CN110267680A

CN110267680A - 感染性疾病或炎症性疾病的预防和/或治疗剂

Info

Publication number: CN110267680A
Application number: CN201880008834.3A
Authority: CN
Inventors: 铃木和男; 龟冈洋祐; 山河芳夫; 岸富久子; 铃木治; 小浦美奈子; 松田润一郎
Original assignee: National Research And Development Corp Medical Base Institute Of Health And Nutrition; Co A-Clip Institute
Current assignee: National Research And Development Corp Medical Base Institute Of Health And Nutrition; Co A-Clip Institute
Priority date: 2017-01-27
Filing date: 2018-01-26
Publication date: 2019-09-20
Anticipated expiration: 2038-01-26
Also published as: AU2018213716A1; US20220213180A1; SG11201906968YA; EP3581204A1; SG10202108219QA; EP3581204A4; EP4317431A2; WO2018139608A1; JP7126658B2; US20190367600A1; EP4317431A3; CN110267680B; KR102581165B1; KR20190108152A; JPWO2018139608A1; CA3051826A1

Abstract

鉴定对难治性血管炎等炎症性疾病、感染性疾病的治疗有效的靶分子，从而提供不同于以往的不进行靶分子鉴定的治疗方法的、特异性针对这些疾病的治疗方法。根据本发明的一个方式，提供一种感染性疾病或炎症性疾病的预防和/或治疗剂，其含有特异性地识别载脂蛋白A2(APOA2)的抗体作为有效成分。

Description

感染性疾病或炎症性疾病的预防和/或治疗剂

技术领域

本发明涉及感染性疾病或炎症性疾病的预防和/或治疗剂。

背景技术

对于作为炎症性疾病的类风湿关节炎等，使用抗体药物(英夫利昔单抗、雅美罗等)。另一方面，对于同样为炎症性疾病的难治性血管炎，没有标准治疗药，正在研究使用类固醇或抗体药物。

最近，有时也将免疫球蛋白(Ig)制剂用于难治性血管炎，在嗜酸性肉芽肿性多血管炎(Eosinophilic Granulomatosis with Polyangitis：EGPA、Churg－Strauss综合症)中已经得到许可。

需要说明的是，免疫球蛋白是抗体及与其在结构上、功能上有关联性的蛋白质的总称。另外，将所结合的抗原已经明确的免疫球蛋白，称为对应于该特定抗原的抗体。

作为难治性血管炎的治疗方法，有类固醇等方案，另外，作为标准治疗方法，正在研究抗体药物。其中，关于作为针对特定抗原的抗体药物也开始用于难治性血管炎的英夫利昔单抗(Remicade(注册商标))，克罗恩病中的炎症性细胞因子TNFα为该单抗的对应抗原，该单抗被开发作为抑制过量产生的的TNFα的作用的抗体药物。该英夫利昔单抗是还破坏产生TNFα的细胞的抗体药物(参照非专利文献1)。另外，例如利妥昔单抗(Rituxan)，该抗体药物作为针对CD20的单克隆抗体已在国外被开发为淋巴瘤用药物，也开始被用于难治性血管炎(参照非专利文献2)。已鉴定出抗原的上述各种抗体药物虽然不是难治性血管炎所专用的药物，但是具有有效性，可认为其直接与抗原反应而将该抗原中和。目前临床上使用的抗体药物不是针对难治性血管炎的特异性抗原而开发的抗体，因此始终存在风险。

大量给药免疫球蛋白对于难治性血管炎的治疗是有效的。详细而言，免疫球蛋白的多样性由10 ⁸个克隆构成，基本分子结构是轻链(L链)和重链(H链)这2种多肽各2条通过二硫键而连接而成的。重链是由恒定区(C区)和包含VH区的可变区(V区)连接而成的结构。另一方面，轻链由包含CL区的稳定区以及包含VL区的可变区连接而成。利用可变区的氨基酸序列的多样性，在生物体内制作针对多样化的抗原的多样化的抗体。

关于免疫球蛋白制剂的作用机制，有几个假说。第一假说是包含在免疫球蛋白制剂中的、包含针对未知抗原的抗体在内的多种抗体在发挥药理效果。另外，第二假说为：多种抗体中的、难治性血管炎的自身抗体-针对髓过氧化物酶(MPO)的抗体(抗MPO抗体)(参照非专利文献3)具有该效果，特别是针对MPO的广泛表位的多种抗MPO抗体在发挥药理效果。而且还有下述假说：也许是针对同样地作为与难治性血管炎的重症化相关的自身抗体的、抗膜突蛋白抗体(参照专利文献1、非专利文献4～5)的药理作用。两假说的共同点是，免疫球蛋白制剂为多样化的免疫球蛋白的混合物、即多克隆这一点对治疗效果大有帮助。作为其他假说，也有针对特定抗原的多样化的抗体显示有效性的假说。

已知人重组抗体的单克隆ScFv对难治性血管炎模型小鼠显示治疗效果(参照专利文献2～5)。在这样的状况下，期望在减少患者的感染风险、明确重组免疫球蛋白制剂的治愈机制的基础上，开发一种以抗原已被鉴定的抗体为有效成分的、针对难治性血管炎的抗体药物。

如果是抗原已被鉴定的抗体，则可以将以往的重组ScFv作为模型而通过重组DNA技术制造抗体药物。嵌合抗体、人源化抗体作为抗体药物已经实用化(参照专利文献6～7)。另外，作为使免疫球蛋白基因在宿主细胞内表达为可溶状态的正常型蛋白质的技术，还已知以与蛋白伴侣的融合蛋白形式来表达免疫球蛋白的例子(参照专利文献8)。需要说明的是，这些全部是单一分子的免疫球蛋白、即单克隆的免疫球蛋白或其片段。

现有技术文献

专利文献

专利文献1：国际公开第2012/039161号

专利文献2：美国专利申请公开第2013/0164290号公报

专利文献3：日本特开2013-147495号公报

专利文献4：美国专利申请公开第2015/0166645号公报

专利文献5：日本特开2016-160265号公报

专利文献6：日本特开平5-304989号公报

专利文献7：日本特开2000-14383号公报

专利文献8：日本特开2004-81199号公报

非专利文献

非专利文献1:Gilberto Poggioli，Silvio Laureti，Massimo Campieri，FilippoPierangeli，Paolo Gionchetti，Federica Ugolini，Lorenzo Gentilini，Piero Bazzi，Fernando Rizzello，and Maurizio Coscia.Infliximab in the treatment of Crohn’sdisease.Ther Clin Risk Manag.2007Jun；3(2)：301－308.

非专利文献2:Watts RA，Scott DG.Vasculitis and inflammatory arthritis.BestPract Res Clin Rheumatol.2016Oct；30(5)：916－931.

非专利文献3:Goeken JA.Antineutrophil cytoplasmic antibody－A usefulserological marker for vasculitis.J Clin Immunol 1991；11：161－174

非专利文献4:Suzuki K，Nagao T，Itabashi M，Hamano Y，Sugamata R，Yamazaki Y，Yumura W，Tsukita S，Wang PC，Nakayama T，Suzuki K.A novel autoantibody against膜突蛋白in the serum of patients with MPO－ANCA－associated vasculitis.NephrolDial Transplant.2014Jun；29(6)：1168－77.

非专利文献5:Ellen F.Carney.VASCULITIS：Potential role of an anti膜突蛋白autoantibody in AAV Nature Reviews Nephrology 2014；10：3.

非专利文献6:Ito－Ihara T，Ono T，Nogaki F，Suyama K，Tanaka M，Yonemoto S，Fukatsu A，Kita T，Suzuki K，E.Muso.Clinical efficacy of intravenousimmunoglobulin for patients with MPO－ANCA－associated rapidly progressiveglomerulonephritis.Nephron Clin Pract.2005；102：c35－c42.

非专利文献7:Unizony S，Villarreal M，Miloslavsky EM，Lu N，Merkel PA，SpieraR，Seo P，Langford CA，Hoffman GS，Kallenberg CM，St Clair EW，Ikle D，Tchao NK，DingL，Brunetta P，Choi HK，Monach PA，Fervenza F，Stone JH，Specks U；RAVE－ITNResearch Group.Clinical outcomes of treatment of anti－neutrophil cytoplasmicantibody(ANCA)－associated vasculitis based on ANCA type.Ann RheumDis.2015Nov 30.pii：annrheumdis－2015－208073.doi：10.1136/annrheumdis－2015－208073.[Epub ahead of print]

非专利文献8:de Joode AA，Roozendaal C，van der Leij MJ，Bungener LB，SandersJS，Stegeman CA.Performance of two strategies for urgent ANCA and anti－GBManalysis in vasculitis.Eur J Intern Med.2014Feb；25(2)：182－6.doi：10.1016/j.ejim.2013.11.011.Epub 2013Dec 19.

非专利文献9:Kallenberg CG，Stegeman CA，Heeringa P.Autoantibodies vex thevasculature.Nat.Med.2008Oct；14(10)：1018－9.

非专利文献10:Kain R，Exner M，Brandes R，Ziebermayr R，Cunningham D，AldersonCA，Davidovits A，Raab I，Jahn R，Ashour O，Spitzauer S，Sunder－Plassmann G，FukudaM，Klemm P，Rees AJ，Kerjaschki D.Molecular mimicry in pauci－immune focalnecrotizing glomerulonephritis.Nat.Med.2008Oct；14(10)：1088－96.Epub 2008Oct5.

非专利文献11:Tomizawa K，Nagao T，Kusunoki R，Saiga K，Oshima M，Kobayashi K，Nakayama T，Tanokura M，Suzuki K.Reduction of MPO－ANCA epitopes in SCG/Kj miceby 15－Deoxyspergualin treatment restricted by IgG2b associated withcrescentic glomerulonephritis.Rheumatology(Oxford).2010；49：1245－56.

发明内容

发明所要解决的课题

如上所述，现状是不存在难治性血管炎的标准治疗方法。另外，使用抗体药物的治疗方法虽然也在研究之中，但不是作为特异性用于难治性血管炎的治疗方法而开发的。即，现状是：对于作为炎症性疾病的难治性血管炎而言，虽然作为方案示出了使用类固醇的方案，但是不存在标准治疗药物。

因此，鉴于上述的现有技术和医疗现状，本发明的目的在于，通过鉴定对难治性血管炎等炎症性疾病、感染性疾病的治疗有效的靶分子，从而提供不同于以往的不进行靶分子鉴定的治疗方法的、特异性针对这些疾病的治疗方法。

用于解决课题的技术方案

本发明人以解决上述课题为目标，进行了深入研究。而且，在该过程中克服了极大的困难，结果查明，专利文献5中对血管炎模型小鼠显示出各种治疗效果的、由序列编号：31所示的氨基酸序列构成的人单链可变片段(hScFv；以下也将该克隆称为“VasSF”)的靶抗原是载脂蛋白A2(APOA2)。其结果是，发现通过使用特异性识别APOA2的抗体能够预防和/或治疗血管炎等炎症性疾病、感染性疾病，从而完成了本发明。

即，根据本发明的一个方式，提供一种感染性疾病或炎症性疾病的预防和/或治疗剂，其含有特异性地识别载脂蛋白A2(APOA2)的抗体作为有效成分。

根据本发明的另一方式，提供：一种抗APOA2重组免疫球蛋白片段组合物，其含有下述多肽作为有效成分，所述多肽包含与序列编号：4所示的氨基酸序列一致或实质上一致的氨基酸序列；一种抗APOA2重组免疫球蛋白片段组合物，其含有下述多肽作为有效成分，所述多肽由序列编号：4所示的氨基酸序列构成。

根据本发明的又一方式，提供编码下述多肽的多核苷酸、含有该多核苷酸的载体、以及含有该载体的宿主细胞，所述多肽包含与序列编号：4所示的氨基酸序列一致或实质上一致的氨基酸序列。

根据本发明的又一方式，提供：一种感染性疾病或炎症性疾病的预防和/或治疗方法，其包含给药有效量的抗APOA2抗体的步骤；一种感染性疾病或炎症性疾病的预防和/或治疗剤的筛选方法，其使用载脂蛋白A2(APOA2)。

根据本发明的又一方式，提供：一种感染性疾病或炎症性疾病的诱导剂，其含有载脂蛋白A2(APOA2)作为有效成分；包含对人以外的非转基因动物给药载脂蛋白A2(APOA2)的工序的、感染性疾病或炎症性疾病的疾病模型动物的制作方法；以及通过该制作方法制作的感染性疾病或炎症性疾病的疾病模型动物。

发明效果

在完成本发明的过程中，实现了对难治性血管炎等炎症性疾病、感染性疾病的治疗有效的靶分子的鉴定。然后基于该见解反复进行了深入研究，结果实现了不同于以往的不进行靶分子鉴定的治疗方法的、特异性针对这些疾病的治疗方法的提供。

