CN110226673A - 一种加州鲈鱼养殖中保肝健肠的复合制剂及其制备方法 - Google Patents

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Abstract

本发明涉及一种加州鲈鱼养殖中保肝健肠的复合制剂及其制备方法，属于水产养殖技术领域。其利用丁酸梭状芽孢杆菌和鼠李糖乳杆菌形成混合菌种，在以杜仲叶、水飞蓟果实、麸皮、次粉、米糠和无机盐等为基础的固体物料中发酵，生成具有较高活菌数的混合发酵产物，将其低温烘干粉碎后再按一定比例与月桂酸单甘油脂和胆汁酸混合，经包装形成可保护加州鲈鱼肝脏、提高肠道活力、促进消化、抑制病原生物、提高免疫力的复合制剂。本发明活性高、保存期长、使用方便，直接添加于饲料中投喂，通过加州鲈鱼—肠壁修复－肠道微生态平衡－胆汁酸代谢轴来保肝健肠，有效地去除加州鲈鱼肝脏中的脂质累积，修复肠道壁，保证肠道中有益菌群的数量、拮抗病毒和细菌的侵染，促进消化，减轻病害的发生，提高养殖产量和质量。

Description

一种加州鲈鱼养殖中保肝健肠的复合制剂及其制备方法
技术领域
本发明涉及一种加州鲈鱼养殖中保肝健肠的复合制剂及其制备方法，属于水产养殖技术领域。
背景技术
加州鲈鱼（Micropterus salmoides），又名大口黑鲈，隶属鲈形目，太阳鱼科，黑鲈属，原产美国加利福尼亚州密西西比河水系。因其肉质鲜美、生长快，经济价值高而在很多国家和地区进行人工养殖。20世纪70年代末中国台湾从国外引进，1983年人工繁殖成功，同年加州鲈鱼从中国台湾引进广东。目前国内养殖地区，主要集中在浙江湖州、江苏吴江、广东顺德南海等地。2017年全国加州鲈鱼养殖总产量约35~40万吨，其中广东产量约占全国总产量的60%，浙江、江苏占30%，两湖、河南等华中市场及川渝地区也在快速发展。加州鲈鱼养殖之所以火爆，很大程度上得益于高鱼价、高收益，因此养殖潜力极大！
加州鲈鱼养殖可根据饲料来源不同分为全程冰鲜投喂、全程配合饲料投喂和混合投喂3种模式。传统的养殖是以投喂冰鲜低值海水小杂鱼为主，全程冰鲜鱼养殖饲料系数一般在4.0左右，对水环境的影响较大；近年来兴起全程配合饲料投喂，饲料系数一般在1.0~1.3之间；还有混合投喂模式，一餐饲料一餐鱼，饲料占20~30%。近年来，加州鲈鱼饲料出现井喷式增长，总销量达15万吨，养殖用料比例已接近50%，预计未来3~5年内将全面替代冰鲜鱼。
加州鲈鱼配合饲料的应用，较好地解决了水体污染等问题，但同样带来了新的问题。在加州鲈鱼养殖中，用配合饲料投喂到0.3-0.4斤/尾的规格后，会出现加料困难、厌食、生长缓慢，同时还伴随着肝胆综合症（如肝肿大、肝发白、花肝、发白、发黄、坏死，胆囊变大、胆汁变黑或变淡等）、脂肪肝等导致抗病能力减弱的现象。加州鲈鱼的肝脏一旦发生病变，会造成鱼体免疫力下降、代谢紊乱、饵料消化率降低、吃料量减少，肠道问题出现，极易感染其他病原性疾病（如诺卡氏病、虹彩病毒等）而死亡率增高，给养殖户造成重大的经济损失。因此加州鲈鱼的肝肠问题亟待解决。
