Ab以共价键相连。Ab为对Globo系列抗原具特异性的抗体，或与一或多个肿瘤相关抗原或细胞表面受体结合的抗体。接头L可于细胞外(即胞外空间中)维持稳定状态。
在某一实施例中，当该抗体药物缀合物进入细胞，且该细胞表面之受体对该抗体药物缀合物的抗体具特异性时，该缀合物之药物基团才会自抗体分离，并提供实质剂量。当该抗体药物缀合物确实进入细胞后，药物基团才会真正自抗体分离。
在另一实施例中，该抗体药物缀合物会与Globo系列抗原特异结合，如Globo H、SSEA-3或SSEA-4。该抗体药物缀合物可与Globo H、SSEA-4、SSEA-3特异结合。该抗体药物缀合物可抑制表达Globo系列抗原之肿瘤生长。
在另一实施例中，化学式(I)的抗体(Ab)为一人类、嵌合或人源化抗体。
根据本发明的另一方面，提供一种医药组合物，其包括化学式(I)之化合物或医药上可接受的盐类或其溶质，以及医药上可接受的稀释剂、溶媒或赋形剂。
根据本发明的另一方面，提供一种医药组合，其包括化学式(I)之化合物，以及具抗癌特性或其他疗效之另一化合物。
根据本发明的另一方面，本文所公开的化合物及组合物包括可用于诊断及治疗之使用方法。
根据本发明的另一方面，提供一种杀死或抑制肿瘤或癌细胞增殖之方法，其包含使用抗体药物缀合物或医药上可接受的盐类或其溶质，对该些细胞提供能杀死或抑制肿瘤或癌细胞增殖之剂量。
根据本发明的另一方面，提供多种治疗癌症之方法，其包含对病患施用具化学式(I)化合物之配方。其中一种方法系用以治疗哺乳类动物体内癌症，其中该癌症之特征为表达Globo系列抗原。使用未缀合之抗Globo系列抗原抗体进行治疗时，该哺乳动物选择性不会产生治疗反应，或仅产生微弱反应。该方法包含对该哺乳动物施用具治疗有效量的抗体药物缀合化合物。
根据本发明的另一方面，提供一种能针对表达Globo系列抗原之肿瘤并抑制其增殖之方法，其包含对病患施用抗体药物缀合化合物，该缀合化合物与所述生长因子受体以及化疗制剂特异结合，其中施用所述抗体药物缀合物与所述化疗制剂时，两者皆具备能抑制病患体内肿瘤细胞生长之有效剂量。
根据本发明的另一方面，提供一种治疗人类病患之方法，该人类病患易罹患或经诊断罹患会表达Globo系列抗原之病症，该方法包含施用化学式(I)化合物的抗体药物缀合物搭配化疗制剂之组合。
根据本发明的另一方面，提供一种用以侦测癌症细胞之测定方法，其包含：将多个细胞暴露于抗体药物缀合物化合物，并判定该抗体药物缀合物化合物与该些细胞之结合程度。
根据本发明的另一方面，提供多种筛选抗体药物缀合物候选物之方法以治疗疾病或病症，其中该疾病或病症之特征为表达Globo系列抗原。
本发明的另一方面为包括多种制造物，即包含抗体药物缀合物、容器及治疗信息仿单或卷标之工具组。
本发明的另一方面为包括多种使用抗体药物缀合化合物治疗疾病或病症之方法，该疾病或病症之特征为病患体内过量表达Globo系列抗原。
本发明的另一方面为包括抗体药物缀合化合物之制造方法、制备方法、合成方法、缀合方法及纯化方法，以及包括制备、合成及缀合抗体药物缀合物时之中间产物。
抗体药物缀合物：抗体
化学式(I)的抗体单元之范围，包括与受体、抗原或其他与特定目标细胞群相关之接受性基团结合或者反应性相关或复合之任何抗体单元。抗体可为任何蛋白质或类蛋白质分子，该分子会与预计由提供疗效方法或其他生物方法改造的细胞群基团复合或反应。根据本发明的一方面，该抗体单元能运送美登木素(maytansinoid)药物基团至特定目标细胞群，而该抗体单元亦会与该目标细胞群产生反应。此类抗体包括但不限于大分子量蛋白质，如完整长度抗体及抗体片段。
包含本发明抗体药物缀合物的抗体，较佳地保留原生及野生型抗体所具备之与抗原结合能力。因此，本发明的抗体较佳地能与抗原特异结合。
本文使用的“抗体”一词系具备最广之定义，且特别涵盖能表现表现预期生物活性之单克隆抗体、多克隆抗体、二聚体、多聚体、多特异性抗体(如双特异性抗体)以及抗体片段(见Miller et al(2003)Jour.of Immunology 170:4854-4861)。抗体可为鼠抗体、人类抗体、人源化抗体、嵌合抗体或衍生自其他物种的抗体。抗体为免疫系统制造之蛋白质，可辨识特定抗原并与之结合(见Janeway,C.,Travers,P.,Walport,M.,Shlomchik(2001)Immuno Biology,5th Ed.,Garland Publishing,New York)。目标抗原一般具备无数结合位置，又称抗原表位，可被多种抗体上之互补性决定区辨识。与特定抗原表位特异结合的抗体，各自具备不同结构。因此，单一抗原可具备一种以上之对应结合抗体。抗体结构包括完整免疫球蛋白分子或完整免疫球蛋白分子之一具免疫活性部位，即包含抗原结合位置之分子，其可与整体或部分目标之抗原进行免疫特异结合，目标包括但不限于癌症细胞，或会针对自体免疫疾病制造自体免疫抗体的细胞。本文所公开的免疫球蛋白可为任一类型(如IgG、IgE、IgM、IgD及IgA)、任一类别(如IgG1、IgG2、IgG3、IgG4、IgA1及IgA2)或任一子类别之免疫球蛋白分子。免疫球蛋白分子可衍生自任何物种。然而，根据本发明的一方面，免疫球蛋白为人源、鼠源或兔源。
举例而言，该些抗体可具备完整长度，或包含具抗原结合位置抗体之一个(或多个)片段，包括但不限于Fab、F(ab')2、Fab'、F(ab)'、Fv、单链Fv(scFv)、双价单链Fv(bi-scFv)、三价单链Fv(tri-scFv)、Fd、dAb片段(见Ward et al.,Nature,341:544-546(1989))、经分离之互补性决定区、双链抗体(diabodies)、三链抗体(triabodies)、四链抗体(tetrabodies)、线性抗体(linear antibodies)、单链抗体分子，以及由抗体片段形成之多特异性抗体。本文中亦包含使用重组技术或合成接头连接抗体片段所生成之单链抗体。见Bird et al.Science,1988,242:423-426.Huston et al,Proc.Natl.Acad.Sci.USA,1988,85:5879-5883。
举例而言，本文中的抗体或其抗原结合部分可为单一特异性、双特异性或多特异性。多特异性或双特异性抗体或其片段对于单一目标碳水化合物(如Globo H)之不同抗原表位可具备特异性，或具备对于一种以上目标碳水化合物具特异性之抗原结合区(如对于Globo H、SSEA-3及SSEA-4具特异性之抗原结合区)。在某一实施例中，多特异性抗体或其抗原结合部分包含至少两种不同之可变区，其中各可变区可与单一碳水化合物抗原特异结合，或与同样碳水化合物抗原上之不同抗原表位特异结合，可参考Tutt et al.,1991,J.Immunol.147:60-69.Kufer et al.,2004,Trends Biotechnol.22:238-244。本文中的抗体可与另一官能分子联结或共同表现，如另一肽或蛋白质分子。举例而言，抗体或其片段可透过官能基与一或多个其他分子结构，如另一抗体或抗体片段联结(如经化学耦合、基因融合、非共价键连结或其他方式)，以制造具备第二结合特异型之双特异性或多特异性抗体。
本文中涵盖所有同型抗体，包括IgG(如IgG1、IgG2、IgG3、IgG4)、IgM、IgA(IgA1、IgA2)、IgD或IgE(本文中涵盖所有类别或子类别)。本文中的抗体或其抗原结合部分可为哺乳动物(如老鼠或人类)抗体或其抗原结合部分。此类抗体之轻链可为κ型或λ型。
本文中抗体或其抗原结合部分之可变区，可源于非人类或人类。本文中抗体或其抗原结合部分之框架，可为人类、人源化、非人类(如经改造以降低人体抗原性之鼠框架)或合成框架(例如共通序列(consensus sequence))。
在某一实施例中，本文中的抗体或其抗原结合部分包含至少一个重链可变区及/或一个轻链可变区。
本文中的抗体或其抗原结合部分会与Globo H特异结合，且解离常数(KD)为小于大约10-7M、小于大约10-8M、小于大约10-9M、小于大约10-10M、小于大约10-11M或小于大约10- 12M。在某一实施例中，该抗体或抗体结合部分具1～10×10-9或更小之解离常数(KD)。在另一实施例中，解离常数由表面电浆共振程度决定。
包含本发明抗体药物缀合物的抗体，较佳地保留原生及野生型抗体所具备之与抗原结合能力。因此，本发明的抗体较佳地能与抗原特异结合。前述抗原包括肿瘤相关抗原(TAA)、细胞表面受体蛋白质及其他细胞表面分子、细胞存活调节因子、细胞增殖调节因子、与组织生长或分化相关(如确定或疑似能提供官能基)之分子、淋巴激素、细胞激素、细胞周期调节相关之分子、脉管生成(vasculogenesis)相关之分子，以及血管新生(angiogenesis)相关(如确定或疑似能提供官能基)之分子。肿瘤相关抗原可为分化群因子(即CD蛋白)。可与本文中抗体结合之抗原，可属于前述任一分类下之某一子集合，其中所述分类之其他子集合包含具备显著特性(相对目标抗原而言)之其他分子/抗原。
在某一实施例中，抗体药物缀合物的抗体与Globo H、SSEA-3、SSEA-4等Globo系列抗原特异结合。
在某些实施例中，抗体或其抗原结合部分包括抗Globo系列抗原抗体(Globo H：OBI-888、SSEA-4：OBI-999)之重链可变区及/或轻链可变区，如表1所示。
在相关实施例中，示例性抗体或其抗原结合部分包括抗Globo系列抗原抗体(Globo H：OBI-888、SSEA-4：OBI-999)之重链可变互补性决定区及/或轻链可变互补性决定区。自融合瘤选殖出之示例性重链可变区及轻链可变区互补性决定区及框架，皆详列于表1中。
表1-1抗Globo H抗体(OBI-888)氨基酸序列
[详细说明可参考美国专利第2017/0101462号(WO2017/062792)]
表1-2抗SSEA-4抗体(OBI-898)氨基酸序列
[详细说明可参考美国专利第2017/283488号(WO2017/172990)]
抗体具备之重链可变区及轻链可变区，与自选殖抗体株2C2所产生的抗体之重链可变区及轻链可变区至少大约70％、至少大约75％、至少大约80％、至少大约81％、至少大约82％、至少大约83％、至少大约84％、至少大约85％、至少大约86％、至少大约87％、至少大约88％、至少大约89％、至少大约90％、至少大约91％、至少大约92％、至少大约93％、至少大约94％、至少大约95％、至少大约96％、至少大约97％、至少大约98％、至少大约99％或至少大约100％同源。此类抗体亦可与碳水化合物抗原(如Globo H)结合。同源性可以氨基酸或核苷酸序列中呈现。
针对Globo系列抗原的抗体药物缀合物
根据本公开内容之一方面，其公开该新抗体药物缀合物(OBI-999)具对Globo H之特异性。该抗体药物缀合物之抗Globo H抗体系结合至Fucα1→2Galβ1→3GalNAcβ1→3Galα1→4Galβ1→4Glc。
本文描述之任一抗体皆可为完整长度抗体或其抗原结合片段。在某些示例性中，该抗原结合片段为Fab片段、F(ab')2片段或单链Fv片段。在某些示例性中，该抗体为人类抗体、人源化抗体、嵌合抗体或单链抗体。
本文描述之任一抗体具以下一或多个特征：(a)为重组抗体、单克隆抗体、嵌合抗体、人源化抗体、人类抗体、抗体片段、具双特异性抗体、具单特异性抗体、单价抗体、IgG1抗体、IgG2抗体或抗体之衍生物；(b)为人类、鼠科、人源化或嵌合抗体、抗原结合片段或抗体之衍生物；(c)为单链抗体片段、多体、Fab片段及/或与IgG、IgM、IgA、IgE、IgD同型及/或其子类型之免疫球蛋白；(d)具以下一或多个特征：(i)能调控癌细胞抗体依赖型细胞调节的细胞毒杀作用(ADCC)及/或补体依赖型细胞毒杀作用(CDC)；(ii)能引发及/或促进癌细胞凋亡；(iii)能抑制目标癌细胞进行细胞增殖；(iv)能引发及/或促进吞噬癌细胞作用；及/或(v)能引发及/或促进细胞毒性物质之释放；(e)与该肿瘤关联之碳水化合物抗原专一结合，此抗原为具肿瘤特异性之碳水化合物抗原；(f)不与表达于非癌细胞、非肿瘤细胞、良性癌细胞及/或良性肿瘤细胞上之抗原结合；及/或(g)与表达于癌症干细胞及正常癌细胞上之肿瘤关联之碳水化合物抗原专一结合。