附图说明

[图1A]是用于说明鉴定特定抗体的靶抗原时所使用的方法的说明图。

[图1B]是示出在实施例1中尝试通过ProteoSeek^TM法鉴定靶抗原的结果的照片。

[图1C]是示出在实施例1中尝试使用HiTrap(注册商标)NHS-activated HP柱鉴定靶抗原的结果的照片。

[图2]是示出在实施例1中尝试通过甲苯磺酰基活化Dynabeads(注册商标)鉴定靶抗原的结果的照片。

[图3]左侧是与图2相同的照片，右侧是示出通过MS/MS离子检索法命中的11种候选分子的表。

[图4]是示出在实施例4中评价抗APOA2多克隆抗体对肾脏组织的治疗效果的结果的显微镜照片。

[图5]是示出在实施例4中评价抗APOA2多克隆抗体的与肾小球新月体形成率相关的治疗效果的结果的图表。

[图6]是示出在实施例4中评价抗APOA2多克隆抗体对脾脏组织的治疗效果的结果的显微镜照片。

[图7]是示出在实施例4中评价抗APOA2多克隆抗体的与脾脏重量相关的治疗效果的结果的图表。

[图8]是示出在实施例4中评价抗APOA2多克隆抗体的与血清中的MPO-ANCA和抗膜突蛋白抗体水平相关的治疗效果的结果的图表。

[图9]是示出在实施例4中评价抗APOA2多克隆抗体的与血清中的细胞因子·趋化因子相关的治疗效果的结果的图表。

[图10]是示出在实施例4中评价抗APOA2多克隆抗体的与外周血中的白细胞数相关的治疗效果的结果的图表。

[图11]是示出在实施例4中评价抗APOA2多克隆抗体对肺组织的治疗效果的结果的显微镜照片。

[图12]是用于说明实施例5中制作的质粒pTAC2-URq01_OptEcoli的说明图。

[图13]是用于说明实施例5中在pET32载体的T7启动子控制区域的整合部位整合包含编码本发明抗体的基因的整合片段的方法的说明图。

[图14]是用于说明实施例5中的操作的整体的说明图。

[图15]是示出实施例5中从大肠杆菌细胞DE32的培养物中纯化重组蛋白(VasAP)的结果的数据。

[图16]是示出实施例6中评价抗APOA2单克隆抗体(VasAP)的与肾小球新月体形成率相关的治疗效果的结果的图表。

[图17]是示出实施例6中评价抗APOA2单克隆抗体(VasAP)的与脾脏重量相关的治疗效果的结果的图表。

[图18]是示出实施例6中评价抗APOA2单克隆抗体(VasAP)的与血清中的MPO-ANCA和抗膜突蛋白抗体水平相关的治疗效果的结果的图表。

[图19]是示出实施例6中评价抗APOA2单克隆抗体(VasAP)的与血清中的炎症性细胞因子·趋化因子水平相关的治疗效果的结果的图表。

[图20]是示出实施例6中评价抗APOA2单克隆抗体(VasAP)的与外周血中的白细胞数相关的治疗效果的结果的图表。

[图21]是示出实施例7中对给药APOA2蛋白的野生型小鼠的泌尿评分的经时变动进行评价的结果的图表。

[图22]是示出实施例7中对给药APOA2蛋白的野生型小鼠的肾小球新月体形成率进行评价的结果的图表。

[图23]是示出实施例7中观察给药APOA2蛋白的野生型小鼠的肾脏组织的结果的显微镜照片。

[图24]是示出实施例7中观察给药APOA2蛋白的野生型小鼠的脾脏组织和肺组织的结果的显微镜照片。

具体实施方式

本发明的第1方式是感染性疾病或炎症性疾病的预防和/或治疗剂，其含有特异性地识别载脂蛋白A2(APOA2)的抗体作为有效成分。

本发明人对作出本发明的经过进行概述的话，首先，本发明人尝试寻找专利文献5中的、对血管炎模型小鼠显示出各种治疗效果的由序列编号：31所示的氨基酸序列构成的人单链可变片段(hScFv；以下也将该克隆称为“VasSF”)的靶抗原。但是，抗原的寻找非常困难，如后述的实施例一栏所记载的那样尝试了各种方法，但都没有实现抗原的鉴定，经过极长期的努力和创造性的工作，结果最终鉴定出VasSF的靶抗原，由此完成了本发明。

即，令人惊讶的是，本发明人已经查明，作为VasSF的靶抗原，以往完全不知道与感染性疾病、炎症性疾病相关的蛋白-载脂蛋白A2(APOA2)是VasSF的靶抗原，由此发现，使用特异性地识别APOA2的抗体能够预防和/或治疗血管炎等炎症性疾病、感染性疾病。需要说明的是，人载脂蛋白A2(hAPOA2)由包含473bp的APOA2基因(RefSeq Accession No.NM＿001643、CDS的序列与序列编号：1对应)编码，由100个氨基酸(RefSeq Accession No.NP＿001634、序列编号：2)构成。

基于所述的几个见解，本发明人完成了本发明。以下，对用于实施本发明的方式进行详细说明，但本发明的技术范围并不仅限定于下述方式。

[本发明的蛋白质(抗原)]

本发明中使用的载脂蛋白A2(APOA2；也称为“本发明的蛋白质”)是包含与序列编号：2所示的氨基酸序列一致或实质上一致的氨基酸序列的蛋白质。本发明的蛋白质是从人或其他温血动物(例如，豚鼠、大鼠、小鼠、鸡、兔子、猪、绵羊、牛、猴等)的细胞[例如肝细胞、脾细胞、神经细胞、神经胶质细胞，胰脏β细胞、骨髓细胞、系膜细胞(日语：メサンギウム細胞)、朗格汉斯细胞、表皮细胞、上皮细胞、杯状细胞，内皮细胞、平滑肌细胞、成纤维细胞、纤维细胞、肌细胞、脂肪细胞、免疫细胞(例如巨噬细胞、T细胞、B细胞、自然杀伤细胞、肥大细胞、嗜中性粒细胞、嗜碱性粒细胞、嗜酸性粒细胞、单核细胞)、巨核细胞、滑膜细胞、软骨细胞、骨细胞、成骨细胞、破骨细胞、乳腺细胞或间质细胞、或者这些细胞的母细胞、干细胞或癌细胞等]或这些细胞所存在的所有组织(例如，脑、脑部的各部位(例如嗅球、杏仁核、基底神经节(日语：大脳基底球)、海马、丘脑、下丘脑、大脑皮质、延髓，小脑)、脊髓、垂体、胃、胰脏、肾脏、肝脏、生殖腺、甲状腺、胆囊、骨髓、肾上腺、皮肤、肌肉(例如，平滑肌、骨骼肌)、肺、消化道(例如大肠、小肠)、血管、心脏、胸腺、脾脏，下颌下腺、外周血、前列腺、睾丸、卵巢、胎盘、子宫、骨骼、关节、脂肪组织(例如，白色脂肪组织、褐色脂肪组织)等]等中分离、纯化出的蛋白质。另外，可以是化学合成或利用无细胞翻译系统通过生物化学方式合成的蛋白质，或者也可以是由导入了具有编码所述氨基酸序列的碱基序列的核酸的转化体产生的重组蛋白。

作为与序列编号：2所示的氨基酸序列实质上一致的氨基酸序列，可列举与序列编号：2所示的氨基酸序列具有约50％以上、优选为约60％以上、更优选为约70％以上、尤其优选为约80％以上、特别优选为约90％以上、最优选为约95％以上的同源性(homology)的氨基酸序列等。在此，所谓“同源性”是指：使用该技术领域公知的数学算法进行2个氨基酸序列的排列时的、最佳的比对(优选的是，该算法为了最佳的比对而可考虑向序列中的一方或双方中导入间隙)中的、相同氨基酸和类似氨基酸残基相对于重叠的全部氨基酸残基的比例(％)。“类似氨基酸”是指物理化学性质类似的氨基酸，例如，可以举出被分类在同一组中的氨基酸，所述组是指例如：芳香族氨基酸(Phe、Trp、Tyr)、脂肪族氨基酸(Ala、Leu、Ile、Val)、极性氨基酸(Gln、Asn)、碱性氨基酸(Lys、Arg、His)、酸性氨基酸(Glu、Asp)、具有羟基的氨基酸(Ser、Thr)、侧链小的氨基酸(Gly、Ala、Ser、Thr、Met)等。估计这样的类似氨基酸的置换不会改变蛋白质的表型(即，是保守性的氨基酸置换)。保守性氨基酸置换的具体例在该技术领域中是公知的，记载于各种文献中(例如，参照Bowie等Science、247：1306－1310(1990))。

本说明书中的氨基酸序列的同源性可以使用同源性计算算法NCBI BLAST(National Center for Biotechnology Information Basic Local Alignment SearchTool)、并且在以下的条件(期待值＝10；允许间隙；matrix＝BLOSUM62；filtering＝OFF)进行计算。作为用于确定氨基酸序列的同源性的其他算法，可列举例如Karlin等，Proc.Natl.Acad.Sci.USA，90：5873－5877(1993)中记载的算法[该算法被整合到NBLAST和XBLAST程序(version2.0)中(Altschul等，Nucleic Acids Res.，25：3389－3402(1997))]、Needleman等，J.Mol.Biol.，48：444－453(1970)中记载的算法[该算法被整合到GCG软件包中的GAP程序中]、Myers和Miller，CABIOS，4：11－17(1988)中记载的算法[该算法被整合到作为CGC序列比对软件包的一部分的ALIGN程序(version2.0)中]、Pearson等，Proc.Natl.Acad.Sci.USA，85：2444－2448(1988)中记载的算法[该算法被整合到GCG软件包中的FASTA程序中]等，它们也同样可以优选使用。

更优选地，与序列编号：2所示的氨基酸序列实质上一致的氨基酸序列是指：与序列编号：2所示的氨基酸序列具有约50％以上、优选为约60％以上、更优选为约70％以上、尤其优选为约80％以上、特别优选为约90％以上、最优选为约95％以上的一致性(identity)的氨基酸序列。

本发明中使用的蛋白质含有与序列编号：2所示的氨基酸序列实质上一致的氨基酸序列、并且与含有序列编号：2所示的氨基酸序列的蛋白质具有实质上同质(日语：同質)的活性。

作为实质上同质的活性，可列举例如配体结合活性、信号信息传递作用等。在此，所谓“实质上同质”表示：它们的性质定性地(例如生理学上或药理学上)同质。因此，本发明的蛋白质的活性优选同等，但这些活性的程度(例如约0.01～约100倍、优选为约0.1～约10倍、更优选为0.5～2倍)以及蛋白质的分子量等的量化要素可以不同。

配体结合活性、信号信息传递作用等活性的测定可以基于其本身公知的方法进行。例如，可以按照后述的、抑制本发明中使用的蛋白质的活性的化合物或其盐的筛选方法中所使用的方法等来进行。

另外，作为本发明中使用的蛋白质，还包含例如含有下述氨基酸序列的蛋白质等所谓的突变蛋白，所述氨基酸序列为：(i)序列编号：2所示的氨基酸序列中的1个或2个以上(例如，1～50个左右、优选为1～30个左右、更优选为1～10个左右、进一步优选为数(1～5、4、3或2)个)氨基酸缺失的氨基酸序列；(ii)序列编号：2所示的氨基酸序列中添加1个或2个以上(例如，1～50个左右、优选为1～30个左右、更优选为1～10个左右、进一步优选为数(1～5、4、3或2)个)氨基酸而成的氨基酸序列；(iii)序列编号：2所示的氨基酸序列中插入1个或2个以上(例如，1～50个左右、优选为1～30个左右、更优选为1～10个左右、进一步优选为数(1～5、4、3或2)个)氨基酸而成的氨基酸序列；(iv)序列编号：2所示的氨基酸序列中的1个或2个以上(例如，1～50个左右、优选为1～30个左右、更优选为1～10个左右、进一步优选为数(1～5、4、3或2)个)氨基酸被其它氨基酸置换的氨基酸序列；或者，(v)将它们组合而成的氨基酸序列。

如上所述地进行了氨基酸序列的插入、缺失或置换的情况下，该插入、缺失或置换的位置没有特别限定。

作为本发明中使用的蛋白质的优选例子，可列举例如含有序列编号：2所示的氨基酸序列的人载脂蛋白A2(Refseq Accession No.NP＿001634)或其它哺乳动物中的人载脂蛋白A2的同源蛋白(日语：ホモログ)等。

本说明书中，蛋白质和肽按照肽表述的惯例而以左端为N末端(氨基末端)、右端为C末端(羧基末端)的方式来记载。以含有序列编号：2所示的氨基酸序列的蛋白质为代表的、本发明中使用的蛋白质可以是C末端为羧基(－COOH)、羧酸酯(－COO^－)、酰胺(－CONH₂)或酯(－COOR)中的任一者。

