CN110177787A - 整合素拮抗剂 - Google Patents

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大卫·W·格里格斯
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St Louis University
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Indaro Medical Co Ltd
St Louis University
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Abstract

本公开提供药剂，包括式(I)的药剂，其中变量如本文所定义。还提供包含此类药剂的药物组合物、试剂盒和制品。还提供使用药剂的方法。该化合物可用于抑制或拮抗整合素αvβ1和/或α5β1。在一些实施方式中，本文提供的化合物表现出整合素αvβ3、αvβ5、αvβ6、αvβ8和/或αIIbβ3的抑制或拮抗活性降低。

Description

整合素拮抗剂
通过引用任何优先权申请并入
根据37CFR1.57，申请数据表(Application Data Sheet)中确认的任何和所有优先权要求，或对其进行的任何更正，在此通过引用并入。
技术领域
本公开涉及药物、医学和细胞生物学领域。更具体地，它涉及可用作整合素拮抗剂的药剂(化合物)。
背景技术
整合素(整联蛋白，integrin)为介导细胞与其它细胞和细胞外基质的相互作用的整合细胞质膜蛋白家族。最近，整合素αvβ1被确定为在多种纤维化病症中发挥作用。其它整合素，诸如αvβ3和αvβ5，也与纤维化病症相关联，而抑制这两种整合素的化合物可用于治疗这些病症。
据信整合素α5β1在并入第九和第十III型纤连蛋白重复的区域中结合到纤连蛋白，据信后者含有用于整合素结合的RGD基序。除纤连蛋白外，据报道α5β1还与其它含RGD的细胞外基质蛋白(包括纤维蛋白原、变性胶原和原纤维蛋白-1)相互作用(Bax et al.,J.Biol.Chem.,278(36):34605-34616,2003,2003；Perdih,Curr.Med.Chem.,17(22):2371-2392,2010；Suehiro et al.,J.Biochem.,128(4):705-710,2000)。这些配体通常被分类为临时基质的组分，临时基质的组分由细胞作为组织中伤口愈合反应的一部分而铺设。该反应的组分为血管生成和纤维化。
相反，抑制一些其它整合素，诸如αvβ6和αvβ8，与多种不期望的炎症有关的副作用相关联(Huang,et al.,1996；Lacy-Hulbert,et al.,2007；Travis,et al.,2007；Worthington,et al.,2015)。对于一些适应症，选择性抑制αvβ1、αvβ3、αvβ5和/或α5β1为期望的。
整合素αIIbβIII(也称为糖蛋白IIb/IIIa或GPIIb/IIIa)为在血小板上发现的整合素复合物。整合素αIIbβIII抑制与血小板聚集的中断相关联，血小板聚集的中断与治疗某些疾病或紊乱时的毒性和/或禁忌相关联(King et al.,2016；Bennet,2005；Giordano etal.,2016；Cook et al.,1997)。
发明内容
本公开提供新的整合素受体拮抗剂、药物组合物及其制造方法以及其使用方法。
在一些方面，本公开提供下式的化合物：
或上式的药用盐、溶剂化物或互变异构体，其中：R1、R2、X和Y具有本文所述的值中的任何值。
在一些实施方式中，R1为氢、烷基(C≤8)、芳基(C≤12)、芳烷基(C≤12)、取代的烷基(C≤8)、取代的芳基(C≤8)或取代的芳烷基(C≤12)；
R2为氢、烷基(C≤8)、取代的烷基(C≤8)或在体内可转化成氢的取代基；
X为氰基、卤素、烷氧基(C≤8)、取代的烷氧基(C≤8)、烷基(C≤8)或取代的烷基(C≤8)；并且
Y为氢、氰基、卤素、烷氧基(C≤8)、取代的烷氧基(C≤8)、烷基(C≤8)或取代的烷基(C≤8)。
在式(I)的一些其它实施方式中，R1可为氢、未取代的C1-8烷基、取代的C1-8烷基、未取代的C6或10芳基、取代的C6或10芳基、未取代的C7-12芳烷基或取代的C7-12芳烷基；
R2可为氢、未取代的C1-8烷基或取代的C1-8烷基；
X可为氢、卤素、氰基、未取代的C1-12烷基、取代的C1-12烷基、未取代的C1-12烷氧基、取代的C1-12烷氧基、未取代的C6或10芳基、取代的C6或10芳基、未取代的C7-12芳烷基、取代的C7-12芳烷基、未取代的5-10元杂芳基、取代的5-10元杂芳基、未取代的3-10元杂环烷基、取代的3-10元杂环烷基、未取代的C6或10芳氧基、取代的C6或10芳氧基、未取代的C2-12酰氧基、取代的C2-12酰氧基，或
其中R4和R5各自独立地为未取代的C1-8烷基或取代的C1-8烷基，并且
R6可为氢、-OH、-CN、-NH2、-CF3、-CF2H、-CH2F、-CO2H、-CO2-C1-8烷基、-C(＝O)NH2、-CH2OH、-CH2O-C1-8烷基，或C1-8烷氧基，或者
X为
其中A'为-CF2-、-O-、C1-6亚烷基(烷二基，烷烃二基，alkanediyl)、C1-8亚烷氧基，或者为共价键从而形成环丙烷环，并且
R7可为-OH、-CN、-NH2、-CO2H、-CO2-C1-8烷基、-C(＝O)NH2、-CF3、-CF2H、-CH2F、-CH2OH、-CH2O-C1-8烷基、C1-8烷基或C1-8烷氧基；
Y可为叔丁基，或
其中R8和R9各自独立地为未取代的C1-8烷基或取代的C1-8烷基，
并且R10为氢、-OH、-CN、-NH2、-CF3、-CF2H、-CFH2、-CO2H、-CO2-C1-8烷基、-C(＝O)NH2、-CH2OH、-CH2O-C1-8烷基，或C1-8烷氧基，或者
Y可为其中A”为-CF2-、-O-、C1-6亚烷基、C1-8亚烷氧基，或者为共价键从而形成环丙烷环；并且R11为-OH、-CN、-NH2、-CO2H、-CO2-C1-8烷基、-C(＝O)NH2、-CF3、-CF2H、-CH2F、-CH2OH、-CH2O-C1-8烷基、C1-8烷基或C1-8烷氧基。
在式(I)的一些其它实施方式中：
R1为氢、烷基(C≤8)、芳基(C≤12)、芳烷基(C≤12)、取代的烷基(C≤8)、取代的芳基(C≤8)或取代的芳烷基(C≤12)；
R2为氢、烷基(C≤8)、取代的烷基(C≤8)或在体内可转化成氢的取代基；并且
X和Y各自独立地为氰基、卤素、烷氧基(C≤8)、取代的烷氧基(C≤8)、烷基(C≤8)或取代的烷基(C≤8)；
或上式的药用盐或互变异构体。
在一些实施方式中，化合物进一步定义为：
或其药用盐、溶剂化物或互变异构体，其中：R1、R2、X和Y具有本文所述的值中的任何值。
在一些实施方式中，化合物进一步定义为：
或其药用盐、溶剂化物或互变异构体，其中：R1、R2、X和Y具有本文所述的值中的任何值。在一些实施方式中，R1可为未取代的C1-8烷基、取代的C1-8烷基、未取代的C6或10芳基、取代的C6或10芳基、未取代的C7-10芳烷基或取代的C7-10芳烷基；R2可为氢、未取代的C1-6烷基或取代的C1-6烷基；X可为卤素、氰基、未取代的C1-12烷基、取代的C1-12烷基、未取代的C1-12烷氧基、取代的C1-12烷氧基、未取代的C6或10芳基、取代的C6或10芳基、未取代的C7-10芳烷基、取代的C7-10芳烷基、未取代的5-10元杂芳基、取代的5-10元杂芳基、未取代的3-10元杂环烷基、取代的3-10元杂环烷基、未取代的C6或10芳氧基、取代的C6或10芳氧基、未取代的C2-12酰氧基、取代的C2-12酰氧基，或或者X可为其中A'为-CF2-、-O-、C1-6亚烷基、C1-8亚烷氧基，或者为共价键从而形成环丙烷环；R8和R9各自独立地为未取代的C1-8烷基或取代的C1-8烷基；并且R10可为氢、-OH、-CN、-NH2、-CF3、-CF2H、-CFH2、-CO2H、-CO2-C1-6烷基、-C(＝O)NH2、-CH2OH、-CH2O-C1-6烷基，或C1-6烷氧基。
在一些实施方式中，化合物进一步定义为：
或其药用盐、溶剂化物或互变异构体，其中：R1、R2、X和Y具有本文所述的值中的任何值。
在一些实施方式中，R1为烷基(C≤8)，诸如甲基。在一些实施方式中，R2为氢。在其它实施方式中，R2为在体内可转化为氢的取代基，其产生前药。
在一些实施方式中，X为卤素，诸如溴、氟或氯。在其它实施方式中，X为氰基。在其它实施方式中，X为烷基(C≤8)。在一些实施方式中，X为烷基(C3-6)，诸如叔丁基。在其它实施方式中，X为烷氧基(C≤8)，诸如甲氧基。
在一些实施方式中，Y为氢。在其它实施方式中，Y为卤素，诸如溴、氟或氯。在其它实施方式中，Y为氰基。在其它实施方式中，Y为烷基(C≤8)。在一些实施方式中，Y为烷基(C3-6)，诸如叔丁基。在其它实施方式中，Y为烷氧基(C≤8)，诸如甲氧基。
在一些实施方式中，碳原子21处于S构型。在一些实施方式中，X处于3位。在一些实施方式中，Y处于4位或5位。
在一些实施方式中，R1可为未取代的C1-8烷基。在一些实施方式中，R1可为甲基。在一些实施方式中，R2可为氢。在一些实施方式中，X可为氢、卤素、氰基、未取代的C1-12烷基、取代的C1-12烷基、未取代的C1-12烷氧基、取代的C1-12烷氧基、未取代的C6或10芳基、取代的C6或10芳基、未取代的C7-12芳烷基、取代的C7-12芳烷基、未取代的5-10元杂芳基、取代的5-10元杂芳基、未取代的3-10元杂环烷基、取代的3-10元杂环烷基、未取代的C6或10芳氧基、取代的C6或10芳氧基、未取代的C2-12酰氧基、取代的C2-12酰氧基。在一些实施方式中，X为氢、卤素、氰基、未取代的C1-12烷基、取代的C1-12烷基、未取代的C6或10芳基、取代的C6或10芳基、未取代的C7-12芳烷基、取代的C7-12芳烷基、未取代的5-10元杂芳基、取代的5-10元杂芳基、未取代的3-10元杂环烷基、取代的3-10元杂环烷基、未取代的C6或10芳氧基、取代的C6或10芳氧基、未取代的C2-12酰氧基、取代的C2-12酰氧基或在一些实施方式中，X可为卤素。在一些实施方式中，X可为溴、氟或氯。在一些实施方式中，X可为-CF3。在一些实施方式中，X可为-OH或氰基。在一些实施方式中，X可为未取代的C1-8烷基。在一些实施方式中，X可为未取代的C3-6烷基。在一些实施方式中，X可为叔丁基。在一些实施方式中，X可为未取代的C1-8烷氧基。在一些实施方式中，X可为甲氧基或异丙氧基。在一些实施方式中，Y可为叔丁基。在一些实施方式中，Y可为在一些实施方式中，R8和R9各自独立地为未取代的C2-8烷基。在一些实施方式中，R8可为甲基，并且R9可为未取代的C2-8烷基。在一些实施方式中，R8和R9各自为-CH3。在一些实施方式中，R10可为-CF3、-CF2H或-CFH2。在一些实施方式中，R10可为-CF3。在一些实施方式中，R10可为氢或-CH3。在一些实施方式中，Y可为在一些实施方式中，A”可为C1-3亚烷基，C1-4亚烷氧基，或者为共价键从而形成环丙烷环。在一些实施方式中，A”可为共价键，从而形成环丙烷环。在一些实施方式中，R11可为-CF3、-CF2H、-CH2F、-CH2O-C1-6烷基、C1-6烷基或C1-8烷氧基。在一些实施方式中，R11可为-CF3、-CF2H、-CH2F、C1-6烷基或C1-6烷氧基。在一些实施方式中，R11可为-CF3、-CF2H或甲氧基。在一些实施方式中，R11可为-CF3、-CF2H。在一些实施方式中，R11可为-CH2O-CH3。在一些实施方式中，X可处于3位。在一些实施方式中，Y可处于4位或5位。在一些实施方式中，化合物可为整合素拮抗剂。在一些实施方式中，整合素可为α5β1整合素拮抗剂。在一些实施方式中，如通过针对α5β1整合素功能的固相受体测定法所测量的，该化合物表现出针对α5β1整合素的IC50值小于50nM、40nM、30nM、20nM、15nm或1nM，或者由前述任一项定义的范围。在一些实施方式中，整合素为αvβ1整合素拮抗剂。在一些实施方式中，如通过针对αvβ1整合素功能的固相受体测定法所测量的，该化合物表现出针对αvβ1整合素的IC50值小于15nM。在一些实施方式中，如通过针对αvβ3整合素功能的固相受体测定法所测量的，该化合物表现出针对αvβ3整合素的IC50值小于10nM。在一些实施方式中，如通过针对αvβ5整合素功能的固相受体测定法所测量的，该化合物表现出针对αvβ5整合素的IC50值小于10nM。在一些实施方式中，如通过针对αvβ1整合素功能、αvβ3整合素功能和αvβ5整合素功能的固相受体测定法所测量的，该化合物表现出针对αvβ1整合素、αvβ3整合素和αvβ5整合素的IC50值小于10nM。在一些实施方式中，如通过针对αvβ6整合素功能的固相受体测定法所测量的，该化合物表现出针对αvβ6整合素的IC50值大于10nM。在一些实施方式中，如通过针对αvβ8整合素功能的固相受体测定法所测量的，该化合物表现出针对αvβ8整合素的IC50值大于10nM。在一些实施方式中，如通过针对αvβ6整合素功能和αvβ8整合素功能的固相受体测定法所测量的，该化合物表现出针对αvβ6整合素和αvβ8整合素的IC50值大于10nM。
在一些实施方式中，化合物为整合素拮抗剂，诸如αvβ1整合素拮抗剂。在一些实施方式中，如通过针对αvβ1整合素功能的固相受体测定法所测量的，该化合物表现出针对αvβ1整合素的IC50值小于15nM。在一些实施方式中，如通过针对αvβ6整合素功能的固相受体测定法所测量的，该化合物表现出针对αvβ3整合素的IC50值小于10nM。在一些实施方式中，如通过针对αvβ5整合素功能的固相受体测定法所测量的，该化合物表现出针对αvβ5整合素的IC50值小于10nM。在一些实施方式中，如通过针对αvβ1整合素功能、αvβ3整合素功能和αvβ5整合素功能的固相受体测定法所测量的，该化合物表现出针对αvβ1整合素、αvβ3整合素和αvβ5整合素的IC50值小于10nM。在一些实施方式中，如通过针对αvβ1整合素功能的固相受体测定法所测量的，该化合物表现出针对αvβ6整合素的IC50值大于10nM。在一些实施方式中，如通过针对αvβ1整合素功能的固相受体测定法所测量的，该化合物表现出针对αvβ8整合素的IC50值大于10nM。在一些实施方式中，如通过针对αvβ6整合素功能和αvβ8整合素功能的固相受体测定法所测量的，该化合物表现出针对αvβ6整合素和αvβ8整合素的IC50值大于10nM。
在一些实施方式中，化合物进一步定义为：
或其药用盐。在一些实施方式中，化合物进一步定义为：
或其药用盐。
在一些实施方式中，化合物进一步定义为：
或其药用盐、溶剂化物或互变异构体。
在一些实施方式中，化合物进一步定义为：
或其药用盐、溶剂化物或互变异构体。
在又一方面，本公开提供下式的化合物：
或其药用盐。在一些实施方式中，化合物进一步定义为：
或其药用盐。
在又一方面，本公开提供药物组合物，包含：
a)如本文公开和描述的化合物；和
b)赋形剂。
在一些实施方式中，药物组合物被配制用于以下方式施用：口服、脂肪内、动脉内、关节内、颅内、皮内、病灶内、肌内、鼻内、眼内、心包内、腹膜内、胸膜内、前列腺内、直肠内、鞘内、气管内、瘤内、脐内、阴道内、静脉内、膀胱内、玻璃体内、脂质体内、局部(locally)、粘膜内、肠胃外、直肠内、结膜下、皮下、舌下、外用(局部，topically)、经口、经皮、经阴道、在月经中、在脂质组合物中、经由导管、经由灌洗、经由连续输注、经由输注、经由吸入、经由注射、经由局部递送或经由局部灌注。药物组合物可被配制用于口服、外用、静脉内或玻璃体内施用。在一些实施方式中，药物组合物被配制为单位剂量。
在另一方面，本公开提供治疗和/或预防有此需要的患者的疾病或紊乱的方法，包括以足以治疗和/或预防疾病或紊乱的量向患者施用本文所述的化合物或组合物。在一些实施方式中，该疾病或紊乱与纤维化相关联。该疾病或紊乱可为硬皮病，或肺、肝脏、肾、心脏、皮肤或胰腺的纤维化。在一些实施方式中，该疾病或紊乱为肺的纤维化。在其它实施方式中，该疾病或紊乱为肝脏的纤维化。在其它实施方式中，该疾病或紊乱为心脏的纤维化。在其它实施方式中，该疾病或紊乱为肾的纤维化。在其它实施方式中，该疾病或紊乱为胰腺的纤维化。在其它实施方式中，该疾病或紊乱为皮肤的纤维化。在一些实施方式中，该疾病或紊乱为硬皮病。
在一些实施方式中，患者为人、猴、牛、马、绵羊、山羊、狗、猫、小鼠、大鼠、豚鼠或其转基因物种。患者可为猴、牛、马、绵羊、山羊、狗、猫、小鼠、大鼠或豚鼠。另选地，患者可为人。
在又一方面，本公开提供抑制整合素的结合的方法，包括将整合素与本文所述的化合物或组合物接触。整合素可为α5β1、αvβ1、αvβ3或αvβ5。在一些实施方式中，整合素为α5β1。在一些其它实施方式中，整合素为αvβ1。在一些实施方式中，该方法在体外进行。在其它实施方式中，该方法离体或在体内进行。在一些实施方式中，结合的抑制足以治疗或预防患者的疾病或紊乱。
一些实施方式提供治疗和/或预防有此需要的患者的疾病或紊乱的方法，包括以足以治疗和/或预防疾病或紊乱的量向患者施用本文公开和描述的化合物或组合物。在一些实施方式中，该疾病或紊乱与纤维化相关联。在一些实施方式中，该疾病或紊乱为硬皮病，或肺、肝脏、肾、心脏、皮肤或胰腺的纤维化。在一些实施方式中，该疾病或紊乱为肺的纤维化。在一些实施方式中，该疾病或紊乱为肝脏的纤维化。在一些实施方式中，该疾病或紊乱为心脏的纤维化。在一些实施方式中，该疾病或紊乱为肾的纤维化。在一些实施方式中，该疾病或紊乱为胰腺的纤维化。在一些实施方式中，该疾病或紊乱为皮肤的纤维化。在一些实施方式中，该疾病或紊乱为硬皮病。在一些实施方式中，患者为人、猴、牛、马、绵羊、山羊、狗、猫、小鼠、大鼠、豚鼠或其转基因物种。在一些实施方式中，患者为猴、牛、马、绵羊、山羊、狗、猫、小鼠、大鼠或豚鼠。在一些实施方式中，患者为人。
一些实施方式提供抑制整合素的结合的方法，包括将整合素与本文公开和描述的化合物或组合物接触。在一些实施方式中，整合素为α5β1、αvβ1、αvβ3或αvβ5。在一些实施方式中，整合素为αvβ1。在一些实施方式中，整合素为α5β1。在一些实施方式中，该方法在体外进行。在一些实施方式中，该方法离体或在体内进行。在一些实施方式中，结合的抑制足以治疗或预防患者的疾病或紊乱。
根据以下详细描述，本公开的其它目的、特征和优点将变得显而易见。然而，应理解，详细描述和具体示例虽然指示本公开的具体实施方式，但仅以说明的方式给出，因为本领域技术人员将根据该详细描述明白在本公开的精神和范围内的各种改变和修改。请注意，仅仅因为特定一个化合物归于一个特定的通式，并不意指它不能还属于另一个通式。
具体实施方式
本文公开可用作α5β1或αvβ1整合素拮抗剂的新化合物和组合物、其制造方法以及其使用方法，包括用于治疗和/或预防由整合素介导的疾病或紊乱。在一些实施方式中，本文提供的化合物可用于整合素α5β1、αvβ1、αvβ3和/或αvβ5的选择性抑制或拮抗。在一些实施方式中，本文提供的化合物表现出整合素αvβ6、αvβ8和/或αIIbβ3的抑制或拮抗活性降低。
I.化合物和合成方法
本公开提供的化合物可使用下面概述的方法制成，并在实施例部分中进一步描述。本领域技术人员将容易理解，实施例中描述的条件和方法的已知变化可用于合成本公开的化合物。所用的起始材料和设备可通过先前报道的方法制备，并且可由本领域技术人员容易地复制。例如，在March’s Advanced Organic Chemistry:Reactions,Mechanisms,and Structure(2007)中教导此类原理和技术，该文献通过引用并入本文。
在一些实施方式中，本公开的化合物包括下文列出的实施例和权利要求中描述的化合物。一些实施方式包括作为整合素αvβ1抑制剂有活性的化合物，诸如下表1中列出的化合物(其含有非大体积X和Y取代基)。一些实施方式包括作为整合素αvβ1抑制剂有活性的化合物，与表1中的化合物相比，这些化合物通常也作为整合素α5β1的抑制剂具有增加的活性，诸如下表2中列出的化合物(其含有大体积Y取代基)。
表1：本公开的实施例化合物
表2：本公开的实施例化合物
本公开的所有化合物可用于预防和治疗本文论述的或一种或多种疾病或紊乱。在一些实施方式中，本文中表征或例示为中间体、代谢物和/或前药的化合物中的一种或多种也可用于预防和治疗一种或多种疾病或紊乱。由此，除非明确相反地陈述，否则本发明的化合物中的所有被视为设想用作活性药物成分(API)的“活性化合物”和“治疗化合物”。人类或兽医使用的实际适用性通常使用临床试验方案和监管程序，诸如由食品和药品管理局(FDA)管理的程序的组合而确定。在美国，FDA负责通过确保人类药物和兽药、疫苗和其它生物产物以及医疗器械的安全、有效性、质量和安全性而保护公众健康。
在一些实施方式中，本公开的化合物的优点在于，无论是否用于本文所陈述的适应症，它们可比现有技术中已知的化合物更有效、比现有技术中已知的化合物毒性更小、比现有技术中已知的化合物作用时间更长、比现有技术中已知的化合物产生的副作用更少、比现有技术中已知的化合物更容易吸收和/或具有比现有技术中已知的化合物更好的药代动力学特征(例如，更高的口服生物利用度和/或更低的清除率)，和/或具有相对于现有技术中已知的化合物其它有用的药理学性质、物理性质或化学性质。
本公开方法中采用的化合物可含有一个或多个不对称取代的碳原子或氮原子，并可以光学活性或外消旋形式分离。因此，除非特别指出特定的立体化学或异构形式，否则旨在结构的所有手性、非对映异构、外消旋形式、差向异构形式和所有几何异构形式。化合物可以外消旋体和外消旋混合物、单一对映异构体、非对映异构体混合物和单独的非对映异构体形式存在。在一些实施方式中，获得单一的非对映异构体。本公开的化合物的手性中心可具有如由国际纯粹与应用化学联合会1974年建议(IUPAC 1974 Recommendations)所定义的S构型或R构型。在一些实施方式中，本公开的化合物处于S构型。例如，可使用以下实施例部分中教导的技术及其修改而分离立体异构体的混合物。还包括互变异构形式以及此类异构体和互变异构体的药用盐。
构成本公开的化合物的原子旨在包括此类原子的所有同位素形式。本公开的化合物包括具有一个或多个已同位素修饰或富集的原子的化合物，特别为具有药用同位素的化合物或可用于药学研究的化合物。如本文所用，同位素包括具有相同原子序数但不同质量数的原子。作为一般实例而非限制，氢的同位素包括氘和氚，并且碳的同位素包括13C和14C。类似地，设想本公开的化合物的一个或多个碳原子可被硅原子取代。此外，设想本公开的化合物的一个或多个氧原子可被硫原子或硒原子取代。
本公开的化合物还可以前药形式存在。由于已知前药增强药物的许多所需品质(例如，溶解度、生物利用度、制造等)，如果需要，本公开的一些方法中采用的化合物可以前药形式递送。因此，本公开设想本公开的化合物的前药以及递送前药的方法。本公开中采用的化合物的前药可通过修饰化合物中存在的官能团而制备，使得修饰在例行操作中或在体内裂解成母体化合物。因此，前药包括，例如，本文所述的化合物，其中羟基、氨基或羧基与任何基团键合，当向受试者施用前药时，所述基团分别裂解形成羟基、氨基或羧酸。
应认识到，形成本公开的任何盐的一部分的特定阴离子或阳离子并不重要，只要该盐作为整体为药理学上可接受的。药用盐及其制备和使用方法的其它实施例载于Handbook of Pharmaceutical Salts:Properties,and Use(2002)中，其通过引用并入本文。
应进一步认识到，本公开的化合物包括已进一步修饰以包含在体内可转化为氢的取代基的化合物。这包括可通过酶学或化学方法转化为氢原子的那些基团，包括但不限于水解和氢解。实例包括可水解基团，诸如酰基、具有氧羰基的基团、氨基酸残基、肽残基、邻硝基苯基亚磺酰基、三甲基甲硅烷基、四氢吡喃基、二苯基氧膦基等。酰基的实施例包括甲酰基、乙酰基、三氟乙酰基等。具有氧羰基的基团的实施例包括乙氧基羰基、叔丁氧基羰基(-C(O)OC(CH3)3，Boc)、苄氧基羰基、对甲氧基-苄氧基羰基、乙烯氧基羰基、β-(对甲苯磺酰基)乙氧基羰基等。合适的氨基酸残基包括但不限于以下的残基：Gly(甘氨酸)、Ala(丙氨酸)、Arg(精氨酸)、Asn(天冬酰胺)、Asp(天冬氨酸)、Cys(半胱氨酸)、Glu(谷氨酸)、His(组氨酸)、Ile(异亮氨酸)、Leu(亮氨酸)、Lys(赖氨酸)、Met(蛋氨酸)、Phe(苯丙氨酸)、Pro(脯氨酸)、Ser(丝氨酸)、Thr(苏氨酸)、Trp(色氨酸)、Tyr(酪氨酸)、Val(缬氨酸)、Nva(正缬氨酸)、Hse(高丝氨酸)、4-Hyp(4-羟基脯氨酸)、5-Hyl(5-羟基赖氨酸)、Orn(鸟氨酸)和β-Ala。合适的氨基酸残基的实例还包括用保护基保护的氨基酸残基。合适的保护基团的实例包括肽合成中通常采用的基团，包括酰基(诸如甲酰基和乙酰基)、芳基甲氧基羰基(诸如苄氧基羰基和对硝基苄氧基羰基)、叔丁氧基羰基(-C(O)OC(CH3)3，Boc)等。合适的肽残基包括含有2至5个氨基酸残基的肽残基。这些氨基酸或肽的残基可以D-形式、L-形式或其混合物的立体化学构型存在。另外，氨基酸或肽残基可具有不对称碳原子。具有不对称碳原子的合适氨基酸残基的实例包括以下的残基：Ala、Leu、Phe、Trp、Nva、Val、Met、Ser、Lys、Thr和Tyr。具有不对称碳原子的肽残基包括具有一个或多个具有不对称碳原子的组成氨基酸残基的肽残基。合适的氨基酸保护基团的实例包括肽合成中通常采用的基团，包括酰基(诸如甲酰基和乙酰基)、芳基甲氧基羰基(诸如苄氧基羰基和对硝基苄氧基羰基)、叔丁氧基羰基(-C(O)OC(CH3)3)等。“在体内可转化为氢”的取代基的其它实例包括可还原消除的可氢解基团。合适的可还原消除的可氢解基团的实例包括但不限于芳基磺酰基(诸如邻甲苯磺酰基)；用苯基或苄氧基取代的甲基(诸如苄基、三苯甲基和苄氧基甲基)；芳基甲氧基羰基(诸如苄氧基羰基和邻甲氧基-苄氧基羰基)；和卤代乙氧基羰基(诸如β,β,β-三氯乙氧基羰基和β-碘乙氧基羰基)。
I.生物活性
本发明的另一个目的为提供可作为αvβ1和/或α5β1整合素拮抗剂的新化合物和组合物、其制备方法以及其使用方法，包括用于治疗和/或预防由整合素介导的疾病或紊乱。在一些实施方式中，化合物可用于整合素α5β1、整合素αvβ1、整合素αvβ3和/或整合素αvβ5的选择性抑制或拮抗。在一些实施方式中，本文提供的化合物表现出整合素αvβ3、整合素αvβ5、整合素αvβ6、整合素αvβ8和/或整合素αIIbβ3的抑制或拮抗活性降低。在一些进一步的实施方式中，本文提供的化合物表现出降低的整合素αvβ3和/或整合素αvβ5的抑制或拮抗活性。
这些化合物和组合物可用于抑制或拮抗整合素，因此在另一个实施方式中，本公开提供用于抑制或拮抗α5β1整合素、αvβ1整合素、αvβ3整合素和/或αvβ5整合素的方法。
尽管不受任何特定理论的束缚，但出乎意料地发现，在取代基X和/或取代基Y上具有至少一个大体积取代基的式(I)化合物表现出针对整合素α5β1的显著增加的活性。大体积取代基的实施例包括未取代的烷基，例如支链烷基；取代的烷基；环状基团，例如环烷基；和杂环烷基。在一些实施方式中，至少一个大体积取代基位于苯环上的间位。缺乏此类大体积取代基的现有化合物主要作用于其它整合素受体，而针对α5β1的活性相对较低。在一些实施方式中，与缺乏此类大体积取代基的结构有关化合物相比，在X或Y上具有大体积基团的式(I)化合物表现出针对整合素α5β1的增加的活性，例如，将表2的化合物(具有大体积Y基团)与表1的化合物(没有大体积X基团或Y基团)以及下表3的比较物化合物进行比较。
表3：比较物化合物
在取代基X和/或取代基Y上具有至少一个大体积基团的式(I)的有关化合物与缺乏此类大体积基团的化合物之间的活性差异为值得注意的。例如，类似于比较物2(CC2)的化合物，但在X和/或Y上具有吡唑(R1)甲基和大体积取代基，与CC2相比提供针对α5β1的增加的活性。具体地，CC2给出针对α5β1的770nM的测量IC50，而实施例21给出12nM，实施例24给出15nM，实施例30给出12nM，并且实施例38(Y＝叔丁基)给出23nM。另外，实施例6(来自表1)给出针对α5β1的158nM的测量IC50，而仅通过添加叔丁基而不同的实施例16(来自表2)给出针对α5β1的30nM的测量IC50，活性增加几倍。实施例17(来自表2)与实施例9(来自表1)的比较指示，当在式(I)化合物的X和/或Y上包含至少一个大体积基团时，活性类似增加。具体地，实施例9给出针对α5β1的110nM的测量IC50，而实施例17给出针对α5β1的11nM的测量IC50。
因此，在取代基X和/或取代基Y上具有至少一个大体积基团的式(I)化合物可用于治疗涉及整合素α5β1活性的病症。据信表达α5β1的细胞在并入第九和第十III型纤连蛋白重复的区域中结合到纤连蛋白，据信后者含有用于整合素结合的RGD基序。除纤连蛋白外，据报道α5β1与其它含RGD的细胞外基质蛋白(包括纤维蛋白原、变性胶原和原纤维蛋白-1)相互作用(Bax et al.,J.Biol.Chem.,278(36):34605-34616,2003,2003；Perdih,Curr.Med.Chem.,17(22):2371-2392,2010；Suehiro et al.,J.Biochem.,128(4):705-710,2000)。这些配体通常被分类为临时基质的组分，临时基质的组分由细胞作为组织中伤口愈合反应的一部分而铺设。该反应的组分为血管生成(新血管形成)和纤维化(瘢痕形成)，其有益于急性损伤的愈合，但在许多疾病背景下可为有害的。许多研究支持α5β1在血管生成中的重要作用。例如，缺乏该整合素的小鼠在第10至11天表现出胚胎致死性，其表型包括胚胎和胚外血管系统中的缺陷(Yang et al.,Development,119(4):1093-1105,1993)。据信血管生成细胞因子诸如bFGF、IL-8、TGFβ和TNFα在体外和体内上调内皮细胞上的α5β1表达，并且免疫组织化学表明来自各种类型的人肿瘤活组织检查和动物异种移植肿瘤的血管中α5β1和纤连蛋白染色的协调增加(Collo,J.Cell Sci.,112(Pt 4):569-578,1999；Kim etal.,Am.J.Pathol.,156(4):1345-1362,2000)。已观察到特异性抑制α5β1的单克隆抗体和已被描述为α5β1抑制剂的化合物在一些实验模型中显著减少血管生成(Kim et al.,Am.J.Pathol.,156(4):1345-1362,2000；Bhaskar et al.,J.Transl.Med.,5:61,2007；Livant et al.,J.Clin.Invest.,105(11):1537-1545,2000；Zahn et al.,Arch.Ophthalmol.,127(10):1329-1335,2009)。
