CN110679949A - 一种减肥组合物及其制备方法 - Google Patents
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Abstract
本发明提供了一种减肥组合物及其制备方法，其中，每份减肥组合物的原料包括：40亿‑160亿数量个数的灭活AKK菌，20亿‑100亿数量个数的纳豆菌，10亿‑60亿数量个数的罗伊氏乳杆菌，5g‑20g重量的益生元。本发明还公开了一种减肥组合物的制备方法，主要步骤包括制备灭活AKK菌、纳豆菌的培养、罗伊氏乳杆菌的培养、减肥组合物的真空冷冻干燥、冻干粉粉碎、称重、制粒、包装。本发明采用多种减肥机制，加强组合物的减肥效果，克服了以往减肥产品减肥作用机制单一，减肥效果不佳的弊端；本发明提供的减肥组合物，每份重量小，产品口味好，不影响使用人员的日常饮食习惯，避免了服用一般减肥产品常出现的营养不良，免疫力下降，后期反弹，正常代谢机能受影响等现象。
Description
技术领域
本发明涉及保健制品领域，特别涉及一种减肥组合物及其制备方法。
背景技术
肥胖症是一种人体进食热量多于消耗量，以体内脂肪积聚过多而而造成超过标准体重的病症。近年来，随着我国人民生活水平的不断提高，我国人体超重率和肥胖率均持续上升，成年人超重率上升到30%左右，肥胖率上升到12%左右；儿童和青少年超重率上升到10%左右，肥胖率上升到6.4%左右。肥胖不仅导致形体改变¸影响日常生活质量¸甚至还会影响社交，造成较大的心里压力；肥胖症还会累计心血管、呼吸、骨骼、肌肉、内分泌、生殖等系统正常功能，进而引起高血压、糖尿病、冠心病、高脂血症、睡眠呼吸暂停、抑郁症等疾病，因此采取适当合理的减肥措施¸避免并发症的发生及进展势在必行。
目前常用的减肥方法为：运动减肥¸饮食节制减肥¸药物减肥和保健制品减肥。运动减肥方法综合效果最好，但需要较多的运动时间，不易长期坚持；饮食节制减肥方法简单易行，但会伴随一系列的副作用,如营养不良、免疫力下降以及胆结石等；药物减肥方法效果明显，但长期使用会扰乱人体正常的代谢功能，而且停药之后易反弹；保健制品减肥毒副作用较小，但普遍存在减肥机制单一，疗效缓慢，减肥机理不明确的现象，同时目前减肥保健品市场滥加药物现象严重¸良莠不齐¸鱼目混珠，对人民群众的生命健康造成了潜在威胁。
发明内容
本发明为了弥补现有技术的不足，提供了一种减肥组合物及其制备方法。
本发明是通过如下技术方案实现的：一种减肥组合物，每份减肥组合物的原料包括：40亿-160亿数量个数的灭活AKK菌，20亿-100亿数量个数的纳豆菌，10亿-60亿数量个数的罗伊氏乳杆菌，5g-20g重量的益生元。
进一步地，每份减肥组合物的原料包括：80亿-120亿数量个数的灭活AKK菌，30亿-60亿数量个数的纳豆菌，20亿-40亿数量个数的罗伊氏乳杆菌，8g-15g重量的益生元。
进一步地，所述益生元包括：菊粉、低聚果糖、低聚半乳糖、乳果糖中的一种或多种。
本发明提出的一种减肥组合物的制备方法，包括以下步骤：
（1）将AKK菌以4%接种量接入发酵罐中，在厌氧条件下培养24h；发酵液离心收集菌体，菌体用去离子水重悬，灭活后即得灭活AKK菌；
（2）大豆放入去离子水中浸泡、蒸熟、降温后，接种纳豆菌后37℃下进行固态培养20h，用去离子水对纳豆进行洗脱，收集洗脱液，得到纳豆菌液；
（3）将罗伊氏乳杆菌以2%-5%接种量接入发酵罐中，厌氧条件下培养16-24h，离心收集菌体，菌体用去离子水重悬，得到罗伊氏乳杆菌液；
（4）检测培养得到的AKK菌、纳豆菌液和罗伊氏乳杆菌液的菌体浓度；