进一步地，本发明中使用的蛋白质还包含：N末端的氨基酸残基(例如甲硫氨酸残基)的氨基被保护基(例如，甲酰基、乙酰等C_1－6烷酰基等的C_1－6酰基等)保护的状态的蛋白质、在生物体内被切断而生成的N末端的谷氨酰胺残基已经焦谷氨酸化的蛋白质、分子内的氨基酸的侧链上的取代基(例如－OH、－SH、氨基、咪唑基、吲哚基、胍基等)被适当的保护基(例如，甲酰基、乙酰基等C_1－6烷酰基等的C_1－6酰基等)保护的蛋白质、或结合有糖链的所谓的糖蛋白等复合蛋白质等。

作为本发明中使用的蛋白质的部分肽，只要具有上述本发明中使用的蛋白质的部分氨基酸序列、且与该蛋白质具有实质上同质的活性则可以为任一的肽。这里，“实质上同质的活性”与上述含义相同。另外，“实质上同质的活性”的测定可以与上述本发明中使用的蛋白质的场合同样地进行。

例如，使用具有本发明所使用的蛋白质的构成氨基酸序列中的至少20个以上、优选为50个以上、进一步优选为70个以上、更优选为100个以上、最优选为150个以上的氨基酸序列的肽等。

另外，就本发明中使用的部分肽而言，其氨基酸序列中的1个或2个以上(优选为1～20个左右、更优选为1～10个左右、进一步优选为数(1～5、4、3或2)个)氨基酸可以缺失；或者，其氨基酸序列中可以添加1个或2个以上(优选为1～20个左右、更优选为1～10个左右、进一步优选为数(1～5、4、3或2)个)氨基酸；或者，其氨基酸序列中可以插入1个或2个以上(优选为1～20个左右、更优选为1～10个左右、进一步优选为数(1～5、4、3或2)个)氨基酸；或者，其氨基酸序列中的1个或2个以上(优选为1～20个左右、更优选为1～10个左右、进一步优选为数(1～5、4、3或2)个)氨基酸可以被其它氨基酸置换。

本发明中使用的部分肽还可以用作用来制作抗体的抗原。本发明中使用的蛋白质或其部分肽可以为游离体，也可以为盐(以下没有特别说明时，则是同样的)。作为这类盐，使用与生理学上可接受的酸(例如无机酸、有机酸)或碱(例如碱金属盐)等的盐，尤其优选生理学上可接受的酸加成盐。作为这类盐，可使用例如与无机酸(例如盐酸、磷酸、氢溴酸、硫酸)的盐或与有机酸(例如乙酸、甲酸、丙酸、富马酸、马来酸、琥珀酸、酒石酸、柠檬酸、苹果酸、草酸、苯甲酸、甲磺酸、苯磺酸)的盐等。

本发明中使用的蛋白质可以从上述的人、其它温血动物的细胞或组织中用其本身公知的蛋白质纯化方法纯化而制造。具体而言，例如，将哺乳动物的组织或细胞在表面活性剂的存在下进行匀浆，将得到的组织的粗提取物组分供于反相色谱、离子交换色谱、亲和色谱等色谱等，从而可以制备本发明中使用的蛋白质。

本发明中使用的蛋白质或其部分肽还可以利用公知的肽合成法制造。

本发明中使用的蛋白质的部分肽可以通过用适当的肽酶切断本发明中使用的蛋白质来制造。

进一步地，本发明中使用的蛋白质或其部分肽还可以如下制造：对含有编码其的多核苷酸的转化体进行培养，从得到的培养物中分离纯化该蛋白质或该部分肽，从而制造。

[本发明的抗体]

针对本发明中使用的蛋白质或其部分肽的抗体(以下也称为“本发明的抗体”)，只要是特异性识别本发明中使用的蛋白质或其部分肽的抗体即可，可以是多克隆抗体、单克隆抗体中的任一者。抗体的同种型没有特别限定，优选为IgG、IgM或IgA，特别优选为IgG。

另外，本发明的抗体只要至少具有用于特异性识别、结合靶抗原的互补性决定区(CDR)即可，没有特别限制，除了为完整的抗体分子以外，还可以是例如：Fab、Fab’、F(ab’)₂等片段；ScFv、ScFv－Fc、微型抗体、双抗体等通过基因工序学制作的偶联(日语：コンジュゲート)分子；或修饰有聚乙二醇(PEG)等具有蛋白质稳定化作用的分子等的它们的诱导体等。

作为本发明的抗体，可列举例如：由包含与序列编号：4所示的氨基酸序列一致或实质上一致的氨基酸序列的多肽(优选为由与序列编号：4所示的氨基酸序列一致或实质上一致的氨基酸序列构成的多肽)构成的抗体。即，根据本发明的其它方式，提供一种抗APOA2重组免疫球蛋白片段组合物，其含有由包含与序列编号：4所示的氨基酸序列一致或实质上一致的氨基酸序列的多肽(优选为由与序列编号：4所示的氨基酸序列一致或实质上一致的氨基酸序列构成的多肽)作为有效成分。这些抗APOA2重组免疫球蛋白片段组合物优选用于感染性疾病或炎症性疾病的预防和/或治疗。

针对本发明中使用的蛋白质或其部分肽(以下，在抗体的说明中也将它们简称为“本发明的蛋白质”)的抗体，可以按照其本身公知的抗体或抗血清的制造方法来制造。

以下对本发明的抗体的免疫原制备方法、和该抗体的制造方法进行说明。

作为为了制备本发明的抗体而使用的抗原，可以使用上述的本发明的蛋白质或其部分肽、或具有1种或2种以上的与本发明的蛋白质或其部分肽相同的抗原决定簇的(合成)肽等中的任一者(以下，也将它们简称为“本发明的抗原”)。

本发明的蛋白质或其部分肽例如可以如下制造：(a)从人、猴、大鼠、小鼠、鸡等温血动物的组织或细胞中，使用公知的方法或基于其的方法制备；(b)通过使用肽合成仪等的公知的肽合成方法通过化学方式合成；(c)对含有编码本发明的蛋白质或其部分肽的DNA的转化体进行培养；或者，(d)以编码本发明的蛋白质或其部分肽的核酸为模板，使用无细胞转录/翻译系统通过生物化学方式合成。

(a)单克隆抗体产生细胞的制作

对温血动物，通过例如腹腔内注入、静脉注入、皮下注射、皮内注射等给药方法将本发明的抗原本身单独地或与载体、稀释剂一起给药到能产生抗体的部位。给药时，为了提高抗体产生能力，还可以给药弗氏完全佐剂、弗氏不完全佐剂。通常每1～6周给药1次，总计进行2～10次左右。作为使用的温血动物，可列举例如猴、兔、狗、豚鼠、小鼠、大鼠、仓鼠、绵羊、山羊、驴、鸡。为了避免产生抗Ig抗体的问题，优选使用与给药对象种属相同的哺乳动物，在制作单克隆抗体时，通常优选使用小鼠和大鼠。

由于伦理原因，难以对人进行人工免疫敏化，因此在本发明的抗体以人为给药对象时，优选：(i)对按照后述的方法制作的人抗体产生动物(例如，小鼠)进行免疫，得到人抗体；(ii)按照后述的方法制作嵌合抗体、人源化抗体或全人抗体；或者，(iii)将体外免疫法与利用病毒进行的细胞无限增殖化、人－人(或小鼠)杂交瘤制作技术、噬菌体展示法等组合而得到人抗体。需要说明的是，体外免疫法的情况下，对于常规免疫情况下抗体产生受到抑制的抗原也可能能够取得抗原，能够用ng～μg级别的抗原量得到抗体，在数天内完成免疫等，因此作为一种获得针对不稳定、且难以大量制备的抗原的抗体的方法也可优选用于非人动物源抗体的制备中。

作为体外免疫法所使用的动物细胞，可列举从人和上述温血动物(优选为小鼠、大鼠)的外周血、脾脏、淋巴结等中分离的淋巴细胞、优选为B淋巴细胞等。例如，在小鼠细胞、大鼠细胞的情况下，从4～12周龄左右的动物中摘出脾脏，分离脾细胞，用适当的培养基(例如，杜尔贝科改良伊戈尔培养基(DMEM)、RPMI1640培养基、Ham F12培养基等)洗涤后，悬浮于包含抗原的添加有胎牛血清(FCS；5～20％左右)的培养基中，使用CO₂培养箱等培养4～10天左右。作为抗原浓度，可列举例如0.05～5μg，但不限于此。优选按照常规方法制备同一品系的动物(优选1～2周龄左右)的胸腺细胞培养上清并添加到培养基中。

在人细胞的体外免疫中，由于难以得到胸腺细胞培养上清而优选将IL－2、IL－4、IL－5、IL－6等多种细胞因子和根据需要使用的辅助物质(例如，胞壁酰二肽等)与抗原一起添加到培养基中，进行免疫敏化。

(b)单克隆抗体的纯化

单克隆抗体的分离纯化可以按照其本身公知的方法、例如免疫球蛋白的分离纯化法[例：盐析法、醇沉淀法、等电点沉淀法、电泳法、利用离子交换体(例如，DEAE、QEAE)的吸附脱附法、超速离心法、凝胶过滤法以及利用抗原结合固相或蛋白A或蛋白G等活性吸附剂仅收集抗体、然后使其断开而得到抗体的特异性纯化法等]来进行。

按照以上所述在温血动物的生物体内或生物体外培养杂交瘤、再由其体液或培养物采集抗体，由此可以制造单克隆抗体。

在将本发明的抗体用于感染性疾病、炎症性疾病的预防·治疗时，该抗体必需具有对于这些疾病的治疗活性，因此需要调查所得到的单克隆抗体的治疗活性的程度。治疗活性可以通过对比抗体存在下和非存在下的疾病模型动物中的治疗效果的表现程度等来测定。

在优选实施方式中，本发明的抗体作为以人为给药对象的药品来使用。因此，本发明的抗体(优选为单克隆抗体)为给药于人时显示抗原性的风险性降低的抗体(具体而言，全人抗体、人源化抗体、小鼠－人嵌合抗体等)，特别优选为全人抗体。人源化抗体和嵌合抗体可以按照后述的方法通过基因工序学方式来制作。另外，全人抗体还可以由上述的人－人(或小鼠)杂交瘤来制造，但是为了稳定且低成本地提供大量的抗体，期望使用后述的人抗体产生动物(例如，小鼠)或噬菌体展示法来制造。

(i)嵌合抗体的制作

本说明书中“嵌合抗体”是指：H链和L链的可变区(V_H和V_L)的序列来自某种哺乳动物种属、恒定区(C_H和C_L)的序列来自其它哺乳动物种属的抗体。可变区的序列优选来自例如小鼠等可以容易地制作杂交瘤的动物种属，恒定区的序列优选来自成为给药对象的哺乳动物种属。

作为嵌合抗体的制作方法，可列举例如美国专利第6，331，415号说明书中记载的方法或对其进行部分改进的方法等。需要说明的是，如果将得到的嵌合单克隆抗体用木瓜蛋白酶分解则可以得到Fab，如果将其用胃蛋白酶分解则可以得到F(ab’)₂。

另外，将编码小鼠V_H和V_L的DNA用适当的接头、例如编码由1～40个氨基酸、优选为3～30个氨基酸、更优选为5～20个氨基酸构成的肽(例如[Ser－(Gly)m]n或[(Gly)m－Ser]n(m为0～10的整数、n为1～5的整数)等)的DNA连接，从而可以制成scFv，进一步将编码C_H3的DNA用适当的接头连接则可以制成微型抗体单体，将编码C_H全长的DNA用适当的接头连接则可以制成ScFv－Fc。使这种经基因工序学手段修饰(偶联)的编码抗体分子的DNA处于适当的启动子控制下，从而可以在大肠杆菌、酵母等微生物中表达，可以大量生产抗体分子。

将编码小鼠V_H和V_L的DNA随机插入一个启动子的下流并导入到大肠杆菌中，则通过单顺反子的基因表达而形成被称为Fv的二聚体。另外，使用分子模型将V_H和V_L的FR中的适当的氨基酸置换为Cys时，通过两条链的分子间二硫键而形成被称为dsFv的二聚体。

(ii)人源化抗体

本说明书中“人源化抗体”是指：存在于可变区的、除互补性决定区(CDR)以外的全部区域(即，恒定区和可变区中的框架区(FR))的序列来自人、仅CDR的序列来自其它哺乳动物种属的抗体。作为其它哺乳动物种属，优选例如小鼠等可以容易地制作杂交瘤的动物种属。

作为人源化抗体的制作方法，可列举例如美国专利第5，225，539号、第5，585，089号、第5，693，761号和第5，693，762号中记载的方法或对它们的一部分进行改进的方法等。人源化抗体也与嵌合抗体同样地可以使用基因工序学方法改变成ScFv、ScFv－Fc、微型抗体、dsFv、Fv等，也可以使用适当的启动子在大肠杆菌、酵母等微生物中生产。