目前水产养殖业者在这个问题的处理上主要采用二种方式：一是应用抗生素等来消除病原、改善机体环境；二是在饵料中添加功能性的营养剂来保肝健肠。这些处理方式虽有一定的效果，但隐患和弊端较多。使用抗生素消除肠道中的致病菌，治标但不治本，会导致抗生素在组织中的残留、耐药性等问题出现，且2020年后我国禁止在饲料中添加抗生素。同样，在饲料中单一添加水飞蓟素、葡醛内酯等保肝药、胆汁酸等利胆药、乳酸菌等微生态制剂，因添加量及成本限制等因素，特别是无法解决单一添加剂与肠道菌群等相关性而达不到良好的性价效果，故没有解决根本问题。因此，在加州鲈鱼养殖尤其是采用配合饲料的养殖上急需开发一种集保肝健肠、促进消化、抑菌抗毒、防病抗病于一体的复合制剂，具有多效、安全、快速、吸收利用率高、价格适宜、使用方便等特点，从而提高加州鲈鱼的养殖效果。
发明内容
本发明的目的在于克服现有技术中的不足，提供一种加州鲈鱼养殖中保肝健肠的复合制剂及其制备方法，其可保护加州鲈鱼肝脏、提高肠道活力、促进消化。该制剂直接添加于饲料中投喂，可通过加州鲈鱼—肠壁修复－肠道微生态平衡－胆汁酸代谢轴来保肝健肠，有效地去除加州鲈鱼肝脏中的脂质累积，修复肠道壁，保证肠道中有益菌群的数量、拮抗病毒和细菌的侵染，促进消化，减轻病害的发生，从而达到提高养殖产量、质量和效益的目的。
作为本发明的目的之一，一种加州鲈鱼养殖中保肝健肠的复合制剂，配方比例按重量份计如下：胆汁酸0.1~10份，月桂酸单甘油脂0.1~10份和微生物固体发酵物80.0~99.8份；将上述原料混合均匀即得加州鲈鱼养殖中保肝健肠的复合制剂。
进一步地，所述胆汁酸的有效含量大于90%；所述月桂酸单甘油脂为食品级。
作为本发明的另一目的，加州鲈鱼养殖中保肝健肠的复合制剂的制备方法，取胆汁酸0.1~10份，月桂酸单甘油脂0.1~10份和微生物固体发酵物80.0~99.8份，将上述三种物质在常温下混合均匀，即得加州鲈鱼养殖中保肝健肠的复合制剂。
进一步地，所述微生物固体发酵物为首先将鼠李糖乳杆菌和丁酸梭状芽孢杆菌分别培养，然后按照1:3~5的比例混合，得到混合菌，对混合菌发酵得到微生物固体发酵物。
进一步地，所述微生物固体发酵物具体制备过程如下：
（1）鼠李糖乳杆菌的培养：从试管斜面上取一环鼠李糖乳杆菌（Lactobacillus rhamnosus），接种到100~300mL灭菌的MRS液体培养基中，于32~37℃静置培养28~36h；然后将其接入1~5L经灭菌的MRS液体培养基中，于32~37℃静置培养28~36h，制成菌种种子液备用；
（2）丁酸梭状芽孢杆菌的培养：从试管斜面上取一环丁酸梭状芽孢杆菌（Clostridium tyrobutyricum），接种到100~300mL灭菌的MRS液体培养基中，于32~37℃厌氧培养28~36h；然后将其接入1~5L经灭菌的MRS液体培养基中，于32~37℃静置培养28~36h，制成菌种种子液备用；
（3）混合菌的组合：取步骤（1）所得鼠李糖乳杆菌和步骤（2）所得丁酸梭状芽孢杆菌，按鼠李糖乳杆菌：丁酸梭状芽孢杆菌菌液体积比为1:3~5的比例混合后得到混合菌，放入经灭菌的25L桶中备用；
（4）微生物固体发酵物的培养：在25kg的单向透气发酵袋中加入重量为15~20kg的经100℃灭菌15 min后冷却备用的固体发酵培养基，继续加入步骤（3）所得混合菌3~5L及无菌纯水1~5L，搅拌均匀，于32~37 ℃恒温培养室中培养72~96h；将发酵物取出，40~60℃低温烘干，粉碎至80~100目，即得到微生物固体发酵物。
进一步地，所述的MRS液体培养基配比为：牛肉膏10 g·L-1，蛋白胨10 g·L-1，酵母膏5 g·L-1，葡萄糖 5 g·L-1，柠檬酸二胺2 g·L-1，吐温80 1 g·L-1，乙酸钠5 g·L-1，磷酸氢二钾2 g·L-1，硫酸镁0.2 g·L-1、硫酸锰0.05 g·L-1，碳酸钙20 g·L-1；调节pH 6.5左右，经121℃灭菌15 min后冷却备用。
