CN104640857B - 作为整合素拮抗剂的β氨基酸衍生物 - Google Patents

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Abstract

本文公开了新颖药剂，所述新颖药剂可用作介导血管生成和纤维化病理过程的整合素受体的拮抗剂，并且因此可用于药物组合物以及用于通过抑制或拮抗这些整合素来治疗由这些整合素介导的病况的方法。所述新颖药剂包括具有以下结构式的那些：

Description

作为整合素拮抗剂的β氨基酸衍生物
优先权要求
本申请要求于2012年7月18日提交的美国临时申请号61/673,058和于2013年2月13日提交的美国临时申请号61/764,443的权益，这两个美国临时申请的全部内容均以引用方式并入本文中。
背景技术
I.技术领域
本发明涉及药物、医学和细胞生物学领域。更具体地，本发明涉及可用作整合素受体拮抗剂的药剂(化合物)，所述药剂作为一组介导血管生成和纤维化的病理过程的整合素的拮抗剂具有特别突出的生物活性。因此，这些化合物可用于药物组合物以及用于通过抑制或拮抗这些整合素来治疗由所述整合素介导的病况的方法。
II.相关技术的说明
整合素是介导与其它细胞和与细胞外基质的细胞相互作用的整合性胞质膜蛋白质家族。整合素家族的约1/3成员直接结合含于其同源蛋白质配体的序列内的特定氨基酸基序，精氨酸-甘氨酸-天冬氨酸(RGD)。本领域内已经确定含有RGD序列的肽和模拟RGD序列的合成小分子化合物能够以不同程度的特异性结合这些整合素受体，并且由此抑制与正常生理配体的结合(Millard等，2011.)。利用所述药剂进行治疗的生物效应取决于结构内所反映的固有分子性质，所述分子性质决定了具体的整合素或整合素的组合在机体组织内在一段时期内受到抑制的程度。
许多人类疾病的特征是两种常见的起作用的机理中的任一种或两种：血管生成和纤维化。结合RGD的整合素的不同亚群在驱使这两个过程方面具有重要作用，使得对血管生成和纤维化的同时拮抗需要能够有效地结合若干目标整合素的药剂。这与被特异性地设计用于结合单个整合素的药剂形成对比，所述药剂由于它们的作用机理受到较大限制而可能在一些应用中效果较差。
已显示在促进血管生成方面具有作用的整合素包括αvβ3、αvβ5和α5β1。αvβ3和αvβ5最初在角膜或绒毛尿囊(choriallantoic)模型中分别被描述为由bFGF和VEGF诱导的血管生成的介体。最近，来自使用缺少这些整合素的小鼠的研究的数据也支持α5β1的重要功能作用。整合素α5β1(还被称为VLA-5)通常被称作‘典型的纤连蛋白受体’，反映了它与这种细胞外基质蛋白质的被充分表征的相互作用。表达α5β1的细胞结合纤连蛋白中包含第九和第十III型纤连蛋白重复的区域，后者含有对于整合素结合至关重要的RGD基序。除纤连蛋白以外，α5β1还被报道与包括纤维蛋白原、变性的胶原蛋白和微纤维蛋白-1在内的其它含有RGD的细胞外基质蛋白质相互作用(Bax等，2003；Perdih，2010；Suehiro等，2000)。这些配体是细胞作为组织中的伤口愈合反应的一部分铺设的临时基质的组成部分。这一反应的关键组成部分是有益于急性损伤的愈合但在许多疾病背景下可能有害的血管生成(新血管形成)和纤维化(瘢痕形成)。
结合RGD的整合素的拮抗剂应当可用于治疗具有血管生成或纤维化作为其病理的主要部分的人类疾病。具体地说，α5β1在血管生成中的重要作用受到众多研究的支持。例如，缺少这一整合素的小鼠在第10到11天展现胚胎致死，具有包括胚胎脉管系统和胚胎外脉管系统两者的缺陷的表型(Yang等，1993)。例如bFGF、IL-8、TGFβ和TNFα等血管生成细胞因子在体外和体内上调内皮细胞上的α5β1表达，并且免疫组织化学在来自不同类型的人类肿瘤活检物和动物的异种移植肿瘤的血管中显示α5β1染色和纤连蛋白染色两者的协调增加(Collo，1999；Kim等，2000)。特异性地抑制α5β1的单克隆抗体和已被描述为α5β1抑制剂的化合物在多个实验模型中显著地减少血管生成(Kim等，2000；Bhaskar等，2007；Livant等，2000；Zahn等，2009)。
由于α5β1表达并不局限于内皮，所以除血管生成以外，它还具有其它功能作用。它在许多细胞类型中以不同程度表达，所述细胞类型包括成纤维细胞、造血和免疫细胞、平滑肌细胞、上皮细胞和肿瘤细胞。已表明肿瘤细胞上的表达与肿瘤生长和转移的进展有关(Adachi等，2000；Blasé等，1995；Danen等，1994；Edward，1995)。在人类成纤维细胞中，α5β1促进运动性和存活(Lobert等，2010)。在胰腺星形细胞中，它与结缔组织生长因子相互作用以刺激粘附、迁移和纤维发生(Gao和Brigstock，2006)。已显示，对α5β1的药理性拮抗抑制人类视网膜上皮细胞在体外的附着、迁移和增殖，并且在经玻璃体内对具有视网膜脱离的兔施用时减少了视网膜细胞的增殖和瘢痕形成(Li等，2009；Zahn等，2010)。
已表明αv家族的多种结合RGD的整合素与促进潜在促纤维化细胞因子TGFβ的生物活化有关。这是通过结合潜在相关肽(LAP)介导的，特别是通过αvβ6和αvβ8介导的，而且还通过αvβ1、αvβ3和αvβ5介导。这些整合素相互作用全部决定性地取决于含于LAP中的氨基酸序列精氨酸-甘氨酸-天冬氨酸(RGD)。实际上，在RGD序列中含有突变的小鼠不能进行细胞因子活化并且模拟无TGFβ小鼠的表型。预期同时抑制具有活化TGFβ的潜力的多种整合素可能在预防或治疗众多纤维化病况方面具有特别实用性。另外，所述广谱整合素拮抗剂可特别用于同时调节血管生成与纤维化两者。
发明内容
本公开提供新颖的整合素受体拮抗剂、药物组合物和它们的制造方法以及它们的使用方法。
在一些方面，本发明提供下式的化合物或其药学上可接受的盐或互变异构体：
其中：W是其中：RA是-H或-F；RB是-H、-OH、-NH2、-F、-CN或烷氧基(C≤8)，其中如果RA是-F，那么RB是-H或-F；并且m是0-3；A是C-R″或N，其中：R″是-H、-OH、-CO2R1、-C(＝O)R2或-N(R1)(C＝O)R3、或烷氧基(C≤8)、酰氧基(C≤8)、烷基氨基(C≤8)、二烷基氨基(C≤8)或任何所述基团的被取代形式，其中：R1是-H、烷基(C≤8)或被取代的烷基(C≤8)；R2是烷基氨基(C≤8)、二烷基氨基(C≤8)、杂环烷基(C≤8)、杂芳基(C≤8)或任何所述基团的被取代形式；R3是烷基(C≤8)、芳基(C≤8)、芳烷基(C≤8)、杂芳基(C≤8)、杂环烷基(C≤8)或任何所述基团的被取代形式；R′是-H、烷基(C≤8)或被取代的烷基(C≤8)；X是：氢、卤代或氰基；烷基(C≤12)、烷氧基(C≤12)、芳基(C≤12)、芳烷基(C≤12)、杂芳基(C≤8)、杂环烷基(C≤12)、芳氧基(C≤12)、酰氧基(C≤12)或任何所述基团的被取代形式；-(CH2)n′-CO2-烷基(C≤6)，其中，n′是0-3；其中R4和R5各自独立地为烷基(C≤8)、被取代的烷基(C≤8)或-CH2O-烷基(C≤8)；R6是-OH、-CN、-NH2、-CF3、-CF2H、-CH2F、-CO2H、-CO2-烷基(C≤8)、-C(＝O)NH2、-CH2OH、-CH2O-烷基(C≤8)或烷氧基(C≤8)，前提条件是若R4和R5各自为-CF3，那么R6是-OH、烷氧基(C≤8)或-NH2；其中n是1或2并且X1是-H或烷基(C≤8)；或其中：A′是共价键，由此形成环丙烷环、-CF2-、-O-、烷二基(alkanediyl)(C≤6)或烷氧基二基(alkoxydiyl)(C≤8)；并且R7是-OH、-CN、-NH2、-CO2H、-CO2-烷基(C≤8)、-C(＝O)NH2、-CF3、-CF2H、-CH2F、-CH2OH、-CH2O-烷基(C≤8)、烷基(C≤8)或烷氧基(C≤8)；Y是：叔丁基、新戊基、降冰片基或金刚烷基；其中R8和R9各自独立地为烷基(C≤8)、被取代的烷基(C≤8)或-CH2O-烷基(C≤8)；R10是-OH、-CN、-NH2、-CF3、-CF2H、-CFH2、-CO2H、-CO2-烷基(C≤8)、-C(＝O)NH2、-CH2OH、-CH2O-烷基(C≤8)或烷氧基(C≤8)，前提条件是若R8和R9各自为-CF3，那么R10是-OH、烷氧基(C≤8)或-NH2；其中n″是1或2并且Y1是-H或烷基(C≤8)；或其中：A″是共价键，由此形成环丙烷环、-O-、-CF2-、烷二基(C≤6)或烷氧基二基(C≤8)；并且R11是-OH、-CN、-NH2、-CO2H、-CO2-烷基(C≤8)、-C(＝O)NH2、-CF3、-CF2H、-CH2F、-CH2OH、-CH2O-烷基(C≤8)、烷基(C≤8)或烷氧基(C≤8)；L是氢、羟基或烷氧基(C≤8)；并且Z是氢、氟或羟基并且连接到碳原子2或6；前提条件是如果W是那么X和Y各自不均为叔丁基；进一步的前提条件是如果W是A是C-OH，Z是氢，并且X是溴代或碘代，那么Y不是叔丁基。在一些实施方案中，所述化合物进一步被定义为：
或其药学上可接受的盐或互变异构体，
其中：W是其中：RA是-H或-F；RB是-H、-OH、-NH2、-F、-CN或烷氧基(C≤8)，其中如果RA是-F，那么RB是-H或-F；并且m是0-3；A是C-R″或N，其中：R″是-H、-OH、-CO2R1、-C(＝O)R2或-N(R1)(C＝O)R3、或烷氧基(C≤8)、酰氧基(C≤8)、烷基氨基(C≤8)、二烷基氨基(C≤8)或任何所述基团的被取代形式，其中：R1是-H、烷基(C≤8)或被取代的烷基(C≤8)；R2是烷基氨基(C≤8)、二烷基氨基(C≤8)、杂环烷基(C≤8)、杂芳基(C≤8)或任何所述基团的被取代形式；R3是烷基(C≤8)、芳基(C≤8)、芳烷基(C≤8)、杂芳基(C≤8)、杂环烷基(C≤8)或任何所述基团的被取代形式；R′是-H、烷基(C≤8)或被取代的烷基(C≤8)；X是：氢、卤代或氰基；烷基(C≤12)、烷氧基(C≤12)、芳基(C≤12)、芳烷基(C≤12)、杂芳基(C≤8)、杂环烷基(C≤12)、芳氧基(C≤12)、酰氧基(C≤12)或任何所述基团的被取代形式；-(CH2)n′-CO2-烷基(C≤6)，其中，n′是0-3；其中R4和R5各自独立地为烷基(C≤8)或被取代的烷基(C≤8)；R6是-OH、-CN、-NH2、-CF3、-CF2H、-CO2H、-CO2-烷基(C≤8)、-C(＝O)NH2、-CH2OH或烷氧基(C≤8)，前提条件是若R4和R5各自为CF3，那么R6是OH；其中n是1或2；或其中：A′是共价键，由此形成环丙烷环、烷二基(C≤6)或烷氧基二基(C≤8)；并且R7是-OH、-CN、-NH2、-CO2H、-CO2-烷基(C≤8)、-C(＝O)NH2、-CF3、-CF2H或烷氧基(C≤8)；Y是：叔丁基、新戊基、降冰片基或金刚烷基；其中R8和R9各自独立地为烷基(C≤8)或被取代的烷基(C≤8)；R10是-OH、-CN、-NH2、-CF3、-CF2H、-CO2H、-CO2-烷基(C≤8)、-C(＝O)NH2、-CH2OH或烷氧基(C≤8)，前提条件是若R8和R9各自为CF3，那么R10是OH；其中n″是1或2；或其中：A″是共价键，由此形成环丙烷环、烷二基(C≤6)或烷氧基二基(C≤8)；并且R11是-OH、-CN、-NH2、-CO2H、-CO2-烷基(C≤8)、-C(＝O)NH2、-CF3、-CF2H或烷氧基(C≤8)；L是氢、羟基或烷氧基(C≤8)；并且Z是氢或羟基并且连接到碳原子2或6；前提条件是如果W是 那么X和Y各自不均为叔丁基；进一步的前提条件是如果W是A是C-OH、Z是氢，并且X是溴代或碘代，那么Y不是叔丁基。在一些实施方案中，所述化合物进一步被定义为：
或其药学上可接受的盐或互变异构体，
其中：W是其中：RA是-H或-F；RB是-H、-OH、-NH2、-F、-CN或烷氧基(C≤8)，其中如果RA是-F，那么RB是-H或-F；并且m是0-3；A是C-R″或N，其中：R″是-H、-OH、-CO2R1、-C(＝O)R2或-N(R1)(C＝O)R3、或烷氧基(C≤8)、酰氧基(C≤8)、烷基氨基(C≤8)、二烷基氨基(C≤8)或任何所述基团的被取代形式，其中：R1是-H、烷基(C≤8)或被取代的烷基(C≤8)；R2是烷基氨基(C≤8)、二烷基氨基(C≤8)、杂环烷基(C≤8)、杂芳基(C≤8)或任何所述基团的被取代形式；R3是烷基(C≤8)、芳基(C≤8)、芳烷基(C≤8)、杂芳基(C≤8)、杂环烷基(C≤8)或任何所述基团的被取代形式；X是：氢、卤代或氰基；烷基(C≤12)、烷氧基(C≤12)、芳基(C≤12)、芳烷基(C≤12)、杂芳基(C≤8)、杂环烷基(C≤12)、芳氧基(C≤12)、酰氧基(C≤12)或任何所述基团的被取代形式；-(CH2)n′-CO2-烷基(C≤6)，其中，n′是0-3；其中R4和R5各自独立地为烷基(C≤8)、被取代的烷基(C≤8)或-CH2O-烷基(C≤8)；R6是-OH、-CN、-NH2、-CF3、-CF2H、-CH2F、-CO2H、-CO2-烷基(C≤8)、-C(＝O)NH2、-CH2OH、-CH2O-烷基(C≤8)或烷氧基(C≤8)，前提条件是若R4和R5各自为-CF3，那么R6是-OH、烷氧基(C≤8)或-NH2；其中n是1或2并且X1是-H或烷基(C≤8)；或其中：A′是共价键，由此形成环丙烷环、-CF2-、-O-、烷二基(C≤6)或烷氧基二基(C≤8)；并且R7是-OH、-CN、-NH2、-CO2H、-CO2-烷基(C≤8)、-C(＝O)NH2、-CF3、-CF2H、-CH2F、-CH2OH、-CH2O-烷基(C≤8)、烷基(C≤8)或烷氧基(C≤8)；Y是：叔丁基；其中R8和R9各自独立地为烷基(C≤8)、被取代的烷基(C≤8)或-CH2O-烷基(C≤8)；R10是-OH、-CN、-NH2、-CF3、-CF2H、-CFH2、-CO2H、-CO2-烷基(C≤8)、-C(＝O)NH2、-CH2OH、-CH2O-烷基(C≤8)或烷氧基(C≤8)，前提条件是若R8和R9各自为-CF3，那么R10是-OH、烷氧基(C≤8)或-NH2；其中n是1或2并且Y1是-H或烷基(C≤8)；或其中：A″是共价键，由此形成环丙烷环、-O-、-CF2-、烷二基(C≤6)或烷氧基二基(C≤8)；并且R11是-OH、-CN、-NH2、-CO2H、-CO2-烷基(C≤8)、-C(＝O)NH2、-CF3、-CF2H、-CH2F、-CH2OH、-CH2O-烷基(C≤8)、烷基(C≤8)或烷氧基(C≤8)；并且Z是氢、氟或羟基并且连接到碳原子2或6；前提条件是如果W是那么X和Y各自不均为叔丁基；进一步的前提条件是如果W是A是C-OH，Z是氢，并且X是溴代或碘代，那么Y不是叔丁基。在一些实施方案中，所述化合物进一步被定义为：
或其药学上可接受的盐或互变异构体，