α5β1表达不限于内皮，并且除了血管发生之外它还可具有其它功能性作用。α5β1在许多细胞类型中不同程度地表达，包括成纤维细胞、造血细胞和免疫细胞、平滑肌细胞、上皮细胞和肿瘤细胞。肿瘤细胞上的表达与肿瘤生长和转移的进展有关联(Adachi et al.,Clin.Cancer Res.,6(1):96-101,2000,2000；Blase et al.,Int.J.Cancer,60(6):860-866,1995；Danen et al.,Histopathology,24(3):249-256,1994；Edward,Curr.Opin.Oncol.,7(2):185-191,1995)。在人成纤维细胞中，发现α5β1促进运动和存活(Lobert et al.,Dev.Cell,19(1):148-159,2010)。在胰腺星状细胞中，α5β1与结缔组织生长因子相互作用以刺激粘附、迁移和纤维形成(Gao and Brigstock,Gut,55:856-862,2006)。已表明，α5β1的药理学拮抗作用抑制体外人的视网膜上皮细胞的附着迁移和增殖，并且当玻璃体内给予视网膜脱离的兔时，减少视网膜细胞增殖和瘢痕形成(Li et al.,Invest.Ophthalmol.Vis.Sci.,50(12):5988-5996,2009；Zahn et al.,Invest.Ophthalmol.Vis.Sci.,51(2):1028-1035,2010)。
在一些实施方式中，式(I)化合物可用于治疗血管发生和/或相关病症。这些相关病症包括纤维化，例如纤维肌瘤生长，和/或细胞增殖疾病，例如癌症。一些实施方式包括在纤维化和血管生成的治疗或预防中使用式(I)化合物。在一些实施方式中，将式(I)化合物施用于患有癌症的患者。在进一步的实施方式中，将式(I)化合物施用于患有纤维化生长的患者。在更进一步的实施方式中，式(I)化合物减缓纤维肌瘤的生长，停止纤维肌瘤的生长，或逆转纤维肌瘤的生长。在进一步的实施方式中，纤维肌瘤为肿瘤。
术语“肿瘤”在本文中广泛用于意指任何非先天性、病理性、局部组织生长。肿瘤可为良性的，例如血管瘤、神经胶质瘤、畸胎瘤等，或者可为恶性的，例如癌、肉瘤、成胶质细胞瘤、星形细胞瘤、神经母细胞瘤、视网膜母细胞瘤等。肿瘤可为转移性的也可不为转移性的。术语“癌症”通常用于指伴随恶性肿瘤出现的疾病。肿瘤可为例如肺癌、乳腺癌、前列腺癌、宫颈癌、胰腺癌、结肠癌或卵巢癌的癌，或者肉瘤，例如骨肉瘤或卡波西肉瘤。
在进一步的实施方式中，纤维肌瘤为纤维瘤。纤维瘤可为例如硬纤维瘤或软纤维瘤。纤维瘤可为，例如，血管纤维瘤、囊性纤维瘤、粘液纤维瘤、牙骨质骨化纤维瘤、软骨粘液纤维瘤、增生性纤维瘤、非骨化纤维瘤，骨化纤维瘤、项纤维瘤、胶原纤维瘤、腱鞘纤维瘤、毛囊周围纤维瘤、多形性纤维瘤、子宫纤维瘤、神经纤维瘤或卵巢纤维瘤。
整合素αvβ1在器官纤维化的主要细胞介质活化的肌成纤维细胞的表面上表达(Henderson et al.,2013)。此外，最近的一项研究表明，细胞表达的αvβ1在体外直接结合并激活促纤维化生长因子，转化生长因子-β1(TGFβ1)(Reed et al.,2015)。同样的研究还表明，用选择性αvβ1小分子抑制剂进行治疗处理可减轻小鼠肺或肝脏中损伤诱导的纤维化。总之，这些数据为αvβ1在组织纤维化中的体内关键作用提供证据。
与αvβ1一样，整合素αvβ3和整合素αvβ5也能够在体外结合和激活潜伏的TGFβ(Tatler,et al.,2011；Wipff,et al,2007)。αvβ3的特异性阻断降低TGFβ信号传导并且可使细胞中的促纤维化基因表达模式正常化(Wipff,et al.,2007；Asano,et al.,2005a；Patsenker,et al.,2007)。缺乏β-3亚基表达并因此缺乏αvβ3表达的小鼠表现出减弱的CCL18驱动的肺胶原蛋白积聚(Luzina,et al.,2009)，并且在人类“硬皮综合征”(硬皮病的一种形式)的小鼠模型中受到保护(Gerber,et al.,2013)。整合素αvβ5在细胞上表达水平的调节影响TGFβ信号通路组分的核定位，并改变纤维化标志物诸如α平滑肌肌动蛋白和胶原蛋白的表达(Luzina,et al.,2009；Asano,et al.,2005b；Scotton,et al.,2009)。
整合素αvβ3和整合素αvβ5与促进血管生成有关联(Avraamides et al.,2008)，因此可预测除了其它整合素外，它们的拮抗作用提供对该过程的优异阻断。还已知整合素αvβ3在肿瘤细胞转移中起作用，并且在与骨质疏松症和一些癌症相关联的骨吸收增加中起作用(Nakamura et al.,2007；Schneider et al.,2011)。
另外，在一些方面，本公开的拮抗剂表现出对其它整合素诸如αvβ6和αvβ8的活性降低。这些特异性整合素的丢失或过度抑制与炎症有关的副作用或小鼠自身免疫的发展相关联(Huang,et al.,1996；Lacy-Hulbert,et al.,2007；Travis,et al.,2007；Worthington,et al.,2015)。
另外，在一些实施方式中，本发明的化合物对整合素αIIbβIII表现出抑制或拮抗活性降低，整合素αIIbβIII为在血小板上发现的整合素复合物。整合素αIIbβIII抑制与血小板聚集的中断相关联，血小板聚集与治疗某些疾病或紊乱时的毒性和/或禁忌相关联。在一些实施方式中，本文提供的化合物相对于非靶向整合素，例如整合素αIIbβIII，对整合素αvβ1和整合素α5β1表现出增加的特异性。在一些实施方式中，本文提供的化合物可用作抗纤维化剂，其最小化与出血性疾病相关联的毒性的可能性。
尽管不受任何特定理论的束缚，但出乎意料地发现具有大体积X取代基和/或Y取代基的某些式(I)化合物(其中X、Y取代模式为2,5二取代)表现出对αvβ1和α5β1的抑制活性，同时免于影响αvβ3、αvβ5、αvβ6和/或αvβ8。例如，实施例32对αvβ1和α5β1表现出高抑制活性，而在αvβ3、αvβ5、αvβ6和αvβ8处表现出低活性。因此，一些实施方式包括根据式(Iba)的化合物。
存在许多类型的整合素，并且许多细胞在其表面上具有多种类型。整合素对所有动物都至关重要，并且已在从海绵动物到哺乳动物的所有被研究动物中发现。作为靶向整合素的此类化合物已在不同的动物中发现许多用途，包括伴侣动物、家畜，动物园动物以及野生动物。整合素已在人类中广泛研究。整合素与其它蛋白质诸如钙粘蛋白、免疫球蛋白超家族细胞粘附分子、选择蛋白和联蛋白聚糖协同作用以介导细胞-细胞和细胞-基质的相互作用和交流。整合素结合细胞表面和ECM组分诸如纤连蛋白、玻连蛋白、胶原蛋白和层粘连蛋白。
每个整合素由α糖蛋白亚基和β糖蛋白亚基的非共价异二聚体形成，其组合传达不同的生物活性诸如细胞附着、迁移、增殖、分化和存活。目前，已在哺乳动物中描述24种整合素，其通过18个α亚基和8个β亚基的配对形成，并列于表4中：
表4-整合素
另外，一些亚基的变体通过差异剪接形成；例如，存在β-1亚基的四种变体。通过这些α亚基和β亚基的不同组合，生成大约24种独特的整合素，尽管数量根据不同的研究而变化。
在一些实施方式中，化合物为整合素拮抗剂，诸如α5β1整合素拮抗剂。在一些实施方式中，如通过针对α5β1整合素功能的固相受体测定法所测量的，该化合物表现出针对α5β1整合素的IC50值小于20nM、小于15nM或小于10nM。在一些实施方式中，化合物为整合素拮抗剂，诸如αvβ1整合素拮抗剂。在一些实施方式中，如通过针对αvβ1整合素功能的固相受体测定法所测量的，该化合物表现出针对αvβ1整合素的IC50值小于15nM。在一些实施方式中，如通过针对αvβ3整合素功能的固相受体测定法所测量的，该化合物表现出针对αvβ3整合素的IC50值小于10nM。在一些实施方式中，如通过针对αvβ5整合素功能的固相受体测定法所测量的，该化合物表现出针对αvβ5整合素的IC50值小于10nM。在一些实施方式中，如分别通过针对αvβ1整合素功能、αvβ3整合素功能和αvβ5整合素功能的固相受体测定法所测量的，该化合物表现出针对αvβ1整合素、αvβ3整合素和αvβ5整合素的IC50值小于10nM。在一些实施方式中，通过针对αvβ6整合素功能的固相受体测定法所测量的，该化合物表现出针对αvβ6整合素的IC50值大于10nM。在一些实施方式中，如通过针对αvβ8整合素功能的固相受体测定法所测量的，该化合物表现出针对αvβ8整合素的IC50值大于10nM。在一些实施方式中，如分别通过针对αvβ6整合素功能和αvβ8整合素功能的固相受体测定法所测量的，该化合物表现出针对αvβ6整合素和αvβ8整合素中的每一种的IC50值大于10nM。在一些实施方式中，如通过针对αIIbβ3整合素功能的固相受体测定法所测量的，该化合物表现出针对αIIbβ3整合素的IC50值大于2,000nM。在一些实施方式中，如通过针对αIIbβ3整合素功能的固相受体测定法所测量的，该化合物表现出针对αIIbβ3整合素的IC50值大于5,000nM。
II.治疗方法
本公开涉及药物、医学和细胞生物学领域。更具体地，本发明涉及可用作一种或多种特异性整合素的拮抗剂(诸如α5β1整合素、αvβ1整合素、αvβ3整合素和/或αvβ5整合素的拮抗剂)的药剂(化合物)及其药物组合物。因此，这些化合物可用于药物组合物和治疗由一种或多种此类整合素介导的病症的方法中，例如，通过抑制或拮抗这些整合素中的一种或多种。在本公开的几个方面，本文提供的化合物可用于涉及这些整合素中的一种的各种生物学领域、预防学领域或治疗学领域。在本公开的一些方面，本文所述的化合物还可显示与炎性副作用有关联的其它整合素，诸如αvβ6和αvβ8的活性降低(Huang,et al.,1996；Lacy-Hulbert,et al.,2007；Travis,et al.,2007；Worthington,et al.,2015)。
另一方面，本发明提供使用一种或多种本文公开的化合物以及其药物组合物抑制或拮抗α5β1整合素、αvβ1整合素、αvβ3整合素和/或αvβ5整合素中的一种或多种的方法。此类药物组合物进一步包含一种或多种无毒的药用载体和/或稀释剂和/或佐剂(在本文中统称为“载体”材料)，并且如果需要，进一步包含其它活性成分。在一些实施方式中，化合物作为进一步包含药用载体的药物组合物的一部分施用。在一些实施方式中，化合物和/或其药物组合物可口服、胃肠外或通过吸入喷雾施用，或以含有常规药用载体、佐剂和赋形剂的单位剂量制剂局部施用。本文所用的术语肠胃外包括，例如，皮下、静脉内、玻璃体内、肌内、胸骨内、输注技术或腹膜内。在一些实施方式中，本公开的化合物通过任何合适的途径以适合于这种途径的药物组合物的形式施用，并且以对预期治疗有效的剂量施用。本领域普通技术人员使用医学领域熟悉的临床前和临床方法可容易地确定预防或阻止医学病症进展所需的化合物的治疗有效剂量。
基于本领域技术人员熟知和理解的标准实验室实验技术和程序，以及与已知有用性化合物的比较，上述化合物可用于治疗患有上述病理性病症的患者。本领域技术人员将认识到，选择本公开的最合适的化合物在本领域普通技术人员的能力范围内，并且这将取决于多种因素，包括在标准测定和动物模型中获得的结果的评估。
在本公开的几个方面，本文提供的化合物可用于多种生物学领域、预防学领域或治疗学领域，包括其中α5β1整合素、αvβ1整合素、αvβ3整合素和/或αvβ5整合素中的一种或多种起作用的领域。
本公开还涉及治疗或抑制与其纤维化和纤维化疾病，诸如肺纤维化、肾、心脏、肌肉和肝纤维化，硬皮病，瘢痕形成相关联的的病理性病症，诸如视网膜、角膜和皮肤瘢痕形成。另外，此类整合素拮抗剂可用于治疗以骨质损失增加或过多为特征的病症，包括但不限于骨质疏松症、成骨不全症、佩吉特病、恶性体液高钙血症、骨原发癌和转移性癌以及包括类风湿性关节炎的关节炎。此外，此类药剂可用于减少与疾病，诸如癌症、黄斑变性、玻璃体视网膜病变和糖尿病性视网膜病变相关联的病理性血管生成和纤维化。
III.药物配方和给药途径
对于需要此类治疗的动物，尤其为哺乳动物的施用，治疗有效量的化合物通常与一种或多种适合于施用途径的赋形剂组合。设想本公开的化合物以适合于治疗兽医患者以及人类患者的方式配制。在一些实施方式中，兽医患者可为伴侣动物、家畜、动物园动物和野生动物。该化合物可与乳糖、蔗糖、淀粉粉末、链烷酸的纤维素酯、纤维素烷基酯、滑石、硬脂酸、硬脂酸镁、氧化镁、磷酸和硫酸的钠盐和钙盐、明胶、阿拉伯胶、海藻酸钠、聚乙烯吡咯烷酮和/或聚乙烯醇混合，并且为便于施用而制成片剂或胶囊。另选地，可将化合物溶于水、聚乙二醇、丙二醇、乙醇、玉米油、棉籽油、花生油、芝麻油、苯甲醇、氯化钠和/或各种缓冲剂中。其它赋形剂和施用方式在制药领域中为众所周知的，并且可适应所治疗动物的类型。
可用于本公开的药物组合物可进行常规的药物操作，诸如灭菌和/或可含有常规的药物载体和赋形剂，诸如防腐剂、稳定剂、润湿剂、乳化剂、缓冲剂等。
本发明化合物可通过多种方法施用，例如口服或注射(例如皮下、静脉内、腹膜内等)。取决于施用途径，可将活性化合物包衣在材料中以保护化合物免受酸和其它可能使化合物失活的自然条件的作用。它们还可通过疾病或伤口部位的连续灌注/输注而施用。
为了通过肠胃外施用以外的方式施用治疗化合物，可能需要用一种材料涂覆该化合物或与该化合物共同施用，以防止其失活。例如，治疗化合物可在合适的载体，例如脂质体或稀释剂中施用于患者。药用稀释剂包括盐水和水性缓冲溶液。脂质体包括水包油包水CGF乳剂以及常规脂质体。
治疗化合物还可肠胃外、腹膜内、脊柱内或脑内施用。分散体可在甘油、液体聚乙二醇及其混合物和油中制备。在通常的储存和使用条件下，这些制剂可含有防腐剂以防止微生物的生长。
药物组合物可适用于可注射用途，包括无菌水溶液(水溶性的)或分散体和用于临时制备无菌可注射溶液或分散体的无菌粉末。在所有情况下，组合物必须为无菌的并且必须为流动的，以便存在易于注射的程度。它必须在制造和储存条件下稳定，并且必须防止微生物诸如细菌和真菌的污染作用。载体可为溶剂或分散介质，含有例如水、乙醇、多元醇(诸如甘油、丙二醇和液体聚乙二醇等)、其合适的混合物和植物油。例如，通过使用包衣诸如卵磷脂、通过在分散的情况下保持所需的粒度以及通过使用表面活性剂可保持适当的流动性。通过各种抗细菌剂和抗真菌剂，例如对羟基苯甲酸酯、氯丁醇、苯酚、抗坏血酸、硫柳汞等可实现微生物作用的预防。在许多情况下，在组合物中包含等渗剂，例如糖、氯化钠或多元醇诸如甘露醇和山梨糖醇可为有用的。通过在组合物中包含延迟吸收的试剂，例如单硬脂酸铝或明胶，可实现可注射组合物的延长吸收。
通过将所需量的治疗化合物以所需的量与上面枚举的成分中的一种或组合掺入适当的溶剂中，随后过滤灭菌可制备无菌可注射溶液。通常，通过将治疗化合物掺入无菌载体中而制备分散体，所述无菌载体含有基础分散介质和来自上面枚举的那些的所需其它成分。在用于制备无菌可注射溶液的无菌粉末的情况下，制备方法包括真空干燥和冷冻干燥，其从先前无菌过滤的溶液中产生活性成分(即，治疗化合物)加上任何附加的所需成分的粉末。
治疗化合物可口服施用，例如，用惰性稀释剂或可吸收的食用载体一起施用。治疗化合物和其它成分也可包封在硬壳或软壳明胶胶囊中，压制成片剂，或直接掺入受试者的饮食中。对于口服治疗施用、治疗化合物可与赋形剂合并并以可摄入的片剂、口含片、锭剂、胶囊、酏剂、悬浮液、糖浆、糯米纸囊剂等形式使用。当然，治疗化合物在组合物和制剂中的百分比可变化。在此类治疗上有用的组合物中治疗化合物的量使得可获得合适的剂量。
以剂量单位形式配制肠胃外组合物以便于施用和剂量均匀为特别有利的。如本文所用的剂量单位形式指适合作为待治疗受试者的单位剂量的物理上离散的单位；每个单元含有预定量的治疗化合物，该治疗化合物经计算可产生与所需药品载体相关联的所需治疗效果。本公开的剂量单位形式的规格由以下决定并且直接取决于：(a)治疗化合物的独特特性和要实现的特定治疗效果，以及(b)复合此类治疗化合物用于治疗患者选定病症的技术中固有的局限性。
治疗化合物还可局部施用或通过注射到皮肤、眼睛或粘膜。另选地，如果需要局部递送至肺，则可通过吸入干粉或气溶胶制剂而施用治疗化合物。
活性化合物以足以治疗与患者病症相关联的病症的治疗有效剂量施用。例如，可在动物模型系统中评估化合物的功效，该动物模型系统可预测在人或其它动物中治疗疾病的功效，诸如实施例和附图中所示的模型系统。
可从动物研究中针对各种不同动物确定的有效剂量外推治疗剂的有效剂量范围。通常，可根据下式计算人体当量剂量(HED)(单位：mg/kg)(参见，例如，Reagan-Shaw etal.,FASEB J.,22(3):659-661,2008，其通过引用并入本文)：
HED(mg/kg)＝动物剂量(mg/kg)×(动物Km/人Km)
在换算中使用Km因子可得到更准确的HED值，这些值基于体表面积(BSA)而不仅基于体质量。人和各种动物的Km值为众所周知的。例如，平均60kg人(其中BSA为1.6m2)的Km为37，而20kg儿童(BSA 0.8m2)的Km为25。一些相关动物模型的Km也为众所周知的，包括：小鼠Km为3(给定重量为0.02kg，且BSA为0.007)；仓鼠Km为5(重量为0.08kg，且BSA为0.02)；大鼠Km为6(重量为0.15kg，且BSA为0.025)，猴子Km为12(重量为3kg，且BSA为0.24)。
精确量的治疗组合物取决于执业医师的判断并且为每个人特有的。尽管如此，计算的HED剂量提供通用指导。影响剂量的其它因素包括患者的身体和临床状态、施用途径、治疗的预期目标和特定治疗制剂的效力、稳定性和毒性。
施用于受试者的本公开的化合物或包含本公开的化合物的组合物的实际剂量可通过物理和生理因素确定，诸如所治疗的动物类型、年龄、性别、体重、病情严重程度、所治疗疾病的类型、既往或同时的治疗干预、受试者的特发病和施用途径。这些因素可由熟练的技术人员确定。负责施用的执业医师通常将确定组合物中活性成分的浓度和个体受试者的适当剂量。如果出现任何并发症，可由个体医生调整剂量。
在一天或几天的一次或多次剂量施用中，有效量通常为约0.001mg/kg至约1000mg/kg、约0.01mg/kg至约750mg/kg、约100mg/kg至约500mg/kg、约1.0mg/kg至约250mg/kg、约10.0mg/kg至约150mg/kg(取决于施用方式和上述因素)。其它合适的剂量范围包括每天1mg至10000mg、每天100mg至10000mg、每天500mg至10000mg以及每天500mg至1000mg。在一些具体实施方式中，该量小于每天10,000mg，范围为每天750mg至9000mg。
有效量可小于1毫克/千克/天、小于500毫克/千克/天、小于250毫克/千克/天、小于100毫克/千克/天、小于50毫克/千克/天、小于25毫克/千克/天或小于10毫克/千克/天。或者可在1毫克/千克/天至200毫克/千克/天的范围内。例如，关于糖尿病患者的治疗，与未治疗的受试者相比，单位剂量可为使血糖降低至少40％的量。在另一个实施方式中，单位剂量为将血糖降低至非糖尿病受试者的血糖水平的±10％的水平的量。
在其它非限制性实例中，剂量还可包含每次施用约1微克/千克/体重、约5微克/千克/体重、约10微克/千克/体重、约50微克/千克/体重、约100微克/千克/体重、约200微克/千克/体重、约350微克/千克/体重、约500微克/千克/体重、约1毫克/千克/体重、约5毫克/千克/体重、约10毫克/千克/体重、约50毫克/千克/体重、约100毫克/千克/体重、约200毫克/千克/体重、约350毫克/千克/体重、约500毫克/千克/体重、至约1000毫克/千克/体重或更多，以及其中可得出的任何范围。在本文所列数字的可得出范围的非限制性实例中，基于上述数量，可施用约5毫克/千克/体重至约100毫克/千克/体重、约5微克/千克/体重至约500毫克/千克/体重等的范围。
在某些实施方式中，本公开的药物组合物可包含例如至少约0.1％的本公开的化合物。在其它实施方式中，本公开的化合物可包含单位重量的例如约1％至约75％或约25％至约60％，以及其中可得出的任何范围。
设想单剂量或多剂量的药剂。本领域普通技术人员仅使用例行实验可确定递送多剂量的所需时间间隔。例如，受试者可每天以大约12小时的间隔施用两剂量。在一些实施方式中，该药剂每天施用一次。
可按例行时间表施用一种或多种药剂。如本文所用，例行时间表指预定的指定时间段。只要时间表为预定的，则例行时间表可包括相同的时间段或者长度不同的时间段。例如，例行时间表可涉及每天两次、每天一次、每两天一次、每三天一次、每四天一次、每五天一次、每六天一次、每周一次、每月一次或其间任何设定天数或周数。另选地，预定的例行时间表可包括第一周每天施用两次，随后几个月每天施用，等等。在其它实施方式中，本公开规定一种或多种药剂可口服并且其时间取决于或不取决于食物摄入量。因此，例如，可每天早上和/或每天晚上服用药剂，无论受试者何时已进食或将要进食。
IV.联合治疗
除了用作单一治疗之外，本公开的化合物还可用于联合治疗。可用包括两种药剂的单一组合物或药理学制剂，或者用同时施用的两种不同的组合物或制剂实现有效的联合治疗，其中一种组合物包含本公开的化合物，并且另一种包括第二药剂(一种或多种)。另选地，治疗可在其它药剂治疗之前或之后间隔数分钟至数月。
此类联合治疗的非限制性实例包括本公开的一种或多种化合物与另一种药剂的组合，例如消炎剂、化疗剂、放射治疗、抗抑郁剂、抗精神病剂、抗惊厥剂、情绪稳定剂、抗感染剂、抗高血压剂、降胆固醇剂或其它血脂调节剂、促进体重减轻的药剂、抗血栓形成剂、用于治疗或预防心血管事件诸如心肌梗塞或中风的药剂、抗糖尿病剂、用于减少移植排斥反应或移植物抗宿主疾病的药剂、抗关节炎剂、镇痛剂、抗哮喘剂或用于呼吸系统疾病的其它药剂，或用于治疗或预防皮肤病的药剂。本公开的化合物可与设计用于改善患者对癌症的免疫应答的药剂组合，包括但不限于癌症疫苗。
V.定义
当用于化学基团时：“氢”意指-H；“羟基”意指-OH；“氧代(oxo)”意指＝O；“羧基”意指-C(＝O)OH(也写为-COOH或-CO2H)；“卤代”独立地意指-F、-Cl、-Br或-I；“氨基”意指-NH2；“氰基”意指-CN；“叠氮基”意指-N3；“巯基”意指-SH；并且“硫代(thio)”意指＝S。
在化学式的上下文中，符号“-”意指单键，“＝”意指双键，并且“≡”意指三键。符号“----”代表任选的键，如果存在，则为单键或双键。符号代表单键或双键。因此，式涵盖，例如， 并且应理解，没有一个此类环原子形成大于一个双键的一部分。此外，应注意，当连接一个或两个立体原子时，共价键符号“-”不指示任何优选的立体化学。相反，它涵盖所有立体异构体及其混合物。当垂直穿过键绘制时(例如，对于甲基，)，符号指示该基团的附着点。应注意，通常仅以较大的基团的方式识别附着点，以便帮助读者明确地识别附着点。符号意指单键，其中附着于楔形标粗端的基团“在页面外”。符号意指单键，其中附着于楔形标粗端的基团为“在页面内”。符号意指单键，其中双键(例如，E或Z)周围的几何形状未定义。因此，这两种选择以及它们的组合都为预期的。本申请中所示结构原子上的任何未定义的化合价隐含地代表与该原子键合的氢原子。碳原子上的粗点指示附着在该碳上的氢被取向在纸面之外。
当基团“R”被描述为环系统上的“浮动基团”时，例如，在式中：
则R可取代附着于任何环原子的任何氢原子，包括描绘的、暗示的或明确定义的氢，只要形成稳定的结构即可。当基团“R”被描述为稠环系统上的“浮动基团”时，例如在式中：
则除非另有说明，否则R可取代附着于稠合环中任一个的环原子中的任一个上的氢。可置换的氢包括所描绘的氢(例如，上式中附着于氮的氢)、隐含的氢(例如，上式中未示出但被理解为存在的氢)、明确定义的氢和任选的氢，其存在取决于环原子的同一性(例如，当X等于-CH-时，附着于X基团的氢)，只要形成稳定的结构即可。在所示的实例中，R可位于稠环系统的5元环或6元环上。在上面式中，紧接在括号中的基团“R”之后的下标字母“y”代表数字变量。除非另有说明，否则该变量可为0、1、2或任何大于2的整数，仅受环或环系统的可取代氢原子的最大数量限制。
对于化学基团和化合物类别，该基团或类别中的碳原子数如下所示：“Cn”定义该基团/类别中碳原子的确切数量(n)。“C≤n”定义可在该基团/类别中的碳原子的最大数量(n)，对于所论述的基团/类别，其中最小数量尽可能小，例如，可理解为最小碳原子数量在基团“烯基(C≤8)”或类别“烯烃(C≤8)”中为两个。类比“烷氧基(C≤10)”，“烷氧基(C≤10)”表示具有1至10个碳原子的烷氧基。“Cn-n'”定义该基团中碳原子的最小(n)和最大数量(n')。因此，“烷基(C2-10)”表示具有2至10个碳原子的那些烷基。这些碳数指示符可在其修饰的化学基团或类别之前或之后，并且可包括或不包括在括号中，而不表示含义的任何变化。因此，术语“C5烯烃”、“C5-烯烃”、“烯烃(C5)”和“烯烃C5”都为同义词。当本文定义的任何化学基团或化合物类别被术语“取代的”修饰时，不计入取代氢原子的部分中的任何碳原子。因此，具有总共7个碳原子的甲氧基己基为取代的烷基(C1-6)的实例。
当用于修饰化合物或化学基团时，术语“饱和的”指化合物或化学基团不具有碳-碳双键且不具有碳-碳三键，除非如下所述。当该术语用于修饰原子时，它意指原子不为任何双键或三键的一部分。在取代形式的饱和基团的情况下，可存在一个或多个碳氧双键或碳氮双键。并且当存在此类键时，不排除可作为酮-烯醇互变异构或亚胺/烯胺互变异构的一部分出现的碳-碳双键。当术语“饱和的”用于修饰物质的溶液时，它意指该物质不再溶于该溶液中。
当在没有“取代的”修饰语的情况下使用时，术语“脂族”表示如此修饰的化合物或化学基团为非环或环状但非芳香烃化合物或基团。在脂族化合物/基团中，碳原子可以直链、支链或非芳环(脂环族)连接在一起。脂肪族化合物/基团可为饱和的，其通过单个碳-碳键(烷烃/烷基)连接或者为不饱和的，具有一个或多个碳-碳双键(烯烃/烯基)或者具有一个或多个碳-碳三键连接(炔烃/炔基)。
当用于修饰化合物或化学基团时，术语“芳族”指在完全共轭的环状π系统中具有4n+2个电子的平面不饱和环原子。
当在没有“取代的”修饰语的情况下使用时，术语“烷基”指单价饱和脂族基团，其具有碳原子作为附着点，具有直链或支链非环状结构并且除碳和氢之外没有其它原子。基团-CH3(Me)、-CH2CH3(Et)、-CH2CH2CH3(n-Pr或丙基)、-CH(CH3)2(i-Pr、iPr或异丙基)、-CH2CH2CH2CH3(n-Bu)、-CH(CH3)CH2CH3(仲丁基)、-CH2CH(CH3)2(异丁基)、-C(CH3)3(叔丁基、t-丁基、t-Bu或tBu)和-CH2C(CH3)3(新戊基)为烷基的非限制性实例。当在没有“取代的”修饰语的情况下使用时，术语“亚烷基(烷二基，alkanediyl)”指二价饱和脂族基团，其具有一个或两个饱和碳原子作为附着点，具有直链或支链非环状结构，没有碳-碳双键或三键并且除碳和氢之外没有其它原子。基团-CH2-(亚甲基)、-CH2CH2-、-CH2C(CH3)2CH2-和-CH2CH2CH2-为亚烷基的非限制性实例。当在没有“取代的”修饰语的情况下使用时，术语“烷叉基”指二价基团＝CRR'，其中R和R'独立地为氢或烷基。烷叉基的非限制性实例包括：＝CH2、＝CH(CH2CH3)和＝C(CH3)2。“烷烃”指具有式H-R的化合物，其中R为烷基，该术语如上所定义。当这些术语中的任何一个与“取代的”修饰语一起使用时，一个或多个氢原子被-OH、-F、-Cl、-Br、-I、、-NH2、-NO2、-CO2H、-CO2CH3、-CN、-SH、-OCH3、-OCH2CH3、-C(O)CH3、-NHCH3、-NHCH2CH3、-N(CH3)2、-C(O)NH2、-C(O)NHCH3、-C(O)N(CH3)2、-OC(O)CH3、-NHC(O)CH3、-S(O)2OH、或-S(O)2NH2独立地取代。以下基团为取代的烷基的非限制性实例：-CH2OH、-CH2Cl、-CF3、-CH2CN、-CH2C(O)OH、-CH2C(O)OCH3、-CH2C(O)NH2、-CH2C(O)CH3、-CH2OCH3、-CH2OC(O)CH3、-CH2NH2、-CH2N(CH3)2、和-CH2CH2Cl。术语“卤代烷基”为取代烷基的子集，其中氢原子取代限于卤素(即-F、-Cl、-Br或-I)，使得除碳、氢和卤素之外不存在其它原子。基团-CH2Cl为卤代烷基的非限制性实例。术语“氟代烷基”为取代的烷基的子集，其中氢原子取代限于氟，使得除碳、氢和氟之外不存在其它原子。基团-CH2F、-CF3和-CH2CF3为氟代烷基的非限制性实例。
术语“芳基”在没有“取代的”修饰语的情况下使用时指具有芳族碳原子作为附着点的单价不饱和芳族基团，所述碳原子形成一个或多个六元芳环结构的一部分，其中环原子都为碳，并且其中该基团不包括除碳和氢之外的原子。如果存在一个以上环，则环可为稠合的或未稠合的。如本文所用，该术语不排除存在附着于第一芳环或存在的任何附加芳环上的一个或多个烷基、环烷基和/或芳烷基(允许碳数限制)。芳基的非限制性实例包括苯基(Ph)、甲基苯基、(二甲基)苯基、-C6H4CH2CH3(乙基苯基)、萘基和衍生自联苯的单价基团。在当没有“取代的”修饰语的情况下使用时，术语“亚芳基(芳二基，芳烃二基，arenediyl)”指具有两个芳族碳原子作为附着点的二价芳族基团，所述碳原子形成一个或多个六元芳环结构的一部分，其中环原子都为碳，并且其中单价基团不包括除碳和氢之外的原子。如本文所用，该术语不排除存在附着于第一芳环或存在的任何附加芳环上的一个或多个烷基、芳基和/或芳烷基(允许碳数限制)。如果存在大于一个环，则环可为稠合的或未稠合的。未稠合的环可经由以下中的一种或多种连接：共价键、亚烷基或亚烯基(烯二基，alkenediylgroups)(允许碳数限制)。亚芳基的非限制性实例包括：
“芳烃(arene)”指具有式H-R的化合物类，其中R为芳基，该术语如上所定义。苯和甲苯为芳烃的非限制性实例。当这些术语中的任何一个与“取代的”修饰语一起使用时，芳环或附着于其的任何烷基、环烷基和/或芳烷基上的一个或多个氢原子已独立地被-OH、-F、-Cl、-Br、-I、-NH2、-NO2、-CO2H、-CO2CH3、-CN、-SH、-OCH3、-OCH2CH3、-C(O)CH3、-NHCH3、-NHCH2CH3、-N(CH3)2、-C(O)NH2、-C(O)NHCH3、-C(O)N(CH3)2、-OC(O)CH3、-NHC(O)CH3、-S(O)2OH或-S(O)2NH2取代。
在当没有“取代的”修饰语的情况下使用时，术语“芳烷基”指单价基团-亚烷基-芳基，其中术语亚烷基和芳基各自以与上文提供的定义一致的方式使用。非限制性实例为：苯甲基(苄基、Bn)和2-苯基-乙基。当术语芳烷基与“取代的”修饰语一起使用时，来自亚烷基和/或芳基的一个或多个氢原子已独立地被-OH、-F、-Cl、-Br、-I、-NH2、-NO2、-CO2H、-CO2CH3、-CN、-SH、-OCH3、-OCH2CH3、-C(O)CH3、-NHCH3、-NHCH2CH3、-N(CH3)2、-C(O)NH2、-C(O)NHCH3、-C(O)N(CH3)2、-OC(O)CH3、-NHC(O)CH3、-S(O)2OH或-S(O)2NH2取代。取代的芳烷基的非限制性实例为：(3-氯苯基)-甲基和2-氯-2-苯基-乙-1-基。