进一步地，步骤（1）和步骤（2）中所得菌液均培养至活菌数≥108 CFU·mL-1。
进一步地，步骤（4）中停止发酵时，发酵物菌含量≥10８CFU·g-1、水分含量≤20%。
进一步地，步骤（4）中采用的固体发酵培养基按重量份数计配方如下：粗蛋白含量≥15%的麸皮30~50份；粗蛋白含量≥15%的次粉5~20份；米糠粉5~15份；杜仲叶5~12份；水飞蓟果实5~10份；硫酸镁0.1~1份；磷酸二氢钾0.1~1份；于室温下粉碎至80~100目，混合均匀，于烘箱中100 ℃灭菌15 min，冷却后备用。
进一步地，所述鼠李糖乳杆菌（Lactobacillus rhamnosus）具体为CGMCC 1.12734CGMCC 1.3724或ATCC 7469。
所述环丁酸梭状芽孢杆菌（Clostridium tyrobutyricum，具体为CICC 24498。
进一步地，所述的单向透气发酵袋为常规设备，在市场上购买，无任何特殊要求，采用通常的加工方法。
进一步地，所述的粉碎机为常规设备，在市场上购买，无任何特殊要求，采用通常的加工方法。
作为本发明的另一种目的，加州鲈鱼养殖中保肝健肠的复合制剂的应用：每100kg饲料中添加0.5-1.5kg加州鲈鱼养殖中保肝健肠的复合制剂，根据加州鲈鱼发育程度连用5-15天。
本发明中各组分的作用原理如下：
（1）丁酸梭状芽孢杆菌：丁酸梭状芽孢杆菌（Clostridium butyricum）属于芽孢杆菌科，梭菌属，革兰氏阳性，有芽孢，孢子卵圆，偏心或次端生，可抵抗不良环境，是一种专性厌氧的革兰氏阳性芽孢杆菌。其两端钝圆，中间部分轻度膨胀，细菌呈直杆状或稍有弯曲，单个或成对，短链，偶见有丝状菌体，周身鞭毛，能运动。孢子卵圆，偏心或次端生。革兰氏染色初培养的菌为阳性，菌稍长可变为阴性。在琼脂平板上形成白色或奶油色的不规则圆形菌落，稍突，直径为1～3mm。不水解明胶，不消化血清蛋白，能够发酵葡萄糖、蔗糖、果糖、乳糖等碳水化合物产酸，一个显著的特征是产生淀粉酶，水解淀粉但不水解纤维素。水解淀粉和糖类的最终代谢产物为丁酸、醋酸和乳酸，还发现有少量的丙酸、甲酸。本发明利用其菌体本身及生长中释放的有效成份丁酸来修复肠道，促进肠道上皮组织细胞的再生，增强鼠李糖乳杆菌的定植；同时利用其不受胆汁酸的影响，平衡胆汁酸和肠道微生物之间的关系。
（2）鼠李糖乳杆菌：鼠李糖乳杆菌（Lactobacillus rhamnosus）为革兰阳性厌氧菌，无质粒；不能利用乳糖，但可代谢单糖；在厌氧情况下能很好生长，在有CO2存在的情况下也能生长。鼠李糖乳杆菌可产生少量醋酸和大量乳酸，在LBS番茄汁琼脂和MRS琼脂培养基中生长呈现特定的形态学特征，如大的、奶油白色、不透明菌落，且散发奶油味。鼠李糖乳杆菌从属于乳杆菌属，是机体正常菌群之一，肠道黏着率高，定植能力强，并具有高效降胆固醇，促进细胞分裂，可起到调节肠道菌群、预防和治疗腹泻、排除毒素、提高机体免疫力及抗癌等重要的生理保健功能。本发明利用其生长代谢脂质，减轻脂质在肝脏中的累积，并利用其与丁酸梭菌的协同，特别是与胆汁酸的良性共存，抑制机体中的病原微生物，促进肠道平衡，提高摄食率。
（3）月桂酸单甘油酯：月桂酸单甘油酯又名十二酸单甘油酯，是由月桂酸和甘油直接酯化合成，外观一般为鳞片状或油状、白色或浅黄色的细粒状结晶。既是优良的乳化剂，又是安全高效的抗病毒剂，且不受pH限制，在中性或微碱性条件下，仍有较好的效果，可抑制HIV病毒、细胞巨化病毒、疱疹病毒、感冒病毒等。本发明利用其对病毒的拮抗作用来提高加州鲈对机体内环境中病毒侵染的抵抗能力。