其中：W是其中：RA是-H或-F；RB是-H、-OH、-F，其中如果RA是-F，那么RB是-H或-F；A是C-R″或N，其中：R″是-H、-OH，X是：卤代、叔丁基、CF3、CF2H或氰基；其中R4和R5各自独立地为烷基(C≤8)或被取代的烷基(C≤8)；R6是-OH、-CN、-NH2、-CF3、-CF2H、-CO2H、-CO2-烷基(C≤8)、-C(＝O)NH2、-CH2OH或烷氧基(C≤8)，前提条件是若R4和R5各自为CF3，那么R6是OH；其中n是1或2；或其中：A′是共价键，由此形成环丙烷环、烷二基(C≤6)或烷氧基二基(C≤8)；并且R7是-OH、-CN、-NH2、-CO2H、-CO2-烷基(C≤8)、-C(＝O)NH2、-CF3、-CF2H或烷氧基(C≤8)；Y是：叔丁基；其中R8和R9各自独立地为烷基(C≤8)或被取代的烷基(C≤8)；R10是-OH、-CN、-NH2、-CF3、-CF2H、-CO2H、-CO2-烷基(C≤8)、-C(＝O)NH2、-CH2OH或烷氧基(C≤8)，前提条件是若R8和R9各自为CF3，那么R10是OH；其中n″是1或2；或其中：A″是共价键，由此形成环丙烷环、烷二基(C≤6)或烷氧基二基(C≤8)；并且R11是-OH、-CN、-NH2、-CO2H、-CO2-烷基(C≤8)、-C(＝O)NH2、-CF3、-CF2H或烷氧基(C≤8)；并且Z是氢或羟基并且连接到碳原子2或6；前提条件是如果W是那么X和Y各自不均为叔丁基；进一步的前提条件是如果W是A是C-OH，Z是氢，并且X是溴代或碘代，那么Y不是叔丁基。在一些实施方案中，标记为β的碳原子呈R构型。在其它实施方案中，标记为β的碳原子呈S构型。在一些实施方案中，Y是：其中：R8和R9各自独立地为烷基(C≤8)、被取代的烷基(C≤8)或-CH2O-烷基(C≤8)；并且R10是-OH、-CF3、-CF2H、-CFH2、-CO2-烷基(C≤8)、-CH2OH、-CH2O-烷基(C≤8)或烷氧基(C≤8)，前提条件是若R8和R9各自为-CF3，那么R10是-OH、烷氧基(C≤8)或-NH2。
在一些实施方案中，W是在一些实施方案中，A是C-OH。在其它实施方案中，A是N。在一些实施方案中，X是卤代。在一些实施方案中，X是溴代。在其它实施方案中，X是氯代。在其它实施方案中，X是烷基(C≤8)或被取代的烷基(C≤8)。在一些实施方案中，X是叔丁基。在其它实施方案中，X是2-羟基-异丙基。在其它实施方案中，X是-CF3。在其它实施方案中，X是氰基。在其它实施方案中，X是杂芳基。在一些实施方案中，X是嘧啶基。在其它实施方案中，X是吡啶基。在一些实施方案中，L是氢。在一些实施方案中，Y是叔丁基。在其它实施方案中，Y是2-羟基-异丙基。在其它实施方案中，Y是其中R8和R9各自独立地为烷基(C≤8)、被取代的烷基(C≤8)或-CH2O-烷基(C≤8)；R10是-OH、-CN、-NH2、-CF3、-CF2H、-CFH2、-CO2H、-CO2-烷基(C≤8)、-C(＝O)NH2、-CH2OH、-CH2O-烷基(C≤8)或烷氧基(C≤8)，前提条件是若R8和R9各自为-CF3，那么R10是-OH、烷氧基(C≤8)或-NH2。在一些实施方案中，R8和R9是烷基(C≤8)。在一些实施方案中，R8和R9是甲基。在一些实施方案中，R10是-CN、-CH2OH、-CH2O-烷基(C≤8)或-CF3。在其它实施方案中，其中R10是-CH2O-CH3。在其它实施方案中，Y是在其它实施方案中，Y是在其它实施方案中，Y是在其它实施方案中，Y是在其它实施方案中，R8是烷基(C≤8)。在其它实施方案中，R8是甲基。在其它实施方案中，R9是被取代的烷基(C≤8)。在其它实施方案中，R9是-CF3。在其它实施方案中，R10是-OH。在其它实施方案中，Y是在其它实施方案中，Y是其中：A″是共价键，由此形成环丙烷环、-O-、-CF2-、烷二基(C≤6)或烷氧基二基(C≤8)；并且R11是-OH、-CN、-NH2、-CO2H、-CO2-烷基(C≤8)、-C(＝O)NH2、-CF3、-CF2H、-CH2F、-CH2OH、-CH2O-烷基(C≤8)、烷基(C≤8)或烷氧基(C≤8)。在一些实施方案中，A″是共价键。在其它实施方案中，A″是烷氧基二基(C≤8)。在一些实施方案中，A″是-CH2OCH2-。在其它实施方案中，A″是烷二基(C≤6)。在一些实施方案中，A″是-CH2-。在其它实施方案中，R11是-CN、-CH2OH、-CH2O-烷基(C≤8)、-CF2H或-CFH2。在一些实施方案中，R11是-CH2OCH3。在其它实施方案中，Y是在其它实施方案中，Y是在其它实施方案中，Y是在其它实施方案中，Y是在其它实施方案中，Y是在其它实施方案中，Y是在一些实施方案中，Z是氢。在其它实施方案中，Z是羟基并且连接到碳原子2。在其它实施方案中，Z是羟基并且连接到碳原子6。在其它实施方案中，Z是氟化物并且连接到碳原子2。在其它实施方案中，Z是氟化物并且连接到碳原子6。在一些实施方案中，R′是氢。
在其它实施方案中，W是在一些实施方案中，A是C-OH。在其它实施方案中，A是C-H。在其它实施方案中，A是N。在一些实施方案中，R′是氢。在一些实施方案中，L是氢。在一些实施方案中，Z是氢。在一些实施方案中，Y是烷基(C≤8)。在一些实施方案中，Y是叔丁基。在一些实施方案中，X是卤代。在一些实施方案中，X是溴代。在其它实施方案中，X是烷基(C≤8)。在其它实施方案中，X是叔丁基。
在一些实施方案中，W是在一些实施方案中，A是C-OH。在其它实施方案中，A是C-H。在一些实施方案中，R′是氢。在一些实施方案中，L是氢。在一些实施方案中，Z是氢。在一些实施方案中，Y是烷基(C≤8)。在一些实施方案中，Y是叔丁基。在一些实施方案中，X是卤代。在一些实施方案中，X是溴代。
在一些实施方案中，所述化合物进一步被定义为：
或其药学上可接受的盐或互变异构体。
在其它实施方案中，所述化合物进一步被定义为：
或其药学上可接受的盐或互变异构体。
在一些实施方案中，根据权利要求1所述化合物为表A中所示的式的化合物或其药学上可接受的盐或互变异构体。
在另一方面，本发明提供包含以下的药物组合物：a)本发明的化合物；和b)赋形剂。
在又一方面，本发明提供治疗和/或预防有需要的患者的疾病或病症的方法，其包括以足以治疗和/或预防所述疾病或病症的量对所述患者施用本发明的化合物。在一些实施方案中，所述疾病或病症与血管生成相关。在其它实施方案中，所述疾病或病症与纤维化相关。在其它实施方案中，所述疾病或病症与纤维化和/或血管生成相关。在其它实施方案中，所述疾病或病症是肺纤维化、肝纤维化、肾纤维化、心脏纤维化和胰腺纤维化、硬皮病、瘢痕形成、早产儿视网膜病变、家族性渗出性玻璃体视网膜病变、增生性玻璃体视网膜病变、黄斑变性、糖尿病视网膜病变、癌症、骨质疏松症、自身免疫疾病、恶性肿瘤的体液性高钙血症、佩吉特氏病(Paget’s disease)、牙周病、银屑病、关节炎、再狭窄和感染。在其它实施方案中，所述疾病或病症是肺纤维化。在其它实施方案中，所述疾病或病症是肝纤维化。在其它实施方案中，所述疾病或病症是心脏纤维化。在其它实施方案中，所述疾病或病症是肾纤维化。在其它实施方案中，所述疾病或病症是胰腺纤维化。在其它实施方案中，所述疾病或病症是硬皮病。在其它实施方案中，所述疾病或病症是瘢痕形成。在一些实施方案中，瘢痕形成是皮肤瘢痕形成(dermal scarring)。在其它实施方案中，瘢痕形成是视网膜瘢痕形成。在其它实施方案中，其中瘢痕形成是角膜瘢痕形成。在其它实施方案中，所述疾病或病症是早产儿视网膜病变。在其它实施方案中，所述疾病或病症是家族性渗出性玻璃体视网膜病变。在其它实施方案中，所述疾病或病症是增生性玻璃体视网膜病变。在其它实施方案中，所述疾病或病症是黄斑变性。在其它实施方案中，所述疾病或病症是糖尿病视网膜病变。在其它实施方案中，所述疾病或病症是癌症。在一些实施方案中，癌症包括实体瘤生长或瘤形成。在其它实施方案中，癌症包括肿瘤转移。在一些实施方案中，癌症是膀胱癌、血癌、骨癌、脑癌、乳癌、中枢神经系统癌、子宫颈癌、结肠癌、子宫内膜癌、食道癌、胆囊癌、生殖器癌、生殖泌尿道癌、头癌、肾癌、喉癌、肝癌、肺癌、肌肉组织癌、颈癌、口腔粘膜癌或鼻粘膜癌、卵巢癌、胰腺癌、前列腺癌、皮肤癌、脾脏癌、小肠癌、大肠癌、胃癌、睾丸癌或甲状腺癌。在其它实施方案中，癌症是上皮细胞癌(carcinoma)、肉瘤、淋巴瘤、白血病、黑素瘤、间皮瘤、多发性骨髓瘤或精原细胞瘤。在其它实施方案中，所述疾病或病症是骨质疏松症。在其它实施方案中，所述疾病或病症是自身免疫疾病。在一些实施方案中，自身免疫病症是多发性硬化。在其它实施方案中，所述疾病或病症是恶性肿瘤的体液性高钙血症。在其它实施方案中，所述疾病或病症是佩吉特氏病。在其它实施方案中，所述疾病或病症是牙周病。在其它实施方案中，所述疾病或病症是银屑病。在其它实施方案中，所述疾病或病症是关节炎。在一些实施方案中，关节炎是类风湿性关节炎(rheumatoid arthritis)。在其它实施方案中，所述疾病或病症是再狭窄。在其它实施方案中，所述疾病或病症是感染。在一些实施方案中，患者是人类、猴、牛(cow)、马、绵羊、山羊、狗、猫、小鼠、大鼠、豚鼠或其转基因物种。在其它实施方案中，患者是猴、牛、马、绵羊、山羊、狗、猫、小鼠、大鼠或豚鼠。在其它实施方案中，患者是人类。
在另一方面，本发明提供下式的化合物或其盐或互变异构体：
其中：R′是-H、烷基(C≤8)、被取代的烷基(C≤8)、烷基芳基(C≤12)和甲硅烷基；R″和R″′各自独立地为-H、烷基(C≤8)、被取代的烷基(C≤8)、烷基芳基(C≤12)、被取代的烷基芳基(C≤12)、酰基、叔丁氧基羰基、9-芴基甲氧基羰基、氨基甲酸酯基、苄氧羰基或苯甲酰基；X是：氢、卤代或氰基；烷基(C≤12)、烷氧基(C≤12)、芳基(C≤12)、芳烷基(C≤12)、杂芳基(C≤8)、杂环烷基(C≤12)、芳氧基(C≤12)、酰氧基(C≤12)或任何所述基团的被取代形式；-(CH2)n′-CO2-烷基(C≤6)，其中，n′是0-3；其中R4和R5各自独立地为烷基(C≤8)、被取代的烷基(C≤8)或-CH2O-烷基(C≤8)；R6是-OH、-CN、-NH2、-CF3、-CF2H、-CH2F、-CO2H、-CO2-烷基(C≤8)、-C(＝O)NH2、-CH2OH、-CH2O-烷基(C≤8)或烷氧基(C≤8)，前提条件是若R4和R5各自为-CF3，那么R6是-OH、烷氧基(C≤8)或-NH2；其中n是1或2并且X1是-H或烷基(C≤8)；或其中：A′是共价键，由此形成环丙烷环、-CF2-、-O-、烷二基(C≤6)或烷氧基二基(C≤8)；并且R7是-OH、-CN、-NH2、-CO2H、-CO2-烷基(C≤8)、-C(＝O)NH2、-CF3、-CF2H、-CH2F、-CH2OH、-CH2O-烷基(C≤8)、烷基(C≤8)或烷氧基(C≤8)；Y是：叔丁基、新戊基、降冰片基或金刚烷基；其中R8和R9各自独立地为烷基(C≤8)、被取代的烷基(C≤8)或-CH2O-烷基(C≤8)；R10是-OH、-CN、-NH2、-CF3、-CF2H、-CFH2、-CO2H、-CO2-烷基(C≤8)、-C(＝O)NH2、-CH2OH、-CH2O-烷基(C≤8)或烷氧基(C≤8)，前提条件是若R8和R9各自为-CF3，那么R10是-OH、烷氧基(C≤8)或-NH2；其中n″是1或2并且Y1是-H或烷基(C≤8)；或其中：A″是共价键，由此形成环丙烷环、-O-、-CF2-、烷二基(C≤6)或烷氧基二基(C≤8)；并且R11是-OH、-CN、-NH2、-CO2H、-CO2-烷基(C≤8)、-C(＝O)NH2、-CF3、-CF2H、-CH2F、-CH2OH、-CH2O-烷基(C≤8)、烷基(C≤8)或烷氧基(C≤8)；L是氢、羟基或烷氧基(C≤8)；并且Z是氢、氟或羟基并且连接到碳原子2或6。在其它实施方案中，本发明提供具有下式的化合物或其盐或互变异构体：
其中：R′是-H、烷基(C≤8)、被取代的烷基(C≤8)、烷基芳基(C≤12)和甲硅烷基；R″和R″′各自独立地为-H、烷基(C≤8)、被取代的烷基(C≤8)、烷基芳基(C≤12)、被取代的烷基芳基(C≤12)、酰基、叔丁氧基羰基、9-芴基甲氧基羰基、氨基甲酸酯基、苄氧羰基或苯甲酰基；X是：氢、卤代或氰基；烷基(C≤12)、烷氧基(C≤12)、芳基(C≤12)、芳烷基(C≤12)、杂芳基(C≤8)、杂环烷基(C≤12)、芳氧基(C≤12)、酰氧基(C≤12)或任何所述基团的被取代形式；-(CH2)n′-CO2-烷基(C≤6)，其中，n′是0-3；其中R4和R5各自独立地为烷基(C≤8)、被取代的烷基(C≤8)或-CH2O-烷基(C≤8)；R6是-OH、-CN、-NH2、-CF3、-CF2H、-CH2F、-CO2H、-CO2-烷基(C≤8)、-C(＝O)NH2、-CH2OH、-CH2O-烷基(C≤8)或烷氧基(C≤8)，前提条件是若R4和R5各自为-CF3，那么R6是-OH、烷氧基(C≤8)或-NH2；其中n是1或2并且X1是-H或烷基(C≤8)；或其中：A′是共价键，由此形成环丙烷环、-CF2-、-O-、烷二基(C≤6)或烷氧基二基(C≤8)；并且R7是-OH、-CN、-NH2、-CO2H、-CO2-烷基(C≤8)、-C(＝O)NH2、-CF3、-CF2H、-CH2F、-CH2OH、-CH2O-烷基(C≤8)、烷基(C≤8)或烷氧基(C≤8)；Y是：叔丁基、新戊基、降冰片基或金刚烷基；其中R8和R9各自独立地为烷基(C≤8)、被取代的烷基(C≤8)或-CH2O-烷基(C≤8)；R10是-OH、-CN、-NH2、-CF3、-CF2H、-CFH2、-CO2H、-CO2-烷基(C≤8)、-C(＝O)NH2、-CH2OH、-CH2O-烷基(C≤8)或烷氧基(C≤8)，前提条件是若R8和R9各自为-CF3，那么R10是-OH、烷氧基(C≤8)或-NH2；其中n″是1或2并且Y1是-H或烷基(C≤8)；或其中：A″是共价键，由此形成环丙烷环、-O-、-CF2-、烷二基(C≤6)或烷氧基二基(C≤8)；并且R11是-OH、-CN、-NH2、-CO2H、-CO2-烷基(C≤8)、-C(＝O)NH2、-CF3、-CF2H、-CH2F、-CH2OH、-CH2O-烷基(C≤8)、烷基(C≤8)或烷氧基(C≤8)；L是氢、羟基或烷氧基(C≤8)；并且Z是氢、氟或羟基并且连接到碳原子2或6。在一些实施方案中，所述化合物受以下前提条件限制：X和Y各自不均为叔丁基；进一步的前提条件是Z是氢，并且X是溴代或碘代，那么Y不是叔丁基。在一些实施方案中，标记为β的碳原子呈R构型。在其它实施方案中，标记为β的碳原子呈S构型。在一些实施方案中，R′是-H。在其它实施方案中，R′是烷基(C≤8)。在一些实施方案中，R′是乙基。在一些实施方案中，R″是-H。在一些实施方案中，R″′是-H。在其它实施方案中，R″和R″′均为-H。在一些实施方案中，L是氢。在一些实施方案中，Z是氢。在其它实施方案中，Z是羟基。在其它实施方案中，Z是羟基并且连接到标记为2的碳。在其它实施方案中，Z是羟基并且连接到标记为6的碳。在一些实施方案中，X是卤代。在一些实施方案中，X是氯代。在其它实施方案中，X是溴代。在其它实施方案中，X是烷基(C≤12)或被取代的烷基(C≤12)。在一些实施方案中，X是烷基(C≤12)。在一些实施方案中，X是叔丁基。在其它实施方案中，X是被取代的烷基(C≤12)。在一些实施方案中，X是三氟甲基。在其它实施方案中，X是杂芳基(C≤8)。在一些实施方案中，X是3-吡啶基。在其它实施方案中，X是3-嘧啶基。在其它实施方案中，X是氰基。在一些实施方案中，Y是叔丁基。在其它实施方案中，Y是其中R8和R9各自独立地为烷基(C≤8)、被取代的烷基(C≤8)或-CH2O-烷基(C≤8)并且R10是-OH、-CN、-NH2、-CF3、-CF2H、-CFH2、-CO2H、-CO2-烷基(C≤8)、-C(＝O)NH2、-CH2OH、-CH2O-烷基(C≤8)或烷氧基(C≤8)，前提条件是若R8和R9各自为-CF3，那么R10是-OH、烷氧基(C≤8)或-NH2。在其它实施方案中，R8是烷基(C≤8)。在一些实施方案中，R8是甲基。在一些实施方案中，R9是烷基(C≤8)或被取代的烷基(C≤8)。在一些实施方案中，R9是烷基(C≤8)。在一些实施方案中，R9是甲基。在其它实施方案中，R9是被取代的烷基(C≤8)。在一些实施方案中，R9是三氟甲基。在一些实施方案中，R10是-OH、-CN、-CF3、-CH2OH或-CH2O-烷基(C≤8)。在一些实施方案中，R10是-OH。在其它实施方案中，R10是-CN。在其它实施方案中，R10是-CH2OH。在其它实施方案中，R10是-CF3。在其它实施方案中，R10是-CH2O-烷基(C≤8)。在其它实施方案中，R10是-CH2O-CH3。在其它实施方案中，Y是2-羟基-异丙基。在其它实施方案中，Y是在其它实施方案中，Y是在其它实施方案中，Y是在其它实施方案中，Y是在其它实施方案中，Y是在其它实施方案中，Y是其中：A″是共价键，由此形成环丙烷环、-O-、-CF2、烷二基(C≤6)或烷氧基二基(C≤8)；并且R11是-OH、-CN、-NH2、-CO2H、-CO2-烷基(C≤8)、-C(＝O)NH2、-CF3、-CF2H、-CH2F、-CH2OH、-CH2O-烷基(C≤8)、烷基(C≤8)或烷氧基(C≤8)。在一些实施方案中，A″是共价键，由此形成环丙烷环。在其它实施方案中，A″是烷二基(C≤6)。在一些实施方案中，A″是-CH2-。在其它实施方案中，A″是烷氧基二基(C≤8)。在一些实施方案中，A″是-CH2-O-CH2-。在一些实施方案中，R11是-CN。在其它实施方案中，R11是-CHF2。在其它实施方案中，R11是-CH2F。在其它实施方案中，R11是-CH2OH。在其它实施方案中，R11是-CH2O-烷基(C≤8)。在其它实施方案中，R11是-CH2O-CH3。在其它实施方案中，Y是在其它实施方案中，Y是在其它实施方案中，Y是在其它实施方案中，Y是在其它实施方案中，Y是在其它实施方案中，Y是在一些实施方案中，所述化合物进一步被定义为：