较佳地，该些抗体与各自目标抗原之结合反应具特异性。一般而言，“特异性”一词系指一结合对中其中一方不会与其特异结合对象之外的其他分子明显结合之情形，且与本文所详述分子以外之其他分子少于约30％，较佳为20％、10％或1％会产生交叉反应。
抗体制造
制造单克隆抗体之方法相当多样化。以融合瘤技术而言，该技术系使用不同来源的细胞，包括小鼠(鼠科)、仓鼠、大鼠及人类细胞，以筛选出一可制造单一种类抗体之选殖克隆。其他制造单克隆抗体之方法，如制造嵌合及人源化抗体时，则使用基因工程技术，即DNA重组技术。
多克隆抗体可于动物体内生成，生成时使用注射或腹腔内注射将相关抗原及佐剂注入目标动物体内。单克隆抗体系取自一实质同质抗体群的抗体，除自然产生的微量基因变异种类外，包含该抗体群之个别抗体皆无二致。
相关文献中亦已描述将人类骨髓瘤克隆及小鼠-人类异骨髓瘤克隆用于产制人类单克隆抗体(见Kozbor,(1984)J.Immunol.,133:3001,and Brodeur et al.,MonoclonalAntibody Production Techniques and Applications,pp.51-63(Marcel Dekker,Inc.,New York,1987))。对培养融合瘤细胞之培养基进行测定，以制备拮抗该抗原之单克隆抗体。融合瘤细胞所生成的单克隆抗体之结合特异性，可由免疫沉淀法或试管内结合测定法判定，如放射免疫分析法(radioimmunoassay,RIA)或酵素结合免疫吸附法(ELISA)。举例而言，单克隆抗体之结合亲和力可经由Scatchard分析法(见Munson et al(1980)Anal.Biochem.107:220)判定。
使用传统技术(如使用寡核苷酸探针，此探针可与编码鼠科抗体重链与轻链之基因特异结合)可轻易将编码单克隆抗体之DNA分离并定序。融合瘤细胞可作为此DNA之来源。此DNA经分离后可置于表达溶媒内，并转染至宿主细胞中，如转染至如大肠杆菌、猿猴COS细胞、中国仓鼠卵巢(CHO)细胞或骨髓瘤细胞等不会自行制造其他抗体蛋白质之宿主细胞，以合成重组宿主细胞内之单克隆细胞(参考美国专利第2005/0048572号、2004/0229310号)。针对编码该抗体的DNA于细菌内之重组表达，相关评论文章包括Skerra et al(1993)Curr.Opinion in Immunol.5:256-262及Plückthun(1992)Immunol.Revs.130:151-188。
在另一实施例中，可自噬菌体抗体库分离出单克隆抗体或抗体片段，噬菌体抗体库之制造技术可参考McCafferty et al(1990)Nature 348:552-554；Clackson et al(1991)Nature 352:624-628；及Marks et al(1991)J.Mol.Biol.,222:581-597，以上文献分别描述由噬菌体抗体库分离出鼠科及人类抗体之技术。后续文献描述透过链置换(chainshuffling)方法(参考Marks et al(1992)Bio/Technology 10:779-783)制造高亲和力(nM等级)抗体之技术，亦描述使用组合感染(combinatorial infection)及活体内重组技术作为建构巨大噬菌体抗体库之策略(参考Waterhouse et al(1993)Nuc.Acids.Res.21:2265-2266)。因此，前述技术皆可替代用来分离单克隆抗体之单克隆抗体融合瘤传统技术。
可使用不同方式改造DNA，如透过以人类重链及轻链恒定域编码序列取代同源鼠科序列之方式(参考美国专利第4,816,567号，以及Morrison et al(1984)Proc.Natl.Acad.Sci.USA 81:6851)，或透过以共价键将非免疫球蛋白多肽的全部或部分编码序列连接至免疫球蛋白编码序列上之方式。
一般而言，此非免疫球蛋白多肽皆用以取代抗体恒定域，或用以取代抗体抗原结合位置之可变域，以生成包含两个抗原结合位置之嵌合双价抗体，此两个结合位置分别对不同抗原具特异性。
抗体药物缀合物：接头：
示例性抗体药物缀合物接头
针对抗体药物缀合物之合适示例性接头已于文献中描述，例如美国专利第7595292号(WO2005/007197)。文献中与接头相关之段落，皆以引用方式直接并入本文中。接头L将抗体以共价键连接至不包含二硫键基之药物基团上。该接头为一双功能性或多功能性基团，可用以连接一或多个药物基团(D)及抗体单元(Ab)，以形成化学式(I)的抗体药物缀合物。可使用具备与该药物基团及该抗体单元结合的反应功能性之接头，轻易制备抗体药物缀合物。该抗体内之半胱氨酸硫氢基或胺基，如N端或离氨酸等氨基酸侧链，可与接头试剂、药物基团或药物接头试剂之官能基形成键结。
较佳地，该些接头于胞外作用。较佳地，该抗体药物缀合物经运输或输送入细胞前维持稳定且完整状态，即该抗体维持与该药物基团连接之状态。位于目标细胞外之接头皆处于稳定状态，且可于细胞内以某有效速率被切割。有效接头之特性包括：(i)维持该抗体之特异结合属性；(ii)使该缀合物或该药物基团可于胞内输送；(iii)维持稳定且完整状态，即未被切割状态，直到该缀合物被输送或运输至目标位置；及(iv)针对该美登木素(maytansinoid)药物基团维持细胞毒性效果或抑制细胞生长效果。该抗体药物缀合物之稳定性可由标准分析技术测定，如质谱仪、高效液相层析法及液相层析质谱分离/分析技术。
要使该抗体及该药物基团建立共价键键结，该接头必须具备两个反应官能基，即反应时具备双价性。有助于连结两个或多个官能基或生物活性基团，如肽、核酸、药物、毒素、抗体、半抗原及报导基团等之双价性接头试剂为习知技术，且其连结方法与其衍生缀合物已于相关文献中描述(参考Hermanson,G.T.(1996)Bioconjugate Techniques；AcademicPress:New York,p234-242)。
示例性抗体药物缀合物接头可包括化学通式(II)之生物活性化合物，其中X或X'其中之一代表聚合物(尤其为毒素)，且另一符号代表氢原子；其中每个Q各自代表联结基团；W代表拉电子基或可经由还原该拉电子基制备之基团；或者，若X'代表聚合物，则X-Q-W整体可代表拉电子基；此外，若X'代表聚合物，则X'与拉电子基W可与两侧相邻之原子共同组成一环；Z1与Z2各自代表由一生物分子衍生之一基团，且分别与A及B透过亲核基团互相连接；或者，Z1与Z2共同代表衍生自生物分子之单独基团，两者分别与A、B透过两个亲核基团连接；A为C1-5烯基链或亚烯基链；且B为键结或C1-4烯基链或亚烯基链；形成示例性抗体药物缀合物接头时，可将合适聚合物与合适生物活性分子透过前述分子内之亲核基团缀合，较佳地为透过一双硫键缀合。
在某些实施例中，本公开内容提供一如化学式(III)之蛋白质-聚合物缀合物。
其中X为一选自由聚烯烃基二醇(polyalkylene glycols)、聚乙烯吡咯烷酮、聚丙烯酸酯、聚恶唑啉(polyoxazolines)、聚乙烯醇、聚丙烯酰胺、聚甲基丙烯酰胺、水解聚马来酸酐共聚物、聚酯、聚甲醛、聚原酸酯、聚碳酸酯、聚亚胺碳酸酯、聚酰胺、双乙烯基醚顺丁烯二酸酐(divinylether-maleic anhydride)与苯乙烯顺丁烯二酸酐(styrene-maleicanhydride)之共聚物、多聚糖及聚谷氨酸组成群组之均聚物或共聚合物(尤其为毒素)；Q为选自由直接键结、烯基、选择性取代芳基与选择性取代杂芳基组成群组之联结基团，其中该烯基、芳基或杂芳基可被一或多个氧原子、硫原子、酮基、—O—CO—基、—CO—O—基、—NR基终止或中断反应；W选自由酮基、酯基、砜基、还原酮基、还原酯基与还原砜基组成之群组；X'-Q为氢；A为C1-5烯基链或亚烯基链；B为键结或C1-4烯基链或亚烯基链A；且Z为与A及B连接之单独蛋白质，连接时透过经还原蛋白质内双硫键而产生之两个醇基。
显示示例性抗体药物缀合物效力之活性测定
本文中所述抗体药物缀合物(OBI-999)之物理/化学性质及生物功能，可使用习知测定技术加以定性。
抗体对碳水化合物抗原之亲和力，可透过实验并使用任何合适方法测定(见Berzofsky et al,"Antibody-Antigen Interactions,"In Fundamental Immunology,Paul,W.E.,Ed.,Raven Press:New York,N.Y.(1984)；Kuby,Janis Immunology,W.H.Freeman and Company:New York,N.Y.(1992)；及本发明描述之方法)。在不同条件下(如盐度、pH)，对特定抗体-碳水化合物抗原交互作用测定亲和力之结果会出现落差。因此，测定亲和力及其他抗原结合参数(如KD、Ka、Ka)时，较佳之方法为使用抗体及抗原之标准化溶液，以及标准化缓冲溶液。
本文中所述抗体或其抗原结合部分，皆具备试管内及活体内治疗、预防及/或诊断用途。举例而言，该些抗体可被施用至培养细胞，如于试管内(in vitio)或活体外(exvivo)培养的细胞，或可施用于受试者，如施用于该受试者体内，以达治疗、抑制、预防复发及/或诊断癌症之目的。
经纯化的抗体可进一步使用一系列测定方法定性，该些方法包括但不限于N端定序(N-terminal sequencing)、氨基酸分析、非变性大小排除高效液相层析法(non-denaturing size exclusion high pressure liquid chromatography)、质谱仪分析、离子交换层析法及木瓜蛋白酶分解法(papain digestion)。
必要时，可对抗体进行分析以测定其生物活性。在某些实施例中，对本文中所述抗体进行测试以测定其抗原结合活性。习知且可用于本文中之抗原结合测定方法，包括但不限于使用西方墨点法、放射免疫分析法、ELISA(酵素结合免疫吸附法)、三明治免疫分析法(“sandwich”immunoassays)、免疫沉淀分析法、荧光免疫分析法、化学冷光免疫分析法(chemiluminescent immunoassays)、奈米粒子免疫分析法(nanoparticleimmunoassays)、适体免疫分析法(aptamer immunoassays)及蛋白A免疫分析法等技术之任何直接结合或竞争性结合(competitive binding)测定方法。
人源化抗体
本文系关于各种人源化抗体。多种将非人抗体人源化之方法皆属习知技术。举例而言，人源化抗体可具有一或多个自非人来源引入之氨基酸残基。非人氨基酸残基通称为“输入”残基，一般而言取自“输入”可变域。可透过Winter与其同事之方法(参考Jones etal.(1986)Nature 321:522-525；Riechmann et al.(1988)Nature 332:323-327；Verhoeyen et al.(1988)Science 239:1534-1536)，以高变域序列取代人类抗体中之对应序列进行抗体人源化。因此，该“人源化”抗体属于嵌合抗体(参考美国专利第4,816,567号)，其中实质上少于一完整人类抗体可变域已经被该非人抗体之对应序列取代。实际上，人源化抗体一般属于人类抗体，其中某些高变域残基与可能的某些框架残基被来自啮齿类动物抗体中类似位置之残基所取代。