人源化抗体制作技术还可以用于制作可优选给药于例如尚未建立杂交瘤制作技术的其它动物种属的单克隆抗体。可列举例如牛、猪、绵羊、山羊、鸡等作为家畜(家禽)而大规模繁殖的动物；狗、猫等宠物动物等作为对象。

(iii)使用人抗体产生动物进行的、全人抗体的制作

向敲除(KO)了内源性免疫球蛋白(Ig)基因的非人温血动物中导入有功能的人Ig基因，将其用抗原进行免疫，则作为该动物源抗体的替代物而产生人抗体。因此，如果使用小鼠等之类的已经建立了杂交瘤制作技术的动物，则可以通过与以外的小鼠单克隆抗体的制作同样的方法取得全人单克隆抗体。

在将本发明的抗体作为药品来使用时，优选为单克隆抗体，但是也可以为多克隆抗体。在本发明的抗体为多克隆抗体时，不需要使用杂交瘤，因此如果使用虽然未建立杂交瘤制作技术但已经建立了转基因技术的动物种属、优选牛等有蹄类动物、并且通过与上述同样的方法制作人抗体产生动物，则也可以廉价地制造更加大量的人抗体(例如，参照Nat.Biotechnol.，20，889－894(2002))。对于得到的人多克隆抗体，可以采集人抗体产生动物的血液、腹水、乳汁、卵等且优选为乳汁、卵，并且将与上述同样的纯化技术组合来对其进行纯化。

(iv)使用噬菌体展示人抗体文库进行的、全人抗体的制作

制作全人抗体的另一个途径是使用噬菌体展示的方法。该方法的情况下，通过PCR导入的变异有时被导入到CDR以外，因此临床阶段有偶发的HAHA产生的报道，另一方面则具有下述优点：不存在来自宿主动物的种间病毒感染的风险性、抗体的特异性是无限的(连针对禁忌克隆、糖链等的抗体也可容易地制作)等。需要说明的是，作为噬菌体展示人抗体文库的制作方法，没有特别限定。

(3)多克隆抗体的制作

本发明的多克隆抗体可以按照其本身公知的方法或基于其的方法制造。例如，制备免疫抗原(蛋白质或肽抗原)本身、或其与载体蛋白的复合体，与上述的单克隆抗体的制造方法同样地对温血动物进行免疫，从该免疫动物中采集含有针对本发明的蛋白质的抗体的物质，进行抗体的分离纯化，由此可以制造。

可以从通过上述的方法免疫的温血动物的血液、腹水等、优选血液中采集多克隆抗体。

关于抗血清中的多克隆抗体滴度的测定，可以与上述的抗血清中的抗体滴度的测定同样地进行测定。多克隆抗体的分离纯化可以按照与上述的单克隆抗体的分离纯化同样的免疫球蛋白的分离纯化法来进行。

以下对本发明的蛋白质或其部分肽(以下也简称为“本发明的蛋白质”)、编码本发明的蛋白质或其部分肽的DNA、上述的本发明抗体的用途进行说明。

本发明的蛋白质为本发明的抗体的靶分子，因此，以罹患或者疑似罹患感染性疾病或炎症性疾病的患者的、本发明的蛋白质有无表达或其程度为指标，可以推断使用本发明的抗体进行的预防·治疗的有效性。

另外，通过抑制本发明的蛋白质(APOA2)的活性，能够进行感染性疾病或炎症性疾病的预防·治疗。因此，本发明的抗体可作为感染性疾病或炎症性疾病的预防·治疗剂使用。另外，从其它观点出发，本发明还提供感染性疾病或炎症性疾病的预防和/或治疗方法，其包含给药有效量的本发明的抗体的步骤。此时，“有效量”可由医生等判断人根据抗体的活性程度、患者的身体状况和疾病的状况等适当决定。需要说明的是，作为感染症，采取广义解释，可包括多种多样的起因于外源物的感染的疾病(例如，各种细菌、病毒、或寄生虫所致的感染、起因于该感染的败血症等)。另外，作为炎症性疾病，可例示例如特发性血小板减少性紫癜、无丙种球蛋白血症、川崎病、格林-巴利综合症、显微镜下多血管炎(MPA)、嗜酸性肉芽肿性多血管炎(Eosinophilic Granulomatosis with Polyangitis：EGPA、Churg－Strauss综合症)、等难治性血管炎，以及肾炎和/或肾小球肾炎、特发性肺纤维化等。

含有本发明的抗体的上述疾病的预防·治疗剂为低毒性，可以直接以液剂形式、或以适当剂型的药物组合物形式对人或哺乳动物(例如，大鼠、兔、绵羊、猪、牛、猫、狗、猴等)经口或非经口(例如，血管内给药、皮下给药、肌肉内给药等)给药。

本发明的抗体既可以将其本身进行给药，也可以制成适当的药物组合物而给药。作为给药时所使用的药物组合物，可以包含本发明的抗体及其盐、药理学上可接受的载体、稀释剂或赋形剂。这类药物组合物可以以适合于经口给药或非经口给药的剂形形式提供。

作为用于非经口给药的组合物，使用例如注射剂、栓剂等，注射剂可以包含静脉注射剂、皮下注射剂、皮内注射剂、肌肉注射剂、点滴注射剂等剂形。这类注射剂可以按照公知的方法制备。作为注射剂的制备方法，例如可以将上述本发明的抗体或其盐溶解、悬浮或乳化于通常被用于注射剂的无菌的水性液或油性液而制备。作为注射用的水性液，使用例如生理盐水、包含葡萄糖和其它辅助药的等渗液等，可以与适当的溶解辅助剂、例如醇(例如，乙醇)、多元醇(例如，丙二醇、聚乙二醇)、非离子表面活性剂〔例如，聚山梨酯80、HCO－50(polyoxyethylene(50mol)adduct of hydrogenated castor oil)〕等。作为油性液，可使用例如芝麻油、大豆油等，作为溶解辅助剂，可组合使用苯甲酸苄基酯、苯甲醇等。所制备的注射液优选填充在适当的瓶中。直肠给药时所使用的栓剂可以通过将上述抗体或其盐混合到通常的栓剂用基剂中而制备。

作为用于经口给药的组合物，可列举固体或液体的剂形，具体可列举片剂(包括糖衣片、包衣片)、丸剂、颗粒剂、散剂、胶囊剂(包括软胶囊剂)、糖浆剂、乳剂、悬浮剂等。这类组合物可以通过公知的方法制造，可以含有制剂领域中通常使用的载体、稀释剂或赋形剂。作为片剂用的载体、赋形剂，使用例如乳糖、淀粉、蔗糖、硬脂酸镁。

上述的非经口用或经口用药物组合物适合于制成与活性成分的给药量相符的给药单位的剂形。作为这类给药单位的剂形，可列举例如片剂、丸剂、胶囊剂、注射剂(安瓿)、栓剂。作为抗体的含量，每一给药单位剂形为通常5～500mg，特别地，注射剂的情况下优选含有5～100mg的上述抗体，其它剂形的情况下优选含有10～250mg的上述抗体。

含有本发明的抗体的上述制剂的给药量根据给药对象、对象疾病、症状、给药途径等而不同，例如在用于成人的治疗·预防的情况下，以1次量计，将通常0.01～20mg/kg体重左右、优选为0.1～10mg/kg体重左右、进一步优选为0.1～5mg/kg体重左右的本发明的抗体以1天1～5次左右、优选为1天1～3次左右通过静脉注射进行给药的方式是适当的。在其它非经口给药和经口给药的情况下，也可以基于该量进行给药。在症状特别严重的情况下，可以根据其症状而增加给药量。

需要说明的是，只要不会由于与上述抗体配合而产生不优选的相互作用，则上述各组合物中也可以含有其它活性成分。

进一步地，本发明的抗体可以与其它药剂组合使用。本发明的抗体和其它药剂可以同时或在不同时间给药于患者。

[本发明的多核苷酸]

根据本发明，还提供一种多核苷酸，其编码作为上述预防·治疗剂、免疫球蛋白片段组合物的有效成分使用的本发明的抗体。作为一例，该多核苷酸编码包含与序列编号：4所示的氨基酸序列一致或实质上一致的氨基酸序列的多肽，优选编码由与序列编号：4所示的氨基酸序列一致或实质上一致的氨基酸序列构成的多肽，进一步优选编码由与序列编号：4所示的氨基酸序列一致的氨基酸序列构成的多肽。编码本发明的抗体的多核苷酸可以是DNA，也可以是RNA，或者是DNA/RNA嵌合体。优选列举DNA。另外，该多核苷酸可以是双链，也可以是单链。双链的情况下，可以是双链DNA、双链RNA或DNA：RNA的杂合体。单链的情况下，可以是正义链(即，编码链)，也可以是反义链(即，非编码链)。

作为编码本发明的抗体的DNA，可以是例如：含有在高度严谨(high stringent)的条件下与包含序列编号：3所示的碱基序列的DNA杂交的碱基序列、并且编码与含有序列编号：4所示的氨基酸序列的蛋白质具有实质上同质的活性的蛋白质的DNA。

作为与序列编号：3所示的碱基序列可以在高度严谨的条件下杂交的DNA，使用例如含有与序列编号：3所示的碱基序列具有约50％以上、优选为约60％以上、更优选为约70％以上、尤其优选为约80％以上、特别优选为约90％以上、最优选为约95％以上的同源性(homology)的碱基序列的DNA等。

本说明书中的碱基序列的同源性例如可以使用同源性计算算法NCBI BLAST(National Center for Biotechnology Information Basic Local Alignment SearchTool)在以下的条件(期待值＝10；允许间隙；filtering＝ON；Match score＝1；Missmatchscore＝－3)下计算。作为用于确定碱基序列的同源性的其它算法，可同样优选例示出上述的氨基酸序列的同源性计算算法。

杂交可以按照其本身公知的方法或基于其的方法来进行，例如MolecularCloning 2nd ed.(J.Sambrook et al.，Cold Spring Harbor Lab.Press，1989)中记载的方法等。另外，在使用市售的文库的的情况下，可以按照所附的使用说明书中记载的方法进行。更优选地，可以按照高度严谨的条件来进行。

高度严谨的条件是指例如：钠浓度为约19～约40mM、优选为约19～约20mM且温度为约50～约70℃、优选为约60～约65℃的条件。特别优选钠盐浓度为约19mM且温度为约65℃的情况。本领域技术人员可以适当改变杂交溶液的盐浓度、杂交反应的温度、探针浓度、探针的长度、错配的数量、杂交反应的时间、洗涤液的盐浓度、洗涤的温度等而容易地调节为所期望的严谨度。

需要说明的是，序列编号：3的3’末端添加有编码构成His标签的6个组氨酸残基的序列(序列编号：3的第778～795位的碱基)。因此，作为编码本发明的抗体的多核苷酸，也优选包含至少含有序列编号：3的第1～777位的碱基的碱基序列(或相对于其具有上述范围的同源性的碱基序列)的碱基序列。需要说明的是，从同样的观点出发，作为本发明的抗体，也优选由包含与含有序列编号：4的第1～259位的氨基酸的氨基酸序列一致或实质上一致(“实质上一致”的优选方式与上述相同)的氨基酸序列的多肽构成的抗体。

另外，本发明还提供包含上述本发明的多核苷酸的载体。该载体既可以作为感染性疾病或炎症性疾病的预防和/或治疗剂使用，也可以用于产生本发明的抗体，其中，所述感染性疾病或炎症性疾病的预防和/或治疗剂含有该载体本身作为有效成分。

作为上述载体，一般通常为负载有编码本发明的抗体的DNA的质粒或病毒载体。本领域技术人员能够利用常规的基因工序学技术适当地制作具有所期望的DNA的载体。通常，可以利用市售的各种载体。

本发明的载体对于在宿主细胞内中保有本发明的多核苷酸、或表达本发明的抗体有用。

本发明的多核苷酸通常负载(插入)到适当的载体中并导入到宿主细胞中。作为该载体，只要稳定地保有所插入的DNA即可，没有特别限制。例如，如果使用大肠杆菌作为宿主细胞，则作为克隆用载体，优选pBluescript载体(Stratagene公司制)等，可以利用市售的各种载体。另外，是出于生产本发明的抗体的目的而使用载体的情况下，表达载体特别有用。作为表达载体，只要是在试管内、大肠杆菌内、培养细胞内、生物个体内表达多肽的载体即可，没有特别限制，如果是试管内表达，可例示例如pBEST载体(プロメガ公司制)，如果是大肠杆菌内表达，可例示例如pET载体(Invitrogen公司制)，如果是培养细胞内表达，可例示例如pME18S-FL3载体(GenBank Accession No.AB009864)，如果是生物个体内表达，可例示例如pME18S载体(Mol Cell Biol.8:466-472(1988))等。本发明的多核苷酸向载体中的插入可以利用常规方法进行，例如可以通过使用限制酶位点的连接酶反应或In-fusion法(宝生物)进行。