或其盐或互变异构体。在其它实施方案中，所述化合物进一步被定义为：
或其盐或互变异构体。在其它实施方案中，所述化合物进一步被定义为：
或其盐或互变异构体。在其它实施方案中，所述化合物进一步被定义为：
或其盐或互变异构体。
在一些方面，本公开预期以下事实：苯环与β-氨基酸上的氨基酸骨架之间的键是自由旋转的。因此，在一些方面，预期所述结构可旋转使得X基团朝所述骨架定向并且Y远离所述骨架定向，并且说明书中最通常绘制的方式，如以下结构中所示，显示X基团朝所述骨架定向并且Y远离所述骨架定向。结构：
等同于结构：
考虑到结合骨架中标记为β的碳与芳香环中标记为1的碳的键的自由旋转。
根据下文详细描述将明了本公开的其它目标、特征和优点。然而，应当理解，尽管详细描述和具体实施例指示了本发明的具体实施方案，但仅仅是以举例方式给出的，因为本领域技术人员根据此详细描述将明了属于本发明精神和范围内的各种变化和修改。注意，仅仅因为特定化合物归于一个特定通式并不意味着其不能还属于另一通式。
具体实施方式
本文公开了具有整合素受体拮抗剂性质的新化合物和组合物、它们的制造方法以及它们的使用方法，包括用于治疗和/或预防疾病的方法。
I.定义
当在化学基团的背景下使用时，“氢”意指-H；“羟基”意指-OH；“氧代/氧基(oxo)”意指＝O；“卤代”独立地意指-F、-Cl、-Br或-I；“氨基”意指-NH2；“羟基氨基”意指-NHOH；“硝基”意指-NO2；亚氨基意指＝NH；“氰基”意指-CN；“异氰酸酯基”意指-N＝C＝O；“叠氮基”意指-N3；在单价的背景下，“磷酸酯基”意指-OP(O)(OH)2或其去质子化形式；在二价的背景下，“磷酸酯基”意指-OP(O)(OH)O-或其去质子化形式；“巯基”意指-SH；“硫代/硫基(thio)”意指＝S；“磺酰基”意指-S(O)2-；并且“亚磺酰基”意指-S(O)-。
在化学结构式的背景下，符号“-”意指单键，“＝”意指双键；并且“≡”意指三键。符号“----”代表任选键，它如果存在，则为单键或双键。符号
代表单键或双键。因此，例如，结构包括结构 如本领域技术人员所应当理解的，没有一个所述环原子形成多于一个的双键的一部分。当垂直穿过键绘出时，符号指示基团的连接点。应当注意的是，针对较大的基团，通常仅以这种方式标识连接点，以便帮助读者快速地并且清楚地鉴别连接点。符号意指其中连接到楔形的粗端的基团位于“纸面外”的单键。符号意指其中连接到楔形的粗端的基团位于“纸面内”的单键。符号意指其中构象(例如，R或S)或几何结构未定义(例如，E或Z)的单键。
本申请中所示结构的原子上任何未定义的化合价均隐含地代表键结到所述原子的氢原子。当基团“R”被描绘为例如下式中的环系统上的“浮动基团”时：
R可替代连接到任何环原子的任何氢原子，包括所描绘的氢、隐含的氢或明确定义的氢，只要形成稳定结构即可。当基团“R”被描绘为例如下式中的稠合环系统上的“浮动基团”时：
除非另有说明，否则R可替代连接到任一稠合环的任何环原子的任何氢。可替代的氢包括所描绘的氢(例如，上文式中连接到的氮的氢)、隐含的氢(例如，上文式中未显示但应理解为存在的氢)、明确定义的氢以及存在取决于环原子特性的任选氢(例如，当X等于-CH-时，连接到基团X的氢)，只要形成稳定结构即可。在所描绘的示例中，R可位于稠合环系统的5元环或6元环上。在上文式中，紧随括号中基团“R”的下标字母“y”代表数字变量。除非另有说明，否则这一变量可为0、1、2或大于2的任何整数，只受环或环系统的可替代氢原子的最大数量限制。
对于下面的基团和类别来说，以下括号中的下标进一步将基团/类别定义如下：“(Cn)”定义所述基团/类别中的碳原子的确切数目(n)。“(C≤n)”定义所述基团/类别中可能的碳原子的最大数目(n)，针对所讨论的基团的最小数目尽可能小，例如，应当理解的是，基团“烯基(C≤8)”或类别“烯烃(C≤8)”中碳原子的最小数目是2。例如，“烷氧基(C≤10)”指定那些具有1到10个碳原子(例如，1个、2个、3个、4个、5个、6个、7个、8个、9个或10个或其中可导出的任何范围(例如，3到10个碳原子))的烷氧基。(Cn-n′)定义所述基团中碳原子的最小数目(n)和最大数目(n′)。类似地，“烷基(C2-10)”指定那些具有2到10个碳原子(例如，2个、3个、4个、5个、6个、7个、8个、9个或10个或其中可导出的任何范围，例如，3到10个碳原子))的烷基。
除非下文说明，否则如本文所用的术语“饱和的”意指这样修饰的化合物或基团没有碳-碳双键并且没有碳-碳三键。所述术语并不排除碳-杂原子多重键，例如碳氧双键或碳氮双键。此外，它并不排除可作为酮一烯醇互变异构或亚胺/烯胺互变异构的一部分出现的碳-碳双键。
当在没有“被取代的”修饰语的情况下使用时，术语“脂肪族”意味着这样修饰的化合物/基团是无环的或环状的但非芳香烃的碳氢化合物或基团。在脂肪族化合物/基团中，碳原子可以直链、支链或非芳香环(脂环族)结合在一起。脂肪族化合物/基团可为饱和的，即通过单键结合(烷烃/烷基)，或不饱和的，具有一个或多个双键(烯烃/烯基)或具有一个或多个三键(炔烃/炔基)。当术语“脂肪族”在没有“被取代的”修饰语的情况下使用时，仅存在碳和氢原子。当所述术语在有“被取代的”修饰语的情况下使用时，一个或多个氢原子已被-OH、-F、-Cl、-Br、-I、-NH2、-NO2、-CO2H、-CO2CH3、-CN、-SH、-OCH3、-OCH2CH3、-C(O)CH3、-N(CH3)2、-C(O)NH2、-OC(O)CH3或-S(O)2NH2独立地替代。
当在没有“被取代的”修饰语的情况下使用时，术语“烷基”是指具有碳原子作为连接点、具有直链或支链的、有环的、环状的或无环的结构并且没有除碳和氢以外的原子的单价饱和脂肪族基团。因此，如本文所用的环烷基是烷基亚群。基团-CH3(Me(甲基))、-CH2CH3(Et(乙基))、-CH2CH2CH3(n-Pr(正丙基))、-CH(CH3)2(iso-Pr(异丙基))、-CH(CH2)2(环丙基)、-CH2CH2CH2CH3(n-Bu(正丁基))、-CH(CH3)CH2CH3(仲丁基)、-CH2CH(CH3)2(异丁基)、-C(CH3)3(叔丁基)、-CH2C(CH3)3(新戊基)、环丁基、环戊基、环己基和环己基甲基是烷基基团的非限制性示例。当在没有“被取代的”修饰语的情况下使用时，术语“烷二基”是指具有一个或两个饱和碳原子作为连接点、具有直链或支链的、有环的、环状的或无环的结构、没有碳-碳双键或三键并且没有除碳和氢以外的原子的二价饱和脂肪族基团。基团-CH2-(亚甲基)、-CH2CH2-、-CH2C(CH3)2CH2-、-CH2CH2CH2-和是烷二基的非限制性示例。当在没有“被取代的”修饰语的情况下使用时，术语“亚烷基”是指二价基团＝CRR′，其中R和R′独立地为氢、烷基，或R与R′一起代表具有至少两个碳原子的烷二基。亚烷基基团的非限制性示例包括：＝CH2、＝CH(CH2CH3)和＝C(CH3)2。当这些术语中的任一个在有“被取代的”修饰语的情况下使用时，一个或多个氢原子已被-OH、-F、-Cl、-Br、-I、-NH2、-NO2、-CO2H、-CO2CH3、-CN、-SH、-OCH3、-OCH2CH3、-C(O)CH3、-N(CH3)2、-C(O)NH2、-OC(O)CH3或-S(O)2NH2独立地替代。以下基团是被取代的烷基基团的非限制性示例：-CH2OH、-CH2Cl、-CF3、-CH2CN、-CH2C(O)OH、-CH2C(O)OCH3、-CH2C(O)NH2、-CH2C(O)CH3、-CH2OCH3、-CH2OC(O)CH3、-CH2NH2、-CH2N(CH3)2和-CH2CH2Cl。术语“卤代烷基”是被取代的烷基亚群，其中一或多个氢原子已被卤代基团取代并且不存在除碳、氢和卤素以外的其它原子。基团-CH2Cl是卤代烷基的非限制性示例。“烷烃”是指其中R是烷基的化合物H-R。术语“氟烷基”是被取代的烷基亚群，其中一个或多个氢已被氟基取代并且不存在除碳、氢和氟以外的其它原子。基团-CH2F、-CF3和-CH2CF3是氟烷基的非限制性示例。“烷烃”是指其中R是烷基的化合物H-R。
当在没有“被取代的”修饰语的情况下使用时，术语“烯基”是指具有碳原子作为连接点、具有直链或支链的、有环的、环状的或无环的结构、具有至少一个非芳香碳-碳双键、没有碳-碳三键并且没有除碳和氢以外的原子的单价不饱和脂肪族基团。烯基基团的非限制性示例包括：-CH＝CH2(乙烯基)、-CH＝CHCH3、-CH＝CHCH2CH3、-CH2CH＝CH2(烯丙基)、-CH2CH＝CHCH3和-CH＝CH-C6H5。当在没有“被取代的”修饰语的情况下使用时，术语“烯二基(alkenediyl)”是指具有两个碳原子作为连接点、具有直链或支链的、有环的、环状的或无环的结构、具有至少一个非芳香碳-碳双键、没有碳-碳三键并且没有除碳和氢以外的原子的二价不饱和脂肪族基团。基团-CH＝CH-、-CH＝C(CH3)CH2-、-CH＝CHCH2-和是烯二基的非限制性示例。当这些术语在有“被取代的”修饰语的情况下使用时，一个或多个氢原子已被-OH、-F、-Cl、-Br、-I、-NH2、-NO2、-CO2H、-CO2CH3、-CN、-SH、-OCH3、-OCH2CH3、-C(O)CH3、-N(CH3)2、-C(O)NH2、-OC(O)CH3或-S(O)2NH2独立地替代。基团-CH＝CHF、-CH＝CHCl和-CH＝CHBr是被取代的烯基的非限制性示例。“烯烃”是指其中R是烯基的化合物H-R。
当在没有“被取代的”修饰语的情况下使用时，术语“炔基”是指具有碳原子作为连接点、具有直链或支链的、有环的、环状的或无环的结构、具有至少一个碳-碳三键并且没有除碳和氢以外的原子的单价不饱和脂肪族基团。如本文所用的术语炔基并不排除一个或多个非芳香碳-碳双键的存在。基团-C≡CH、-C≡CCH3和-CH2C≡CCH3是炔基的非限制性示例。当炔基在有“被取代的”修饰语的情况下使用时，一个或多个氢原子已被-OH、-F、-Cl、-Br、-I、-NH2、-NO2、-CO2H、-CO2CH3、-CN、-SH、-OCH3、-OCH2CH3、-C(O)CH3、-N(CH3)2、-C(O)NH2、-OC(O)CH3或-S(O)2NH2独立地替代。“炔烃”是指其中R是炔基的化合物H-R。
当在没有“被取代的”修饰语的情况下使用时，术语“芳基”是指具有芳香碳原子作为连接点的单价不饱和芳香基，所述碳原子形成一个或多个六元芳香环结构的一部分，其中环原子全部为碳，并且其中所述基团全部由碳和氢组成而无其他原子。如果存在多于一个的环，那么所述环可为稠合的或不稠合的。如本文所用的所述术语并不排除连接到第一个芳香环或所存在的任何另外的芳香环的一个或多个烷基(允许碳数限制)的存在。芳基的非限制性示例包括苯基(Ph)、甲基苯基、(二甲基)苯基、-C6H4CH2CH3(乙基苯基)、萘基和从联苯衍生的单价基团。当在没有“被取代的”修饰语的情况下使用时，术语“芳二基(arenediyl)”是指具有两个芳香碳原子作为连接点的二价芳香基团，所述碳原子形成一个或多个六元芳香环结构的一部分，其中环原子全部为碳，并且其中所述单价基团全部由碳和氢组成而无其他原子。如本文所用的所述术语并不排除连接到第一个芳香环或所存在的任何另外的芳香环的一个或多个烷基基团(允许碳数限制)的存在。如果存在多于一个的环，那么所述环可为稠合的或不稠合的。芳二基基团的非限制性示例包括：
当这些术语在有“被取代的”修饰语的情况下使用时，一个或多个氢原子已被-OH、-F、-Cl、-Br、-I、-NH2、-NO2、-CO2H、-CO2CH3、-CN、-SH、-OCH3、-OCH2CH3、-C(O)CH3、-N(CH3)2、-C(O)NH2、-OC(O)CH3或-S(O)2NH2独立地替代。“芳烃”是指其中R是芳基的化合物H-R。
当在没有“被取代的”修饰语的情况下使用时，术语“芳烷基”是指单价基团-烷二基-芳基，其中术语烷二基和芳基各自以与上文所提供的定义一致的方式使用。芳烷基的非限制性示例是：苯基甲基(苄基、Bn)和2-苯基-乙基。当所述术语在有“被取代的”修饰语的情况下使用时，来自烷二基和/或芳基的一个或多个氢原子已被-OH、-F、-Cl、-Br、-I、-NH2、-NO2、-CO2H、-CO2CH3、-CN、-SH、-OCH3、-OCH2CH3、-C(O)CH3、-N(CH3)2、-C(O)NH2、-OC(O)CH3或-S(O)2NH2独立地替代。被取代的芳烷基的非限制性示例是：(3-氯苯基)-甲基和2-氯-2-苯基-乙-1-基。
当在没有“被取代的”修饰语的情况下使用时，术语“杂芳基”是指具有芳香碳原子或氮原子作为连接点的单价芳香基团，所述碳原子或氮原子形成一个或多个芳香环结构的一部分，其中至少一个环原子是氮、氧或硫，并且其中所述杂芳基基团全部由碳、氢、芳香氮、芳香氧和芳香硫组成而无其他原子。如本文所用的所述术语并不排除连接到芳香环或芳香环系统的一个或多个烷基、芳基和/或芳烷基基团(允许碳数限制)的存在。如果存在多于一个的环，那么所述环可为稠合的或不稠合的。杂芳基基团的非限制性示例包括呋喃基、咪唑基、吲哚基、吲唑基(Im)、异唑基、甲基吡啶基、唑基、苯基吡啶基、吡啶基、吡咯基、嘧啶基、吡嗪基、喹啉基、喹唑啉基、喹喔啉基、三嗪基、四唑基、噻唑基、噻吩基和三唑基。当在没有“被取代的”修饰语的情况下使用时，术语“杂芳二基”是指具有两个芳香碳原子、两个芳香氮原子或一个芳香碳原子和一个芳香氮原子作为两个连接点的二价芳香基团，所述原子形成一个或多个芳香环结构的一部分，其中至少一个环原子是氮、氧或硫，并且其中所述二价基团全部由碳、氢、芳香氮、芳香氧和芳香硫组成而无其他原子。如本文所用的所述术语并不排除连接到芳香环或芳香环系统的一个或多个烷基、芳基和/或芳烷基基团(允许碳数限制)的存在。如果存在多于一个的环，那么所述环可为稠合的或不稠合的。杂芳二基的非限制性示例包括：