制造人源化抗体时，选择人类抗体轻链或重链可变域皆对降低抗原性有关键影响。根据所谓“最适”(best-fit)方法，会将啮齿类抗体之可变域序列与习知数据库中之所有人类抗体可变域序列逐一比对，并取最接近该啮齿类抗体序列之人类抗体序列，作为人类抗体(参考Sims et al.(1993)J.Immunol.151:2296；Chothia et al.(1987)J.Mol.Biol.196:901)。另一方法则使用一特殊框架，其衍生自包含特定亚群轻链或重链的所有人类抗体之共通序列。此框架可适用数种不同之人源化抗体(参考Carter et al.(1992)Proc.Natl.Acad.Sci.USA,89:4285；Presta et al.(1993)J.Immunol.,151:2623)。
进一步而言，一般预期之情况为抗体经人源化后仍保留对抗原之高亲和力，以及其他有益之生物特性。根据某一方法，若欲达成此目的，则须使用亲代序列及人源化序列之三维模型，透过分析亲代序列及多种概念型人源化产物制备人源化抗体。对本发明所属技术领域中具有通常知识者而言，免疫球蛋白三维模型维容易取得且熟悉之工具。挑选出候选免疫球蛋白序列后，可使用现有计算机程序描绘并显示可能出现之序列三维结构构型。可经由研究计算机程序显示之图像，针对候选免疫球蛋白序列中的残基可能具备之功能进行分析；换言之，可分析残基如何影响候选免疫球蛋白与抗原之结合能力。如此一来，即可由受者抗体及输入序列中挑选并结合框架残基，以获得目标抗体特性，如使与目标抗原结合之亲和力增加。一般而言，高变域残基会直接且高度实质影响抗原结合过程。
用途
本文中所述的抗体药物缀合物(OBI-999)可用于如试管内、活体外及/或活体内之治疗方法。本文中所述的抗体药物缀合物(OBI-999)可作为拮抗抗体，用以于试管内、活体外及/或活体内部分或完全阻断特定抗原活性。有鉴于此，本文中所述的抗体药物缀合物(OBI-999)可用于如包含该抗原的细胞培养物中、于人类受试者体内，或于具可与该抗体产生交叉反应的抗原之其他哺乳动物受试者(如黑猩猩、狒狒、狨猴(marmoset)、食蟹猕猴(cynomolgus)、猪或小鼠)体内，以抑制特定抗原活性。在某一实施例中，本文中所述的抗体药物缀合物(OBI-999)可用于抑制抗原活性，其方法为将该抗体药物缀合物(OBI-999)与该抗原接触，以使抗原活性受到抑制。在某一实施例中，该抗原为人类蛋白质分子。
在某一实施例中，本文中所述的抗体药物缀合物(OBI-999)可用于一种抑制受试者体内的抗原之方法，其中该受试者处在抗原活性有害之病症下，该方法包含对该受试者施用本文中所述的抗体药物缀合物(OBI-999)，以使该受试者体内之该抗原活性被抑制。在某一实施例中，该抗原为人类蛋白质分子，且该受试者为人类受试者。另外，该受试者亦可为表达抗原之哺乳动物，该抗原与本文中所述的抗体药物缀合物(OBI-999)结合。又，该受试者亦可为体内已注入该抗原之哺乳动物(注入方式包括施用该抗原或表达抗原基因转殖)。本文中所述的抗体药物缀合物(OBI-999)可被施用于人类受试者体内，以达治疗效果。此外，本文中所述的抗体药物缀合物(OBI-999)可被施用入非人类哺乳动物体内(如灵长类动物、猪或小鼠)，该哺乳动物表达与该抗体药物缀合物(OBI-999)交互反应之抗原，以达兽医相关目的或针对人类疾病建立一动物模型。若目的为后者，则该些动物模型可用于评估本文中所述抗体药物缀合物(OBI-999)之疗效(如测试剂量多寡及施用时间长短)。本文中所述的抗体药物缀合物(OBI-999)可用于疾病、病症或状态之治疗、抑制、延缓发展、预防/延缓复发、改善或预防，该些疾病、病症或状态皆与Globo系列抗之异常表达及/或活性相关，包括但不限于癌症、肌肉异常、泛素途径相关(ubiquitin-pathway-related)基因异常、免疫/发炎异常、神经异常，以及其他泛素途径相关异常。
本文中所述的抗体药物缀合物(OBI-999)可于实施治疗方法时单独使用或与其他组合物同时使用。举例而言，本文中所述的抗体药物缀合物(OBI-999)可与另一抗体及/或佐剂/治疗剂(如类固醇)同时施用。举例而言，本文中所述的抗体药物缀合物(OBI-999)可于疗程内与消炎剂及/或抗菌剂合并使用，例如治疗任何本文描述之疾病，包括癌症、肌肉异常、泛素途径相关基因异常、免疫/发炎异常、神经异常，以及其他泛素途径相关基因异常。前述合并疗法包括合并施用(包含于相同或不同配方内之两种或多种试剂)及分别施用，进行后者时，施用本文中所述抗体药物缀合物(OBI-999)之时机可为施用该辅助疗法或各种疗法之前及/或之后。
本文中所述的抗体药物缀合物(OBI-999)可以任何合适之方式施用，包括肠道外、皮下、腹膜腔内、胸膜腔内与鼻腔内施用，以及欲进行局部治疗时可于病灶内施用。肠道外灌注方式包括肌肉内、静脉内、动脉内、腹膜腔内或皮下施用。此外，该抗体药物缀合物(OBI-999)适合透过脉冲灌注(pulse infusion)方式施用，特别是以逐步降低该抗体药物缀合物(OBI-999)之剂量的方式。可透过任何合适路径给药，如静脉注射或皮下注射等注射方式，且部分视施用形式为短时间或慢性而定。
治疗应用
本文描述之治疗方法，包含针对需要前述治疗之受试者施用具备治疗有效量之组合物，该组合物包含一或多个本文描述的抗体药物缀合物(OBI-999)。
在某些实施例中，需要该治疗之受试者(如人类病患)系被诊断出、疑似或有风险罹患癌症。该癌症种类包括但不限于恶性肉瘤、皮肤癌、血癌、淋巴癌、脑癌、胶质母细胞瘤、肺癌、乳癌、口腔癌、头颈癌、鼻咽癌、食道癌、胃癌、肝癌、胆管癌、胆囊癌、膀胱癌、胰脏癌、肠癌、大肠直肠癌、肾脏癌、子宫颈癌、子宫内膜癌、卵巢癌、睾丸癌、颊癌、口咽癌、喉癌及前列腺癌。
在较佳实施例中，该抗体药物缀合物(OBI-999)可针对表达Globo系列抗原之癌细胞。在某些实施例中，该抗体药物缀合物(OBI-999)可针对癌细胞上之Globo系列抗原。在某些实施例中，该抗体药物缀合物(OBI-999)可针对癌细胞内之Globo系列抗原。
该治疗可使肿瘤大小减少、恶性肿瘤细胞消失、预防癌症转移、预防癌症复发、减少或消灭扩散之癌细胞、延长存活期及/或拉长癌症肿瘤恶化所需时间。
在某些实施例中，该治疗方式进一步包含于施用该些抗体药物缀合物(OBI-999)期间或之后，对前述受试者施用一额外疗法。在某些实施例中，该额外疗法为使用化疗制剂之疗法。在某些实施例中，该额外疗法为放射疗法。
本文中所述的方法对于治疗及预防早期肿瘤尤其有效，可藉此预防肿瘤持续恶化，使因肿瘤恶化引起之致病率及死亡率降低。本文中所述的方法对于预防肿瘤复发或再生，如原发肿瘤移除后持续存在之潜伏肿瘤，或者对于减少或预防肿瘤复发亦有效。
在某些实施例中，本文中所述公开的方法可适用于治疗或预防癌症，例如特性为Globo H、SSEA-3及/或SSEA-4表达量增加之癌症。在某些实施例中，该癌症包含癌症干细胞。在某些实施例中，该癌症为潜伏期癌(pre-cancer)及/或恶性癌及/或抗药性癌。在某些实施例中，该癌症为脑癌。
待接受本文描述方法治疗之受试者可为哺乳动物，较佳为人类。哺乳动物种类包括但不限于农场动物、竞赛用动物、宠物、灵长类动物、马、狗、猫、小鼠及大鼠。需要该治疗之人类受试者，可为罹患、有风险罹患或疑似罹患癌症之人类病患，该癌症包括但不限于恶性肉瘤、皮肤癌、血癌、淋巴癌、脑癌、肺癌、乳癌、口腔癌、食道癌、胃癌、肝癌、胆管癌、胰脏癌、肠癌、肾脏癌、子宫颈癌、卵巢癌及前列腺癌。可使用常规医学检查测定出罹患癌症之受试者。
本文所使用的“有效量”一词，系指使各活性试剂提供疗效予该受试者所需之剂量，该活性试剂可单独使用，或与一或多个其他活性试剂合并使用。本发明所属技术领域中具通常知识者皆理解，有效量会随接受治疗之疾病条件、该疾病条件严重程度、个别病患相关参数(包括年龄、健康状况、身材、性别及体重)、接受治疗时间、同时接受疗程之特性(如适用之情形)、详细施用途径，以及属医疗人员知识及专业范围内之因素而变化。对于本发明所属技术领域中具通常知识者，该些因素皆为习知因素，且可仅透过常规实验因应。一般认为，较佳应使用个别成分或组合物之最大剂量，即基于健全医疗判断之最安全剂量。然而，本发明所属技术领域中具通常知识者将理解，病患可能基于医疗、心理或任何其他可能方面之理由，坚持使用较低剂量或可容忍剂量。
本文所使用的“治疗”一词，系指应用或施用组合物，包括一或多个活性试剂予受试者，该受试者罹患癌症、癌症症状或具罹癌体质，且意图治愈、治疗、减轻、纾解、调整、补救、补强、改善或影响癌症、癌症症状或癌症体质。
癌症“发展”或“变化”系指癌症初期样态及/或后续变化情形。癌症发展可使用习知标准临床技术侦测并评估。然而，发展亦指可能无法侦测之变化。就本文中公开内容而言，发展或变化系指该些症状之生物历程。“发展”包括发生、再现及起始。本文所使用的癌症“发生”或“起始”等词，包括癌症最初之起始及/或再现。
视治疗之疾病种类或病灶，医疗领域中具通常知识者习知之传统方法，可用以施用医药组合物至该受试者。该组合物亦可透过其他传统途径施用，如口服、肠道外、吸入喷剂(inhalation spray)、局部施用，直肠、鼻腔、口腔、阴道内，或者植入型储药槽(implanted reservoir)。本文所使用的“肠道外”一词，包括皮下、皮内、静脉内、肌肉内、动脉内、滑膜内、胸骨内、脊髓腔内、病灶内及颅内注射或灌注技术。此外，该组合物可经由注射式之长效储存施用途径(injectable depot routes of administration)施用于该受试者，如使用一、三或六个月之长效储存注射式或生物可分解之材料及方法。
注射式组合物可包含不同溶媒，如植物油、二甲基乙酰胺(dimethylactamide)、二甲基甲酰胺(dimethyformamide)、乳酸乙酯(ethyl lactate)、碳酸乙酯(ethylcarbonate)、十四酸异丙酯(isopropyl myristate)、乙醇及多元醇(polyols)(甘油、丙二醇(propylene glycol)、液态聚乙二醇及其类似物)。使用静脉注射方法时，可以滴注法(drip method)施用水溶性抗体药物缀合物(OBI-999)，藉以灌注包含该抗体药物缀合物(OBI-999)及生理可接受赋形剂(excipient)之医药配方。生理可接受赋形剂可包括5％右旋糖(dextrose)、0.9％食盐水、林格氏液(Ringer’s solution)或其他合适之赋形剂。
施用抗体药物缀合物之医药配方
施用治疗用抗体药物缀合物时，可经由任何适用待治疗病症之途径。一般而言，抗体药物缀合物会透过肠道外途径施用，即灌注、腹腔内、皮下、肌肉内、静脉内、皮内、脊髓腔、一次全剂量、肿瘤内注射或硬膜外等途径(参考Shire et al(2004)J.Pharm.Sciences93(6):1390-1402)。制备治疗用抗体药物缀合物之医药配方时，通常会以肠道外施用为目标，再搭配医药上可接受的肠道外溶媒以及单位剂量形式。具预期纯度的抗体药物缀合物可选择性地与医药上可接受的稀释剂、溶媒、赋形剂或稳定剂混合，其形式为冻晶配方或水溶液(参考Remington's Pharmaceutical Sciences(1980)16th edition,Osol,A.Ed.)。
