CN110198947A - 线粒体质子离子载体的肝前药 - Google Patents

线粒体质子离子载体的肝前药 Download PDF

Info

Publication number
CN110198947A
CN110198947A CN201780083873.5A CN201780083873A CN110198947A CN 110198947 A CN110198947 A CN 110198947A CN 201780083873 A CN201780083873 A CN 201780083873A CN 110198947 A CN110198947 A CN 110198947A
Authority
CN
China
Prior art keywords
mixture
compound
formula
stirred
dcm
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Pending
Application number
CN201780083873.5A
Other languages
English (en)
Inventor
芒努斯·约阿基姆·汉松
埃斯基尔·埃尔梅尔
马修·艾伦·格雷戈里
史蒂文·詹姆斯·莫斯
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Niu Wei Pharmaceutical Co Ltd
Original Assignee
Niu Wei Pharmaceutical Co Ltd
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Niu Wei Pharmaceutical Co Ltd filed Critical Niu Wei Pharmaceutical Co Ltd
Publication of CN110198947A publication Critical patent/CN110198947A/zh
Pending legal-status Critical Current

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07F—ACYCLIC, CARBOCYCLIC OR HETEROCYCLIC COMPOUNDS CONTAINING ELEMENTS OTHER THAN CARBON, HYDROGEN, HALOGEN, OXYGEN, NITROGEN, SULFUR, SELENIUM OR TELLURIUM
    • C07F9/00—Compounds containing elements of Groups 5 or 15 of the Periodic System
    • C07F9/02—Phosphorus compounds
    • C07F9/06—Phosphorus compounds without P—C bonds
    • C07F9/22—Amides of acids of phosphorus
    • C07F9/24—Esteramides
    • C07F9/2454—Esteramides the amide moiety containing a substituent or a structure which is considered as characteristic
    • C07F9/2458—Esteramides the amide moiety containing a substituent or a structure which is considered as characteristic of aliphatic amines
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/16—Amides, e.g. hydroxamic acids
    • A61K31/165—Amides, e.g. hydroxamic acids having aromatic rings, e.g. colchicine, atenolol, progabide
    • A61K31/167—Amides, e.g. hydroxamic acids having aromatic rings, e.g. colchicine, atenolol, progabide having the nitrogen of a carboxamide group directly attached to the aromatic ring, e.g. lidocaine, paracetamol
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/66—Phosphorus compounds
    • A61K31/664—Amides of phosphorus acids
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
    • A61P1/16—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system for liver or gallbladder disorders, e.g. hepatoprotective agents, cholagogues, litholytics
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07F—ACYCLIC, CARBOCYCLIC OR HETEROCYCLIC COMPOUNDS CONTAINING ELEMENTS OTHER THAN CARBON, HYDROGEN, HALOGEN, OXYGEN, NITROGEN, SULFUR, SELENIUM OR TELLURIUM
    • C07F9/00—Compounds containing elements of Groups 5 or 15 of the Periodic System
    • C07F9/02—Phosphorus compounds
    • C07F9/06—Phosphorus compounds without P—C bonds
    • C07F9/22—Amides of acids of phosphorus
    • C07F9/24—Esteramides
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07F—ACYCLIC, CARBOCYCLIC OR HETEROCYCLIC COMPOUNDS CONTAINING ELEMENTS OTHER THAN CARBON, HYDROGEN, HALOGEN, OXYGEN, NITROGEN, SULFUR, SELENIUM OR TELLURIUM
    • C07F9/00—Compounds containing elements of Groups 5 or 15 of the Periodic System
    • C07F9/02—Phosphorus compounds
    • C07F9/06—Phosphorus compounds without P—C bonds
    • C07F9/22—Amides of acids of phosphorus
    • C07F9/24—Esteramides
    • C07F9/2404—Esteramides the ester moiety containing a substituent or a structure which is considered as characteristic
    • C07F9/242—Esteramides the ester moiety containing a substituent or a structure which is considered as characteristic of hydroxyaryl compounds
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07F—ACYCLIC, CARBOCYCLIC OR HETEROCYCLIC COMPOUNDS CONTAINING ELEMENTS OTHER THAN CARBON, HYDROGEN, HALOGEN, OXYGEN, NITROGEN, SULFUR, SELENIUM OR TELLURIUM
    • C07F9/00—Compounds containing elements of Groups 5 or 15 of the Periodic System
    • C07F9/02—Phosphorus compounds
    • C07F9/06—Phosphorus compounds without P—C bonds
    • C07F9/22—Amides of acids of phosphorus
    • C07F9/24—Esteramides
    • C07F9/2404—Esteramides the ester moiety containing a substituent or a structure which is considered as characteristic
    • C07F9/2433—Compounds containing the structure N-P(=X)n-X-acyl, N-P(=X)n-X-heteroatom, N-P(=X)n-X-CN (X = O, S, Se; n = 0, 1)
    • C07F9/2441—Compounds containing the structure N-P(=X)n-X-acyl, N-P(=X)n-X-heteroatom, N-P(=X)n-X-CN (X = O, S, Se; n = 0, 1) containing the structure N-P(=X)n-X-C(=X) (X = O, S, Se; n = 0, 1)
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07F—ACYCLIC, CARBOCYCLIC OR HETEROCYCLIC COMPOUNDS CONTAINING ELEMENTS OTHER THAN CARBON, HYDROGEN, HALOGEN, OXYGEN, NITROGEN, SULFUR, SELENIUM OR TELLURIUM
    • C07F9/00—Compounds containing elements of Groups 5 or 15 of the Periodic System
    • C07F9/02—Phosphorus compounds
    • C07F9/06—Phosphorus compounds without P—C bonds
    • C07F9/22—Amides of acids of phosphorus
    • C07F9/24—Esteramides
    • C07F9/2454—Esteramides the amide moiety containing a substituent or a structure which is considered as characteristic
    • C07F9/247—Esteramides the amide moiety containing a substituent or a structure which is considered as characteristic of aromatic amines (N-C aromatic linkage)
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07F—ACYCLIC, CARBOCYCLIC OR HETEROCYCLIC COMPOUNDS CONTAINING ELEMENTS OTHER THAN CARBON, HYDROGEN, HALOGEN, OXYGEN, NITROGEN, SULFUR, SELENIUM OR TELLURIUM
    • C07F9/00—Compounds containing elements of Groups 5 or 15 of the Periodic System
    • C07F9/02—Phosphorus compounds
    • C07F9/06—Phosphorus compounds without P—C bonds
    • C07F9/22—Amides of acids of phosphorus
    • C07F9/24—Esteramides
    • C07F9/2454—Esteramides the amide moiety containing a substituent or a structure which is considered as characteristic
    • C07F9/2479—Compounds containing the structure P(=X)n-N-acyl, P(=X)n-N-heteroatom, P(=X)n-N-CN (X = O, S, Se; n = 0, 1)
    • C07F9/2487—Compounds containing the structure P(=X)n-N-acyl, P(=X)n-N-heteroatom, P(=X)n-N-CN (X = O, S, Se; n = 0, 1) containing the structure P(=X)n-N-C(=X) (X = O, S, Se; n = 0, 1)