当这些术语在有“被取代的”修饰语的情况下使用时，一个或多个氢原子已被-OH、-F、-Cl、-Br、-I、-NH2、-NO2、-CO2H、-CO2CH3、-CN、-SH、-OCH3、-OCH2CH3、-C(O)CH3、-N(CH3)2、-C(O)NH2、-OC(O)CH3或-S(O)2NH2独立地替代。
当在没有“被取代的”修饰语的情况下使用时，术语“杂环烷基”是指具有碳原子或氮原子作为连接点的单价非芳香基团，所述碳原子或氮原子形成一个或多个非芳香环结构的一部分，其中至少一个环原子是氮、氧或硫，并且其中所述杂环烷基全部由碳、氢、氮、氧和硫组成而无其他原子。如本文所用的所述术语并不排除连接到环或环系统的一个或多个烷基基团(允许碳数限制)的存在。如果存在多于一个的环，那么所述环可为稠合的或不稠合的。杂环烷基基团的非限制性示例包括氮丙啶基、氮杂环丁基、吡咯烷基、哌啶基、哌嗪基、吗啉基、硫代吗啉基、四氢呋喃基、四氢噻吩基、四氢吡喃基和吡喃基。当术语“杂环烷基”在有“被取代的”修饰语的情况下使用时，一个或多个氢原子已被-OH、-F、-Cl、-Br、-I、-NH2、-NO2、-CO2H、-CO2CH3、-CN、-SH、-OCH3、-OCH2CH3、-C(O)CH3、-N(CH3)2、-C(O)NH2、-OC(O)CH3或-S(O)2NH2独立地替代。
当在没有“被取代的”修饰语的情况下使用时，术语“酰基”是指基团-C(O)R，其中R是氢、烷基、芳基、芳烷基或杂芳基，如上文所定义的那些术语。基团-CHO、-C(O)CH3(乙酰基、Ac)、-C(O)CH2CH3、-C(O)CH2CH2CH3、-C(O)CH(CH3)2、-C(O)CH(CH2)2、-C(O)C6H5、-C(O)C6H4CH3、-C(O)CH2C6H5、-C(O)(咪唑基)是酰基基团的非限制性示例。除基团-C(O)R的氧原子已被硫原子替代(即-C(S)R)外，“硫代酰基”是以类似方式定义的。当这两个术语中的任何一个在有“被取代的”修饰语的情况下使用时，一个或多个氢原子(包括直接连接羰基或硫代羰基的氢原子)已被-OH、-F、-Cl、-Br、-I、-NH2、-NO2、-CO2H、-CO2CH3、-CN、-SH、-OCH3、-OCH2CH3、-C(O)CH3、-N(CH3)2、-C(O)NH2、-OC(O)CH3或-S(O)2NH2独立地替代。基团-C(O)CH2CF3、-CO2H(羧基)、-CO2CH3(甲基羧基)、-CO2CH2CH3、-C(O)NH2(氨基甲酰基)和-CON(CH3)2是被取代的酰基的非限制性示例。
当在没有“被取代的”修饰语的情况下使用时，术语“烷氧基”是指基团-OR，其中R是烷基，如上文所定义的术语。烷氧基的非限制性示例包括：-OCH3(甲氧基)、-OCH2CH3(乙氧基)、-OCH2CH2CH3、-OCH(CH3)2(异丙氧基)、-OCH(CH2)2、-O-环戊基和-O-环己基。当在没有“被取代的”修饰语的情况下使用时，术语“烯氧基”、“炔氧基”、“芳氧基”、“芳烷氧基”、“杂芳氧基”和“酰氧基”是指定义为-OR的基团，其中R分别是烯基、炔基、芳基、芳烷基、杂芳基和酰基。术语“烷氧基二基”是指二价基团-O-烷二基-、-O-烷二基-O-或-烷二基-O-烷二基-。当在没有“被取代的”修饰语的情况下使用时，术语“烷硫基”和“酰硫基”是指基团-SR，其中R分别是烷基和酰基。当这些术语中的任一个在有“被取代的”修饰语的情况下使用时，一个或多个氢原子已被-OH、-F、-Cl、-Br、-I、-NH2、-NO2、-CO2H、-CO2CH3、-CN、-SH、-OCH3、-OCH2CH3、-C(O)CH3、-N(CH3)2、-C(O)NH2、-OC(O)CH3或-S(O)2NH2独立地替代。术语“醇”对应于如上文所定义的烷烃，其中至少一个氢原子已被羟基替代。
当在没有“被取代的”修饰语的情况下使用时，术语“烷基氨基”是指基团-NHR，其中R是烷基，如上文所定义的术语。烷基氨基基团的非限制性示例包括：-NHCH3和-NHCH2CH3。当在没有“被取代的”修饰语的情况下使用时，术语“二烷基氨基”是指基团-NRR′，其中R和R′可为相同或不同的烷基或R与R′可一起代表烷二基。二烷基氨基基团的非限制性示例包括：-N(CH3)2、-N(CH3)(CH2CH3)和N-吡咯烷基。当在没有“被取代的”修饰语的情况下使用时，术语“烷氧基氨基”、“烯基氨基”、“炔基氨基”、“芳基氨基”、“芳烷基氨基”、“杂芳基氨基”和“烷基磺酰基氨基”是指定义为-NHR的基团，其中R分别是烷氧基、烯基、炔基、芳基、芳烷基、杂芳基和烷基磺酰基。芳基氨基基团的非限制性示例是-NHC6H5。当在没有“被取代的”修饰语的情况下使用时，术语“酰胺基”(酰基氨基)是指基团-NHR，其中R是酰基，如上文所定义的术语。酰胺基基团的非限制性示例是-NHC(O)CH3。当在没有“被取代的”修饰语的情况下使用时，术语“烷基亚氨基”是指二价基团＝NR，其中R是烷基，如上文所定义的术语。术语“烷基氨基二基(alkylaminodiyl)”是指二价基团-NH-烷二基-、-NH-烷二基-NH-或-烷二基-NH-烷二基-。当这些术语中的任一个在有“被取代的”修饰语的情况下使用时，一个或多个氢原子已被-OH、-F、-Cl、-Br、-I、-NH2、-NO2、-CO2H、-CO2CH3、-CN、-SH、-OCH3、-OCH2CH3、-C(O)CH3、-N(CH3)2、-C(O)NH2、-OC(O)CH3或-S(O)2NH2独立地替代。基团-NHC(O)OCH3和-NHC(O)NHCH3是被取代的酰胺基的非限制性示例。
当在没有“被取代的”修饰语的情况下使用时，术语“烷基磺酰基”和“烷基亚磺酰基”分别是指基团-S(O)2R和-S(O)R，其中R是烷基，如上文所定义的术语。术语“烯基磺酰基”、“炔基磺酰基”、“芳基磺酰基”、“芳烷基磺酰基”和“杂芳基磺酰基”是以类似方式定义的。当这些术语中的任一个在有“被取代的”修饰语的情况下使用时，一个或多个氢原子已被-OH、-F、-Cl、-Br、-I、-NH2、-NO2、-CO2H、-CO2CH3、-CN、-SH、-OCH3、-OCH2CH3、-C(O)CH3、-N(CH3)2、-C(O)NH2、-OC(O)CH3或-S(O)2NH2独立地替代。
如本文所用的“手性助剂”是指能够影响反应的立体选择性的可去除手性基团。本领域技术人员熟悉所述化合物，并且许多可在市面上购得。
所用的词语“a/an(一)”，当在权利要求书和/或说明书中结合术语“包含”使用时，可意指“一”，但它也与“一或多”、“至少一”和“一或多于一”的含义一致。
在本申请通篇内，术语“约”用于指示值包括用于测定所述值的装置、方法的固有误差变化、或研究个体之间存在的变化。
术语“包含(comprise)”、“具有/含有(have)”和“包括(include)”是开放式连系动词。这些动词中的一个或多个的任何形式或时态，例如“单数(comprises/has/includes)”、“进行时(comprising/having/including)”，也是开放式的。例如，“包含”、“具有/含有”或“包括”一个或多个步骤的任何方法并不限于仅以那一个或多个步骤进行并且还涵盖其它未列出的步骤。
当术语“有效的”在本说明书和/或权利要求书中使用时，所述术语意指足以实现期望的、预期的或想要的结果。
当用作化合物的修饰语时，术语“水合物”意指所述化合物具有小于一个(例如，半水合物)、一个(例如，一水合物)或超过一个(例如，二水合物)与每个化合物分子缔合的水分子，例如呈所述化合物的固体形式。
如本文所用的术语“IC50”是指为所获得最大响应的50％的抑制剂量。这一定量量度指示将给定的生物过程、生物化学过程或化学过程(或过程的组分，即酶、细胞、细胞受体或微生物)抑制一半需要多少的特定药物或其他物质(抑制剂)。
第一化合物的“异构体”是每个分子含有与所述第一化合物相同的组成原子、但那些原子在三维中的构型不同的单独化合物。
如本文所使用的，术语“患者”或“个体”是指活的哺乳动物生物体，例如人类、猴、牛、绵羊、山羊、猪、狗、猫、小鼠、大鼠、豚鼠或其转基因物种。在一些实施方案中，患者还可包括鸟类、爬行动物、两栖动物、鱼类和昆虫动物。在其它实施方案中，患者还可包括动物园动物或作为宠物饲养的动物，例如狗、猫、小鼠、大鼠、豚鼠、蜥蜴、蛇、鸟、海龟、蛙或鱼。鸟类个体的非限制性示例包括鸡、火鸡、鸭、鹅、野鸟(例如鹌鹑和野鸡)和宠物鸟(例如长尾小鹦鹉、澳洲鹦鹉、情侣鹦鹉、鹦鹉和金刚鹦鹉)。海龟、水龟、陆龟、蛇和蜥蜴代表爬行动物个体或患者的非限制性示例。蛙、蟾蜍、蝾螈和火蜥蜴代表两栖动物个体的非限制性示例。在某些实施方案中，鱼类个体由以下非限制性示例代表：淡水鱼，例如罗非鱼、鲑鱼、鲇鱼、鲤鱼、鳗鱼和鳟鱼；海鱼，例如金枪鱼、鳕鱼、鲱鱼、沙丁鱼、鳀鱼、鲽鱼、鳎鱼和鲨鱼；以及软体动物和甲壳动物，例如小虾、对虾、章鱼、鱿鱼、龙虾、蟹、牡蛎、磷虾和贻贝。在某些实施方案中，患者是昆虫，包括蜜蜂的非限制性示例。在某些实施方案中，患者或个体是灵长类动物。人类个体的非限制性示例是成人、青少年、婴儿和胎儿。
如本文所一般使用的，“药学上可接受的”是指那些在合理的医学判断范围内适用于与人类和动物的组织、器官和/或体液接触而无过度的毒性、刺激性、过敏反应或其它问题或并发症、与合理的效益/风险比相称的化合物、材料、组合物和/或剂型。
“药学上可接受的盐”意指本发明化合物的盐，其如上文所定义是药学上可接受的并且具有所需药理学活性。所述盐包括与例如以下的无机酸形成的酸加成盐：盐酸、氢溴酸、硫酸、硝酸、磷酸等；或与例如以下的有机酸形成的酸加成盐：1，2-乙二磺酸、2-羟乙基磺酸、2-萘磺酸、3-苯丙酸、4，4′-亚甲基双(3-羟基-2-烯-1-甲酸)、4-甲基二环[2.2.2]辛-2-烯-1-甲酸、乙酸、脂肪族单羧酸和二羧酸、脂肪族硫酸、芳香族硫酸、苯磺酸、苯甲酸、樟脑磺酸、碳酸、肉桂酸、柠檬酸、环戊丙酸、乙磺酸、富马酸、葡庚糖酸、葡糖酸、谷氨酸、乙醇酸、庚酸、己酸、羟基萘甲酸、乳酸、月桂基硫酸、马来酸、苹果酸、丙二酸、扁桃酸、甲磺酸、粘康酸、邻-(4-羟基苯甲酰基)苯甲酸、草酸、对-氯苯磺酸、苯基取代的链烷酸、丙酸、对-甲苯磺酸、丙酮酸、水杨酸、硬脂酸、琥珀酸、酒石酸、叔丁基乙酸、三甲基乙酸等。药学上可接受的盐还包括可在存在的酸性质子能够与无机碱或有机碱反应时形成的碱加成盐。可接受的无机碱包括氢氧化钠、碳酸钠、氢氧化钾、氢氧化铝和氢氧化钙。可接受的有机碱包括乙醇胺、二乙醇胺、三乙醇胺、氨基丁三醇、N-甲基葡糖胺等。应当认识到，形成本发明的任何盐的一部分的具体阴离子或阳离子并不是至关重要的，只要所述盐总体上是药理学上可接受的即可。药学上可接受的盐和它们的制备与使用方法的另外的示例呈现于《药学盐手册：性质和应用》(Handbook of Pharmaceutical Salts：Properties，and Use(2002))中。
如本文所用的术语“药学上可接受的载体”意指参与运送或输送化学剂的药学上可接受的材料、组合物或媒介物，例如液体或固体的填充剂、稀释剂、赋形剂、溶剂或封装材料。
“预防(Prevention或preventing)”包括：(1)抑制个体或患者中疾病的发作，所述个体或患者可能具有患所述疾病的风险和/或易于患所述疾病，但尚未经历或展示所述疾病的任何或所有病状或症状；和/或(2)减缓个体或患者中疾病的病状或症状的发生，所述个体或患者可能具有患所述疾病的风险和/或易于患所述疾病，但尚未经历或展示所述疾病的任何或所有病状或症状。
“前药”意指可在活体内以代谢方式转化成根据本发明的抑制剂的化合物。前药本身可能对给定的靶蛋白也具有活性，也可能不具有活性。例如，包含羟基的化合物可作为通过在活体内水解转化成羟基化合物的酯施用。可在活体内转化成羟基化合物的合适的酯包括乙酸酯、柠檬酸酯、乳酸酯、磷酸酯、酒石酸酯、丙二酸酯、草酸酯、水杨酸酯、丙酸酯、琥珀酸酯、富马酸酯、马来酸酯、亚甲基-双-β-羟基萘甲酸酯、龙胆酸酯、羟乙磺酸酯、二-对-甲苯酰基酒石酸酯、甲磺酸酯、乙磺酸酯、苯磺酸酯、对-甲苯磺酸酯、环已基氨基磺酸酯、奎尼酸酯(quinate)、氨基酸酯等。类似地，包含胺基的化合物可作为通过在活体内水解转化成胺化合物的酰胺施用。
当指代原子时，术语“饱和的”意指所述原子仅借助单键连接到其它原子。
“立体异构体”或“旋光异构体”是给定化合物的以下异构体：其中相同原子键结到相同的其它原子，但那些原子在三维中的构型不同。“对映异构体”是给定化合物的像左手和右手一样彼此为镜像的立体异构体。“非对映异构体”是给定化合物的并非对映异构体的立体异构体。手性分子含有手性中心，也被称作立构中心(stereocenter)或立体异构源(stereogenic)中心，所述中心是分子中带有使得任何两个基团的互换产生立体异构体的基团的任何点，但不一定为原子。在有机化合物中，手性中心通常为碳原子、磷原子或硫原子，但在有机化合物和无机化合物中，其它原子也可能为立构中心。分子可具有多个立构中心，使其具有许多立体异构体。在立体异构归因于四面体立体异构源中心(例如，四面体碳)的化合物中，假设可能的立体异构体的总数将不超过2n，其中n是四面体立构中心的数量。具有对称性的分子通常具有少于最大可能数目的立体异构体。对映异构体的50∶50混合物被称作外消旋混合物。或者，对映异构体的混合物可以是对映异构体富集的，使得一种对映异构体以大于50％的量存在。通常，可使用本领域内已知的技术来拆分或分离对映异构体和/或非对映异构体。预期对于立体化学尚未界定的任何立构中心或手性轴来说，该立构中心或手性轴可以其R型、S型或作为所述R型和S型的混合物存在，包括外消旋和非外消旋混合物。如本文所用的术语“基本上不含其它立体异构体”意指所述组合物含有≤15％、更优选≤10％、甚至更优选≤5％或最优选≤1％的其他立体异构体。
“有效量”、“治疗有效量”或“药学有效量”意指当对个体或患者施用以治疗疾病时足以实现对所述疾病的所述治疗的量。
“治疗(Treatment或treating)”包括(1)抑制正经历或展示疾病的病状或症状的个体或患者中的所述疾病(例如，阻止所述病状和/或症状的进一步发展)，(2)改善正经历或展示疾病的病状或症状的个体或患者中的所述疾病(例如，逆转所述病状和/或症状)，和/或(3)实现正经历或展示疾病的病状或症状的个体或患者中的所述疾病的任何可测量的减退。在一些实施方案中，对患有本文所述的病理病况之一的患者的治疗包括对所述患者施用一定量的本文所述的化合物，所述量在控制所述病况方面或在将所述患者的生存力延长至超出在缺乏所述治疗时预期的生存力方面是治疗有效的。如本文所用的术语对所述病况的“抑制”还指减缓、阻断、阻止或终止所述病况并且不一定指示所述病况的完全消除。相信延长患者的生存力，除了是就其本身或其本身的显著有益效果外，还指示所述病况在某种程度上受到有益地控制。
本文所用的其它缩写如下：1H-NMR是质子核磁共振，AcOH是乙酸，Ar是氩，ACN或CH3CN是乙腈，CHN分析是碳/氢/氮元素分析，CHNCl分析是碳/氢/氮/氯元素分析，CHNS分析是碳/氢/氮/硫元素分析，DI水是去离子水，DIC是二异丙基碳化二亚胺，DMA是N，N-二甲基乙酰胺，DMAP是4-(N，N-二甲基氨基)吡啶，DMF是N，N-二甲基甲酰胺，EDCl是1-(3-二甲基氨基丙基)-3-乙基碳化二亚胺盐酸盐，EtOAc是乙酸乙酯，EtOH是乙醇，FAB MS是快速原子轰击质谱法，g是克，HOBT是1-羟基苯并三唑水合物，HPLC是高效液相色谱法，IBCF是氯甲酸异丁酯，KSCN是硫氰酸钾，L是升，LiOH是氢氧化锂，MEM是甲氧基乙氧基甲基，MEMCl是甲氧基乙氧基甲基氯，MeOH是甲醇，mg是毫克，MgSO4是硫酸镁，ml是毫升，mL是毫升，MS是质谱法，MTBE是甲基叔丁基醚，N2是氮，NaHCO3是碳酸氢钠，NaOH是氢氧化钠，Na2SO4是硫酸钠，NMM是N-甲基吗啉，NMP是N-甲基吡咯烷酮，NMR是核磁共振，P2O5是五氧化二磷，PTSA是对甲苯磺酸，RPHPLC是反相高效液相色谱法，RT是室温，TFA是三氟乙酸，THF是四氢呋喃，TMS是三甲代甲硅烷基，并且Δ是加热反应混合物。