施用可接受的肠道外溶媒、稀释剂、溶媒、赋形剂及稳定剂时，其剂量及浓度对受者皆不具毒性，且包括缓冲液如磷酸盐、柠檬酸盐及其他有机酸；抗氧化剂包括抗坏血酸及甲硫氨酸；防腐剂(如十八烷基二甲基苄基氯化铵(octadecyldimethylbenzyl ammoniumchloride)；六甲基氯化铵(hexamethonium chloride)；苯基氯卡铵(benzalkoniumchloride)、苄索氯铵(benzethonium chloride)；或酚、丁醇或苯甲醇；具烷基之对羟基苯甲酸酯，如对羟基苯甲酸甲酯或对羟基苯甲酸丙酯；邻苯二酚、间苯二酚、环己醇；3-戊醇；及间-甲酚)；低分子量(小于大约10个残基)；蛋白质，如血清白蛋白、明胶或免疫球蛋白；亲水性聚合物如聚乙烯吡咯烷酮；氨基酸如甘氨酸、谷氨酰胺、天冬酰胺、组氨酸、精氨酸或离氨酸；单糖、双糖及其他碳水化合物包括葡萄糖、甘露糖或糊精；螯合剂如EDTA；糖如蔗糖、甘露醇、海藻糖或山梨糖醇；成盐反离子如钠；金属组合物(如锌-蛋白质组合物)；及/或非离子性界面活性剂如TWEENTM、PLURONICSTM或聚乙二醇。举例而言，专利第WO 97/04801号描述冻晶抗-ErbB2抗体配方，其内容以引用方式具体并入本文中。抗体药物缀合物之示例性配方如trastuzumab-SMCC-DM1，于约pH 6环境下具有大约100mg/ml之海藻糖(2-(羟甲基)-6-[3,4,5-三羟基-6-(羟甲基)四氢吡喃-2-基]氧基-四氢吡喃-3,4,5-三醇/2-(hydroxymethyl)-6-[3,4,5-trihydroxy-6-(hydroxymethyl)tetrahydropyran-2-yl]oxy-tetrahydropyran-3,4,5-triol；C12H22O11；CAS编号99-20-7)及大约0.1％之TWEENTM 20(吐温20；十二烷酸2-[2-[3,4-二(2-羟基乙氧基)四氢吡喃-2-基]-2-(2-羟基乙氧基)乙氧基]乙酯/2-[2-[3,4-bis(2-hydroxyethoxy)tetrahydrofuran-2-yl]-2-(2-hydroxyethoxy)ethoxy]ethyl ester；C26H50O10；CAS编号9005-64-5)。
治疗用抗体药物缀合物之医药配方可含有特定量之未反应药物基团(D)、抗体-接头中间产物(Ab-L)，及/或药物-接头中间产物(D-L)，此为制备抗体药物缀合物过程中未完全纯化及分离过量试剂、不纯物、副产物之结果；或为贮藏大量抗体药物缀合物或配方抗体药物缀合物组合物时，根据时间或温度条件产生的水解反应或降解反应之结果。
活性医药成分亦可包覆于微胶囊中，微胶囊种类包括羟丙甲纤维素或明胶微胶囊以及聚甲基丙烯酸甲酯微胶囊，可分别于胶体药物传输系统(例如脂质体、白蛋白微球、微滴乳状液、奈米粒子及奈米胶囊)或粗滴乳状液中经由例如聚集技术(coacervationtechnique)或界面聚合法制备。上述技术公开于Remington's Pharmaceutical Sciences16th edition,Osol,A.Ed.(1980)。
可制备持续释放制剂。持续释放制剂之合适示例性，包括包含该抗体药物缀合物的固态疏水性聚合物之半透膜基质，其具有成形产品之外形，如薄膜或微胶囊。持续释放基质包括聚酯纤维、水凝胶(如聚甲基丙烯酸羟基乙酯或聚乙烯醇)、聚乳酸(美国专利第3,773,919号)、L-聚谷氨酸及γ-乙基-L-谷氨酰胺共聚物、不可降解之乙烯/醋酸乙烯酯共聚物、可降解之乳酸-甘醇酸共聚物如LUPRON DEPOTTM(成分为乳酸-甘醇酸共聚物及柳菩林之可注射式微球)，以及聚-D-(-)-3-羟基丁酸(poly-D-(-)-3-hydroxybutyric acid)。
预期于活体内施用之配方必须为无菌，使用无菌渗透膜实施渗透作用可轻易达成此目标。
该些配方包括适用前述施用途径之配方。基于方便因素，可将配方以单位剂量形式呈现，且可使用制药技术领域之任何习知技术制备。相关技术和配方可参考Remington'sPharmaceutical Sciences(Mack Publishing Co.,Easton,Pa.)。上述方法包括使活性成分与包含一或多个附加成分的溶媒结合之步骤。一般制备配方之方法，皆为使活性成分与液态溶媒或细致切分的固态溶媒或两者同步且紧密结合，接着于必要时替产物塑形。
水性悬浮液内含有活性材料与适用于制备水性悬浮液的赋形剂之混合物。上述赋形剂包括悬浮剂，如羧甲基纤维素、交联羧甲基纤维素、甲基纤维素、羟丙甲纤维素、海藻酸钠、聚乙烯吡咯烷酮(polyvinylpyrrolidone)、黄耆胶、阿拉伯胶以及分散剂或润湿剂，如天然生成之甘油磷脂(如卵磷脂)、氧化烷基与脂肪酸之缩合产物(如聚氧乙烯硬脂酸酯)、氧化乙烯与长链脂肪醇之缩合产物(如十七烷乙烯氧基鲸蜡醇)、氧化乙烯与自脂肪酸及己糖醇酐(如聚乙烯脱水山梨醇单油酸酯)衍生的部分酯之缩合产物。水性悬浮液亦可含有一或多种防腐剂，如苯甲酸乙酯或对羟基苯甲酸丙酯；一或多种着色剂；一或多种调味剂；及一或多种甜味剂，如蔗糖或糖精。
抗体药物缀合物之医药组合物可具备无菌注射式制剂之形式，如无菌水性或油性悬浮液。悬浮液可根据习知技术调配，即使用上述合适之分散剂或润湿剂及悬浮剂。无菌注射式制剂亦可为无菌注射式溶液或悬浮液，其溶于无毒且肠道外可接受的稀释剂或溶剂，如溶于1,3-丁二醇之溶液或制备为冻晶粉。可使用的接受溶媒及溶剂包括水、林格氏液及等渗氯化钠溶液。此外，传统上可使用无菌固定油作为溶剂或悬浮媒介。为达此目的，可使用任何无味固定油，包括合成单酸或双酸甘油酯。另外，制备注射式制剂时亦可使用如油酸等脂肪酸。
可与溶媒材料结合以制备单剂量制剂之活性成分，其剂量会根据接受治疗对象及施用模式变动。举例而言，静脉内灌注预计使用的水性悬浮液内，每毫升可含有大约3到500μg之活性成分，以使灌注合适体积之速率可达30mL/hr。进行皮下(一次全剂量注射)施用时，用量可为大约1.5mL或少于总体积之量，浓度可为每mL含大约100mg的抗体药物缀合物。对于需要经过频繁、慢性施用的抗体药物缀合物，可采用皮下注射方式，如透过预先充填之注射器或自动注射装置。
一般而言，施用抗体药物缀合物时，每剂之医药上具疗效起始剂量介于大约0.01-100mg/kg之间，即每日大约0.1至20mg/每kg病患体重，而一般施用化合物之起始剂量为每日0.3至15mg/kg。举例而言，可对人类病患施用之起始剂量为大约1.5mg抗体药物缀合物/每kg病患体重。此剂量可加重至最大可容忍剂量。施用剂量之时程大约为每三周一次，但会根据病患身体症状或反应调高或调低施用频率。此剂量可进一步于治疗过程中调整为等于或低于最大可容忍剂量，在多次施用之情形下，如大约四次或四次以上，便可使病患安全无虞。
适合肠道外施用之配方包括水性及非水性无菌注射溶液，其可包含抗氧化剂、缓冲液、抑菌剂及溶质，使配方与预期接受注射患者之血液渗透压相等；以及可包含水性及非水性无菌悬浮液，可包括悬浮剂及增稠剂。
口服施用蛋白质药物时，由于药物在患者体内被吸收、水解、变性之程度有限，导致生物利用度偏低，一般较不倾向采取此施用途径。不过，适合口服施用的抗体药物缀合物配方可制成分装形式，如胶囊、囊剂或锭剂，每一分装单位皆含有预先决定的抗体药物缀合物剂量。
可将配方包装于单位剂量或多剂量容器内，例如封装之安瓿或小瓶，且可贮藏于冷冻干燥(冻晶)状态下，使用前仅需要透过无菌液态溶媒，例如水，便可立即注射。实时注射液及悬浮液皆由先前描述之无菌粉末、颗粒、锭剂制备。示例性单位剂量配方包含每日剂量或单位每日次剂量，或者合适小单位之之活性成分。
本发明进一步提供兽医用组合物，其包含至少一种上述之活性成分，以及兽医用溶媒。兽医用溶媒为适用于施用兽医用组合物之材料，其可为固态、液态或气态材料，于兽医领域中为惰性或可接受的材料，且与活性成分相容。兽医用组合物之施用方式包括肠道外、口服或其他预期之途径。
基于预防或治疗疾病之目的，抗体药物缀合物之合适剂量将取决于如上述之待治疗疾病种类、疾病严重程度及进程、分子施用目的为预防或治疗、先前疗程、病患病史与对抗体之反应，以及主治医师之裁量权。合适情况为对病患于一次治疗或一系列疗程中施用该分子。依病症种类及严重程度，分子之起始候选剂量为大约1μg/kg至15mg/kg(如0.1-20mg/kg)，无论是透过一或多次分别施用或连续灌注方式对病患施用分子。一般每日剂量可能介于大约1μg/kg至100mg/kg或以上，视上述因素而定。对病患施用的示例性抗体药物缀合物之剂量介于大约0.1至大约10mg/每kg病患体重之间。
对于在数天或更长时间内反复施用之情形，将视症状而定，持续治疗至症状如预期受到抑制为止。示例性给药疗程包含施用大约4mg/kg之起始负荷剂量，接着每周固定施用大约2mg/kg之抗ErbB2抗体。其他给药疗程亦可具疗效。使用传统技术及测定方式可轻易监测此疗法之进度。
组合疗法
在一医药组合配方或组合疗法给药疗程中，抗体药物缀合物可与具抗癌性质之第二化合物结合。较佳地，该医药组合配方或给药疗程之第二化合物具有和该组合的抗体药物缀合物互补之活性，因此不会互相产生不良影响。
第二化合物可为化疗制剂、细胞毒性制剂、细胞激素、生长抑制剂、抗激素制剂、芳香环酶抑制剂、蛋白激酶抑制剂、脂质激酶抑制剂、抗雄性激素、反义寡核苷酸、核酶、基因疗法疫苗、抗血管新生制剂及/或心脏保护药剂。上述分子可适当包含于组合物中，其剂量相对于预期目的具有疗效。含有抗体药物缀合物之医药组合物，亦可含有具治疗有效量之化疗制剂，如微管蛋白生成抑制剂、拓扑异构酶抑制剂或DNA结合剂。
界定代谢产物时，可透过制备被放射性标记(如14C或3H)的抗体药物缀合物、于肠道外对大鼠、小鼠、豚鼠、猴子、人类等动物施用可侦测剂量(如大于约0.5mg/kg)的抗体药物缀合物、预留足够时间使代谢发生(一般大约为30秒到30小时)，并且将其转化产物自尿液、血液或其他生物样本分离。上述产物在被标记之后，即可被轻易分离(分离其他产物时，则透过能与仍存在代谢产物中的表位结合的抗体)。代谢产物结构会以传统方式测定，如使用质谱仪、液相层析质谱仪或核磁共振分析法。一般而言，分析代谢产物之方法与本发明所属领域中技术人员习知之传统药物代谢研究方法相同。当转化产物不存在于活体内时，即可用于诊断测定过程，以便施用具疗效剂量的抗体药物缀合物化合物。
代谢产物包括于活体内切割抗体药物缀合物之产物，其中药物基团与抗体之键结会被切割。代谢切割可能因此产生裸露抗体或抗体片段。抗体代谢产物可与部分或全部之接头连接。代谢切割亦可产生完整或部分药物基团。药物基团之代谢产物可与部分或全部之接头连接。
制造物
在另一实施例中，提供一种制造物或“工具组”，其包含抗体药物缀合物及可用于治疗前述病症之材料。该制造物包含容器以及显示于容器上或与容器相关之标签或仿单。合适之容器包括瓶子、小瓶、针筒或泡罩包装。容器可由许多材料形成，如玻璃或塑料。容器内装有抗体药物缀合物组合物，其具备治愈疾病疗效，且可具有无菌给药通道(例如容器可为静脉注射袋或小瓶，小瓶含有可以皮下注射针头戳穿之塞子)。组合物中至少一种活性制剂为抗体药物缀合物。根据标签或仿单说明，组合物可用于治疗任意指定之病症，如癌症。
无须进一步说明，对本发明所属技术领域中具有通常知识者而言，一般皆可根据以上说明完全实现本发明。因此，以下提供之具体实施例仅作为例示性说明，不应被理解为具有任何限制本文后续公开内容之意图。本文引述之所有文献皆以引用方式并入，以配合本文目的或涉及之主题。
实施例
实施例1：抗体与药物之缀合
PolyTherics公司将单甲基奥瑞斯他丁反应试剂(MMAE)与OBI-888单克隆抗体缀合，以制备抗体药物缀合物(OBI-999)。双硫缀合物接头如美国专利第7595292号(WO2005/007197)所公开；OBI-888为抗Globo H之单克隆抗体，如美国专利第20170101462号(WO2017/062792)所公开；单甲基奥瑞斯他丁反应试剂为市场上可购得之抗肿瘤剂。透过实施试验级反应和纯化步骤，以判定合适之条件。结果显示，还原抗体不易聚合。筛选还原与缀合之条件后，即使缀合物产率显著提升。OBI-999(药物抗体比＝4)之完整化学结构式如下所示：
实施例2：抗体药物缀合物(OBI-999)之分析
2.1外观
以颜色与透明度等视觉效果检视产物溶液之外观。
2.2疏水性交互作用层析法分析
使用与Dionex Ultimate 3000RS高效液相层析法系统连接之TOSOH之TSKgel丁基疏水性色谱柱(Butyl-NPR column，3.5cm×4.6mm)进行疏水性交互作用层析法。流动相为缓冲液A(溶于50mM磷酸钠之1.5M硫酸铵，pH 7.0)。使用缓冲液B(溶于50mM磷酸钠之20％异丙醇(v/v)，pH 7.0)实施梯度冲提，自20％至86％(超过18.4分钟，流速为1.2mL/min)。分析过程中，管柱温度皆维持30℃，并于280nm时进行紫外线侦测。每组分析皆注射10μg之原生OBI-888或缀合产物。