Abstract

本发明提供了新的线粒体质子离子载体的肝靶向前药。这些化合物在药物中具有效用，包括它们在治疗诸如NASH和NAFLD的疾病中的用途。

Description

线粒体质子离子载体的肝前药
技术领域
本发明提供了新的线粒体质子离子载体(mitochondrial proton ionophore)(质子载体)的肝脏代谢前药。这些化合物从肝脏中的无活性非解偶联形式切割以释放出能够引起温和线粒体解偶联的温和解偶联剂，具有治疗非酒精性脂肪性肝炎(NASH)和/或非酒精性脂肪肝病(NAFLD)的潜力。本发明还涉及它们在药物中的用途，特别是用于治疗非酒精性脂肪肝病(NAFLD)和非酒精性脂肪性肝炎(NASH)。本发明还涉及水杨酰苯胺在药物中的特定用途，特别是用于治疗非酒精性脂肪肝病(NAFLD)和非酒精性脂肪性肝炎(NASH)。
背景技术
非酒精性脂肪肝病(NAFLD)影响多达30％的世界人口，并且是向非酒精性脂肪性肝炎(NASH)发展的重要一步。然而，尝试用药物制剂降低NAFLD的发生率已经取得了有限的成功。
非酒精性脂肪肝病(NAFLD)是转诊至肝诊所的最常见原因，其进展形式，非酒精性脂肪性肝炎(NASH)，可导致肝硬化和终末期肝病。长期以来已知线粒体质子载体如二硝基苯酚(DNP)在临床前模型中促进NAFLD和NASH的体重减轻和影响标志物。然而，尽管它们有潜力，但由于它们的毒性，它们的发展受到限制。本研究的目的是探索一类新的肝靶向质子载体，用于体外解偶联活性和适合作为NAFLD和NASH的潜在治疗。
长期以来已知线粒体质子离子载体或解偶联剂如2,4二硝基苯酚(DNP)促进体重减轻。然而，安全问题导致它成为FDA禁用的首批药剂之一。20-50mg/kg体重的急性施用可能是致命的(Hsaio等人，2005Clin Toxicol(Phila).43(4):281-285)，主要急性毒性来自高热，通过肌肉组织解偶联(Simkins,1937J Am Med Assoc.108:2110–2117)。慢性毒性可包括白内障、骨髓、CNS和CVS副作用(公共卫生署，美国卫生与公众服务部(Public HealthService,U.S.Department of Health and Human Services)(1995)。“二硝基苯酚的毒理学概况(Toxicological Profile for Dinitrophenols)”。有毒物质和疾病登记处)(Bushke 1947,American Journal of Ophthalmology第30卷,第11期,1947年11月,第1356-1368页)。
饮用水中的两种DNP(Goldgof等人，2014J Biol Chem.2014年7月11日；289(28):19341-19350)和DNP的控释制剂已被证明具有治疗NAFLD和相关疾病的潜力。每日施用可逆转大鼠中的NAFLD、胰岛素抵抗、T2D、NASH和肝纤维化，但无可检测的毒性(Perry等人，2015Science.2015年3月13日；347(6227):1253-1256)。然而，这种治疗需要非常仔细的监测和剂量调整，以将DNP的血浆浓度维持在1-5uM的范围内并避免毒性。
其他解偶联剂也显示出前景，例如水杨酰水杨酸，其被认为独立于UCP1的刺激棕色脂肪组织呼吸(Smith等人，2016,糖尿病(Diabetes)2016年11月；65(11):3352-3361)。
还描述了DNP的简单醚前药(WO2015/031598)。
水杨酰苯胺，也称为2-羟基-N-苯基苯甲酰胺，用作局部抗真菌和杀真菌剂(US 2,485,339)。取代的水杨酰苯胺已显示具有解偶联活性(参见Terada 1990中的S13，环境健康展望(Environ Health Perspect)1990年7月；87:213-218)。然而，绝大多数的治疗开发(特别是作为抗蠕虫药)一直是取代的水杨酰苯胺(例如S13、氯硝柳胺、氯羟柳胺和碘醚柳胺)，其已被开发为抗蠕虫药物(Swan Jl S.Afr.vet.Ass.(1999)70(2):61-70)。
我们已经发现，通过磷酸酯前药化学可以产生有效的肝靶向释放的质子载体，其中裂解机制由在肝脏中显著更普遍的代谢酶触发。靶向质子载体部分和对肝脏的解偶联活性是有利的，这导致对肝脏代谢、NAFLD或NASH的积极作用，而不是其他器官中的活性，其可能导致毒性(例如高热)。
我们还发现水杨酰苯胺是一种有效的低毒性质子载体，具有合适的性质，并且具有治疗NASH和/或NAFLD、糖尿病和/或体重减轻的显著潜力。特别地，它具有高渗透性、口服生物利用度，并且在口服给药后是天然肝靶向的。这些性质对于治疗NAFLD或NASH的药剂都是有利的，特别是在聚焦暴露于靶器官和降低对其他器官的毒性方面。因此，在本发明的一些化合物中，水杨酰苯胺结构是结构的一部分。
此外，含有非硝基的质子载体部分可能是有利的，因为它们可以导致毒性降低，例如白内障发展的减少。
因此，需要提供质子离子载体的肝靶向前药，其具有改善的性质以治疗NAFLD和/或NASH。
发明内容
本发明描述了质子载体的肝靶向前药。它们在其给药状态(dosed state)下没有或具有有限的解偶联活性，但是被肝酶切割，例如在微粒体中发现的那些以产生活性解偶联剂。
因此，本发明化合物的一个优点是在给药状态下它们与肝代谢后释放的形式相比的降低的解偶联活性。
本发明化合物的另一个优点是它们具有改善的耐受性。
其他优点包括肝代谢增加和血浆或肌肉代谢减少。
本发明提供了式(I)的前药
式(I)
其中：
X和X’可独立地为NH或O
Y不存在，或是-CR3R4O-、-C(＝O)O-、或(X是苯基取代基，Z连接到O)
Y’不存在、-CR3R4O-、-C(＝O)O-、或(X’是苯基取代基，Z’连接到O)
Z是式(II)
Z’是CHR2’(C＝O)OR1’、Me、Et、iPr、Ph或式(II)
R1和R1’独立地为Me、Et、iPr、nPr、tBu、iBu、sBu或CH2CMe3
R2和R2’独立地为H、Me、Et、iPr、Ph、Bn
R3是H、Me、Et
R4是H、Me、Et
式(II)
其中：
R5是H、NO2或
R6是H、NO2、Cl、Br或I
R7是H、Me、Et、iPr、tBu、sBu、iBu、Cl、Br或I
R8是H、NO2、Cl、Br、C(CN)H(C6H4)-p-Cl
R9是H、Cl、OH或CH3
R10是H或Cl
R5和R6不能都是H；
当R6为Cl时，R5不能为H或NO2；
当Z’为CHR2’(C＝O)OR1’、Me、Et、iPr时，则Y’必须不存在；
当Z’为CHR2’(C＝O)OR1’时，则X’必须为NH；
当Z’是Me、Et或iPr时，则X’必须是O；
当Z是式II且R6是NO2时，则Y不能不存在
当Z’是式II且R6是NO2时，则Y’不能不存在
当Z为式II且R6为NO2且Z’为CHR2’(C＝O)OR1’时，则R2和R2’不能为H或Me；
或其药学上可接受的盐。
在一个实施方式中，Z和/或Z’是式(II)且R5是
在优选的实施方式中，Z和/或Z’是式(II)且R5是且R6、R7、R8、R9和R10都是H。
在优选的实施方式中，Z和/或Z’是式(II)且R5是且R6是Cl，R7是H或tBu，R8是Cl，R9是NO2且R10是H。
在一个实施方式中，Z’是CHR2’(C＝O)OR1’，且Z是式(II)，且R5是
在一个实施方式中，Z’是CHR2’(C＝O)OR1’，R1和R1’是iPr且R2和R2’是Me或Bn且Z是式(II)且R5是且R6、R7、R8、R9和R10都是H。
在一个实施方式中，Z’是CHR2’(C＝O)OR1’，R1和R1’是CH2tBu且R2和R2’是Me或Bn且Z是式(II)且R5是且R6、R7、R8、R9和R10都是H。
在一个实施方式中，Z’是CHR2’(C＝O)OR1’，R1和R1’是iPr且R2和R2’是Me或Bn且Z是式(II)且R5是且R6是Cl，R7是H或tBu，R8是Cl，R9是NO2，且R10是H。
在一个实施方式中，Z’是CHR2’(C＝O)OR1’，R1和R1’是CH2tBu且R2和R2’是Me或Bn且Z是式(II)且R5是且R6是Cl，R7是H或tBu，R8是Cl，R9是NO2，且R10是H。
合适的实施方式包括
化合物可选自以下：
或选自
根据本发明的化合物可以用于药物中以治疗疾病或紊乱，或者它们可以用于药物研究(medical research，医学研究)。该化合物可用于预防或治疗其中肝靶向线粒体解偶联有用的紊乱或疾病，例如NAFLD或NASH。
本发明还提供了使用水杨酰苯胺预防或治疗其中肝靶向线粒体解偶联是有用的紊乱或疾病(例如NAFLD或NASH)的方法。
如果本文公开的一些化合物已知，则在此将它们放弃；因此，本发明涉及这样的化合物，只要它们是新的。本发明涉及本文公开的化合物，其用于药物，特别是用于治疗NASH或NAFLD。化合物的其他用途从本文的描述中可见。
所公开的本发明化合物可以治疗有效的适应症包括非酒精性脂肪肝病(NAFLD)和非酒精性脂肪性肝炎(NASH)。
本公开提供的治疗患者疾病的方法包括向需要这种治疗的患者施用合适剂量的一种或多种本发明的化合物。
可以基于若干因素确定适当剂量的本发明化合物，包括例如所用化合物的效力、所治疗患者的体重和/或状况、受治疗的疾病的严重程度、副作用的发生率和/或严重程度、施用方式和处方医师的判断。适当的剂量范围可以通过本领域技术人员已知的方法确定。
此外，与DNP或DNP的其他前药(例如WO2015/031598中描述的那些)相比，预期所述化合物显示出用于治疗这些和相关疾病的改善的性质，包括改善的耐受性、增加的治疗指数、增加的肝解偶联与肝外解偶联比例、以及增加的肝前药代谢与肝外前药代谢比率。
因此，本发明化合物的有利性质可包括以下一种或多种：
-增加的质子载体部分的相对肝暴露
-减少的质子载体部分的肌肉暴露
-降低的母体化合物的质子载体活性
-减少患者间差异
-减少的副作用
-增加的治疗指数
-减少的最大解偶联效应
-减少的肾脏和大脑暴露
一般化学方法
技术人员将认识到，本发明化合物可以已知方式以多种方法制备。以下路线仅说明可用于合成式(I)化合物的一些方法，这些方法对于本领域技术人员而言是显而易见的。
对于其中X’为O，Y’为键，且Z’为烷基的化合物，如
然后，所需的主要连接是如所示的A和B。
连接A是通过使两种物质反应而制成的，例如
这可以在碱如K2CO3的存在下，在非亲核溶剂如乙腈中和在碘化物的存在下进行以活化C-Cl键。
诸如ZOCH2Cl的化合物可以通过例如，使酚(例如，DNP或水杨酰苯胺)与氯甲烷磺酰氯反应来制备。合适地，该反应可以在双相体系(例如，DCM和水)中与碱(NaHCO3)和相转移剂(nBu4NHSO4)进行。
化合物如可以通过使二氯磷酸烷基酯(alkylphosphorodichloridate)在合适的溶剂(例如DCM)中在碱(例如三乙胺)存在下与氨基酸酯和苄醇反应来制备。然后，可以通过合适的催化剂(例如Pd(OH)2/C)经由氢解除去苄基。
对于其中X’为NH，Y’为键，且Z’为CHR2’(C＝O)OR1’的化合物，如
然后，所需的主要连接是如所示的A和C。
连接A在上面描述，使用可使连接C以与连接B相同的方式制备化合物如但使用POCl3作为起始原料代替二氯磷酸烷基酯。
对于其中X’为O，Y’为键且Z’为烷基且Y为PhCH2O的化合物如
然后，主要连接是如所示的D。这可以通过羟基的亲核置换通过如下方法制备，其中在合适的溶剂如THF中，Z为H的如上所示的化合物在活化试剂(通常为DIAD和PPh3)存在下与合适的酚(例如DNP或水杨酰苯胺)反应。其中Z为H的化合物可以通过如下方法制备，包括使二氯磷酸烷基酯在合适的溶剂(例如DCM)中在碱(例如三乙胺)存在下与氨基酸酯、O-保护的苯胺和苄醇反应制备。然后，可以通过合适的催化剂(例如Pd(OH)2/C)经由氢解除去苄基。然后，可以在合适的溶剂如THF中，通过例如TBAF的作用除去苯胺的保护基团(通常为TBS)。
化合物如可以通过使POCl3与氨基酸酯和合适的酚(例如，水杨酰苯胺)在碱(通常为三乙胺)存在下在非亲核溶剂如DCM中反应来制备。
化合物如可以通过使POCl3与氨基酸酯和合适的酚(例如，水杨酰苯胺)在碱(通常为三乙胺)存在下在非亲核溶剂如DCM中反应来制备。
保护基团包括但不限于苄基和叔丁基。其他羰基化合物的保护基及其去除在‘有机合成中的格林保护基团(Greene’s Protective Groups in Organic Synthesis)’(Wuts和Greene，Wiley,2006)中有详细描述。保护基团可以通过本领域技术人员已知的方法除去，包括在苄基酯的非均相催化剂存在下氢化和用有机或无机酸，优选为三氟乙酸或稀释的HCl处理叔丁基酯。
在形成混合物的情况下，可能需要分离本发明的化合物。分离化合物的一种方法是柱色谱法。
包含本发明化合物的药物组合物
本发明还提供了一种药物组合物，包含本发明化合物连同一种或多种药学上可接受的稀释剂或载体。
本发明的化合物或其制剂可以通过任何常规途径施用，例如但不限于口服、肠胃外、局部、通过粘膜如颊、舌下、透皮、阴道、直肠、鼻、眼或，通过医疗装置(例如支架)，通过吸入或通过注射(皮下或肌肉内)。治疗可以在一段时间内由单剂量或多剂量组成。
治疗可以是每日施用一次、每日施用两次、每日施用三次、每日施用四次等。治疗也可以通过连续施用，诸如例如通过输注(滴注)静脉施用。
尽管本发明的化合物可以单独施用，但优选将其与一种或多种可接受的载体一起作为药物制剂提供。在与本发明化合物相容并且对其接受者无害的意义上，载体必须是“可接受的”。合适的载体的实例在下面更详细地描述。
制剂可以方便地以单位剂型存在，并且可以通过药学领域熟知的任何方法制备。这些方法包括使活性成分(本发明的化合物)与构成一种或多种辅助成分的载体结合的步骤。通常，制剂通过将活性成分与液体载体或细碎的固体载体或两者均匀且紧密地结合在一起来制备，然后，如果需要，使产品成形。
本发明化合物通常以药物制剂的形式口服或通过任何肠胃外途径施用，所述药物制剂包含活性成分，任选地在药学上可接受的剂型中以无毒有机或无机、酸或碱、加成盐的形式。取决于紊乱和待治疗的患者，以及施用途径，组合物可以不同的剂量和/或频率施用。
药物组合物在制造和储存条件下必须是稳定的；因此，优选应该保存以防止微生物如细菌和真菌的污染作用。载体可以是溶剂或分散介质，含有例如水、乙醇、多元醇(例如甘油、丙二醇和液体聚乙二醇)、植物油及其合适的混合物，或者它可以是固体材料，例如用于制造固体剂型。
例如，本发明的化合物还可以片剂、胶囊剂、胚珠、酏剂、溶液或悬浮液的形式口服、颊或舌下施用，其可含有调味剂或着色剂，用于立即、延迟或控制释放的应用。
适合于口服施用的根据本发明的制剂可以离散单位形式提供，例如胶囊剂、扁囊剂或片剂，每个含有预定量的活性成分；以粉末或颗粒形式；以水性液体或非水性液体中的溶液或悬浮液形式；或者以水包油液体乳液或油包水液体乳液形式。活性成分也可以大丸剂、药糖剂或糊剂形式提供。
适用于口服施用的本发明化合物的溶液、乳液或悬浮液也可含有一种或多种溶剂，包括水、醇、多元醇等，以及一种或多种赋形剂，例如pH调节剂、稳定剂、表面活性剂、增溶剂、分散剂、防腐剂、香料等。具体实例包括赋形剂，例如N,N-二甲基乙酰胺，分散剂，例如聚山梨醇酯80、表面活性剂和增溶剂，例如，聚乙二醇、Phosal 50PG(其由磷脂酰胆碱、大豆脂肪酸、乙醇、单甘酯/双甘酯、丙二醇和抗坏血酸棕榈酸酯组成)。根据本发明的制剂还可以是乳液形式，其中根据式(I)的化合物可以存在于水性油乳液中。油可以是任何类似油的物质，诸如例如大豆油或红花油、中链甘油三酯(MCT-油)，诸如例如，椰子油、棕榈油等或其组合。
片剂可含有赋形剂，例如微晶纤维素、乳糖(例如，乳糖一水合物或无水乳糖)、柠檬酸钠、碳酸钙、磷酸氢钙和甘氨酸、丁基化羟基甲苯(E321)、交聚维酮、羟丙甲纤维素、崩解剂如淀粉(优选玉米、马铃薯或木薯淀粉)、淀粉乙醇酸钠、交联羧甲基纤维素钠和某些复合硅酸盐、和造粒粘合剂如聚乙烯吡咯烷酮、羟丙基甲基纤维素(HPMC)、羟丙基纤维素(HPC)、聚乙二醇8000、蔗糖、明胶和阿拉伯胶。此外，可以包括润滑剂，例如硬脂酸镁、硬脂酸、山嵛酸甘油酯和滑石。
片剂可以通过压缩或模塑制成，任选地含有一种或多种辅助成分。压缩片剂可以通过在合适的机器中压制自由流动形式的活性成分如粉末或颗粒，任选地与粘合剂(例如，聚维酮、明胶、羟丙基甲基纤维素)、润滑剂、惰性稀释剂、防腐剂、崩解剂(例如，羟基乙酸淀粉钠、交联聚维酮、交联羧甲基纤维素钠)、表面活性剂或分散剂混合来制备。模制片剂可以通过在合适的机器中模制用惰性液体稀释剂润湿的粉末化合物的混合物来制备。片剂可以任选地包衣或刻痕，并且可以配制成使其中的活性成分缓慢或控制释放，例如使用不同比例的羟丙基甲基纤维素以提供期望的释放曲线。