上述定义取代以引用方式并入本文中的任何参考文献中的任何冲突性定义。然而，不应当认为定义某些术语的事实指示未经定义的任何术语是不确定的。而是，认为使用的所有术语清楚地描述了本发明，使得本领域技术人员可了解所述范围并实施本发明。
II.化合物和合成方法
由本公开提供的化合物可使用下文所概述的以及实施例部分中进一步描述的方法制得。用于制备可用于本发明中的化合物的一般合成顺序概述于方案I-XIV中。在适当的情况下，对有关本发明的各个方面的解释与实际程序两者均进行了描述。以下方案和实施例打算仅用于对本发明进行说明，而并不对其范围或精神进行限制。本领域技术人员将容易理解，方案和实施例中所述的条件和工艺的已知变化形式可用于合成本发明的化合物。所用的起始材料和设备可在市面上购得或通过由本领域技术人员先前报告的并且容易重复的方法制备。
方案I
方案I图解说明可用于制备本发明的式I的被环胍取代的左手侧芳香酸部分的一般方法，所述部分然后可首先偶合到甘氨酰-β-氨基酸酯或甘氨酸酯，之后(在酯水解后)偶合到适当的β-氨基酸酯。简单地说，在方案I中，使适当的氨基苯甲酸(或吡啶酸)与硫氰酸铵在热的稀盐酸中反应，在正常后处理后，得到3-硫脲苯甲酸(或吡啶酸)。起始的氨基苯甲酸(或吡啶酸)可在市面上购得或可通过相应的硝基苯甲酸(或吡啶酸)的还原转化成所述氨基苯甲酸(或吡啶酸)，相应的硝基苯甲酸(或吡啶酸)可在市面上获得或通过适当的苯甲酸(或吡啶酸)的硝化、之后还原成所需的氨基苯甲酸(或吡啶酸)或通过本领域技术人员已知的其它所报道的方法合成。通过在回流下与碘甲烷在乙醇中反应将这一硫脲中间体转化成S-甲基衍生物。使适当的1，3-二氨基-2-取代的丙烷或乙二胺与这一得到的中间体在热DMA(或DMF)中反应。在冷却后，形成沉淀并且通过过滤分离两性离子产物。可通过从稀盐酸冻干获得HCl盐。或者，可通过去除挥发物和浓缩从原始的反应混合物分离所述产物。将得到的产物吸收于水中并且将pH值调节为约5-7，此时两性离子产物沉淀出来并且通过过滤加以分离。可如先前所述或通过简单地溶解于稀盐酸中并且浓缩成固体干燥获得HCl盐。
方案IA
方案IA图解说明可用于制备式I的被简单的胍取代的左手侧芳香酸部分的方法，所述部分然后可首先偶合到甘氨酰-β-氨基酸酯或甘氨酸酯，之后(在酯水解后)偶合到适当的β-氨基酸酯。这还可使用本领域技术人员已知的其它适当的胍基化试剂实现，例如使用吡唑-甲脒.HCl实现。方案IA的方法可使用常规的技术和方法加以修改以制备可用于偶合到β-氨基酸的替代化合物。
简单地说，在方案IA中，向于二烷/水和DIEA中的3，5-二甲基吡唑-1-甲脒硝酸盐中添加适当的3-氨基苯甲酸(或吡啶酸)。在回流下搅拌混合物，将沉淀过滤，洗涤并干燥。然后将沉淀进一步在水中制成浆体，用HCl酸化并浓缩。去除溶剂并将残余物在醚中制成浆体并且干燥，获得适当的3-胍基苯甲酸(或吡啶酸)盐酸盐。
方案IB
方案IB图解说明可用于制备式I的被环脒取代的左手侧芳香酸部分的方法，所述部分然后可首先偶合到甘氨酰-β-氨基酸酯或甘氨酸酯，之后(在酯水解后)偶合到适当的β-氨基酸酯。
总之，方案I、IA和IB图解说明用于合成由针对式I和II中的W和Z所定义的各种取代基组成的左手侧苯甲酸和吡啶酸的一般方法。
方案II
方案II图解说明可用于制备本发明的式I或II的优选四氢嘧啶苯甲酸部分的方法，所述部分然后可首先偶合到甘氨酰-β-氨基酸酯或甘氨酸酯，之后(在酯水解后)偶合到适当的β-氨基酸酯。简单地说，在方案II中，使用Austr.J.Chem.(1981)或Becker等，(1983)(其以引用方式并入本文中)所述的程序将3，5-二羟基苯甲酸转化成3-氨基-5-羟基-苯甲酸。如Organic Process Research&Development，2004(其以引用方式并入本文中)所教导的，使产物与异硫氰酸甲酯在DMF中在室温下反应，在正常后处理后得到3-N′-甲基硫脲-5-羟基苯甲酸。通过与纯的碘甲烷在低于40℃下反应将这一硫脲中间体转化成S-甲基衍生物。使1，3-二氨基-2-羟基丙烷与这一得到的中间体在热的DMA(或DMF)中反应。在冷却后，形成沉淀并且通过过滤分离两性离子产物。可通过从稀盐酸冻干获得HCl盐。或者，可通过去除挥发物和浓缩从原始的反应混合物分离所述产物。将得到的产物吸收于水中并且将pH值调节为约5-7，此时两性离子产物沉淀出来并且通过过滤加以分离。可如先前所述或通过简单地溶解于稀盐酸中并且浓缩成固体和干燥获得HCl盐。
方案III
方案III图解说明用于从适当的苯甲醛开始合成本发明的式I或II(当Z＝H时)的β氨基酸酯部分的一般方法。这一β氨基酸酯然后可偶合到Boc-甘氨酸，之后(在去除Boc保护基团后)偶合到方案I和II中所述的适当的苯甲酸或已偶合到甘氨酸的苯甲酸。简单地说，在方案III中，向异丙醇中的适当的苯甲醛中添加乙酸铵，之后添加丙二酸。在回流下搅拌反应混合物，将得到的沉淀过滤并用热异丙醇洗涤并且干燥，获得所需的外消旋β氨基酸。通过在过量乙醇中在过量HCl气体存在下加热这一酸来合成乙酯。可通过手性色谱分离或通过如Faulconbridge等(2000)或Landis等(2002)中所述的酶法拆分将这些外消旋β氨基酸酯拆分成(R)对映异构体和优选(S)对映异构体，这些文献以引用方式并入本文中。
方案IV
方案IV图解说明用于从适当的苯甲醛开始合成本发明的式I或II(其中Z＝OH)的β氨基酸酯部分的一般方法。这一β氨基酸酯然后可偶合到Boc-甘氨酸，之后(在去除Boc保护基团后)偶合到方案I和II中所述的适当的苯甲酸(优选方法)或已偶合到甘氨酸的苯甲酸。简单地说，使用例如由Vogel′s Textbook of Practical Organic Chemistry，1989教导的经修改的珀金反应(Perkin reaction)容易地从水杨醛制备香豆素，所述文献以引用方式并入本文中。以类似于Rico(1994)(其以引用方式并入本文中)的方式将适当取代的香豆素转化成3-氨基二氢香豆素(3-aminohydrocoumarin)，所述3-氨基二氢香豆素容易在酸性醇中打开，得到3-氨基-3-(3，5-取代的-2-羟基)苯丙酸酯。可通过手性色谱分离(例如，通过外消旋酯的CBZ衍生物，其在反相手性柱上分离，在用例如TMSI脱保护后提供纯净的(S)和(R)β氨基酸酯对映异构体)或通过如Faulconbridge等(2000)或Landis等(2002)中所述的酶法拆分将这些外消旋β氨基酸酯拆分成(R)对映异构体和优选(S)对映异构体，这些文献以引用方式并入本文中。
方案V
方案V图解说明用于从适当的苯甲醛开始合成本发明的式I或II的β氨基酸酯部分的替代性一般方法。这一β氨基酸酯然后可偶合到Boc-甘氨酸，之后(在去除Boc保护基团后)偶合到方案I和II中所述的适当的苯甲酸或已偶合到甘氨酸的苯甲酸。简单地说，通过维悌希反应(Wittig reaction)将适当的苯甲醛转化成相应的肉桂酸酯。使羟胺迈克尔加成(Michael addition)到得到的肉桂酸酯上获得N-羟基化的β-氨基酸酯。用Zn/乙酸还原N-羟基-β-氨基酸酯，在EtOH/HCl中转化成相应的乙酯后，得到呈外消旋体形式的所需β氨基酸酯。如方案IV中，可通过手性色谱分离(例如，通过外消旋酯的CBZ衍生物，其在反相手性柱上分离，在用例如TMSI脱保护后提供纯净的(S)和(R)β氨基酸酯对映异构体)或通过如Faulconbridge等(2000)或Landis等(2002)中所述的酶法拆分将这些外消旋β氨基酸酯拆分成(R)对映异构体和优选(S)对映异构体，这些文献以引用方式并入本文中。
方案VI
方案VI图解说明用于从适当的苯甲醛开始并且使用手性辅基手性合成本发明的式I或II(其中Z是OH)的β氨基酸酯部分的替代性一般方法。这一β氨基酸酯然后可偶合到Boc-甘氨酸，之后(在去除Boc保护基团后)偶合到方案I和II中所述的适当的苯甲酸(特定方法)或已偶合到甘氨酸的苯甲酸。如所描述的，方案VI图解说明使用S-苯基甘氨醇作为手性助剂手性合成所需β氨基酸酯的优选(S)对映异构体((R)异构体的合成是通过利用R-苯基甘氨醇作为替代获得的)。描述所述反应的参考文献包括：Organic Process Research&Development(2004)；Awasthi等(2005)；美国专利6,414,180；美国专利5,840,961，这些文献以引用方式并入本文中。简单地说，首先用MEM氯化物和碳酸钾处理适当的水杨醛，获得MEM保护的水杨醛。然后使MEM醚保护的水杨醛与S-苯基甘氨醇在硫酸镁存在下在THF中反应，获得亚胺。然后向N-甲基吡咯烷中的亚胺中添加雷福尔马茨基(Reformatsky)试剂叔丁基溴乙酸锌(tert-butyl zinc bromoacetate)。通过用四乙酸铅处理来裂解得到的β氨基酸酯的手性辅基。对反应混合物进行碱性后处理，之后在回流下与对甲苯磺酸于乙醇中加热，获得(S)-β氨基酸酯的所需PTSA盐。
方案VII
方案VII图解说明用于制备本发明的式I的乙基-N-甘氨酰-β氨基酸部分的一般方法，所述部分可偶合到方案I和II中所述的式I或II的苯甲酸部分。这一方法描述了将β氨基酸酯偶合到甘氨酸。简单地说，用活化的Boc甘氨酸处理所需的β氨基酸酯(上文方案III-VI中所述的示例方法)。去除Boc保护基团(例如通过用乙醇/HCl处理)获得相应的β氨基酸酯的甘氨酰胺(优选的(S)对映异构体是通过利用上文方案中所述的(S)-β氨基酸酯获得的)。
方案VIII
方案VIII图解说明用于制备本发明的式I或II的乙基-N-甘氨酰-β氨基酸部分(当Z＝OH时)的一般方法，所述部分可偶合到方案I和II中所述的式I的苯甲酸部分。这一方法描述了将β氨基酸酯(其中Z＝OH)偶合到甘氨酸。简单地说，用活化的Boc甘氨酸处理所需的β氨基酸酯(上文方案III-VI中所述的示例方法)。去除Boc保护基团(例如通过用乙醇/HCl处理)获得相应的β氨基酸酯的甘氨酰胺(优选的(S)对映异构体是通过利用上文方案中所述的(S)-β氨基酸酯获得的)。方案VIII是用于合成式I的化合物(当Z＝OH时)的优选方法。
方案IX
方案IX图解说明可用于制备本发明的各种化合物的一般方法。简单地说，使用已知方法将适当的左手侧芳香酸(例如描述于方案I、IA、IB和II中)活化用于偶合。因此，在溶解于例如DMA的合适的溶剂中后，添加等量的NMM。将反应混合物冷却到冰浴温度并且添加IBCF。向混合的酸酐中间体中添加甘氨酰-β-氨基酸酯和NMM。在完成反应后，通过制备型HPLC纯化产物并且通过用例如LiOH的碱在合适的溶剂(二烷/水或乙腈/水)中处理将酯水解成酸。或者，可使用合适的酸，例如TFA。通过制备型HPLC，或通过在pH 5-7下分离两性离子并且通过标准程序转化成所需盐来分离产物。(优选的(S)对映异构体是通过利用上文方案中所述的(S)-β氨基酸酯获得的)。
方案X
方案X图解说明可用于制备本发明的各种化合物的一般方法。简单地说，使用已知方法将3-羟基-5-[(1，4，5，6-四氢-5-羟基-2-嘧啶基)氨基]苯甲酸(例如描述于方案II中)活化用于偶合。因此，在溶解于例如DMA的合适的溶剂中后，添加等量的NMM。将反应混合物冷却到冰浴温度并且添加IBCF。向混合的酸酐中间体中添加甘氨酰-β-氨基酸酯和NMM。在完成反应后，通过制备型HPLC纯化产物并且通过用例如LiOH的碱在合适的溶剂(二烷/水或乙腈/水)中处理将酯水解成酸。或者，可使用合适的酸，例如TFA。通过制备型HPLC，或通过在pH 5-7下分离两性离子并且通过标准程序转化成所需盐来分离产物。(优选的(S)对映异构体是通过利用上文方案中所述的(S)-β氨基酸酯获得的)。
方案XI
方案XI图解说明可用于制备本发明的各种化合物的一般方法。简单地说，使用已知方法将适当的左手侧芳香酸(例如描述于方案I、IA、IB和II中)活化用于偶合。因此，在溶解于例如DMA的合适的溶剂中后，添加等量的NMM。将反应混合物冷却到冰浴温度并且添加IBCF。向混合的酸酐中间体中添加甘氨酸乙酯HCl和NMM。在完成反应后，通过制备型HPLC纯化产物并且通过用例如NaOH的碱在合适的溶剂(水、二烷/水或乙腈/水)中处理、之后酸化将酯水解成酸。然后使用已知方法将这一甘氨酸加合物活化用于偶合。因此，在溶解于例如DMA的合适的溶剂中后，添加等量的NMM。将反应混合物冷却到冰浴温度并且添加IBCF。向混合的酸酐中间体中添加适当的β氨基酸酯盐(例如描述于上文方案III-VI中)和NMM。在完成反应后，通过制备型HPLC纯化产物并且通过用例如LiOH等碱在合适的溶剂(二烷/水或乙腈/水)中处理将酯水解成酸。或者，可使用合适的酸，例如TFA。通过制备型HPLC，或通过在pH 5-7下分离两性离子并且通过标准程序转化成所需盐来分离产物(特定的(S)对映异构体是通过利用上文方案中所述的(S)-β氨基酸酯获得的)。
方案XII
方案XII图解说明用于苯甲醛起始材料的一般合成方法，所述苯甲醛起始材料可能不容易从商业来源获得并且可用于制备本发明的各种化合物，如先前方案中所述。在上面底部两个示例中，已知的芳香氯化方法可代替所描绘的溴化反应，由此获得相应的被氯取代的苯甲醛。所述方法是本领域内众所周知的。参见Kurahashi等(2011)中的支持信息部分；Nomura等(2007)；和March’s Advanced Organic Chemistry：Reactions，Mechanisms，and Structure(2007)，这些文献以引用方式并入本文中。
方案XIII
方案XIII图解说明用于苯甲醛起始材料的一般合成方法，所述苯甲醛起始材料可能不容易从商业来源获得并且可用于制备本发明的各种化合物，如先前方案中所述。具体地说，其图解说明用于苯甲醛类似物的一般方法，所述方法利用适当的醛保护的芳香Br或I试剂，而Br或I可使用交叉偶合或其它芳香Br或I促进的衍生化被置换，所述衍生化为本领域技术人员广泛已知，并且所述方法获得可用于制备本发明的各种化合物的苯甲醛起始材料，如先前方案中所述。当Z是OH时，可根据需要利用本领域技术人员已知的各种保护基团对羟基进行保护以有效地执行所描绘的合成程序。随后可利用已知的脱保护试剂去除保护基团。这些意为是容易被本领域技术人员了解并实施的一般合成方法，且并不意为对范围进行限制。
方案XIIIA
X＝Br，Cl，CF3，其它定义的X
方案XIIIA中所列出的所有参考文献均以引用方式并入本文中。
方案XIIIA进一步图解说明用于苯甲醛起始材料的一般合成方法，所述苯甲醛起始材料可能不容易从商业来源获得并且可用于制备本发明的各种化合物，如先前方案中所述。当Z是OH时，可根据需要利用本领域技术人员已知的各种保护基团对羟基进行保护以有效地执行所描绘的合成程序。随后可利用已知的脱保护试剂去除保护基团。参见例如Greene和Wuts(1999)，所述文献以引用方式并入本文中。此外，如针对通式中的X所定义的三氟甲基或其它适合基团(amenable group)可取代上文方案中描绘为(Cl)Br-的取代基。这些方案意于说明用于生成目标苯甲醛的方法，所述苯甲醛可用于合成本文所要求保护的化合物，但不可以在市面上购得。它们在本质上并不意于具有限制性并且可进一步以本领域技术人员已知的方式加以调适和修改。
方案XIV