（4）胆汁酸：胆汁酸是胆汁的重要成分，在脂肪代谢中起着重要作用。胆汁酸主要存在于肠肝循环系统并通过再循环起一定的保护作用。胆汁酸可以激活脂肪酶，促进脂肪的乳化、消化和吸收，提高动物对饲料中的脂肪的利用和转化率，降低饵料系数。胆汁酸可以加速脂肪转化成脂肪酸从肝脏输出到肌肉组织中，减少脂肪在肝脏和腹腔的过度蓄积，预防动物脂肪肝。胆汁酸可以通过肠-肝循环促进肝脏分泌胆汁，在胆汁分泌的过程中结合霉菌毒素、细菌内毒素等并将它们排出肝脏和肠道，达到畅通胆道、保肝排毒的作用。但是单纯使用胆汁酸一方面会破坏肠道微生物的定植，另一方面也会被某些种类的微生物分解。本发明利用胆汁酸加快对脂肪的代谢，保护肝脏，另一方面使其与相互没有负面影响的丁酸梭菌和鼠李糖乳杆菌的共存，在保肝的同时护肠。
（5）杜仲叶：植物杜仲的叶子。杜仲叶面呈椭圆形或卵形，长7~15cm，宽3.5~7cm。表面黄绿色或黄褐色，微有光泽。先端渐尖，基部圆形成广楔形，边缘有锯齿，具短叶柄。质脆，搓之易碎，折断面有少量银白色橡胶丝相连。气味，味微苦。杜仲叶的活性成分包括黄酮类、环烯醚萜类、苯丙素类、木脂素类、多糖类以及杜仲橡胶等。主要药理作用为降血压、降血脂、降血糖、抗炎抗病毒、抗疲劳、强筋健骨、抗衰老等。目前使用的都是杜仲叶的提取物，价格高。本发明利用其作为固体培养基质，利用微生物发酵将其生理活性物质转入发酵物中，成本低廉，起到降低脂质累积、提高免疫力的功效。
（6）水飞蓟果实：为菊科植物水飞蓟的干燥成熟果实，秋季果实成熟时采收果序，晒干，打下果实，除去杂质，晒干。其性味苦凉，有清热解毒，疏肝利胆之功效。水飞蓟果实的主要药用成份为水飞蓟素，具保护肝脏细胞免受毒性物质侵害，尤其是酒精及环境污染物（农药、重金属等）入侵损害肝脏；具有强力的抗氧化功能，能保护肝脏细胞免受自由基破坏，效力远胜于维生素E；促进蛋白质的合成，加快制造新的肝脏细胞，或令已受损的肝脏细胞自行修复。水飞蓟素目前已商品化，但成本较高。而水飞蓟中国各地均有种植，采收方便。本发明利用其作为固体培养基质，利用微生物发酵将其生理活性物质转入发酵物中，成本低廉，起到保肝抗氧化、修复受损肝脏组织的功效。
本发明的有益效果：本发明以富含生理活性产物的杜仲叶、水飞蓟果实为基础，配以麸皮、次粉、米糠和无机盐等组成固体发酵物料，利用丁酸梭状芽孢杆菌和鼠李糖乳杆菌这2株具不同性状和生态活性的微生物菌株进行混合发酵，生成含较高活菌数、丁酸、乳酸、绿原酸和水飞蓟素的混合发酵产物，将其低温烘干粉碎后再按一定比例与月桂酸单甘油脂和胆汁酸混合，经包装形成保护加州鲈鱼肝脏和肠道健康的复合制剂。该制剂集抑制病原、修复肠道、提高肠道活力、促进消化、保肝护肝、防病促长等多功能于一体，直接添加于饲料中投喂，使用量小，每100kg饲料中仅需添加1kg左右，保存期长、活性高、使用方便；使用后可通过加州鲈鱼—肠壁修复－肠道微生态平衡－胆汁酸代谢轴来保肝健肠，有效地去除加州鲈鱼肝脏中的脂质累积，修复肠道壁，保证肠道中有益菌群的数量、拮抗病毒和细菌的侵染，促进消化，减轻病害的发生，提高养殖产量和质量。
具体实施方式
下述的单向透气发酵袋、粉碎机、混合机、包装机等均为常规设备，在市场上购买，无任何特殊要求，采用通常的加工方法。本发明所采用的物料来源方便，均可在市场上购买。