在当没有“取代的”修饰语的情况下使用时，术语“烷氧基”指基团-OR，其中R为烷基，该术语如上所定义。非限制性实例包括：-OCH3(甲氧基)、-OCH2CH3(乙氧基)、-OCH2CH2CH3、-OCH(CH3)2(异丙氧基)、-OC(CH3)3(叔丁氧基)、-OCH(CH2)2、-O-环戊基和-O-环己基。在当没有“取代的”修饰语的情况下使用时，术语“烷硫基(alkylthio)”和“酰硫基”指基团-SR，其中R分别为烷基和酰基。术语“醇”对应于如上定义的烷烃，其中至少一个氢原子已被羟基取代。术语“醚(ether)”对应于如上定义的烷烃，其中至少一个氢原子已被烷氧基取代。当这些术语中的任何一个与“取代的”修饰语一起使用时，一个或多个氢原子已独立地被-OH、-F、-Cl、-Br、-I、-NH2、-NO2、-CO2H、-CO2CH3、-CN、-SH、-OCH3、-OCH2CH3、-C(O)CH3、-NHCH3、-NHCH2CH3、-N(CH3)2、-C(O)NH2、-C(O)NHCH3、-C(O)N(CH3)2、-OC(O)CH3、-NHC(O)CH3、-S(O)2OH或-S(O)2NH2取代。
当与权利要求和/或说明书中的术语“包含”结合使用时，词语“一”或“一种”的使用可意指“一个”，但它也与“一个或多个”、“至少一个”和“一个或多于一个”的含义一致。
在整个申请中，术语“约”用于指示一个值包括设备的固有误差变化、用于确定该值的方法，或者研究对象之间存在的变化。
“活性成分”(AI)(也称为活性化合物、活性物质、活性剂、药剂、剂、生物活性分子或治疗化合物)为具有生物活性的药物或农药中的成分。类似术语活性药物成分(API)和散装活性物质也用于医学中，术语活性物质可用于农药制剂。
术语“包含”、“具有”和“包括”为开放式连接动词。这些动词中的一个或多个的任何形式或时态，诸如“包含(comprises)”、“包含(comprising)”、“具有(has)”、“具有(having)”、“包括(includes)”和“包括(including)”，也为开放式的。例如，“包含(comprises)”、“具有(has)”或“包括(includes)”一个或多个步骤的任何方法不限于仅拥有那些一个或多个步骤，还涵盖其它未列出的步骤。
在说明书和/或权利要求中使用的术语“有效”意指足以实现期望的、希望的或预期的结果。当在用化合物治疗患者或受试者的上下文中使用时，“有效量”、“治疗有效量”或“药学有效量”意指当施用于受试者或患者用于治疗或预防疾病时，足以实现该疾病的此类治疗或预防的化合物的量。
“赋形剂”为与药物、药物组合物、制剂或药品递送系统的活性成分一起配制的药用物质。例如，可使用赋形剂以稳定组合物，使组合物增大(因此当用于此目的时通常称为“填充剂”、“填充料”或“稀释剂”)，或者赋予最终剂型中的活性成分治疗增强作用，诸如促进药物吸收、降低粘度或增强溶解度。赋形剂包括药学上可接受版本的抗粘附剂、粘合剂、包衣、着色剂、崩解剂、调味剂、助流剂、润滑剂、防腐剂、吸附剂、甜味剂和载体(vehicles)。用作输送活性成分的介质的主要赋形剂通常称为载体。赋形剂也可用于制造过程，例如，除了有助于体外稳定性，例如防止在预期的保存期内变性或聚集之外，还有助于处理活性物质，诸如通过促进粉末流动性或不粘性。赋形剂的适用性通常取决于施用途径、剂型、活性成分以及其它因素而变化。
当用作化合物的修饰语时，术语“水合物”指化合物具有少于一个(例如，半水合物)、一个(例如，一水合物)或多于一个(例如，二水合物)与每个化合物分子相关联的水分子，诸如以化合物的固体形式。
如本文所用，术语“IC50”指获得的最大反应的50％的抑制剂量。这种定量测量指示需要多少特定药物或其它物质(抑制剂)以将给定的生物、生物化学或化学过程(或过程的组分，即酶、细胞、细胞受体或微生物)抑制一半。
第一化合物的“异构体”为一种单独的化合物，其中每个分子含有与第一化合物相同的组成原子，但这些原子在三维上的构型不同。
如本文所用，术语“患者”或“受试者”指活的哺乳动物生物，诸如人、猴、牛、绵羊、山羊、狗、猫、小鼠、大鼠、豚鼠或其转基因物种。在某些实施方式中，患者或受试者为灵长类动物。人类患者的非限制性实例为成人、青少年、婴儿和胎儿。
如本文通常使用的“药用”指在合理的医学判断范围内，适用于与人和动物的组织、器官和/或体液接触而没有过度毒性、刺激、过敏反应或与合理的利益/风险比相称的问题或并发症的那些化合物、材料、组合物和/或剂型。
“药用盐”意指如上所定义的本发明化合物的药用盐，并且其具有所需的药理学活性。此类盐包括由无机酸诸如盐酸、氢溴酸、硫酸、硝酸、磷酸等形成的酸加成盐；或由诸如以下的有机酸形成的酸加成盐：1,2-乙二磺酸、2-羟基乙磺酸、2-萘磺酸、3-苯基丙酸、4,4'-亚甲基双(3-羟基-2-烯-1-羧酸)、4-甲基双环[2.2.2]辛-2-烯-1-羧酸、乙酸、脂肪族单羧酸和二羧酸、脂肪族硫酸、芳香硫酸、苯磺酸、苯甲酸、樟脑磺酸、碳酸、肉桂酸、柠檬酸、环戊烷丙酸、乙磺酸、富马酸、葡庚糖酸、葡萄糖酸、谷氨酸、乙醇酸、庚酸、己酸、羟基萘甲酸、乳酸、十二烷基硫酸、马来酸、苹果酸、丙二酸、扁桃酸酸、甲磺酸、粘康酸、邻-(4-羟基苯甲酰基)苯甲酸、草酸、对氯苯磺酸、苯基取代的链烷酸、丙酸、对甲苯磺酸、丙酮酸、水杨酸、硬脂酸、琥珀酸、酒石酸、叔丁酸乙酯酸、三甲基乙酸、三氟乙酸等。药用盐还包括当酸性质子能够与无机或有机碱反应时可形成的碱加成盐。可接受的无机碱包括氢氧化钠、碳酸钠、氢氧化钾、氢氧化铝和氢氧化钙。可接受的有机碱包括乙醇胺、二乙醇胺、三乙醇胺、氨丁三醇、N-甲基葡糖胺等。应认识到，形成本发明任何盐的一部分的特定阴离子或阳离子并不重要，只要该盐作为一个整体为药理学上可接受的。药用盐及其制备和使用方法的其它实施例记载于Handbook of Pharmaceutical Salts:Properties,and Use(P.H.Stahl&C.G.Wermuth eds.,Verlag Helvetica Chimica Acta,2002)中。
“药用载体(pharmaceutically acceptable carrier)”、“药品载体(drugcarrier)”或简称“载体(carrier)”为与活性成分药物一起配制的药用物质，所述活性成分药物涉及携带、递送和/或运输化学试剂。药品载体可用于改善药物的递送和有效性，包括例如调节药物生物利用度、降低药物代谢和/或降低药物毒性的控释技术。一些药品载体可增加药物递送到特定靶部位的有效性。载体的实施例包括：脂质体、微球(例如，由聚(乳酸-共-乙醇酸)制成)、白蛋白微球、合成聚合物、纳米纤维、蛋白质-DNA复合物、蛋白质缀合物、红细胞、病毒体和树枝状大分子。
“药物药品(pharmaceutical drug)”(也称为药物、药剂、药物制品、药物组合物、药物制剂、药物产物、药用产物、药、药物处理、医药或简称药品)为用于诊断、治愈、治疗或预防疾病的药品。活性成分(AI)(如上定义)为药物或农药中具有生物活性的成分。类似术语活性药物成分(API)和散装活性物质也用于医学中，术语活性物质可用于农药制剂。一些药物和农药产物可含有一种以上的活性成分。与活性成分相反，非活性成分通常在药物环境中称为赋形剂(如上定义)。
“预防”或“防止”包括：(1)抑制可能有风险和/或易患该疾病但尚未经历或显示该疾病的病理或症状中的任何或所有的受试者或患者的疾病发作，和/或(2)减缓可能有风险和/或易患该疾病但尚未经历或显示该疾病的病理或症状中的任何或所有的受试者或患者的疾病的病理或症状的发作。
“前药”意指在体内可代谢转化为根据本发明的抑制剂的化合物。前药本身可相对于给定靶蛋白具有活性或也可相对于给定靶蛋白不具有活性。例如，包含羟基的化合物可作为酯施用，该酯通过体内水解转化为羟基化合物。可在体内转化成羟基化合物的合适的酯包括乙酸盐、柠檬酸盐、乳酸盐、磷酸盐、酒石酸盐、丙二酸盐、草酸盐、水杨酸盐、丙酸盐、琥珀酸盐、富马酸盐、马来酸盐、亚甲基-双-β-羟基萘甲酸盐、龙胆酸盐、羟乙基磺酸盐、二-对甲苯磺酸盐、甲磺酸盐、乙磺酸盐、苯磺酸盐、对甲苯磺酸盐、环己基氨基磺酸盐、喹啉盐、氨基酸酯等。类似地，包含胺基的化合物可作为酰胺施用，该酰胺通过体内水解转化为胺化合物。
“立体异构体”或“光学异构体”为给定化合物的异构体，其中相同的原子与相同的其它原子键合，但三维中那些原子的构型不同。“对映异构体”为给定化合物的立体异构体，它们为彼此的镜像，如左手和右手。“非对映异构体”为给定化合物的非对映异构体的立体异构体。手性分子含有手性中心，也称为立体中心或立体中心，其在带有基团的分子中为任何点，但不一定为原子，使得任何两个基团的交换产生立体异构体。在有机化合物中，手性中心通常为碳原子、磷原子或硫原子，尽管在有机化合物和无机化合物中其它原子也可为立体中心。一个分子可具有多个立体中心，给它很多立体异构体。在立体异构由四面体立体中心(例如，四面体碳)引起的化合物中，假设可能的立体异构体的总数将不超过2n，其中n为四面体立体中心的数量。具有对称性的分子经常具有少于最大可能数量的立体异构体。对映异构体的50:50混合物称为外消旋混合物。另选地，对映异构体的混合物可富含对映异构体，使得一种对映异构体以大于50％的量存在。通常，可使用本领域已知的技术拆分或分离对映异构体和/或非对映异构体。设想对于尚未定义立体化学的任何立构中心或手性轴，该立体中心或手性轴可以其R形式、S形式或作为R形式和S形式的混合物存在，包括外消旋和非外消旋混合物。如本文所用，短语“基本上不含其它立体异构体(substantially freefrom other stereoisomers)”意指组合物含有≤15％，更优选≤10％，甚至更优选≤5％，或最优选≤1％的另一种立体异构体。
“在体内可转化为氢的取代基”意指通过酶学或化学方法，包括但不限于水解和氢解可转化为氢原子的任何基团。实例包括可水解基团，诸如酰基、具有氧羰基的基团、氨基酸残基、肽残基、邻硝基苯基亚磺酰基、三甲基甲硅烷基、四氢吡喃基、二苯基氧膦基等。酰基的实施例包括甲酰基、乙酰基、三氟乙酰基等。具有氧羰基的基团的实例包括乙氧基羰基、叔丁氧基羰基(-C(O)OC(CH3)3)、苄氧基羰基、对甲氧基-苄氧基羰基、乙烯氧基羰基、β-(对甲苯磺酰基)乙氧基羰基等。合适的氨基酸残基包括但不限于以下的残基：Gly(甘氨酸)、Ala(丙氨酸)、Arg(精氨酸)、Asn(天冬酰胺)、Asp(天冬氨酸)、Cys(半胱氨酸)、Glu(谷氨酸)、His(组氨酸)、Ile(异亮氨酸)、Leu(亮氨酸)、Lys(赖氨酸)、Met(蛋氨酸)、Phe(苯丙氨酸)、Pro(脯氨酸)、Ser(丝氨酸)、Thr(苏氨酸)、Trp(色氨酸)、Tyr(酪氨酸)、Val(缬氨酸)、Nva(正缬氨酸)、Hse(高丝氨酸)、4-Hyp(4-羟基脯氨酸)、5-Hyl(5-羟基赖氨酸)、Orn(鸟氨酸)和β-Ala。合适的氨基酸残基的实例还包括用保护基保护的氨基酸残基。合适的保护基团的实例包括肽合成中通常采用的那些，包括酰基(诸如甲酰基和乙酰基)、芳基甲氧基羰基(诸如苄氧基羰基和对硝基苄氧基羰基)、叔丁氧基羰基(-C(O)OC(CH3)3)等。合适的肽残基包括含有2至5个氨基酸残基的肽残基。这些氨基酸或肽的残基可以D-形式、L-形式或其混合物的立体化学构型存在。另外，氨基酸或肽残基可具有不对称碳原子。具有不对称碳原子的合适氨基酸残基的实施例包括以下的残基：Ala、Leu、Phe、Trp、Nva、Val、Met、Ser、Lys、Thr和Tyr。具有不对称碳原子的肽残基包括具有一个或多个具有不对称碳原子的组成氨基酸残基的肽残基。合适的氨基酸保护基团的实施例包括肽合成中通常采用的那些，包括酰基(诸如甲酰基和乙酰基)、芳基甲氧基羰基(诸如苄氧基羰基和对硝基苄氧基羰基)、叔丁氧基羰基(-C(O)OC(CH3)3)等。“在体内可转化为氢”的取代基的其它实施例包括可还原消除的可氢解基团。合适的可还原消除的可氢解基团的实施例包括但不限于芳基磺酰基(诸如邻甲苯磺酰基)；被苯基或苄氧基取代的甲基(诸如苄基、三苯甲基和苄氧基甲基)；芳基甲氧基羰基(诸如苄氧基羰基和邻甲氧基-苄氧基羰基)；和卤代乙氧基羰基(诸如β,β,β-三氯乙氧基羰基和β-碘乙氧基羰基)。
“治疗(Treatment)”或“治疗(treating)”包括(1)抑制经历或显示疾病的病理或症状的受试者或患者的疾病(例如，阻止病理和/或症状的进一步发展)，(2)改善疾病在经历或显示疾病的病理或症状的受试者或患者的疾病(例如，逆转病理和/或症状)，和/或(3)实现正在经历或显示疾病的病理或症状的受试者或患者的疾病的任何可测量的减少。
本文使用的其它缩写如下：1H NMR为质子核磁共振，AcOH为乙酸，Ac2O为乙酸酐，ACN或CH3CN为乙腈，br为宽的，d为双峰，DCM为二氯甲烷，DIAD为偶氮二羧酸二异丙酯，DMA为N,N-二甲基乙酰胺，DMF为N,N-二甲基甲酰胺，DMSO为二甲基亚砜，EtOAc或EA为乙酸乙酯，EtOH为乙醇，FAB MS为快速原子轰击质谱，g为克，GC-MS为气相色谱质谱，HOBT为1-羟基苯并三唑水合物，HPLC为高效液相色谱，L为升，LAH为氢化铝锂，LC-MS为液相色谱质谱，LDA为二异丙基氨基锂，LiHMDS为双(三甲基甲硅烷基)锂酰胺，m为多重数，MeOH为甲醇，mg为毫克，ml为毫升，mL为毫升，MS为质谱，N为正态，N2为氮，Na2SO4为硫酸钠，NMR为核磁共振，PE为石油醚，q为五重峰，rt为保留时间，t为三重峰，THF为四氢呋喃，TLC为薄层色谱，并且Δ表示加热反应混合物。
以上定义取代任何通过引用并入本文的参考文献中的任何冲突定义。然而，定义某些术语的事实不应被视为指示任何未定义的术语为不确定的。相反，所使用的所有术语被认为为以此类术语描述本公开，使得普通技术人员可理解本公开的范围和实践。
VI.实施例
包括以下实施例以演示本公开的优选实施方式。本领域技术人员应理解，以下实施例中公开的技术代表发明人发现的在本公开的实践中很好地起作用的技术，因此可被视为构成其实践的优选模式。然而，根据本公开，本领域技术人员应理解，在不脱离本公开的精神和范围的情况下，可对所公开的具体实施方式进行许多改变并仍然获得相似或类似的结果。
VII.仪器仪表和一般方法
在Agilent 1100系统上进行分析型HPLC分析，并在Agilent 1100系列LC/MSD(G1946C)电喷雾质谱仪系统上进行LC-MS分析。在Biotage KP-C18-HS 120g SNAP柱上使用可变双波长UV检测器并且在Redisep Rf Gold C18盒上使用含有0.05％TFA的乙腈/水梯度，而在Biotage SP4HPFC系统或CombiFlashRf(Teledyne Isco)系统任一个上进行反相制备型HPLC纯化。在Biotage KP-SIL SNAP盒和Redisep Rf硅胶(Isco)盒上使用可变双波长UV检测器，而在Biotage SP4HPFC系统或在CombiFlashRf(Teledyne Isco)系统任一个上进行正常相制备型HPLC纯化。
使用具有二极管阵列检测器的C18分析柱通过分析型HPLC分析所有最终化合物，并在210nm、254nm和280nm处监测峰的纯度。在配备有宽带NMR探针的Bruker Avance-III/400MHz光谱仪上，在氘代溶剂(DMSO-d6、CD3OD和CDCl3)中记录1H和19F NMR光谱。氘代溶剂的信号用作内部参考。化学位移以ppm(δ)表示，偶合常数(J)以赫兹(Hz)表示。除非另有说明，否则反应在干燥氮气氛下进行。
起始材料从商业来源获得，并在通过LC-MS分析验证其纯度后无需进一步纯化即可使用。溶剂为分析级，并按供应的方式使用。按照文献程序合成非市售起始材料，并在进一步纯化后使用，并且通过1H NMR和LC-MS分析验证它们的纯度。
VIII.制备化合物
方案1
制备3-(单取代苯基和二取代苯基)-4-(1-甲基-5-(2-(5,6,7,8-四氢-1,8-萘啶-2-基)乙氧基)-1H-吡唑-3-基)丁酸的一般程序
实施例A
方案2：制备2-(5,6,7,8-四氢-1,8-萘啶-2-基)乙醇
步骤1.制备2-甲基-1,8-二氮杂萘
将2-氨基吡啶-3-甲醛(5.125g，42.0mmol)/丙酮(9.5mL，126.0mmol)和L-脯氨酸(5.31g，46.2mmol)在无水乙醇(70mL)中的混合物在氮气氛下加热回流过夜(15h)。将溶剂真空蒸发，得到淡黄色固体。将固体溶于二氯甲烷(50mL)中，得到白色沉淀，过滤，用二氯甲烷洗涤，合并的滤液真空蒸发，得到黄橙色残余物。将固体再溶于二氯甲烷(50mL)中，用水(1×50mL)洗涤，分离有机层，水层用二氯甲烷(1×25mL)萃取。将合并的有机萃取物用盐水(1×50mL)洗涤，经无水Na2SO4干燥，过滤并真空蒸发，得到脏黄色固体(6.04g，产率99％)。固体的GC-MS分析显示所需产物的质量：m/z 144(M+)；计算的C9H8N2：144.17。1H NMR(400MHz，CDCl3)：δ2.83(s，3H)，7.38(d，J＝8.00Hz，1H)，7.45(dd，1H)，8.09(d，J＝8.00Hz，1H)，8.16(d，J＝8.00Hz，1H)，9.08(s，1H)。样品的1H NMR光谱与产物的建议结构一致。
步骤2.制备(E)-1-乙氧基-2-(1,8)-萘啶-2-基)乙醇
在-40℃氮气氛下，向2-甲基-1,8-二氮杂萘(6.024g，41.8mmol)(来自步骤1)在无水THF(140mL)中的溶液中加入1.0M的双(三甲基甲硅烷基)酰胺锂在THF(88.0mL)中的溶液，并且将反应混合物在-40℃下搅拌30min，得到血红色溶液。在-40℃下搅拌30min后，在5min内将纯碳酸二乙酯(5.60mL)逐滴加入上述溶液中，并将反应混合物升温至0℃(冰浴)并在该温度下搅拌2h，得到深橙红色溶液。用饱和氯化铵水溶液(60.0mL)冷激反应混合物，得到橙红色溶液，并且真空除去THF，得到橙红色混合物。用乙酸乙酯(3×50mL)萃取所得混合物。合并有机层，用盐水洗涤，经无水Na2SO4/MgSO4干燥，过滤并真空蒸发，得到深橙红色结晶固体(8.65g)。使用Varian SF-40-120g Super Flash硅胶柱，通过硅胶闪蒸色谱法纯化粗残余物，用10％至100％乙酸乙酯的正庚烷溶液洗脱，得到作为黄橙色结晶固体的所需产物(7.76g，产率85％)。固体的LC-MS分析显示所需产物的质量：m/z 217(M+H)和m/z 239(M+Na)；计算的C12H12N2O2：216.23。1H NMR(400MHz，DMSO-d6)：δ1.21(t，J＝7.0Hz，3H)，4.10(q，2H)，4.89(s，1H)，6.77(d，J＝9.38Hz，1H)，7.14(m，1H)，7.46(d，J＝9.36Hz，1H)，7.89(d，1H)，8.36(d，1H)，11.80(brs，1H，-OH)。分离产物的1H NMR可与产物的真实样品重叠。
步骤3.制备5,6,7,8-四氢-1,8-萘啶-2-基乙酸乙酯
向(E)-1-乙氧基-2-(1,8-萘啶-2-基)乙醇(5.18g，23.98mmol)(来自步骤2)在无水乙醇(100mL)中的脱气溶液中加入活性炭(1.44g)上的氢氧化钯，并且将反应混合物在室温下在氢气球下搅拌过夜(16h)。将反应混合物通过垫过滤以除去Pd(OH)2/C。将残余物用无水乙醇(2×25mL)洗涤，并且将滤液真空蒸发，得到黄色粘稠液体，缓慢结晶成浅黄色固体(5.30g，产率98％)。产物的LC-MS分析显示所需产物的质量：m/z 221(M+H)；计算的C12H16N2O2：220.26。该产物将用于下一步骤。
步骤4.制备2-(5,6,7,8-四氢-1,8-萘啶-2-基)乙醇
在室温氮气氛下向无水THF(95.0mL)中加入1.0M氢化铝锂在THF(95.0mL)中的溶液，同时搅拌。将反应混合物的温度降至15℃(水-冰浴)，并且在30min内逐滴加入2-(5,6,7,8-四氢-1,8-萘啶-2-基)乙酸乙酯(来自步骤3)在无水THF(50.0mL)中的溶液，得到黄色溶液。将得到的反应混合物在室温下搅拌4h。将反应混合物冷却至0℃(盐-冰浴)并用盐水(25.0mL)缓慢冷激反应。在骤冷期间加入附加THF(30.0mL)以分解乳液。在完全加入盐水后，将反应混合物在室温下搅拌过夜。向上述反应混合物中加入无水硫酸钠(25.0g)，并且将混合物在室温下再搅拌30min并过滤。用乙酸乙酯(3×30mL)洗涤固体盐残余物。合并滤液并浓缩至约150mL，再次用无水硫酸钠干燥，过滤并真空蒸发，得到橙色粘稠液体(4.8063g)。粗产物在SF-40-120g Super Flash硅胶柱上通过硅胶闪蒸色谱法纯化，并且用0％至5％甲醇的乙酸乙酯溶液洗脱，得到作为黄色粘稠液体的所需产物(3.504g，产率82％)。纯化液体的LC-MS分析显示所需产物的质量：m/z 179(M+H)；计算的C10H14N2O：178.23。液体在冰箱中储存过夜后固化成浅黄色蜡状/结晶固体。
实施例1
方案3：制备3-(2,3-二氢苯并[b][1,4]二噁英-6-基)-4-(1-甲基-5-(2-(5,6,7,8-四氢)-1,8-萘啶-2-基)乙氧基)-1H-吡唑-3-基)丁酸
步骤1.制备2-(2,3-二氢苯并[b][1,4]二噁英-6-基)-4-羟基-4-甲基-6-氧代环己烷-1,3-二羧酸二乙酯
在25℃下，向2,3-二氢苯并[b][1,4]二噁英-6-甲醛(15g，91.44mmol)和乙酰乙酸乙酯(41.6g，320.04mmol)的混合物溶液中一次性加入哌啶(2.73g，32mmol)。然后将混合物在25℃下搅拌72小时。将反应混合物用EtOH(200mL)稀释并冷却至-20℃并过滤，得到作为白色结晶固体的所需产物(21.1g，产率57％)。
步骤2.制备3-(2,3-二氢苯并[b][1,4]二噁英-6-基)戊二酸
向2-(2,3-二氢苯并[b][1,4]二噁英-6-基)-4-羟基-4-甲基-6-氧代环己烷-1,3-二甲酸二乙酯(20.00g，49.24mmol)(来自步骤1)在EtOH(200mL)中的溶液中一次性加入NaOH(3.94g，98.48mmol)。将混合物加热至100℃并搅拌1.5h。将反应混合物冷却至25℃并在60℃下减压浓缩至上述残余物浓度。加入HCl直至pH 1，并且然后将混合物倒入水(50mL)中并搅拌20分钟。用乙酸乙酯(3×100mL)萃取水相。将合并的有机相用盐水溶液(2×100mL)洗涤，用无水Na2SO4干燥，过滤并真空蒸发，得到作为棕色固体的酸(10.00g，产率76.92％)。
步骤3.制备4-(2,3-二氢苯并[b][1,4]二噁英-6-基)二氢-2H-吡喃-2,6(3H)-二酮
将3-(2,3-二氢苯并[b][1,4]二噁英-6-基)戊二酸(8g，30.06mmol)(来自步骤2)在乙酸酐(217.4g，2.12mol)中的溶液在140℃下搅拌加热2.5h。将混合物冷却至25℃，并且然后真空蒸发，得到作为棕色油状物的所需产物(6.02g，产率80.04％)。
步骤4.制备3-(2,3-二氢苯并[b][1,4]二噁英-6-基)-7-乙氧基-5,7-二氧代庚酸
在-78℃下，在N2下，在2min时间内向4-(2,3-二氢苯并[b][1,4]二噁英-6-基)二氢-2H-吡喃-2,6(3H)-二酮(6.00g，24.19mmol)(来自步骤3)在THF(50mL)的溶液中逐滴加入LDA(5.18g，48.38mmol)。在-60℃下搅拌1h后，在-78℃下，在N2下，在2min内逐滴加入干燥的EtOAc(4.25g，48.38mmol)。将反应混合物在-78℃下搅拌另外5h。TLC(PE:EtOAc＝20:1)显示起始材料被完全消耗。用2N HCl冷激反应直至pH＝1，并且然后用EtOAc(3×80mL)萃取反应混合物。合并的有机相用饱和盐水溶液洗涤，经无水Na2SO4干燥，过滤并真空浓缩，得到作为黄色液体的所需产物(6.50g，产率80.0％)，将其通过硅胶柱色谱纯化(PE:EA＝3:1)。
步骤5.制备3-(2,3-二氢苯并[b][1,4]二噁英-6-基)-4-(5-羟基-1-甲基-1H-吡唑-3-基)丁酸酯
在40℃下，在N2下，向3-(2,3-二氢苯并[b][1,4]二噁基-6-基)-7-乙氧基-5,7-二氧代庚酸(3g，8.9mmol)(来自步骤4)在EtOH(120mL)的溶液中分批加入甲基肼(450.34mg，9.79mmol)。然后将混合物在100℃下搅拌5小时。TLC显示反应完全。将混合物冷却至25℃并将反应混合物真空浓缩。向上述残余物中加入EtOH(20mL)和二噁烷/HCl(20mL)，将得到的悬浮液在室温下搅拌12h，并且然后在减压下浓缩，得到作为黄色油状物的所需产物(2.2g，产率71.45％)，将其通过硅胶柱色谱纯化(DCM:EtOH＝8:1)。1H NMR(400MHz，CDCl3)：δ1.10-1.19(m，3H)，2.02-2.08(m，1H)，2.53-2.73(m，2H)，2.89-3.05(m，2H)，3.24(s，1H)，3.38-3.50(m，1H)，3.52-3.66(m，1H)，3.74(br.s.，2H)，3.95-4.07(m，2H)，4.16-4.23(m，4H)，5.78(br，s，1H)，6.62-6.80(m，3H)。
步骤6.制备3-(2,3-二氢苯并[b][1,4]二噁英-6-基)-4-(1-甲基-5-(2-(5,6,7,8-四氢-1,8-萘啶-2-基)乙氧基)-1H-吡唑-3-基)丁酸(实施例1)
向3-(2,3-二氢苯并[b][1,4]二噁英-6-基)-4-(5-羟基-1-甲基-1H-吡唑-3-基)丁酸己酯(1.0g，2.89mmol，1.00当量)(来自步骤5)在CH3CN(10mL)中的溶液，加入2-(5,6,7,8-四氢-1,8-萘啶-2-基)乙基4-甲基苯磺酸盐(960mg，2.89mmol，1.00当量；通过使2-(5,6,7,8-四氢-1,8-萘啶-2-基)乙醇(来自实施例A，步骤4)与甲苯磺酰氯和碱在THF中反应制得)并且加入Cs2CO3(1.88g，5.78mmol，2.00当量)，并且然后将反应混合物在80℃下搅拌8h。过滤反应混合物以除去不溶物，并且将滤液真空浓缩。将残余物悬浮在3N HCl(10mL)中，并且然后将其在100℃下搅拌另外8h，得到所需产物。通过反相制备型HPLC纯化粗产物，得到作为黄色油状物的实施例1(48mg，产率3.6％)。通过反相制备型HPLC进行第二次纯化液体并冷冻干燥馏分，得到作为无色粉末的实施例1(23.2mg)。固体的LC-MS分析显示所需产物的质量：m/z 479(M+H)和m/z 501(M+Na)；计算的C26H30N4O5：478.54。1H NMR(400MHz，DMSO-d6)：δ1.75-1.86(m，2H)，2.35-2.45(m，1H)，2.62(d，J＝7.53Hz，2H)，2.73(t，J＝5.77Hz，2H)，3.11(t，J＝6.02Hz，3H)，3.15-3.23(m，2H)，4.18(s，4H)，4.32(t，J＝6.15Hz，2H)，5.49(s，1H)，6.64-6.69(m，2H)，6.69-6.74(m，2H)7.61(d，J＝7.28Hz，1H)，8.15(br s，1H)，14.34-14.55(m，1H)。
实施例2
制备3-(3-氯-5-氟苯基)-4-(1-甲基-5-(2-(5,6,7,8-四氢-1,8-萘啶-2-基)乙氧基-1H-吡唑-3-基)丁酸
实施例2以与实施例1类似的方式制备，使用3-氯-5-氟苯甲醛作为反应方案3中所需的苯甲醛。通过反相制备型HPLC纯化粗产物，并在冷冻干燥馏分后得到作为无色粉末的标题化合物(39.4mg)。固体的LC-MS分析显示在室温下1.92min时的所需产物纯度>98％和所需产物质量：m/z473(35ClM+H)，m/z 475(37ClM+H)，m/z 495(35ClM+Na)和m/z 497(37ClM+Na)；计算的C24H26ClFN4O3：472.94。1H NMR(400MHz，DMSO-d6)：δ1.81(brs，2H)，2.54-2.64(m，2H)，2.65-2.77(m，5H)，3.11(brs，3H)，3.39(brs，6H)，4.31(brs，2H)，5.52(s，1H)，6.66(d，J＝6.78Hz，1H)，7.13(d，J＝9.91Hz，1H)，7.16-7.22(m，2H)，7.61(d，J＝6.15Hz，1H)，8.13(brs，1H)，14.32-14.57(m，1H)。
实施例3
制备3-(3-氟-4-甲氧基苯基)-4-(1-甲基-5-(2-(5,6,7,8-四氢-1,8-萘啶-2-基)乙氧基-1H)-吡唑-3-基)丁酸
实施例3以与实施例1类似的方式制备，使用3-氟-4-甲氧基苯甲醛作为反应方案3中所需的苯甲醛。通过反相制备型HPLC纯化粗产物，并在冷冻干燥馏分后得到作为乳脂粉末的标题化合物(26.6mg)。固体的LC-MS分析显示在室温下1.76min时的所需产物和所需产物质量：m/z 469(M+H)和m/z 491(M+Na)；计算的C25H29FN4O4：468.52。1H NMR(400MHz，DMSO-d6)：δ1.77-1.87(m，2H)，2.54-2.69(m，3H)，2.70-2.78(m，2H)，3.09(t，J＝6.09Hz)，2H)，3.17-3.29(m，1H)，3.39-3.47(m，3H)，3.78(s，4H)，4.25(t，J＝6.09Hz，2H)，5.43(s，1H)，6.69(d，J＝7.28Hz，1H)，6.95-7.06(m，2H)，7.09(dd，J＝12.86，1.82Hz，1H)，7.58-7.70(m，1H)，8.26(brs，1H)。
实施例4
制备3-(4-溴-3-氟苯基)-4-(1-甲基-5-(2-(5,6,7,8-四氢-1,8-萘啶-2-基)乙氧基)-1H-吡唑-3-基)丁酸
实施例4以与实施例1类似的方式制备，使用3-氟-4-溴苯甲醛作为反应方案3中所需的苯甲醛。通过反相制备型HPLC纯化粗产物，并在冷冻干燥馏分后得到作为乳脂粉末的实施例5(84.7mg)。固体的LC-MS分析显示在室温下1.93min时的所需产物和所需产物质量：m/z 517(79BrM+H)，m/z 519(81BrM+H)，m/z 539(79BrM+Na)和m/z 541(81BrM+Na)；计算的C24H26BrFN4O3：517.39。1H NMR(300MHz，CDCl3)：δ1.88-2.02(m，2H)，2.46-2.72(m，2H)，2.78(d，J＝5.84Hz，2H)，2.86-3.02(m，2H)，3.15(brs，2H)，3.51(brs，2H)，3.60(s，3H)，4.39(brs，2H)，5.66(s，1H)，6.43(d，J＝6.97Hz，1H)，6.95(dd，J＝18.65，8.29Hz，2H)，7.34-7.50(m，2H)，9.13(brs，3H)，9.59-9.94(m，1H)，15.27(brs，1H)。
实施例5
制备3-(3-溴-4-氟苯基)-4-(1-甲基-5-(2-(5,6,7,8-四氢-1,8-萘啶-2-基)乙氧基)-1H-吡唑-3-基)丁酸
实施例5以与实施例1类似的方式制备，使用3-溴-4-氟苯甲醛作为反应方案3中所需的苯甲醛。通过反相制备型HPLC纯化粗产物，并在冷冻干燥馏分后得到作为乳脂粉末的标题化合物(93.2mg)。固体的LC-MS分析显示在1.91min时的所需产物和所需产物质量：m/z517(79BrM+H)，m/z 519(81BrM+H)，m/z 539(79BrM+Na)和m/z 541(81BrM+Na)；计算的C24H26BrFN4O3：517.39。1H NMR(400MHz，CDCl3)：δ1.87-1.99(m，2H)，2.55-2.72(m，2H)，2.77(t，J＝5.83Hz，2H)，2.86-3.06(m，2H)，3.13(t，J＝5.90Hz，2H)，3.38-3.45(m，1H)，3.49(brs，2H)，3.59(s，3H)，4.37(t，J＝6.02Hz，2H)，5.68(s，1H)，6.43(d，J＝7.15Hz，1H)，6.97-7.04(m，1H)，7.13(brs，1H)，7.27(s，1H)，7.37(d，J＝7.15Hz，2H)，9.67(brs，1H)，15.03(brs，1H)。