方案XIV图解说明用于合成可用于制备如方案I中所述的本发明式I四氢嘧啶苯甲酸部分的二胺中间体的一般合成方法，其中A＝H且B＝F或A与B两者均＝F。
方案XV
方案XV图解说明用于在β氨基酯试剂的合成中引入氰基取代基的方便合成方法，其中X是如通式中所定义的氰基并且Y可为如通式中所定义且在上文方案和后续实施例中表征的多个合适取代基。这一方案图解说明一种用于合成其中X是氰基的化合物的方法并且并不打算在本质上具有限制性并且可进一步以本领域技术人员已知的方式加以调适和修改。
所有上文所述的这些方法均可使用美国专利6,013,651和6,028,223(其以引用方式并入本文)中所教导的原理和技术以及本领域技术人员应用的有机化学的原理和技术加以进一步修改和优化。所述原理和技术在例如March’s Advanced Organic Chemistry：Reactions，Mechanisms，and Structure(2007)中有教导，该文献以引用方式并入本文中。
可通过本文所述的方法制得和用于本文所述的方法中的化合物的非限制性示例列示于表A(下文)中：
表A.β氨基酸衍生物的示例
本发明的方法中所用的化合物可含有一个或多个不对称取代的碳原子或氮原子，并且可以旋光形式或外消旋形式分离。因此，除非明确地指示具体的立体化学或异构形式，否则结构的所有手性形式、非对映异构形式、外消旋形式、差向异构形式以及所有几何异构形式都是想要的。式I的β氨基酸部分的(S)-对映异构体是优选对映异构体。化合物可作为外消旋体和外消旋混合物、单一对映异构体、非对映异构混合物和单个非对映异构体存在。在一些实施方案中，获得单一非对映异构体。本发明的化合物的手性中心可具有S构型或R构型，如由IUPAC 1974 Recommendations所定义。例如，可使用下文实施例部分中所教导的技术以及其变化形式来分离立体异构体的混合物。还包括互变异构形式以及所述异构体和互变异构体的药学上可接受的盐。
构成本发明的化合物的原子意于包括所述原子的所有同位素形式。本发明的化合物包括具有一个或多个已经被同位素丰度改变或富集的原子的那些，特别是具有药学上可接受的同位素的那些或可用于药学研究的那些。如本文所用的同位素包括那些具有相同原子序数但质量数不同的原子。作为一般的示例并且不具有限制性，氢的同位素包括氘和氚，并且碳的同位素包括13C和14C。类似地，预期本发明化合物的一个或多个碳原子可被硅原子替代。此外，预期本发明的化合物的一个或多个氧原子可被一个或多个硫或硒原子替代。
本发明的化合物还可以前药形式存在。因为已知前药可提高众多所需的药物品质(例如，溶解度、生物利用度、制造等)，所以如果需要，本发明的一些方法中所用的化合物可以前药形式递送。因此，本发明涵盖本发明化合物的前药以及递送前药的方法。本发明中所用的化合物的前药可通过以如下的方式修饰存在于所述化合物中的官能团来制备：所述修饰物在常规操作中或在活体内裂解成母体化合物。因此，前药包括例如本文所述的化合物，其中羟基、氨基或羧基键结到当对患者施用所述前药时裂解而分别形成羟基、氨基或羧酸的任何基团。
应当认识到，形成本发明的任何盐的一部分的具体阴离子或阳离子并不重要，只要所述盐总体上是药理学上可接受的即可。药物上可接受的盐和它们的制备与使用方法的另外的示例呈现于Handbook of Pharmaceutical Salts：Properties，and Use(2002)中，该文献以引用方式并入本文中。
应当进一步认识到，本发明的化合物包括已经进一步修饰而包含可在体内转化成氢的取代基的那些。这包括可通过酶学或化学手段(包括但不限于水解和氢解)转化成氢原子的那些基团。示例包括可水解基团，例如酰基、具有氧基羰基的基团、氨基酸残基、肽残基、邻-硝基苯基亚磺酰基、三甲代甲硅烷基、四氢吡喃基、二苯基氧膦基等。酰基的示例包括甲酰基、乙酰基、三氟乙酰基等。具有氧基羰基的基团的示例包括乙氧基羰基、叔丁氧基羰基(-C(O)OC(CH3)3、Boc)、苄氧羰基、对-甲氧基苄氧羰基、乙烯氧基羰基、β-(对-甲苯磺酰基)乙氧基羰基等。合适的氨基酸残基包括但不限于Gly(甘氨酸)、Ala(丙氨酸)、Arg(精氨酸)、Asn(天冬酰胺)、Asp(天冬氨酸)、Cys(半胱氨酸)、Glu(谷氨酸)、His(组氨酸)、Ile(异亮氨酸)、Leu(亮氨酸)、Lys(赖氨酸)、Met(蛋氨酸)、Phe(苯丙氨酸)、Pro(脯氨酸)、Ser(丝氨酸)、Thr(苏氨酸)、Trp(色氨酸)、Tyr(酪氨酸)、Val(缬氨酸)、Nva(正缬氨酸)、Hse(高丝氨酸)、4-Hyp(4-羟基脯氨酸)、5-Hyl(5-羟基赖氨酸)、Orn(乌氨酸)和β-Ala的残基。合适的氨基酸残基的示例还包括受保护基团保护的氨基酸残基。合适的保护基团的示例包括通常用于肽合成中的那些，包括酰基(例如甲酰基和乙酰基)、芳基甲氧基羰基(例如苄氧羰基和对-硝基苄氧羰基)、叔丁氧基羰基(-C(O)OC(CH3)3、Boc)等。合适的肽残基包括包含两个到五个氨基酸残基的肽残基。这些氨基酸或肽的残基可以D-型、L-型或其混合物的立体化学构型存在。另外，氨基酸或肽的残基可具有不对称的碳原子。具有不对称的碳原子的合适的氨基酸残基的示例包括Ala、Leu、Phe、Trp、Nva、Val、Met、Ser、Lys、Thr和Tyr的残基。具有不对称的碳原子的肽残基包括具有一个或多个具有不对称的碳原子的组成性氨基酸残基的肽残基。合适的氨基酸保护基团的示例包括通常用于肽合成的那些，包括酰基(例如甲酰基和乙酰基)、芳基甲氧基羰基(例如苄氧羰基和对-硝基苄氧羰基)、叔丁氧基羰基(-C(O)OC(CH3)3)等。“可在体内转化成氢”的取代基的其它示例包括可还原消除的可氢解基团。合适的可还原消除的可氢解基团的示例包括但不限于芳基磺酰基(例如邻-甲苯磺酰基)；被苯基或苄氧基取代的甲基(例如苄基、三苯甲基和苄氧基甲基)；芳基甲氧基羰基(例如苄氧羰基和邻-甲氧基-苄氧羰基)；和卤代乙氧基羰基(例如β，β，β-三氯乙氧基羰基和β-碘代乙氧基羰基)。
本发明的化合物还可具有以下优点：无论用于本文所述适应症中还是其它适应症中，它们可比本领域内已知的化合物更为有效果，毒性更小，作用时间更长，更强效，产生更少副作用，更容易被吸收，和/或具有更好的药物代谢动力学分布(例如，更高的口服生物利用度和/或更低的廓清率)，和/或相对于本领域内已知的化合物具有其它有用的药理学、物理学或化学性质。
III.生物活性
本发明的另一目的是提供包含上述化合物的药物组合物。所述化合物和组合物可用于抑制或拮抗整合素，因此在另一实施方案中，本发明涉及特别抑制或拮抗α5β1整合素并且另外地抑制或拮抗αvβ6和αvβ8整合素的方法。所述化合物和组合物可用于抑制或拮抗另外的整合素，例如αvβ3、αvβ5和αvβ1(在本文中被定义为相关整合素)。本发明进一步涉及治疗或抑制需要所述治疗的哺乳动物中与此相关的病理病况，例如血管生成，包括肿瘤血管生成；纤维化和纤维化疾病，例如肺纤维化、肾纤维化、心脏纤维化和肝纤维化；硬皮病；瘢痕形成，例如视网膜瘢痕形成、角膜瘢痕形成和皮肤瘢痕形成；视网膜病变，包括糖尿病视网膜病变和黄斑变性；玻璃体视网膜病变，包括早产儿视网膜病变(ROP)和家族性渗出性玻璃体视网膜病变(FEVR)；骨质疏松症；恶性肿瘤的体液性高钙血症；佩吉特氏病；肿瘤转移；实体瘤生长(瘤形成)；关节炎，包括类风湿性关节炎；牙周病；银屑病；平滑肌细胞迁移和再狭窄。另外，所述药剂可用作抗病毒剂和抗微生物剂。此外，所述药剂可通过抑制TGF-β激活而用作免疫系统调节剂，所述抑制由抑制或拮抗目标整合素引起。所述免疫调节影响T调节性细胞和T效应细胞的免疫活性和功能，并且因此可用于治疗免疫相关病状，包括自身免疫疾病，例如多发性硬化，以及治疗肿瘤和感染性病原体。
IV.治疗方法
本发明涉及药学、医学和细胞生物学领域。更具体地，本发明涉及可用作整合素受体拮抗剂的药剂(化合物)，所述药剂作为整合素α5b1的拮抗剂具有特别突出的生物活性，并且另外地作为整合素avb6和avb8的突出的拮抗剂。因此，这些化合物可用于药物组合物以及用于通过抑制或拮抗这些整合素来治疗由所述整合素介导的病况的方法。
本发明的某些化合物可组合α5β1拮抗与对其它结合RGD的整合素的拮抗。所述混合的拮抗剂可尤其用于治疗或预防其中多于一种的整合素促进异常血管生成的疾病。它们还可在第二疾病过程由可同时受抗血管生成性拮抗剂影响的RGD整合素介导时使用，所述第二疾病过程与血管生成相互依赖或独立于血管生成。具体地说，肿瘤决定性地依赖于新血管的形成以维持直径生长超过几毫米。视网膜中的异常血管生成是许多致盲性病症的特征，例如湿性年龄相关性黄斑变性、玻璃体视网膜病变、早产儿视网膜病变和糖尿病视网膜病变。已显示血管生成与肺纤维化和肝纤维化的进展以及与类风湿性关节炎中滑膜血管翳的生长相关。
已表明整合素αvβ3和vβ5与促进血管生成有关(Avraamides等，2008)，使得可预测对它们以及α5β1的拮抗提供了对这一过程的极好阻断。还已知整合素αvβ3在肿瘤细胞转移中以及在与骨质疏松症和一些癌症相关的提高的骨吸收中起作用。本发明的拮抗剂针对以下至少五种已报道在体外结合潜在细胞因子TGFβ复合物的整合素具有不同活性：αvβ1、αvβ3、αvβ5、αvβ6和αvβ8。参见(Asano等，2005；Mu等，2002；Munger等，1999；wipff等，2007；和Munger等，1998)，这些文献以引用方式并入本文中。TGFβ经常与血管生成细胞因子VEGF共表达并且诱导其合成(Ferrari等，2006)。除了具有血管调节活性外，TGFβ还是例如肺、肝、肾和皮肤等许多组织中纤维化的强有力诱导物(Nishimura，2009)。几乎所有TGFβ都是以含有潜在相关肽(LAP)的复合物形式从细胞中分泌的。整合素αvβ3、αvβ5和αvβ6与含于LAP内的RGD基序相互作用，在复合物中产生允许TGFβ与激活促纤维化途径的细胞受体相结合的构象变化。整合素αvβ8也以依赖RGD的方式激活TGFβ，但利用了不同于其它整合素的依赖蛋白酶的机理。
潜在TGFβ普遍存在于组织中，并且以空间和时间受限的方式被整合素激活。因此，肺或肝中的上皮整合素αvβ6的上调可促进局部的胶原蛋白沉积和瘢痕形成，如已在患有特发性肺纤维化(Horan等，2008)或肝纤维化(Popov等，2008)的患者中所观察到的。类似地，αvβ5以及在较低的程度上αvβ3存在于间充质细胞上并且能够激活间充质TGFβ(Wipff等，2007；Scotton等，2009)。整合素αvβ8在上皮细胞、神经细胞、免疫细胞和间充质细胞类型亚群上表达。在皮肤中，伴随伤口愈合过程的TGFβ激活介导基质沉积并且促进瘢痕的形成。本发明的化合物由于它们能够同时抑制若干活化TGFβ的整合素，因此比具有更受限制的抑制谱的任何先前所述的化合物在治疗纤维化方面具有更大的功效潜力。此外，这些具有突出的α5β1效能的化合物，对于特征在于异常的血管生成病理与纤维化病理两者的疾病，具有有益的独特潜力。
TGFβ是形成FoxP3+调节性T细胞(Treg)的重要诱导物(Yoshimura，2011)。因此，抑制TGFβ激活的本发明化合物可降低Treg活性，并且在单独或与现有疗法组合施用时进而缓解例如癌症等疾病状态中的免疫抑制。利用所述化合物减弱Treg活性还具有增强旨在预防或治疗癌症和感染性疾病的疫苗的活性的潜力。TGFβ在IL-6存在下促进幼稚T细胞转化成TH17细胞(Yoshimura，2011)。这些细胞促进多种自身免疫疾病。已报道在树突细胞上缺乏所有αvβ8表达的小鼠具有免除实验性自身免疫性脑炎(一种多发性硬化模型)的接近完全的保护(Melton等，2010)。因此，抑制TGFβ活化的本发明化合物可降低Th17活性，并且在单独或与现有疗法组合施用时可用于预防或治疗自身免疫疾病。
已知对整合素αIIbβ3(还被称为纤维蛋白原受体)的拮抗阻断作为血液凝固过程的一部分的血小板聚集。因此，为了在治疗由整合素α5β1和其它整合素介导的病况或疾病状态时避免出血增加，利用选择性地免除(spare)αIIbβ3的化合物将是有益的。还对αvβ5在视网膜的正常维持中的作用进行了描述(Nandrot等，2006)。因此，在化合物的一些使用中，免除αvβ5抑制可能是所需要的。
如上文所讨论的，整合素是介导与其它细胞和与细胞外基质(ECM)的细胞相互作用的整合性胞质膜蛋白质家族。它们还在细胞信号传导中起作用并且因此调节细胞形状、运动性和细胞周期。整合素不仅进行受体所特有的“由外向内(outside-in)”的信号传导，而且它们还以“由内向外(inside-out)”的模式操作。因此，它们将来自ECM的信息转导给细胞并且将细胞状态展现给外部，从而允许对环境中的变化作出快速且灵活的响应，例如允许通过血小板进行血液凝固。
存在许多类型的整合素，并且许多细胞在它们的表面上具有多种类型。整合素对于所有动物都是至关重要的，并且已在从海绵到哺乳动物的所有被研究的动物中发现。因此，已发现靶向整合素的化合物在不同动物中具有诸多用途，所述动物包括伴侣动物、家畜动物、动物园动物以及野生动物。已在人类中对整合素进行了广泛地研究。整合素与其它蛋白质(例如钙粘素、免疫球蛋白超家族细胞粘附分子、选择素和多配体蛋白聚糖)一起作用以介导细胞-细胞和细胞-基质相互作用以及通讯。整合素结合细胞表面和ECM组分，例如纤连蛋白、玻连蛋白、胶原蛋白和层粘连蛋白。
当释放到细胞膜中时，推测新合成的整合素二聚体将被发现呈通过上述结构研究所揭示的相同的“弯曲”构象。一个学派主张这种弯曲形式防止它们与它们的配体相互作用，尽管弯曲形式可在结合ECM配体的整合素的高分辨率EM结构中占优势。因此，整合素二聚体必须明显地不是‘不弯的’以便使它们起动(prime)并允许它们与ECM结合。在细胞中，起动是通过称为踝蛋白的蛋白质实现的，所述蛋白质结合整合素二聚体的β尾并且改变其构象。此外，踝蛋白蛋白质能够二聚体化并且因此被认为干预导致形成粘着斑的整合素二聚体成簇。最近，Kindlin-1蛋白质和Kindlin-2蛋白质也已被发现与整合素相互作用并且将其激活。
每种整合素都是通过α和β糖蛋白亚单位的非共价杂二聚体化形成的，所述糖蛋白亚单位的组合传递了不同的生物活性，例如细胞附着、迁移、增殖、分化和存活。目前，已在哺乳动物中描述了24种整合素，这些整合素是通过18个α亚单位与8个β亚单位的配对形成的：
表1-整合素
基因 蛋白质 别名 类型
ITGA1 CD49a VLA1 α
ITGA2 CD49b VLA2 α
ITGA3 CD49c VLA3 α
ITGA4 CD49d VLA4 α
ITGA5 CD49e VLA5 α
ITGA6 CD49f VLA6 α
ITGA7 ITGA7 FLJ25220 α
ITGA8 ITGA8 α
ITGA9 ITGA9 RLC α
ITGA10 ITGA10 α
ITGA11 ITGA11 HsT18964 α
ITGAD CD11D FLJ39841 α
ITGAE CD103 HUMINAE α
ITGAL CD11α LFA1A α
ITGAM CD11b MAC-1 α
ITGAV CD51 VNRA、MSK8 α
ITGAW ITGAW α
ITGAX CD11c α
ITGB1 CD29 FNRB、MSK12、MDF2 β
ITGB2 CD18 LFA-1、MAC-1、MF17 β
ITGB3 CD61 GP3A、GPIIIa β
ITGB4 CD104 β
ITGB5 ITGB5 FLJ26658 β
ITGB6 ITGB6 β
基因 蛋白质 别名 类型
ITGB7 ITGB7 β
ITGB8 ITGB8 β
另外，一些亚单位的变体是通过差别剪接形成的；例如，存在β-1亚单位的4种变体。通过这些α亚单位与β亚单位的不同组合，生成了大约24种独特的整合素，尽管该数目根据不同研究而变化。