2.3粒径筛析层析法分析
使用与Agilent Infinity 1260 Bioinert系统连接的TOSOH Bioscience之TSKgel Super SW 3000色谱柱(4.6mm×30cm，4μm)及保护管柱(4.6mm×4cm)进行粒径筛析层析法。流动相为0.2M磷酸钾缓冲液，pH 6.8(0.2M氯化钾、15％异丙醇)。流速稳定维持0.35mL/min。分析过程中，管柱皆维持于室温，并实施等位冲提20分钟，于280nm时侦测紫外线。每组分析皆注射10μg之缀合产物。以主峰面积及初始冲提峰面积分别与总峰面积比较，以分别计算纯度与聚合度百分比。
2.4十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)分析
使用NuPAGE 4-12％之Bis-Tris胶(Invitrogen，Cat#NP0321BOX)搭配脂肪酸甲脂磺酸钠，于还原条件下进行SDS-PAGE分析。分析时，将1μg样本(基于蛋白质)置于各泳道之电泳胶上方。于200V下进行电泳35分钟。电泳胶经InstantBlue染剂(Expedeon，Cat#ISB1LUK)染色以侦测蛋白质，并使用ImageQuant造影设备(GE Healthcare)分析电泳胶。
2.5使用Bradford定量法与紫外线吸收度判定浓度
使用Bradford微量滴定盘定量法，并与原生OBI-888标准曲线(0-100μg/mL)比对后测定缀合物之浓度。进行Bradford定量法时，于96孔平底培养皿中将100μL校准标准物及样本与200μL之Bradford试剂(Expedeon，BFU1L)混合，再取同样三份之混合物。读取595nm之光密度，并与该原生OBI-888标准曲线比对以测定样本浓度。缀合物(基于蛋白质)之浓度亦经由操作超威量光谱仪后之紫外线吸收度(A280)测定。取同样三份之测量结果，并透过平均值计算抗体浓度：
c＝Abs/ε.l
其中c为浓度(mg/mL)；Abs为280nm时之吸收度；ε为消光系数(mL/mg.cm)；l为长度(cm)。
自大型缀合物分离出一抗体药物缀合物样本(OBI-999)，该缀合物样本之药物对抗体值为4，且经分离出的抗体药物缀合物(OBI-999)重量为14.5mg(经Bradford法测定)。使用疏水性交互作用层析法分析药物对抗体比值分布情形，如图1所示。图1(A)显示使用疏水性交互作用层析法分析OBI-888之一单峰(100％)，而图1(B)则显示抗体药物缀合物(OBI-999)之一主峰(82.3％)，该抗体药物缀合物之药物对抗体值为4。OBI-888(图2A)及抗体药物缀合物(OBI-999)(图2B)之纯度经粒径筛析层析法测定，两者纯度皆大于96％。最后，图3显示针对OBI-888及抗体药物缀合物(OBI-999)之SDS-PAGE分析结果。样本为均相产物(单一药物对抗体比值>82％)，且聚合度低(<5％)。表2列出相关分析结果。
表2：抗体药物缀合物(OBI-999)之分析结果
实施例3：测量裸小鼠体内示例性抗体之抗肿瘤活性(乳癌)
在一人类乳腺癌肿瘤异体移植模型中，MCF-7(ATCC HTB-22)细胞经皮下途径(对每只小鼠施打0.2mL之matrigel/培养液1:1混合物，内含2.0×107个细胞)接种至无胸腺母裸小鼠(nu/nu)身体右侧。自细胞移植前一周至研究结束期间，每周于小鼠肩胛骨间经皮下施打雌二醇环戊基丙酸酯(estradiol cyclopentyl propionate)补充注射液(100μg/每小鼠)两次。将经植入肿瘤之小鼠分为十一组实验组，每组包含六只小鼠，细胞移植后隔天即开始施打测试试剂(标记为第1天)。
3.1试验物质及给药模式
每天使用含25mM柠檬酸钠、100mM NaCl缓冲液(pH 6.5)之稀释原液制备抗体药物缀合物(OBI-999)、OBI-888及MMAE等试验物质，并透过静脉(IV)每周对小鼠施打一次，为期两周或六周。每周对两组实验组经静脉施打溶媒(25mM柠檬酸钠、100mM NaCl缓冲液)一次，分别为期六周(第一组)及两周(第二组)。每周施打10mg/kg抗体药物缀合物(OBI-999)试验物质一次，为期两周，或每周施打0.3、1及3mg/kg，为期六周。每周施打10mg/kgOBI-888试验物质一次，为期两周，或每周施打0.3、1及3mg/kg，为期六周。每周施打0.057mg/kg MMAE试验物质一次，为期六周。除抗体药物缀合物(OBI-999)具12.5mL/kg之剂量、以10mg/kg施打之外，所有试验物质皆具10mL/kg之剂量。
表3：裸小鼠体内示例性抗体之抗肿瘤活性之研究设计(乳癌)
3.2克隆
人类乳腺癌肿瘤克隆MCF-7(ATCC HTB乳腺癌)由赞助人提供。肿瘤细胞由赞助人制备培养(1×108个细胞/mL)，而包含2×107个细胞之0.2mLMCF-7肿瘤细胞接种源(1:1混合之matrigel与培养液)则以皮下注射方式植入每只小鼠右侧身体。
3.3受试动物
实验使用自台湾BioLasco公司(经Charles River Laboratories授权)购得之六至七周龄母裸小鼠(nu/nu)。受试动物皆饲养于个独立通风笼中(IVC，36 Mini IsolatorSystem)。分配给每3-5只受试动物之空间大小为27×20×14cm3。所有受试动物皆于恒温(20-24℃)、恒湿(30-70％)、亮暗各12小时之干净卫生环境中。小鼠可自由食用标准实验饲料(Oriental Yeast Co.,Ltd.，日本)并饮用高压灭菌自来水。动物实验之饲养、实验与死后处置等流程，皆依据Guide for the Care and Use of Laboratory Animals:EighthEdition(National Academies Press,Washington,D.C.,2011)之规范，于实验团队经AAALAC认证之实验动物设施中执行。此外，进行实验之动物照护及使用申请表已由Eurofins Panlabs Taiwan,Ltd.之实验动物照护及使用委员会审核并核准。
3.4实验化学物质
本实验使用益斯多注射液(Estol-Depot Inj.，estradiol cyclopentylpropionate)(Astar，台湾)及BD Matrigel基质胶(BD Biosciences，美国)。
3.5实验器材
实验器材包括光标尺(Mitutoyo，日本)、离心机5810R(Eppendorf，德国)、二氧化碳培养箱(Forma Scientific Inc.，美国)、血球计数器(Hausser Scientific Horsham，美国)、独立通风笼(36 Mini Isolator system，Tecniplast，意大利)、倒立显微镜CK-40(Olympus，日本)、系统显微镜E-400(Nikon，日本)及垂直无菌操作台(Tsao-Hsin，台湾)。
3.6实验方法
每周观察两次并纪录小鼠肿瘤体积、体重、死亡率及明显毒性作用征兆，为期77天。肿瘤体积(mm3)系根据长椭球体积公式计算：长度(mm)×[宽度(mm)]2×0.5。肿瘤生长抑制程度以T/C(治疗/控制)×计。T/C值≤42％即代表显著抗肿瘤活性。使用双因子变异数分析再进行Bonferroni事后检定，以判断各实验组相较于各溶媒对照组之统计显著性(*p<0.05)。
3.7实验结果
表4-1：异体移植MCF-7乳癌肿瘤及裸小鼠体内肿瘤体积(第1天到第26天)
表4-2：异体移植MCF-7乳癌肿瘤及裸小鼠体内肿瘤体积(第29天到第49天)
表4-3：异体移植MCF-7乳癌肿瘤及裸小鼠体内肿瘤体积(第53天到第77天)
表5-1：异体移植MCF-7乳癌肿瘤及裸小鼠体重(第1天到第26天)
表5-2：异体移植MCF-7乳癌肿瘤及裸小鼠体重(第29天到第49天)
表5-1：异体移植MCF-7乳癌肿瘤及裸小鼠体重(第53天到第77天)
图4显示植入母裸小鼠(nu/nu)之MCF-7肿瘤生长曲线。每周使用静脉注射施打抗体药物缀合物(OBI-999)一次，剂量为10mg/kg，为期两周。相较于对应之溶媒对照组(图4A)，植入肿瘤之实验组自第19天至第77天呈现显著抗肿瘤活性(T/C值≤42％)。此外，每周施打一次抗体药物缀合物(OBI-999)、为期六周之实验组呈现剂量依赖效应。实验过程中，每周静脉施打抗体药物缀合物(OBI-999)0.3mg/kg一次、为期六周之组别，并未呈现明显抗肿瘤活性。然而，每周静脉施打抗体药物缀合物(OBI-999)1mg/kg及3mg/kg一次、为期六周之组别，相较于对应之溶媒对照组(图4B)，则分别自第26天至第77天及自第19天至第77天呈现显著(T/C值≤42％)抗肿瘤活性。
每周静脉施打OBI-888一次、为期六周、剂量10mg/kg之组别，在实验给药期间及给药后一小段时间内，相较于对应之溶媒对照组(图4A)呈现微弱至中等抗肿瘤活性。此外，每周施打一次OBI-888、为期六周之实验组呈现剂量依赖效应。实验过程中，每周静脉施打OBI-888一次、为期六周、剂量0.3mg/kg之组别呈现微弱抗肿瘤活性。实验过程中，每周静脉施打OBI-888一次、为期六周、剂量1mg/kg之组别呈现中等抗肿瘤活性。每周静脉施打OBI-888一次、为期六周、剂量3mg/kg之组别于第67天及第70天呈现显著(T/C值≤42％)抗肿瘤活性，不过第26天时，抗肿瘤活性相较于对应之溶媒对照组(图4B)即已接近显著程度(T/C值≤42％)。
每周静脉施打MMAE一次、为期六周、剂量0.057mg/kg之组别，在实验给药期间及给药后一小段时间内，相较于对应之溶媒对照组(图4B)呈现微弱至中等抗肿瘤活性。
图5显示被植入MCF-7肿瘤之母裸小鼠(nu/nu)体重变化。所有试验物质在所有剂量下皆可被受试动物容忍，且实验过程中，施打试验物质之组别皆未呈现显著体重变化。实验前后并未观察到任何明显毒性反应。相较于溶媒对照组，施打抗体药物缀合物(OBI-999)、OBI-888及MMAE之组别显然安全无虞。
实施例4：测量裸小鼠体内示例性抗体之抗肿瘤活性(胃癌)
在一人类胃癌肿瘤异体移植模型中，NCI-N87(ATCC CRL-5822)活体细胞经皮下途径(对每只小鼠施打0.2mL之matrigel(1:1)，内含2.5×106个细胞)接种至母裸小鼠(nu/nu)身体右侧。将经植入肿瘤之小鼠分为七组实验组，每组包含五只小鼠，细胞移植后隔天即开始施打测试试剂(标记为第1天)。
4.1试验物质及给药模式
使用含25mM柠檬酸钠、100mM NaCl缓冲液(pH 6.5)之稀释原液制备抗体药物缀合物(OBI-999)、OBI-888及MMAE等试验物质，并透过静脉(IV)每周对小鼠施打一次，为期四周。每周经腹腔内(IP)对小鼠注射标准制剂、MMAE抗体及对应溶媒(PBS pH 7.4)一次，为期四周，剂量为0.191mg/kg。某一实验组接受试验物质之组合疗法，其中包括剂量10mg/kg之OBI-888及剂量0.191mg/kg之MMAE。
表6：裸小鼠体内示例性抗体之抗肿瘤活性之研究设计(胃癌)
4.2克隆
人类胃癌活体肿瘤克隆NCI-N87(ATCC CRL-5822)购自Eurofins PanlabsTaiwan,Ltd.，并同样于Eurofins Panlabs Taiwan,Ltd.培养。于37℃下，使用含有10％胎牛血清且置于5％二氧化碳培养箱中之RPMI-1640培养液培养肿瘤细胞，并将肿瘤细胞以皮下注射方式植入每只小鼠右侧身体。
4.3受试动物