实施例6
制备3-(3-溴苯基)-4-(1-甲基-5-(2-(5,6,7,8-四氢-1,8-萘啶-2-基)乙氧基-1H-吡唑-3-基)丁酸
实施例6以与实施例1类似的方式制备，使用3-溴苯甲醛作为反应方案3中所需的苯甲醛。通过反相制备型HPLC纯化粗产物，并在冷冻干燥馏分后得到作为乳脂粉末的标题化合物(64.9mg)。固体的LC-MS分析显示在室温下1.89min时的所需产物和所需产物质量：m/z 499(79BrM+H)，m/z 501(81BrM+H)，m/z 521(79BrM+Na)和m/z 523(81BrM+Na)；计算的C24H27BrN4O3：499.40。1H NMR(300MHz，CD3OD)：δ1.96(brs，2H)，2.61-2.79(m，2H)，2.84(brs，2H)，2.93-3.09(m，1H)，3.11-3.27(m，3H)，3.52(brs，3H)，3.61-3.78(m，3H)，4.58(brs，2H)，6.14(brs，1H)，6.73(d，J＝6.40Hz，1H)，7.26(brs，2H)，7.39(d，J＝6.41Hz，1H)，7.45(s，1H)，7.63(d，J＝5.65Hz，1H)。
通过在N,N-二甲基乙酰胺中与氰化锌进行置换反应合成以下实施例7、实施例8、实施例9和实施例12。实施例5、实施例4、实施例11和实施例6分别用作反应的前体。
实施例7
制备3-(3-氰基-4-氟苯基)-4-(1-甲基-5-(2-(5,6,7,8-四氢-1,8-萘啶-2-基)乙氧基)-1H-吡唑-3-基)丁酸
方案4
无水N,N-二甲基乙酰胺(DMA)(50mL)在高真空下脱气，并在使用前通过N2交替30min。在N2气氛下向圆底烧瓶中加入Pd(OAc)2(1.5g，6.8mmol)和X-磷酸盐(6.38g，0.439mmol)，随后脱气DMA。然后将混合物在80℃下加热60min，得到深色溶液。在N2气氛下向第二个圆底烧瓶中加入实施例5(500mg，0.919mmol)、Zn(CN)2(118mg，1.01mmol)和Zn(5mg，催化剂)，并且随后脱气DMA(5mL)。在25℃下将催化剂溶液加入上述溶液中，并将所得混合物在90℃下加热1h。将反应混合物冷却至25℃并通过真空蒸发除去溶剂。将残余物在水(20mL)和乙酸乙酯(20mL)之间分配。首先将混合物通过过滤，并且然后分离各层。水层用乙酸乙酯(3×20mL)萃取，合并的有机层用水、盐水洗涤，经Na2SO4干燥，并且然后真空蒸发溶剂。向粗残余物中加入3N LiOH水溶液(10mL)并将反应混合物在100℃下搅拌8h。通过反相制备型HPLC纯化粗残余物，并在冷冻干燥后得到作为黄色油状物的实施例7(100.0mg)。通过反相制备型HPLC对液体进行第二次纯化，并冷冻干燥馏分，得到作为乳脂粉末的标题化合物。固体的LC-MS分析显示在室温下1.80min时的所需产物和所需产物的质量：m/z 464(M+H)和m/z 486(M+Na)；计算的C25H26N5O3：463.50。1H NMR(400MHz，DMSO-d6)：δ1.78-1.86(m，2H)，2.33(brs，1H)，2.55-2.70(m，3H)，2.71-2.78(m，3H)，3.10(t，J＝6.15Hz，2H)，3.37(brs，5H)，4.28(t，J，＝，6.27Hz，2H)，5.44(s，1H)，6.67(d，J＝7.40Hz，1H)，7.41(t，J，＝，9.16Hz，1H)，7.61-7.67(m，2H)，7.81-7.87(m，1H)，7.98(brs，1H)13.95-14.07(m，1H)。
实施例8
制备3-(4-氰基-3-氟苯基)-4-(1-甲基-5-(2-(5,6,7,8-四氢-1,8-萘啶-2-基)乙氧基)-1H-吡唑-3-基)丁酸
使用实施例4作为前体，以与实施例7(方案4)相同的方式制备实施例8。通过反相制备型HPLC纯化粗产物，并在冷冻干燥馏分后，得到作为无色粉末的所需标题化合物(30.7mg)。固体的LC-MS分析显示在室温下1.79min时的所需产物和所需产物质量：m/z 464(M+H)和m/z 486(M+Na)；计算的C25H26N5O3：463.50。1H NMR(400MHz，DMSO-d6)：δ1.79-1.86(m，2H)，2.53-2.70(m，3H)，2.70-2.79(m，4H)，3.08(t，J＝5.96Hz，2H)，3.33-3.45(m，8H)，4.23(t，J＝6.09Hz，2H)，5.43(s，1H)，6.68(d，J＝7.28Hz，1H)，7.28(dd，J＝8.09和1.32Hz，1H)，7.46(d，J＝10.16Hz，1H)，7.63(d，J＝7.40Hz，1H)，7.80(t，J＝7.53Hz，1H)8.08(brs，1H)。
实施例9
制备3-(3-氰基苯基)-4-(1-甲基-5-(2-(5,6,7,8-四氢-1,8-萘啶-2-基)乙氧基)-1H-吡唑-3-基)丁酸
使用实施例6作为前体，以与实施例7(方案4)类似的方式制备实施例9。通过反相制备型HPLC纯化粗产物，并在冷冻干燥馏分后，得到作为无色粉末的所需标题化合物(65.5mg)。固体的LC-MS分析显示在室温下1.72min时的所需产物和所需产物质量：m/z 446(M+H)和m/z 468(M+Na)；计算的C25H27N5O3：445.51。1H NMR(400MHz，DMSO-d6)：δ1.78-1.86(m，2H)，2.52-2.62(m，3H)，2.63-2.78(m，6H)，3.08(t，J＝6.09Hz，2H)，3.31-3.38(m，4H)，3.39-3.47(m，3H)，4.24(t，J＝6.15Hz，4H)，5.42(s，1H)，6.68(d，J＝7.28Hz，1H)，7.43-7.49(m，1H)，7.58(d，J＝8.03Hz，1H)，7.63(d，J＝7.40Hz，2H)，7.72(s，1H)，8.17(brs，1H)。
实施例10
制备3-(3-溴-5-(三氟甲基)苯基)-4-(1-甲基-5-(2-(5,6,7,8-四氢-1,8-萘啶-2-基)乙氧基)-1H-吡唑-3-基)丁酸
实施例10以与实施例1类似的方式制备，使用3-溴-5-(三氟甲基)苯甲醛作为反应方案3中所需的苯甲醛。通过制备型HPLC(柱：Phenomenex Gemini C18 250*50 10μ；流动相：[水(0.225％FA)-ACN]；B％：15％至45％，11.2min)纯化粗产物。将HPLC流出物冷冻干燥，得到作为白色固体的标题化合物(29mg)和回收的起始酯(115mg)。获得作为白色固体的3-[3-溴-5-(三氟甲基)苯基]-4-[1-甲基-5-[2-(5,6,7,8-四氢-1,8-萘啶-2-基)乙氧基]吡唑-3-基]丁酸(29mg，51μmol，12％产率，99.5％纯度)。1H NMR(400MHz，CD3OD)δppm 1.84-1.92(m，2H)2.53-2.63(m，1H)2.64-2.87(m，5H)2.94-3.09(m，2H)3.36-3.42(m，5H)3.46-3.56(m，1H)4.30(t，J＝6.39Hz，2H)5.48(s，1H)6.50(d，J＝7.28Hz，1H)7.31(d，J＝7.28Hz，1H)7.48(s，1H)7.62(s，1H)7.67(s，1H)。
实施例11
制备3-(3-溴-5-(三氟甲氧基)苯基)-4-(1-甲基-5-(2-(5,6,7,8-四氢-1,8-萘啶-2-基)乙氧基)-1H-吡唑-3-基)丁酸
实施例11以与实施例1类似的方式制备，使用3-溴-5-(三氟甲氧基)苯甲醛作为反应方案3中所需的苯甲醛，其中3-[3-溴-5-(三氟甲氧基)苯基]-4-[1-甲基-5-[2-(5,6,7,8-四氢-1,8-萘啶-2-基)乙氧基]吡唑-3-基]丁酸己酯作为标题化合物的直接前体。通过制备型HPLC(TFA条件：柱：Boston pH-lex 150*25 10μm；水(0.1％TFA)-ACN从22至52；梯度时间(min)：8；流速(mL/min)2)纯化粗产物。获得作为黄色固体[LC-MS(ES7911-26-P1E)、1HNMR(ES7911-26-P1A_01)、19F NMR(ES7911-26-P1A_02)、COSY(ES7911-26-P1C)]的标题化合物。固体的LC-MS分析显示所需产物的质量：m/z 583.0(M+H)；1H NMR(400MHz，CD3OD)7.60(d，J＝7.6Hz，1H)，7.41(t，J＝1.6Hz，1H)，7.29(s，1H)，7.09(s，1H)，6.68(d，J＝7.2Hz，1H)，5.44(s，1H)，4.36-4.26(m，2H)，3.54-3.42(m，6H)，3.16(t，J＝6.0Hz，2H)，2.90-2.79(m，3H)，2.79-2.69(m，2H)，2.68-2.60(m，1H)，2.00-1.90(m，2H)。
实施例12
制备3-(3-氰基-5-(三氟甲基)苯基)-4-(1-甲基-5-(2-(5,6,7,8-四氢-1,8-萘啶-2-基)乙氧基)-1H-吡唑-3-基)丁酸
方案5
步骤1.制备3-(3-氰基-5-(三氟甲基)苯基)-4-(1-甲基-5-(2-(5,6,7,8-四氢-1,8-萘啶)-吡啶-2-基)乙氧基)-1H-吡唑-3-基)丁酸酯
3-[3-溴-5-(三氟甲基)苯基]-4-[1-甲基-5-[2-(5,6,7,8-四氢-1,8-萘啶-2-基)乙氧基]吡唑-3-基]丁酸己酯(343mg，576μmol，1当量，实施例10的标题化合物的直接前体)和二氰基锌(203mg，1.73mmol，110μL，3当量)的混合物在25mL微波小瓶中的DMF(8mL)中抽空并用N2(3x)回填。加入三苯基磷钯(67mg，58μmol，0.1当量)。将反应小瓶密封，并将反应混合物再次脱气并用N2(3x)回填，并且然后在微波辐射下在120℃下搅拌90min。真空除去溶剂，得到灰色胶状物。通过闪蒸硅胶色谱法(12g 二氧化硅闪蒸柱，洗脱液0％至80％乙酸乙酯/石油醚梯度为35mL/min)纯化残余物，得到作为棕色胶状物的所需物质(181mg)。LCMS显示纯度为77.5％。固体的LC-MS分析显示所需产物的质量：m/z542(M+H)；计算的C28H30F3N5O3：541.23。
步骤2.制备3-(3-氰基-5-(三氟甲基)苯基)-4-(1-甲基-5-(2-(5,6,7,8-四氢-1,8-萘啶-2-基)乙氧基)-1H-吡唑-3-基)丁酸
向搅拌的3-[3-氰基-5-(三氟甲基)苯基]-4-[1-甲基-5-[2-(5,6,7,8-四氢-1,8-萘啶-2-基)乙氧基]吡唑-3-基]丁酸己酯(90mg，166μmol，1当量)在THF(3mL)和MeOH(1mL)的混合物中的溶液中加入LiOH·H2O(50mg，1.19mmol，7.17当量)在H2O(2mL)中的溶液，在25℃下搅拌3小时。真空除去有机溶剂，并且残余的水溶液用1mL AcOH酸化至pH<7。将溶剂在真空下蒸发至干，然后重悬于MeOH(5mL)中并搅拌2min。滤出未溶解的沉淀物，并且通过制备型HPLC(柱：Boston Green ODS150*30 5μ；流动相：[水(0.1％TFA)-ACN]；B％：28％至38％，8min)纯化滤液。将HPLC流出物冷冻干燥，得到作为白色固体的标题化合物(43mg，69μmol，41％产率，100％纯度，TFA)。固体的LC-MS分析显示所需产物的质量：m/z 514(M+H)；计算的C26H26F3N5O3：513.20。1H NMR(400MHz，CD3OD)δppm 1.95(dd，J＝6.50，5.18Hz，2H)2.68-2.86(m，5H)2.90(d，J＝6.61Hz，1H)3.15(t，J＝5.95Hz，2H)3.43(s，3H)3.45-3.52(m，2H)3.52-3.63(m，1H)4.31(t，J＝6.06Hz，2H)5.48(s，1H)6.69(d，J＝7.28Hz，1H)7.60(d，J＝7.50Hz，1H)7.77(s，1H)7.89(d，J＝13.23Hz，2H)；19FNMR(400MHz，CD3OD)δppm-64.44，-77.33。
实施例13
制备3-(2-甲氧基-5-(三氟甲基)苯基)-(1-甲基-5-(2-(5,6,7,8-四氢-1,8-萘啶-2-基)乙氧基)-1H-吡唑-3-基)丁酸三氟乙酸盐
实施例13以与实施例1类似的方式制备，使用2-甲氧基-5-(三氟甲基)苯甲醛作为反应方案3中所需的苯甲醛。通过制备型HPLC(柱：Boston Green ODS 150*30 5μ；流动相：[水(0.1％TFA)-ACN]；B％：20％至50％，8min)纯化粗产物。得到作为白色固体(其通过LCMS、HPLC、1H NMR和19F NMR确认)的标题化合物(120mg，189μmol，55％产率，99.6％纯度，TFA盐)。固体的LC-MS分析显示所需的质量：m/z 519.0(M+H)；计算的C26H29N4O4F3：518.53。1HNMR(CD3OD，400MHz)7.58(d，J＝7.2Hz，1H)，7.49(br d，J＝8.8Hz，1H)，7.36(d，J＝1.6Hz，1H)，7.08(d，J＝8.8Hz，1H)，6.66(d，J＝7.6Hz，1H)，5.55(s，1H)，4.35(t，J＝6.0Hz，2H)，3.91(s，3H)，3.81(quin，J＝7.6Hz，1H)，3.47-3.53(m，5H)，3.16(t，J＝6.0Hz，2H)，2.86-2.97(m，2H)，2.82(br t，J＝6.0Hz，2H)，2.65-2.78(m，2H)，1.95(quin，J＝6.0Hz，2H)。19FNMR(CD3OD，376MHz)-62.86(s，1F)，-77.37(s，1F)。
实施例14
制备3-(5-溴-2-甲氧基苯基)-4-(1-甲基-5-(2-(5,6,7,8-四氢-1,8-萘啶-2-基)乙氧基)-1H-吡唑-3-基)丁酸三氟乙酸盐
实施例14以与实施例1类似的方式制备，使用5-溴-2-甲氧基-苯甲醛作为反应方案3中所需的苯甲醛。通过制备型HPLC(柱：Boston Green ODS150*30 5μ流动相：[水(0.1％TFA)-ACN]；B％：20％至50％，8min)纯化粗产物。得到作为白色固体(其通过LCMS(m/z529.0(M+H))、HPLC、1H NMR和19F NMR确认)的标题化合物(190mg，293μmol，84％产率，99.4％纯度，TFA)。1H NMR(CD3OD，400MHz)7.59(d，J＝7.2Hz，1H)，7.29(dd，J＝8.8，2.4Hz，1H)，7.22(d，J＝2.4Hz，1H)，6.86(d，J＝8.8Hz，1H)，6.66(d，J＝7.2Hz，1H)，5.55(s，1H)，4.37(t，J＝6.0Hz，2H)，3.82(s，3H)，3.73(quin，J＝7.6Hz，1H)，3.47-3.53(m，5H)，3.16(t，J＝6.0Hz，2H)，2.85-2.94(m，2H)，2.82(t，J＝6.4Hz，2H)，2.61-2.73(m，2H)，1.95(quin，J＝6.0Hz，2H)，19F NMR(CD3OD，376MHz)-77.32(br s，1F)。
实施例15
制备(3S)-3-(3-氟-4-甲氧基苯基)-4-(1-甲基-5-(2-(5,6,7,8-四氢-1,8-萘啶-2-基)乙氧基)-1H-吡唑-3-基)丁酸
方案6
步骤1.制备二乙基2-(3-氟-4-甲氧基-苯基)-4-羟基-4-甲基-6-氧代-环己烷-1,3-二甲基二乙酯
将哌啶(310μL，3.13mmol)加入到3-氟-4-甲氧基苯甲醛(5.0g，31.14mmol)和乙酰乙酸乙酯(8.75g，67.21mmol)的混合物的溶液中。将反应混合物在室温下搅拌72h，得到浅黄色微晶固体。通过将固体溶于沸腾的abs.乙醇(70mL)中并将黄色溶液冷却至室温使粗产物重结晶，得到浅黄色结晶固体。过滤固体，用abs.乙醇(2×100mL)洗涤并真空干燥，得到无色结晶固体(9.59g，产率78％)。固体的LC-MS分析显示所需产物的质量：m/z 397(M+H)，m/z 419(M+Na)和m/z 815(2M+Na)；计算的C20H25FO7：396.41。1H NMR(400MHz，DMSO-d6)：δ0.89(t，J＝7.09Hz，3H，CH3-CH2-)，0.98(t，J＝7.09Hz，3H，CH3-CH2-)，1.24(s，3H，CH3-)，2.33(d，J＝3.45Hz，1H，-CH-)，2.88(d，J＝13.45Hz，1H，-CH-)，3.27(d，J＝11.98Hz，1H，-CH-)3.78(s，3H，-O-CH3)，3.79-3.97(m，6H，2×-CH2-CH3+-CH2-C(CH3)OH)，4.94(s，1H，-OH)，6.99-7.11(m，2H，H-5，H-6)，7.16-7.12(m，1H，H-2)。产物的1H NMR光谱与产物的建议结构一致。
步骤2.制备3-(3-氟-4-甲氧基-苯基)戊二酸
向来自步骤1的2-(3-氟-4-甲氧基-苯基)-4-羟基-4-甲基-6-氧代-环己烷-1,3-二甲酸二乙酯(4.05g，10.22mmol)在abs.乙醇(50.0mL)中的悬浮液中加入50％氢氧化钠溶液(20mL)，并将反应混合物在回流条件下加热1h，得到米色悬浮液。1.5h后，将反应混合物冷却至室温，并且真空蒸发乙醇，得到悬浮在水中的棕色沉淀。将乙酸乙酯(75mL)加入上述溶液中并在室温下搅拌30min。分离水层和有机层。用乙酸乙酯(1×25mL)洗涤水层以除去残余的副产物。将水层用浓HCl酸化直至pH＝1。将溶剂真空蒸发，得到无色至乳白色固体。过滤固体，用水(2×10mL)洗涤并真空干燥，得到乳黄色结晶固体(2.08g，79％)。固体的LC-MS分析显示在室温下1.51min时的所需产物和所需产物质量：m/z 239(M+H-H2O)，m/z 257(M+H)和m/z 279(M+Na)；计算的C12H13FO5：256.23。1H NMR(400MHz，DMSO-d6)：δ2.48(dd，J＝15.90Hz和8.80Hz，2H，-CH-CH2-COOH，部分隐藏在DMSO峰下)，2.61(dd，J＝15.90Hz和8.80Hz，2H，HOOC-CH2-CH-)，3.34-3.39(m，1H，部分隐藏在水峰下，-CH-CH2-COOH)，3.79(s，3H，CH3O-)，6.98-7.08(dd/m，2H，H-5和H-6)，7.13(dd，J＝12.84和1.83Hz，Hz，1H，H-2)，12.07(s，2H，2×-COOH)；产物的1H NMR光谱与产物的建议结构一致。
步骤3.制备3-(3-氟-4-甲氧基-苯基)戊二酸二乙酯
向来自步骤2的3-(3-氟-4-甲氧基-苯基)戊二酸(2.04g，794mmol)的无水乙醇(25mL)中的溶液中加入乙醚(20mL)中的2.0M HCl的溶液。将反应混合物在室温下搅拌过夜，得到黄橙色溶液。真空蒸发溶剂，得到黄色粘稠液体。将残余物在水(50mL)和乙酸乙酯(50mL)之间分配。分离水层和有机层。将有机层用饱和NaHCO3溶液(1×10mL)、盐水(1×25mL)洗涤，经无水硫酸钠干燥，过滤并真空蒸发，得到黄橙色粘稠液体(2.382g，产率96％)。液体的LC-MS分析显示在室温下2.42min时的所需产物和所需产物质量：m/z 267(M+H-C2H5O-)，m/z 313(M+H)，m/z 335(M+Na)；计算的C16H21FO5：312.34。1H NMR(400MHz，CDCl3)：δ1.17(t，J＝7.1Hz，6H，2×CH3-CH2-)，2.53-2.74(m，4H，2×-CH2-C＝O-)，3.59(t，J＝7.58Hz，1H，-CH2-CH-CH2-)，3.86(s，3H，-OCH3)，3.99-4.12(m，4H，2×CH3-CH2-O-)，6.85-6.91(m，1H)，6.92-7.00(m，2H)。该化合物的1H NMR光谱与产物的建议结构一致。
步骤4.制备(S)-5-乙氧基-3-(3-氟-4-甲氧基苯基)-5-氧代戊酸
在室温下搅拌来自步骤3的3-(3-氟-4-甲氧基-苯基)戊二酸二乙酯(2.356g，7.52mmol)在28mM KH2PO4溶液中的悬浮液。通过加入1N NaOH溶液和50mM KH2PO4溶液将水相的pH调节至pH 7.30。加入来自南极假丝酵母(Candida antartica)的脂肪酶丙烯酸树脂(203.0mg)，并且将反应混合物在室温下搅拌过夜。搅拌过夜(17h)后，对反应混合物的乳黄色悬浮液进行LC-MS分析，显示在室温下1.98min时的所需产物(48％)和在室温下2.42min时的未反应的起始材料(52％)。46h后，加入另一部分脂肪酶丙烯酸树脂珠粒(142.0mg)，用1N NaOH溶液将反应混合物的pH调节至7.30，并将反应混合物在室温下搅拌。搅拌6天(138h)后，反应混合物的LC-MS分析显示在室温下1.97min时的所需产物(>98％)和在室温下2.41min时的未反应的起始材料(<2％)。144h后，将反应混合物在Whatman#1滤纸上过滤以除去脂肪酶丙烯酸树脂。滤液的LC-MS分析显示在室温下1.97min时的所需产物(>99％)和在2.41min时的未反应的起始材料(<1％)的基线痕量。LC-MS分析还显示所需产物的质量：m/z 267(M+H-H2O)，m/z 285(M+H)和m/z 307(M+Na)；一种相当纯净的反应混合物将滤液用3N HCl(5mL)酸化，得到无色悬浮液。将悬浮液用固体氯化钠饱和，得到无色胶状悬浮液。滤出氯化钠，并且滤液用乙酸乙酯(2×50mL)萃取。乙酸乙酯层用盐水(2×50mL)洗涤，用无水Na2SO4干燥，过滤并真空蒸发，得到浅黄色粘稠油状物，开始缓慢固化成浅黄色结晶固体(2.14g，产率99％)。固体的LC-MS分析显示在室温下1.97min时的所需产物和所需产物质量：m/z 267(M+H-H2O)，m/z 285(M+H)和m/z 307(M+Na)；计算的C14H17FO5：284.28。1H NMR(400MHz，CDCl3)：δ1.18(t，J＝7.09Hz，3H，CH3-CH2-CO-)，2.53-2.82(m，4H，2×-CH2-)，3.59(quin/m)，1H，-CH2-CH-CH2-)，3.87(s，3H，-O-CH3)，4.06(qd，J＝7.09和1.22Hz，2H)，6.86-6.92(m，1H)，6.94-7.00(m，2H)，-COOH峰隐藏在基线下。产物的1H NMR光谱与产物的建议结构一致。
步骤5.制备(3S)-3-(3-氟-4-甲氧基-苯基)-5-氧代-庚二酸二乙酯
在氮气氛下和0℃(冰浴)下，向来自步骤4的(S)-5-乙氧基-3-(3-氟-4-甲氧基-苯基)-5-氧代-戊酸(2.06g，7.246mmol)和Meldrum酸(1.23g，114.13mmol)在无水DMF(15.0mL)中的溶液中缓慢加入氰基膦酸二乙酯(1.61g，163.11mmol)，随后加入三乙胺(3.5mL，25.11mmol)。将反应混合物在0℃下搅拌30min，得到橙色溶液。30min后，将反应混合物升温至室温并在室温下在氮气氛下搅拌过夜。将反应混合物在冰冷的2N HCl(20mL)中冷激并搅拌5min，得到棕色油状残余物。将混合物用水(20mL)稀释，并用乙酸乙酯(4×25mL)萃取。合并有机层，用水(1×50mL)、盐水(1×50mL)洗涤，经无水Na2SO4干燥，并且过滤并真空蒸发，得到橙棕色油状物(6.21g)。将油状物溶于无水乙醇(80.0mL)中，将反应混合物回流3h，得到橙色溶液。将溶剂真空蒸发，得到橙棕色油状物(3.34g)。粗产物的LC-MS分析显示在室温下2.36min时的所需产物和在室温下2.46min时的副产物。LC-MS还显示所需产物的质量：m/z 309(M+H-C2H5O-)，m/z 355(M+H)，m/z 377(M+Na)和副产物质量：m/z 430(M+H)，m/z 452(M+Na)和m/z 881(2M+Na)。将粗产物溶于二氯甲烷中并施加到80g RediSep二氧化硅柱上，并使用0％至60％EtOAc在己烷中通过硅胶闪蒸色谱法纯化。将纯馏分混合在一起，并且将混合物真空蒸发，得到无色至极浅黄色粘稠液体(1.767g，产率69％)。液体的LC-MS分析显示在室温2.35min时的所需产物和所需产物质量：m/z 309(M+H-C2H5O-)，m/z355(M+H)，m/z 377(M+Na)；计算的C18H23FO6：354.37。1H NMR(400MHz，CDCl3)：δ1.17(t，J＝7.21Hz，3H，CH3-CH2-CO-)，1.25(t，J＝7.21Hz，3H，CH3-CH2-CO-)，2.48-2.72(m，4H)，2.83-3.00(m，2H)，3.86(s，3H，-O-CH3)，4.05(qd，J＝7.13和1.83Hz，2H)，4.12-4.22(m，2H)，4.28(q，J＝7.25Hz，1H)，6.89(d，J＝8.31Hz，1H)，6.92-6.94(m，2H)，6.96(t，J＝2.20Hz，1H，-OH)。产物的1H NMR光谱与产物的建议结构一致。
步骤6：制备(3S)-3-(3-氟-4-甲氧基-苯基)-4-(5-羟基-1-甲基-吡唑-3-基)丁酸乙酯
在室温下向来自步骤5的(3S)-3-(3-氟-4-甲氧基-苯基)-5-氧代-庚二酸二乙酯(1.756g，4.955mmol)在无水乙醇中的溶液中加入甲基肼(300μL，5.697nmmol)，得到淡黄色溶液。将反应混合物在回流条件下加热1.5h，得到亮黄色溶液。将反应混合物冷却至室温并真空蒸发，得到黄色胶状残余物(1.82g)。将粗产物溶于含有痕量乙醇的乙酸乙酯中并施加到40g RediSep二氧化硅柱上，并使用0％至20％甲醇在EtOAc溶液中通过硅胶闪蒸色谱法纯化，得到极浅黄色粘稠液体，在真空泵上干燥，得到浅黄色泡沫状固体(1.347g，产率81％)。固体的LC-MS分析显示在室温下1.84min时的所需产物和所需产物质量：m/z 337(M+H)，m/z 359(M+Na)和m/z 695(2M+Na)；计算的C17H21FN2O4：336.36。1H NMR(400MHz，CDCl3)：δ1.18(t，J＝7.21Hz，3H，CH3-CH2-CO-)，2.55-2.62(m，1H，-CHH-CH-CH2-)，2.63-2.71(m，2H，-CHH-CH-CHH-)，2.74-2.82(m，1H，-CHH-CH-CH2-)，3.23(s，3H，N-CH3)，3.34-3.46(m，1H，-CH2-CH-CH2-)，3.88(s，3H，-OCH3)，4.06(q，J＝7.09Hz，2H，CH3-CH2-CO-)，6.85-6.92(m，3H，Ph-H-2，H-5，H-6)，6.92-6.94(m，1H，Py-H-4)，6.96(s，1H，-OH)。产物的1H NMR光谱与产物的建议结构一致。
步骤7：制备(3S)-3-(3-氟-4-甲氧基-苯基)-4-[1-甲基-5-[2-(5,6,7,8-四氢-1,8-萘啶-2-基)乙氧基]吡唑-3-基]丁酸乙酯
在-10℃(盐-冰浴)下向三苯基膦(1.15g，4.388mmol)在无水THF(15mL)中的溶液中逐滴加入DIAD(900μL，4.57mmol)，得到5min至10min内得到黄色悬浮液。将反应混合物在-10℃下搅拌另外20min。向上述反应混合物中滴加2-(5,6,7,8-四氢-1,8-萘啶-2-基)乙醇(711.0mg，3.987mmol)(来自方案2)在THF中的溶液(5.0mL)。将反应混合物在-10℃下搅拌20min，将步骤6的(3S)-3-(3-氟-4-甲氧基-苯基)-4-(5-羟基-1-甲基-吡唑-3-基)丁酸乙酯的溶液(1.341g，3.987mmol)一次性加入无水THF(5.0mL)，得到橙色溶液。在-10℃下搅拌10min后，将反应混合物升温至室温，并在室温下搅拌过夜。将反应混合物用饱和NH4Cl溶液(50mL)冷激，并用乙酸乙酯(2×50mL)萃取。将合并的有机层用盐水(1×50mL)洗涤，经无水Na2SO4干燥，过滤并真空蒸发，得到黄色泡沫/胶状残余物。粗产物在RediSep 80g硅胶柱上通过硅胶闪蒸色谱法纯化，并且用0％至2％甲醇在乙酸乙酯中洗脱，得到乳状结晶固体(858.0mg，产率44％)。固体的LC-MS分析显示在室温下2.04min时的所需产物和所需产物质量：m/z 497(M+H)和m/z 519(M+Na)；计算的C27H33FN4O4：496.58。1H NMR(400MHz，CDCl3)：δ1.12(t，J＝7.21Hz，3H)，1.92(dt，J＝11.68，6.02Hz，1H)，2.52(dd，J＝15.41，10.03Hz，1H)，2.65-2.84(m，5H)，2.97(t，J＝6.85Hz，2H)，3.32-3.39(m，1H)，3.40-3.46(m，2H)，3.50(s，3H)，3.85(s，3H)，3.93-4.04(m，2H)，4.26(t，J＝6.85Hz，2H)，4.89-5.03(m，1H)，4.96(br s，1H)，5.22(s，1H)6.39(d，J＝7.09Hz，1H)，6.83-6.89(m，1H)，6.91-6.98(m，2H)，7.09(d，J＝7.34Hz，1H)。产物的1H NMR光谱与产物的建议结构一致。
步骤8：制备(3S)-3-(3-氟-4-甲氧基苯基)-4-(1-甲基-5-(2-(5,6,7,8-四氢-1,8-萘啶-2-基)乙氧基)-1H-吡唑-3-基)丁酸
向来自步骤7的(3S)-3-(3-氟-4-甲氧基-苯基)-4-[1-甲基-5-[2-(5,6,7,8-四氢-1,8-萘啶-2-基)乙氧基]吡唑-3-基]丁酸己酯(806mg，1.623mmol)在无水THF(5mL)中的溶液中加入1.0N NaOH水溶液(8.0mL)并将所得悬浮液在50℃下搅拌，得到黄色悬浮液。搅拌8h后，反应混合物的LC-MS分析显示在室温下1.78min时的所需产物；在室温下2.04min时没有起始材料的痕迹。将溶剂真空蒸发，得到黄色胶状残余物。粗残余物通过反相制备型HPLC在Biotage KP-C18-HS(120g)柱上纯化，并在含有0.05％TFA的水中使用梯度为10％至50％的乙腈，得到作为淡黄色胶状残余物的所需标题化合物(实施例15)。残余物的LC-MS分析显示在室温下1.77min时的所需产物和所需产物质量：m/z 469(M+H)和m/z 491(M+Na)；计算的C25H29FN4O4：468.53。将上述残余物溶于含有几滴乙腈的水中并冷冻干燥，得到乳白色至浅黄色冻干粉末(708.0mg，产率93％)。1H NMR(400MHz，DMSO-d6)：δ1.77-1.87(m，2H)，2.40-2.48(m，1H)，2.54-2.62(m，1H)，2.65(t，J＝6.97Hz，2H)，2.74(t，J＝6.11Hz，2H)，3.09(t，J＝6.11Hz，2H)，3.19-3.29(m，1H)，3.38(s，3H)，3.41(t，J＝5.38Hz，1H)，3.78(s，3H)，4.25(t，J＝6.11Hz，2H)，5.43(s，1H)，6.68(d，J＝7.34Hz，1H)，6.94-7.05(m，2H)，7.09(dd，J＝12.96和1.71Hz，1H)，7.62(d，J＝7.34Hz，1H)，8.44(brs，1H)，13.92(brs，1H)。19FNMR(376MHz，DMSO-d6)：δ-135.81(dd，J＝12.95和8.86Hz，1F，3-F)；还显示在δ-74.35(s，3F，CF3COOH)下的TFA。