作为上述宿主细胞，没有特别限制，根据目的而使用各种宿主细胞。作为用于表达本发明的抗体的细胞，可例示例如细菌细胞(例：链球菌、葡萄球菌、大肠杆菌、链霉菌、枯草杆菌)、昆虫细胞(例：果蝇S2、斜纹夜蛾(Spodoptera)SF9)、动物细胞(例：CHO、COS、HeLa、C127、3T3、BHK、HEK293、Bowes黑素瘤细胞)和植物细胞。载体向宿主细胞中的导入可通过例如磷酸钙沉淀法、电脉冲穿孔法(Current protocols in Molecular Biologyedit.Ausubel et al.(1987)Publish.John Wiley&Sons.Section 9.1-9.9)、脂质转染法(GIBCO-BRL公司制)、显微注射法等公知方法进行。

为了使在宿主细胞内表达的多肽分泌到内质网的内腔、细胞周辺腔或细胞外的环境中，可以使适当的分泌信号整合到目标多肽中。这些信号相对于目标多肽可以为内源性，也可以为异种信号。

关于上述制造方法中的多肽的回收，在本发明的多肽被分泌到培养基的情况下，回收培养基。在细胞内产生本发明的多肽的情况下，首先裂解其细胞，然后回收多肽。

为了从重组细胞培养物回收、纯化本发明的多肽，可以使用包括硫酸铵或乙醇沉淀、酸提取、阴离子或阳离子交换色谱、磷酸纤维素色谱、疏水性相互作用色谱、亲和色谱、羟基磷灰石色谱和凝集素色谱在内的公知方法。

在使用本发明的抗体的治疗奏效的患者中，本发明的蛋白质(APOA2)是表达的，进一步地，如果抑制APOA2的活性则能够进行感染性疾病或炎症性疾病的预防·治疗。因此，抑制APOA2的活性的化合物或其盐可作为感染性疾病或炎症性疾病的预防和/或治疗剂使用。

因此，本发明的蛋白质(APOA2)作为用于筛选抑制该蛋白质的活性的化合物或其盐的试剂有用。

即，根据本发明的另一方式，提供使用本发明的蛋白质的、抑制该蛋白质的活性的化合物或其盐的筛选方法。

在筛选抑制本发明的蛋白质的活性的化合物或其盐时，该筛选方法大体上分为：

(a－1)比较受试物质存在下和非存在下的、经分离的本发明的蛋白质的活性的方法；

(a－2)在受试物质存在下和非存在下培养具有产生本发明的蛋白质的能力的细胞，并且对两条件下的本发明的蛋白质的活性进行比较的方法。

上述(a－1)的筛选方法中使用的本发明的蛋白质可以使用上述的本发明的蛋白质或其部分肽的制造方法来进行分离·纯化。

作为上述(a－2)的筛选方法中使用的具有产生本发明的蛋白质的能力的细胞，只要是本来就表达本发明的蛋白质的人或其它温血动物细胞或包含它们的生物体试样(例如，血液、组织、脏器等)，则没有特别限制。在为来自非人动物的血液、组织、脏器等的情况下，可以将它们从生物体分离并且进行培养，也可以对生物体给药受试物质并经过一定时间后分离这些生物体试样。

另外，作为具有产生本发明的蛋白质的能力的细胞，可例示上述的通过基因工序学方法制作的各种转化体。

作为受试物质，可列举例如蛋白质、肽、非肽性化合物、合成化合物、发酵产物、细胞提取液、植物提取液、动物组织提取液等，这些物质可以是新物质，也可以是公知物质。

上述(a－1)和(a－2)的筛选方法中的本发明的蛋白质的活性的测定可以按照现有公知的方法来进行。

本发明的筛选用试剂盒含有本发明的蛋白质或其部分肽(以下也简称为“本发明的蛋白质”)。本发明的蛋白质既可以是使用上述任一方法分离·纯化而得的，也可以如上所述地以产生本发明的蛋白质的细胞(温血动物细胞)的形态提供。

本发明的筛选用试剂盒还可以进一步含有上述的本发明的抗体，用以测定产生本发明的蛋白质的细胞中的该蛋白质的表达量。

该筛选用试剂盒除了上述以外，可以任选包含反应缓冲液、封闭液、洗涤用缓冲液、标记试剂、标记检测试剂等。

使用本发明的筛选方法或筛选用试剂盒的得到的、抑制本发明的蛋白质的活性的物质(游离体或盐的形态)作为感染性疾病或炎症性疾病的预防·治疗剂、作为低毒性且安全的药物有用。

在将使用本发明的筛选方法或筛选用试剂盒得到的化合物或其盐作为上述的预防·治疗剂使用时，可以按照常规手段制剂化。

本说明书中，在用缩写来表示碱基、氨基酸等时，基于IUPAC－IUB Commission onBiochemical Nomenclature所规定的缩写或该领域中的惯用缩写。另外，当氨基酸存在光学异性体时，如无特别明示则表示L体。

如上所述，如果抑制了本发明的蛋白质(APOA2)的活性，则能够进行感染性疾病或炎症性疾病的预防·治疗。因此，本发明的蛋白质(APOA2)为感染性疾病或炎症性疾病的病因。由此，根据本发明的又一方式，提供一种感染性疾病或炎症性疾病的诱导剂，其含有载脂蛋白A2(APOA2)作为有效成分。

进一步地，根据本发明的又一方式，提供一种感染性疾病或炎症性疾病的疾病模型动物的制作方法，其包含对人以外的非转基因动物给药载脂蛋白A2(APOA2)的工序。另外，根据本发明的又一方式，还提供一种通过上述的制作方法制作的、感染性疾病或炎症性疾病的疾病模型动物。

本发明的一方式的感染性疾病或炎症性疾病的疾病模型动物的制作方法包含对人以外的非转基因动物给药载脂蛋白A2(APOA2)的工序。通过采取该构成，可以对实验动物诱导感染性疾病或炎症性疾病所特有的症状。需要说明的是，具体的疾病如上所述，在此省略详细的说明。

本方式的疾病模型动物的制作方法中使用的非转基因动物是指：不是转基因动物的、所谓的野生型动物。这里，转基因动物是指基因组内导入有外源性DNA的动物，也包括通过导入人为操作的基因而不再表达特定基因的功能的敲除动物等。另外，伴有可遗传的生殖细胞系DNA变化的动物、和伴有不可遗传的体细胞系DNA变化的动物都包括在转基因动物中。即，本方式的疾病模型动物以野生型动物为基础而制作。以往，感染性疾病或炎症性疾病的疾病模型动物中几乎没有以野生型的动物为基础而诱导出的例子。作为具体的动物，可以使用人以外的任意的哺乳动物。作为这类动物，可列举小鼠、大鼠、仓鼠等豚鼠等啮齿类以及猴、黑猩猩、猩猩等非人灵长类、兔、牛、山羊、绵羊、猪等，但不限定于这些。优选为啮齿类，特别优选为小鼠。

本方式的疾病模型动物的制作方法中，载脂蛋白A2(APOA2)的给药途径没有特别限制。经口、非经口给药均可，因此可例示经口、腹腔内、静脉内、动脉内、肌肉内、皮下、皮内、吸入、胃内、肠内、经皮等以往公知的任意的给药途径，但不限于这些。

载脂蛋白A2(APOA2)可以单独地给药，也可以在不损害载脂蛋白A2(APOA2)的效果的范围内与适当的药剂学上可接受的载体或稀释剂组合给药。因此，可以包含用于药品、化妆品中的各种成分而构成，可以制备成具有各种剂形的制剂而使用。

载脂蛋白A2(APOA2)的给药量、给药次数和给药期可以根据动物的种类、品系、周龄、性别差异等适当设定。作为小鼠，优选广泛用作实验动物的FVB/N、Balb/c、C57BL/6，但不限于此。此时，在期望的症状一次即产生时，可以给药1次，也可以持续给药至出现所期望的症状。

关于制作的疾病模型动物是否罹患感染性疾病或炎症性疾病这一点，可以基于公知的方法进行确认。例如，为了确认罹患血管炎，可以如后述的实施例所示那样用显微镜观察模型动物的肾脏、脾脏、肺等的组织，从而通过判定是否存在上述疾病所特有的病理学变化来确认罹患。另外，可以通过评价动物的泌尿评分、或者对采自动物的血液中的各种成分进行检测或测定来确认罹患。

并且，作为本发明的又一方式，还提供通过上述感染性疾病或炎症性疾病的疾病模型动物的制作方法而制作的疾病模型动物。本方式所提供的感染性疾病或炎症性疾病的疾病模型动物是通过对非转基因动物、即野生型动物给药载脂蛋白A2(APOA2)而制作的，表现出感染性疾病或炎症性疾病所特有的症状。因此，本方式所提供的疾病模型动物可以用于感染性疾病或炎症性疾病、特别是难治性血管炎的发症和疾病形成机制的分析、这些的治疗·预防方法、以及治疗·预防剂的评价和筛选。

另外，根据本发明的又一方式，还提供感染性疾病或炎症性疾病的预防和/或治疗剂的筛选方法。例如，可以对上述疾病模型动物给药作为感染性疾病或炎症性疾病的预防和/或治疗剂的候选物质的试验物质，并评价症状的改善和消失。这里，作为试验物质，可以为任意的感染性疾病或炎症性疾病的候选物质，生物体内物质、基因重组物质、化学合成化合物等均可，另外，不限于这些。另外，既可以单独地给药，也可以与适当的药学上可接受的载体或稀释剂组合并制剂化而给药。试验物质的给药可以按照公知的任意给药途径进行，经口、非经口给药均可。因此，可例示经口、腹腔内、静脉内、动脉内、肌肉内、皮下、皮内、吸入、胃内、肠内、经皮等，不限定于这些。可以考虑试验物质的性质、特别是药物分布性质、溶解性等而设定。另外，试验物质的给药量、给药次数和给药期可以根据动物的种类、品系、周龄、性别差异等以及试验物质的种类等适当设定。

关于本方式的感染性疾病或炎症性疾病的预防和/或治疗剂的筛选方法中的症状的改善和消失的评价，可以从与上述各种指标和后述的实施例中采用的指标同样的观点出发而进行。并且在症状由于试验物质的给药而改善或消失的情况下，可以将该试验物质评价为感染性疾病或炎症性疾病的预防和/或治疗剂。另外，作为阴性对照，可以使用不进行任何给药、或给药除了不含试验物质之外组成相同的制剂的疾病模型动物。可以在该阴性对照动物和给药了试验物质的动物之间比较症状的改善和消失。并且，例如给药了试验物质的动物的症状与未给药试验物质的阴性对照动物相比得到改善时，可以将该试验物质评价为感染性疾病或炎症性疾病的预防和/或治疗剂。

实施例

以下使用实施例详细说明本发明，但本发明不限于以下的实施例。需要说明的是，下述实施例中，对人进行的血液试样的采集均取得了知情同意，在确认了血液提供者的意思后实施。

[实施例1]

1.重组人ScFv抗体(VasSF)的靶分子的鉴定

尝试按照下述方式寻找专利文献5中记载对血管炎模型小鼠显示出各种治疗效果的、由专利文献5的序列编号：31(与本说明书的序列编号：4相同)所示的氨基酸序列构成的重组人ScFv(VasSF)的靶抗原。

首先，在鉴定特定抗体的靶抗原时，如图1A所示，大致有两种方法，但是靶分子的鉴定通常是极其困难的。

本实施例中，本发明人们分别使用以下的3种方法进行了VasSF的靶抗原的鉴定，最终通过使用甲苯磺酰基活性化Dynabeads(注册商标)、且用MS/MS法缩小候选物质的范围成功地鉴定出靶抗原。

1－1.利用ProteoSeek ^TM法的鉴定

准备来自健康人的血浆作为样品，将其用ProteoSeek ^TMAlbumin/IgG Removal Kit(PIERCE)处理后，尝试通过使用以下的一抗～四抗的SDS-PAGE和蛋白质印迹来鉴定靶抗原。

一抗：VasSF

二抗：抗人IgG F(ab)₂抗体(Rockland)

三抗：抗兔IgG山羊抗体(碱性磷酸酶标记)(invitorogen)

四抗：抗山羊IgG兔抗体(碱性磷酸酶标记)(jackson)

将这些的结果示于图1B。图1B的左侧的照片示出考马斯亮蓝(CBB)染色的结果，右侧的照片示出蛋白质印迹的结果。右侧的照片的被圆圈包围的部位中可观察到反应，但是，由于非常多的靶抗原候选斑点重叠，所以本实验未能实现靶抗原的鉴定。

1－2.利用HiTrap(注册商标)NHS-activated HP柱(GEヘルスケア)的鉴定

准备柱床体积1mL的HiTrap NHS-activated HP柱(GEヘルスケア)。量取0.4mg/mL的VasSF溶液5mL(2mg)，用amico 10k浓缩到约40倍。然后用偶联缓冲液稀释，使其结合于上述准备的柱。