（5）将灭活AKK菌、纳豆菌液、罗伊氏乳杆菌液、益生元溶液分别计量后进行混合，搅拌均匀，然后真空冷冻干燥；
（6）将步骤（5）得到的冻干粉粉碎、称重、制粒、包装。
进一步地，步骤（1）中灭菌方法为巴氏灭菌法、机械破碎法中的一种。
进一步地，所述机械破碎法包括超声波破碎法，高速剪切法，高压均质法。
进一步地，所述巴氏灭菌法的灭菌温度为68-70℃，灭菌时间为30min。
进一步地，步骤（2）中所述大豆和浸泡去离子水的质量比为1:4，浸泡时间为16-24h，蒸煮温度为121℃，蒸熟时间为20-30min。
进一步地，步骤（1）和步骤（3）的培养温度为37℃，罐压0.02-0.05MPa，厌氧培养24h，全程保持搅拌转速100转/分钟，用氨水控制PH 6.9-7.1。
进一步地，步骤（6）中每包11.2-12.3g。
与现有技术相比，本发明的有益之处为：
1、本发明采用的AKK（Akkermansia muciniphila）菌为革兰氏厌氧型球菌，是一类栖息于人类大肠粘膜上的菌群，外膜分离出的Amuc-1100蛋白，在巴氏消毒中保持稳定，其以Toll样受体2为作用靶点，可调节肠道内黏液厚度及维持肠道屏障完整性；纳豆中粘液物质成分为聚谷氨酸，对食物成分具有容纳包裹作用，可延缓肠道对能量物质的吸收，并且增加饱腹感；纳豆中含有的氨基酸诱导体成份能使小肠中的α-葡萄糖苷酶活力下降；纳豆粘液中还含有丰富的营养成分和纳豆菌；罗伊氏乳杆菌对肠道的粘附性好，可以形成一层强有力的生物屏障，阻止病原微生物的侵染。
2、本发明采用多种减肥机制，加强组合物的减肥效果，克服了以往减肥产品减肥作用机制单一，减肥效果不佳的弊端。
3、利用肠道粘液层的修复和强化，改善了肠道益生菌栖息环境，增大了其栖息空间；肠道黏液层，罗伊氏乳杆菌，纳豆菌，AKK菌形成的生物屏障，对能量物质，细菌毒素的吸收进行了多重抑制；纳豆中粘液物质成分为聚谷氨酸，聚谷氨酸良好的水溶胶性能，可以减缓能量物质的消化吸收，增加饱腹感，控制食欲；通过纳豆中含有的氨基酸诱导体成份抑制α-葡萄糖苷酶的活性，减少了淀粉类物质的吸收利用；益生元激发肠道益生菌活力，大幅度提高肠道益生菌的丰度，形成对能量物质的竞争性代谢消耗。
4、本发明提供的减肥组合物，每份重量小，产品口味好，不影响使用人员的日常饮食习惯，避免了服用市场上一般减肥产品常出现的营养不良，免疫力下降，后期反弹，正常代谢机能受影响等现象的发生。
附图说明
下面结合附图对本发明作进一步的说明。
图1为本发明减肥组合物对大鼠体重的影响，其中*p < 0.05，**p < 0.01。
具体实施方式
为使本发明实施例的目的、技术方案和优点更加清楚，下面将对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述。实施例中未注明具体条件者，按照常规条件或制造商建议的条件进行。所用试剂或仪器未注明生产厂商者，均为可以通过市售购买获得的常规产品。
下面对本发明实施例的一种减肥组合物及其制备方法进行具体说明。
实施案例1
一、制备改良MRSC培养基
向30L全自动发酵罐中加入如下原料：蛋白胨150g,牛肉膏150g,酵母膏75g，无水乙酸钠72g,柠檬酸二铵30g,吐温-80 1.5g,硫酸镁8.7g,硫酸锰4.2g,磷酸氢二钾30g,去离子水8L,液碱调PH 6.2-6.4。121℃灭菌20分钟，降温至37℃。然后全自动向发酵罐中加入经过单独灭菌的50%葡萄糖溶液0.3L，加入经过单独灭菌的西红柿汁1.5L，加入经无菌过滤处理的15%浓度的L-半胱氨酸溶液100ml，发酵培养液最终体积在15L。
二、制备灭活AKK菌