实施例16
制备3-(3-溴-5-叔丁基-苯基)-4-(1-甲基-5-(2-(5,6,7,8-四氢-1,8-萘啶-2-基)乙氧基)-1H-吡唑-3-基)丁酸
实施例16以与实施例1类似的方式制备，使用3-溴-5-叔丁基苯甲醛作为反应方案3中所需的苯甲醛。通过反相制备型HPLC纯化粗产物，并在冷冻干燥馏分后得到作为无色粉末的标题化合物(75.2mg)。固体的LC-MS分析显示在室温下2.20min时的所需产物纯度>95％且所需产物质量：m/z 555(79BrM+H)、m/z 557(81BrM+H)、m/z 577(79BrM+Na)和m/z 579(81BrM+Na)；计算的C30H36BrN4O3：555.51。1H NMR(400MHz，CD3OD)：δ1.24-1.31(m，9H)，1.92-2.01(m，2H)，2.65-2.78(m，2H)，2.78-2.88(m，2H)，2.95(dd，J＝14.62，8.97Hz，1H)，3.12(dd，J＝14.62，6.59Hz，1H)，3.24(t，J＝5.90Hz，2H)3.43-3.55(m，3H)，3.66(s，3H)，4.54(t，J＝5.77Hz，2H)，6.06(s，1H)，6.73(d，J＝7.28Hz，1H)，7.21(s，1H)，7.26(s，1H)，7.39(s，1H)，7.63(d，J＝7.40Hz，1H)。
实施例17
制备3-(3-叔丁基-5-氰基苯基)-4-(1-甲基-5-(2-(5,6,7,8-四氢-1,8-萘啶-2-基)乙氧基)-1H-吡唑-3-基)丁酸
使用实施例16作为前体，以与实施例7(方案4)类似的方式制备实施例17。通过反相制备型HPLC纯化粗产物，并在冷冻干燥馏分后，得到作为无色粉末的标题化合物(38.2mg)。固体的LC-MS分析显示在室温下2.04min时的所需产物和所需产物质量：m/z 502(M+H)和m/z 524(M+Na)；计算的C29H35N5O3：501.62。1H NMR(400MHz，DMSO-d6)：δ1.19-1.25(m，9H)，1.78-1.88(m，2H)，2.54-2.69(m，3H)，2.70-2.80(m，3H)，3.08(t，J＝6.02Hz，2H)，3.37(s，4H)，3.39-3.45(m，4H)，4.22(t，J＝6.02Hz，2H)，5.41(s，1H)，6.68(d，J＝7.40Hz，1H)，7.50(s，1H)，7.54(s，1H)，7.59(s，1H)，7.63(d，J＝7.40Hz，1H)，8.18(brs，1H)。
实施例18
制备3-(3,5-二叔丁基苯基)-4-[1-甲基-5-[2-(5,6,7,8-四氢-1,8-萘啶-2-基)乙氧基]吡唑-3-基]丁酸
方案7
步骤1.制备2-(3,5-二叔丁基苯基)-4-羟基-4-甲基-6-氧代-环己烷-1,3-二羧酸二乙酯
将哌啶(90μL，0.91mmol)加入到3,5-二叔丁基苯甲醛(1.774g，7.88mmol)和乙酰乙酸乙酯(2.57g，19.76mmol)的混合物的溶液中。将反应混合物在室温下搅拌92h，得到淡黄色微晶固体。通过将固体溶于沸腾的己烷(30mL)中并将黄色溶液冷却至室温而重结晶粗产物，得到无色结晶固体。过滤固体，用己烷(3×10mL)洗涤并真空干燥，得到无色结晶固体(2.70g，产率74％)。固体的LC-MS分析显示所需产物的质量：m/z 443(M+H-H2O)、m/z 461(M+H)、m/z 483(M+Na)和m/z 943(2M+Na)；计算的C27H40O6：460.61。1H NMR(400MHz，CDCl3)：δ0.72(t，J＝7.21Hz，3H，CH3-CH2-)，1.01(t，J＝7.09Hz，3H，CH3-CH2-)，1.29(s，18H，2×t-C4H9-)，1.36(s，3H，CH3-)，2.51(dd，J＝14.18Hz和2.69Hz，1H，-CH-在C-2)，2.72(d，J＝14.18Hz，1H，-CH-在C-1)，3.03(d，J＝12.23Hz，1H，-CH-，在C-3)，3.70(d，J＝12.47Hz，1H，-OH)，3.73-3.89(m，3H，-CH2-CH3+-CHH-)，3.94-3.99(s，1H，-CHH-)，4.01(q，2H，-CH2-CH3)，7.03(d，J＝1.71Hz，1H，Ar-H-4)，7.19-7.32(m，2H，Ar-H-2，H-6)。产物的1H NMR光谱与产物的建议结构一致。
步骤2.制备3-(3,5-二叔丁基苯基)戊二酸
向来自步骤1的2-(3,5-二叔丁基-苯基)-4-羟基-4-甲基-6-氧代-环己烷-1,3-二甲酸二乙酯(2.70g，5.86mmol)在abs.乙醇(15.0mL)中的溶液中加入50％氢氧化钠溶液(20mL)，并将反应混合物在回流条件下加热1h，得到米色悬浮液。1.5h后，将反应混合物冷却至室温，并真空蒸发乙醇，得到乳米色沉淀。将沉淀物溶于水(50mL)中并用乙酸乙酯(50mL)稀释，并在室温下搅拌15min。分离水层和有机层。用乙酸乙酯(1×25mL)洗涤水层以除去残余的副产物。将水层用浓HCl酸化直至pH＝1，得到乳白色结晶固体。过滤固体，用水(3×25mL)洗涤并真空干燥，得到乳黄色结晶固体(1.767g，产率94％)。固体的LC-MS分析显示所需产物的质量：m/z 303(M+H-H2O)、m/z 321(M+H)和m/z 343(M+Na)；计算的C19H28O4：320.43。1H NMR(400MHz，DMSO-d6)：δ1.26(s，18H，2×t-C4H9-)，2.50(dd J＝15.75Hz和7.0Hz，2H，-CH-CH2-COOH，部分隐藏在DMSO峰下)，2.62(dd，J＝15.75Hz和7.0Hz，2H，HOOC-CH2-CH-)，3.43(quin，J＝7.52Hz，1H，-CH2-CH-CH2-COOH)，7.08(d，J＝1.71Hz，2H，H-2和H-6)，7.20(t，J＝1.71Hz，1H，H-4)，12.04(s，2H，2×-COOH)；产物的1H NMR光谱与产物的建议结构一致。
步骤3.制备4-(3,5-二叔丁基苯基)四氢吡喃-2,6-二酮
在回流条件下加热来自步骤2的3-(3,5-二叔丁基苯基)戊二酸(2.13g，6.647mmol)在乙酸酐(40.0mL)中的悬浮液，在10min内得到黄橙色溶液。4h后停止加热，将反应混合物冷却至室温。真空蒸发溶剂，得到浅棕色粘稠液体，该液体在室温下固化成浅棕色结晶固体。将粗产物从含有二氯甲烷的己烷中结晶，得到几乎无色的结晶固体，过滤固体，用己烷洗涤并真空干燥，得到几乎无色的结晶固体(1.90g，产率95％)。结晶固体的LC-MS分析显示所需产物的质量：m/z 303(M+H)和m/z 325(M+Na)；计算的C19H26O3：302.41。1HNMR(400MHz，CDCl3)：δ1.33(s，18H，2×叔-C4H9-)，2.89(dd，J＝17.36，11.49Hz，2H，-CH2-)，3.14(dd，J＝17.36，4.40Hz，2H，-CH2-)，3.42(tt，J＝11.55，4.34Hz，1H，-CH2-CH-CH2-)，7.02(d，J＝1.47Hz，2H，H-2，H-6)，7.40(t，J＝1.71Hz，1H，H-3)。产物的1H NMR光谱与产物的建议结构一致。
步骤4.制备3-(3,5-二叔丁基苯基)-5-乙氧基-5-氧代-戊酸
将来自步骤3的4-(3,5-二叔丁基苯基)四氢吡喃-2,6-二酮在无水吡啶和abs.乙醇的混合物中的溶液回流加热1.5h，得到淡棕褐色溶液。将溶剂真空蒸发，得到浅棕褐色粘稠残余物。将残余物溶于乙酸乙酯(25mL)中。首先用1N HCl(25mL)洗涤乙酸乙酯层，并且然后用水(1×25mL)洗涤，并且最后用盐水(1×10mL)洗涤。乙酸乙酯层用无水Na2SO4干燥，过滤并真空蒸发，得到浅棕褐色粘稠液体，该液体固化成浅棕褐色至乳白色泡沫状固体(618.0mg，产率98％)。粗产物的LC-MS分析显示所需产物的纯度>95％且所需产物的质量：m/z 331(M+H-H2O)、m/z 349(M+H)和m/z 371(M+Na)；计算的C21H32O4：348.48。1H NMR(400MHz，CDCl3)：δ1.14(t，J＝7.09Hz，3H，CH3-CH2-)，1.31(s，18H，2×叔-C4H9-)，2.59-2.85(m，4H，-CH2-CH-CH2-)，3.64(quin J＝7.34Hz，1H，-CH2-CH-CH2-)，4.05(q，J＝7.09Hz，2H，-O-CH2-CH3)，7.05(d，J＝1.71Hz，2H，H-2，H-6)，7.28(s，1H，H-4)，-COOH峰隐藏在基线下。产物的1H NMR光谱与产物的建议结构一致。
步骤5.制备3-(3,5-二叔丁基苯基)-5-氧代-庚二酸二乙酯
在氮气氛下和在0℃(冰浴)下，向来自步骤4的3-(3,5-二叔丁基苯基)-5-乙氧基-5-氧代-戊酸(618.0mg，1.773mmol)和Meldrum酸(294.95mg，2.047mmol)在无水DMF中的溶液中缓慢加入氰基膦酸二乙酯(290μL，1.911mmol)，随后加入三乙胺(900μL，6.457mmol)。将反应混合物在0℃下搅拌30min，得到黄橙色溶液。30min后，将反应混合物升温至室温并在室温下在氮气氛下搅拌过夜，得到深橙色溶液。将反应混合物在冰冷的2N HCl(10mL)中冷激并搅拌5min，得到乳白色蜡状残余物。将混合物用水(20mL)稀释，并用乙酸乙酯(2×25mL)萃取。合并有机层，用水(1×23mL)、盐水(1×25mL)洗涤，经无水Na2SO4干燥，过滤并真空蒸发，得到黄橙色粘稠液体。
将粘稠油状物溶于无水乙醇(20.0mL)中，将反应混合物回流3h，得到橙色溶液。3h后对反应混合物的LC-MS分析显示所需产物的质量：m/z 373(M+H-C2H5O-)、m/z 419(M+H)和m/z 441(M+Na)。真空蒸发溶剂，得到黄橙色粘稠残余物(696.3mg)。将粗产物溶于二氯甲烷中并施加到24g RediSep二氧化硅柱上，并在CombiFlashRf上通过硅胶闪蒸色谱法纯化，并使用0％至30％EtOAc在己烷中通过硅胶闪蒸色谱法纯化。将纯馏分混合在一起，并且将混合物真空蒸发，得到无色至极浅黄色泡沫状固体(430.5mg，产率58％)。固体的LC-MS分析显示所需产物的纯度>95％且所需产物质量：m/z 373(M+H-C2H5O-)、m/z 419(M+H)、m/z 441(M+Na)；计算的C25H38O5：418.57。1H NMR(400MHz，CDCl3)：δ1.15(t，J＝7.09Hz，3H，CH3-CH2-CO-)，1.25(t，J＝7.09Hz，3H，CH3-CH2-CO-)，1.31(s，18H，2×叔-C4H9-)，2.59-2.74(m，2H，-CH2-CH-CH2-)，2.86-3.04(m，2H，-CH2-CH-CH2-)，3.33(s，2H，b-CO-CH2-CO-)，3.70(quin，J＝7.21Hz，1H，-CH2-CH-CH2-)，4.04(q，J＝7.09Hz，2H，CH3-CH2-CO-)，4.16(q，J＝7.17Hz，2H，CH3-CH2-CO-)，7.02-7.06(m，2H，Ph-H-2，H-6)，7.25-7.28(m，1H，Ph-H-4)。产物的1H NMR光谱与产物的建议结构一致
步骤6.制备3-(3,5-二叔丁基苯基)-4-(5-羟基-1-甲基-吡唑-3-基)丁酸乙酯
在室温下向来自步骤5的3-(3,5-二叔丁基苯基)-5-氧代-庚二酸二乙酯(430.50mg，1.028mmol)在无水乙醇(5.0mL)中的溶液中加入甲基肼(70μL，1.33mmol)，得到无色溶液。将反应混合物在回流条件下加热过夜，得到极浅黄色溶液。将溶剂真空蒸发，得到脏的黄色泡沫状固体。将粗产物溶于含有痕量DCM的乙酸乙酯中，并施加到12g RediSep二氧化硅柱上，并使用0％至20％甲醇在EtOAc中通过硅胶闪蒸色谱法纯化。将纯馏分混合在一起，并且将混合物真空蒸发，得到极浅黄色粘稠液体，在真空泵上干燥，得到浅黄色至乳白色固体(355.5mg，产率86％)。固体的LC-MS分析显示所需产物的质量：m/z 401(M+H)、m/z 423(M+Na)和m/z 823(2M+Na)；计算的C24H36N2O3：400.56。1H NMR(400MHz，CDCl3)：δ1.18(t，J＝7.09Hz，3H，CH3-CH2-CO-)1.30(s，18H，2×叔-C4H9-)，2.64-2.88(m，4H，CH2-CH-CH2-，两个非对映异构体-CH2-)，2.81(s，1H，-OH)，3.24(s，3H，N-CH3)，3.46(quin，J＝7.52Hz，1H，-CH2-CH-CH2-)，4.07(q，J＝7.10Hz，2H，-O-CH2-CH3)，7.02(d，J＝1.71Hz，2H，H-2，H-6)，7.25-7.29(m，2H，Py-H-4和Ph-H4)。产物的1H NMR光谱与产物的建议结构一致。
步骤7.制备3-(3,5-二叔丁基苯基)-4-[1-甲基-5-[2-(5,6,7,8-四氢-1,8-萘啶-2-基)乙氧基]吡唑-3-基]丁酸乙酯
在-10℃(盐-冰浴)下，向三苯基膦(262.5mg，1.00mmol)在无水THF(5mL)中的溶液中逐滴加入DIAD(200μL，1.02mmol)，在5min内得到黄色悬浮液。将反应混合物在-10℃下搅拌另外20min。向上述反应混合物中滴加2-(5,6,7,8-四氢-1,8-萘啶-2-基)乙醇(155.7mg，0.874mmol)在THF(4.0mL)中的溶液。将反应混合物在-10℃下搅拌20min，并且然后将来自步骤6的3-(3,5-二叔丁基苯基)-4-(5-羟基-1-甲基-吡唑-3-基)丁酸乙酯(350.0mg，0.874mmol)在无水THF(5.0mL)中的溶液中一次性加入，得到橙色溶液。在-10℃下搅拌10min后，将反应混合物升温至室温，并在室温下搅拌过夜。将反应混合物用饱和NH4Cl溶液(25mL)冷激，并用乙酸乙酯(2×25mL)萃取。将合并的有机层用盐水(1×25mL)洗涤，经无水Na2SO4干燥，过滤并真空蒸发，得到黄色泡沫状/胶状残余物。粗产物首先通过硅胶闪蒸色谱法纯化，使用RediSep 24g硅胶柱，用0％至2％甲醇在乙酸乙酯中洗脱，得到作为黄色固体的所需产物(1.092g)。产物的LC-MS分析显示所需产物的纯度>70％。通过反相制备型HPLC使用RediSep C18柱并在含有0.05％TFA的水中使用梯度为10％至60％的乙腈，冷冻干燥后得到作为浅黄色泡沫状固体的所需产物(244.3mg；产率50％)。固体的LC-MS分析显示所需产物的质量：m/z 561(M+H)和m/z 583(M+Na)；计算的C34H48N4O3：560.78。1H NMR(400MHz，CDCl3)：δ1.08(t，J＝7.09Hz，3H)，1.29(s，18H，2×叔-C4H9-)，1.91-2.00(m，1H)，2.56-2.72(m，2H)，2.78(t，J＝6.24Hz，2H)，2.81-2.96(m，2H)，3.16(t，J＝5.99Hz，2H)，3.38-3.47(m，1H)，3.52(t，J＝4.65Hz，2H)，3.56(s，3H，N-CH3)，3.97(q，J＝7,17Hz，2H)，4.29(t，J＝5.99Hz，2H)，5.36(s，1H)，6.38(d，J＝7.34Hz，1H)，7.04(t，J＝1.71Hz，2H)，7.24(t，J＝1.71Hz，2H)，7.27(s，1H)，7.33(d，J＝7.34Hz，1H)，10.39(brs，1H)。产物的1H NMR光谱与产物的建议结构一致。
步骤8.制备3-(3,5-二叔丁基苯基)-4-[1-甲基-5-[2-(5,6,7,8-四氢-1,8-萘啶-2-基)乙氧基]吡唑-3-基]丁酸(实施例18)
向来自步骤7的3-(3,5-二叔丁基苯基)-4-[1-甲基-5-[2-(5,6,7,8-四氢-1,8-萘啶-2-基)乙氧基]吡唑-3-基]丁酸己酯(235.0mg，0.419mmol)在无水THF(3mL)中的溶液中加入1N NaOH水溶液(4.0mL)并将所得溶液在50℃下搅拌过夜。将反应混合物用2N HCl酸化，并且真空蒸发溶剂，得到极浅黄色结晶/胶状残余物。通过反相制备型HPLC纯化粗残余物，使用RediSep C18柱并在含有0.05％TFA的水中使用梯度为10％至60％的乙腈。将纯馏分混合在一起，并且将混合物真空蒸发，得到无色胶状残余物。将残余物溶于水和乙腈的混合物中，将溶液冷冻干燥，得到作为无色冻干粉末的所需产物，实施例18(240mg)。
固体的LC-MS分析显示所需产物的质量：m/z 533(M+H)和m/z 555(M+Na)。计算的C32H44N4O3：532.73。1H NMR(400MHz，DMSO-d6)：δ1.24(s，18H，2×叔-C4H9-)，1.78-1.87(m，2H)，2.58(d，J＝5.62Hz，1H)，2.60-2.69(m，3H)，2.74(t，J＝6.11Hz，2H)，3.09(t，J＝5.99Hz，2H)，3.24-3.34(m，1H)，3.39(s，3H)，3.40-3.44(m，1H)，4.23(t，J＝5.99Hz，2H)，5.40(s，2H)，6.69(d，J＝7.34Hz，1H)，7.02(d，J＝1.71Hz，1H)，7.11-7.22(m，1H)，7.64(d，J＝7.34Hz，1H)，8.12(brs，1H)，13.67(brs；1H)。产物的1H NMR光谱与产物的建议结构一致。
实施例19
制备3-(3-溴-5-(1-(二氟甲基)环丙基)苯基)-4-(1-甲基-5-(2-(5,6,7,8-四氢-1,8-萘啶-2-基)乙氧基)-1H-吡唑-3-基)丁酸
实施例19以与实施例1类似的方式制备，使用3-溴-5-(1-(二氟甲基)环丙基)苯甲醛(根据方案8合成)作为反应方案3中所需的苯甲醛。通过制备型HPLC(柱：PhenomenexGemini C18 250*50 10μ；流动相：[水(0.225％FA)-ACN]；B％：23％至53％，11.2min)纯化粗产物。将HPLC流出物冻干，得到作为白色固体的标题化合物(200mg)。固体的LC-MS分析显示所需产物的质量：m/z 589(M+H)；计算的C28H31BrF2N4O3：589.47。1H NMR(400MHz，CD3OD)：δppm 0.91(br d，J＝2.21Hz，2H)1.08-1.15(m，2H)1.84-1.96(m，2H)2.51-2.61(m，1H)2.62-2.85(m，5H)2.94-3.10(m，2H)3.34-3.47(m，6H)4.28(t，J＝6.28Hz，2H)5.40(s，1H)5.45-5.80(m，1H)6.52(d，J＝7.28Hz，1H)7.20(s，1H)7.34-7.39(m，2H)。19FNMR(400MHz，CD3OD)：δppm-117.89-118.04。
方案8
步骤1.制备1,3-二溴-5-(氯甲基)苯
在氮气氛下，将(3,5-二溴苯基)甲醇(10g，37.60mmol，1当量)溶于干燥烧瓶中的无水DCM(100mL)中。将反应混合物冷却至0℃并在氮气氛下搅拌。将DIEA(9.72g，75.21mmol，13.10mL，2当量)逐滴加入上述溶液中，在0℃下搅拌10min后，将MsCl(6.46g，56.41mmol，4.37mL，1.5当量)逐滴加入上述反应混合物中。最后，将反应混合物在26℃下搅拌2小时。TLC(石油醚:EtOAc＝5:1，UV和由KMnO4染色)显示起始醇被消耗并形成两个新斑点。将反应混合物用水(80mL)洗涤，随后用NaHCO3(80mL)溶液和盐水(80mL)洗涤，经无水Na2SO4干燥，过滤并蒸发至干，得到作为棕色液体的所需产物(12.11g)。将上述液体直接用于下一步，无需进一步纯化。1H NMR(400MHz，氯仿-d)δppm3.04(s，3H)4.49(s，2H)5.16(s，2H)7.48(d，J＝1.76Hz，2H)7.50(d，J＝1.76Hz，2H)7.63(t，J＝1.76Hz，1H)7.70(t，J＝1.76Hz，1H)。
步骤2.制备2-(3,5-二溴苯基)乙腈
在28℃下，将1,3-二溴-5-(氯甲基)苯(12.11g，42.58mmol，1当量)、KCN(13.86g，212.92mmol，9.12mL，5当量)和1,4,7,10,13,16-己氧杂环辛癸烷(1.13g，4.26mmol，0.1当量)在CH3CN(150mL)中的悬浮液搅拌12h。观察到棕色悬浮液。TLC(石油醚:乙酸乙酯＝7:1，UV和由I2染色)显示起始材料被消耗并形成一个主要的新斑点。减压浓缩反应混合物。将所得残余物溶于水(100mL)中并用乙酸乙酯(3×80mL)萃取，有机层经硫酸钠干燥，减压浓缩，得到作为棕色残余物的粗产物。通过闪蒸硅胶色谱法(80g二氧化硅闪蒸柱，洗脱液0％至9％乙酸乙酯/石油醚梯度为30mL/min)纯化残余物，得到作为浅黄色固体的所需产物(7.58g，27.57mmol，65％产率)。1H NMR(400MHz，氯仿-d)δppm 3.73(d，J＝0.66Hz，2H)7.36-7.55(m，2H)7.67(t，J＝1.65Hz，1H)。
步骤3.制备1-(3,5-二溴苯基)环丙烷甲腈
在0℃下，向搅拌的苄基(三乙基)铵的溶液中；氯化物(303.21mg，1.33mmol，0.05当量)在NaOH(43mL，50％)中的溶液中加入2-(3,5-二溴苯基)乙腈(7.32g，26.62mmol，1当量)、1,2-二溴乙烷(15g，79.87mmol，6.03mL，3当量)溶液。将所得混合物在26℃下搅拌12小时。TLC(石油醚:乙酸乙酯＝15:1)显示起始材料被消耗并且在上面形成一个主要的新斑点。将反应混合物倒入冰水(60mL)中并用乙酸乙酯(3×80mL)萃取。有机层经硫酸钠干燥，减压浓缩，得到棕色粗产物。通过闪蒸硅胶色谱法(80g二氧化硅闪蒸柱，洗脱液0％至5％乙酸乙酯/石油醚梯度为40mL/min)纯化残余物，得到作为黄色固体的所需产物(7.1g，23.59mmol，88.60％产率)。1H NMR(400MHz，氯仿-d)δppm 1.39-1.47(m，2H)1.75-1.83(m，2H)7.37(d，J＝1.76Hz，2H)7.61(t，J＝1.76Hz，1H)。
步骤4.制备1-(3,5-二溴苯基)环丙烷甲醛
在-78℃下，向搅拌的1-(3,5-二溴苯基)环丙烷甲腈(8.3g，27.58mmol，1当量)在DCM(305mL)中的溶液中加入DIBAL-H(1M，38.61mL，1.4当量)。将所得混合物在-78℃下搅拌2小时。TLC(石油醚:乙酸乙酯＝4:0.2mL，由KMnO4染色和UV)显示在起始材料下方形成一个新斑点并且起始材料被消耗。将反应混合物用2N HCl(100mL)冷激并搅拌6min，用H2O(60mL)稀释，然后用乙酸乙酯(3×150mL)萃取。用饱和NaHCO3溶液(150mL)洗涤有机层，随后用盐水(150mL)洗涤，经硫酸钠干燥并减压浓缩，得到8.9g作为黄色固体的粗产物。粗产物直接用于下一步，无需进一步纯化。1H NMR(400MHz，氯仿-d)δppm 1.37-1.47(m，2H)1.55-1.69(m，2H)7.40(d，J＝1.76Hz，2H)7.63(t，J＝1.76Hz，1H)9.10(s，1H)。
步骤5.制备1,3-二溴-5-(1-(二氟甲基)环丙基)苯
在0℃下，向搅拌的1-(3,5-二溴苯基)环丙烷甲醛(8.9g，29.28mmol，1当量)在DCM(126mL)中的溶液中缓慢加入DAST(18.88g，117.11mmol，15.5mL，4当量)。将所得混合物在26℃下搅拌12小时。TLC(石油醚:乙酸乙酯＝20:1，UV和由I2染色)显示起始材料被消耗，并在上面形成具有低极性的新的主要斑点。用水(80mL*2)洗涤反应混合物。有机层经硫酸钠干燥，减压浓缩，得到褐色残余物。通过闪蒸硅胶色谱法(20g二氧化硅闪蒸柱，洗脱液0％至5％乙酸乙酯/石油醚梯度为30mL/min)纯化残余物，得到作为灰白色固体的所需产物(5.92g，18.15mmol，61.99％产率)。1HNMR(400MHz，氯仿-d)δppm0.93-1.04(m，2H)1.13-1.22(m，2H)5.40-5.75(m，1H)7.49(d，J＝1.51Hz，2H)7.61(t，J＝1.63Hz，1H)；19FNMR(400MHz，氯仿-d)δppm-116.73。
步骤6. 3-溴-5-(1-(二氟甲基)环丙基)苯甲醛
在-78℃下，向搅拌的1,3-二溴-5-[1-(二氟甲基)环丙基]苯(5.52g，16.93mmol，1当量)在THF(82mL)中的溶液中逐滴加入n-BuLi(2.5M，6.77mL，1.0当量)。将所得混合物搅拌10min，并在-78℃下用DMF(1.86g，25.4mmol，1.95mL，1.5当量)冷激，并在-78℃下搅拌1小时。TLC(石油醚:乙酸乙酯＝10:1，UV和KMnO4)显示起始材料被消耗并且下面形成一个主要的新斑点。到向反应混合物中加入饱和NH4Cl(15mL)并用H2O(70mL)稀释，然后用乙酸乙酯(3×60mL)萃取。有机层经硫酸钠干燥，减压浓缩，得到淡黄色残余物。通过闪蒸硅胶色谱法(12g 二氧化硅闪蒸柱，洗脱液0％至10％乙酸乙酯/石油醚梯度为30mL/min)纯化残余物，得到作为灰白色固体的所需产物(1.5g，5.45mmol，32.20％产率)。1H NMR(400MHz，氯仿-d)δppm 1.01-1.08(m，2H)1.21-1.28(m，2H)5.43-5.74(m，1H)7.83(dt，J＝11.30，1.63Hz，2H)7.94-7.98(m，1H)9.96(s，1H)。
实施例20
制备3-(3-氰基-5-(1-(二氟甲基)环丙基)苯基)-4-(1-甲基-5-(2-(5,6,7,8-四氢-1,8-萘啶-2-基)乙氧基)-1H-吡唑-3-基)丁酸
方案9
3-[3-溴-5-[1-(二氟甲基)环丙基]苯基]-4-[1-甲基-5-[2-(5,6,7,8-四氢-1,8-萘啶-2-基)乙氧基]吡唑-3-基]丁酸(100mg，155.11μmol，1当量，FA)和二氰基锌(54.6mg，465.3μmol，29.5μL，3当量)的混合物在25mL微波小瓶中的DMF(6mL)中抽空并用N2(3x)回填。加入三苯基膦(17.9mg，15.5μmol，0.1当量)。将反应小瓶密封，并将反应混合物再次脱气并用N2(3x)回填，并且然后在微波辐射下在120℃下搅拌90min。LCMS显示起始溴化物被消耗，所需产物为主峰。HPLC显示形成66％的所需产物。通过Pre-HPLC(柱：Boston GreenODS 150*30 5μ；流动相：[水(0.1％TFA)-ACN]；B％：20％至50％，7min)纯化滤液。冷冻干燥后，得到85mg作为白色固体的所需产物(85mg，129.28μmol，83％产率，98.8％纯度，TFA)。固体的LC-MS分析显示所需产物的质量：m/z 536(M+H)；计算的C29H31F2N5O3：535.24。1H NMR(400MHz，CD3OD)δppm 0.92-1.01(m，2H)1.13-1.20(m，2H)1.90-2.00(m，2H)2.62-2.94(m，6H)3.11-3.19(m，2H)3.42-3.53(m，6H)4.29(td，J＝6.06，2.20Hz，2H)5.39(s，1H)5.45-5.78(m，1H)6.68(d，J＝7.50Hz，1H)7.48-7.53(m，2H)7.54-7.58(m，1H)7.60(d，J＝7.28Hz，1H)；19FNMR(400MHz，CD3OD)δppm-77.3，-117.4。
实施例21
制备3-(3-(1-(二氟甲基)环丙基)-5-氟苯基)-4-(1-甲基-5-(2-(5,6,7,8-四氢-1,8-萘啶-2-基)乙氧基)-1H-吡唑-3-基)丁酸
实施例21以与实施例19类似的方式制备，在反应方案8中使用(3-溴-5-氟苯基)甲醇代替3,5-二溴苯基)甲醇。通过制备型HPLC(条件：柱：Boston pH-lex 150*25 10μm；流动相：[水(0.1％TFA)-ACN]；B％：31％至61％，8min)纯化粗产物，得到作为白色固体的所需化合物(118.6mg，产率45％，纯度97.2％)。固体的LC-MS分析显示所需产物的质量：m/z 529.1(M+H)；计算的C28H31F3N4O3：528.57。1H NMR(400MHz，CD3OD)：δppm＝7.60(d，J＝7.5Hz，1H)，7.01(s，1H)，6.96-6.87(m，2H)，6.67(d，J＝7.3Hz，1H)，5.78-5.45(m，1H)，5.39(s，1H)，3.52-3.47(m，2H)，3.46-3.40(m，3H)，3.14(t，J＝5.8Hz，2H)，2.89-2.57(m，7H)，1.98-1.90(m，2H)，1.14-1.07(m，2H)，0.92(br d，J＝2.2Hz，2H)。19F NMR(376MHz，CD3OD)：δppm＝-77.39(br s，1F)，-115.84(t，J＝9.5Hz，1F)，-117.83--117.96(m，1F)，-117.97--118.09(m，1F)。
实施例22
制备3-(3-氯-5-(1-(二氟甲基)环丙基)苯基)-4-(1-甲基-5-(2-(5,6,7,8-四氢-1,8-萘啶-2-基)乙氧基-1H-吡唑-3-基)丁酸
实施例22以与实施例19类似的方式制备，在反应方案8中使用(3-溴-5-氯苯基)甲醇代替3,5-二溴苯基)甲醇。通过制备型HPLC(条件：柱：Boston Green ODS 150*30 5μ；流动相：[水(0.1％TFA)-ACN]；B％：25％至55％，8min)纯化粗产物。获得作为白色固体的标题化合物(88mg，133μmol，44％产率，100％纯度，TFA)。液体的LC-MS分析显示所需产物的质量：m/z 545(M+H)1H NMR(400MHz，CD3OD)：δppm＝7.57(d，J＝7.3Hz，1H)，7.20(t，J)＝1.7Hz，1H)，7.16(t，J＝1.7Hz，1H)，7.10(s，1H)，6.64(d，J＝7.3Hz，1H)，5.74-5.55(m，1H)，5.43(s，1H)，4.35-4.23(m，2H)，3.51-3.46(m，2H)，3.42-3.33(m，1H)，3.29(td，J＝1.6，3.3Hz，3H)，3.17-3.08(m，2H)，2.91-2.60(m，6H)，1.93(td，J＝6.1，11.9Hz，2H)，1.14-1.06(m，2H)，0.95-0.85(m，2H)。