类似类型的固体组合物也可用作明胶胶囊中的填充剂。就此而言，优选的赋形剂包括乳糖、淀粉、纤维素、乳糖或高分子量聚乙二醇。对于含水悬浮液和/或酏剂，本发明的化合物可与各种甜味剂或调味剂、着色剂或染料、乳化剂和/或悬浮剂以及稀释剂如水、乙醇、丙二醇和甘油及其组合混合。
适于在口腔中施用的制剂包括含有调味基础的活性成分的锭剂，通常是蔗糖和阿拉伯胶或黄蓍胶；含片，包括惰性基质中的活性成分，如明胶和甘油，或蔗糖和阿拉伯胶；和嗽口水，其包含在合适的液体载体中的活性成分。
适于局部施用的药物组合物可以配制成软膏剂、乳膏剂、乳液、悬浮液、洗剂、粉末剂、溶液剂、糊剂、凝胶剂、浸渍敷料剂、喷雾剂、气雾剂或油剂、透皮装置、散布剂(dustingpowder)等。这些组合物可通过含有活性剂的常规方法制备。因此，它们还可以包含相容的常规载体和添加剂，例如防腐剂，有助于药物渗透的溶剂，乳膏或软膏中的润肤剂和用于洗剂的乙醇或油醇。这些载体可以占组合物的约1％至约98％存在。更常见的是，它们将占组合物的高达约80％。仅作为说明，通过将足量的含有按重量计约5-10％的化合物的亲水性材料和水混合，制备乳膏或软膏，以足够的量产生具有期望稠度的乳膏或软膏。
适于透皮施用的药物组合物可以离散贴剂形式提供，旨在与受体的表皮保持长时间的紧密接触。例如，可通过离子电渗疗法从贴剂递送活性剂。
对于外部组织(例如，口腔和皮肤)的应用，组合物优选以局部软膏或乳膏形式施用。当配制成软膏时，活性剂可与石蜡或水混溶性软膏基质一起使用。
可替换地，可以将活性剂配制成具有水包油乳膏基质或油包水基质的乳膏。
对于肠胃外施用，使用活性成分和无菌载体制备流体单位剂型，例如但不限于水、醇、多元醇、甘油和植物油，优选为水。取决于所使用的载体和浓度，活性成分可以是胶状的，悬浮或溶解在载体中。在制备溶液时，可将活性成分溶解在注射用水中并过滤灭菌，然后填充到合适的小瓶或安瓿中并密封。
有利地，诸如局部麻醉剂、防腐剂和缓冲剂的试剂可以溶解在载体中。为了增强稳定性，可以在填充到小瓶中之后冷冻组合物并在真空下除去水。然后，将干燥的冻干粉末密封在小瓶中，并且可以提供附带的注射用水的小瓶以在使用前重构液体。
适用于注射用途的本发明的药物组合物包括无菌水溶液或分散液。此外，组合物可以是无菌粉末的形式，用于临时制备这种无菌可注射溶液或分散液。在所有情况下，最终的可注射形式必须是无菌的并且必须是有效的流体以便于注射。
胃肠外悬浮液以与溶液基本相同的方式制备，不同之处在于活性成分悬浮在载体中而不是溶解，并且不能通过过滤完成灭菌。活性成分可以在悬浮于无菌载体中之前通过暴露于环氧乙烷来灭菌。有利地，组合物中包含表面活性剂或润湿剂以促进活性成分的均匀分布。
应当理解，除了上面特别提到的成分之外，本发明的制剂可以包括关于所讨论制剂类型的本领域中常规的其他试剂，例如适合于口服施用的那些可以包括调味剂。本领域技术人员将知道如何选择合适的制剂以及如何制备它(参见例如Remington的药物科学(Pharmaceutical Sciences)，第18版或更高版本)。本领域技术人员还将知道如何选择合适的施用途径和剂量。
取决于施用方法，组合物可含有按重量计0.1％、5-60％，或按重量计10-30％的本发明的化合物。
本领域技术人员将认识到，本发明的化合物的各个剂量的最佳量和间隔将由所治疗病症的性质和程度，施用的形式、途径和部位，以及所治疗的特定受试者的年龄和状况确定，并且医生将最终确定要使用的适当剂量。该剂量可以按适当的频率重复进行。如果产生副作用，则可以根据正常的临床实践改变或减少剂量的量和/或频率。
除非上下文另有要求，否则本文提及的所有％值均为％w/w。
这种药物与本发明任何化合物的任何组合都在本发明的范围内。因此，基于本文的公开内容，本领域技术人员将理解，本发明的要点是本发明化合物的有价值性质的发现，以避免或减少本文所述的副作用。因此，潜在使用能够进入细胞并递送代谢物和可能的其他活性部分结合具有或可能具有本文所述副作用的任何药物的本发明的化合物从本公开内容显而易见。
定义
本文使用的冠词“一个”和“一种”用于是指该冠词的一个或多于一个(即，至少一个)的语法对象。举例来说，“类似物”表示一种类似物或多于一种类似物。
如本文所用，术语“本发明的一种或多种化合物”是指式(I)的化合物或水杨酰苯胺。
如本文所用，术语“水杨酰苯胺”是指具有式(II)的结构的化合物：
如本文所用，术语“生物利用度”是指药物或其他物质在施用后在生物活性部位被吸收或变得可用的程度或速率。该性质取决于许多因素，包括化合物的溶解度、肠道中的吸收速率、蛋白质结合和代谢的程度等。本文描述了本领域技术人员熟悉的各种生物利用度测试(也参见Trepanier等人，1998，Gallant-Haidner等人，2000)。
本发明化合物的药学上可接受的盐包括由药学上可接受的无机或有机酸或碱形成的常规盐以及季铵酸加成盐。合适的酸盐的更具体实例包括盐酸、氢溴酸、硫酸、磷酸、硝酸、高氯酸、富马酸、乙酸、丙酸、琥珀酸、乙醇酸、甲酸、乳酸、马来酸、酒石酸、柠檬酸、棕榈酸、丙二酸、羟基马来酸、苯乙酸、谷氨酸、苯甲酸、水杨酸、富马酸、甲苯磺酸、甲磺酸、萘-2-磺酸、苯磺酸、羟基萘甲酸、氢碘酸、苹果酸、甾体酸(steroic)、丹宁酸等。其他酸，例如草酸，虽然本身不是药学上可接受的，但可以用于制备用作获得本发明的化合物及其药学上可接受的盐的中间体的盐。合适的碱性盐的更具体实例包括钠、锂、钾、镁、铝、钙、锌、N,N’-二苄基乙二胺、氯普鲁卡因、胆碱、二乙醇胺、乙二胺、N-甲基葡糖胺和普鲁卡因盐。
如本文所用，术语“烷基”是指仅由sp3碳原子组成的任何直链或支链，被氢原子完全饱和，诸如例如直链烷基的-CnH2n+1，其中n可以在1至10的范围内，诸如例如甲基、乙基、丙基、异丙基、正丁基、异丁基、仲丁基、叔丁基、正戊基、新戊基、异戊基、己基、异己基、庚基、辛基、壬基或癸基。本文使用的烷基可以进一步被取代。
如本文所用，术语“环烷基”是指具有通式–CnH2n-1的环状/环结构碳链，其中n在3-10之间，诸如例如，环丙基、环丁基、环戊基、环己基、环庚基或环辛基、二环[3.2.1]辛基、螺[4,5]癸基、降蒎烷基(norpinyl)、降冰片基、降癸酰基(norcapryl)、金刚烷基等。如本文所用的环烷基可进一步被取代。
如本文所用，术语“烯基”是指由碳和氢原子组成的直链或支链，其中至少两个碳原子通过双键连接，诸如例如具有2至10个碳原子和至少一个双键的C2-10烯基不饱和烃链。C2-6烯基包括但不限于乙烯基、1-丙烯基、烯丙基、异丙烯基、正丁烯基、正戊烯基、正己烯基等。如本文所用的烯基可进一步被取代。
如本文所用，术语“环烯基”是指具有通式–CnH2n-1的环状/环结构碳链，其中n在3-10之间，其中至少两个碳原子通过双键连接，诸如例如环丙烯基、环丁烯基、环戊烯基、环己烯基、环庚烯基、环辛烯基、降冰片烯基或二环[2.2.2]辛2烯基。如本文所用的环烯基可进一步被取代。
本上下文中的术语“C1-10烷氧基”表示单独或组合使用的基团-O-C-1-10烷基，其中C1-10烷基如上所定义。直链烷氧基的实例是甲氧基、乙氧基、丙氧基、丁氧基、戊氧基和己氧基。支链烷氧基的实例是异丙氧基、仲丁氧基、叔丁氧基、异戊氧基和异己氧基。环状烷氧基的实例是环丙氧基、环丁氧基、环戊氧基和环己氧基。
如本文所用，术语“C3-7杂环烷基”表示完全饱和的杂环，如环状烃，其在环中独立地含有一个或多个选自氮、氧和硫的杂原子。杂环的实例包括但不限于吡咯烷(1-吡咯烷、2-吡咯烷、3-吡咯烷、4-吡咯烷、5-吡咯烷)、吡唑烷(1-吡唑烷、2-吡唑烷、3-吡唑烷、4-吡唑烷、5-吡唑烷)、咪唑烷(1-咪唑烷、2-咪唑烷、3-咪唑烷、4-咪唑烷、5-咪唑烷)、噻唑烷(2-噻唑烷、3-噻唑烷、4-噻唑烷、5-噻唑烷)、哌啶(1-哌啶、2-哌啶、3-哌啶、4-哌啶、5-哌啶、6-哌啶)、哌嗪(1-哌嗪、2-哌嗪、3-哌嗪、4-哌嗪、5-哌嗪、6-哌嗪)、吗啉(2-吗啉、3-吗啉、4-吗啉、5-吗啉、6-吗啉)、硫代吗啉(2-硫代吗啉、3-硫代吗啉、4-硫代吗啉、5-硫代吗啉、6-硫代吗啉)、1,2-氧硫杂环戊烷(3-(1,2-氧硫杂环戊烷)、4-(1,2-氧硫杂环戊烷)、5-(1,2-氧硫杂环戊烷))、1,3-二氧杂环戊烷(2-(1,3-二氧杂环戊烷)、3-(1,3-二氧杂环戊烷)、4-(1,3-二氧杂环戊烷))、四氢吡喃(2-四氢吡喃、3-四氢吡喃、4-四氢吡喃、5-四氢吡喃、6-四氢吡喃)、六氢吡嗪(1-(六氢吡嗪)、2-(六氢吡嗪)、3-(六氢吡嗪)、4-(六氢吡嗪)、5-(六氢吡嗪)、6-(六氢吡嗪))。
如本文所用，术语“C1-10烷基-C3-10环烷基”是指通过具有指定碳原子数的如上定义的烷基连接的如上定义的环烷基。
如本文所用，术语“芳基”旨在包括碳环芳环体系。芳基还旨在包括下面列举的碳环体系的部分氢化衍生物。
如本文所用，术语“杂芳基”包括含有一个或多个选自氮、氧和硫的杂原子的杂环不饱和环体系，例如呋喃基、噻吩基、吡咯基，并且还旨在包括下面列举的杂环体系的部分氢化衍生物。
如本文所用，术语“芳基”和“杂芳基”是指芳基，其可以是任选未取代的或单-、二-或三-取代的，或杂芳基，其可以是任选未取代的或单-，二-或三-取代的。“芳基”和“杂芳基”的实例包括但不限于苯基、联苯基、茚基、萘基(1-萘基、2-萘基)、N-羟基四唑基、N-羟基三唑基、N-羟基咪唑基、蒽基(1-蒽基、2-蒽基、3-蒽基)、菲基、芴基、并环戊二烯基、薁基、联亚苯基、噻吩基(1-噻吩基、2-噻吩基)、呋喃基(1-呋喃基、2-呋喃基)、呋喃基、噻吩基、异噁唑基、异噻唑基、1,2,3-三唑基、1,2,4-三唑基、吡喃基、哒嗪基、吡嗪基、1,2,3-三嗪基、1,2,4-三嗪基、1,3,5-三嗪基、1,2,3-噁二唑基、1,2,4-噁二唑基、1,2,5-噁二唑基、1,3,4-噁二唑基、1,2,3-噻二唑基、1,2,4-噻二唑基、1,2,5-噻二唑基、1,3,4-噻二唑基、四唑基、噻二嗪基、吲哚基、异吲哚基、苯并呋喃基、苯并噻吩基(硫茚基)、吲哚基、噁二唑基、异噁唑基、喹唑啉基、芴基、呫吨基、异茚满基、二苯甲基、吖啶基、苯并异噁唑基、嘌呤基、喹唑啉基、喹嗪基、喹啉基、异喹啉基、喹喔啉基、萘啶基、蝶啶基、氮杂环庚烯基、二氮杂环庚烯基、吡咯基(2-吡咯基)、吡唑基(3-吡唑基)、5-噻吩-2-基-2H-吡唑-3-基、咪唑基(1-咪唑基、2-咪唑基、4-咪唑基、5-咪唑基)、三唑基(1,2,3-三唑-1-基、1,2,3-三唑-2-基、1,2,3-三唑-4-基、1,2,4-三唑-3-基)、噁唑基(2-噁唑基、4-噁唑基、5-噁唑基)、噻唑基(2-噻唑基、4-噻唑基、5-噻唑基)、吡啶基(2-吡啶基、3-吡啶基、4-吡啶基)、嘧啶基(2-嘧啶基、4-嘧啶基、5-嘧啶基、6-嘧啶基)、吡嗪基、哒嗪基(3-哒嗪基、4-哒嗪基、5-哒嗪基)、异喹啉基(1-异喹啉基、3-异喹啉基、4-异喹啉基、5-异喹啉基、6-异喹啉基、7-异喹啉基、8-异喹啉基)、喹啉基(2-喹啉基、3-喹啉基、4-喹啉基、5-喹啉基、6-喹啉基、7-喹啉基、8-喹啉基)、苯并[b]呋喃基(2-苯并[b]呋喃基、3-苯并[b]呋喃基、4-苯并[b]呋喃基、5-苯并[b]呋喃基、6-苯并[b]呋喃基、7-苯并[b]呋喃基)、2,3-二氢-苯并[b]呋喃基(2-(2,3-二氢-苯并[b]呋喃基)、3-(2,3-二氢-苯并[b]呋喃基)、4-(2,3-二氢-苯并[b]呋喃基)、5-(2,3-二氢-苯并[b]呋喃基)、6-(2,3-二氢-苯并[b]呋喃基)、7-(2,3-二氢-苯并[b]呋喃基))、苯并[b]噻吩基(2-苯并[b]噻吩基、3-苯并[b]噻吩基、4-苯并[b]噻吩基、5-苯并[b]噻吩基、6-苯并[b]噻吩基、7-苯并[b]噻吩基)、2,3-二氢-苯并[b]噻吩基(2-(2,3-二氢-苯并[b]噻吩基)、3-(2,3-二氢-苯并[b]噻吩基)、4-(2,3-二氢-苯并[b]噻吩基)、5-(2,3-二氢-苯并[b]噻吩基)、6-(2,3-二氢-苯并[b]噻吩基)、7-(2,3-二氢-苯并[b]噻吩基))、吲哚基(1-吲哚基、2-吲哚基、3-吲哚基、4-吲哚基、5-吲哚基、6-吲哚基、7-吲哚基)、吲唑基(1-吲唑基、2-吲唑基、3-吲唑基、4-吲唑基、5-吲唑基、6-吲唑基、7-吲唑基)、苯并咪唑基(1-苯并咪唑基、2-苯并咪唑基、4-苯并咪唑基、5-苯并咪唑基、6-苯并咪唑基、7-苯并咪唑基、8-苯并咪唑基)、苯并噁唑基(1-苯并噁唑基、2-苯并噁唑基)、苯并噻唑基(1-苯并噻唑基、2-苯并噻唑基、4-苯并噻唑基、5-苯并噻唑基、6-苯并噻唑基、7-苯并噻唑基)、咔唑基(1-咔唑基、2-咔唑基、3-咔唑基、4-咔唑基)。部分氢化衍生物的非限制性实例是1,2,3,4-四氢萘基、1,4-二氢萘基、吡咯啉基、吡唑啉基、吲哚啉基、噁唑烷基、噁唑啉基、氧杂环庚烯基等。
如本文所用，术语“酰基”是指羰基–C(＝O)R，其中R基团是任何上述定义的基团。具体实例是甲酰基、乙酰基、丙酰基、丁酰基、戊酰基、己酰基、庚酰基、辛酰基、壬酰基、癸酰基、苯甲酰基等。
应用于任何基团的“任选取代的”是指如果需要，所述基团可以被一个或多个取代基取代，所述取代基可以相同或不同。‘任选取代的烷基’包括‘烷基’和‘取代的烷基’。
“取代的”和“任选取代的”部分的合适取代基的实例包括卤素(氟、氯、溴或碘)、C1-6烷基、C3-6环烷基、C3-6环烯基羟基、C1-6烷氧基、氰基、氨基、硝基、C1-6烷基氨基、C2-6烯基氨基、二C1-6烷基氨基、C1-6酰基氨基、二C1-6酰基氨基、C1-6芳基、C1-6芳基氨基、C1-6芳酰基氨基、苄基氨基、C1-6芳基酰胺基、羧基、C1-6烷氧基羰基或(C1-6芳基)(C1-10烷氧基)羰基、氨基甲酰基、单-C1-6氨基甲酰基、二-C1-6氨基甲酰基或上述任何一种，其中烃基部分本身被卤素、氰基、羟基、C1-2烷氧基、氨基、硝基、氨基甲酰基、羧基或C1-2烷氧基羰基取代。在含有氧原子的基团如羟基和烷氧基中，氧原子可以用硫代替，以制备诸如硫代(SH)和硫代-烷基(S-烷基)的基团。因此，任选的取代基包括诸如S-甲基的基团。在硫代-烷基中，硫原子可以进一步氧化以形成亚砜或砜，因此任选的取代基包括诸如S(O)-烷基和S(O)2-烷基的基团。
取代可以采取双键的形式，并且可以包括杂原子。因此，具有羰基(C＝O)而不是CH2的烷基可以被认为是取代的烷基。
因此，取代的基团包括例如CFH2、CF2H、CF3、CH2NH2、CH2OH、CH2CN、CH2SCH3、CH2OCH3、OMe、OEt、Me、Et、-OCH2O-、CO2Me、C(O)Me、i-Pr、SCF3、SO2Me、NMe2、CONH2、CONMe2等。在芳基的情况下，取代可以是来自芳环中相邻碳原子的环的形式，例如环状缩醛，例如O-CH2-O。
附图说明
图1显示与已知的强效解偶联剂DNP比较，化合物1和2的游离线粒体解偶联的结果。
图2显示与已知的强效解偶联剂MNP相比，化合物4的游离线粒体解偶联的结果。
图3显示完整HepG2肝细胞中线粒体解偶联测定中的水杨酰苯胺和DNP的结果。
图4A显示与DMSO阴性对照和DNP阳性对照相比，化合物11在分离的线粒体解偶联测定中的结果。
图4B显示与DMSO阴性对照和MNP阳性对照相比，化合物9在分离的线粒体解偶联测定中的结果。
图5A显示与DMSO阴性对照和氯硝柳胺对照相比，化合物6在分离的线粒体解偶联测定中的结果。
图5B显示与DMSO阴性对照和氯硝柳胺对照相比，化合物18在分离的线粒体解偶联测定中的结果。
图6A显示与DMSO阴性对照和水杨酰苯胺对照相比，化合物23在分离的线粒体解偶联测定中的结果。
图6B显示与DMSO阴性对照和水杨酰苯胺对照相比，化合物14在分离的线粒体解偶联测定中的结果。
图7显示与DMSO阴性对照和DNP相比，完整HepG2肝细胞、血小板中线粒体解偶联测定中的化合物11的结果。
图8显示与DMSO阴性对照和MNP相比，完整HepG2肝细胞、血小板中线粒体解偶联测定中的化合物9的结果。
图7显示与DMSO阴性对照和DNP相比，完整HepG2肝细胞、血小板中线粒体解偶联测定中的化合物11的结果。
图8显示与DMSO阴性对照和MNP相比，完整HepG2肝细胞、血小板中线粒体解偶联测定中的化合物9的结果。