以下实施例中的所述鼠李糖乳杆菌（Lactobacillus rhamnosus）具体为CGMCC1.12734 CGMCC 1.3724或ATCC 7469。
下面本发明将结合实施例作进一步描述：
实施例1 一种加州鲈鱼养殖中保肝健肠的复合制剂，其组份比例按重量份数计：
取胆汁酸（有效含量90%）6份，月桂酸单甘油脂（食品级）8份，微生物固体发酵物86份。将以上原料组份按比例称重后在常温下混合均匀、分装，最后包装入库。
所述的微生物固体发酵物采用以下工艺步骤：
（1）鼠李糖乳杆菌的培养：从试管斜面上取一环鼠李糖乳杆菌（Lactobacillus rhamnosus，CGMCC 1.12734，由中国普通微生物菌种保藏管理中心提供）菌苔，接种到150mL灭菌的MRS液体培养基中，于35 ℃静置培养36 h。然后将其接入2L经灭菌的MRS液体培养基中，于35℃静置培养36h，制成菌种种子液备用。此时菌液的活菌数≥108 CFU·mL-1。
所述的MRS液体培养基为，牛肉膏10 g·L-1，蛋白胨10 g·L-1，酵母膏5 g·L-1，葡萄糖 5 g·L-1，柠檬酸二胺2 g·L-1，吐温80 1 g·L-1，乙酸钠5 g·L-1，磷酸氢二钾2 g·L-1，硫酸镁0.2 g·L-1、硫酸锰0.05 g·L-1，碳酸钙20 g·L-1，调节pH 6.5左右，经121℃灭菌15 min后冷却备用。
（2）丁酸梭状芽孢杆菌的培养：从试管斜面上取一环丁酸梭状芽孢杆菌（Clostridium tyrobutyricum，CICC 24498，由中国工业微生物菌种保藏管理中心提供）菌苔，接种到150 mL灭菌的MRS液体培养基中，于37 ℃厌氧培养32 h。然后将其接入2 L经灭菌的MRS液体培养基中，于37 ℃静置培养32 h，制成菌种种子液备用。此时菌液的活菌数≥108 CFU·mL-1。
（3）混合菌的组合：取上述培养至活菌浓度≥108 CFU·mL-1的丁酸梭状芽孢杆菌和鼠李糖乳杆菌，按3:1的比例混合后放入经灭菌的25 L桶中备用。
（4）微生物固体发酵物的培养：在25kg的单向透气发酵袋中加入重量为20kg的固体发酵培养物料（经100℃灭菌15min后冷却备用），将上述混合菌种5L及无菌纯水5L加入固体培养物料，搅拌均匀，于35 ℃恒温培养室中培养72h，待发酵物菌含量≥10８CFU·g-1、水分含量≤20%时停止培养。将发酵物取出，50℃低温烘干，粉碎至90目备用。
所述的固体发酵培养物料，其组份比例按重量份数计：麸皮（粗蛋白含量≥15%）46.5份，次粉（粗蛋白含量≥15%）18份，米糠粉12份，杜仲叶12份，水飞蓟果实10份，硫酸镁0.5份，磷酸二氢钾1份，于室温下粉碎至100目，混合均匀，于烘箱中100℃灭菌15min，冷却后备用。
实施例2：一种加州鲈鱼养殖中保肝健肠的复合制剂，其组份比例按重量份数计：
取胆汁酸（有效含量90%）7份，月桂酸单甘油脂（食品级）8份，微生物固体发酵物85份。将以上原料组份按比例称重后在常温下混合均匀、分装，最后包装入库。
所述的微生物固体发酵物采用以下工艺步骤：
（1）鼠李糖乳杆菌的培养：从试管斜面上取一环鼠李糖乳杆菌（Lactobacillus rhamnosus，CGMCC 1.3724，由中国普通微生物菌种保藏管理中心提供）菌苔，接种到200 mL灭菌的MRS液体培养基中，于36℃静置培养32 h。然后将其接入3L经灭菌的MRS液体培养基中，于36℃静置培养32h，制成菌种种子液备用。此时菌液的活菌数≥108 CFU·mL-1。