实施例23
制备3-(3-(1-(二氟甲基)环丙基)-5-(三氟甲基)苯基)-4-(1-甲基-5-(2-(5,6,7,8-四氢-1,8-萘啶-2-基)乙氧基)-1H-吡唑-3-基)丁酸
实施例23以与实施例19类似的方式制备，在反应方案8中使用(3-溴-5-(三氟甲基)苯基)甲醇代替3,5-二溴苯基)甲醇。通过制备型HPLC(TFA条件：柱：Boston Green ODS150*30 5μ；流动相：[水(0.1％TFA)-ACN]；B％：20％至50％，8min)纯化粗产物。获得作为白色固体的标题化合物(55mg，95μmol，60％产率，100％纯度)。1H NMR、19F NMR、LC-MS和HMBC与标题化合物结构一致。1H NMR(400MHz，CD3OD)δppm 7.60(d，J＝7.5Hz，1H)，7.49(s，1H)，7.46(s，1H)，7.42(s，1H)，6.67(d，J＝7.3Hz，1H)，5.80-5.45(m，1H)，5.42(s，1H)，4.34-4.24(m，2H)，3.53-3.47(m，3H)，3.45(s，3H)，3.14(t，J＝6.1Hz，2H)，2.94-2.64(m，6H)，1.95(quin，J＝6.0Hz，2H)，1.20-1.14(m，2H)，1.00-0.93(m，2H)；19F NMR(376MHz，CD3OD)-63.9，-77.4，-117.4，-117.6。
实施例24
制备3-(3-氟-5-(1,1,1-三氟-2-甲基丙烷-2-基)苯基)-4-(1-甲基-5-(2-(5,6,7,8-四氢-1,8-萘啶-2-基)乙氧基)-1H-吡唑-3-基)丁酸
实施例24以与实施例1类似的方式制备，使用3-氟-5-(1,1,1-三氟-2-甲基丙烷-2-基)苯甲醛(根据方案10合成)作为反应方案3中所需的苯甲醛。通过制备型HPLC(柱：Boston Green ODS 150*30 5μ；流动相：[水(0.1％TFA)-ACN]；B％：30％至56％，7min)纯化粗产物。将HPLC流出物冷冻干燥，得到作为白色固体的所需产物(350mg，528μmol，65％产率，100％纯度，TFA)。固体的LC-MS分析显示所需产物的质量：m/z 549(M+H)；计算的C28H32F4N4O3：548.24。1H NMR(400MHz，CD3OD)ppm 1.52(s，6H)1.95(dd，J＝6.50，5.18Hz，2H)2.59-2.93(m，6H)3.15(t，J＝5.95Hz，2H)3.41-3.54(m，6H)4.30(td，J＝6.01，1.87Hz，2H)5.45(s，1H)6.67(d，J＝7.50Hz，1H)6.98(dt，J＝9.48，1.76Hz，1H)7.04-7.09(m，1H)7.04-7.13(m，1H)7.59(d，J＝7.28Hz，1H)；19F NMR(400MHz，CD3OD)ppm-77.3，-115.1。
方案10
步骤1.制备1-(3-溴-5-氟苯基)乙酮
在氮气下，将1,3-二溴-5-氟-苯(20g，78.77mmol，1当量)溶于干燥烧瓶中的i-PR2O(200mL)中。将反应混合物冷却至-78℃并在氮气氛下搅拌。将n-BuLi(2.5M，31.5mL，1当量)逐滴加入上述溶液中，并将反应混合物在-78℃下搅拌30min。在完全加入n-BuLi后，将N-甲氧基-N-甲基-乙酰胺(9.75g，94.5mmol，10.05mL，1.2当量)滴加到上述反应混合物中，同时保持反应混合物低于-78℃。加入后，将反应混合物缓慢升温至30℃达30min。将反应混合物倒入水(150mL)中并将反应混合物搅拌15min。分离有机相，水相用乙酸乙酯(150mL)萃取，合并有机相，经无水Na2SO4干燥，过滤并真空蒸发，得到残余物(16g粗品)。通过闪蒸硅胶色谱法(120g二氧化硅闪蒸柱，洗脱液0％至10％乙酸乙酯/石油醚梯度为85mL/min)纯化残余物。获得作为灰白色固体的化合物(11.3g，产率66％)。1H NMR(400MHz，CDCl3)δppm 7.91-7.84(m，1H)，7.63-7.54(m，1H)，7.45(td，J)＝2.0，7.8Hz，1H)，2.63-2.55(m，3H)。
步骤2.制备2-(3-溴-5-氟苯基)-1,1,1-三氟丙烷-2-醇
在0℃下，向搅拌的1-(3-溴-5-氟-苯基)乙酮(11.2g，51.60mmol，1当量)和TMSCF3(14.68g，103.2mmol，2当量)在DMF(100mL)中的溶液中分批加入Cs2CO3(33.63g，103.2mmol，2当量)，得到棕色悬浮液。然后将反应混合物在30℃下搅拌4小时。将反应混合物用水(100mL)冷激，并且分离并用乙酸乙酯(200mL*2)萃取，有机层用水(200mL*2)和盐水(200mL)洗涤。将混合物反应物经无水Na2SO4干燥，过滤并真空蒸发，得到残余物。通过闪蒸硅胶色谱法(220g二氧化硅闪蒸柱，洗脱液0％至30％乙酸乙酯/石油醚梯度为100mL/min)纯化残余物。获得作为黑褐色液体的化合物(18.4g，粗品)。1HNMR(400MHz，CDCl3)δppm 7.37(s，1H)，7.16-7.03(m，2H)，1.60(s，3H)。
步骤3.制备2-(3-溴-5-氟苯基)-1,1,1-三氟丙-2-基甲磺酸盐
在氮气下，将2-(3-溴-5-氟-苯基)-1,1,1-三氟-丙-2-醇(18g，62.71mmol，1当量)和TEA(19.04g，188.1mmol，26.2mL，3当量)的混合物溶于干燥烧瓶中的DCM(180mL)中。将反应混合物冷却至0℃并在氮气氛下搅拌。将MsCl(8.9g，77.7mmol，6mL，1.24当量)逐滴加入上述溶液中，并将反应混合物在30℃下搅拌3h。通过加入H2O(100mL)冷激反应混合物，并且然后分离并用DCM(250mL)萃取。合并有机层，并且经Na2SO4干燥，过滤并减压浓缩，得到残余物(15.6g)。通过闪蒸硅胶色谱法(120g二氧化硅闪蒸柱，洗脱液0％至10％乙酸乙酯/石油醚梯度为85mL/min)纯化残余物。获得作为黄色固体的化合物(11.6g，产率50.66％)。1H NMR(400MHz，CDCl3)δppm 7.48(s，1H)，7.38-7.32(m，1H)，7.30-7.22(m，1H)，3.22-3.17(m，3H)，2.28(d，J＝1.1Hz，3H)。
步骤4.制备1-溴-3-氟-5-(1,1,1-三氟-2-甲基丙-2-基)苯
在N2下，在-78℃下，向搅拌的[1-(3-溴-5-氟-苯基)-2,2,2-三氟-1-甲基-乙基]甲磺酸酯(1000mg，2.74mmol，1当量)在无水DCM(10mL)中的溶液中逐滴加入三氯甲基铝(1M，5.48mL，2当量)。将反应混合物在1小时内缓慢升温至环境温度(26℃)并在该温度下搅拌1小时。TLC(石油醚)显示起始材料被消耗并且在上面形成两个新斑点。将混合物缓慢倒入饱和NH4Cl(30mL)中，然后搅拌15min。通过硅藻土垫滤出未溶解的沉淀物。将滤液和洗涤液用盐水(15mL)洗涤，经硫酸钠干燥，并真空浓缩，得到粗产物。通过闪蒸硅胶色谱法(12g 二氧化硅闪蒸柱，洗脱液100％石油醚梯度为32mL/min)纯化残余物，得到作为无色油状物的所需产物(649mg，2.28mmol，产率83％)。1H NMR(400MHz，CDCl3)δppm 1.56(s，6H)7.13-7.20(m，1H)7.23(dt，J＝7.83，1.93Hz，1H)7.42(s，1H)；19FNMR(400MHz，氯仿-d))ppm-76.1，-110.5。
步骤5.制备3-氟-5-(1,1,1-三氟-2-甲基丙烷-2-基)苯甲醛
在-78℃下，向搅拌的1-溴-3-氟-5-(2,2,2-三氟-1,1-二甲基-乙基)苯(3900mg，13.68mmol，1当量)在二异丙醚(45mL)中的溶液中逐滴加入n-BuLi(2.5M，10.94mL，2当量)，得到黄色悬浮液。将所得混合物在-78℃下搅拌30min并在-78℃下用DMF(2g，27.36mmol，2.11mL，2当量)冷激，得到黄色透明溶液，然后缓慢升温至室温(26℃)达30min。TLC(石油醚，由KMnO4染色)显示起始材料被消耗并且在下面发现一个主要的新斑点。向反应混合物中加入饱和NH4Cl(50mL)并用H2O(15mL)稀释，搅拌15min，然后用乙酸乙酯(3×40mL)萃取。有机层经硫酸钠干燥，减压浓缩，得到淡黄色残余物。通过闪蒸硅胶色谱法(24g二氧化硅闪蒸柱，洗脱液0％至5％乙酸乙酯/石油醚梯度为30mL/min)纯化残余物，得到作为浅黄色油状物的所需产物(1.0g，4.27mmol，31％产率)。1H NMR(400MHz，CDCl3)ppm 1.63(s，7H)7.46-7.51(m，1H)7.51-7.57(m，1H)7.82(s，1H)10.01(d，J＝1.76Hz，1H)；19F NMR(400MHz，CDCl3)ppm-76.1，-110.8。
实施例25
制备4-[1-甲基-5-[2-(5,6,7,8-四氢-1,8-萘啶-2-基)乙氧基]吡唑-3-基]-3-[3-(2,2,2-三氟-1,1-二甲基乙基)-5-三氟甲基)苯基]丁酸
实施例25以与实施例24类似的方式制备，在反应方案10中使用1,3-二溴-5-(三氟甲基)苯代替1,3-二溴-5-氟-苯。通过制备型HPLC(柱：Xbridge150*30mm*10μm；流动相：[水(0.05％氢氧化铵v/v)-ACN]；B％：11％至51％，12min)纯化粗产物。获得作为白色固体的标题化合物(4.9mg，8.19μmol，3.42％产率，100％纯度)。1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δppm1.55(d，J＝2.5Hz，6H)，1.70-1.78(m，2H)，2.61-2.66(m，2H)，2.69-2.79(m，2H)，2.82(t，J＝6.5Hz，2H)，3.24(br s，2H)，3.35(s，3H)，3.44-3.55(m，1H)，4.19(t，J＝6.8Hz，2H)，5.37(s，1H)，6.25-6.36(m，2H)，7.05(d，J＝7.3Hz，1H)，7.59(br d，J＝5.0Hz，2H)，7.66(s，1H)。固体的LC-MS分析显示所需产物的质量：m/z 599(M+H)。
实施例26
制备3-[3-溴-5-(2,2,2-三氟-1,1-二甲基-乙基)苯基]-4-[1-甲基-5-[2-(5,6,7,8-四氢-1,8-萘啶-2-基)乙氧基]吡唑-3-基]丁酸
实施例26以与实施例24类似的方式制备，在反应方案10中使用1,3,5-三溴苯代替1,3-二溴-5-氟-苯。通过制备型HPLC(柱：Boston Green ODS 150*30 5μ；流动相：[水(0.1％TFA)-ACN]；B％：25％至55％，8min)纯化粗产物。获得作为白色固体的标题化合物(20mg，33μmol，52％产率)。液体的LC-MS分析显示所需产物的质量：m/z 611(M+H)。1H NMR(400MHz，CD3OD)7.59(d，J＝7.5Hz，1H)，7.46(s，1H)，7.37-7.36(m，1H)，7.25(s，1H)，6.67(d，J＝7.3Hz)，1H)，5.41(s，1H)，4.32-4.26(m，2H)，3.51-3.48(m，2H)，3.44(s，3H)，3.42-3.37(m，1H)，3.14(t，J)＝6.0Hz，2H)，2.86-2.62(m，6H)，1.98-1.92(m，2H)，1.50(s，6H)；19FNMR(376MHz，CD3OD)-77.32，-77.36。
实施例27
制备3-(3-氯-5-(1,1,1-三氟-2-甲基丙烷-2-基)苯基)-4-(1-甲基-5-(2-(5,6,7,8-四氢-1,8-萘啶-2-基)乙氧基)-1H-吡唑-3-基)丁酸
实施例27以与实施例24类似的方式制备，在反应方案10中使用1,3-二溴-5-氯-苯代替1,3-二溴-5-氟-苯。通过制备型HPLC(TFA条件：柱：Boston Green ODS 150*30 5μ；流动相：[水(0.1％TFA)-ACN]；B％：15％至45％，8min)纯化粗产物。获得作为白色固体的标题化合物(128mg，226μmol，80％产率，100％纯度)。1H NMR(400MHz，CD3OD)7.60(d，J＝7.3Hz，1H)，7.33(s，1H)，7.26-7.19(m，2H)，6.68(d，J＝7.3Hz，1H)，5.44(s，1H)，4.34-4.26(m，2H)，3.52-3.48(m，2H)，3.46(s，3H)，3.45-3.38(m，1H)，3.15(t，J＝5.9Hz，2H)，2.92-2.85(m，1H)，2.83(t，J＝6.3Hz，2H)，2.78-2.70(m，2H)，2.69-2.60(m，1H)，1.99-1.91(m，2H)，1.52(s，6H)；19F NMR(376MHz，CD3OD)-77.36。LCMS(质量：m/z 565.1(M+H))。
实施例28
制备3-[3-氰基-5-(2,2,2-三氟-1,1-二甲基-乙基)苯基]-4-[1-甲基-5-[2-(5,6,7,8-四氢-1,8-萘啶-2-基)乙氧基]吡唑-3-基]丁酸三氟乙酸盐
方案11
步骤1.制备3-[3-氰基-5-(2,2,2-三氟-1,1-二甲基-乙基)苯基]-4-[1-甲基-5-[2-(5,6,7,8-四氢-1,8-萘啶-2-基)乙氧基]吡唑-3-基]丁酸酯
3-[3-溴-5-(2,2,2-三氟-1,1-二甲基-乙基)苯基]-4-[1-甲基-5-[2-(5,6,7,8-四氢-1,8-萘啶-2-基)乙氧基]吡唑-3-基]丁酸己酯(50mg，78μmol，1当量)和Zn(CN)2(27.6mg，235umol，14.93μL，3当量)的混合物在25mL微波小瓶中的DMF(3mL)抽空并用N2回填三次。加入Pd(PPh3)4(9.06mg，7.8μmol，0.1当量)。将反应小瓶密封，并将反应混合物再次脱气并用N2回填(3次)，并且然后在微波辐射下在120℃下搅拌1.5小时。LC-MS显示大部分3-[3-溴-5-(2,2,2-三氟-1,1-二甲基-乙基)苯基]-4-[1-甲基-5-[2-(5,6,7,8-四氢-1,8-萘啶-2-基)乙氧基]吡唑-3-基]丁酸己酯被消耗，并检测到所需质量(m/z 584.2(M+H))。减压浓缩反应混合物，得到残余物。通过制备型HPLC(柱：Phenomenex Gemini C18 250*50mm*10μm；流动相：[水(0.05％HCl)-ACN]；B％：30％至60％，10min)纯化残余物。获得作为白色固体的标题化合物(40mg，69μmol，87％产率)。液体的LC-MS分析显示所需产物的质量：m/z584.2(M+H)。
步骤2.制备3-[3-氰基-5-(2,2,2-三氟-1,1-二甲基-乙基)苯基]-4-[1-甲基-5-[2-(5,6,7,8-四氢-1,8-萘啶-2-基)乙氧基]吡唑-3-基]丁酸三氟乙酸盐
向3-[3-氰基-5-(2,2,2-三氟-1,1-二甲基-乙基)苯基]-4-[1-甲基-5-[2-(5,6,7,8-四氢-1,8-萘啶-2-基)乙氧基]吡唑-3-基]丁酸己酯(40mg，68.54μmol，1当量)在THF(2mL)中的溶液中加入LiOH·H2O(1M，2.06mL，30当量)。将混合物在60℃下搅拌16小时。LC-MS显示3-[3-氰基-5-(2,2,2-三氟-1,1-二甲基-乙基)苯基]-4-[1-甲基-5-[2-(5,6,7,8-四氢-1,8-萘啶-2-基)乙氧基]吡唑-3-基]丁酸己酯被完全消耗，并检测到所需质量(m/z556.1(M+H))。减压浓缩反应混合物以除去THF。将残余物用AcOH稀释至pH(约5)并用EtOAc50mL(25mL*2)萃取。减压浓缩合并的有机层，得到残余物。通过制备型HPLC(柱：BostonGreen ODS 150*30 5μ；流动相：[水(0.1％TFA)-ACN]；B％：30％至56.25％，7min)纯化残余物。获得作为白色固体的标题化合物(8.8mg，15.5μmol，23％产率，98％纯度)。液体的LC-MS分析显示所需产物的质量：m/z 556.1(M+H)。1H NMR(400MHz，CD3OD)7.71(s，1H)，7.64-7.60(m，3H)，6.71(d，J＝7.5Hz，1H)，5.42(s，1H)，4.33-4.26(m，2H)，3.54(br s，1H)，3.52(brd，J＝6.0Hz，2H)，3.45(s，3H)，3.16(t，J＝5.9Hz，2H)，2.95-2.71(m，1H)，2.95-2.71(m，5H)，2.00-1.94(m，2H)，1.57(s，6H)。19F NMR(376MHz，CD3OD)-77.37(s，1F)，-77.41(s，1F)。
实施例29
制备3-(3-氯-5-(4-(甲氧基甲基)四氢-2H-吡喃-4-基)苯基)-4-(1-甲基-5-(2-(5,6,7,8)-四氢-1,8-萘啶-2-基)乙氧基)-1H-吡唑-3-丁酸
实施例29以与实施例1类似的方式制备，使用3-氯-5-(4-(甲氧基甲基)四氢-2H-吡喃-4-基)苯甲醛(根据方案12合成)作为反应方案3中所需的苯甲醛。通过制备型HPLC(柱：Boston Green ODS 150*30 5μ；流动相：[水(0.1％TFA)-ACN]；B％：15％至45％，8min)纯化粗产物。获得作为浅黄色固体的标题化合物(112.5mg，产率83％)。该化合物的LC-MS分析显示所需产物的质量：m/z 583(M+1)；1H NMR(400MHz，CD3OD)δ＝7.61(d，J＝7.5Hz，1H)，7.18(t，J＝1.8Hz，1H)，7.13(s，1H)，7.05(s，1H)，6.70(d，J＝7.5Hz，1H)，5.43(s，1H)，4.30(t，J＝6.1Hz，2H)，3.75-3.62(m，2H)，3.53-3.47(m，2H)，3.47-3.32(m，6H)，3.29-3.12(m，5H)，2.92-2.80(m，3H)，2.77-2.60(m，3H)，2.07-1.84(m，6H)。
方案12
步骤1.制备2-(3-溴-5-氯苯基)-1,3-二氧戊环
将3-溴-5-氯-苯甲醛(10g，45.57mmol，1当量)和乙二醇(8.48g，136.70mmol，7.64mL，3当量)、PTSA(156.93mg，911.32umol，0.02当量)的混合物在氮气下溶于干燥的烧瓶中的无水甲苯(100mL)中。将反应混合物在140℃下回流2小时。加入饱和NaHCO3溶液(100mL)。分离甲苯层，用NaCl溶液(150mL)洗涤，经无水Na2SO4干燥，过滤并真空蒸发。获得作为浅黄色液体的标题化合物(12.8g，粗品)。1H NMR(400MHz，CD3OD)δ＝7.59-7.48(m，2H)，7.42(d，J＝1.3Hz，1H)，5.77(s，1H)，4.19-3.97(m，4H)。
步骤2.制备4-(3-氯-5-(1,3-二氧戊环-2-基)苯基)四氢-2H-吡喃-4-羧酸甲酯
在-20℃，在N2下，向N-环己基环己胺(6.26g，34.53mmol，6.88mL，1.3当量)在甲苯(70mL)中的混合物中加入n-BuLi(2.5M，13.8mL，1.3当量)。将混合物升温至0℃并搅拌20min，加入四氢吡喃-4-羧酸甲酯(3.83g，26.56mmol，3.55mL，1当量)并在28℃下搅拌10min。然后加入2-(3-溴-5-氯-苯基)-1,3-二氧戊环(7g，26.56mmol，1当量)、Pd(dba)2(458mg，797μmol，0.03当量)和t-Bu3P(1.61g，796.92μmol，1.87mL，10％纯度，0.03当量)。将混合物在28℃下搅拌12小时。通过在28℃下加入饱和NH4Cl(50mL)冷激混合物，并且然后用EtOAc(50mL)稀释，并用EtOAc(1500mL*2)萃取。将合并的有机层用盐水(150mL)洗涤，经Na2SO4干燥，过滤并减压浓缩，得到残余物。通过闪蒸硅胶色谱法(80g二氧化硅闪蒸柱，洗脱液0％至50％乙酸乙酯/石油醚梯度为65mL/min)纯化残余物。获得作为浅黄色液体的化合物(3.7g，产率43％)。1H NMR(400MHz，CD3OD)δ＝7.41-7.39(m，1H)，7.35(d，J＝1.8Hz，2H)，5.77(s，1H)，4.15-4.09(m，2H)，4.08-4.01(m，2H)，3.94(td，J＝3.6，12.0Hz，2H)，3.68(s，3H)，3.55(dt，J＝2.0，11.7Hz，2H)，2.52(dd，J＝2.3，13.6Hz，2H)，2.02-1.90(m，2H)。
步骤3.制备(4-(3-氯-5-(1,3-二氧戊环-2-基)苯基)四氢-2H-吡喃-4-基)甲醇
向LAH(859.5mg，22.7mmol，2当量)在THF(20mL)中的混合物。将4-[3-氯-5-(1,3-二氧戊环-2-基)苯基]四氢吡喃-4-羧酸甲酯(3.7g，11.32mmol，1当量)的混合物溶于THF(40mL)中并在25℃下在N2下加入。将反应混合物在25℃下搅拌8小时。将反应混合物用H2O(50mL)冷激并用乙酸乙酯(2*100mL)萃取。将合并的有机相用盐水溶液(120mL)洗涤，经无水Na2SO4干燥，过滤并真空蒸发。通过闪蒸硅胶色谱法(40g二氧化硅闪蒸柱，洗脱液0％至50％乙酸乙酯/石油醚梯度为35mL/min)纯化残余物。获得作为白色固体的化合物(2.4g，产率71％)。1H NMR(400MHz，CD3OD)δ＝7.41(t，J＝1.5Hz，1H)，7.33(d，J＝1.5Hz，2H)，5.78(s，1H)，4.16-4.09(m，2H)，4.08-4.02(m，2H)，3.80(ddd，J＝3.9，5.7，18.8Hz，2H)，3.63(s，2H)，3.57(ddd，J＝3.0，8.8，18.8Hz，2H)，2.15-2.06(m，2H)，1.98-1.90(m，2H)。
步骤4.制备4-(3-氯-5-(1,3-二氧戊环-2-基)苯基)-4-(甲氧基甲基)四氢-2H-吡喃
在氩气氛下，将NaH(803mg，20.1mmol，60％纯度，2.5当量)加入到溶于无水THF(30mL)中的[4-[3-氯-5-(1,3-二氧戊环-2-基)苯基]四氢吡喃-4-基]甲醇(2.4g，8.03mmol，1当量)的溶液中，并将所得混合物在0℃下搅拌30min。向反应溶液中逐滴加入CH3I(6.9g，48.61mmol，3.03mL，6.05当量)，并将所得混合物在25℃下搅拌2小时。将反应混合物缓慢用盐水(20mL)冷激，并且然后用乙酸乙酯(50mL*3)萃取。将合并的有机相用盐水(100mL)洗涤，经无水Na2SO4干燥，过滤并真空浓缩。通过闪蒸硅胶色谱法(40g二氧化硅闪蒸柱，洗脱液0％至50％乙酸乙酯/石油醚梯度为35mL/min)纯化残余物。获得作为浅黄色液体的标题化合物(2.3g，产率92％)。1H NMR(400MHz，氯仿-d)δ＝7.37(d，J＝1.5Hz，1H)，7.31(s，2H)，5.79(s，1H)，4.16-4.10(m，2H)，4.09-4.02(m，2H)，3.82-3.74(m，2H)，3.55(ddd，J＝3.0，8.7，11.7Hz，2H)，3.36(s，2H)，3.21(s，3H)，2.07-2.03(m，2H)，2.03-1.95(m，2H)。
步骤5.制备3-氯-5-(4-(甲氧基甲基)四氢-2H-吡喃-4-基)苯甲醛
在氮气下，将4-[3-氯-5-(1,3-二氧戊环-2-基)苯基]-4-(甲氧基甲基)四氢吡喃(2.3g，7.35mmol，1当量)和PTSA(253mg，1.47mmol，0.2当量)溶于干燥的烧瓶中的丙酮(30mL)中，并在25℃下搅拌12小时。加入饱和NaHCO3(30mL*2)，用EtOAc(50mL×2)萃取混合物，经无水Na2SO4干燥，过滤并真空蒸发，得到残余物。获得作为浅黄色液体的标题化合物(1.9g，产率96％)。1H NMR(400MHz，CD3OD)δ＝10.01-9.94(m，1H)，7.74(td，J＝1.5，8.0Hz，2H)，7.58(t，J＝1.9Hz，1H)，3.80(ddd，J＝3.8，6.3，18.8Hz，2H)，3.62-3.53(m，2H)，3.42(s，2H)，3.26-3.19(m，3H)，2.14-2.07(m，2H)，2.04-1.97(m，2H)。
实施例30
制备3-(3-氟-5-(4-(甲氧基甲基)四氢-2H-吡喃-4-基)苯基)-4-(1-甲基-5-(2-(5,6,7,8)-四氢-1,8-萘啶-2-基)乙氧基)-1H-吡唑-3-基)丁酸
实施例30以与实施例29类似的方式制备，在反应方案12中使用3-溴-5-氟苯甲醛代替3-溴-5-氯-苯甲醛。通过制备型HPLC(柱：Boston Green ODS 150*30 5μ；流动相：[水(0.1％TFA)-ACN]；B％：15％至45％，8min)纯化粗产物。获得作为白色固体的标题化合物(6.7mg，9.8μmol，37％产率，100％纯度，TFA)。固体的LC-MS分析显示所需产物的质量：m/z567.1(M+H)；计算的C31H39FN4O5：566.66。1H NMR(CD3OD，400MHz)7.60(d，J＝7.2Hz，1H)，6.90-6.96(m，2H)，6.85-6.90(m，1H)，6.69(d，J＝7.2Hz，1H)，5.46(s，1H)，4.30(t，J＝6.0Hz，2H)，3.61-3.75(m，2H)，3.46-3.55(m，3H)，3.45(s，3H)，3.32-3.44(m，4H)，3.12-3.19(m，5H)，2.60-2.91(m，6H)，1.85-2.06(m，6H)。
实施例31
制备3-(3-(4-(甲氧基甲基)四氢-2H-吡喃-4-基)-5-(三氟甲基)苯基)-4-(1-甲基-5-(2-(5,6,7,8-四氢-1,8-萘啶-2-基)乙氧基-1H-吡唑-3-基)丁酸
实施例31以与实施例29类似的方式制备，在反应方案12中使用3-溴-5-(三氟甲基)苯甲醛代替3-溴-5-氯-苯甲醛。通过制备型HPLC(柱：Boston Green ODS 150*30 5μ；流动相：[水(0.1％TFA)-ACN]；B％：25％至51.25％)纯化粗产物。获得作为黄色固体的标题化合物(19mg，26μmol，15％产率，100％纯度，TFA)。1H NMR(400MHz，CD3OD)：δppm＝7.58(d，J＝7.3Hz，1H)，7.43(s，1H)，7.37(br d，J＝4.2Hz，2H)，6.66(d，J＝7.5Hz，1H)，5.45(s，1H)，4.28(t，J＝6.0Hz，2H)，3.75-3.61(m，2H)，3.53-3.46(m，3H)，3.43(s，3H)，3.33(s，1H)，3.29(d，J＝1.3Hz，3H)，3.21-3.07(m，5H)，2.90(dd，J＝6.6，14.3Hz，1H)，2.84-2.62(m，5H)，2.11-1.99(m，2H)，1.99-1.86(m，4H)。
实施例32
制备3-(5-(叔丁基)-2-甲氧基苯基)-4-(1-甲基-5-(2-(5,6,7,8-四氢-1,8-萘啶-2-基)乙氧基-1H-吡唑-3-基)丁酸
实施例32以与实施例1类似的方式制备，使用5-(叔丁基)-2-甲氧基苯甲醛(根据方案13合成)作为反应方案3中所需的苯甲醛。通过制备型HPLC(柱：Boston Green ODS150*30 5μ；流动相：[水(0.1％TFA)-ACN]；B％：25％至55％，8min)纯化粗产物。得到作为白色固体的标题化合物(93mg，149μmol，27％产率，100％纯度，TFA)。液体的LC-MS分析显示所需产物的质量：m/z 507(M+H)1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δppm 1.16(s，9H)，1.74-1.83(m，2H)，2.51(br dd，J＝7.5，4.6Hz，2H)，2.55-2.67(m，2H)，2.69-2.74(m，2H)，3.05(t，J＝6.1Hz，2H)，3.34(s，3H)，3.36-3.42(m，2H)，3.52-3.63(m，2H)，3.72(s，3H)，4.19(t，J＝6.1Hz，2H)，5.29(s，1H)，6.65(d，J＝7.3Hz，1H)，6.79(d，J＝9.3Hz，1H)，7.05-7.11(m，2H)，7.59(d，J＝7.3Hz，1H)，8.43(br s，1H)。
方案13
制备5-(叔丁基)-2-甲氧基苯甲醛
向1-叔丁基-4-甲氧基-苯(3g，18.27mmol，1当量)在TFA(30mL)中的溶液中加入乌洛托品(5.12g，36.53mmol，6.83mL，2当量)。将混合物在80℃下搅拌16小时。LC-MS显示检测到所需化合物。减压浓缩反应混合物，得到残余物。通过闪蒸硅胶色谱法(40g二氧化硅闪蒸柱，洗脱液0％至3％乙酸乙酯/石油醚梯度为30mL/min)纯化残余物。获得作为黄色液体的5-叔丁基-2-甲氧基-苯甲醛(2.4g，12.5mmol，68％产率)。液体的LC-MS分析显示所需产物的质量：m/z 193(M+H)1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δppm 1.26(s，9H)，2.43-2.57(m，3H)，3.89(s，3H)，7.16(d，J＝8.8Hz，1H)，7.63-7.73(m，2H)，10.28-10.38(m，1H)。
实施例33
制备3-(3-(叔丁基)-2-甲氧基苯基)-4-(1-甲基-5-(2-(5,6,7,8-四氢-1,8-萘啶-2-基)乙氧基)-1H-吡唑-3-基)丁酸
实施例33以与实施例1类似的方式制备，使用3-(叔丁基)-2-甲氧基苯甲醛(根据方案14合成)作为反应方案3中所需的苯甲醛。通过制备型HPLC(柱：Boston Green ODS150*30 5μ；流动相：[水(0.1％TFA)-ACN]；B％：25％至55％，8min)纯化粗产物。获得作为白色固体的标题化合物(136.3mg，219.25μmol，66％产率，99.8％纯度，TFA)。油状物的LC-MS分析显示所需产物的质量：m/z 507.1(M+H)；计算的C29H38N4O4：506.64。1H NMR(CD3OD，400MHz)δppm 7.59(d，J＝7.2Hz，1H)，7.17(d，J＝7.6Hz，2H)，7.00-7.05(m，1H)，6.67(d，J＝7.2Hz，1H)，5.46(s，1H)，4.31(t，J＝6.0Hz，2H)，3.86-3.95(m，1H)，3.77(s，3H)，3.47-3.53(m，5H)，3.15(t，J＝6.0Hz，2H)，2.93(dd，J＝14.4，6.4Hz，1H)，2.83(t，J＝6.4Hz，2H)，2.64-2.79(m，3H)，1.95(quin，J＝6.0Hz，2H)，1.30(s，9H)。
方案14