图9显示与DMSO阴性对照和氯硝柳胺相比，完整HepG2肝细胞、血小板中线粒体解偶联测定中的化合物6的结果。
图10显示与DMSO阴性对照和氯硝柳胺相比，完整HepG2肝细胞、血小板中线粒体解偶联测定中的化合物18的结果。
图11显示与DMSO阴性对照和水杨酰苯胺相比，完整HepG2肝细胞、血小板中线粒体解偶联测定中的化合物23的结果。
图12显示与DMSO阴性对照和水杨酰苯胺相比，完整HepG2肝细胞、血小板中线粒体解偶联测定中的化合物14的结果。
具体实施方式
实验
评估了一系列广泛的质子载体化学类别的线粒体解偶联活性，以寻找解偶联效力结合低细胞毒性。然后产生肝靶向前药并在临床前模型中进行测试。
线粒体解偶联活性的评估揭示了许多类别的质子载体，其显示出比DNP显著更低的毒性，但具有改善的解偶联效力。然后，用化学物质产生一系列前药，目的是肝靶向质子载体。前药在肝细胞中诱导解偶联的线粒体呼吸，具有与有效载荷质子载体类似的低微摩尔效力但对分离的肝线粒体缺乏作用。与有效载荷质子载体相比，呼吸刺激的治疗范围扩大，且最大诱导呼吸小于一半。选择并研究本发明的化合物对许多NASH临床前标志物和耐受性的影响。
本发明的化合物的临床前评估表明它可以引起肝靶向的温和线粒体解偶联，而没有与历史线粒体解偶联剂(例如，DNP)相关的脱靶问题。临床前评估表明它具有治疗NAFLD和NASH的潜力。
一般生物学方法
生物利用度的测量
本领域技术人员将能够使用本领域技术人员已知的体内和体外方法确定本发明化合物的药代动力学和生物利用度，包括但不限于下文和Gallant-Haidner等人，2000和Trepanier等人，1998和其中的参考文献中描述的那些。这可用于确定肝脏中质子载体部分与肌肉和其他器官的相对暴露。化合物的生物利用度由许多因素决定(例如，水溶性、细胞膜渗透性、蛋白质结合程度和代谢和稳定性)，每种因素可通过本文实施例中所述的体外试验确定。本领域技术人员将理解，这些因素中的一种或多种的改善将导致化合物的生物利用度的改善。可替换地，本发明化合物的生物利用度可使用如下文或本文实施例中更详细描述的体内方法测量。
为了测量体内生物利用度，可将化合物腹膜内(i.p.)或静脉内(i.v.)和口服(p.o.)施用给试验动物(例如，小鼠或大鼠)，并定期采集血样以检查药物的血浆浓度随时间如何变化。血浆浓度随时间的时间过程可用于使用标准模型计算百分比形式的化合物的绝对生物利用度。下面描述典型方案的实例。
例如，给小鼠或大鼠静脉注射给予1或3mg/kg的本发明化合物，或口服给予1、5或10mg/kg的本发明的化合物。以5分钟、15分钟、1小时、4小时和24小时间隔取血样，并通过LCMS-MS测定样品中的本发明的化合物的浓度。然后，可以使用血浆或全血浓度的时间过程来得出关键参数，例如血浆下面积或血液浓度-时间曲线(AUC-其与达到体循环的未改变药物的总量成正比)、最大(峰值)血浆或血药浓度、最大血浆或血药浓度发生的时间(峰值时间)，用于准确测定生物利用度的其他因素包括：化合物的终末半衰期、全身清除率、稳态分布体积和F％。然后通过非隔室或隔室方法分析这些参数以得到计算的百分比生物利用度，对于这种类型的方法的实例，参见Gallant-Haidner等人，2000和Trepanier等人，1998，以及其中的参考文献。
功效测量
可以使用下述一种或多种方法测试本发明的化合物的功效：
1.评估线粒体解偶联的测定
用于评估分离的线粒体中的解偶联潜力的测定
没有前药代谢的线粒体解偶联的效力可以如下测试：
根据Hansson等人(Hansson等人(Brain Res.2003年1月17日；960(1-2):99-111)制备分离的大鼠肝线粒体。在高分辨率测氧描记器(Oxygraph-2k Oroboros仪器,因斯布鲁克,奥地利)中在2ml的玻璃室中在37℃的恒定温度下测量呼吸，搅拌速度为750rpm。用DatLab软件(Oroboros仪器,因斯布鲁克,奥地利)记录数据，采样率设定为2s，氧浓度范围为210-50μM的O2。如果需要，通过部分升高室塞子以进行短暂的空气平衡来进行复氧。仪器背景氧通量在一组单独的实验中测量，并根据制造商的说明在随后的实验中自动校正。为了测量分离的线粒体的呼吸，将样品悬浮在线粒体呼吸介质(MiR05)中，该培养基含有蔗糖110mM、HEPES 20mM、牛磺酸20mM、K-乳糖醛酸60mM、MgCl2 3mM、KH2PO4 10mM、EGTA 0.5mM、BSA 1g/l，pH 7.1。在底物(苹果酸盐(5mM)、谷氨酸盐(5mM)、丙酮酸盐(5mM)和琥珀酸盐(10mM))存在下达到稳定的呼吸后，通过补充ADP(1mM)诱导状态3呼吸，然后加入引起状态4O的寡霉素(1μg/ml，ATP-合成酶抑制剂)。状态4O是呼吸状态，其依赖于线粒体膜上质子的反向通量，这是由于ATP-合成酶的抑制和饱和底物浓度和ADP的存在。药物候选物及其各自的已知质子载体的有效载荷以固定浓度给予以诱导解偶联呼吸。然后，加入鱼藤酮(2μM，复合物I[CI]抑制剂)、抗霉素-A(1μg/ml，复合物III[CIII]抑制剂)和叠氮化钠(10mM)以抑制ETS，提供对其所有呼吸值校正的残留的非线粒体氧气消耗。
2.用于评估完整肝细胞和血小板中的线粒体解偶联的测定
对于HepG2细胞和血小板中的呼吸测量，将细胞在37℃下在高分辨率测氧描记器(Oxygraph-2k Oroboros仪器,因斯布鲁克,奥地利)中悬浮于线粒体呼吸介质MiR05中。最初，使样品稳定在常规呼吸状态，揭示内源底物的氧化磷酸化(OXPHOS)的静息细胞能量需求。为了评估独立于ADP磷酸化的呼吸作用，依次加入寡霉素(1μg/ml，ATP-合成酶抑制剂)诱导LEAK呼吸状态(呼吸状态，其中氧消耗取决于质子穿过线粒体膜的反向通量)。仔细滴定药物候选物和已知的质子载体以在内源底物供应下诱导ETS(电子传递系统)的最大解偶联呼吸/最大速率，并持续直至观察到解偶联呼吸的减少或至少没有进一步增加。然后，加入鱼藤酮(2μM，复合物I[CI]抑制剂)和抗霉素-A(1μg/ml，复合物III[CIII]抑制剂)以抑制ETS，因此提供对其所有值进行校正的残留的非线粒体氧气消耗。
具有前药代谢的线粒体解偶联的效力测试如下：
a)HepG2细胞(以模拟与肝细胞代谢的解偶联)。
b)血小板(以模拟血液中的解偶联)
肝细胞稳定性测定
将预先储存在液氮中的冷冻保存的肝细胞置于37±1℃的振荡水浴中2分钟±15秒。然后，将肝细胞加入10倍体积的预热的Krebs-Henseleit碳酸氢盐(KHB)缓冲液(2000mg/L葡萄糖，不含碳酸钙和碳酸氢钠，Sigma)中，轻轻混合并以500rpm离心3分钟。离心后，小心取出上清液，加入10倍体积的预热的KHB缓冲液以重悬细胞沉淀。将其轻轻混合并以500rpm离心3分钟。然后，除去上清液并丢弃。然后，通过细胞计数确定细胞活力和产量，并且这些值用于产生人肝细胞悬浮液至合适的接种密度(活细胞密度＝2×106个细胞/mL)。在预热的KHB(1％DMSO)中制备2X给药溶液(200μM的加标溶液：在980μL的DMSO中的20μL的底物储备液(10mM)，2X给药溶液：在990μL的KHB中的10μL的200μM的加标溶液(稀释后2μM)。
向孔中加入50μL的预热的2X给药溶液，并加入50μL的预热的肝细胞溶液(2×106细胞/mL)并开始计时。然后，将板在37℃下温育。在温育时间(0、15、30、60和120分钟)完成后，将100μL的含有内标的乙腈加入到每个孔中，轻轻混合，并加入50μL的预热的肝细胞溶液(2×106个细胞/mL)。在温育结束时，测定细胞活力。将样品在4℃下以4000rpm离心15分钟，用超纯水将上清液稀释2倍并通过LC-MS/MS分析化合物水平。
测试化合物在DMSO中以10mM浓度制备成储备溶液。在1.5mL的微量离心管中将储备溶液一式两份稀释在PBS中，pH7.4，至目标浓度100μM，最终DMSO浓度为1％(例如，4μL的10mM的DMSO储备溶液进入396μL的100mM的磷酸盐缓冲液中)。然后，将样品管在室温下轻轻摇动4小时。将样品离心(10分钟，15000rpm)以沉淀未溶解的颗粒。将上清液转移到新管中并用PBS稀释(各个测试制品的稀释因子通过所应用的分析仪器上的化合物的信号水平确认)。然后，将稀释的样品与相同体积(1:1)的MeOH混合。最后，将样品与相同体积(1:1)的含有内标的ACN混合，用于LC-MS/MS分析。表观渗透系数(Papp)和化合物在单层上的流出比计算如下：
渗透系数(Papp)由以下等式计算：
其中dQ/dt是作为时间的函数的基础(A-B)或顶端(B-A)隔室中的化合物的量(nmol/s)。C0是供体(顶端或基础)隔室的初始浓度(T＝0的平均值)(nmol/mL)，且A是转移小室的面积(cm2)。
然后，将流出比计算如下：
水溶性测定
水溶性可以测试如下：在室温下，在100％的DMSO中制备10mM的化合物的储备溶液。在琥珀瓶中将一式三份的0.01mL的等分试样用0.1M PBS，pH 7.3溶液或100％DMSO制成0.5mL。将得到的0.2mM的溶液在室温下在 vibrax VXR振荡器上振荡6小时，然后将所得溶液或悬浮液转移到2mL的微量离心管中并以13200rpm离心30分钟。然后，如上所述通过LCMS方法分析上清液的等分试样。
可替换地，可以如下测试在pH7.4下在PBS中的溶解度：通过将测试化合物和对照化合物稀释至40μM、16μM、4μM、1.6μM、0.4μM、0.16μM、0.04μM和0.002μM，用50％MeOH的H2O溶液产生校准曲线。然后，将标准点在MeOH:PBS 1:1中进一步稀释1:20。1:20稀释后的最终浓度为2000nM、800nM、200nM、80nM、20nM、8nM、2nM和1nM。然后，将标准品与含有内标的相同体积(1:1)的ACN混合。将样品离心(5分钟，12000rpm)，然后通过LC/MS分析。
细胞渗透性测定
Caco-2渗透性测定
可以如下测试细胞渗透性：将测试化合物在DMSO中溶解至10mM，然后在缓冲液中进一步稀释以产生最终的10μM给药浓度。还包括荧光标记物荧光黄，以监测膜的完整性。然后，将测试化合物施加到Caco-2细胞单层的顶端(A)表面，并测量化合物渗透到基底外侧(B)隔室中。这在相反的方向(基底到顶端)进行，以研究主动转运(外排)。LC-MS/MS用于量化测试和标准对照化合物(例如心得安和醋丁洛尔)的水平。
材料
除非另有说明，否则以下实施例中使用的所有试剂均获得自商业来源。
实施例
通过NMR光谱和质谱联用表征本发明化合物。实施例说明了以下化合物，但本发明不限于此。
其中式IV是且式III是
实施例1-化合物1
在氮气下，在0℃下，将二氯磷酸甲酯(3.0g,20.1mmol)的DCM(60ml)溶液滴加到苄醇(2.18g,20.1mmol)和三乙胺(TEA)(2.04g,20.1mmol)的混合物中。添加后，将反应在室温下搅拌30分钟，然后将其再次冷却至0℃。将L-丙氨酸异丙酯盐酸盐(3.71g,22.2mmol)加入到反应中，然后滴加TEA(6.12g,60.4mmol)。将反应混合物在室温下搅拌2小时，然后用水淬灭。将所得混合物用DCM萃取两次，然后将合并的有机层用Na2SO4干燥，过滤并真空除去溶剂。通过硅胶柱色谱法纯化残余物，得到IT-001，为无色油状物。将IT-001和Pd(OH)2/C(100mg)在THF(30mL)中的混合物在室温下在氢气氛(气球)下搅拌2小时。过滤反应混合物，然后真空除去溶剂，得到IT-002，为无色油状物。在0℃下，将氯甲基氯磺酸酯(7.2g,43.4mmol)加入到2,4-二硝基苯酚(4.0g,21.7mmol)、四丁基硫酸氢铵(738mg,2.17mmol)和NaHCO3(9.2g,109mmol)在DCM(80mL)和水(80mL)的混合物中。添加后，将混合物在室温下搅拌过夜。将混合物用水稀释并用DCM萃取两次。将合并的有机层用Na2SO4干燥，过滤，然后真空除去溶剂，得到IT-003，为黄色油状物，将其不经纯化用于下一步骤。将IT-002(5.0g,22.2mmol)、IT-003(4.2g,18.1mmol)、K2CO3(3.75g,27.2mmol)和NaI(543mg,3.62mmol)在CH3CN(80mL)中的混合物在室温下搅拌过夜。过滤混合物并用CH3CN洗涤。真空除去溶剂，残余物用硅胶柱色谱纯化，然后用制备型HPLC(CH3CN/H2O)纯化，得到标题化合物，为淡黄色固体。
实施例2-化合物2
在-78℃下，在Ar下，将苄醇(3.39g,31.3mmol)和TEA(3.96g,39.1mmol)的混合物滴加到三氯氧磷(6.0g,39.1mmol)的DCM(150mL)溶液中。将混合物在-78℃下搅拌30分钟。加入L-丙氨酸异丙酯盐酸盐(16.4g,97.8mmol)，然后将TEA(19.8g,196mmol)滴加到反应混合物中。添加后，将混合物温热至室温并搅拌4小时。将反应混合物用水淬灭并用DCM萃取两次。将合并的有机层干燥(Na2SO4)，过滤，然后真空除去溶剂。通过硅胶柱色谱法(EtOAc/石油醚)纯化残余物，得到IT-004，为无色油状物。将IT-004(5.0g,12.1mmol)和Pd(OH)2/C(1.0g)在THF(100mL)中的混合物在室温下在氢气氛(气球)下搅拌2小时。将反应混合物过滤并减压蒸发，得到IT-005，将其不经纯化用于下一步骤。在室温下，将氯甲基氯磺酸酯(4.0g,24mmol)加入到IT-005(3.9g,12mmol)、四丁基硫酸氢铵(407mg,1.2mmol)和NaHCO3(6.0g,72mmol)在DCM(60mL)和水(60mL)的混合物中，并搅拌过夜。将混合物用DCM萃取3次。将合并的有机层用Na2SO4干燥，过滤，然后真空除去溶剂，得到IT-006，为淡黄色油状物，将其不经纯化用于下一步骤。将IT-006(1.8g,4.83mmol)、2,4-二硝基苯酚(1.33g,7.24mmol)、K2CO3(1.34g,9.66mmol)和NaI(145mg,0.97mmol)在CH3CN(27mL)中的混合物在室温下搅拌过夜。过滤混合物并用CH3CN洗涤。真空除去溶剂，残余物用硅胶柱色谱纯化，然后用制备型HPLC(CH3CN/H2O)纯化，得到标题化合物，为无色油状物。
实施例3-化合物3
在室温下，将叔丁基二甲基甲硅烷基氯(2.02g,13.4mmol)加入到(4-氨基苯基)甲醇(1.5g,12.2mmol)、DMAP(491mg,4.02mmol)和TEA(1.48g,14.6mmol)在DMF(15mL)中的溶液中，并搅拌过夜。将混合物用水稀释并用EtOAc萃取两次。将合并的有机层用盐水洗涤，干燥(Na2SO4)，过滤，然后真空除去溶剂。通过硅胶柱色谱法(EtOAc/石油醚)纯化残余物，得到IT-007，为浅黄色油状物。在-78℃下，在Ar下，将IT-007(2.3g,9.7mmol)和TEA(982mg,9.7mmol)在DCM(5mL)中的溶液滴加到二氯磷酸甲酯(1.44g,9.7mmol)的DCM(20mL)溶液中。将混合物在-78℃下搅拌30分钟，然后加入L-丙氨酸异丙酯盐酸盐(1.63g，9.7mmol)。然后，将TEA(2.45g,24.3mmol)滴加到反应混合物中。添加后，将混合物温热至室温并搅拌过夜。将反应用水淬灭并用DCM萃取两次。将合并的有机层干燥(Na2SO4)，过滤，然后真空除去溶剂。通过硅胶柱色谱法(EtOAc/石油醚)纯化残余物，得到IT-008，为无色油状物。将TBAF(1M在THF中,6.5mL,6.5mmol)加入到IT-008(970mg,2.18mmol)的THF(10mL)溶液中。将反应加热至40℃并搅拌过夜，然后真空除去溶剂。通过硅胶柱色谱法(EtOAc/石油醚)纯化残余物，得到IT-009，为无色油状物。在0℃下，将DIAD(245mg,1.21mmol)滴加到IT-009(100mg,0.303mmol)、2,4-二硝基苯酚(111mg,0.606mmol)和Ph3P(159mg,0.606mmol)的THF(5mL)溶液中。添加后，将混合物在室温下搅拌2小时。真空除去溶剂，残余物通过制备型TLC(EtOAc)直接纯化，得到标题化合物，为淡黄色固体。
实施例4-化合物4
将IT-006(参见实施例2，1.8g,4.83mmol)、4-硝基苯酚(1.01g,7.24mmol)、K2CO3(1.34g,9.66mmol)和NaI(145mg,0.97mmol)在CH3CN(27mL)中的混合物在室温下搅拌过夜。过滤混合物并用CH3CN洗涤。真空除去溶剂，残余物用硅胶柱色谱纯化，然后用制备型TLC纯化，得到标题化合物，为白色固体。