实验使用自台湾BioLasco公司(经Charles River Laboratories授权)购得之五至六周龄母裸小鼠(nu/nu)。受试动物皆饲养于个独立通风笼中(IVC，36 Mini IsolatorSystem)。分配给每3只受试动物之空间大小为27×20×14cm3。所有受试动物皆于恒温(20-24℃)、恒湿(30-70％)、亮暗各12小时之干净卫生环境中。小鼠可自由食用标准实验饲料[MFG(Oriental Yeast Co.,Ltd.，日本)]并饮用罐装高压灭菌自来水。动物实验之饲养、实验与死后处置等流程，皆依据Guide for the Care and Use of Laboratory Animals:Eighth Edition(National Academies Press,Washington,D.C.,2011)之规范，于实验团队经AAALAC认证之实验动物设施中执行。此外，进行实验之动物照护及使用申请表已由Eurofins Panlabs Taiwan,Ltd.之实验动物照护及使用委员会审核并核准。
4.4实验化学物质
本实验使用NaCl(Sin-Tong，台湾)、胎牛血清(Hyclone，美国)、Matrigel(BD，美国)及RPMI-1640(Hyclone，美国)。
4.5实验器材
实验器材包括动物笼(Tecniplast，意大利)、1000mL烧杯(Kimax，美国)、游标尺(Mitutoyo，日本)、第二类生物安全操作柜(NuAire，美国)、独立通风笼(IVC，36 MiniIsolator system)(Tecniplast，意大利)、小鼠磅秤#Z-40(Taconic，美国)、不锈钢钳(Klappenecker，德国)及垂直无菌操作台(Tsao-Hsin，台湾)。
4.6实验方法
每周观察两次并纪录小鼠肿瘤体积、体重、死亡率及明显毒性作用征兆，为期100天。肿瘤生长抑制程度以T/C(治疗/控制)×计。相较于溶媒对照组，T/C值≤42％即代表显著抗肿瘤活性。使用双因子变异数分析再进行Bonferroni事后检定，以判断各实验组相较于各溶媒对照组之统计显著性(*p<0.05)。
4.7实验结果
表7-1：异体移植NCI-N87胃癌肿瘤及母裸小鼠(nu/nu)体内肿瘤体积(第1天到第25天)
表7-2：异体移植NCI-N87胃癌肿瘤及母裸小鼠(nu/nu)体内肿瘤体积(第29天到第53天)
表7-3：异体移植NCI-N87胃癌肿瘤及母裸小鼠(nu/nu)体内肿瘤体积(第57天到第85天)
表7-4：异体移植NCI-N87胃癌肿瘤及母裸小鼠(nu/nu)体内肿瘤体积(第88天到第100天)
表8-1：异体移植NCI-N87胃癌肿瘤及母裸小鼠(nu/nu)体重(第1天到第25天)
表8-2：异体移植NCI-N87胃癌肿瘤及母裸小鼠(nu/nu)体重(第29天到第53天)
表8-3：异体移植NCI-N87胃癌肿瘤及母裸小鼠(nu/nu)体重(第57天到第85天)
表8-4：异体移植NCI-N87胃癌肿瘤及母裸小鼠(nu/nu)体重(第88天到第100天)
图17显示植入母裸小鼠(nu/nu)之NCI-N87肿瘤生长曲线。实验过程中，经静脉注射剂量为1mg/kg的抗体药物缀合物(OBI-999)之实验组，相较于溶媒对照组呈现强效抗肿瘤活性。实验组自第15天起即呈现显著抗肿瘤活性(T/C值≤42％)并持续至第53天，TGI百分比于第53天达最大值83％。实验过程中，经静脉注射剂量为3mg/kg的抗体药物缀合物(OBI-999)之实验组，相较于溶媒对照组呈现强效抗肿瘤活性。实验组自第11天起即呈现显著抗肿瘤活性(T/C值≤42％)并持续至第53天，TGI百分比于第53天达最大值97％。实验过程中，经静脉注射剂量为10mg/kg的抗体药物缀合物(OBI-999)之实验组，相较于溶媒对照组呈现强效抗肿瘤活性。实验组自第11天起即呈现显著抗肿瘤活性(T/C值≤42％)并持续至第53天，TGI百分比于第53天达最大值97％。
实验过程中，每周经静脉注射剂量为10mg/kg的OBI-888之实验组，相较于溶媒对照组呈现微弱抗肿瘤活性(图17)。
实验过程中，每周经静脉注射剂量为10mg/kg的试验物质抗-CD 30抗体药物缀合物(OBI-910)之实验组，相较于溶媒对照组呈现强效抗肿瘤活性。实验组自第11天起即呈现显著抗肿瘤活性(T/C值≤42％)并持续至第53天，TGI百分比于第53天达最大值75％。
实验过程中，每周经腹腔内注射剂量为0.191mg/kg的标准制剂MMAE之实验组，相较于溶媒对照组呈现中等抗肿瘤活性，TGI百分比于第53天达最大值53％。
实验过程中，施打包含10mg/kg试验物质OBI-888及0.191mg/kg标准制剂MMAE的组合疗法之实验组，相较于溶媒对照组呈现显著抗肿瘤生长效果。实验组自第11天起即呈现显著抗肿瘤活性(T/C值≤42％)并持续至第53天，TGI百分比于第53天达最大值62％(图17)。
图18显示被植入NCI-N87肿瘤之母裸小鼠(nu/nu)体重变化。所有试验物质皆可被受试动物容忍，且实验过程中，施打试验物质之组别皆未呈现显著体重变化。
实施例5：测量裸小鼠体内示例性抗体之抗肿瘤活性(肺癌)
在一人类小细胞肺癌肿瘤异体移植模型中，将NCI-H526第E期上皮癌活体细胞；变异小细胞肺癌细胞(ATCC CRL-5811)经皮下途径(对每只小鼠施打0.2mL之matrigel(1:0.8)，内含1×106个细胞)接种至母裸小鼠(nu/nu)身体右侧。将经植入肿瘤之小鼠分为五组实验组，每组包含八只小鼠，细胞移植后隔天即开始施打测试试剂(标记为第1天)。
4.1试验物质及给药模式
使用含25mM柠檬酸钠、100mM NaCl缓冲液(pH 6.5)之稀释原液制备抗体药物缀合物(OBI-999)、OBI-888及MMAE等试验物质，并透过静脉(IV)每周对小鼠施打一次，为期四周。每周经腹腔内(IP)对小鼠注射标准制剂、MMAE抗体及对应溶媒(PBS pH 7.4)一次，为期四周，剂量为0.191mg/kg。某一实验组接受试验物质之组合疗法，其中包括剂量10mg/kg之OBI-888及剂量0.191mg/kg之MMAE。
表9：裸小鼠体内示例性抗体之抗肿瘤活性之研究设计(肺癌)
5.2克隆
NCI-H526肺癌肿瘤克隆购自美国典型菌种保护中心(American Type CultureCollection)(ATCC CRL-5811，变异小细胞肺癌上皮癌)，并于Eurofins Panlabs Taiwan,Ltd.培养。于37℃下，使用含有10％胎牛血清且置于5％二氧化碳培养箱中之RPMI-1640培养液培养肿瘤细胞，并将肿瘤细胞以皮下注射方式植入每只小鼠右侧身体。
5.3受试动物
实验使用自台湾BioLasco公司(经Charles River Laboratories授权)购得之六至七周龄母裸小鼠(nu/nu)。受试动物皆饲养于个独立通风笼中(IVC，36 Mini IsolatorSystem)。分配给每5只受试动物之空间大小为27×20×14cm3。所有受试动物皆于恒温(20-24℃)、恒湿(30-70％)、亮暗各12小时之干净卫生环境中。小鼠可自由食用标准实验饲料[MFG(Oriental Yeast Co.,Ltd.，日本)]并饮用高压灭菌自来水。动物实验之饲养、实验与死后处置等流程，皆依据Guide for the Care and Use of Laboratory Animals:EighthEdition(National Academies Press,Washington,D.C.,2011)之规范，于实验团队经AAALAC认证之实验动物设施中执行。此外，进行实验之动物照护及使用申请表已由Eurofins Panlabs Taiwan,Ltd.之实验动物照护及使用委员会审核并核准。
5.4实验化学物质
本实验使用胎牛血清(Hyclone，美国)、RPMI-1640培养液(ThermoFisher，美国)及Matrigel(Corning，美国)。
5.5实验器材
实验器材包括光标尺(Mitutoyo，日本)、离心机5810R(Eppendorf，德国)、二氧化碳培养箱(Forma Scientific Inc.，美国)、血球计数器(Hausser Scientific Horsham，美国)、独立通风笼架(36 Mini Isolator system，Tecniplast，意大利)、倒立显微镜CK-40(Olympus，日本)、系统显微镜E-400(Nikon，日本)及垂直无菌操作台(Tsao-Hsin，台湾)。
5.6实验方法
每周观察两次并纪录小鼠肿瘤体积、体重、死亡率及明显毒性作用征兆，为期45天。肿瘤生长抑制程度以T/C(治疗/控制)×计。相较于溶媒对照组，T/C值≤42％即代表显著抗肿瘤活性。使用双因子变异数分析再进行Bonferroni事后检定，以判断各实验组相较于各溶媒对照组之统计显著性(*p<0.05)。
5.7实验结果
表10-1：异体移植NCI-H526肺癌肿瘤及母裸小鼠(nu/nu)体内肿瘤体积(第1天到第25天)
表10-2：异体移植NCI-H526肺癌肿瘤及母裸小鼠(nu/nu)体内肿瘤体积(第29天到第45天)
表11-1：异体移植NCI-H526肺癌肿瘤及母裸小鼠(nu/nu)体重(第1天到第25天)
表11-2：异体移植NCI-H526肺癌肿瘤及母裸小鼠(nu/nu)体重(第29天到第45天)
图27显示植入母裸小鼠(nu/nu)之NCI-H526肿瘤生长曲线。实验过程中，每周经静脉注射剂量为10mg/kg的抗体药物缀合物(OBI-999)一次、为期四周之实验组，自第15天起即呈现显著抗肿瘤活性(T/C值≤42％)并持续至第31天，TGI百分比于第25天达最大值85％。
实验过程中，每周经静脉注射剂量为10mg/kg的试验物质OBI-888之实验组，相较于溶媒对照组呈现中等抗肿瘤活性；然而，实验组自第18天起即呈现显著抗肿瘤活性(T/C值≤42％)，TGI百分比于第18天达最大值61％。
实验过程中，每周经腹腔内注射剂量为0.191mg/kg的标准制剂MMAE之实验组，相较于溶媒对照组呈现中等抗肿瘤活性，TGI百分比于第18天达最大值55％。
实验过程中，施打包含10mg/kg试验物质OBI-888及0.191mg/kg标准制剂MMAE的组合疗法之实验组，相较于溶媒对照组呈现中等抗肿瘤生长效果；然而，实验组于第18天、第22天及第25天即呈现显著抗肿瘤活性(T/C值≤42％)，TGI百分比于第18天达最大值69％。
图28显示被植入NCI-H526肿瘤之母裸小鼠(nu/nu)体重变化。所有试验物质皆可被受试动物容忍，且实验过程中，施打试验物质之组别皆未呈现显著体重变化。
实施例6：测量裸小鼠体内示例性抗体之抗肿瘤活性(胰脏癌)
本实验之目的为评估OBI-888、抗体药物缀合物(OBI-999)、MMAE以及由OBI-888与MMAE结合之药剂针对公裸BALB/c小鼠体内之人类胰脏癌细胞(HPAC)异体移植模型，所产生之活体内抗肿瘤效力。
6.1试验物质及给药模式
使用含25mM柠檬酸钠、100mM NaCl缓冲液(pH 6.5)之稀释原液制备抗体药物缀合物(OBI-999)、OBI-888等试验物质及对应溶媒，并透过静脉(IV)每周对小鼠施打一次，为期四周。每周经腹腔内(IP)对小鼠注射标准制剂、MMAE抗体及对应溶媒(PBS pH 7.4)一次，为期四周，剂量为0.191mg/kg。某一实验组接受试验物质之组合疗法，其中包括剂量10mg/kg之OBI-888及剂量0.191mg/kg之MMAE。
表12：裸小鼠体内示例性抗体之抗肿瘤活性之研究设计(胰脏癌)
6.2克隆