制备3-(叔丁基)-2-甲氧基苯甲醛
在氩气氛下，将无水THF(75mL)中的3-叔丁基-2-羟基-苯甲醛(5g，28.05mmol，1当量)用Cs2CO3(18.28g，56.11mmol，2当量)处理，并将混合物在20℃下搅拌30min。随后，向到混合物中逐滴加入CH3I(17.9g，126.11mmol，7.85mL，4.50当量)，并将所得混合物在20℃下搅拌16小时。TLC(石油醚:乙酸乙酯＝15:1，Rf＝0.45)指示3-叔丁基-2-羟基-苯甲醛被完全消耗并且形成一个新斑点。将混合物倒入水(100mL)中并用乙酸乙酯(100mL*3)萃取。将合并的有机相用盐水(150mL)洗涤，用无水Na2SO4干燥，过滤并真空浓缩。通过闪蒸硅胶色谱法(80g 二氧化硅闪蒸柱，洗脱液0％至5％乙酸乙酯/石油醚梯度为60mL/min)纯化残余物。获得作为黄色油状物的标题化合物(4.2g，21.7mmol，77％产率，99％纯度)。油状物的LC-MS分析显示所需产物的质量：m/z 193.0(M+H)；计算的C12H16O2：192.25。1H NMR(CDCl3，400MHz)δppm 10.35(s，1H)，7.71(dd，J＝7.6，2.0Hz，1H)，7.58(dd，J＝8.0，1.6Hz，1H)，7.15(t，J＝7.6Hz，1H)，3.95(s，3H)，1.42(s，9H)。
实施例34
制备3-(4-(叔丁基)-2-甲氧基苯基)-4-(1-甲基-5-(2-(5,6,7,8-四氢-1,8-萘啶-2-基)乙氧基)-1H-吡唑-3-基)丁酸
实施例34以与实施例33类似的方式制备，在反应方案14中使用4-叔丁基-2-羟基-苯甲醛代替3-叔丁基-2-羟基-苯甲醛。通过制备型HPLC(TFA条件：柱：Boston Green ODS150*30 5μ；流动相：[水(0.1％TFA)-ACN]；B％：30％至60％，8min)纯化粗产物。获得作为白色固体的标题化合物(88mg，138.6μmol，74％产率，98％纯度，TFA)。LCMS分析显示所需产物的质量：m/z 507.1(M+H)。1H NMR、19F NMR和HMBC与标题化合物一致。1H NMR(400MHz，CD3OD)δppm 7.60(br d，J＝6.8Hz，1H)，7.04(d，J＝8.0Hz，1H)，6.97-6.85(m，2H)，6.67(br d，J＝7.2Hz，1H)，5.49(br s，1H)，4.34(br s，2H)，3.84(s，3H)，3.71(br t，J＝7.2Hz，1H)，3.55-3.44(m，5H)，3.15(br t，J＝6.0Hz，2H)，2.83(br t，J＝6.0Hz，4H)，2.74-2.57(m，2H)，2.02-1.89(m，2H)，1.29(s，9H)；19F NMR(376MHz，CD3OD)-77.44(s，3F)。
实施例35
制备3-(5-叔丁基-2-异丙氧基-苯基)-4-[1-甲基-5-[2-(5,6,7,8-四氢-1,8-萘啶-2-基)乙氧基]吡唑-3-基]丁酸三氟乙酸盐
实施例35以与实施例33类似的方式制备，在反应方案14中使用5-叔丁基-2-羟基-苯甲醛代替3-叔丁基-2-羟基-苯甲醛以及2-溴丙烷代替CH3I。通过制备型HPLC(柱：BostonGreen ODS 150*30 5μ；流动相：[水(0.1％TFA)-ACN]；B％：30％至60％，8min)纯化粗产物。获得作为白色固体的标题化合物(78.5mg，119μmol，44％产率，98％纯度，TFA)。液体的LC-MS分析显示所需产物的质量：m/z 535.1(M+H)。1H NMR(400MHz，CD3OD)7.58(d，J＝7.3Hz，1H)，7.13(dd，J＝2.4，8.6Hz，1H)，7.09(d，J＝2.4Hz，1H)，6.81(d，J＝8.6Hz，1H)，6.66(d，J＝7.3Hz，1H)，5.40(s，1H)，4.63-4.54(m，1H)，4.29(t，J＝6.0Hz，2H)，3.69(quin，J＝7.4Hz，1H)，3.49(d，J＝5.6Hz，1H)，3.52-3.48(m，1H)，3.47(s，3H)，3.13(t，J＝6.0Hz，2H)，2.89-2.61(m，6H)，1.93(quin，J＝6.0Hz，2H)，1.32(dd，J＝6.0，7.7Hz，6H)，1.22(s，9H)。19FNMR(376MHz，CD3OD)-77.36(s，1F)。
实施例36
制备3-[3-叔丁基-5-(三氟甲氧基)苯基]-4-[1-甲基-5-[2-(5,6,7,8-四氢-1,8-萘啶-2-基)乙氧基]吡唑-3-基]丁酸
实施例36以与实施例1类似的方式制备，使用3-叔丁基-5-(三氟甲氧基)苯甲醛(根据方案15合成)作为反应方案3中所需的苯甲醛。通过制备型HPLC(柱：Boston pH-lex150*25 10μm；流动相：[水(0.1％TFA)-ACN]；B％：35％至65％，8min)纯化粗产物。获得作为白色固体的标题化合物(14mg，25μmol，37％产率，100％纯度)。液体的LC-MS分析显示所需产物的质量：m/z 561.3。1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δppm1.20(s，9H)，1.72-1.84(m，2H)，2.58-2.76(m，6H)，3.06(t，J＝5.8Hz，2H)，4.18(t，J＝6.1Hz，2H)，5.36(s，1H)，6.66(d，J＝7.3Hz，1H)，6.96-7.01(m，1H)，7.05(s，1H)，7.20(s，1H)，7.61(d，J＝7.1Hz，1H)。
方案15
步骤1.制备2-[3-溴-5-(三氟甲氧基)苯基]丙-2-醇
在-78℃下，向1,3-二溴-5-(三氟甲氧基)苯(25g，78.15mmol，1当量)在i-PR2O(50mL)中的溶液中加入n-BuLi(2.5M，32mL，1.02当量)达0.5h，然后加入丙酮(7.9g，136mmol，10mL，1.74当量)。将混合物在20℃下搅拌2h。将反应混合物倒入100mL NH4Cl水溶液中并将所得混合物搅拌15min。分离有机相，经无水Na2SO4干燥，过滤并真空蒸发，得到残余物。通过闪蒸硅胶色谱法(80g二氧化硅闪蒸柱，洗脱液0％至1％乙酸乙酯/石油醚梯度为50mL/min)纯化残余物。获得作为黄色液体的标题化合物(8g，26.75mmol，34％产率)。1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δppm 1.94(s，6H)，5.90(s，1H)，7.91-8.01(m，2H)，8.19-8.25(m，1H)。
步骤2.制备1-溴-3-(1-氯-1-甲基-乙基)-5-(三氟甲氧基)苯
向2-[3-溴-5-(三氟甲氧基)苯基]丙-2-醇(8g，26.75mmol，1当量)的溶液中加入HCl(54.2g，535mmol，53.1mL，36％纯度，20当量)。将混合物在20℃下搅拌2小时。TLC(石油醚:乙酸乙酯＝20:1，UV)显示2-[3-溴-5-(三氟甲氧基)苯基]丙-2-醇被完全消耗并且检测到一个斑点。将反应混合物倒入0℃的100mL H2O中。然后将混合物用DCM(50mL*3)萃取。将合并的有机层减压浓缩，得到产物，无需进一步纯化。获得作为黄色液体的标题化合物(7g，22mmol，82％产率)。1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δppm 1.84-2.01(m，6H)，7.59(br d，J＝12.8Hz，2H)，7.81(t，J＝1.5Hz，1H)。
步骤3.制备1-溴-3-叔丁基-5-(三氟甲氧基)苯
在-78℃下，向1-溴-3-(1-氯-1-甲基-乙基)-5-(三氟甲氧基)苯(6g，18.90mmol，1当量)在DCM(60mL)溶液中加入Al(CH3)3(在己烷中)(1M，37.79mL，2当量)。将混合物在20℃下搅拌2小时。TLC(石油醚:乙酸乙酯＝1:0，UV)指示1-溴-3-(1-氯-1-甲基-乙基)-5-(三氟甲氧基)苯被完全消耗，并且检测到具有较低极性的一个新斑点。将反应混合物倒入100mLNH4Cl水溶液中并将反应混合物搅拌15min。分离有机相，经无水Na2SO4干燥，过滤并真空蒸发，得到残余物。通过闪蒸硅胶色谱法(80g二氧化硅闪蒸柱，洗脱液0％至1％乙酸乙酯/石油醚梯度为100mL/min)纯化残余物。获得作为黄色液体的标题化合物(4.6g，15.5mmol，82％产率)。1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δppm 1.27(s，9H)，7.36(s，1H)，7.47(s，1H)，7.61(t，J＝1.6Hz，1H)。
步骤4.制备3-叔丁基-5-(三氟甲氧基)苯甲醛
向1-溴-3-叔丁基-5-(三氟甲氧基)苯(5.7g，19.18mmol，1当量)在i-PR2O(50mL)溶液中加入n-BuLi(2.5M，10mL，1.30当量)并在-78℃下搅拌0.5小时，然后加入DMF(2.1g，28.8mmol，2.21mL，1.5当量)。将混合物在20℃下搅拌2小时。TLC(石油醚:乙酸乙酯＝20:1，UV)显示1-溴-3-叔丁基-5-(三氟甲氧基)苯被完全消耗并且检测到一个斑点。将反应混合物倒入0℃的50mL H2O中。然后将混合物用DCM(50mL*3)萃取。将合并的有机层减压浓缩，得到产物残余物。通过闪蒸硅胶色谱法(40g二氧化硅闪蒸柱，洗脱液0％至1.5％乙酸乙酯/石油醚梯度为60mL/min)纯化残余物。获得作为黄色液体的标题化合物(1.95g，7.92mmol，41％产率)。1H NMR(400MHz，δppm 1.29(s，9H)，7.63(br d，J＝6.4Hz，2H)，7.97(t，J＝1.4Hz，1H)，9.90-10.06(m，1H)
实施例37
制备3-[3-叔丁基-5-(三氟甲基)苯基]-4-[1-甲基-5-[2-(5,6,7,8-四氢-1,8-萘啶-2-基)乙氧基]吡唑-3-基]丁酸
实施例37以与实施例36类似的方式制备，在反应方案15中使用1,3-二溴-5-(三氟甲基)苯代替1,3-二溴-5-(三氟甲氧基)苯。通过制备型HPLC(柱：Boston Green ODS 150*30 5μ；流动相：[水(0.1％TFA)-ACN]；B％：35％至65％，8min)纯化粗产物。得到作为白色固体的标题化合物(12.4mg，22.25μmol，51％产率，98％纯度)。液体的LC-MS分析显示所需产物的质量：m/z 545.3。1H NMR(400MHz，CD3OD)δppm 1.28(s，9H)，1.87-1.97(m，2H)，2.65-2.88(m，6H)，3.13(t，J＝6.1Hz，2H)，3.43(s，3H)，3.44-3.55(m，4H)，4.28(t，J＝5.7Hz，2H)，5.42(s，1H)，6.68(d，J＝7.5Hz，1H)，7.27(s，1H)，7.44(s，2H)，7.59(d，J＝7.3Hz，1H)
实施例38
制备3-(3-(叔丁基)-5-氟苯基)-4-(1-甲基-5-(2-(5,6,7,8-四氢-1,8-萘啶-2-基)乙氧基)-1H-吡唑-3-基)丁酸
实施例38以与实施例1类似的方式制备，使用3-叔丁基-5-氟-苯甲醛作为反应方案3中所需的苯甲醛。通过制备型HPLC(柱：Boston Green ODS150*30 5μ；流动相：[水(0.1％TFA)-ACN]；B％：30％至56.25％，7min)纯化粗产物。获得作为白色固体的标题化合物(57mg，产率41％)。该化合物的LC-MS分析显示所需产物的质量：m/z 495(M+H)；1H NMR(400MHz，CD3OD)δ＝7.59(d，J＝7.3Hz，1H)，7.00(s，1H)，6.92(br d，J＝11.0Hz，1H)，6.79(br d，J＝9.8Hz)，1H)，6.68(d，J＝7.3Hz，1H)，5.56(s，1H)，4.35(t，J＝6.0Hz，2H)，3.52-3.37(m，5H)，3.17(t，J＝5.9Hz，2H)，2.94-2.57(m，6H)，1.95(quin，J＝5.9Hz，2H)，1.25(s，9H)。
实施例39
制备3-(5-异丙基-2-甲氧基苯基)-4-(1-甲基-5-(2-(5,6,7,8-四氢-1,8-萘啶-2-基)乙氧基)-1H-吡唑-3-基)丁酸三氟乙酸盐
实施例39以与实施例1类似的方式制备，使用5-异丙基-2-甲氧基-苯甲醛作为反应方案3中所需的苯甲醛。通过制备型HPLC(柱：Boston Green ODS 150*30 5μ流动相：[水(0.1％TFA)-ACN]；B％：25％至55％，8min)纯化粗产物。获得作为白色固体(由LCMS(m/z493.1(M+H))、HPLC、1H NMR和19F NMR确认)的标题化合物(105mg，172μmol，55％产率，99.1％纯度，TFA)。1H NMR(CD3OD，400MHz)7.59(d，J＝7.2Hz，1H)，7.02(dd，J＝8.4，2.4Hz，1H)，6.96(d，J＝2.0Hz，1H)，6.84(d，J＝8.4Hz，1H)，6.67(d，J＝7.2Hz，1H)，5.50(s，1H)，4.34(t，J＝6.0Hz，2H)，3.80(s，3H)，3.73(quin，J＝7.6Hz，1H)，3.47-3.53(m，5H)，3.16(t，J＝6.0Hz，2H)，2.85-2.96(m，2H)，2.74-2.85(m，3H)，2.61-2.74(m，2H)，1.95(quin，J＝6.0Hz，2H)，1.16(d，J＝7.2Hz，6H)；19F NMR(CD3OD，376MHz)-77.31(s，1F)。
实施例40
制备3-(3-溴-5-异丙基-苯基)-4-[1-甲基-5-[2-(5,6,7,8-四氢-1,8-萘啶-2-基)乙氧基]吡唑-3-基]丁酸三氟乙酸盐
实施例40以与实施例1类似的方式制备，使用3-溴-5-异丙基-苯甲醛作为反应方案3中所需的苯甲醛。通过制备型HPLC(柱：Boston Green ODS 150*30 5μ流动相：[水(0.1％TFA)-ACN]；B％：35％至59.4％，6.5min)纯化粗产物。获得作为白色固体(由LCMS(m/z 543.0(M+H))、HPLC、1H NMR和19F NMR确认)的标题化合物。1H NMR(CD3OD，400MHz)7.60(d，J＝7.3Hz，1H)，7.19(d，J＝7.3Hz，2H)，7.04(s，1H)，6.68(d，J＝7.3Hz，1H)，5.57-5.42(m，1H)，4.45-4.26(m，2H)，3.54-3.33(m，5H)，3.17(t，J＝6.0Hz，2H)，2.92-2.54(m，7H)，1.95(quin，J＝5.9Hz，2H)，1.19(dd，J＝1.4，6.9Hz，6H).19F NMR(CD3OD，376MHz)-77.33(s，1F)。
实施例41
制备3-(3-溴-5-叔丁基-苯基)-4-[5-[2-(5,6,7,8-四氢-1,8-萘啶-2-基)乙氧基]-1-(2,2,2-三氟乙基)吡唑-3-基]丁酸三氟乙酸盐
实施例41以与实施例1类似的方式制备，在反应方案3中使用3-溴-5-叔丁基苯甲醛作为所需的苯甲醛以及(2,2,2-三氟乙基)肼代替甲基肼。通过制备型HPLC(TFA条件：柱：Boston Green ODS 150*30 5μ；流动相：[水(0.1％TFA)-ACN]；B％：38％至68％，8min)纯化粗产物。获得作为白色固体的标题化合物(105mg，134μmol，51％产率，95％纯度，TFA)。1HNMR(400MHz，CD3OD)7.60(br d，J＝7.6Hz，1H)，7.31(s，1H)，7.16(dd，J＝1.6，4.0Hz，2H)，6.72-6.63(m，1H)，5.47(s，1H)，4.50(q，J＝8.8Hz，2H)，4.32(t，J＝6.0Hz，2H)，3.53-3.46(m，2H)，3.44-3.35(m，1H)，3.15(t，J＝6.0Hz，2H)，2.89-2.79(m，3H)，2.79-2.66(m，2H)，2.65-2.56(m，1H)，1.94(quin，J＝6.0Hz，2H)，1.24(s，9H)。19F NMR(376MHz，CD3OD)-72.69(t，J＝8.8Hz，3F)，-77.33(br s，3F)。LC-MS分析显示所需产物的质量：m/z 625.1(M+H)；计算的C29H34BrF3N4O3：624.17。
实施例42
制备3-(5-叔丁基-2-羟基-苯基)-4-[1-甲基-5-[2-(5,6,7,8-四氢-1,8-萘啶-2-基)乙氧基]吡唑-3-基]丁酸钠盐
方案16
步骤1.制备6-叔丁基-4-[[1-甲基-5-[2-(5,6,7,8-四氢-1,8-萘啶-2-基)乙氧基]吡唑-3基]甲基]苯并二氢吡喃-2-酮
在-78℃下，向3-(5-叔丁基-2-甲氧基-苯基)-4-[1-甲基-5-[2-(5,6,7,8-四氢-1,8-萘啶)-2-基)乙氧基]吡唑-3-基]丁酸己酯(30mg，56μmol，1当量)在CH2Cl2(10mL)中的溶液中加入CH2Cl2(5mL)中的BBr3(14.06mg，56μmol，5.4μL，1当量)。将混合物升温至25℃并在该温度下搅拌2小时。LC-MS显示3-(5-叔丁基-2-甲氧基-苯基)-4-[1-甲基-5-[2-(5,6,7,8-四氢-1,8-萘啶-2-基)乙氧基]吡唑-3-基]丁酸己酯被完全消耗并检测到所需质量(m/z 475.1(M+H))。将反应混合物倒入水(60mL)中，并将得到的水层用CH2Cl2(20mL*3)萃取。经无水Na2SO4干燥有机萃取物，真空蒸发溶剂，得到残余物，无需进一步纯化。得到作为黄色胶状物的标题化合物(25mg，53μmol，94％产率)。液体的LC-MS分析显示所需产物的质量：m/z475.1(M+H)。
步骤2.制备3-(5-叔丁基-2-羟基-苯基)-4-[1-甲基-5-[2-(5,6,7,8-四氢-1,8-萘啶-2-基)乙氧基]吡唑-3-基]丁酸钠盐
向6-叔丁基-4-[[1-甲基-5-[2-(5,6,7,8-四氢-1,8-萘啶-2-基)乙氧基]吡唑-3-基]甲基]苯并二氢吡喃-2-酮(25mg，53μmol，1当量)在THF(1mL)中的溶液加入NaOH(1M，1.58mL，30当量)。将混合物在60℃下搅拌16小时。LC-MS显示6-叔丁基-4-[[1-甲基-5-[2-(5,6,7,8-四氢-1,8-萘啶-2-基)乙氧基]吡唑-3-甲基]苯并二氢吡喃-2-酮被完全消耗并且检测到所需质量(m/z 493.1(M+H))。减压浓缩反应混合物，除去THF，得到残余物。通过制备型HPLC(柱：Xbridge 150*30mm*10um；流动相：[水(0.05％氢氧化铵v/v)-ACN]；B％：20％至60％，7min)纯化残余物。获得作为白色固体的标题化合物。液体的LC-MS分析显示所需产物的质量：m/z 493.1(M+H)。1H NMR(400MHz，CD3OD)7.24(d，J＝7.3Hz，1H)，7.13(d，J＝2.3Hz，1H)，7.03(dd，J＝2.4，8.4Hz，1H)，6.69(d，J＝8.5Hz，1H)，6.45(d，J＝7.3Hz，1H)，5.40(s，1H)，4.28(t，J＝6.4Hz，2H)，3.75(quin，J＝7.3Hz，1H)，3.42(br s，2H)，3.40(s，3H)，3.04-2.81(m，4H)，2.77-2.59(m，4H)，1.90(quin，J＝5.9Hz，2H)，1.25(s，9H)。
实施例43
制备3-(5-(叔丁基)-2-氯苯基)-4-(1-甲基-5-(2-(5,6,7,8-四氢-1,8-萘啶-2-基)乙氧基)-1H-吡唑-3-基)丁酸三氟乙酸盐
实施例43以与实施例1类似的方式制备，使用5-(叔丁基)-2-氯苯甲醛(根据方案17合成)作为反应方案3中所需的苯甲醛。通过制备型HPLC(柱：Boston Green ODS 150*305μ；流动相：[水(0.1％TFA)-ACN]；B％：30％至60％，8min)纯化粗产物。获得作为白色固体(由LCMS(m/z 511.1(M+H))、HPLC、HMBC、1H NMR和19F NMR确认)的标题化合物(50.5mg，97.95μmol，41％产率，99％纯度)。1H NMR(CD3OD，400MHz)δ7.61(d，J＝7.5Hz，1H)，7.30-7.23(m，2H)，7.22-7.18(m，1H)，6.69(d，J＝7.3Hz，1H)，5.40(s，1H)，4.31(t，J＝6.0Hz，2H)，3.96(quin，J＝7.4Hz，1H)，3.54-3.44(m，5H)，3.15(t，J＝6.0Hz，2H)，2.92-2.64(m，6H)，1.96(quin，J＝5.9Hz，2H)，1.27(s，9H)。19F NMR(CD3OD，376MHz)-77.37(br s，1F)。
方案17
步骤1.制备4-(叔丁基)-2-碘苯胺
将I2(17.01g，67.01mmol，13.5mL，1当量)加入到4-叔丁基苯胺(10g，67.01mmol，10.6mL，1当量)、Ag2SO4(20.89g，67.01mmol，11.4mL，1当量)在MeOH(300mL)中的混合物中。将所得混合物在15℃下搅拌2小时。过滤混合物，并且浓缩滤液。将浓缩物在饱和Na2SO3(150mL)和Et2O(200mL)之间分配。分离水层并用Et2O(2*150mL)萃取。将合并的有机萃取液用盐水(200mL)洗涤，经Na2SO4干燥并真空浓缩，得到残余物。通过闪蒸硅胶色谱法(120g二氧化硅闪蒸柱，洗脱液0％至10％乙酸乙酯/石油醚梯度为80mL/min)纯化残余物。获得作为黑褐色液体(由1H NMR确认)的标题化合物(14.6g，53.07mmol，79％产率)。1H NMR(CDCl3，400MHz)7.63(d，J＝2.0Hz，1H)，7.17(dd，J＝2.1，8.4Hz，1H)，6.70(d，J＝8.3Hz，1H)，4.06-3.85(m，2H)，1.26(s，9H)。
步骤2.制备4-(叔丁基)-1-氯-2-碘苯
在N2下，将亚硝酸叔丁酯(2.81g，27.26mmol，3.24mL，1.5当量)加入到CuCl2(2.93g，21.81mmol，1.2当量)在CH3CN(30mL)中的混合物中。将所得混合物用4-叔丁基-2-碘-苯胺(5g，18.17mmol，1当量)在CH3CN(30mL)中的溶液处理，并且然后将混合物在65℃下加热2h。将混合物用EtOAC(50mL)稀释，并用水(50mL)洗涤。用EtOAC(100*2mL)萃取水层。将合并的有机相经Na2SO4干燥并真空浓缩。通过闪蒸硅胶色谱法(80g二氧化硅闪蒸柱，洗脱液0％乙酸乙酯/石油醚梯度为65mL/min)纯化残余物。获得作为红色液体(由1H NMR确认)的标题化合物(3.9g，13.24mmol，73％产率)。1H NMR(CDCl3，400MHz)7.91-7.81(m，1H)，7.39-7.33(m，1H)，7.33-7.28(m，1H)，1.32-1.27(m，9H)。
步骤3.制备5-(叔丁基)-2-氯苯甲醛
在-78℃下，向搅拌的4-叔丁基-1-氯-2-碘-苯(3.9g，13.24mmol，1当量)在THF(20mL)和EtOAc(20mL)中的溶液中逐滴加入i-PrMgCl(2.0M，6.62mL，1当量)。将所得混合物在-78℃下搅拌2小时，并且然后在-78℃下用DMF(1.94g，26.48mmol，2.04mL，2eq)逐滴处理。完全加入后，将混合物在12小时内缓慢升温至15℃。将反应混合物用水(20mL)冷激，分离有机层，并且水层用EtOAc(30mL*3)萃取，合并的有机层用盐水(100mL)洗涤并经Na2SO4干燥，蒸发。通过闪蒸硅胶色谱法(40g二氧化硅闪蒸柱，洗脱液0％乙酸乙酯/石油醚梯度为35mL/min)纯化残余物。获得作为无色液体(由1H NMR确认)的标题化合物(1.3g，6.61mmol，50％产率)。1H NMR(CDCl3，400MHz)10.52-10.44(m，1H)，7.95(d，J＝2.5Hz，1H)，7.57(dd，J＝2.5，8.5Hz，1H)，7.38(d，J＝8.5Hz)，1H)，1.38-1.31(m，9H)。
实施例44
制备3-(5-叔丁基-2-甲基-苯基)-4-[1-甲基-5-[2-(5,6,7,8-四氢-1,8-萘啶-2-基)乙氧基]吡唑-3-基]丁酸三氟乙酸盐
实施例44以与实施例1类似的方式制备，使用5-叔丁基-2-甲基-苯甲醛(根据方案18合成)作为反应方案3中所需的苯甲醛。通过制备型HPLC(柱：Xbridge BEH C18，250*50mm，10μm；流动相：[水(0.1％TFA)-ACN]；B％：25％至41％，9min)纯化粗产物。获得作为黄色固体的标题化合物52mg，87μmol，15.5％产率，TFA)。1H NMR(400MHz，CD3OD)：δppm＝7.60(d，J＝7.3Hz，1H)，7.21(d，J＝2.0Hz，1H)，7.11-7.06(m，1H)，7.03-6.98(m，1H)，6.67(d，J＝7.3Hz，1H)，5.35(s，1H)，4.34-4.25(m，2H)，3.71(quin，J＝7.5Hz，1H)，3.57-3.45(m，5H)，3.14(t，J＝6.0Hz，2H)，2.83(br t，J＝6.1Hz，2H)，2.77(dd，J＝2.8，7.5Hz，2H)，2.69-2.63(m，2H)，2.27(s，3H)，1.95(td，J＝6.0，18.8Hz，2H)，1.31-1.23(m，9H)。19F NMR(376MHz，CD3OD)＝-77.34(s，1F)。
方案18
步骤1.制备2-溴-4-叔丁基-1-甲基-苯
在20℃下，向BR2(12.94g，80.95mmol，4.17mL，1.2当量)的溶液中逐滴加入1-叔丁基-4-甲基-苯(10g，67.46mmol，11.66mL，1当量)在HOAc(30mL)中的溶液。将所得混合物在50℃下加热120h。将混合物冷却至室温，并且然后加入水(100mL)和亚硫酸氢钠水溶液。用乙酸乙酯(100mL)萃取混合物。将合并的萃取液用水洗涤，经硫酸钠干燥并过滤。滤液的旋转蒸发得到残余物。通过闪蒸硅胶色谱法(120g二氧化硅闪蒸柱，洗脱液100％石油醚梯度为40mL/min)纯化残余物。获得作为无色液体的标题化合物(12.5g，54.9mmol，81％产率)。
步骤2.制备5-叔丁基-2-甲基-苯甲醛
在-78℃下，向搅拌的2-溴-4-叔丁基-1-甲基-苯(12.5g，54.9mmol，1当量)在THF(170mL)中的溶液中逐滴加入n-BuLi(2.5M，26.35mL，1.2当量)。将所得混合物在-78℃下搅拌10min并在-78℃下用DMF(6.02g，82.35mmol，6.34mL，1.5当量)冷激，并搅拌1小时。升温到室温后，向混合物中加入饱和NH4Cl(100mL)。将得到的含水混合物用乙酸乙酯(3×100mL)萃取。将有机萃取液经硫酸钠干燥并减压浓缩。通过闪蒸硅胶色谱法(40g二氧化硅闪蒸柱，洗脱液100％石油醚梯度为35mL/min)纯化残余物。获得作为浅黄色液体的标题化合物(4.09g，23.2mmol，42％产率)。
实施例45
制备3-(3-溴-5-叔丁基-苯基)-4-[1-叔丁基-5-[2-(5,6,7,8-四氢-1,8-萘啶-2-基)乙氧基]吡唑-3-基]丁酸三氟乙酸盐
实施例45以与实施例1类似的方式制备，使用3-溴-5-叔丁基苯甲醛作为反应方案3中所需的苯甲醛以及叔丁基肼代替甲基肼。通过制备型HPLC(TFA条件：柱：X bridge BEHC18，250*50mm，10μm；流动相：[水(0.1％TFA)-ACN]；B％：25％至55％，9min)纯化粗产物。获得作为白色固体的标题化合物(0.016g，21.81μmol，44％产率，97％纯度，TFA)。LC-MS分析显示所需产物的质量：m/z 599.1(M+3H)；计算的C32H43BrN4O3：596.24。LCMS和HPLC、1H NMR和19F NMR、2D NMR证实它为目标产物。1H NMR(400MHz，CD3OD)δ7.60(d，J＝7.2Hz，1H)，7.34-7.30(m，1H)，7.16(d，J＝12.0Hz，2H)，6.69(d，J＝7.6Hz，1H)，5.50(s，1H)，4.31(t，J＝6.0Hz，2H)，3.54-3.47(m，2H)，3.39(quin，J＝7.6Hz，1H)，3.19(t，J＝6.0Hz，2H)，2.89-2.56(m，6H)，1.94(quin，J＝6.0Hz，2H)，1.40(s，9H)，1.26(s，9H)。19F NMR(376MHz，CD3OD)-77.24(br s，3F)。
根据方案19制备实施例46、实施例47和实施例48
方案19
步骤1.制备3-(5-氰基-2-甲氧基苯基)-4-(1-甲基-5-(2-(5,6,7,8-四氢-1,8-萘啶-2-基)乙氧基)-1H-吡唑-3-基)丁酸乙酯
将在实施例14的合成期间制备的3-(5-溴-2-甲氧基-苯基)-4-[1-甲基-5-[2-(5,6,7,8-四氢-1,8-萘啶-2-基)乙氧基]吡唑-3-基]丁酸乙酯(380mg，666μmol，1当量)和在微波小瓶中的DMF(5mL)中的Zn(CN)2(234mg，2mmol，1267μL，3当量)的混合物抽空并用N2(3x)回填。加入Pd(PPh3)4(77mg，67μmol，0.1当量)。将反应小瓶密封，并将反应混合物再次脱气并用N2(3x)回填，并且然后在微波辐射下在120℃下搅拌1.5小时。然后将混合物倒入水(80mL)中，并用EtOAc(3*50mL)萃取。将合并的有机层用盐水(50mL)洗涤，经硫酸钠干燥并蒸发，得到残余物。通过闪蒸硅胶色谱法(12g硅胶闪蒸柱，洗脱液0％至100％乙酸乙酯/石油醚梯度为30mL/min)纯化残余物。获得作为无色油状物(由LCMS(m/z 526.1(M+Na))确认)的标题(135mg，245μmol，37％产率，91％纯度)。
步骤2.制备实施例46、实施例47和实施例48
向来自上述步骤1的3-(5-氰基-2-甲氧基-苯基)-4-[1-甲基-5-[2-(5,6,7,8-四氢-1,8-萘啶-2-基)乙氧基]吡唑-3-基]丁酸乙酯(135mg，245μmol，1当量)在THF(5mL)中的溶液中加入LiOH(1M，8mL，32.69当量)。将反应混合物在60℃下搅拌16小时。LC-MS显示13.8％的3-(5-氰基-2-甲氧基-苯基)-4-[1-甲基-5-[2-(5,6,7,8-四氢-1,8-萘啶-2-基)乙氧基]吡唑-3-基]丁酸(实施例46)，54.2％的3-(5-氨基甲酰基-2-甲氧基-苯基)-4-[1-甲基-5-[2-(5,6,7,8-四氢-1,8-萘啶-2-基)乙氧基]吡唑-3-基]丁酸(实施例47)，22.8％的3-[1-(羧甲基)-2-[1]-甲基-5-[2-(5,6,7,8-四氢-1,8-萘啶-2-基)乙氧基]吡唑-3-基]乙基]-4-甲氧基-苯甲酸(实施例48)。减压浓缩混合物，得到残余物，用AcOH将残余物调节至pH＝5，并且用乙酸乙酯(10mL*2)萃取。将合并的有机相真空浓缩。通过制备型HPLC(柱：Xbridge BEH C18，250*50mm，10μm；流动相：[水(0.1％TFA)-ACN]；B％：15％至45％，9min)纯化残余物。获得作为白色固体的实施例46的化合物(16.2mg，27μmol，11％产率，98％纯度，TFA)；获得作为白色固体的实施例47的化合物(53mg，86μmol，35％产率，99％纯度，TFA)；获得作为白色固体的实施例48的化合物(20mg，30μmol，12％产率，91％纯度，TFA)。