所述的MRS液体培养基为，牛肉膏10 g·L-1，蛋白胨10 g·L-1，酵母膏5 g·L-1，葡萄糖 5 g·L-1，柠檬酸二胺2 g·L-1，吐温80 1 g·L-1，乙酸钠5 g·L-1，磷酸氢二钾2 g·L-1，硫酸镁0.2 g·L-1、硫酸锰0.05 g·L-1，碳酸钙20 g·L-1，调节pH 6.5左右，经121℃灭菌15 min后冷却备用。
（2）丁酸梭状芽孢杆菌的培养：从试管斜面上取一环丁酸梭状芽孢杆菌（Clostridium tyrobutyricum，CICC 24498，由中国工业微生物菌种保藏管理中心提供）菌苔，接种到200mL灭菌的MRS液体培养基中，于36℃厌氧培养32h。然后将其接入3 L经灭菌的MRS液体培养基中，于36℃静置培养32h，制成菌种种子液备用。此时菌液的活菌数≥108 CFU·mL-1。
（3）混合菌的组合：取上述培养至活菌浓度≥108 CFU·mL-1的丁酸梭状芽孢杆菌和鼠李糖乳杆菌，按4:1的比例混合后放入经灭菌的25L桶中备用。
（4）微生物固体发酵物的培养：在25kg的单向透气发酵袋中加入重量为18 kg的固体发酵培养物料（经100℃灭菌15 min后冷却备用），将上述混合菌种5L及无菌纯水4L加入固体培养物料，搅拌均匀，于36 ℃恒温培养室中培养75 h，待发酵物菌含量≥10８CFU·g-1、水分含量≤20%时停止培养。将发酵物取出，48℃低温烘干，粉碎至100目备用。
所述的固体发酵培养物料，其组份比例按重量份数计：麸皮（粗蛋白含量≥15%）50份，次粉（粗蛋白含量≥15%）16.2份，米糠粉12份，杜仲叶10份，水飞蓟果实10份，硫酸镁0.8份，磷酸二氢钾1份，于室温下粉碎至100目，混合均匀，于烘箱中100 ℃灭菌15 min，冷却后备用。
实施例3：一种应用于加州鲈鱼养殖中保肝健肠的复合制剂包含下列组份，其组份比例按重量份数计：
取胆汁酸（有效含量90%）6.2份，月桂酸单甘油脂（食品级）7.2份，微生物固体发酵物86.6份。将以上原料组份按比例称重后在常温下混合均匀、分装，最后包装入库。
所述的微生物固体发酵物采用以下工艺步骤：
（1）鼠李糖乳杆菌的培养：从试管斜面上取一环鼠李糖乳杆菌（Lactobacillus rhamnosus，ATCC 7469，由中国普通微生物菌种保藏管理中心提供）菌苔，接种到100 mL灭菌的MRS液体培养基中，于34 ℃静置培养35h。然后将其接入1 L经灭菌的MRS液体培养基中，于34℃静置培养35h，制成菌种种子液备用。此时菌液的活菌数≥108 CFU·mL-1。
所述的MRS液体培养基为，牛肉膏10 g·L-1，蛋白胨10 g·L-1，酵母膏5 g·L-1，葡萄糖 5 g·L-1，柠檬酸二胺2 g·L-1，吐温80 1 g·L-1，乙酸钠5 g·L-1，磷酸氢二钾2 g·L-1，硫酸镁0.2 g·L-1、硫酸锰0.05 g·L-1，碳酸钙20 g·L-1，调节pH 6.5左右，经121℃灭菌15 min后冷却备用。
（2）丁酸梭状芽孢杆菌的培养：从试管斜面上取一环丁酸梭状芽孢杆菌（Clostridium tyrobutyricum，CICC 24498，由中国工业微生物菌种保藏管理中心提供）菌苔，接种到100mL灭菌的MRS液体培养基中，于35℃厌氧培养35h。然后将其接入1 L经灭菌的MRS液体培养基中，于35℃静置培养35 h，制成菌种种子液备用。此时菌液的活菌数≥108 CFU·mL-1。