使用Dulbecco改良的Eagle培养基与Ham’s F12培养基1:1混合形成培养基，于37℃下、含5％二氧化碳之空气中在试管内(in vitro)培养HPAC肿瘤细胞(ATCC CRL-2119)，形成一单层培养物。该培养基包含1.2g/L碳酸氢钠、2.5mM L-谷氨酰胺、15mM 4-羟乙基乙磺酸(HEPES)及0.5mM丙酮酸钠，并搭配0.002mg/mL胰岛素、0.005mg/mL运铁蛋白、40ng/mL氢羟肾上腺皮质素(hydrocortisone)、10ng/mL表皮生长因子及5％胎牛血清，以及100U/mL青霉素及100μg/mL链霉素。使用胰蛋白酶EDTA进行规律之肿瘤细胞继代培养，每周两次。采集指数生长期内之肿瘤细胞，并计算细胞数以进行肿瘤接种。
6.3受试动物
实验使用自上海Lingchang公司取得之六至八周龄公裸小鼠(nu/nu)。受试动物皆饲养于恒温恒湿之个独立通风笼中，每笼含四只小鼠(温度为20-26℃，湿度为40-70％)。通风笼材质为聚碳酸酯，大小为300mm×200mm×180mm。笼底垫材为玉米梗，每周更换两次。实验过程中，受试动物可自由取用经辐射消毒之干燥颗粒食物以及饮用水。每笼之卷标包含以下信息：动物数量、性别、品系、接收日期、治疗方式、实验编号、组别及治疗开始日期。
6.4实验方法
实验终点为测定试验物质之抗肿瘤效力。每周使用光标尺测量两次肿瘤二维尺寸，以公式V＝0.5a×b2计算肿瘤体积，其中a、b分别为肿瘤之长直径及短直径，体积单位以mm3表示。再以肿瘤尺寸计算T/C值。T/C值(以百分比表示)代表抗肿瘤效力；T与C分别为某一天实验组肿瘤平均体积及对照组肿瘤平均体积。每组之肿瘤生长抑制率(TGI)由以下公式计算：TGI(％)＝[1-(Ti-T0)/V1-V0]×100；Ti为某一天实验组之平均肿瘤体积，T0为第0天实验组之平均肿瘤体积，Vi为与Ti同一天的溶媒对照组之平均肿瘤体积，而V0为第0天溶媒对照组之平均肿瘤体积。
每个时间点下每组之肿瘤体积皆使用概述统计(summary statistics)描述，包括平均值与平均标准误差值。最终轮投药后(分组后第37天)，针对于最佳疗效出现时间点所收集之资料，以统计方法分析各组之肿瘤体积差异。使用单因子变异数分析比较各组之肿瘤体积差异，若取得一显著F统计量(治疗变异相对误差变异之比值)，再使用Games-Howell检定比较各组差异；若否，则使用Dunnett(双侧)检定。以双因子变异数分析分析OBI-888及MMAE间之潜在加乘作用。所有数据皆使用SPSS 17.0分析，p<0.05时代表具有统计显著性。
6.5实验结果
图34显示经植入HPAC的裸小鼠(nu/nu)体内肿瘤之生长曲线。对小鼠施打之10mg/kg抗体药物缀合物(OBI-999)试验物质自第14天起呈现显著抗肿瘤活性，持续至第37天。施打抗体药物缀合物(OBI-999)的小鼠之平均肿瘤尺寸为1mm3(T/C＝0.1％，TGI＝104.0％，p<0.001)。对小鼠单独施打之10mg/kg OBI-888制剂并未呈现显著抗肿瘤活性。施打OBI-888的小鼠之平均肿瘤尺寸为2,044mm3(T/C＝94.2％，TGI＝6.0％，p＝0.967)。对小鼠单独施打或与10mg/kgOBI-888合并施打之0.191mg/kg MMAE制剂呈现微弱抗肿瘤活性，小鼠之平均肿瘤尺寸分别为1,644mm3(T/C＝75.8％，TGI＝25.2％，p＝0.231)及之平均肿瘤尺寸为1,680mm3(T/C＝77.4％，TGI＝23.5％，p＝0.213)。
图35显示经植入HPAC的裸小鼠(nu/nu)之体重变化。所有试验物质皆可被受试动物容忍，且实验过程中，施打试验物质之组别皆未呈现显著体重变化。
除非另外说明，否则本文使用的所有技术及科学词汇及缩写，皆与本发明所属技术领域中具通常知识者所理解之意义相同。虽然任何与本文描述相似或相等之组合物、方法、工具组及信息传递方式可用以实施本发明，但较佳之组合物、方法、工具组及信息传递方式仍如本文所述。
本文列出之所有参考文献，皆以法律允许最大限度之引用方式并入本文中。针对该些参考文献之讨论，目的仅为概述文献作者之主张。本文并未认定任何参考文献(或任何参考文献之一部分)为相关习知技术。对于任何所列参考文献之准确性及相关性，申请人保有质疑之权利。

Claims (47)

1.一种碳水化合物分子，包含一或多个对癌症细胞具特异性的抗原。
2.如权利要求1所述的碳水化合物分子，其中该抗原可使具抗原特异性的抗体将治疗剂有效输送至目标癌症细胞。
3.如权利要求1所述的碳水化合物分子，其中该抗原为Globo系列抗原。
4.如权利要求3所述的碳水化合物分子，其中该Globo系列抗原为阶段特异性胚胎抗原4(SSEA-4)(Neu5Acα2→3Galβ1→3GalNAcβ1→3Galα1→4Galβ1→4Glcβ1)、阶段特异性胚胎抗原3(SSEA-3)(Galβ1→3GalNAcβ1→3Galα1→4Galβ1→4Glcβ1)或Globo H(Fucα1→2Galβ1→3GalNAcβ1→3Galα1→4Galβ1→4Glc)。
5.如权利要求2所述的碳水化合物分子，其中该治疗剂为抗癌毒素、化疗制剂、光动力疗法制剂或生物制剂。
6.如权利要求1所述的碳水化合物分子，其中该癌症为表达Globo系列抗原的癌症。
7.一种抗体药物缀合物(ADC)，包含治疗剂及与Globo系列抗原结合的抗体或抗原结合片段；
其中该治疗剂透过接头以共价键与该抗体或该抗原结合片段缀合。
8.一种组合物，包含
如权利要求7的抗体药物缀合物，其具有以下化学式：
Ab-(L-D)n (I)
其中一或多个药物基团D透过接头L与抗体Ab以共价键相连，该抗体为与Globo系列抗原结合的抗体；n为由1到8的整数。
9.如权利要求7的抗体药物缀合物，其中该抗体选自单克隆抗体、抗原结合片段、嵌合抗体及人源化抗体。
10.如权利要求9的抗体药物缀合物，其中该抗原结合片段为Fab、F(ab’)2、Fv或scFv片段。
11.如权利要求7的抗体药物缀合物，其中该抗体与表达于癌症细胞上的一或多个Globo系列抗原SSEA-4(Neu5Acα2→3Galβ1→3GalNAcβ1→3Galα1→4Galβ1→4Glcβ1)、SSEA-3(Galβ1→3GalNAcβ1→3Galα1→4Galβ1→4Glcβ1)及/或Globo H(Fucα1→2Galβ1→3GalNAcβ1→3Galα1→4Galβ1→4Glc)结合。
12.如权利要求7的抗体药物缀合物，其中该抗体为抗Globo H、抗SSEA-3或抗SSEA-4抗体。
13.如权利要求12的抗体药物缀合物，其中该抗Globo H抗体为OBI-888。
14.如权利要求12的抗体药物缀合物，其中该抗SSEA-4抗体为OBI-898。
15.如权利要求7的抗体药物缀合物，其中该治疗剂为单甲基奥瑞斯他丁反应试剂(monomethyl auristatin E,MMAE)。
16.一种医药组合物，包含如权利要求7的抗体药物缀合物化合物，或其医药上可接受的盐类；以及
医药上可接受溶剂、载体或赋形剂。
17.如权利要求16的医药组合物，其中该组合物包含与Globo系列抗原结合的其他抗体药物缀合物的组合。
18.一种制造如权利要求8的组合物的方法，其中该方法包含：
使抗体Ab与化学式(I)的接头L试剂反应，以形成抗体-接头中间产物Ab-L，并使抗体Ab与药物基团D反应，以形成抗体药物缀合物化合物的混合物；或
使药物基团D与接头L试剂反应，以形成药物-接头中间产物D-L，并使D-L与抗体Ab反应，以形成抗体药物缀合物化合物的混合物。
19.如权利要求8所述的组合物，其中该接头L包含硫醇基。
20.如权利要求19所述的组合物，其中该些硫醇基经还原双硫键而产生。
21.如权利要求8所述的组合物，其中药物基团D为化疗制剂、光动力疗法制剂或生物制剂。
22.如权利要求21所述的组合物，其中光动力疗法制剂选自Photofrin(福得灵)、Laserphyrin(他拉泊芬钠注射液)、氨基酮戊酸(Aminolevulinic acid(ALA))、硅钛菁4(Silicon Phthalocyanine Pc4)、m-四羟甲基氯化膦(m-tetrahydroxyphenylchlorin(mTHPC))、二氢卟吩e6(chlorin e6(Ce6))、Allumera、氨基乙酰丙酸(Levulan)、Foscan(替莫泊芬注射剂)、Metvix、Hexvix、Photochlor(光克洛)、Photosens、Photrex、Lumacan、Visonac、Amphinex、Verteporfin(维视达冻晶注射剂)、Purlytin、ATMPn、锌钛菁(Zincphthalocyanine(ZnPc))、原紫质(Protoporphyrin IX(PpIX))、焦脱镁叶绿酸盐-a(Pyropheophorbide-a(PPa))或脱镁叶绿酸盐-a(Pheophorbide a(PhA))。
23.如权利要求8所述的组合物，其中药物基团D为抗增殖制剂。
24.如权利要求23所述的组合物，其中该抗增殖制剂选自单甲基奥瑞斯他丁E(MMAE)、单甲基奥瑞斯他丁F(MMAE)、mertansine(DM1)、蒽环霉素(anthracycline)、吡咯苯二氮平(pyrrolobenzodiazepine)、α-amanitin、tubulysin、苯二氮平(benzodiazepine)、得舒缓膜衣锭(erlotinib)、万科注射剂(bortezomib)、法洛德注射液(fulvestrant)、纾癌特胶囊(sunitinib)、复乳纳膜衣锭(letrozole)、基利克膜衣锭(imatinib mesylate)、PTK787/ZK222584、益乐铂注射液(oxaliplatin)、亚叶酸(leucovorin)、斥消灵锭(rapamycin)、泰嘉锭膜衣锭(lapatinib)、lonafarnib(SCH66336)、蕾莎瓦膜衣锭(sorafenib)及艾瑞莎膜衣锭(gefitinib)、AG1478、AG1571、烯烃基化剂；烷基磺酸盐；氮丙啶(aziridine)；次乙亚胺(ethylenimine)；甲基三聚氰胺(methylamelamine)；多聚乙酰(acetogenin)；喜树碱(camptothecin)；bryostatin；callystatin；CC-1065；隐花素(cryptophycin)；海兔毒素(dolastatin)；多卡霉素(duocarmycin)；红葱甲素(eleutherobin)；pancratistatin；sarcodictyin；海绵抑素(spongistatin)；苯丁酸氮芥(chlorambucil)；萘氮芥(chlornaphazine)；胆磷酰胺(cholophosphamide)；雌莫司汀(estramustine)；异环磷酰胺(ifosfamide)；氮芥(mechlorethamine)；氧氮芥盐酸盐(mechlorethamine oxide hydrochloride)；美法仑(melphalan)；新恩比兴(novembichin)；苯乙酰胆固醇氮芥(phenesterine)；松龙苯芥(prednimustine)；三芥环磷酰胺(trofosfamide)；尿嘧啶芥(uracil mustard)；亚硝基脲氮芥(carmustine)；氯脲霉素(chlorozotocin)；福莫司汀(fotemustine)；洛莫司汀(lomustine)；尼莫司汀(nimustine)和雷诺司汀(ranimustine)；卡奇霉素(calicheamicin)；蒽环类抗生素(dynemicin)；氯膦酸盐(clodronate)；埃斯波霉素(esperamicin)；新制癌素(neocarzinostatin)发色团；阿克拉霉素(aclacinomycin)；放线菌素(actinomycin)；氨茴霉素(authramycin)；偶氮丝氨酸(azaserine)；博来霉素(bleomycin)；放线菌素C(cactinomycin)；卡拉比星(carabicin)；洋红霉素(carminomycin)；嗜癌霉素(carzinophilin)；色霉素(chromomycin)；放线菌素D(dactinomycin)；唐霉素(daunorubicin)；地托比星(detorubicin)；6-二氮-5-氧-L-正亮氨酸(6-diazo-5-oxo-L-norleucine)；多柔比星(doxorubicin)；表柔比星(epirubicin)；依索比星(esorubicin)；伊达比星(idarubicin)；麻西罗霉素(marcellomycin)；丝裂霉素类(mitomycins)；霉酚酸(mycophenolic