实施例46
制备3-(5-氰基-2-甲氧基苯基)-4-(1-甲基-5-(2-(5,6,7,8-四氢-1,8-萘啶-2-基)乙氧基)-1H-吡唑-3-基)丁酸三氟乙酸盐
使用在实施例14的合成期间制备的3-(5-溴-2-甲氧基-苯基)-4-[1-甲基-5-[2-(5,6,7,8-四氢-1,8-萘啶-2-基)乙氧基]吡唑-3-基]丁酸乙酯(16.2mg，27μmol，11％产率，98％纯度，TFA)制备实施例46，如反应方案19所示，获得作为白色固体的实施例46(16.2mg，27μmol，11％产率，98％纯度，TFA)。
1H NMR(CD3OD，400MHz)δ7.55-7.62(m，2H)，7.46(d，J＝2.0Hz，1H)，7.09(d，J＝8.4Hz，1H)，6.67(d，J＝7.6Hz，1H)，5.56(s，1H)，4.33-4.39(m，2H)，3.92(s，3H)，3.73-3.84(m，1H)，3.47-3.53(m，5H)，3.17(t，J＝6.0Hz，2H)，2.78-2.96(m，4H)，2.63-2.77(m，2H)，1.91-1.99(m，2H)。(m/z 476.1(M+H))。
实施例47
制备3-(5-氨基甲酰基-2-甲氧基苯基)-4-(1-甲基-5-(2-(5,6,7,8-四氢-1,8-萘啶-2-基)乙氧基)-1H-吡唑-3-基)丁酸三氟乙酸盐
使用在实施例14的合成期间制备的3-(5-溴-2-甲氧基-苯基)-4-[1-甲基-5-[2-(5,6,7,8-四氢-1,8-萘啶-2-基)乙氧基]吡唑-3-基]丁酸乙酯制备实施例47，如反应方案19所示，获得作为白色固体的实施例47(53mg，86μmol，35％产率，99％纯度，TFA)。
1H NMR(DMSO-d6，400MHz)13.88(br s，1H)，8.40(br s，1H)，7.83(br s，1H)，7.70-7.77(m，2H)，7.62(d，J＝7.6Hz)，1H)，7.16(br s，1H)，6.94-7.01(m，1H)，6.67(d，J＝7.2Hz，1H)，5.36(s，1H)，4.24(br t，J＝6.0Hz，2H)，3.82(s，3H)，3.68(quin，J＝7.6Hz，1H)，3.34-3.44(m，5H)，3.08(br t，J＝6.0Hz，2H)，2.52-2.78(m，6H)，1.77-1.86(m，2H)19FNMR(DMSO-d6，376MHz)-74.61(s，1F)。LCMS(m/z 494.1(M+H))。
实施例48
制备3-(1-羧基-3-(1-甲基-5-(2-(5,6,7,8-四氢-1,8-萘啶-2-基)乙氧基)-1H-吡唑-3-基)丙-2-基)-4-甲氧基苯甲酸三氟乙酸盐
使用在实施例14的合成期间制备的3-(5-溴-2-甲氧基-苯基)-4-[1-甲基-5-[2-(5,6,7,8-四氢-1,8-萘啶-2-基)乙氧基]吡唑-3-基]丁酸乙酯制备实施例48，如反应方案19所示，获得作为白色固体的实施例48(20mg，30μmol，12％产率，91％纯度，TFA)。
1H NMR(DMSO-d6，400MHz)δ13.88(br s，1H)，8.38(br s，1H)，7.79(dd，J＝8.4，2.0Hz，1H)，7.72(d，J＝2.0Hz，1H))，7.62(d，J＝7.2Hz，1H)，7.04(d，J＝8.4Hz，1H)，6.67(d，J＝7.6Hz，1H)，5.38(s，1H)，4.25(t，J＝6.0Hz，2H)，3.86(s，3H)，3.66(quin，J＝7.6Hz，1H)，3.36-3.44(m，5H)，3.08(t，J＝6.0Hz，2H)，2.54-2.77(m，6H)，1.77-1.86(m，2H)19F NMR(DMSO-d6，376MHz)-74.74(s，1F)。LCMS(m/z 495.1(M+H))。
实施例49
制备3-(3-叔丁基苯基)-4-[1-甲基-5-[2-(5,6,7,8-四氢-1,8-萘啶-2-基)乙氧基]吡唑-3-基]丁酸三氟乙酸盐
实施例49以与实施例1类似的方式制备，使用3-叔丁基苯甲醛作为反应方案3中所需的苯甲醛。通过制备型HPLC(柱：Boston Green ODS 150*30 5μ；流动相：[水(0.1％TFA)-ACN]；B％：25％至50％，8min)纯化粗产物。获得作为白色固体的标题化合物(21.7mg，45μmol，99.7％纯度，TFA盐)。1H NMR(400MHz，CD3OD)：δ7.59(br d，J＝7.6Hz，1H)，7.24-7.13(m，3H)，7.04(br d，J＝6.4Hz，1H)，6.67(d，J＝7.2Hz，1H)，5.62-5.43(m，1H)，4.34(br d，J＝3.2Hz，2H)，3.54-3.45(m，5H)，3.44-3.34(m，1H)，3.16(t，J＝6.0Hz，2H)，2.96-2.75(m，4H)，2.75-2.56(m，2H)，2.02-1.88(m，2H)，1.31-1.19(m，9H)。19F NMR(376MHz，CD3OD)-77.33(br d，J＝5.6Hz，3F)LCMS(m/z 477.1(M+H))。
实施例50
制备3-[2-甲氧基-5-(4-甲氧基四氢吡喃-4-基)苯基]-4-[1-甲基-5-[2-(5,6,7,8-四氢-1,8-萘啶-2-基)乙氧基]吡唑-3-基]丁酸
实施例50以与实施例1类似的方式制备，使用2-甲氧基-5-(4-甲氧基四氢-2H-吡喃-4-基)苯甲醛作为反应方案3中所需的苯甲醛。通过制备型HPLC(TFA条件：柱：BostonPrime C18 150*30mm 5μm；流动相：[水(0.05％氢氧化铵v/v)-ACN]；B％：20％至50％，7min)纯化粗产物。获得作为白色固体的标题化合物(55.5mg，94.6μmol，97％纯度，钠盐)。1H NMR(400MHz，CD3OD)δ7.19(d，J＝7.3Hz，1H)，7.15(dd，J＝2.0，8.5Hz，1H)，7.11(d，J＝2.0Hz，1H)，6.89(d，J＝8.5Hz，1H)，6.41(d，J＝7.3Hz，1H)，5.32(s，1H)，4.21(t，J＝6.5Hz，2H)，3.82(s，3H)，3.80-3.78(m，1H)，3.77-3.44(m，4H)，3.38-3.34(m，2H)，3.33(s，3H)，2.99-2.80(m，4H)，2.79(s，3H)，2.70(br t，J＝6.1Hz，2H)，2.63(d，J＝7.3Hz，2H)，1.94-1.88(m，4H)，1.88-1.82(m，2H)。
以类似于方案12中的苯甲醛的方式合成2-甲氧基-5-(4-甲氧基四氢-2H-吡喃-4-基)苯甲醛，用5-溴-2-甲氧基苯甲醛代替3-溴-5-氯-苯甲醛以及用四氢-4H-吡喃-4-酮代替四氢吡喃-4-羧酸甲酯。
IX.生物测定结果
表5中显示本公开的化合物的整合素抑制活性以及在表3中描绘的来自比较物化合物1和比较物化合物2(CC1和CC2)的数据。
进行每种测定的方法如下所述。
表5：整合素抑制测定数据
NT＝未测试
A.α5β1功能的固相受体测定(SPRA)
将在TBS+缓冲液(25mM Tris pH 7.4，137mM NaCl，2.7mM KCl，1mM CaCl2，1mMMgCl2，1mM MnCl2)中稀释至2μg/mL的纯化的人纤连蛋白(R&D Systems，1918-FN)，加入96孔半孔透明微量滴定板(Costar 3690)的孔(50μL/孔)中，在4℃下温育过夜。将孔用150μLTBS+洗涤3次，并且然后加入150μL封闭缓冲液(含有1％牛血清白蛋白的TBS+，SigmaA7906)。将板在37℃下温育1h，并且然后用TBS+缓冲液洗涤3次。将重组人整合素α5β1(R&DSystems，3230-A5)在TBS+/0.1％牛血清白蛋白中稀释至0.1μg/mL，并向每个孔中加入49μL。将化合物稀释至20μM，并且然后根据标准模板将1μL加入到板的每个孔中，其中每个样品重复三次。在室温下温育2小时后，将板用150μL TBS+缓冲液洗涤3次。向每个孔中加入50μL在TBS+/0.1％BSA中为0.5μg/mL的生物素化抗α5抗体(R&D Systems，BAF1864)，盖上板并在室温下温育1小时。用150μL TBS+缓冲液洗涤板3次后，将50μL在TBS+封闭缓冲液中稀释的链霉抗生物素蛋白缀合的辣根过氧化物酶(R&D Systems，DY998)加入孔中，并将板在室温下温育20min。将板用TBS+缓冲液洗涤3次，随后在黑暗中向每个孔中加入50μL室温TMB底物(Sigma，T4444)，并将板在室温下温育25min。加入25μL的1.0M磷酸作为终止溶液，并使用Spectramax读板仪在450nm下读板。通过非线性回归(最佳拟合)分析构建浓度-响应曲线，并计算每种化合物的IC50值。
B.αvβ1功能的固相受体测定(SPRA)
将在TBS+缓冲液(25mM Tris pH 7.4，137mM NaCl，2.7mM KCl，1mM CaCl2，1mMMgCl2，1mM MnCl2)中稀释至5μg/mL的纯化的人纤连蛋白(R&D Systems，1918-FN)加入96孔半孔透明微量滴定板(Costar3690)的孔(50μL/孔)中，并在4℃下温育过夜。将孔用150μLTBS+洗涤3次，并且然后加入150μL封闭缓冲液(含有1％牛血清白蛋白的TBS+，SigmaA7906)。将板在37℃下温育1h，并且然后用TBS+缓冲液洗涤3次。将重组人整合素αvβ1(R&DSystems，6579-AV)在TBS+/0.1％牛血清白蛋白中稀释至2.0μg/mL，并向每个孔中加入49μL。将化合物稀释至20μM，并且根据标准模板将1μL加入到板的每个孔中，其中每个样品重复三次。在室温下温育2小时后，将板用150μL TBS+缓冲液洗涤3次。向每个孔中加入50μL在TBS+/0.1％BSA中为1μg/mL的生物素化的抗αv抗体(R&D Systems，BAF1219)，盖上板并在室温下温育1小时。用150μL TBS+缓冲液洗涤板3次后，将50μL在TBS+封闭缓冲液中稀释的链霉抗生物素蛋白缀合的辣根过氧化物酶(R&D Systems，DY998)加入孔中，并将板在室温下温育20min。将板用TBS+缓冲液洗涤3次，随后在黑暗中向每个孔中加入50μL TMB底物(Sigma，T4444)，并将板在室温下温育25min。加入25μL的1.0M磷酸作为终止溶液，并使用Spectramax读板仪在450nm下读板。通过非线性回归(最佳拟合)分析构建浓度-响应曲线，并计算每种化合物的IC50值。
C.αvβ3功能的固相受体测定(SPRA)
将在TBS+缓冲液(25mM Tris pH 7.4，137mM NaCl，2.7mM KCl，1mM CaCl2，1mMMgCl2，1mM MnCl2)中稀释至1μg/mL的重组人玻连蛋白(R&D Systems，2308-VN)加入96孔半孔透明微量滴定板(Costar3690)的孔(50μL/孔)中，并在4℃下温育过夜。将孔用150μL TBS+洗涤3次，并且然后加入150μL封闭缓冲液(含有1％牛血清白蛋白的TBS+，Sigma A7906)。将板在37℃下温育1h，并且然后用TBS+缓冲液洗涤3次。将重组人整合素αvβ3(R&D Systems，3050-AV)在TBS+/0.1％牛血清白蛋白中稀释至1μg/mL，并向每个孔中加入49μL。将化合物稀释至20μM，并且然后根据标准模板将1μL加入到板的每个孔中，其中每个样品重复三次。在室温下温育2小时后，将板用150μL TBS+缓冲液洗涤3次。向每个孔中加入50μL在TBS+/0.1％BSA中为0.5μg/mL的生物素化的抗αv抗体(R&D Systems，BAF1219)，盖上板并在室温下温育1小时。用150μL TBS+缓冲液洗涤平板3次后，将50μL在TBS+封闭缓冲液中稀释的链霉抗生物素蛋白缀合的辣根过氧化物酶(R&D Systems，DY998)加入孔中，并将板在室温下温育20min。将板用TBS+缓冲液洗涤3次，随后在黑暗中向每个孔中加入50μL TMB底物(Sigma，T4444)，并将板在室温下温育25min。加入25μL的1.0M磷酸作为终止溶液，并使用Spectramax读板仪在450nm下读板。通过非线性回归(最佳拟合)分析构建浓度-响应曲线，并计算每种化合物的IC50值。
D.αvβ5功能的固相受体测定(SPRA)
将在TBS+缓冲液(25mM Tris pH 7.4，137mM NaCl，2.7mM KCl，1mM CaCl2，1mMMgCl2，1mM MnCl2)中的重组人玻连蛋白(R&D Systems，2308-VN)以0.25μg/mL加入96孔半孔透明微量滴定板(Costar3690)的孔(50μL/孔)中，并在4℃下温育过夜。将孔用150μL TBS+洗涤3次，并且然后加入150μL封闭缓冲液(含有1％牛血清白蛋白的TBS+，Sigma A7906)。将板在37℃下温育1小时，并且然后用TBS+缓冲液洗涤3次。将重组人整合素αvβ5(R&DSystems，2528-AV)在TBS+/0.1％牛血清白蛋白中稀释至0.1μg/mL，并向每个孔中加入49μL。将化合物稀释至20μM，并且然后根据标准模板将1μL加入到板的每个孔中，其中每个样品重复三次。在室温下温育2小时后，将板用150μL TBS+缓冲液洗涤3次。向每个孔中加入50μl在TBS+/0.1％BSA中为0.5μg/mL的生物素化的抗αv抗体(R&D Systems，BAF1219)，盖上平板并在室温下温育1小时。用150μL TBS+缓冲液洗涤板3次后，将50μL在TBS+封闭缓冲液中稀释的链霉抗生物素蛋白缀合的辣根过氧化物酶(R&D Systems，DY998)加入孔中，并将板在室温下温育20min。将板用TBS+缓冲液洗涤3次，随后在黑暗中向每个孔中加入50μL TMB底物(Sigma T4444)，并将板在室温下温育5min。加入25μL的1.0M磷酸作为终止溶液，并使用Spectramax读板仪在450nm下读板。通过非线性回归(最佳拟合)分析构建浓度-响应曲线，并计算每种化合物的IC50值。
E.αvβ6功能的固相受体测定(SPRA)
将在TBS+缓冲液(25mM Tris pH 7.4，137mM NaCl，2.7mM KCl，1mM CaCl2，1mMMgCl2，1mM MnCl2)中稀释至0.25μg/mL的重组人LAP(R&D Systems，246-LP)加入96孔半孔透明微量滴定板(Costar 3690)的孔(50μL/孔)中，并在4℃下温育过夜。将孔用150μL TBS+洗涤3次，并且然后加入150μL封闭缓冲液(含有1％牛血清白蛋白的TBS+，Sigma A7906)。将板在37℃下温育1小时，并且然后用TBS+缓冲液洗涤3次。将重组人整合素αvβ6(R&D Systems，3817-AV)在TBS+/0.1％牛血清白蛋白中稀释至0.1μg/mL，并向每个孔中加入49μL。将化合物稀释至20μM，并且然后根据标准模板将1μL加入到板的每个孔中，其中每个样品重复三次。在室温下温育2小时后，将板用150μL TBS+缓冲液洗涤3次。向每个孔中加入50μL在TBS+/0.1％BSA中为0.5μg/mL的生物素化的抗αv抗体(R&D Systems，BAF1219)，盖上平板并在室温下温育1小时。用150μL TBS+缓冲液洗涤板3次后，将50μL在TBS+封闭缓冲液中稀释的链霉抗生物素蛋白缀合的辣根过氧化物酶(R&D Systems，DY998)加入孔中，并将板在室温下温育20min。将板用TBS+缓冲液洗涤3次，随后在黑暗中向每个孔中加入50μL TMB底物(Sigma T4444)，并将板在室温下温育10min。加入25μL的1.0M磷酸作为终止溶液，并使用Spectramax读板仪在450nm下读板。通过非线性回归(最佳拟合)分析构建浓度-响应曲线，并计算每种化合物的IC50值。
F.αvβ8功能的固相受体测定(SPRA)
将在TBS+缓冲液(25mM Tris pH 7.4，137mM NaCl，2.7mM KCl，1mM CaCl2，1mMMgCl2，1mM MnCl2)中稀释至0.5μg/mL的重组人LAP蛋白(R&D Systems,Inc，246-LP)加入96孔半孔透明微量滴定板(Costar 3690)的孔(50μl/孔)中，并在4℃下温育过夜。将孔用150μL TBS+洗涤3次，并且然后加入150μL封闭缓冲液(含有1％牛血清白蛋白的TBS+，SigmaA7906)。将板在37℃下温育1小时，并且然后用TBS+洗涤3次。将重组人整合素αvβ8(R&DSystems，4135-AV)在TBS+/0.1％牛血清白蛋白中稀释至0.1μg/mL，并向每个孔中加入49μL。将化合物稀释至20μM，并且根据标准模板将1μL加入到板的每个孔中，其中每个样品重复三次。在室温下温育2小时后，将板用150μL TBS+洗涤3次。向每个孔中加入50μL在TBS+/0.1％BSA中为1μg/mL的生物素化的抗αv抗体(R&D Systems，BAF1219)，盖上板并在室温下温育1小时。用150μL TBS+缓冲液洗涤板3次后，将50μL在TBS+封闭缓冲液中稀释的链霉抗生物素蛋白缀合的辣根过氧化物酶(R&D Systems，DY998)加入孔中，并将板在室温下温育20min。将板用TBS+洗涤3次，随后在黑暗中向每个孔中加入50μL TMB底物(Sigma T4444)，并将板在室温下温育10min。加入25μL的1.0M磷酸作为终止溶液，并使用Spectramax读板仪在450nm下读板。通过非线性回归(最佳拟合)分析构建浓度-响应曲线，并计算每种化合物的IC50值。
虽然本公开可集中于若干实施方式或者可根据优选实施方式描述，但为对于本领域技术人员显而易见的是，在不脱离本发明的精神、范围和概念的情况下，可对化合物、组合物和方法应用变化和修改。对于本领域技术人员显而易见的所有变化和修改都被视为在由所附权利要求限定的本发明的精神、范围和概念内。
X.参考文献
以下参考文献通过引用具体地并入本文，所述参考文献在一定程度上提供补充本文所阐述的实施例性程序或其它细节。
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Claims (74)

1.一种下式的化合物，或者其药用盐或互变异构体：
其中：
R1为氢、未取代的C1-8烷基、取代的C1-8烷基、未取代的C6或10芳基、取代的C6或10芳基、未取代的C7-12芳烷基或取代的C7-12芳烷基；
R2为氢、未取代的C1-8烷基或取代的C1-8烷基；
X为氢、卤素、氰基、未取代的C1-12烷基、取代的C1-12烷基、未取代的C1-12烷氧基、取代的C1-12烷氧基、未取代的C6或10芳基、取代的C6或10芳基、未取代的C7-12芳烷基、取代的C7-12芳烷基、未取代的5-10元杂芳基、取代的5-10元杂芳基、未取代的3-10元杂环烷基、取代的3-10元杂环烷基、未取代的C6或10芳氧基、取代的C6或10芳氧基、未取代的C2-12酰氧基、取代的C2-12酰氧基，或
其中R4和R5各自独立地为未取代的C1-8烷基或取代的C1-8烷基，并且
R6为氢、-OH、-CN、-NH2、-CF3、-CF2H、-CH2F、-CO2H、-CO2-C1-8烷基、-C(＝O)NH2、-CH2OH、-CH2O-C1-8烷基或C1-8烷氧基，或者
X为
其中A'为-CF2-、-O-、C1-6亚烷基、C1-8亚烷氧基，或者为共价键从而形成环丙烷环，并且
R7为-OH、-CN、-NH2、-CO2H、-CO2-C1-8烷基、-C(＝O)NH2、-CF3、-CF2H、-CH2F、-CH2OH、-CH2O-C1-8烷基、C1-8烷基或C1-8烷氧基；
Y为叔丁基或
其中R8和R9各自独立地为未取代的C1-8烷基或取代的C1-8烷基，
并且R10为氢、-OH、-CN、-NH2、-CF3、-CF2H、-CFH2、-CO2H、-CO2-C1-8烷基、-C(＝O)NH2、-CH2OH、-CH2O-C1-8烷基或C1-8烷氧基，或者
Y为其中A”为-CF2-、-O-、C1-6亚烷基、C1-8亚烷氧基，或者为共价键从而形成环丙烷环；并且R11为-OH、-CN、-NH2、-CO2H、-CO2-C1-8烷基、-C(＝O)NH2、-CF3、-CF2H、-CH2F、-CH2OH、-CH2O-C1-8烷基、C1-8烷基或C1-8烷氧基。
2.根据权利要求1所述的化合物，进一步定义为：
或它们的药用盐或互变异构体。
3.根据权利要求1所述的化合物，进一步定义为：
或它们的药用盐或互变异构体，
其中：
R1为未取代的C1-8烷基、取代的C1-8烷基、未取代的C6或10芳基、取代的C6或10芳基、未取代的C7-10芳烷基或取代的C7-10芳烷基；
R2为氢、未取代的C1-6烷基或取代的C1-6烷基；
X为卤素、氰基、未取代的C1-12烷基、取代的C1-12烷基、未取代的C1-12烷氧基、取代的C1-12烷氧基、未取代的C6或10芳基、取代的C6或10芳基、未取代的C7-10芳烷基、取代的C7-10芳烷基、未取代的5-10元杂芳基、取代的5-10元杂芳基、未取代的3-10元杂环烷基、取代的3-10元杂环烷基、未取代的C6或10芳氧基、取代的C6或10芳氧基、未取代的C2-12酰氧基、取代的C2-12酰氧基，或或者
X为
其中A'为-CF2-、-O-、C1-6亚烷基、C1-8亚烷氧基，或者为共价键从而形成环丙烷环；
R8和R9各自独立地为未取代的C1-6烷基或取代的C1-6烷基；以及
并且R10为氢、-OH、-CN、-NH2、-CF3、-CF2H、-CFH2、-CO2H、-CO2-C1-6烷基、-C(＝O)NH2、-CH2OH、-CH2O-C1-6烷基或C1-6烷氧基。
4.根据权利要求1所述的化合物，进一步定义为：
或它们的药用盐或互变异构体。
5.根据权利要求1-4中任一项所述的化合物，其中R1为未取代的C1-8烷基。
6.根据权利要求5所述的化合物，其中R1为甲基。
7.根据权利要求1-6中任一项所述的化合物，其中R2为氢。
8.根据权利要求1-7中任一项所述的化合物，其中X为氢、卤素、氰基、未取代的C1-12烷基、取代的C1-12烷基、未取代的C1-12烷氧基、取代的C1-12烷氧基、未取代的C6或10芳基、取代的C6或10芳基、未取代的C7-12芳烷基、取代的C7-12芳烷基、未取代的5-10元杂芳基、取代的5-10元杂芳基、未取代的3-10元杂环烷基、取代的3-10元杂环烷基、未取代的C6或10芳氧基、取代的C6或10芳氧基、未取代的C2-12酰氧基或取代的C2-12酰氧基。
9.根据权利要求1-7中任一项所述的化合物，其中X为氢、卤素、氰基、未取代的C1-12烷氧基、取代的C1-12烷氧基、未取代的C6或10芳基、取代的C6或10芳基、未取代的C7-12芳烷基、取代的C7-12芳烷基、未取代的5-10元杂芳基、取代的5-10元杂芳基、未取代的3-10元杂环烷基、取代的3-10元杂环烷基、未取代的C6或10芳氧基、取代的C6或10芳氧基、未取代的C2-12酰氧基、取代的C2-12酰氧基或
10.根据权利要求1-7中任一项所述的化合物，其中X为卤素。
11.根据权利要求8所述的化合物，其中X为溴、氟或氯。
12.根据权利要求1-7中任一项所述的化合物，其中X为-CF3。
13.根据权利要求1-7中任一项所述的化合物，其中X为-OH或氰基。
14.根据权利要求1-7中任一项所述的化合物，其中X为未取代的C1-8烷基。
15.根据权利要求14所述的化合物，其中X为未取代的C3-6烷基。
16.根据权利要求15所述的化合物，其中X为叔丁基。
17.根据权利要求1-7中任一项所述的化合物，其中X为未取代的C1-8烷氧基。
18.根据权利要求17所述的化合物，其中X为甲氧基或异丙氧基。
19.根据权利要求1-3和5-18中任一项所述的化合物，其中Y为叔丁基。
20.根据权利要求1-3和5-18中任一项所述的化合物，其中Y为
21.根据权利要求20所述的化合物，其中R8和R9各自独立地为未取代的C2-8烷基。
22.根据权利要求20所述的化合物，其中R8为甲基且R9为未取代的C2-8烷基。
23.根据权利要求20所述的化合物，其中R8和R9各自为-CH3。
24.根据权利要求20-23中任一项所述的化合物，其中R10为-CF3、-CF2H或-CFH2。
25.根据权利要求24所述的化合物，其中R10为-CF3。
26.根据权利要求20所述的化合物，其中R10为氢或-CH3。
27.根据权利要求1-3和5-18中任一项所述的化合物，其中Y为
28.根据权利要求27所述的化合物，其中A”为C1-3亚烷基、C1-4亚烷氧基，或者为共价键从而形成环丙烷环。
29.根据权利要求27所述的化合物，其中A”为共价键从而形成环丙烷环。
30.根据权利要求27-29中任一项所述的化合物，其中R11为-CF3、-CF2H、-CH2F、-CH2O-C1-6烷基、C1-6烷基或C1-8烷氧基。
31.根据权利要求27-30中任一项所述的化合物，其中R11为-CF3、-CF2H、-CH2F、C1-6烷基或C1-6烷氧基。
32.根据权利要求31所述的化合物，其中R11为-CF3、-CF2H或甲氧基。
33.根据权利要求32所述的化合物，其中R11为-CF3或-CF2H。
34.根据权利要求32所述的化合物，其中R11为-CH2O-CH3。
35.根据权利要求1-34中任一项所述的化合物，其中碳原子21处于S构型。
36.根据权利要求1和3-35中任一项所述的化合物，其中X处于3位。
37.根据权利要求1和5-36中任一项所述的化合物，其中Y处于4位或5位。
38.根据权利要求1-37中任一项所述的化合物，其中所述化合物为整合素拮抗剂。
39.根据权利要求38所述的化合物，其中所述整合素为α5β1整合素拮抗剂。
40.根据权利要求39所述的化合物，其中通过针对α5β1整合素功能的固相受体测定法所测量的，所述化合物表现出针对所述α5β1整合素的IC50值小于50nM、40nM、30nM、20nM、15nm或1nM，或者由前述任一项所限定的范围。
41.根据权利要求38-40中任一项所述的化合物，其中所述整合素为αvβ1整合素拮抗剂。
42.根据权利要求1-39中任一项所述的化合物，其中通过针对αvβ1整合素功能的固相受体测定法所测量的，所述化合物表现出针对所述αvβ1整合素的IC50值小于15nM。
43.根据权利要求1-42中任一项所述的化合物，其中通过针对αvβ3整合素功能的固相受体测定法所测量的，所述化合物表现出针对αvβ3整合素的IC50值小于10nM。
44.根据权利要求1-43中任一项所述的化合物，其中通过针对αvβ5整合素功能的固相受体测定法所测量的，所述化合物表现出针对αvβ5整合素的IC50值小于10nM。
45.根据权利要求1-44中任一项所述的化合物，其中通过针对αvβ1整合素功能、αvβ3整合素功能和αvβ5整合素功能的固相受体测定法所测量的，所述化合物表现出针对αvβ1整合素、αvβ3整合素和αvβ5整合素的IC50值小于10nM。
46.根据权利要求1-45中任一项所述的化合物，其中通过针对αvβ6整合素功能的固相受体测定法所测量的，所述化合物表现出针对αvβ6整合素的IC50值大于10nM。
47.根据权利要求1-46中任一项所述的化合物，其中通过针对αvβ8整合素功能的固相受体测定法所测量的，所述化合物表现出针对αvβ8整合素的IC50值大于10nM。
48.根据权利要求1-47中任一项所述的化合物，其中通过针对αvβ6整合素功能和αvβ8整合素功能的固相受体测定法所测量的，所述化合物表现出针对所述αvβ6整合素和所述αvβ8整合素的IC50值大于10nM。
49.根据权利要求1所述的化合物，其中所述化合物进一步定义为：
或它们的药用盐。
50.根据权利要求1所述的化合物，进一步定义为：
或它们的药用盐。
51.一种药物组合物，包含：
a)根据权利要求1-50中任一项所述的化合物；和
b)赋形剂。
52.根据权利要求51所述的药物组合物，其中所述药物组合物被配制为用以下方式施用：口服、脂肪内、动脉内、关节内、颅内、皮内、病灶内、肌内、鼻内、眼内、心包内、腹膜内、胸膜内、前列腺内、直肠内、鞘内、气管内、瘤内、脐内、阴道内、静脉内、膀胱内、玻璃体内、脂质体内、局部、粘膜内、肠胃外、直肠内、结膜下、皮下、舌下、外用、经口、经皮、经阴道、在月经中、在脂质组合物中、经由导管、经由灌洗、经由连续输注、经由输注、经由吸入、经由注射、经由局部递送或经由局部灌注。
53.根据权利要求51或52所述的药物组合物，其中所述药物组合物被配制为口服、外用、静脉内或玻璃体内施用。
54.根据权利要求51-53中任一项所述的药物组合物，其中所述药物组合物被配制为单位剂量。
55.一种治疗和/或预防有此需要的患者的疾病或紊乱的方法，包括以足以治疗和/或预防所述疾病或紊乱的量向所述患者施用根据权利要求1-54中任一项所述的化合物或组合物。
56.根据权利要求55所述的方法，其中所述疾病或紊乱与纤维化相关联。
57.根据权利要求55或56所述的方法，其中所述疾病或紊乱为硬皮病，或者肺、肝脏、肾、心脏、皮肤或胰腺的纤维化。
58.根据权利要求57所述的方法，其中所述疾病或紊乱为肺的纤维化。
59.根据权利要求57所述的方法，其中所述疾病或紊乱为肝脏的纤维化。
60.根据权利要求57所述的方法，其中所述疾病或紊乱为心脏的纤维化。
61.根据权利要求57所述的方法，其中所述疾病或紊乱为肾的纤维化。
62.根据权利要求57所述的方法，其中所述疾病或紊乱为胰腺的纤维化。
63.根据权利要求57所述的方法，其中所述疾病或紊乱为皮肤的纤维化。
64.根据要求57所述的方法，其中所述疾病或紊乱为硬皮病。
65.根据权利要求55-64所述的方法，其中所述患者为人、猴、牛、马、绵羊、山羊、狗、猫、小鼠、大鼠、豚鼠或它们的转基因物种。
66.根据权利要求65所述的方法，其中所述患者为猴、牛、马、绵羊、山羊、狗、猫、小鼠、大鼠或豚鼠。
67.根据权利要求65所述的方法，其中所述患者为人。
68.一种抑制整合素的结合的方法，包括将所述整合素与根据权利要求1-54中任一项所述的化合物或组合物接触。
69.根据权利要求68所述的方法，其中所述整合素为α5β1、αvβ1、αvβ3或αvβ5。
70.根据权利要求69所述的方法，其中所述整合素为αvβ1。
71.根据权利要求69所述的方法，其中所述整合素为α5β1。
72.根据权利要求68-71中任一项所述的方法，其中所述方法在体外进行。
73.根据权利要求68-71中任一项所述的方法，其中所述方法离体或在体内进行。
74.根据权利要求68-71和73中任一项所述的方法，其中所述结合的抑制足以治疗或预防患者的疾病或紊乱。
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