向装有15L改良MRSC培养基的全自动发酵罐中通入氮气进行空气置换，溶氧显示值为零且稳定后，停止置换。接入600mlAKK菌种子培养液，接种后继续通入氮气置换空气，溶氧显示值为零且稳定后，关闭排气阀，调整罐压在0.02MPa，37℃厌氧培养24h。全程保持搅拌转速100转/分钟，用氨水控制PH=7.0。
培养结束后用平板显微计数法检测上述培养得到的AKK菌体浓度，此时AKK菌体浓度为16.21亿/ml，培养液OD600=2.42。
取上述AKK菌体培养液2000ml，离心收集AKK菌体，用去离子水重悬至50ml,68-70℃灭菌30分钟，即得到本发明的灭活AKK菌菌液。灭活前的AKK菌菌液浓度为648亿/ml，离心速度为8000转/分钟。
三、纳豆菌的培养
取大豆500g，加入2000ml去离子水，室温下浸泡16h，浸泡结束，沥去水分，121℃蒸煮0.5h，降温至37℃，然后接入40ml纳豆菌培养液，拌匀后摊至3-5cm厚度，37℃培养20h。
培养结束后将上述培养的纳豆放入带滤网的离心机中离心，离心速度为2950转/分钟，之后向纳豆中分3次喷入300ml去离子水，收集全部粘稠离心液体314ml，即得到本发明的纳豆洗脱物，经平板显微计数法检测纳豆洗脱物中纳豆菌含量为6.67亿/ml。
四、罗伊氏乳杆菌的培养
向装有15L改良MRSC培养基的全自动发酵罐中通入氮气进行空气置换，溶氧显示值为零且稳定后，停止置换。接入500ml罗伊氏乳杆菌种子培养液，接种后继续通入氮气置换空气，溶氧显示值为零且稳定后，关闭排气阀，调整罐压在0.02MPa，37℃厌氧培养24h。全程保持搅拌转速100转/分钟，用氨水控制PH=7.0。
培养结束后用平板显微计数法检测上述培养得到的罗伊氏乳杆菌菌体浓度，此时罗伊氏乳杆菌浓度为37.45亿/ml，培养液OD600=4.86。
取上述培养液1000ml，离心收集罗伊氏乳杆菌菌液，离心速度为10000转/分钟，然后用去离子水重悬至50ml，即得到本发明的罗伊氏乳杆菌菌液，本罗伊氏乳杆菌菌液含菌量为749亿/ml。
五、减肥组合物的真空冷冻干燥
取灭活AKK菌菌液3.5g，纳豆洗脱物150ml，罗伊氏乳杆菌菌液0.84g，混合均匀，然后加入840ml浓度为25%的菊糖溶液，混合均匀，然后将该悬菌液放入30℃的恒温室中恒温30min进行预冻。
冷冻干燥前的预冻，将恒温30min的悬菌液分装于冻干盘中，然后放入冷冻干燥机的预冻室内在零下30℃-35℃的条件下预冻3小时，冻结后进行抽真空干燥。将预冻好的料盘放入真空干燥室开始抽真空干燥，干燥条件为：真空度为2-5帕，温度-45℃，干燥室温度28℃，干燥时间45小时。冻干完毕后收集冻干料用无菌粉碎机粉碎，获得冻干粉，重量为238.4g，之后将冻干粉制粒、分装、每份重量11.2-11.5g，即为本发明的减肥组合物。
实施案例2
一、制备改良MRSC培养基
向30L全自动发酵罐中加入如下原料：蛋白胨150g,牛肉膏150g,酵母膏75g，无水乙酸钠72g,柠檬酸二铵30g,吐温-80 1.5g,硫酸镁8.7g,硫酸锰4.2g,磷酸氢二钾30g,去离子水8L,液碱调PH 6.2-6.4。121℃灭菌20分钟，降温至37℃。然后全自动向发酵罐中加入经过单独灭菌的50%葡萄糖溶液0.3L，加入经过单独灭菌的西红柿汁1.5L，加入经无菌过滤处理的15%浓度的L-半胱氨酸溶液100ml，发酵培养液最终体积在15L。
二、制备灭活AKK菌
向装有15L改良MRSC培养基的全自动发酵罐中通入氮气进行空气置换，溶氧显示值为零且稳定后，停止置换。接入600mlAKK菌种子培养液，接种后继续通入氮气置换空气，溶氧显示值为零且稳定后，关闭排气阀，调整罐压在0.02MPa，37℃厌氧培养24h。全程保持搅拌转速100转/分钟，用氨水控制PH=7.0。