接着，用上述柱对作为样品的所准备的来自健康人的血浆进行处理，尝试通过CBB染色和银染色以及蛋白质印迹鉴定靶抗原。

将结合有样品的柱的染色结果示于图1C。如图1C所示，CBB染色(图1C的左侧)基本是不能检测的状态，而通过银染色(图1C的中央)则可以检测到少量。另外，蛋白质印迹(图1C的右侧)中，在10kDa附近观察到粗条带。但是，本实验中，非常多的靶抗原候选斑点也重叠，因此本实验仍未能实现靶抗原的鉴定。

1－3.利用甲苯磺酰基活性化Dynabeads(注册商标)的鉴定

按照所附的说明书，使用VasSF 1mg作为配体，在0.1M硼化钠缓冲液中与DynabeadsTosylactivated(25mg)混和而进行反应，由此制作包被有配体的珠。然后，使用PBS(含有0.05％Tween20)将该包被珠洗涤5次。

另一方面，将人血浆(采血时，使用EDTA－2K作为抗凝固剂)3mL用PBS稀释10倍后，用超滤膜50kDa离心过滤，从而准备样品。

将该样品与上述的包被珠25mg混和，边旋转1小时边在室温下反应。除去血浆后，用PBS(含有0.05％Tween20)洗涤3次。

然后，将结合于包被珠的组分用洗脱缓冲液(0.1M甘氨酸－HCl、pH2.7)洗脱，用1/10体积的中和缓冲液(1M Tris HCl、pH9.0)中和。使用由此而洗脱的组分进行SDS-PAGE。这里，将示出对该SDS-PAGE进行银染色的结果的照片示于图2。如图2的照片所示，在约10kDa附近观察到条带，因此将该条带(斑点)切出。

[实施例2]

2.使用MS/MS离子检索法的、斑点中的靶抗原候选物的检索

用刀将图2中得到的斑点切出(图3的左侧)。接着，进行蛋白酶降解而得到的肽混合物的MS/MS测定，通过在质谱仪中选择来自特定的肽的离子的方法得到MS/MS谱。由得到的MS/MS谱和数据库中所登录的完整蛋白质数据算出评分(表1)。其结果是，命中了下述表1中记载的11种蛋白质，作为靶抗原的候选分子(图3的右侧的表中以缩写形式记载了相同的蛋白质)。

表1.通过MS/MS离子检索检测到的候选分子

[表1]

[实施例3]

3.针对靶抗原的候选分子的、多克隆抗体的治疗效果

1)尝试对于上述表中记载的11种候选分子中的、预测可能存在于血液中的5种分子：Iggamma－2chain C region、Apolipoprotein A－II、Ig heavy chain V－III、Ankyrinrepeat and KH domain－containing protein 1、Apolipoprotein C－I制备多克隆抗体。

2)将包括Recombinant human ApoAII抗原在内的各抗原，与佐剂混合并接种于家兔。

3)每周将各抗原接种于家兔，共接种4次，再在1周后采血，通过ELISA法确认抗体滴度足够高。

4)从高度免疫后的家兔采集全血，分离血浆成分。

5)使用蛋白G柱从血浆分离IgG。

6)利用结合有各抗原的亲和柱，从IgG组分中分离纯化特异抗体。

7)将得到的多克隆抗体给药于血管炎自然发病模型小鼠(SCG/Kj小鼠)，判断各抗体的治疗效果。

上述研究的结果是，仅使用Apolipoprotein A－II(载脂蛋白A2；APOA2)制作的多克隆抗体显示出明显的治疗效果。由此逐渐地确定VasSF的靶抗原为Apolipoprotein A－II(载脂蛋白A2；APOA2)。

[实施例4]

4.作为用于治疗难治性血管炎的抗体药物的抗APOA2多克隆抗体的治疗效果

将上述实施例3中显示出明显的治疗效果的抗APOA2多克隆抗体溶解于含有0.45％甘氨酸(Gly)和0.9％氯化钠的1.5％D－甘露醇后使用。

首先，对10周龄的SCG/Kj小鼠，以10～40mg/kg/day的处方通过腹腔内给药(ip)连续5天给药抗APOA2多克隆抗体，达到13周龄时，通过CO ₂气体安乐死，测定作为血管炎的指标的血清中的MPO－ANCA(myeloperoxidase－specific anti－neutrophil cytoplasmicantibody)值、脾脏重量、外周血中的白细胞数、淋巴细胞数、单核细胞数、粒细胞(嗜中性粒细胞)数、和血小板数，基于其结果判定治疗效果。

4－1.方法

4－1－1)小鼠饲养条件

在设定为14L10D的明暗周期(明亮期5：00－19：00、暗期19：00－5：00)、温度23±1℃、湿度50±5％的环境中饲养SCG/Kj小鼠。关于饵料，在实验前使用小型啮齿类(特殊繁殖用)CRF1：射线灭菌后(オリエンタル酵母工业株式会社)，给药前一天起更换为小型啮齿类(一般饲养用)FR－2：射线灭菌后(船桥ファーム)。关于饮水，使其自由摄取向用反渗透(RO)式饮水处理装置净化后的水中按照浓度0.3～2.0ppm的方式加入了氯的水。动物施设中供给的是从HEPA过滤器中通过的洁净空气，该动物施设仅限于SPF动物的饲养。

4－1－2)治疗方法

对于对象小鼠，从约3周前起每周进行一次尿检，根据给药当天的体重和尿潜血·尿评分的值分组。给药组连续5天ip给药0.1～400mg/kg的样品，对照组连续5天给药Solvent(稳定剂：D甘露醇、甘氨酸、PBS)。按照由最终测定体重计算时每1只为0.33mL的方式调整给药量。给药后，每周进行2次体重测定和尿检。

4－1－3)材料采集

在给药起3周后进行安乐死，进行解剖·材料采集。

1.在CO ₂(干冰)麻醉下，从心脏采集全血(无肝素)。

2.为了检查血液性状，在加入了EDTA－2K和生食：250μL的采样管中添加血液50μL而进行稀释。约2小时后，利用自动测定器(VetScanHMII ABAXIS公司制、Union City，CA、USA)测定WBC、RBC、Hgb、Hct、MCV、MCH、MCHC、Plt。

3.用外周血或采血注射器中所残留的血液制作2枚涂片标本。

4.对于残余血液，在离心分离后，在－80℃保管血清。然后送至株式会社A－CLIP研究所(MPO－ANCA和细胞因子(Bio－Plex)测定用)。

5.开腹并拍摄照片后，摘出脾脏、心脏、肾脏、肺、皮肤并处理，将剩余部分整个浸渍于10％中性缓冲福尔马林液(和光纯药工业株式会社：060－01667)。

脾脏：测定重量后，取作为RNA用的5mm见方并置于RNA later，将剩余的组织浸渍于10％中性缓冲福尔马林液。

肺：取作为RNA用的5mm见方并置于RNA later，将剩余的组织脱气后浸渍于10％中性缓冲福尔马林液中。

肾脏：拍摄照片后，取作为RNA用的5mm见方并置于RNA later，将剩余的组织切割并浸渍于10％中性缓冲福尔马林液。

4－1－4)测定·分析

单位体重的脾脏重量(％)

肾小球形成率：通过在显微镜下观察HE染色后的玻片，对于80～100个肾小球，求出新月体形成率(％Crescent)。

4－1－5)血细胞的计数：通过VetScan(前述)测定白细胞(WBC)、淋巴细胞(LYM)、单核细胞(MON)、嗜中性粒细胞(GRA)。

4－1－6)血清中的生物标志物分析

使用ELISA法进行MPO－ANCA和抗膜突蛋白抗体、BUN的定量。

血清中的炎症性细胞因子·趋化因子(以下所示的)的定量使用Bio－Plex(バイオ·ラッド)来进行，用pg/mL来表示：

Interleukin(IL)－1alpha、IL－1beta、IL－2、IL－3、IL－4、IL－5、IL－6、IL－9、IL－10、IL－12p40、IL－12p70、IL－13、IL－17、Eotaxin、G－CSF、GM－CSF、IFN－gamma、KC、MCP－1、MIP－1alpha、MIP－1beta、RANTES、TNF－alpha、IL－15、IL－18、FGF－basic、LIF、M－CSF、MIG、MIP－2、PDGF－bb、VEGF、IL6sR、IL－23。

4－2.结果

4－2－1)肾小球新月体形成减少

作为自身免疫疾病的难治性血管炎的主要靶组织为肾脏、肺脏和脾脏。首先，大大关系到肾脏功能的肾小球的组织像有改变。示出C56BL/6健康小鼠的、肾小球中形成鲍曼囊的显微镜图像(图4的A)。另一方面，模型小鼠SCG/Kj的无治疗(Solvent给药)组的肾小球的显微镜图像中形成新月体，发生肾功能不全(图4的B的圆圈)。在阴性对照的给药中也如此(图4的C)。需要说明的是，作为阴性对照，使用在通过专利文献3中记载的方法纯化VasSF(ScFv)的过程中所纯化出的、不被抗Fab抗体识别的具有55kDa的大小的分子(本说明书中，也称为“Different Mol”)。与此相对地，通过对本模型小鼠SCG/Kj给药抗APOA2多克隆抗体，肾小球新月体形成减少(图4的D)、其形成率为50％左右，得到改善(图5的A)。

4－2－2)对于脾脏组织和重量的、抗APOA2多克隆抗体的治疗效果

难治性血管炎为自身免疫疾病，因此存在免疫功能缺陷，因此模型小鼠中可观察到显著的脾脏肥大(非专利文献11)。C56BL/6健康小鼠的脾脏的显微镜图像(图6的A)中，脾白髓和脾红髓明显分离，而模型小鼠SCG/Kj的无治疗(Solvent给药)组的脾脏的显微镜图像(图6的B)中，脾白髓和脾红髓未分离。在给药VasSF以外的分子(Different Mol)时也如此(图6的C))。另一方面，通过对本模型小鼠SCG/Kj给药抗APOA2多克隆抗体，几乎形成了健康小鼠的脾脏的组织像(图6的D)。

另外，参照图7，模型小鼠SCG/Kj的脾脏重量方面，无治疗(Solvent给药)组显示出高于C56BL/6健康小鼠的值。另一方面，通过对本模型小鼠SCG/Kj给药抗APOA2多克隆抗体，虽然未降低到健康小鼠的脾脏重量值，但脾脏重量也降低。需要说明的是，在给药VasSF以外的分子(Different Mol)的情况下，脾脏重量未降低。

4－2－3)对于难治性血管炎的血清中的生物标志物：MPO－ANCA、和抗膜突蛋白抗体的、抗APOA2多克隆抗体的治疗效果

难治性血管炎为自身免疫疾病，研究了抗APOA2多克隆抗体对临床检查中所使用的生物标志物：MPO－ANCA、和铃木和男等发现的新生物标志物：抗膜突蛋白抗体(非专利文献4)的血清水平的治疗效果。与显示MPO－ANCA阳性的模型小鼠SCG/Kj小鼠的无治疗(Solvent给药)组和VasSF以外的分子(Different Mol)的给药组相比，通过给药抗APOA2多克隆抗体，几乎改善到健康小鼠的血清中的MPO－ANCA和抗膜突蛋白抗体水平(图8的A和B)。

4－2－4)对于血清中的细胞因子·趋化因子水平的、抗APOA2多克隆抗体的治疗效果

由于脾脏组织的正常化和重量减少、血清中的自身抗体：MPO－ANCA、抗膜突蛋白抗体也通过抗APOA2多克隆抗体而减少至接近正常的水平，因此使用Bio－Plex(バイオ·ラッド)，以(pg/mL)的单位测定了作为炎症标志物的血清中的炎症细胞因子·趋化因子水平。IL－1alpha、IL－1beta、IL－2、IL－3、IL－4、IL－5、IL－6、IL－9、IL－10、IL－12p40、IL－12p70、IL－13、IL－17、Eotaxin、G－CSF、GM－CSF、IFN－gamma、KC、MCP－1、MIP－1alpha、MIP－1beta、RANTES、TNF－alpha、IL－15、IL－18、FGF－basic、LIF、M－CSF、MIG、MIP－2、PDGF－bb、VEGF、IL6sR、IL－23中的几乎全部的细胞因子·趋化因子水平在模型小鼠SCG/Kj的无治疗(Solvent给药)组中都是上升的。另一方面，通过对本模型小鼠SCG/Kj给药抗APOA2多克隆抗体，TNF－alpha、G－CSF、RANTES、IFN－gamma、IL－5、IL－10得到改善(图9的A～F)。

凡例

IL－1a：白细胞介素－1α(interleukin－1alpha)

IL－1b：白细胞介素－1β(interleukin－1beta)

IL－2：白细胞介素－2(interleukin－2)

IL－3：白细胞介素－3(interleukin－3)