实施例5-化合物5
在0℃下，将DIAD(3.91g,19.4mmol)滴加到IT-009(参见实施例3，1.6g,4.84mmol)、4-硝基苯酚(1.01g,7.27mmol)和Ph3P(2.54g,9.68mmol)的THF(30mL)溶液中。添加后，将混合物在室温下搅拌2小时。真空除去溶剂，残余物用硅胶柱色谱、制备型HPLC(CH3CN/H2O)和制备型TLC纯化，得到标题化合物，为淡黄色固体。
实施例6-化合物6
将IT-006(参见实施例2，600mg,1.61mmol)、氯硝柳胺(790mg,2.41mmol)、K2CO3(445mg,3.22mmol)和NaI(48mg,0.32mmol)在CH3CN(20mL)中的混合物在室温下搅拌过夜。过滤混合物并用CH3CN洗涤。真空除去溶剂，残余物用制备型HPLC(CH3CN/H2O)，然后制备型TLC纯化，得到标题化合物，为白色固体。
实施例7-化合物7
将IT-006(参见实施例2，370mg,0.993mmol)、水杨酰苯胺(317mg,1.49mmol)、K2CO3(206mg,1.49mmol)和NaI(30mg,0.2mmol)在CH3CN(7mL)中的混合物在室温下搅拌过夜。过滤混合物并用CH3CN洗涤。除去溶剂，残余物用硅胶柱色谱纯化，然后用制备型HPLC(CH3CN/H2O)纯化，得到标题化合物，为黄色油状物。
实施例8-化合物8
在-78℃下，在Ar下，将苄醇(3.5g,32.4mmol)和TEA(3.3g,32.4mmol)的混合物滴加到三氯氧磷(5.0g,32.4mmol)的DCM(150mL)溶液中。将混合物在-78℃下搅拌30分钟。加入L-丙氨酸甲酯盐酸盐(11.3g,80.9mmol)，然后将TEA(16.4g,162mmol)滴加到反应混合物中。添加后，将混合物温热至室温并搅拌4小时。将反应混合物用水淬灭并用DCM萃取两次。将合并的有机层干燥(Na2SO4)，过滤，真空除去溶剂。通过硅胶柱色谱法(EtOAc/石油醚)纯化残余物，得到IT-010，为无色油状物。将IT-010(1.0g,2.8mmol)和Pd(OH)2/C(200mg)在THF(30mL)中的混合物在室温下在氢气氛(气球)下搅拌2小时。将反应混合物过滤并减压蒸发，得到IT-011，为无色油状物，将其不经纯化用于下一步骤。将IT-011(112mg,0.42mmol)、IT-012(参见实施例20，118mg,0.63mmol)、K2CO3(116mg,0.84mmol)和NaI(13mg,0.084mmol)在CH3CN(2mL)中的混合物在室温下搅拌过夜。过滤混合物并用CH3CN洗涤。真空除去溶剂，残余物用硅胶柱色谱纯化，得到标题化合物，为白色固体。
实施例9-化合物9
在-78℃下，在Ar下，将苄醇(571mg,5.28mmol)和TEA(594mg,5.87mmol)的混合物滴加到三氯氧磷(900mg,5.87mmol)的DCM(30mL)溶液中。将混合物在-78℃下搅拌30分钟。然后将IT-012(参见实施例20，2430mg，15.3mmol)和TEA(2376mg，23.5mmol)的DCM(3mL)溶液滴加到反应混合物中。添加后，将混合物温热至室温并搅拌4小时。将反应混合物用水淬灭并用DCM萃取两次。将合并的有机层干燥(Na2SO4)，过滤，然后真空除去溶剂。通过硅胶柱色谱法(EtOAc/石油醚)纯化残余物，得到IT-013，为无色油状物。将IT-013(1.0g,2.13mmol)和Pd(OH)2/C(200mg)在THF(30mL)中的混合物在室温下在氢气氛(气球)下搅拌2小时。将反应混合物过滤并减压蒸发，得到IT-014，为无色油状物，将其不经纯化用于下一步骤。在5℃下，将氯甲基氯磺酸酯(528mg,3.20mmol)加入到IT-014(810mg,2.13mmol)、四丁基硫酸氢铵(72mg,0.21mmol)和NaHCO3(716mg,8.53mmol)在DCM(16mL)和水(16mL)的混合物中。添加后，将混合物在室温下搅拌过夜。将混合物用DCM稀释，并用Na2CO3水溶液、水、0.5N HCl，水洗涤。将有机层用Na2SO4干燥，过滤，然后真空除去溶剂，得到IT-015，为无色油状物，将其不经纯化用于下一步骤。将IT-015(200mg,0.47mmol)、4-硝基苯酚(97mg,0.70mmol)、K2CO3(97mg,0.70mmol)和NaI(14mg,0.09mmol)在CH3CN(3mL)中的混合物在室温下搅拌过夜。将混合物用水稀释并用EtOAc萃取两次。将合并的有机层用Na2SO4干燥，过滤，然后真空除去溶剂。通过硅胶柱色谱法纯化残余物，得到标题化合物，为无色油状物。
实施例10-化合物10
在-78℃下，在Ar下，将苄醇(1.9g,17.6mmol)和TEA(1.98g,19.6mmol)的混合物滴加到三氯氧磷(3.0g,19.6mmol)的DCM(90mL)溶液中。将混合物在-78℃下搅拌30分钟。加入L-丙氨酸乙酯盐酸盐(7.51g,48.9mmol)，然后将TEA(11.9g,117mmol)滴加到反应混合物中。添加后，将混合物温热至室温并搅拌4小时。将反应混合物用水淬灭并用DCM萃取两次。将合并的有机层干燥(Na2SO4)，过滤，然后真空除去溶剂。通过硅胶柱色谱法(EtOAc/石油醚)纯化残余物，得到IT-016，为无色油状物。将IT-016(200mg,0.518mmol)和Pd(OH)2/C(40mg)在THF(8ml)中的混合物在室温下在氢气氛(气球)下搅拌2小时。过滤反应混合物，真空除去溶剂，得到IT-017，为无色油状物，将其不经纯化用于下一步骤。将IT-017(154mg,0.52mmol)、IT-012(参见实施例20，146mg,0.78mmol)、K2CO3(143mg,1.04mmol)和NaI(15mg,0.10mmol)在CH3CN(2mL)中的混合物在室温下搅拌过夜。过滤混合物并用CH3CN洗涤。真空除去溶剂，残余物用硅胶柱色谱纯化，得到标题化合物，为浅白色固体。
实施例11-化合物11
将L-苯丙氨酸(10g,60.6mmol)溶解在i-PrOH(100mL)中，然后缓慢加入浓H2SO4(10mL)。将混合物回流过夜，然后真空除去溶剂。向残余物中加入冰水，然后用NaOH水溶液碱化溶液。将得到的混合物用DCM萃取两次。将合并的有机层干燥(Na2SO4)，过滤，然后真空除去溶剂，得到IT-018，为无色油状物，其可不经纯化用于下一步骤。在-78℃下，在Ar下，将苄醇(1.27g,11.7mmol)和TEA(1.32g,13.0mmol)的混合物滴加到三氯氧磷(2.0g,13.0mmol)的DCM(60mL)溶液中。将混合物在-78℃下搅拌30分钟。然后将IT-018(6.76g,32.6mmol)和TEA(5.28g，52.2mmol)的DCM(5mL)溶液滴加到反应混合物中。添加后，将混合物温热至室温并搅拌4小时。将反应混合物用水淬灭并用DCM萃取两次。将合并的有机层干燥(Na2SO4)，过滤，然后真空除去溶剂。通过硅胶柱色谱法(EtOAc/石油醚)纯化残余物，得到IT-019，为无色油状物。将IT-019(2.1g,3.71mmol)和Pd(OH)2/C(400mg)在THF(60mL)中的混合物在室温下在氢气氛(气球)下搅拌2小时。过滤反应混合物，然后真空除去溶剂，得到IT-020，为无色油状物，将其不经纯化用于下一步骤。在5℃下，将氯甲基氯磺酸酯(926mg,5.61mmol)加入到IT-020(1.78g,3.74mmol)、四丁基硫酸氢铵(127mg,0.37mmol)和NaHCO3(1.26g,15.0mmol)在DCM(30mL)和水(30mL)的混合物中。添加后，将混合物在室温下搅拌过夜。将混合物用DCM稀释，并用Na2CO3水溶液、水、0.5N HCl，水洗涤。将有机层用Na2SO4干燥，过滤，然后真空除去溶剂，得到IT-021，为无色油状物，将其不经纯化用于下一步骤。将IT-021(600mg,1.15mmol)、2,4-二硝基苯酚(316mg,1.72mmol)、K2CO3(237mg,1.72mmol)和NaI(34mg,0.23mmol)在CH3CN(6mL)中的混合物在室温下搅拌过夜。将混合物用水稀释并用EtOAc萃取两次。将合并的有机层用Na2SO4干燥，过滤，然后真空除去溶剂。通过硅胶柱色谱法纯化残余物，得到标题化合物，为黄色油状物。
实施例12-化合物12
将IT-021(参见实施例11，320mg,0.61mmol)、4-硝基苯酚(127mg,0.92mmol)、K2CO3(126mg,0.92mmol)和NaI(18mg,0.12mmol)在CH3CN(6mL)中的混合物在室温下搅拌过夜。将混合物用水稀释并用EtOAc萃取两次。将合并的有机层用Na2SO4干燥，过滤，然后真空除去溶剂。通过硅胶柱色谱法纯化残余物，得到标题化合物，为无色油状物。
实施例13-化合物13
将IT-021(参见实施例11，320mg,0.61mmol)、氯硝柳胺(301mg,0.92mmol)、K2CO3(126mg,0.92mmol)和NaI(18mg,0.12mmol)在CH3CN(6mL)中的混合物在室温下搅拌过夜。过滤混合物，然后真空除去溶剂。通过制备型HPLC(CH3CN/H2O)纯化残余物，并将粗制产物用EtOH冲洗，得到纯的标题化合物，为浅白色固体。
实施例14-化合物14
将IT-021(参见实施例11，320mg,0.61mmol)、水杨酰苯胺(196mg,0.92mmol)、K2CO3(126mg,0.92mmol)和NaI(18mg,0.12mmol)在CH3CN(6mL)中的混合物在室温下搅拌过夜。将混合物用水稀释并用EtOAc萃取两次。将合并的有机层用Na2SO4干燥，过滤，然后真空除去溶剂。通过硅胶柱色谱法纯化残余物，得到标题化合物，为黄色油状物。
实施例15-化合物15
在0℃下，在氮气下，将苄醇(1.31g,12.1mmol)和TEA(1.36g,13.4mmol)的混合物滴加到二氯磷酸甲酯(2.0g,13.4mmol)的DCM(40mL)溶液中。添加后，将反应在室温下搅拌30分钟，然后将其再次冷却至0℃。将L-丙氨酸甲酯盐酸盐(2.25g,16.1mmol)加入到反应中，然后滴加TEA(4.08g,40.3mmol)。将反应混合物在室温下搅拌过夜，然后用水淬灭。将得到的混合物用DCM萃取两次。将合并的有机层用Na2SO4干燥，过滤，然后真空除去溶剂。通过硅胶柱色谱法纯化残余物，得到IT-022，为无色油状物。将IT-022(200mg,0.7mmol)和Pd(OH)2/C(40mg)在THF(6mL)中的混合物在室温下在氢气氛(气球)下搅拌2小时。过滤反应混合物，真空除去溶剂，得到IT-023，为无色油状物。将IT-023(69mg,0.35mmol)、IT-012(参见实施例20，98mg,0.52mmol)、K2CO3(96mg,0.7mmol)和NaI(10.5mg,0.07mmol)在CH3CN(2mL)中的混合物在室温下搅拌过夜。过滤混合物并用CH3CN洗涤。真空除去滤液中的溶剂，残余物用硅胶柱色谱纯化，得到标题化合物，为无色油状物。
实施例16-化合物16
在0℃下，在氮气下，将苄醇(1.6g,14.7mmol)和TEA(2.24g,22.1mmol)的混合物滴加到二氯磷酸乙酯(3.0g,18.4mmol)的DCM(50mL)溶液中。添加后，将反应在室温下搅拌30分钟，然后将其再次冷却至0℃。将L-丙氨酸异丙酯盐酸盐(3.7g,22.1mmol)加入到反应中，然后滴加TEA(5.59g,55.2mmol)。将反应混合物在室温下搅拌过夜，然后将其用水淬灭。将得到的混合物用DCM萃取两次。将合并的有机层用Na2SO4干燥，过滤，然后真空除去溶剂。通过硅胶柱色谱法纯化残余物，得到IT-024，为无色油状物。将IT-024(500mg,1.52mmol)和Pd(OH)2/C(100mg)在THF(20mL)中的混合物在室温下在氢气氛(气球)下搅拌2小时。过滤反应混合物，然后真空除去滤液中的溶剂，得到IT-025，为无色油状物。在0℃下，将氯甲基氯磺酸酯(376mg,2.28mmol)加入到IT-025(363mg,1.52mmol)、四丁基硫酸氢铵(52mg,0.152mmol)和NaHCO3(510mg,6.07mmol)在DCM(10mL)和水(10mL)的混合物中。添加后，将混合物在室温下搅拌过夜。将混合物用DCM萃取两次。将合并的有机层用Na2SO4干燥，过滤，然后真空除去溶剂，得到IT-026，为无色油状物，将其不经纯化用于下一步骤。将IT-026、4-硝基苯酚(211mg,1.52mmol)、K2CO3(315mg,2.28mmol)和NaI(46mg,0.3mmol)在CH3CN(5mL)中的混合物在室温下搅拌过夜。将混合物用水稀释并用EtOAc萃取两次。将合并的有机层用Na2SO4干燥，过滤，然后真空除去溶剂。通过硅胶柱色谱法纯化残余物，得到标题化合物，为浅黄色油状物。
实施例17-化合物17
在0℃下，在氮气下，将苄醇(1.23g,11.4mmol)和TEA(1.73g,17.1mmol)的混合物滴加到二氯磷酸苯酯(3.0g,14.2mmol)的DCM(50mL)溶液中。添加后，将反应在室温下搅拌30分钟，然后将其再次冷却至0℃。将L-丙氨酸异丙酯盐酸盐(2.9g,17.1mmol)加入到反应中，然后滴加TEA(4.32g,42.7mmol)。将反应混合物在室温下搅拌过夜，然后用水淬灭。将得到的混合物用DCM萃取两次。将合并的有机层用Na2SO4干燥，过滤，然后真空除去溶剂。通过硅胶柱色谱法纯化残余物，得到IT-027，为无色油状物。将IT-027(1.0g,2.65mmol)和Pd(OH)2/C(200mg)在THF(20mL)中的混合物在室温下在氢气氛(气球)下搅拌2小时。过滤反应混合物，然后真空除去滤液中的溶剂，得到IT-028，为无色油状物。将IT-028(381mg,1.33mmol)、IT-012(参见实施例20，1245mg,6.64mmol)、K2CO3(368mg,2.66mmol)和NaI(41mg,0.27mmol)在CH3CN(8mL)中的混合物在室温下搅拌过夜。将混合物用水稀释并用EtOAc萃取两次。将合并的有机层用Na2SO4干燥，过滤，然后真空除去溶剂。通过硅胶柱色谱法纯化残余物，得到标题化合物，为无色油状物。
实施例18-化合物18
在0℃下，在氮气下，将苄醇(2.18g,20.1mmol)和TEA(2.04g,20.1mmol)的混合物滴加到二氯磷酸甲酯(3.0g,20.1mmol)的DCM(60ml)溶液中。添加后，将反应在室温下搅拌30分钟，然后将其再次冷却至0℃。将L-丙氨酸异丙酯盐酸盐(3.71g,22.2mmol)加入到反应中，然后滴加TEA(6.12g,60.4mmol)。将反应混合物在室温下搅拌2小时，然后用水淬灭。将所得混合物用DCM萃取两次，然后将合并的有机层用Na2SO4干燥，过滤并真空除去溶剂。通过硅胶柱色谱法纯化残余物，得到IT-029，为无色油状物。将IT-029(1.0g,3.17mmol)和Pd(OH)2/C(100mg)在THF(30mL)中的混合物在室温下在氢气氛(气球)下搅拌2小时。过滤反应混合物，然后真空除去溶剂，得到IT-030，为无色油状物。在室温下，将氯甲基氯磺酸酯(3146mg,19.1mmol)加入到IT-030(715mg,3.2mmol)、四丁基硫酸氢铵(109mg,0.32mmol)和NaHCO3(3023mg,38.1mmol)在DCM(20mL)和水(20mL)的混合物中。将混合物在室温下搅拌过夜，然后用DCM萃取3次。将合并的有机层用Na2SO4干燥，过滤，然后真空除去溶剂，得到IT-031，为淡黄色油状物，将其不经纯化用于下一步骤。将IT-031(240mg,0.88mmol)、氯硝柳胺(430mg,1.31mmol)、K2CO3(363mg,2.63mmol)和NaI(66mg,0.44mmol)在CH3CN(15mL)中的混合物在40℃下搅拌5小时。将混合物冷却并过滤。真空除去滤液中的溶剂，残余物用硅胶柱色谱纯化，得到标题化合物，为灰色固体。
实施例19-化合物19