培养结束后用平板显微计数法检测上述培养得到的AKK菌体浓度，此时AKK菌体浓度为16.21亿/ml，培养液OD600=2.42。
取上述AKK菌体培养液2000ml，离心收集AKK菌体，用去离子水重悬至50ml,用超声破碎机破碎，即得到发明的灭活AKK菌菌液灭活前的AKK菌菌液浓度为648亿/ml，离心速度为10000转/分钟。
三、纳豆菌的培养
取大豆500g，加入2000ml去离子水，室温下浸泡16h，浸泡结束，沥去水分，121℃蒸煮0.5h，降温至37℃，然后接入40ml纳豆菌培养液，拌匀后摊至3-5cm厚度，37℃培养20h。
培养结束后将上述培养的纳豆放入带滤网的离心机中离心，离心速度为2950转/分钟，之后向纳豆中分3次喷入300ml去离子水，收集全部粘稠离心液体314ml，即得到本发明的纳豆洗脱物，经平板显微计数法检测纳豆洗脱物中纳豆菌含量为6.67亿/ml。
四、罗伊氏乳杆菌的培养
向装有15L改良MRSC培养基的全自动发酵罐中通入氮气进行空气置换，溶氧显示值为零且稳定后，停止置换。接入500ml罗伊氏乳杆菌种子培养液，接种后继续通入氮气置换空气，溶氧显示值为零且稳定后，关闭排气阀，调整罐压在0.02MPa，37℃厌氧培养24h。全程保持搅拌转速100转/分钟，用氨水控制PH=7.0。
培养结束后用平板显微计数法检测上述培养得到的罗伊氏乳杆菌菌体浓度，此时罗伊氏乳杆菌浓度为37.45亿/ml，培养液OD600=4.86。
取上述培养液1000ml，离心收集罗伊氏乳杆菌菌液，离心速度为10000转/分钟，然后用去离子水重悬至50ml，即得到本发明的罗伊氏乳杆菌菌液，本罗伊氏乳杆菌菌液含菌量为749亿/ml。
五、减肥组合物的真空冷冻干燥
取灭活AKK菌菌液3.6g，纳豆洗脱物150ml，罗伊氏乳杆菌菌液0.86g，混合均匀，然后加入900ml浓度为25%的乳果糖溶液，混合均匀，然后将该悬菌液放入30℃的恒温室中恒温30min进行预冻。
冷冻干燥前的预冻，将恒温30min的悬菌液分装于冻干盘中，然后放入冷冻干燥机的预冻室内在零下30℃-35℃的条件下预冻3小时，冻结后进行抽真空干燥。将预冻好的料盘放入真空干燥室开始抽真空干燥，干燥条件为：真空度为2-5帕，温度-45℃，干燥室温度28℃，干燥时间45小时。冻干完毕后收集冻干料用无菌粉碎机粉碎，获得冻干粉，重量为253.6g，之后将冻干粉压片、每片重量1.95-2.05g，每6片即为本发明减肥组合物的1份量。
实施案例3
动物分组与给药：
选取健康成年动物40只(雄性SD大鼠，170±20g)，普通维持饲料适应饲养7天，随机选取10只分别作为空白组。30只给予高脂模型饲料(10％蔗糖、12％猪油、10％蛋黄、 1％胆固醇、0.5％胆酸钠、66.5％基础饲料)1周后分组，按照实施案例1-2配置混悬液(按大鼠体重每kg等计量的给药，减肥组合物剂量为0.52g/kg)，实验动物按体重随机分组为模型组、实施案例1组、实施案例2组，每组10只。空白对照组、模型组灌胃给予同体积溶剂，即去离子水；其余各组分别灌胃给予相应的减肥组合物。空白对照组继续给予维持饲料，模型对照组及各实施案例组继续给予高脂模型饲料，每周称取体重，并按新体重调整灌胃剂量，给减肥组合物42天后测量大鼠体重,观察大鼠的健康程度，之后停止喂减肥组合物，30天后测量大鼠体重,观察大鼠的健康程度，各组大鼠自由饮水、摄食。
数据分析
所有实验数据以平均数±标准差表示，数据采用SPSS 16.0统计分析软件包进行统计学处理，组间比较采用单因素方差分析。设定检验水准为α＝0.05，P>0.05差异无显著性，P<0.05差异具有显著性。