IL－4：白细胞介素－4(interleukin－4)

IL－5：白细胞介素－5(interleukin－5)

IL－6：白细胞介素－6(interleukin－6)

IL－9：白细胞介素－9(interleukin－9)

IL－10：白细胞介素－10(interleukin－10)

IL12p40：白细胞介素－12亚基p40(interleukin－12subunit p40)

IL－12p70：白细胞介素－12亚基p70(interleukin－12subunit p70)

IL－13：白细胞介素－13(interleukin－13)

IL－17：白细胞介素－17(interleukin－17)

Eotaxin：嗜酸细胞活化趋化因子(eotaxin)

G－CSF：粒细胞集落刺激因子(granulocyte colony－stimulating factor)

GM－CSF：粒细胞/巨噬细胞集落刺激因子(granulocyte macrophage－colonystimulating factor)

IFN－g：干扰素γ(interferon gamma)

KC：角质形成细胞源趋化因子(keratinocyte－derived chemokine)

MCP－1：单核细胞趋化性因子蛋白－1(monocyte chemoattractant protein－1)

MIP－1a：巨噬细胞炎症性蛋白－1α(macrophage inflammatory protein－1alpha)

MIP－1b：巨噬细胞炎症性蛋白－1β(macrophage inflammatory protein－1beta)

RANTES：受活化控制的、正常T细胞中表达和分泌的蛋白质(regulated onactivation，normal T cell expressed and secreted)

TNF－a：肿瘤坏死因子－α(tumor necrosis factor－alpha)

IL－15：白细胞介素－15(interleukin－15)

IL－18：白细胞介素－18(interleukin－18)

FGF－basic：碱性成纤维细胞生长因子(fibroblast growth factor－basic)

LIF：白血病抑制因子(leukemia－inhibitory factor)

M－CSF：巨噬细胞集落刺激因子(macrophage colony－stimulating factor)

MIG：干扰素γ诱导性单核因子(monokine induced by interferon gamma)

MIP－2：巨噬细胞炎症性蛋白－2(macrophage inflammatory protein－2)

PDGF－bb：血小板源生长因子－BB(platelet－derived growth factor－BB)

VEGF：血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor)

IL－6sR：白细胞介素－6可溶性受体(interleukin－6soluble receptor)

IL－23：白细胞介素－23(interleukin－23)

4－2－5)对于外周血中的白细胞数的、抗APOA2多克隆抗体的治疗效果

难治性血管炎为自身免疫疾病，模型小鼠SCG/Kj中观察到脾脏肥大以及血清中的自身抗体MPO－ANCA、抗膜突蛋白抗体和炎症性细胞因子·趋化因子的增加，与VasSF同样地，抗APOA2多克隆抗体趋向于使它们恢复正常。根据该结果，调查了对外周血中的白细胞的影响，结果白细胞总数(WBC)、淋巴细胞数(LYM)、单核细胞数(MON)没有变化(图10的A、B)，而嗜中性粒细胞数(GRA)由于抗APOA2多克隆抗体的给药而几乎改善到健康小鼠的值(图10的B)。

4－2－6)肺组织的显微镜图像

难治性血管炎为自身免疫疾病，因此调查了与肾脏同样地受累的脏器-肺的显微镜图像。在模型小鼠SCG/Kj的无治疗组和Different Mol组中，肺组织中出现了血管炎、出血、局部出现了肉芽(图11的B、C)。另一方面，通过抗APOA2多克隆抗体的给药，改善至接近正常肺的图像(图11的A、D)。

[实施例5]

5.用于治疗难治性血管炎的hScFv重组体(VasAP)的构建

5－1.重组体的构建

5－1－1)大肠杆菌中的、进行了表达优化的蛋白质表达

在利用专利文献3(日本特开2013－147495号公报)进行的人工丙种球蛋白文库的制作中，为了最大限度地抑制大肠杆菌内的丙种球蛋白对菌的毒性，采用作为严格控制质粒的蛋白质表达的载体的、在阿糖启动子控制下插入外源基因的pBAD载体。然后，专利文献5(日本特开2016－160265号公报)中已经从上述文库中选择了具有有效性的克隆(VasSF)，因此利用单一克隆进行了表达效率好的载体的检索和序列的改良。

5－1－2)大肠杆菌蛋白表达优化(向pTAC-2载体中导入)

为了使利用大肠杆菌进行的蛋白质表达的效率达到最大，根据有效克隆(VasSF)的氨基酸序列(序列编号：4，与专利文献5的序列编号：31相同)并考虑大肠杆菌的密码子偏好，制作了包含在C末端侧添加了6个组氨酸标签的人工合成基因(URq01_OptEcoli序列；序列编号：3)的质粒pTAC2-URq01_OptEcoli(图12)。

5－1－3)向pET32载体的导入

对于通常为了使重组蛋白在大肠杆菌中强表达而使用的载体pET系载体而言，可以在LacZ操纵子控制下利用T7启动子强化表达，因此，本实验中尝试将URq01_OptEcoli序列导入pET系载体。

具体而言，首先由上述构建的质粒pTAC2-URq01_OptEcoli中用PCR扩增插入序列(编码区域：序列编号：3的区域)，制作整合片段。此时使用的引物的碱基序列如下(下划线部为与pET32载体的克隆部位的末端相同的序列)。

正向引

物：TTTAAGAAGGAGATATACATATGGATTTCGGCCTCAGCTG

(序列编号：5、图13所示的pET32_Rq01OptEc_infF(Tm))

反向引物：TTAATGGTGATGGTGGTGATG

(序列编号：6、图13所示的Rq01_OptEc_cds_6HisStpcmpR)

另一方面，为了使pET32载体线状化且能够与上述扩增片段连接，通过进行反向PCR而扩增该载体。此时使用的引物的碱基序列如下(下划线部为与插入序列的His标签末端相同的序列)。

正向引

物：CATCACCACCATCACCATTAACTGCTAACAAAGCCCGAAAG

(序列编号：7、图13所示的His6StpCmp_pET32_110-129F)

反向引物：ATGTATATCTCCTTCTTAAA

(序列编号：8、图13所示的pET32vbRev693-712)

将上述扩增出的整合片段和线状化pET32载体使用In-Fusion法(宝生物)融合，从而将整合片段整合到pET32载体的T7启动子控制区域的整合部位(图14)。

然后，使用热休克法将上述载体导入到大肠杆菌宿主DE32中，由此制作转化体。需要说明的是，使用设定在pET32载体的框架T7启动子区域的引物和T7终止子区域的引物，对插入序列进行PCR扩增，利用10个菌落确认了整合序列。此时使用的引物的碱基序列如下。

正向引物：ATGGATTTCGGCCTCAGCTG

(序列编号：9、图13所示的Rq01_OptEc_cds_F)

反向引物：TTAATGGTGATGGTGGTGATG

(序列编号：6、图13所示的Rq01_OptEc_cds_6HisStpcmpR)

然后，对由该10个菌落得到的质粒DNA的碱基序列进行了确认，确认任一克隆均为构成正确的整合序列。

5－2)重组体克隆的纯化

通过以下的方法，从作为宿主的大肠杆菌细胞DE32的培养物中纯化重组蛋白质(由序列编号：4构成，本说明书中也称为“VasAP”)。但是，本发明中也可以使用蛋白质纯化的常规纯化方法进行纯化。作为纯化方法的例子，有固定化金属离子亲和色谱、利用离子交换柱的分级、利用DEAE等阳性离子交换树脂的色谱、凝胶过滤法等。

1)将包含目标克隆的大肠杆菌在10℃培养18～48小时。

2)从大肠杆菌的培养液中，通过3500×g、30分钟的离心分离回收菌体。

3)对于1L的菌体，加入20mL 6M硫氰酸胍的50mM Tris缓冲液(pH8.0)溶液，用超声破碎机进行3次19～22kHz下15秒的处理。

4)从超声破碎的菌体液中，通过15000×g、30分钟的离心分离收集上清。

5)从上清中，通过8M脲基的固定化金属离子亲和色谱纯化，收集来自目标克隆的hScFv(VasAP)的峰。

6)对于8M脲基的固定化金属(Ni)离子亲和色谱纯化而得的蛋白质，用超滤膜10kDa进行离心浓缩。

7)用凝胶过滤HPLC制备离心浓缩的蛋白质的峰。

8)将通过凝胶过滤HPLC得到的蛋白质的峰再次进行固定化金属(Co)离子亲和色谱纯化。

9)对于8M脲基的固定化金属(Co)离子亲和色谱纯化后的溶液，用超滤膜10kDa离心浓缩。

10)对于离心浓缩后的蛋白质，用凝胶过滤HPLC置换为8M尿素PBS缓冲液。

11)对于置换为8M尿素PBS缓冲液后的蛋白质，边通过透析分阶段降低尿素浓度并添加精氨酸，边置换为PBS。具体而言，按照8M尿素PBS、4M尿素/0.4M精氨酸、2M尿素/0.4M精氨酸、2M尿素0.4M精氨酸、PBS3次的顺序进行纯化。

将示出以上纯化结果的数据示于图15。图15的A、B为示出凝胶过滤HPLC的曲线的结果的照片，图15的C为示出电泳和蛋白质印迹的结果的照片。

[实施例6]

6.单克隆重组VasAP抗体的治疗效果的确认

6－1.在肾小球的新月体形成和尿液所见中的、重组VasAP抗体的治疗效果

使用上述得到的重组VasAP抗体，通过与上述实施例4同样的方法使用SCG/Kj模型小鼠确认该抗体对肾小球的新月体形成和尿液所见的影响。结果示于图16。

如图16所示，给药VasAP抗体的情况下，模型小鼠SCG/Kj中的新月体形成得到改善(图16的A)，尿液所见方面也显示低于Different Mol时的值(图16的B)。

6－2对于.脾脏重量的、重组VasAP抗体的治疗效果

使用上述得到的重组VasAP抗体，通过与上述实施例4同样的方法使用SCG/Kj模型小鼠该抗体确认对脾脏重量的影响。结果示于图17。

如图17所示，对于模型小鼠SCG/Kj中的肥大脾脏的重量而言，在Different Mol的情况下，结果是生恶化，而给药VasAP抗体的情况下，结果是脾脏重量减轻。

6－3.对于血清中的生物标志物：MPO－ANCA和抗膜突蛋白抗体的、重组VasAP抗体的治疗效果

使用上述得到的重组VasAP抗体，通过与上述实施例4同样的方法使用SCG/Kj模型小鼠该抗体确认对血清中的MPO－ANCA和抗膜突蛋白抗体水平的影响。结果示于图18。

如图18所示，对于模型小鼠SCG/Kj中的上升的血清中的MPO－ANCA和抗膜突蛋白抗体水平，在Different Mol的情况下，结果是恶化，而给药VasAP抗体的情况下，结果是使这些得到改善。

6－4.对于血清中的炎症性细胞因子·趋化因子水平的、重组VasAP抗体的治疗效果

使用上述得到的重组VasAP抗体，通过与上述实施例4同样的方法使用SCG/Kj模型小鼠确认该抗体对血清中的炎症性细胞因子·趋化因子水平的影响。结果示于图19。

如图19所示，通过给药VasAP抗体，TNF－alpha、G－CSF、RANTES、IFN－gamma、IL－5、IL－10的血清水平降低，显示出有效性。

6－5.对于外周血中的白细胞数的、重组VasAP抗体的治疗效果

使用上述得到的重组VasAP抗体，通过与上述实施例4同样的方法使用SCG/Kj模型小鼠确认该抗体对外周血中的白细胞数的影响。结果示于图20。

如图20所示，关于给药VasAP抗体对外周血中的白细胞数的影响，白细胞总数(WBC)、淋巴细胞数(LYM)未见显著改善(图20A)，而单核细胞数(MON)和嗜中性粒细胞数(GRA)则由于VasAP抗体的给药而减少到几乎接近健康小鼠的值(图20B)。

[实施例7]

7.通过在野生型小鼠中诱导血管炎进行的、诱导型血管炎模型小鼠的制作和评价

7－1.通过给药APOA2蛋白进行的、血管炎的发病诱导

7－1－1)供试动物

准备4只雌性BALB/cCr Slc小鼠(10周龄)，将其中的3只作为实验组，将1只作为对照组。

7－1－2)给药样品的制备

作为供试蛋白，准备APOA2蛋白(BTI：BT－928、LOT：9280413)。将该供试蛋白1mg溶解于生理盐水(日本全药工业株式会社制、#412190)1mL，接着进一步添加1mL的生理盐水并混匀，由此制备0.5mg/mL的给药样品。

7－1－3)给药样品的给药

将上述制备的给药样品0.2，分别对实验组的3只小鼠进行腹腔内给药(供试蛋白的给药量为0.1mg/只)。另一方面，对于对照组的小鼠，给药生理盐水(Solvent)0.2mL。