将IT-031(参见实施例18，300mg,1.09mmol)、水杨酰苯胺(350mg,1.64mmol)、K2CO3(453mg,3.28mmol)和NaI(82mg,0.55mmol)在CH3CN(9mL)中的混合物在室温下搅拌过夜。过滤混合物并用EtOAc洗涤。真空除去滤液中的溶剂，残余物用硅胶柱色谱纯化，得到标题化合物，为浅黄色固体。
实施例20-化合物20
在室温下，将氯甲基氯磺酸酯(10.7g,64.7mmol)加入到4-硝基苯酚(3.0g,21.6mmol)、四丁基硫酸氢铵(732mg,2.16mmol)和NaHCO3(18.1g,216mmol)在DCM(90mL)和水(90mL)的混合物中。将混合物在40℃下搅拌过夜。将混合物冷却，用水稀释并用DCM萃取两次。将合并的有机层用Na2SO4干燥，过滤，真空除去溶剂。通过硅胶柱色谱法纯化残余物，得到IT-012，为无色油状物。将L-丙氨酸(60.0g,0.673mol)、2,2-二甲基丙-1-醇(59.4g,0.673mol)和对甲苯磺酸(p-TSA)一水合物(140.9g,0.741mol)在甲苯(1000mL)中的混合物使用Dean-Stark装置加热至回流过夜。冷却反应混合物，过滤收集沉淀物，得到产物(80g)，为对甲苯磺酸盐。将对甲苯磺酸盐(40g)溶解在水中，用Na2CO3水溶液碱化至pH＝9-10。将所得溶液用DCM萃取3次。将合并的有机层用盐水洗涤，用Na2SO4干燥，真空除去溶剂，得到游离的IT-032，为无色油状物。在0℃下，在氮气下，将苄醇(1.5g,13.9mmol)和TEA(1.4g,13.9mmol)的混合物滴加到二氯磷酸甲酯(2.1g,13.9mmol)的DCM(30ml)溶液中。添加后，将反应在室温下搅拌30分钟，然后将其再次冷却至0℃。向反应中滴加IT-032(2.4g,15.3mmol)和TEA(2.1g,20.8mmol)的DCM(10mL)溶液。将反应混合物在室温下搅拌4小时，然后用水淬灭。将得到的混合物用DCM萃取两次。将合并的有机层用Na2SO4干燥，过滤，真空除去溶剂。通过硅胶柱色谱法纯化残余物，得到IT-033，为无色油状物。将IT-033(100mg,0.29mmol)和Pd(OH)2/C(20mg)在THF(5mL)中的混合物在室温下在氢气氛(气球)下搅拌2小时。过滤反应混合物，然后真空除去滤液中的溶剂，得到IT-034，为无色油状物。将IT-034(74mg,0.29mmol)、IT-012(82mg,0.44mmol)、K2CO3(81mg,0.58mmol)和NaI(13mg,0.088mmol)在CH3CN(2mL)中的混合物在室温下搅拌过夜。过滤混合物并用CH3CN洗涤。真空除去滤液中的溶剂，残余物用硅胶柱色谱纯化，得到标题化合物，为浅黄色油状物。
实施例21-化合物21
在0℃下，在氮气下，将苄醇(1.5g,13.9mmol)和TEA(1.4g,13.9mmol)的混合物滴加到二氯磷酸甲酯(2.1g,13.9mmol)的DCM(30ml)溶液中。添加后，将反应在室温下搅拌30分钟，然后将其再次冷却至0℃。将L-丙氨酸乙酯盐酸盐(2.35g,15.3mmol)加入到反应中，然后滴加TEA(4.2g,41.7mmol)。将反应混合物在室温下搅拌4小时，然后用水淬灭。将得到的混合物用DCM萃取两次。将合并的有机层用Na2SO4干燥，过滤，真空除去溶剂。通过硅胶柱色谱法纯化残余物，得到IT-035，为无色油状物。将IT-035(200mg,0.66mmol)和Pd(OH)2/C(40mg)在THF(8mL)中的混合物在室温下在氢气氛(气球)下搅拌2小时。过滤反应混合物，然后真空除去滤液中的溶剂，得到IT-036，为无色油状物。将IT-036(141mg,0.67mmol)、IT-012(参见实施例20，188mg,1.0mmol)、K2CO3(185mg,1.3mmol)和NaI(30mg,0.2mmol)在CH3CN(3mL)中的混合物在室温下搅拌过夜。过滤混合物并用CH3CN洗涤。真空除去滤液中的溶剂，残余物用硅胶柱色谱纯化，得到标题化合物，为浅黄色油状物。
实施例22-化合物22
在-78℃下，氩气氛下，将TEA(1.9g,18.8mmol)滴加到POCl3(2.85g,18.8mmol)和水杨酰苯胺(4.0g,18.8mmol)的干燥DCM(100ml)溶液中。将混合物在-78℃下搅拌30分钟。将L-丙氨酸异丙酯盐酸盐(7.9g,46.9mmol)加入到反应中，然后在-78℃下滴加TEA(11.4g,112.7mmol)。将反应混合物在室温下搅拌3小时，然后用水淬灭。将得到的混合物用DCM萃取两次。将合并的有机层用Na2SO4干燥，过滤，然后真空除去溶剂。将残余物通过硅胶柱色谱法纯化两次(EtOAc/石油醚＝1/3至1/2)，得到标题化合物，为浅黄色油状物。
实施例23-化合物23
在-78℃下，在惰性条件下，将苯基甲醇(571mg,5.28mmol)和TEA(594mg,5.87mmol)的混合物滴加到三氯氧磷(900mg,5.87mmol)的DCM(30mL)溶液中。将混合物在相同温度下搅拌30分钟，然后滴加IT-032(参见实施例20,2430mg，15.3mmol)和TEA(2376mg，23.5mmol)的DCM(3mL)溶液。然后，将混合物温热至室温并搅拌另外4小时。将反应混合物用水淬灭并用DCM萃取两次。将合并的有机层用Na2SO4干燥，过滤，然后真空除去溶剂。通过硅胶柱色谱法(EtOAc/石油醚)纯化残余物，得到IT-037，为无色油状物。将IT-037(1.0g,2.13mmol)和Pd(OH)2/C(200mg)在THF(30mL)中的混合物在室温下在氢气氛(气球)下搅拌2小时。将反应混合物过滤并减压蒸发溶剂，得到IT-038，为无色油状物，将其不经纯化用于下一步骤。在5℃下，将氯甲基氯磺酸酯(528mg,3.20mmol)加入到IT-038(810mg,2.13mmol)、四丁基硫酸氢铵(72mg,0.21mmol)和NaHCO3(716mg,8.53mmol)在DCM(16mL)和水(16mL)的混合物中。添加后，将混合物在室温下搅拌过夜。然后将混合物用DCM稀释，依次用饱和Na2CO3水溶液、水、然后用0.5N HCl和水洗涤。将有机层用Na2SO4干燥，过滤，然后真空除去溶剂，得到IT-039，为无色油状物，将其不经纯化用于下一步骤。将IT-039(400mg,0.93mmol)、2-羟基-N-苯基苯甲酰胺(298mg,1.40mmol)、K2CO3(193mg,1.40mmol)和NaI(28mg,0.18mmol)在CH3CN(10mL)中的混合物在室温下搅拌过夜。将混合物用水稀释并用EtOAc萃取两次。将合并的有机层用Na2SO4干燥，过滤，然后真空除去溶剂。通过硅胶柱色谱法纯化残余物，得到化合物23，为无色油状物。
实施例24-化合物24
在惰性条件下，在-78℃下，将TEA(1.2g,12mmol)滴加到POCl3(912mg,6mmol)和L-丙氨酸异丙酯盐酸盐(1g,6mmol)的干燥DCM(30ml)溶液中。将混合物在-78℃下搅拌1小时。然后，加入水杨酰苯胺(2.6g,12mmol)，接着在-78℃下滴加TEA(1.2g,12mmol)。将得到的混合物在室温下搅拌另外3小时，然后将其用水淬灭。真空除去溶剂，残余物通过制备型HPLC纯化，得到化合物24，为白色固体。
实施例25-化合物25
在-78℃下，在惰性条件下，将苯基甲醇(633mg,5.86mmol)和TEA(658mg,6.51mmol)的混合物滴加到三氯氧磷(1.0g,6.51mmol)的DCM(30mL)溶液中。将混合物在-78℃下搅拌30分钟。然后，分别向反应混合物中滴加(S)-异丙基2-氨基丙酸酯盐酸盐(2.73g,16.28mmol)和TEA(3.4g,33.85mmol)的溶液。添加后，将混合物温热至室温并搅拌4小时。将反应混合物用水淬灭并用DCM萃取两次。将合并的有机层用Na2SO4干燥，过滤，然后真空除去溶剂。通过硅胶柱色谱法(EA/PE＝1/2)纯化残余物，得到25-2，为无色油状物。将25-2(1.85g,4.47mmol)和Pd(OH)2/C(600mg)在THF(30mL)中的混合物在室温下在氢气氛(气球)下搅拌2小时。将反应混合物过滤并减压蒸发溶剂，得到25-3，为无色油状物，将其不经纯化用于下一步骤。在5℃下，将氯甲基氯磺酸酯(1.16g,7.05mmol)加入到25-3(1.53g,4.7mmol)、四丁基硫酸氢铵(160mg,0.47mmol)和NaHCO3(1.6g,18.8mmol)在DCM(20mL)和水(20mL)的混合物中。添加后，将混合物在室温下搅拌过夜。将混合物用DCM稀释，并用Na2CO3水溶液、水、0.5N HCl，水洗涤。将有机层用Na2SO4干燥，过滤并减压浓缩，得到25-4，为无色油状物，将其不经纯化用于下一步骤。将25-4(900mg,2.42mmol)、2-羟基-N-苯基苯甲酰胺(773mg,3.63mmol)、K2CO3(501mg,1.5mmol)和NaI(72mg,0.48mmol)在CH3CN(10mL)中的混合物在室温下搅拌过夜。将混合物用水稀释并用EtOAc萃取两次。将合并的有机层用Na2SO4干燥，过滤并浓缩。通过硅胶柱色谱法(EA/PE＝1/2)纯化残余物，得到25，为无色油状物。
实施例26-化合物26
在-78℃下，在惰性条件下，将苯基甲醇(633mg,5.86mmol)和TEA(658mg,6.51mmol)的混合物滴加到三氯氧磷(1.0g,6.51mmol)的DCM(30mL)溶液中。将混合物在-78℃下搅拌30分钟。然后，分别向反应混合物中滴加(S)-叔丁基2-氨基-3-甲基丁酸酯盐酸盐(3.0g,14.3mmol)和TEA(3.02g,29.9mmol)的溶液。添加后，将混合物温热至室温并搅拌4小时。将反应混合物用水淬灭并用DCM萃取两次。将合并的有机层干燥(Na2SO4)，过滤，然后真空除去溶剂。通过硅胶柱色谱法(EA/PE＝1/2)纯化残余物，得到26-2，为无色油状物。将26-2(2.1g,4.2mmol)和Pd(OH)2/C(500mg)在THF(30mL)中的混合物在室温下在氢气氛(气球)下搅拌2小时。将反应混合物过滤并减压蒸发，得到26-3(为无色油状物，将其不经纯化用于下一步骤。在5℃下，将氯甲基氯磺酸酯(1.49mg,9.03mmol)加入到26-3(2.46g,6.02mmol)、四丁基硫酸氢铵(204mg,0.6mmol)和NaHCO3(2.02g,24.08mmol)在DCM(30mL)和水(30mL)的混合物中。添加后，将混合物在室温下搅拌过夜。将混合物用DCM稀释，并用Na2CO3水溶液、水、0.5N HCl，水洗涤。将有机层用Na2SO4干燥，过滤并减压浓缩，得到26-4，为无色油状物，将其不经纯化用于下一步骤。将26-4(2.1g,4.73mmol)、2-羟基-N-苯基苯甲酰胺(1.51g,7.1mmol)、K2CO3(980mg,7.1mmol)和NaI(142mg,0.95mmol)在CH3CN(20mL)中的混合物在室温下搅拌过夜。将混合物用水稀释并用EtOAc萃取两次。将合并的有机层用Na2SO4干燥，过滤并浓缩。通过硅胶柱色谱法(EA/PE＝1/2)纯化残余物，得到26，为无色油状物。
实施例27-化合物27
用Dean-Stark分水器将27-0(3.3g,20mmol)、2,2-二甲基丙-1-醇(3.5g，40mmol)和对甲苯磺酸(PTSA)一水合物(4.1g,24mmol)在甲苯(50mL)中的混合物加热，并在回流温度下保持过夜。冷却反应混合物，然后真空除去溶剂。将残余物溶于DCM中并通过饱和Na2CO3水溶液碱化至pH 9-10。将所得溶液用DCM萃取3次。将合并的有机层用盐水洗涤，用Na2SO4干燥，然后真空除去溶剂。通过硅胶柱色谱法(EtOAc/石油醚＝1/10至1/1)纯化残余物，得到27-1，为黄色油状物。在-78℃，在Ar下，将苯基甲醇(380mg,3.52mmol)和TEA(395mg,3.91mmol)的混合物滴加到三氯氧磷(600mg,3.91mmol)的DCM(15mL)溶液中，搅拌30分钟。单独地，在-78℃下向反应混合物中滴加27-1(2.2g,9.38mmol)的DCM(5mL)溶液，然后TEA(1.42g,14.01mmol)的DCM(5mL)溶液。添加后，将混合物温热至室温并搅拌4小时。将反应混合物用水淬灭并用DCM萃取两次。将合并的有机层干燥(Na2SO4)，过滤，然后真空除去溶剂。通过硅胶柱色谱法(EtOAc/石油醚＝1/10至1/1)纯化残余物，得到27-2，为无色油状物。将27-2(1.3g,2.09mmol)和Pd(OH)2/C(300mg)在THF(20mL)中的混合物在室温下在氢气氛(气球)下搅拌2小时。过滤反应混合物，然后滤液，真空除去溶剂，得到27-3，为无色油状物。在5℃下，将氯甲基氯磺酸酯(436mg,2.64mmol)加入到27-3(938mg,1.76mmol)、四丁基硫酸氢铵(60mg,0.18mmol)和NaHCO3(591mg,7.04mmol)在DCM(10mL)和水(10mL)的混合物中。添加后，将混合物在室温下搅拌过夜。将混合物用DCM稀释，并用Na2CO3水溶液、水、0.5N HCl，水洗涤。将有机层用Na2SO4干燥，过滤，然后真空除去溶剂，得到27-4，为无色油状物，将其不经纯化用于下一步骤。将27-4(432mg,0.74mmol)、2-羟基-N-苯基苯甲酰胺(238mg,1.11mmol)、K2CO3(153mg,1.11mmol)和NaI(22mg,0.15mmol)在CH3CN(8mL)中的混合物在室温下搅拌过夜。将混合物用水稀释并用EtOAc萃取两次。将合并的有机层用Na2SO4干燥，过滤，然后真空除去溶剂。通过硅胶柱色谱法(EA/PE＝1/10至1/1)纯化残余物，得到27，为白色固体。
实施例28-前药解偶联的分析
测试了选择的本发明化合物的游离线粒体解偶联，并与已知的有效解偶联剂DNP和MNP进行了比较。结果显示在图1、2、4、5、6、7、8、9、10、11和12中。
从数据中可以看出，化合物1、2、4、6、9、11、14、18和23在该测定中显示减少的、很少的或没有解偶联，而DNP、MNP和氯硝柳胺显示出有效的解偶联。这表明代谢(例如，肝代谢)是显著的解偶联作用所需的，允许改善肝靶向。
实施例29-水杨酰苯胺的解偶联活性的分析
在完整HepG2肝细胞中的线粒体解偶联测定中比较水杨酰苯胺和DNP。结果如图3所示。从该数据可以看出，与DNP相比，水杨酰苯胺更有效并且具有较小的最大解偶联效应。
实施例30-相对肝脏暴露与肝外器官的分析
由于肝解偶联与肝外解偶联比例增加是有利的，将3mg/kg水杨酰苯胺或10mg/kg的化合物14或10mg/kg的化合物23(其释放水杨酰苯胺)口服给予CD-1小鼠并且在给药之前和之后测量血液、肌肉和肝脏样品中的水杨酰苯胺水平(参见一般方法)。然后评估肝脏与肝外水杨酰苯胺的比例，需要高比例，因为这预计会导致降低的脱靶解偶联和毒性。
从上述数据可以看出，水杨酰苯胺、化合物14和23都具有理想的肝脏与肝外暴露的比例。
实施例31-体外肝外解偶联与肝解偶联的比较
与肝外组织相比，在肝组织中具有增加的解偶联水平是有利的。为了测试这一点，在HepG2细胞(肝)与血小板(肝外)的体外解偶联测定(参见一般方法中的用于评估完整肝细胞和血小板中的线粒体解偶联的测定)中测试化合物。
数据显示在图7、8、9、10、11和12中。从所呈现的数据可以看出，与血小板相比，化合物6、9、11、14、18和23在HepG2细胞中显示出选择性解偶联，如HepG2细胞中在低浓度下的高最大解偶联所示)。
将质子载体的最大解偶联水平限制在低于DNP的水平可以是有利的，当在HepG2细胞上测试时，已知其在高剂量下会引起副作用和死亡。
实施例32-水杨酰苯胺与其他解偶联剂的渗透性的比较
具有提高的口服生物利用度和细胞渗透性水平是有利的。可以通过caco-2渗透性测定来测量其潜力(参见一般方法)。数据显示在下表中：
从数据可以看出，与DNP(一种众所周知的口服生物可利用的解偶联剂)相比，水杨酰苯胺显示出增加的渗透性和降低的流出比。
本说明书和权利要求所构成的部分的申请可以用作任何后续申请的优先权基础。这种后续申请的权利要求可以针对本文描述的任何特征或特征的组合。它们可以采取产品、组合物、过程或使用权利要求的形式，并且可以包括，作为示例而非限制，所附权利要求：
本申请中提及的所有参考文献，包括专利和专利申请，都通过引用以最大可能的程度并入本文。