acid)；诺拉霉素(nogalamycin)；橄榄霉素(olivomycin)；培洛霉素(peplomycin)；泊非霉素(potfiromycin)；嘌呤霉素(puromycin)；三铁阿霉素(quelamycin)；罗多比星(rodorubicin)；链黑菌素(streptonigrin)；链佐星(streptozocin)；杀结核菌素(tubercidin)；乌苯美司(ubenimex)；净司他丁(zinostatin)；佐柔比星(zorubicin)；甲氨蝶呤(methotrexate)；5-氟尿嘧啶(5-FU)；二甲叶酸(denopterin)；蝶罗呤(pteropterin)；三甲曲沙(trimetrexate)；氟达拉滨(fludarabine)；6-巯嘌呤(6-mercaptopurine)；硫咪嘌呤(thiamiprine)；硫鸟嘌呤(thioguanine)；安西他滨(ancitabine)；阿扎胞苷(azacitidine)；6-氮尿苷(6-azauridine)；卡莫氟(carmofur)；阿糖胞苷(cytarabine)；双脱氧尿苷(dideoxyuridine)；脱氧氟尿苷(doxifluridine)；依诺他滨(enocitabine)；氟尿苷(floxuridine)；卡鲁睪酮(calusterone)；丙酸屈他雄酮(dromostanolonepropionate)；表硫雄醇(epitiostanol)；美雄烷(mepitiostane)；睪内酯(testolactone)；氨鲁米特(aminoglutethimide)；米托坦(mitotane)；曲洛司坦(trilostane)；亚叶酸(folinic acid)；醋葡醛内酯(aceglatone)；醛磷酰胺糖苷(aldophosphamideglycoside)；胺基乙酰丙酸(aminolevulinic acid)；恩尿嘧啶(eniluracil)；安吖啶(amsacrine)；bestrabucil；比生群(bisantrene)；依达曲沙(edatraxate)；地磷酰胺(defofamide)；地美可辛(demecolcine)；亚胺醌(diaziquone)；elformithine；依利醋铵(elliptinium acetate)；埃坡霉素(epothilone)；依托格鲁(etoglucid)；硝酸镓；羟脲(hydroxyurea)；香菇多糖(lentinan)；氯尼达明(lonidamine)；美登素(maytansine)；安丝菌素(ansamitocin)；米托胍腙(mitoguazone)；米托蒽醌(mitoxantrone)；莫哌达醇(mopidamol)；根瘤菌剂(nitraerine)；喷司他丁(pentostatin)；蛋氨氮芥(phenamet)；吡柔比星(pirarubicin)；洛索蒽醌(losoxantrone)；鬼臼酸(podophyllinic acid)；2-乙基酰胼(2-ethylhydrazide)；丙卡巴胼(procarbazine)；雷佐生(razoxane)；根霉素(rhizoxin)；西佐非兰(sizofiran)；螺旋锗(spirogermanium)；细交链孢菌酮酸(tenuazonic acid)；三亚胺醌(triaziquone)；2,2',2”-三氯三乙胺；单端孢菌素类(trichothecenes)；胺基甲酸乙酯(urethan)；长春地辛(vindesine)；达卡巴仁(dacarbazine)；甘露莫司汀(mannomustine)；二溴甘露醇(mitobronitol)；二溴卫矛醇(mitolactol)；哌泊溴烷(pipobroman)；gacytosine；阿拉伯糖苷(arabinoside)；环磷酰胺(cyclophosphamide)；thiotepa；类紫杉醇(taxoid)，汰癌胜注射液(paclitaxel)；克癌易注射剂(doxetaxel)；苯丁酸氮芥(chlorambucil)；吉西他滨(gemcitabine)；6-硫鸟嘌呤(6-thioguanine)；巯基嘌呤(mercaptopurine)；甲氨蝶呤(methotrexate)；顺钼(cisplatin)；卡铂(carboplatin)；长春碱(vinblastine)；铂(platinum)；依托泊苷(etoposide)；异环磷酰胺(ifosfamide)；米托蒽醌(mitoxantrone)；长春新碱(vincristine)；长春瑞滨(vinorelbine)；双羟蒽醌注射液(novantrone)；替尼泊苷(teniposide)；依达曲沙(edatrexate)；唐霉素注射剂(daunomycin)；氨喋呤(aminopterin)；截瘤达锭(xeloda)；吉利康注射液(ibandronate)；拓扑异构酶抑制剂(topoisomerase inhibitor)；二氟甲基鸟氨酸(difluoromethylornithine,DMFO)；类视黄酸(retinoid)或截瘤达(capecitabine)。
25.一种治疗受试者体内癌症的方法，包含对该有需要的受试者施用有效剂量的如权利要求7所述的抗体药物缀合物。
26.如权利要求25所述的方法，其中该癌症为表达Globo系列抗原的癌症。
27.如权利要求26所述的方法，其中该表达Globo系列抗原的癌症选自由恶性肉瘤、皮肤癌、血癌、淋巴癌、脑癌、胶质母细胞瘤、肺癌、乳癌、口腔癌、头颈癌、鼻咽癌、食道癌、胃癌、肝癌、胆管癌、胆囊癌、膀胱癌、胰脏癌、肠癌、大肠直肠癌、肾脏癌、子宫颈癌、子宫内膜癌、卵巢癌、睾丸癌、颊癌、口咽癌、喉癌及前列腺癌组成的群组。
28.如权利要求25所述的方法，其中该方法包含对该有需要的受试者施用有效剂量的与Globo系列抗原结合的其他抗体药物缀合物组合。
29.如权利要求28所述的方法，其中该组合提供治疗癌症的加乘作用及提升疗效。
30.一种诱发或提升有需要的受试者体内免疫反应的方法，包含：
施用免疫原性有效剂量的如权利要求16所述的医药组合物，以及一或多个选自以下的流程：
(a)施用权利要求7所述的抗体药物缀合物两次或多次；
(b)调整两次连续给药的时间间隔及/或给药剂量设定；
(c)调整给药途径及/或改变给药的注射部位；或
(d)结合其他包含Globo系列抗原的抗体药物缀合物。
31.如权利要求30所述的方法，其中注射物可被替换及/或辅以免疫反应增强制剂。
32.如权利要求25、28或30所述的方法，其中该受试者为人类。
33.如权利要求25、28或30所述的方法，其中该有效剂量为自0.01μg至250mg。
34.如权利要求25、28或30所述的方法，其中该有效剂量为自0.001μg/kg至250mg/kg。
35.如权利要求25、28或30所述的方法，其中该有效剂量包含于共同配方或个别配方内。
36.如权利要求30所述的方法，其中该组合在诱发或提升免疫反应提供加乘作用。
37.一种如权利要求7所述的抗体药物缀合物化合物，用于与有效量的额外制剂组合，该额外制剂选自由抗癌制剂、免疫抑制制剂及抗感染制剂组成的群组，该些制剂用于治疗一癌症，该癌症选自由恶性肉瘤、皮肤癌、血癌、淋巴癌、脑癌、胶质母细胞瘤、肺癌、乳癌、口腔癌、头颈癌、鼻咽癌、食道癌、胃癌、肝癌、胆管癌、胆囊癌、膀胱癌、胰脏癌、肠癌、大肠直肠癌、肾脏癌、子宫颈癌、子宫内膜癌、卵巢癌、睾丸癌、颊癌、口咽癌、喉癌及前列腺癌组成的群组。
38.一种使用如权利要求7所述的抗体药物缀合物化合物制造药物的方法，该药物用于治疗恶性肉瘤、皮肤癌、血癌、淋巴癌、脑癌、胶质母细胞瘤、肺癌、乳癌、口腔癌、头颈癌、鼻咽癌、食道癌、胃癌、肝癌、胆管癌、胆囊癌、膀胱癌、胰脏癌、肠癌、大肠直肠癌、肾脏癌、子宫颈癌、子宫内膜癌、卵巢癌、睾丸癌、颊癌、口咽癌、喉癌或前列腺癌。
39.一种使用如权利要求7所述的抗体药物缀合物化合物制造药物并与有效量的额外制剂组合的用途，该额外制剂选自由抗癌制剂、免疫抑制制剂及抗感染制剂组成的群组，该些制剂用于治疗癌症，该癌症选自由恶性肉瘤、皮肤癌、血癌、淋巴癌、脑癌、胶质母细胞瘤、肺癌、乳癌、口腔癌、头颈癌、鼻咽癌、食道癌、胃癌、肝癌、胆管癌、胆囊癌、膀胱癌、胰脏癌、肠癌、大肠直肠癌、肾脏癌、子宫颈癌、子宫内膜癌、卵巢癌、睾丸癌、颊癌、口咽癌、喉癌及前列腺癌组成的群组。
40.一种测定抗体药物缀合物针对癌症细胞疗效的方法，包含：
(a)将细胞与如权利要求7所述的抗体药物缀合物接触；
(b)根据与该癌症细胞结合的抗体药物缀合物数量，测量该抗体药物缀合物的结合程度；及
(c)测定癌症细胞对抗体药物缀合物的结合效力。
41.一种对受试者实施显像技术的方法，包含：
(a)施用有效剂量的抗体药物缀合物，该抗体药物缀合物包含显像剂及与Globo系列抗原结合的抗体或抗原结合片段，其中该显像剂透过接头以共价键与该抗体或该抗原结合片段缀合；及
(b)侦测该受试者体内的该显像剂。
42.如权利要求41所述的方法，其中该显像剂为荧光物质、染剂、核磁共振造影对比剂或放射核种。
43.如权利要求41所述的方法，其中该受试者罹患癌症，该方法被进一步定义为侦测癌症转移的方法。
44.如权利要求41所述的方法，其中该受试者为人类。
45.如权利要求41所述的方法，其中该抗体药物缀合物与Globo系列抗原SSEA-4(Neu5Acα2→3Galβ1→3GalNAcβ1→3Galα1→4Galβ1→4Glcβ1)、SSEA-3(Galβ1→3GalNAcβ1→3Galα1→4Galβ1→4Glcβ1)及/或Globo H(Fucα1→2Galβ1→3GalNAcβ1→3Galα1→4Galβ1→4Glc)结合。
46.一种与Globo H结合的抗体药物缀合物，包含：
抗体，其中该重链可变域包含：
i.第一重链互补决定域(HCDR1)，其具有如SEQ ID NO:1的氨基酸序列；
ii.第二重链互补决定域(HCDR2)，其具有如SEQ ID NO:2的氨基酸序列；
iii.第三重链互补决定域(HCDR3)，其具有如SEQ ID NO:3的氨基酸序列；及
其中该轻链可变域包含：
iv.第一轻链互补决定域(LCDR1)，其具有如SEQ ID NO:7的氨基酸序列；
v.第二轻链互补决定域(LCDR2)，其具有如SEQ ID NO:8的氨基酸序列；
vi.第三重链互补决定域(LCDR3)，其具有如SEQ ID NO:9的氨基酸序列。
47.一种与SSEA-4结合的抗体药物缀合物，包含：
抗体，其中该重链可变域包含：
i.第一重链互补决定域(HCDR1)，其具有如SEQ ID NO:29的氨基酸序列；
ii.第二重链互补决定域(HCDR2)，其具有如SEQ ID NO:31的氨基酸序列；
iii.第三重链互补决定域(HCDR3)，其具有如SEQ ID NO:33的氨基酸序列；及
其中该轻链可变域包含：
iv.第一轻链互补决定域(LCDR1)，其具有如SEQ ID NO:22的氨基酸序列；
v.第二轻链互补决定域(LCDR2)，其具有如SEQ ID NO:24的氨基酸序列；
vi.第三重链互补决定域(LCDR3)，其具有如SEQ ID NO:26的氨基酸序列。
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