整合素亚单位横跨质膜并且通常具有约40-70个氨基酸的极短胞质结构域。例外的是β-4亚单位，它具有1088个氨基酸的胞质结构域，是任何膜蛋白质中已知最大的胞质结构域之一。在细胞质膜外部，α链和β链沿约23nm的长度紧靠在一起；每条链的最后5nm N-末端形成细胞外基质(ECM)的配体结合区域。
整合素亚单位的分子量可在90kDa到160kDa范围内变化。β亚单位具有4个富含半胱氨酸的重复序列。α亚单位与β亚单位两者均结合若干二价阳离子。二价阳离子在α亚单位中的作用是未知的，但可使蛋白质的折叠稳定。β亚单位中的阳离子更为有趣：它们直接参与协调整合素所结合的至少一些配体。
存在对整合素分类的各种方式。例如，α链亚群具有向N-末端插入的另外的结构元件(或“结构域”)，即α-A结构域(被这样称谓是因为它的结构类似于在蛋白质冯韦尔布兰德因子(von Willebrand factor)中发现的A-结构域；它还被称为α-I结构域)。带有这种结构域的整合素要么结合胶原蛋白(例如，整合素α1β1和α2β1)，要么充当细胞-细胞粘附分子(β2家族整合素)。这种α-I结构是所述整合素的配体的结合位点。那些不带有这种插入的结构域的整合素在它们的配体结合位点中也具有A-结构域，但这种A-结构域是在β亚单位上发现的。
在两种情况下，A-结构域均带有多达三个二价阳离子结合位点。一个被生理浓度的二价阳离子永久占据，并且带有钙或镁离子，它们是血液中的主要二价阳离子，中值浓度为1.4mM(钙)和0.8mM(镁)。当配体结合时-至少对于那些在它们的相互作用位点中涉及酸性氨基酸的配体来说，另外两个位点被阳离子占据。酸性氨基酸是许多ECM蛋白质的整合素-相互作用位点的特征，例如作为氨基酸序列精氨酸-甘氨酸-天冬氨酸(“RGD”)的一部分。
本发明还涉及特别抑制或拮抗α5β1整合素以及抑制或拮抗αvβ6和αvβ8以及相关整合素的方法。更具体地，本发明涉及抑制与此相关的病理病况的方法，所述病理病况例如血管生成，包括肿瘤血管生成；纤维化和纤维化疾病，例如肺纤维化、肾纤维化、心脏纤维化和肝纤维化；瘢痕形成，例如视网膜瘢痕形成、角膜瘢痕形成和皮肤瘢痕形成；视网膜病变，包括糖尿病视网膜病变和黄斑变性；玻璃体视网膜病变，包括早产儿视网膜病变(ROP)和家族性渗出性玻璃体视网膜病变(FEVR)；骨质疏松症；恶性肿瘤的体液性高钙血症；佩吉特氏病；肿瘤转移；实体瘤生长(瘤形成)；关节炎，包括类风湿性关节炎；牙周病；银屑病；平滑肌细胞迁移和再狭窄；自身免疫疾病，例如多发性硬化；和感染性病原体，所述方法通过施用治疗有效量的上述化合物连同药学上可接受的载体以实现所述抑制。
对于α5b1、avb6、avb8和相关整合素的选择性抑制或拮抗来说，本发明的化合物可以含有常规的药学上可接受的载体、佐剂和媒介物的单位剂量制剂经口、肠胃外或通过吸入喷雾或经局部施用。如本文所用的术语肠胃外包括例如皮下、静脉内、肌内、胸骨内、输注技术或腹膜内。
本发明的化合物是通过任何合适的途径以适于所述途径的药物组合物形式、并且以对于所预期的治疗有效的剂量施用的。本领域普通技术人员使用医学领域所熟悉的临床前方法和临床方法容易确定所述化合物预防或阻止医学病况的进展或治疗所述医学病况所需的治疗有效剂量。
因此，本发明提供通过抑制或拮抗α5b1、avb6、avb8和相关细胞表面整合素受体所介导的治疗病况的方法，所述方法包括施用治疗有效量的选自上述化合物类别的化合物，其中一种或多种化合物是联合一种或多种无毒的药物上可接受的载体和/或稀释剂和/或佐剂(在本文中被统称为“载体”材料)以及如果需要其它活性成分施用的。更具体地，本发明提供用于抑制α5b1、avb6、avb8和相关细胞表面整合素受体的方法。最优选地，本发明提供用于以下目的的方法：抑制血管生成，包括肿瘤血管生成；抑制和治疗纤维化和纤维化疾病，例如肺纤维化和肝纤维化；抑制和治疗瘢痕形成，例如视网膜瘢痕形成、角膜瘢痕形成和皮肤瘢痕形成；抑制和治疗视网膜病变，包括糖尿病视网膜病变和黄斑变性；抑制和治疗玻璃体视网膜病变，包括早产儿视网膜病变(ROP)和家族性渗出性玻璃体视网膜病变(FEVR)；抑制骨吸收；治疗骨质疏松症；治疗恶性肿瘤的体液性高钙血症；治疗佩吉特氏病；抑制肿瘤转移；抑制实体瘤生长(瘤形成)；治疗关节炎，包括类风湿性关节炎；治疗牙周病；治疗银屑病；抑制平滑肌细胞迁移和再狭窄；治疗自身免疫疾病，例如多发性硬化；以及抑制和治疗传染性病原体。
基于本领域技术人员所熟知和了解的标准实验室实验技术和程序，以及与已知有用性的化合物的比较，上述化合物可用于治疗罹患上述病理病况的患者。本领域技术人员将认识到，对最适当的本发明化合物的选择在本领技术人员的能力范围内并且将取决于多种因素，包括对标准测定和动物模型中获得的结果的评估。
如先前所述的，本发明的化合物可用于多种生物领域、预防领域或治疗领域。预期这些化合物可用于预防或治疗其中α5b1、avb6、avb8和相关整合素起作用的任何疾病状态或病况。
V.药物制剂和施用途径
对于对需要所述治疗的动物、尤其是哺乳动物的施用来说，通常将治疗有效量的所述化合物与一种或多种适于所示施用途径的赋形剂组合。预期将本发明的化合物以适于治疗兽类患者以及人类患者的方式配制。在一些实施方案中，兽类患者可为伴侣动物、家畜动物、动物园动物和野生动物。可将所述化合物与乳糖、蔗糖、淀粉、链烷酸的纤维素酯、纤维素烷基酯、滑石粉、硬脂酸、硬脂酸镁、氧化镁、磷酸和硫酸的钠盐和钙盐、明胶、阿拉伯胶、海藻酸钠、聚乙烯吡咯烷酮和/或聚乙烯醇混合，并且制成片剂或封装用于方便施用。或者，可将所述化合物溶解于水、聚乙二醇、丙二醇、乙醇、玉米油、棉籽油、花生油、芝麻油、苄醇、氯化钠和/或各种缓冲剂中。其它赋形剂和施用模式是药物领域内众所周知的并且可适于所治疗的动物的类型。
可对可用于本发明中的药物组合物进行常规的药物操作，例如灭菌，和/或所述药物组合物可含有常规的药学载体和赋形剂，例如防腐剂、稳定剂、润湿剂、乳化剂、缓冲剂等。
本公开的化合物可通过多种方法施用，例如经口或通过注射(例如皮下、静脉内、腹膜内等)施用。取决于施用途径，可以材料涂覆活性化合物以保护所述化合物免于可使所述化合物失活的酸和其它天然条件的作用。它们还可通过对疾病或伤口部位进行连续灌注/输注来施用。
为了通过非肠胃外施用治疗性化合物，可能有必要用防止其失活的材料涂覆所述化合物，或共同施用化合物与所述材料。例如，可在例如脂质体或稀释剂的适当载体中对患者施用治疗性化合物。药物上可接受的稀释剂包括盐水和缓冲水溶液。脂质体包括水包油包水CGF乳液以及常规脂质体。
治疗性化合物还可不经肠、经腹膜内、经脊柱内或经大脑内施用。分散液可在甘油、液体聚乙二醇和其混合物中以及在油中制备。在通常的储存和使用条件下，这些制剂可含有防腐剂以防止微生物的生长。
可适于注射使用的药物组合物包括无菌水溶液(在水溶性的情况下)或分散液和用于当场制备无菌注射溶液或分散液的无菌粉末。在所有情况下，组合物都必须是无菌的并且必须流动达到存在易注射性的程度。其必须在制造和储存条件下稳定并且必须在抵抗例如细菌和真菌等微生物的污染作用的条件下保存。载体可为含有例如水、乙醇、多元醇(例如甘油、丙二醇和液体聚乙二醇等)、其合适的混合物以及植物油的溶剂或分散介质。可例如通过使用例如卵磷脂等包衣、在分散液的情况下通过维持所需的粒度和通过使用表面活性剂来维持适当的流动性。防止微生物的作用可通过各种抗细菌剂和抗真菌剂(例如，对羟基苯甲酸酯、氯丁醇、苯酚、抗坏血酸、硫柳汞(thimerosal)等)来实现。在许多情况下，将优选在组合物中包括等渗剂，例如，糖、氯化钠或多元醇，例如甘露醇和山梨醇。可通过在组合物中包含使吸收延迟的试剂(例如，单硬脂酸铝或明胶)来产生注射组合物的延长吸收。
可通过在适当的溶剂中以所需量并入治疗性化合物与根据需要的上文所列举的一种成分或成分的组合、之后进行过滤灭菌来制备无菌注射溶液。通常，分散液是通过将治疗性化合物并入含有基础分散介质和来自上文所列举的那些的所需其它成分的无菌载体中制备的。在用于制备无菌注射溶液的无菌粉末的情况下，优选的制备方法是真空干燥和冷冻干燥，所述方法从其预先进行无菌过滤的溶液获得活性成分(即，治疗性化合物)加上任一另外期望成分的粉末。
治疗性化合物可利用例如惰性稀释剂或可同化的可食用载体经口施用。还可将治疗性化合物和其它成分包封在硬壳或软壳明胶胶囊中，压制成片剂，或直接并入到个体的饮食中。对于经口治疗性施用来说，治疗化合物可与赋形剂一起并入并且以下列形式使用：可摄取片剂、口含片剂、锭剂、胶囊、酏剂、悬浮液、糖浆、糯米纸囊剂等。当然，治疗性化合物在所述组合物和制剂中的百分比可变化。治疗性化合物在所述治疗上有用的组合物中的量使得将获得合适剂量。
尤其有利地，为了易于施用和剂量均匀，以剂量单位形式配制肠胃外组合物。如本文所用的剂量单位形式是指适合作为单位剂量用于待治疗个体的物理离散单位；每个单位含有经计算与所需药物载体联合产生期望治疗作用的预定量的治疗性化合物。本发明的剂量单位形式的规格取决于且直接依赖于以下因素：(a)治疗性化合物的独特特征和待实现的特定治疗作用，和(b)调配所述治疗性化合物用于治疗患者的所选病况的领域内固有的限制。
治疗性化合物还可被局部施用到皮肤、眼或粘膜。或者，如果需要局部递送到肺，那么治疗性化合物可通过吸入以干燥粉末或气溶胶制剂施用。
以足以治疗与患者病况相关的病况的治疗有效剂量施用活性化合物。例如，可在可预测在治疗人类或另一动物的疾病方面的功效的动物模型系统(例如实施例和附图中所示的模型系统)中评价化合物的功效。
可从在针对多种不同动物的动物研究中确定的有效剂量外推治疗剂的有效剂量范围。通常，可根据以下公式(参见例如Reagan-Shaw等，FASEB J.，22(3)：659-661，2008，其以引用方式并入本文中)来计算人类当量剂量(HED)(mg/kg)：
HED(mg/kg)＝动物剂量(mg/kg)×(动物Km/人类Km)
在转化中使用Km因子获得更精确的HED值，所述HED值是基于体表面积(BSA)而非仅仅基于体重。人类和各种动物的Km值是众所周知的。例如，平均60kg的人类(BSA为1.6m2)的Km是37，而20kg儿童(BSA 0.8m2)将具有25的Km。一些相关动物模型的Km也是众所周知的，包括：小鼠Km为3(假定0.02kg的重量和0.007的BSA)；仓鼠Km为5(假定0.08kg的重量和0.02的BSA)；大鼠Km为6(假定0.15kg的重量和0.025的BSA)和猴Km为12(假定3kg的重量和0.24的BSA)。
治疗性组合物的精确量取决于从业者的判断并且是每个个体所特有的。然而，计算的HED剂量提供了一般指导。影响剂量的其它因素包括患者的身体和临床状态、施用途径、预定的治疗目标以及具体治疗性制剂的效能、稳定性和毒性。
对个体施用的本公开的化合物或包含本公开化合物的组合物的实际剂量量可由身体因素和生理因素来确定，所述身体因素和生理因素例如所治疗动物的类型、年龄、性别、体重、病况的严重程度、所治疗疾病的类型、先前或同时进行的治疗干预、个体的特发病和施用途径。这些因素可由本领域技术人员确定。负责施用的从业者通常将确定组合物中的活性成分的浓度和用于单个个体的适当剂量。如果发生任何并发症，那么所述剂量可由单个医师进行调节。
有效量通常将在从约0.001mg/kg到约1000mg/kg、从约0.01mg/kg到约750mg/kg、从约100mg/kg到约500mg/kg、从约1.0mg/kg到约250mg/kg、从约10.0mg/kg到约150mg/kg变化，每天一次或多次剂量施用，持续一天或数天(当然取决于施用模式和上文所论述的因素)。其它合适的剂量范围包括1mg/天到10000mg/天、100mg/天到10000mg/天、500mg/天到10000mg/天和500mg/天到1000mg/天。在一些特定实施方案中，所述量小于10,000mg/天，范围为750mg/天到9000mg/天。
所述有效量可小于1mg/kg/天，小于500mg/kg/天，小于250mg/kg/天，小于100mg/kg/天，小于50mg/kg/天，小于25mg/kg/天，或小于10mg/kg/天。或者，其可在1mg/kg/天到200mg/kg/天的范围。例如，关于糖尿病患者的治疗，单位剂量可为相比于未治疗个体将血糖降低至少40％的量。在另一实施方案中，单位剂量是将血糖降低到为非糖尿病个体的血糖水平的±10％的水平的量。
在其它非限制性示例中，剂量还可包括每次施用从约1微克/kg/体重、约5微克/kg/体重、约10微克/kg/体重、约50微克/kg/体重、约100微克/kg/体重、约200微克/kg/体重、约350微克/kg/体重、约500微克/kg/体重、约1毫克/kg/体重、约5毫克/kg/体重、约10毫克/kg/体重、约50毫克/kg/体重、约100毫克/kg/体重、约200毫克/kg/体重、约350毫克/kg/体重、约500毫克/kg/体重，到约1000mg/kg/体重或更高，以及其中可导出的任何范围。在可从本文所列出的数字导出的范围的非限制性示例中，可基于上述数字施用约5mg/kg/体重到约100mg/kg/体重、约5微克/kg/体重到约500毫克/kg/体重等的范围。
在某些实施方案中，本公开的药物组合物可包含例如至少约0.1％的本公开的化合物。在其它实施方案中，本公开的化合物可例如占所述单位重量的约2％到约75％或约25％到约60％，以及其中可导出的任何范围。
涵盖单次剂量或多次剂量的药剂。用于递送多次剂量的所需时间间隔可由本领域技术人员只采用常规实验来确定。作为示例，可以约12小时间隔对个体每天施用两次剂量。在一些实施方案中，所述药剂每天施用一次。
所述药剂可按照常规时间表施用。如本文所用的常规时间表是指预定的指定时间段。常规时间表可涵盖相同或长度不同的时间段，只要所述时间表是预定的即可。例如，常规时间表可涉及每天两次、每天一次、每两天一次、每三天一次、每四天一次、每五天一次、每六天一次、每周一次、每月一次或其间任何设定数量的天数或周施用。或者，预定的常规时间表可涉及第一周按每天两次施用，之后数月按每天一次施用等。在其它实施方案中，本发明规定，所述药剂可经口服用并且其定时取决于或不取决于食物摄取。因此，例如，所述药剂可于每个早晨和/或每个夜晚服用，而不管此时个体是已经进食还是将要进食。
VI.组合疗法
除了被用作单一疗法外，本发明的化合物还可用于组合疗法中。有效的组合疗法可利用包含两种药剂的单一组合物或药理学制剂实现，或利用同时施用的两种不同组合物或制剂来实现，其中一种组合物包含本发明化合物，并且另一种组合物包含第二药剂。或者，所述疗法可在另一药剂治疗之前或之后进行，时间间隔在几分钟到几个月的范围。
所述组合疗法的非限制性示例包括本发明的一种或多种化合物与以下的组合：另一种抗炎剂、化学治疗剂、放射疗法、抗抑郁剂、抗精神病剂、抗惊厥剂、情绪稳定剂、抗感染剂、抗高血压剂、降胆固醇剂或其它血脂调节剂、用于促进重量减轻的药剂、抗血栓剂、用于治疗或预防例如心肌梗塞或中风等心血管事件的药剂、抗糖尿病剂、用于减少移植排斥或移植物抗宿主病的药剂、抗关节炎剂、镇痛剂、抗哮喘剂或用于呼吸道疾病的其它治疗、或用于治疗或预防皮肤病症的药剂。本发明的化合物可与被设计成改进患者对癌症的免疫应答的药剂组合，所述药剂包括(但不限于)癌症疫苗。
VII.实施例
包括以下实施例以证实本发明的优选实施方案。本领域技术人员应当了解，以下实施例中所公开的技术代表了本发明人发现的在本发明的实施中良好地发挥作用的技术，因此可被视为构成其优选实施模式。然而，本领域技术人员根据本公开应当了解，可在不脱离本发明精神和范围的情况下对所公开的具体实施方案作出许多改变，并且仍然获得相同或类似的结果。
仪器和一般方法.