Claims (16)

1.一种式(I)的化合物
其中：
X和X’可以独立地是NH或O；
Y不存在，或是-CR3R4O-、-C(＝O)O-、或(X是苯基取代基，Z连接到O)；
Y’不存在，或是-CR3R4O-、-C(＝O)O-、或(X’是苯基取代基，Z’连接到O)；
Z是式(II)
Z’是CHR2’(C＝O)OR1’、Me、Et、iPr、Ph或式(II)
R1和R1’独立地是Me、Et、iPr、nPr、tBu、iBu、sBu或CH2CMe3
R2和R2’独立地是H、Me、Et、iPr、Ph、Bn
R3是H、Me、Et
R4是H、Me、Et
其中：
R5是H、NO2或
R6是H、NO2、Cl、Br或I
R7是H、Me、Et、iPr、tBu、sBu、iBu、Cl、Br或I
R8是H、NO2、Cl、Br、C(CN)H(C6H4)-p-Cl
R9是H、Cl、OH或CH3
R10是H或Cl
R5和R6不能都是H；
当R6是Cl时，R5不能是H或NO2；
当Z’是CHR2’(C＝O)OR1’、Me、Et、iPr时，则Y’必须不存在；
当Z’是CHR2’(C＝O)OR1’时，则X’必须是NH；
当Z’是Me、Et或iPr时，则X’必须是O；
当Z是式II且R6是NO2时，则Y不能不存在
当Z’是式II且R6是NO2时，则Y’不能不存在
当Z是式II，R6是NO2且Z’是CHR2’(C＝O)OR1’时，则R2和R2’不能是H或Me；
或它的药学上可接受的盐。
2.根据权利要求1所述的化合物，其中
Z和/或Z’是式(II)且R5是
3.根据权利要求1或2所述的化合物，其中，Z和/或Z’是式(II)且
R5是
并且R6、R7、R8、R9和R10都是H。
4.根据权利要求1或2所述的化合物，其中
Z和/或Z’是式(II)；
R5是
并且R6是Cl，R7是H或tBu，R8是Cl，R9是NO2以及R10是H。
5.根据权利要求1或2所述的化合物，其中，Z’是CHR2’(C＝O)OR1’，Z是式(II)
并且R5是
6.根据权利要求1、2和5中任一项所述的化合物，其中，Z’是CHR2’(C＝O)OR1’
R1和R1’是iPr
R2和R2’是Me或Bn
Z是式(II)
R5是
并且R6、R7、R8、R9和R10都是H。
7.根据权利要求1、2和5中任一项所述的化合物，其中，Z’是CHR2’(C＝O)OR1’
R1和R1’是iPr
R2和R2’是Me或Bn
Z是式(II)
R5是
并且R6是Cl，R7是H或tBu，R8是Cl，R9是NO2以及R10是H。
8.根据权利要求1-3中任一项所述的化合物，具有下式中的一种
9.根据权利要求1或2所述的化合物，其中，所述化合物选自
10.根据权利要求1所述的化合物，选自
11.根据权利要求1-10中任一项所述的化合物，用于在药物中使用。
12.根据权利要求1-10中任一项所述的化合物，用于在药物研究中使用。
13.根据权利要求1-10中任一项所述的化合物，用于在预防或治疗其中肝靶向线粒体解偶联是有用的紊乱或疾病中使用，诸如用于在预防或治疗NAFLD或NASH中使用。
14.水杨酰苯胺，用于在预防或治疗其中肝靶向线粒体解偶联是有用的紊乱或疾病中使用，诸如用于在预防或治疗NAFLD或NASH中使用。
15.一种药物组合物，包含权利要求1-10中任一项限定的化合物以及一种药学上可接受的赋形剂。
16.一种治疗患有NASH或NAFLD的受试者的方法，所述方法包括向所述受试者施用有效量的权利要求1-10中任一项限定的化合物或权利要求15限定的组合物。
CN201780083873.5A 2016-11-18 2017-11-17 线粒体质子离子载体的肝前药 Pending CN110198947A (zh)