（3）混合菌的组合：取上述培养至活菌浓度≥108 CFU·mL-1的丁酸梭状芽孢杆菌和鼠李糖乳杆菌，按5:1的比例混合后放入经灭菌的25 L桶中备用。
（4）微生物固体发酵物的培养：在25kg的单向透气发酵袋中加入重量为15 kg的固体发酵培养物料（经100℃灭菌15 min后冷却备用），将上述混合菌种5L及无菌纯水3L加入固体培养物料，搅拌均匀，于35℃恒温培养室中培养80h，待发酵物菌含量≥10８CFU·g-1、水分含量≤20%时停止培养。将发酵物取出，55℃低温烘干，粉碎至80目备用。
所述的固体发酵培养物料，其组份比例按重量份数计：麸皮（粗蛋白含量≥15%）49份，次粉（粗蛋白含量≥15%）15份，米糠粉12.5份，杜仲叶12份，水飞蓟果实9.5份，硫酸镁1份，磷酸二氢钾1份，于室温下粉碎至80目，混合均匀，于烘箱中100℃灭菌15 min，冷却后备用。
应用实施例1
江苏吴江地区的加州鲈鱼养殖池塘，面积20亩，水深2.0米，全程使用配合饲料投饲，因饲料含高蛋白、高油脂、高能量，加州鲈鱼长期摄食这样的三高饲料后诱发脂肪在肝脏和腹腔的过度蓄积，形成脂肪肝，导致鱼的肝脏和消化系统负担太重，引发肠道和肝脏病变，出现肝胆综合症，引发鱼类不吃食、部分生长受限并有一部分死亡。
将实施例1制备所得加州鲈鱼养殖中保肝健肠的复合制剂应用于江苏吴江地区的加州鲈鱼养殖。用量为100kg饲料中添加1kg，连用5天。用后3天鱼类吃食恢复，5天后鱼类活动恢复正常，10天后脂肪肝现象减轻，肝体重比下降。
应用实施例2
应用于浙江湖州地区的加州鲈鱼养殖：浙江湖州地区的加州鲈鱼养殖池塘，面积15亩，水深2.5米，全程使用配合饲料投饲，因饲料含高蛋白、高油脂、高能量，加州鲈鱼长期摄食这样的三高饲料后诱发脂肪在肝脏和腹腔的过度蓄积，形成脂肪肝，导致鱼的肝脏和消化系统负担太重，引发肠道和肝脏病变，出现肝胆综合症，引发鱼类不吃食、部分生长受限并有一部分死亡。
将实施例2制备所得加州鲈鱼养殖中保肝健肠的复合制剂应用于江苏吴江地区的加州鲈鱼养殖。用量为100kg饲料中添加0.8kg，连用7天。用后3天鱼类吃食恢复，6天后鱼类活动恢复正常，12天后脂肪肝现象减轻，肝体重比下降。
应用实施例3
应用于江苏南京地区的加州鲈鱼养殖：江苏南京地区的加州鲈鱼养殖池塘，面积18亩，水深2.3米，全程使用配合饲料投饲，因饲料含高蛋白、高油脂、高能量，加州鲈鱼长期摄食这样的三高饲料后诱发脂肪在肝脏和腹腔的过度蓄积，形成脂肪肝，导致鱼的肝脏和消化系统负担太重，引发肠道和肝脏病变，出现肝胆综合症，引发鱼类不吃食、部分生长受限并有一部分死亡。
将实施例3制备所得加州鲈鱼养殖中保肝健肠的复合制剂应用于江苏吴江地区的加州鲈鱼养殖。用量为100kg饲料中添加1.2kg，连用5天。用后3天鱼类吃食恢复，5天后鱼类活动恢复正常，10天后脂肪肝现象减轻，肝体重比下降。

Claims (10)

1.一种加州鲈鱼养殖中保肝健肠的复合制剂，其特征是配方比例按重量份计如下：胆汁酸0.1~10份，月桂酸单甘油脂0.1~10份和微生物固体发酵物80.0~99.8份；将上述原料混合均匀即得加州鲈鱼养殖中保肝健肠的复合制剂。
2.如权利要求1所述加州鲈鱼养殖中保肝健肠的复合制剂，其特征是：所述胆汁酸的有效含量大于90%；所述月桂酸单甘油脂为食品级。
3.加州鲈鱼养殖中保肝健肠的复合制剂的制备方法，其特征是：取胆汁酸0.1~10份，月桂酸单甘油脂0.1~10份和微生物固体发酵物80.0~99.8份，将上述三种物质在常温下混合均匀，即得加州鲈鱼养殖中保肝健肠的复合制剂。