7－2.野生型小鼠中的血管炎诱导的确认

7－2－1)泌尿评分的评价

对于上述给药了给药样品后的实验组的3只小鼠，在给药样品(含有供试蛋白)的给药起至44天后，进行泌尿评分。结果示于图21。需要说明的是，图21所示的图中，将泌尿评分(纵轴；3只的算术平均值)相对于给药后天数(横轴)的变动以相对值示出，所述相对值是将给药当天(第0天)的值设为100时的相对值。

7－2－2)肾小球中的新月体形成的确认

对于对照组和实验组的各小鼠，通过与上述实施例4同样的方法算出新月体形成率，由此确认各小鼠的肾小球中的新月体的形成。该结果示于图22。另外，通过与上述实施例4同样的方法观察各小鼠的肾脏组织，确认新月体的形成。该结果示于图23。

7－2－2)脾脏组织和肺组织的显微镜图像的观察

通过与上述实施例4同样的方法观察各小鼠的脾脏组织和肺组织。该结果示于图23。

7－3.结果

如图21所示，可知：实验组的小鼠中，给药供试蛋白(APOA2)后，泌尿评分的值经时升高，此后也维持在高值。由此可以确认，实验组的小鼠由于供试蛋白(APOA2)的给药而诱导了炎症性疾病。

另外，如图22所示，实验组的小鼠与对照组的小鼠相比，肾小球中的新月体形成率大幅上升。另外，图23所示的显微镜图像中，实验组的小鼠的肾小球的显微镜图像也形成了新月体，发生肾功能不全。需要说明的是，图23的下段的“放大图”为上段的显微镜图像的被矩形包围部分的放大图。

进一步地，如图24所示，对照组的小鼠的脾脏的显微镜图像中，脾白髓和脾红髓明显分离，实验组的小鼠的脾脏的显微镜图像中，脾白髓和脾红髓未分离。另外，实验组的小鼠的肺组织中出现血管炎、出血、一部分出现肉芽，而对照组的小鼠则没有确认到这些症状。

以上结果表明，通过对野生型的非人动物(这里为小鼠)给药APOA2蛋白，可以诱导炎症性疾病(这里为血管炎)。

[序列表自由文本]

本申请说明书的序列表的序列编号表示以下的序列。

〔序列编号：1〕

表示编码人APOA2的DNA(CDS；包含终止密码子)的碱基序列。

〔序列编号：2〕

表示人APOA2的氨基酸序列。

〔序列编号：3〕

表示编码本发明的抗体之一(VasAP)的DNA(CDS；包含终止密码子)的碱基序列。

〔序列编号：4〕

表示本发明的抗体之一(VasAP)的氨基酸序列。

〔序列编号：5〕

表示PCR用引物(pET32_Rq01OptEc_infF(Tm))的碱基序列。

〔序列编号：6〕

表示PCR用引物(Rq01_OptEc_cds_6HisStpcmpR)的碱基序列。

〔序列编号：7〕

表示PCR用引物(His6StpCmp_pET32_110-129F)的碱基序列。

〔序列编号：8〕

表示PCR用引物(pET32vbRev693-712)的碱基序列。

〔序列编号：9〕

表示PCR用引物(Rq01_OptEc_cds_F)的碱基序列。

本申请基于2017年1月27日提出的日本专利申请号2017－13486号，其公开内容通过参照形式整体引入本申请。

序列表

<110> 株式会社A-CLIP研究所(A-CLIP INSTITUTE, CO., LTD.)

国立研究开发法人医药基盘·健康·营养研究所(NATIONAL INSTITUTES OFBIOMEDICAL INNOVATION, HEALTH AND

NUTRITION)

<120> 感染性疾病或炎症性疾病的预防和/或治疗剂

<130> ACI-16-03-PCT

<150> JP 2017-013486

<151> 2017-01-27

<160> 9

<170> PatentIn version 3.5

<210> 1

<211> 303

<212> DNA

<213> 智人（Homo sapiens）

<220>

<221> misc_feature

<223> 编码人APOA2的DNA 序列

<400> 1

atgaagctgc tcgcagcaac tgtgctactc ctcaccatct gcagccttga aggagctttg 60

gttcggagac aggcaaagga gccatgtgtg gagagcctgg tttctcagta cttccagacc 120

gtgactgact atggcaagga cctgatggag aaggtcaaga gcccagagct tcaggccgag 180

gccaagtctt actttgaaaa gtcaaaggag cagctgacac ccctgatcaa gaaggctgga 240

acggaactgg ttaacttctt gagctatttc gtggaacttg gaacacagcc tgccacccag 300

tga 303

<210> 2

<211> 100

<212> PRT

<213> 智人（Homo sapiens）

<220>

<221> MISC_FEATURE

<223> 人APOA2的氨基酸序列

<400> 2

Met Lys Leu Leu Ala Ala Thr Val Leu Leu Leu Thr Ile Cys Ser Leu

1 5 10 15

Glu Gly Ala Leu Val Arg Arg Gln Ala Lys Glu Pro Cys Val Glu Ser

20 25 30

Leu Val Ser Gln Tyr Phe Gln Thr Val Thr Asp Tyr Gly Lys Asp Leu

35 40 45

Met Glu Lys Val Lys Ser Pro Glu Leu Gln Ala Glu Ala Lys Ser Tyr

50 55 60

Phe Glu Lys Ser Lys Glu Gln Leu Thr Pro Leu Ile Lys Lys Ala Gly

65 70 75 80

Thr Glu Leu Val Asn Phe Leu Ser Tyr Phe Val Glu Leu Gly Thr Gln

85 90 95

Pro Ala Thr Gln

100

<210> 3

<211> 798

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 编码VasAP抗体的DNA序列

<400> 3

atggatttcg gccttagctg gattttcctg gtagcgctgc tgcgtggcgt acagtgccaa 60

gtacacttag tggagtctgg tggtggcttg gttcaaccgg gtcgttctct gcggctctca 120

tgtgcggtga gcggcttcac ctttgcgtcc tatgccatgc attgggtccg tcaggctcct 180

ggcaaagggc tggaatgggt cgcagggatc agtaaggatg ggagcaacaa acgtcatgcc 240

gatagcctcg aaggccgctt taccattagt cgcgataact cgaagaacac cctgtatctc 300

caggttagtg gcttacgcgc agaagatacc gccgtttact attgtgcgcg ctcacaagat 360

ccgacggact tcgattggct tctgtccgaa cattggggtc agggtactct ggtgacagtc 420

tcgtcagcga gcacaaaagg cccgtcggtg tttccgttag ccccttgttc tcgcagtact 480

tccgagagta ctgctgcact gggttgcctg gtgaaagact acttcccgga accggttacc 540

gtgtcgtgga attcaggtgc actgacctct ggagtccata cgtttcctgc ggttttgcag 600

tcgagcggct tgtactctct gagcagcgtt gtgacggtgc cgagctccaa ctttggaacc 660

cagacctata cgtgcaatgt ggatcacaaa ccctccaata cgaaggtaga caaaaccgtg 720

gctccaccag ttgccggtcc aagcgtcttt ctgtttccgc ccaaaccgaa agacacacat 780

caccaccatc accattaa 798

<210> 4

<211> 265

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> VasAP抗体的氨基酸序列

<400> 4

Met Asp Phe Gly Leu Ser Trp Ile Phe Leu Val Ala Leu Leu Arg Gly

1 5 10 15

Val Gln Cys Gln Val His Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln

20 25 30

Pro Gly Arg Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Val Ser Gly Phe Thr Phe

35 40 45

Ala Ser Tyr Ala Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu

50 55 60

Glu Trp Val Ala Gly Ile Ser Lys Asp Gly Ser Asn Lys Arg His Ala

65 70 75 80

Asp Ser Leu Glu Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn

85 90 95

Thr Leu Tyr Leu Gln Val Ser Gly Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val

100 105 110

Tyr Tyr Cys Ala Arg Ser Gln Asp Pro Thr Asp Phe Asp Trp Leu Leu

115 120 125

Ser Glu His Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser

130 135 140

Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg Ser Thr

145 150 155 160

Ser Glu Ser Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro

165 170 175

Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val

180 185 190

His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser

195 200 205

Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Asn Phe Gly Thr Gln Thr Tyr Thr

210 215 220

Cys Asn Val Asp His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Thr Val

225 230 235 240

Ala Pro Pro Val Ala Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro

245 250 255

Lys Asp Thr His His His His His His

260 265

<210> 5

<211> 40

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> PCR引物的碱基序列 (pET32_Rq01OptEc_infF(Tm))

<400> 5

tttaagaagg agatatacat atggatttcg gcctcagctg 40

<210> 6

<211> 21

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> PCR引物的碱基序列 (Rq01_OptEc_cds_6HisStpcmpR)

<400> 6

ttaatggtga tggtggtgat g 21

<210> 7

<211> 41

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> PCR引物的碱基序列 (His6StpCmp_pET32_110-129F)

<400> 7

catcaccacc atcaccatta actgctaaca aagcccgaaa g 41

<210> 8

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> PCR引物的碱基序列 (pET32vbRev693-712)

<400> 8

atgtatatct ccttcttaaa 20

<210> 9

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> PCR引物的碱基序列 (Rq01_OptEc_cds_F)

<400> 9

atggatttcg gcctcagctg 20

Claims

1.一种感染性疾病或炎症性疾病的预防和/或治疗剂，其含有特异性识别载脂蛋白A2(APOA2)的抗体作为有效成分。

2.根据权利要求1所述的预防和/或治疗剂，其中，

所述感染性疾病或炎症性疾病为特发性血小板减少性紫癜、无丙种球蛋白血症、川崎病、格林-巴利综合症、显微鏡下多血管炎(MPA)、嗜酸性肉芽肿性多血管炎(EosinophilicGranulomatosis with Polyangitis：EGPA、Churg－Strauss综合症)、肾炎、肾小球肾炎、特发性肺纤维化、或它们的组合。

3.根据权利要求1或2所述的预防和/或治疗剂，其中，

所述载脂蛋白A2(APOA2)为包含与序列编号：2所示的氨基酸序列一致或实质上一致的氨基酸序列的蛋白质。

4.根据权利要求1～3中任一项所述的预防和/或治疗剂，其中，

所述抗体为单克隆抗体。

5.根据权利要求1～4中任一项所述的预防和/或治疗剂，其中，

所述抗体为嵌合抗体、人源化抗体、或全人抗体。

6.根据权利要求1～5中任一项所述的预防和/或治疗剂，其中，

所述抗体为单链可变片段(ScFv)。

7.一种抗APOA2重组免疫球蛋白片段组合物，其含有下述多肽作为有效成分，所述多肽包含与序列编号：4所示的氨基酸序列一致或实质上一致的氨基酸序列。

8.一种抗APOA2重组免疫球蛋白片段组合物，其含有由序列编号：4所示的氨基酸序列构成的多肽作为有效成分。

9.根据权利要求7或8所述的抗APOA2重组免疫球蛋白片段组合物，其用于感染性疾病或炎症性疾病的预防和/或治疗。

10.一种多核苷酸，其编码下述多肽，所述多肽包含与序列编号：4所示的氨基酸序列一致或实质上一致的氨基酸序列。

11.根据权利要求10所述的多核苷酸，其中，所述多核苷酸包含：

(1)序列编号：3所示的碱基序列；或

(2)与序列编号：3所示的碱基序列具有70％以上的同源性的碱基序列。

12.根据权利要求10所述的多核苷酸，其中，所述多核苷酸包含：

(3)包含序列编号：3的第1～777位的碱基的碱基序列；或

(4)与包含序列编号：3的第1～777位的碱基的碱基序列具有70％以上的同源性的碱基序列。

13.一种载体，其含有权利要求10～12中任一项所述的多核苷酸。

14.根据权利要求13所述的载体，其为pET32载体。

15.一种宿主细胞，其含有权利要求13或14所述的载体。

16.一种感染性疾病或炎症性疾病的预防和/或治疗方法，其包含给药有效量的抗APOA2抗体的步骤。

17.一种感染性疾病或炎症性疾病的预防和/或治疗剂的筛选方法，其使用载脂蛋白A2(APOA2)。

18.一种感染性疾病或炎症性疾病的诱导剂，其含有载脂蛋白A2(APOA2)作为有效成分。

19.一种感染性疾病或炎症性疾病的疾病模型动物的制作方法，其包含对人以外的非转基因动物给药载脂蛋白A2(APOA2)的工序。

20.根据权利要求19所述的疾病模型动物的制作方法，其中，

21.一种感染性疾病或炎症性疾病的疾病模型动物，其是通过权利要求19或20所述的制作方法制作的。

22.一种感染性疾病或炎症性疾病的预防和/或治疗剂的筛选方法，其包含：

对权利要求21所述的疾病模型动物给药作为感染性疾病或炎症性疾病的预防和/或治疗剂的候选物质的试验物质的工序；和

对所述疾病模型动物的感染性疾病或炎症性疾病的症状的改善和消失进行评价的工序。