Applications Claiming Priority (3)

Application Number Priority Date Filing Date Title
DKPA201670919 2016-11-18
DKPA201670919 2016-11-18
PCT/EP2017/079548 WO2018091633A1 (en) 2016-11-18 2017-11-17 Liver prodrugs of mitochondrial proton ionophores

Publications (1)

Publication Number Publication Date
CN110198947A true CN110198947A (zh) 2019-09-03

Family

ID=57460295

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN201780083873.5A Pending CN110198947A (zh) 2016-11-18 2017-11-17 线粒体质子离子载体的肝前药

Country Status (11)

Country Link
US (1) US20190276481A1 (zh)
EP (1) EP3541824A1 (zh)
JP (1) JP2020500853A (zh)
KR (1) KR20190085976A (zh)
CN (1) CN110198947A (zh)
AU (1) AU2017361855A1 (zh)
BR (1) BR112019009988A2 (zh)
CA (1) CA3043437A1 (zh)
MA (1) MA46839A (zh)
MX (1) MX2019005675A (zh)
WO (1) WO2018091633A1 (zh)

Families Citing this family (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN108610292B (zh) * 2018-06-12 2020-11-10 清华大学 一类3,5-二取代乙内酰脲类化合物及其制备方法与应用
CN111646936A (zh) * 2020-06-22 2020-09-11 江苏亚虹医药科技有限公司 芳香醚类化合物的制备方法

Citations (7)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN102459299A (zh) * 2009-05-20 2012-05-16 法莫赛特股份有限公司 N-[(2′r)-2′-脱氧-2′-氟-2′-甲基-p-苯基-5′-尿苷酰基]-l-丙氨酸1-甲基乙基酯及其制备方法
CN102906102A (zh) * 2010-03-31 2013-01-30 吉利德制药有限责任公司 含磷活性物的立体选择性合成
CN103052646A (zh) * 2010-07-19 2013-04-17 吉里德科学公司 用于制备非对映异构体纯氨基磷酸酯前药的方法
US20130143835A1 (en) * 2011-12-05 2013-06-06 Medivir Ab HCV Polymerase Inhibitors
US20150266918A1 (en) * 2014-03-19 2015-09-24 Minghong Zhong Bridged-Cyclo-ProTides as Prodrugs of Therapeutic Nucleosides and Nucleotides
WO2016030335A1 (en) * 2014-08-25 2016-03-03 Medivir Ab Dioxolane analogues of uridine for the treatment of cancer
WO2016069825A1 (en) * 2014-10-29 2016-05-06 Gilead Sciences, Inc. Methods for the preparation of ribosides

Family Cites Families (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
NL59151C (zh) 1945-08-22
US10457629B2 (en) 2013-08-30 2019-10-29 Yale University Therapeutic DNP derivatives and methods using same

Patent Citations (7)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN102459299A (zh) * 2009-05-20 2012-05-16 法莫赛特股份有限公司 N-[(2′r)-2′-脱氧-2′-氟-2′-甲基-p-苯基-5′-尿苷酰基]-l-丙氨酸1-甲基乙基酯及其制备方法
CN102906102A (zh) * 2010-03-31 2013-01-30 吉利德制药有限责任公司 含磷活性物的立体选择性合成
CN103052646A (zh) * 2010-07-19 2013-04-17 吉里德科学公司 用于制备非对映异构体纯氨基磷酸酯前药的方法
US20130143835A1 (en) * 2011-12-05 2013-06-06 Medivir Ab HCV Polymerase Inhibitors
US20150266918A1 (en) * 2014-03-19 2015-09-24 Minghong Zhong Bridged-Cyclo-ProTides as Prodrugs of Therapeutic Nucleosides and Nucleotides
WO2016030335A1 (en) * 2014-08-25 2016-03-03 Medivir Ab Dioxolane analogues of uridine for the treatment of cancer
WO2016069825A1 (en) * 2014-10-29 2016-05-06 Gilead Sciences, Inc. Methods for the preparation of ribosides

Non-Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
HUSSEIN M. ALI ET AL.: ""SYNTHESIS AND QUANTITATIVE OF STRUCTURE-ACTIVITY RELATIONSHIPS OF PHOSPHORAMIDATES AND PHOSPHORODIAMIDATES INCORPORATING AMINO ACID ESTERS"", 《PHOSPHORUS, SUYUR AND SILICON》 *
ROBERT A. MOOK JR.ET AL.: ""Structure–activity studies of Wnt/b-catenin inhibition in the Niclosamide chemotype: Identification of derivatives with improved drug exposure"", 《BIOORGANIC & MEDICINAL CHEMISTRY》 *

Also Published As

Publication number Publication date
WO2018091633A1 (en) 2018-05-24
MX2019005675A (es) 2019-08-14
BR112019009988A2 (pt) 2019-08-27
CA3043437A1 (en) 2018-05-24
JP2020500853A (ja) 2020-01-16
US20190276481A1 (en) 2019-09-12
AU2017361855A1 (en) 2019-05-30
KR20190085976A (ko) 2019-07-19
MA46839A (fr) 2021-03-24
EP3541824A1 (en) 2019-09-25

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CN101300012B (zh) 作为p2x3和p2x2/3调节剂的二氨基嘧啶类化合物在制备治疗呼吸系统疾病的药物中的应用
ES2275628T3 (es) Uso de un agonista/antagonista de estrogenos para el tratamiento de disfucion sexual femenina.
CN101006065B (zh) 抑制bcl蛋白与结合伴侣的相互作用的化合物和方法
CN101815707B (zh) 噁二唑二芳基化合物
US10857150B2 (en) Use of sanglifehrin macrocyclic analogues as anticancer compounds
CN102548557A (zh) 用于降低β-淀粉状蛋白生成的化合物
UA59385C2 (uk) Інтраназальна композиція для лікування сексуальних розладів
CN101778831B (zh) 哌嗪酰胺衍生物
CN106243088B (zh) 取代的哌嗪化合物及其使用方法和用途
CN102470127A (zh) 联芳基化合物和其使用方法
PT1773296E (pt) Gel vaginal farmacêutico compreendendo tenofovir
CN103068801A (zh) 硫代乙酸盐化合物、组合物及其使用方法
CN101340909A (zh) 抑制flt3激酶的方法
CN110437205A (zh) 吡啶烯基哌啶衍生物及其用途
CN104918923A (zh) 新型口服生物可利用的呼吸控制调节化合物及其使用方法
CN105579035A (zh) 二巯基化物类粘液溶解剂
EP2433636A1 (en) Treatment of Malignant Diseases
JP2009517397A (ja) 癌の治療方法
CN104394855A (zh) 用于测定肝细胞癌(hcc)患者的治疗的有效响应的生物标记
CN110198947A (zh) 线粒体质子离子载体的肝前药
CN106687453A (zh) 作为溴结构域抑制剂的四氢喹啉衍生物
JP6357292B2 (ja) Ｃｎｋｓｒ１を阻害するための方法及び組成物
CA3193191A1 (en) Treatment of cognitive dysfunction with pyrrolopyridine-aniline compounds
CN102869665A (zh) 苯并氮杂环庚三烯化合物
CN110272425A (zh) 吡啶酰基八氢吡咯并[3,4-c]吡咯衍生物及其用途

Legal Events

Date Code Title Description
PB01 Publication
PB01 Publication
SE01 Entry into force of request for substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
WD01 Invention patent application deemed withdrawn after publication

Application publication date: 20190903

WD01 Invention patent application deemed withdrawn after publication