实验结果
如图1所示，与空白对照组相比，模型组大鼠体重明显升高，实施案例1-2大鼠体重明显降低（P<0.05，n=10），减肥效果良好，实施案例1-2大鼠健康，各项机能反应良好，反应状况与空白对照组无异。
实施案例4
80名肥胖受试者，受试者平均体重90公斤，随机分为2组，包括实施例1，实施例2，分别服用实施例1-2的减肥组合物，每天11.5g，进行体重跟踪调查，分别于服用后的1、2、3个月测定各组平均体重，3个月后停止服用1、2、3个月，再次测定各组平均体重，统计每组减少的平均体重百分数，结果见表1。
表1表示各组减少的平均体重百分数统计结果
结果可见，本发明实施例1，实施例2减肥效果显著，停药之后没有出现明显的后期反弹现象。
本发明制备的减肥组合物减肥效果显著，随访1年未见反弹者，且对受试者没有任何副作用。
Claims (10)
1.一种减肥组合物，其特征在于：每份减肥组合物的原料包括：40亿-160亿数量个数的灭活AKK菌，20亿-100亿数量个数的纳豆菌，10亿-60亿数量个数的罗伊氏乳杆菌，5g-20g重量的益生元。
2.根据权利要求1所述的一种减肥组合物，其特征在于：所述每份减肥组合物的原料包括：80亿-120亿数量个数的灭活AKK菌，30亿-60亿数量个数的纳豆菌，20亿-40亿数量个数的罗伊氏乳杆菌，8g-15g重量的益生元。
3.根据权利要求1或2所述的一种减肥组合物，其特征在于：所述益生元包括：菊粉、低聚果糖、低聚半乳糖、乳果糖中的一种或多种。
4.根据权利要求1-3中任意一项所述的一种减肥组合物的制备方法，其特征在于：包括以下步骤：
（1）将AKK菌以4%接种量接入发酵罐中，在厌氧条件下培养24h；发酵液离心收集菌体，菌体用去离子水重悬，灭活后即得灭活AKK菌；
（2）大豆放入去离子水中浸泡、蒸熟、降温后，接种纳豆菌后37℃下进行固态培养20h，用去离子水对纳豆进行洗脱，收集洗脱液，得到纳豆菌液；
（3）将罗伊氏乳杆菌以2%-5%接种量接入发酵罐中，厌氧条件下培养16-24h，离心收集菌体，菌体用去离子水重悬，得到罗伊氏乳杆菌液；
（4）检测培养得到的AKK菌、纳豆菌液和罗伊氏乳杆菌液的菌体浓度；
（5）将灭活AKK菌、纳豆菌液、罗伊氏乳杆菌液、益生元溶液分别计量后进行混合，搅拌均匀，然后真空冷冻干燥；
（6）将步骤（5）得到的冻干粉粉碎、称重、制粒、包装。
5.根据权利要求4所述的一种减肥组合物的制备方法，其特征在于：所述步骤（1）中灭菌方法为巴氏灭菌法、机械破碎法中的一种。
6.根据权利要求5所述的一种减肥组合物的制备方法，其特征在于：机械破碎法包括超声波破碎法，高速剪切法，高压均质法。
7.根据权利要求5所述的一种减肥组合物的制备方法，其特征在于：所述巴氏灭菌法的灭菌温度为68-70℃，灭菌时间为30min。
8.根据权利要求4所述的一种减肥组合物的制备方法，其特征在于：所述步骤（2）中所述大豆和浸泡去离子水的质量比为1:4，浸泡时间为16-24h，蒸煮温度为121℃，蒸熟时间为20-30min。
9.根据权利要求4所述的一种减肥组合物的制备方法，其特征在于：所述步骤（1）和步骤（3）的培养温度为37℃，罐压0.02-0.05MPa，厌氧培养24h，全程保持搅拌转速100转/分钟，用氨水控制PH 6.9-7.1。
10.根据权利要求4所述的一种减肥组合物的制备方法，其特征在于：步骤（6）中每包11.2-12.3g。
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