4.如权利要求3所述加州鲈鱼养殖中保肝健肠的复合制剂的制备方法，其特征是：所述微生物固体发酵物为首先将鼠李糖乳杆菌和丁酸梭状芽孢杆菌分别培养，然后按照1:3~5的比例混合，得到混合菌，对混合菌发酵得到微生物固体发酵物。
5.如权利要求4所述加州鲈鱼养殖中保肝健肠的复合制剂的制备方法，其特征是所述微生物固体发酵物具体制备过程如下：
（1）鼠李糖乳杆菌的培养：从试管斜面上取一环鼠李糖乳杆菌（Lactobacillus rhamnosus），接种到100~300mL灭菌的MRS液体培养基中，于32~37℃静置培养28~36h；然后将其接入1~5L经灭菌的MRS液体培养基中，于32~37℃静置培养28~36h，制成菌种种子液备用；
（2）丁酸梭状芽孢杆菌的培养：从试管斜面上取一环丁酸梭状芽孢杆菌（Clostridium tyrobutyricum），接种到100~300mL灭菌的MRS液体培养基中，于32~37℃厌氧培养28~36h；然后将其接入1~5L经灭菌的MRS液体培养基中，于32~37℃静置培养28~36h，制成菌种种子液备用；
（3）混合菌的组合：取步骤（1）所得鼠李糖乳杆菌和步骤（2）所得丁酸梭状芽孢杆菌，按鼠李糖乳杆菌：丁酸梭状芽孢杆菌菌液体积比为1:3~5的比例混合后得到混合菌，放入经灭菌的25L桶中备用；
（4）微生物固体发酵物的培养：在25kg的单向透气发酵袋中加入重量为15~20kg的经100℃灭菌15 min后冷却备用的固体发酵培养基，继续加入步骤（3）所得混合菌3~5L及无菌纯水1~5L，搅拌均匀，于32~37 ℃恒温培养室中培养72~96h；将发酵物取出，40~60℃低温烘干，粉碎至80~100目，即得到微生物固体发酵物。
6.如权利要求5所述加州鲈鱼养殖中保肝健肠的复合制剂的制备方法，其特征是所述的MRS液体培养基配比为：牛肉膏10 g·L-1，蛋白胨10 g·L-1，酵母膏5 g·L-1，葡萄糖 5g·L-1，柠檬酸二胺2 g·L-1，吐温80 1 g·L-1，乙酸钠5 g·L-1，磷酸氢二钾2 g·L-1，硫酸镁0.2 g·L-1、硫酸锰0.05 g·L-1，碳酸钙20 g·L-1；调节pH 6.5左右，经121℃灭菌15 min后冷却备用。
7.如权利要求5所述加州鲈鱼养殖中保肝健肠的复合制剂的制备方法，其特征是：步骤（1）和步骤（2）中所得菌液均培养至活菌数≥108 CFU·mL-1。
8.如权利要求5所述加州鲈鱼养殖中保肝健肠的复合制剂的制备方法，其特征是：步骤（4）中停止发酵时，发酵物菌含量≥10８ CFU·g-1、水分含量≤20%。
9.如权利要求5所述加州鲈鱼养殖中保肝健肠的复合制剂的制备方法，其特征是：步骤（4）中采用的固体发酵培养基按重量份数计配方如下：粗蛋白含量≥15%的麸皮30~50份；粗蛋白含量≥15%的次粉5~20份；米糠粉5~15份；杜仲叶5~12份；水飞蓟果实5~10份；硫酸镁0.1~1份；磷酸二氢钾0.1~1份；于室温下粉碎至80~100目，混合均匀，于烘箱中100 ℃灭菌15 min，冷却后备用。
10.如权利要求5所述加州鲈鱼养殖中保肝健肠的复合制剂的制备方法，其特征是：所述鼠李糖乳杆菌（Lactobacillus rhamnosus）具体为CGMCC 1.12734 CGMCC 1.3724或ATCC7469。
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