在Agilent 1100系统上进行分析型HPLC分析并且在Agilent 1100系列LC/MSD系统上进行LC-MS分析。在连接到配备有Agilent Tech 12m×0.2mm×0.33μm DB-1(交联的聚甲基硅氧烷)柱的Hewlett-Packard 6890气相色谱仪的Hewlett-Packard 5973 CI四极质谱仪上在70eV电离电压下记录化学电离质谱(CI)。在装配有宽带NMR探针的BrukerAvance-III/400MHz波谱仪上记录NMR谱。使用氘化溶剂的信号作为内标。
实施例A
3-羟基-5-((5-羟基-1，4，5，6-四氢嘧啶-2-基)氨基苯甲酸的制备
根据文献程序(参见Organic Process Research&Development，8：571-575，2004，其以引用方式并入本文中)合成3-羟基-5-((5-羟基-1，4，5，6-四氢嘧啶-2-基)氨基苯甲酸。
实施例B
2-(3-羟基-5-((5-羟基-1，4，5，6-四氢嘧啶-2-基)氨基)苯甲酰胺基)乙酸的制备
根据以下程序制备2-(3-羟基-5-((5-羟基-1，4，5，6-四氢嘧啶-2-基)氨基)苯甲酰胺基)乙酸：
3-羟基-5-((5-羟基-1，4，5，6-四氢嘧啶-2-基)氨基苯甲酸与甘氨酸乙酯的偶合：
向3-羟基-5-((5-羟基-1，4，5，6-四氢嘧啶-2-基)氨基苯甲酸(9.013g，35.87mmol)于DMF(50.0mL)与DCM(50.0mL)的1∶1混合物中的悬浮液中添加甘氨酸乙酯盐酸盐(5.02g，35.95mmol)并且在室温下在氮气气氛搅拌该混合物。将纯的N，N’-二异丙基碳化二亚胺(6.75mL，43.60mmol)添加到上述反应混合物中并且将该混合物在室温下搅拌过夜，得到无色悬浮液。粗制
反应混合物按原样用于上述酯的水解。
将上述粗制反应混合物冷却到10℃(冰浴)并且在搅拌下缓慢地添加2.5N NaOH溶液(90.0mL)，将溶液温度保持在低于20℃，得到浅黄色溶液/悬浮液。将反应混合物在室温下搅拌1.5h。在搅拌下将反应混合物用5N HCl酸化到pH 5，得到无色沉淀，并且将该混合物在室温下再搅拌15min并过滤，得到无色固体。将该固体用水(1×25mL)洗涤并且然后用乙腈(1×25mL)洗涤。在真空中干燥该固体，得到无色粉末(9.686g，产率为88％)。
1H NMR(400MHz，D2O)：δ3.37(dd，J＝12.7和3.1Hz，2H)，3.50(dd，J＝12.7Hz和2.8Hz，2H)，4.17(s，2H)，4.37(m，1H)，6.97(t，J＝2.01Hz，1H)，7.17-7.26(m，2H)。样品的1HNMR谱与产物的提出结构一致。
实施例C
5-胍基苯甲酸的制备
根据以下程序制备5-胍基苯甲酸：
步骤1
将化合物1(50g，0.36mol)和异硫氰酸苯甲酰酯(65.5g，0.40mol)于CH3CN(1.0L)中的混合物在室温下搅拌1h。TLC显示没有起始材料剩余。将沉淀过滤并用CH3CN洗涤，干燥，获得呈淡黄色固体形式的化合物2(104g，96％)。
TLC信息：(DCM/MeOH＝10/1)
材料：Rf＝0.1
产物：Rf＝0.2
1H NMR：400MHz DMSOδ12.63(s，1H)，11.64(s，1H)，8.31(s，1H)，8.00-7.98(d，J＝7.06Hz，2H)，7.90-7.83(m，2H)，7.67-7.65(m，1H)，7.57-7.53(m，3H)。
步骤2
在室温下向化合物2(83g，0.28mol)于无水CH3OH(500ml)中的搅拌溶液中缓慢地添加NaOMe(16.44g，0.30mol)。10min内产生澄清溶液，并且将反应混合物搅拌1h。去除溶剂并且将残余物与t-BuOMe研磨，得到淡黄色粉末。将粉末用H2O稀释，酸化到pH＝2-3。将所形成的黄色固体过滤，干燥，获得化合物3(38g，70％)。
TLC信息：(DCM/CH3OH＝20/1+CH3COOH)
材料：Rf＝0.5
产物：Rf＝0.3
1H NMR：400MHz DMSO
δ12.98(s，1H)，9.83(s，1H)，8.02(s，1H)，7.69-7.66(m，2H)，7.45-7.41(m，1H)。
步骤3
在室温下向化合物3(15g，0.076mol)于EtOH(80ml)中的搅拌溶液中缓慢地添加CH3I(11.4g，0.08mol)。将反应混合物加热到回流并且搅拌5h。TLC显示没有起始材料剩余。去除溶剂，获得呈黄色油状物形式的化合物4(14.5g，90％)。
TLC信息：(DCM/CH3OH＝20/1+CH3COOH)
材料：Rf＝0.3
产物：Rf＝0.2
步骤4
将化合物4(14.5g，0.069mol)于NH4OH(100ml)中的混合物加热到回流并搅拌3h。将所形成的固体过滤并干燥。获得呈白色固体形式的5-胍基苯甲酸(实施例C)(5.68g，46％)。
LC/MS(M+H＝180.1)与所需产物一致。
1H NMR：400MHz DMSOδ12.71-12.67(m，1H)，8.16(s，3H)，7.74-7.72(m，2H)，7.40-7.31(m，2H)。
实施例D
3-[(4，5-二氢-Boc-1H-咪唑-2-基)氨基]-苯甲酸的制备
根据以下程序制备3-[(4，5-二氢-Boc-1H-咪唑-2-基)氨基]-苯甲酸：
步骤1
在室温下向化合物1(23.0g，0.094mol)和Et3N(20.0g，0.198mol)的搅拌溶液中添加(Boc)2O(20.5g，0.0942mol)并且将反应混合物搅拌过夜。去除溶剂并且通过快速柱色谱(PE∶EA＝10∶1)纯化残余物，得到呈无色油状物形式的化合物2(20g，98％)。
TLC信息：(PE/EA＝5/1)
材料：Rf＝0.1
产物：Rf＝0.4
1H NMR：WH00398-025-1A 400MHz CDCl3
δ3.84-3.82(m，4H)，2.38(s，3H)，1.50(s，9H)。
步骤2
将化合物2(11.6g，0.054mol)和化合物3(7.0g，0.05mol)于CH3CN/DMF(50ml/20ml)中的溶液在室温下搅拌2d。将所形成的固体过滤并干燥。获得呈白色固体形式的实施例D(7.28g，48％)。
LC/MS(M+H＝306)与所需产物一致。
1H NMR：WH00398-037-1A 400MHz CH3OD
δ7.94-7.87(m，2H)，7.51-7.43(m，2H)，4.12-4.08(m，2H)，3.72-3.67(m，2H)，1.61(s，9H)。
实施例E
3-[(4，5-二氢-1H-咪唑-2-基)氨基]-5-羟基苯甲酸的制备
根据以下程序制备3-[(4，5-二氢-1H-咪唑-2-基)氨基]-5-羟基苯甲酸：
将来自实施例D的化合物2(15.5g，0.072mol)和3-氨基-5-羟基苯甲酸(10g，0.065mol)于CH3CN/DMF(50ml/20ml)中的溶液在室温下搅拌2d。将所形成的固体过滤，干燥。然后通过制备型HPLC纯化该固体，得到以白色固体形式获得的实施例E(2.1g，10％)。
LC/MS(M+H＝222)与所需产物一致。
1H NMR：A000018723 WH00292-035-SLU-DMF-1J DMSO-d6400MHz
δ13.089(s，1H)，10.726(s，1H)，10.251(s，1H)，8.540(s，1H)，7.248-7.227(m，2H)，7.687-6.876(m，1H)，3.677(s，4H)。
实施例F
5-胍基烟酸的制备
根据以下程序制备5-胍基烟酸：
步骤1
将化合物1(40g，0.3mol)和异硫氰酸苯甲酰酯(95g，0.58mol)于CH3CN(2.0L)中的混合物在室温下搅拌12h。TLC显示没有起始材料剩余。将沉淀过滤并用CH3CN洗涤，干燥，获得呈淡黄色固体形式的化合物2(80g，90％)。
TLC信息：(DCM/MeOH＝10/1)
材料：Rf＝0.1
产物：Rf＝0.2
步骤2
在室温下向化合物2(80g，0.27mol)于无水CH3OH(500ml)中的搅拌溶液中缓慢地添加NaOMe(28.5g，0.53mol)。20min内产生澄清溶液，并且将反应混合物搅拌1h。去除溶剂并且将残余物与t-BuOMe研磨，得到淡黄色粉末。将粉末用H2O稀释，酸化到pH＝2-3。将所形成的黄色固体过滤，干燥，获得化合物3(33.7g，65％)。
TLC信息：(DCM/CH3OH＝20/1+CH3COOH)
材料：Rf＝0.5
产物：Rf＝0.3
步骤3
在室温下向化合物3(33.7g，0.17mol)于DMF(200ml)中的搅拌溶液中缓慢地添加CH3I(24.3g，0.17mol)。将反应混合物在RT下搅拌1h。TLC显示没有起始材料剩余。去除溶剂，并且获得呈黄色油状物形式的化合物4(34.3g，95％)。
TLC信息：(DCM/CH3OH＝20/1+CH3COOH)
材料：Rf＝0.3
产物：Rf＝0.2
步骤4
将化合物4(18.8g，0.089mol)于NH4OH(100ml)中的混合物加热到回流并搅拌5h。将所形成的固体过滤并干燥。获得呈白色固体形式的实施例F(5.14g，32％)。
LC/MS(M+H＝181)与所需产物一致。
1H NMR：A000017761WH00398-043-1DMSO-d6400MHz
δ12.602(s，1H)，8.851(s，1H)，8.597(s，1H)，8.322(s，3H)，7.978(s，1H)。
实施例G
5-((5-羟基-1，4，5，6-四氢嘧啶-2-基)氨基烟酸的制备
根据以下程序制备5-((5-羟基-1，4，5，6-四氢嘧啶-2-基)氨基烟酸：
将来自实施例F的化合物4(15.5g，0.074mol)和羟基二氨基丙烷(20g，0.22mol)于DMF(100ml)中的混合物加热到回流并搅拌5h。将所形成的固体过滤并干燥。获得呈白色固体形式的实施例G(5.2g，30％)。
LC/MS(M+H＝237)与所需产物一致。
1H NMR：B000004008wh00398-050-1C DMSO-d6400MHz
δ13.053(s，1H)，9.881(s，2H)，8.783(s，1H)，8.630(s，1H)，7.897(s，1H)，5.492(s，1H)，4.112(s，1H)，3.410(s，2H)，3.228-3.190(m，2H)。
实施例H
(S)-3-(2-氨基-乙酰基氨基)-3-(3-溴-5-叔丁基-苯基)-丙酸乙酯盐酸盐的制备
根据以下程序制备(S)-3-(2-氨基-乙酰基氨基)-3-(3-溴-5-叔丁基-苯基)-丙酸乙酯盐酸盐：
步骤-1：3-溴-5-叔丁基-苯甲醛的制备
在氮气下将1，3-二溴-5-叔丁基苯(50g，0.17mol)溶解于干燥烧瓶中的无水醚(200mL)中。在氮气气氛下将反应混合物冷却到-78℃并搅拌。将n-BuLi于己烷(171.2mL，0.171mol)中的2.46M溶液逐滴添加到上述溶液中，并且在完成n-BuLi添加后将反应混合物在-78℃搅拌30分钟。在-78℃搅拌30分钟后，将反应混合物温热到-30℃。将DMF(16mL，0.2mol)逐滴添加到上述反应混合物中，保持反应混合物在低于-20℃。在添加DMF后，将反应混合物缓慢地温热到0℃(30分钟)并且然后持续搅拌过夜，获得黄橙色溶液。将反应混合物倒入400mL冷却的10％HCl水溶液中并且将混合物搅拌15分钟。将醚层分离，用水(2×250mL)洗涤，经无水Na2SO4干燥，过滤并且在真空中蒸发，得到呈浅黄色粘性液体形式的产物。将粗制产物溶解于二氯甲烷(250mL)中并且使其通过小的硅胶垫(250g)。在真空中蒸发溶剂得到呈浅黄色粘性液体形式的产物(41.2g)。
步骤-2：3-氨基-3-(3-溴-5-叔丁基-苯基)-丙酸的制备
将3-溴-5-叔丁基苯甲醛(41.5g，0.17mol)、丙二酸(21.5g，0.20mol)和乙酸铵(26.6g，0.34mol)于异丙醇(350mL)中的悬浮液在回流下在氮气下加热14h，获得稠的无色固体。将固体热过滤，用热异丙醇(2×100mL)洗涤并且在真空中干燥，得到呈无色固体形式的所需外消旋产物(37.8g)。
步骤-3：3-氨基-3-(3-溴-5-叔丁基-苯基)-丙酸乙酯盐酸盐的制备
将无水乙醇(300ml，用无水HCl气体饱和)添加到3-氨基-3-(3-溴-5-叔丁基苯基)-丙酸(35g，0.12mol)中并且将反应混合物加热到回流保持1.5h，得到浅黄色溶液。在真空中去除溶剂，得到无色固体。用乙醚和己烷(2×100mL)洗涤固体。在倾析掉溶剂层后，在真空中干燥残余物，得到呈奶油固体形式的外消旋氨基酯盐酸盐(30g)。
步骤-4：(S)-3-氨基-3-(3-溴-5-叔丁基-苯基)-丙酸的制备
通过逐滴添加用2.5N NaOH(pH值为约12)碱化3-氨基-3-(3-溴-5-叔丁基苯基)-丙酸乙酯盐酸盐(125g，0.38mol)于水(500mL)中的悬浮液，得到奶油色油性残余物。通过添加50mM KH2PO4溶液将水层的pH值调节为pH＝8.2。将Amano脂肪酶PS(75g)添加到上述反应混合物中并且将反应混合物在室温下搅拌过夜。将反应混合物过滤并且用乙酸乙酯洗涤固体，得到拆分的(S)-酸的无色固体(37g)。
步骤-5：(S)-3-氨基-3-(3-溴-5-叔丁基-苯基)-丙酸乙酯的制备
将无水乙醇(500mL，用无水HCl气体饱和)添加到(S)-3-氨基-3-(3-溴-5-叔丁基苯基)-丙酸(37g，0.12mol)中并且将反应混合物在回流下加热2h，得到无色溶液。在真空中去除溶剂，得到奶黄色泡沫状固体。将固体用乙醚/己烷洗涤并且干燥，得到黄色泡沫状固体(41g)。
步骤-6：(S)-3-(3-溴-5-叔丁基-苯基)-3-(2-叔丁氧基羰基氨基-乙酰基氨基)-丙酸乙酯的制备
在0℃在氮气下向EDCI.HCl(50g，0.25mol)和HOBt(67.5g，0.5mol)于无水DMF(100ml)中的悬浮液中添加Boc-Gly(32.8gm，0.18mol)和氨基酯(41g，0.12mol)并且将反应混合物在RT下搅拌16h。通过TLC监测反应并且在完成反应后，将混合物用冰骤冷，用乙酸乙酯(3×250ml)萃取。将有机层相继用水和盐水洗涤。将有机层经无水硫酸钠干燥并且在真空下浓缩，得到粗制产物。然后通过快速色谱使用碱性氧化铝纯化该粗制产物(用己烷中的50％乙酸乙酯洗脱)，得到呈浅橙色粘性液体形式的纯净产物(28g，46％)。
步骤-7：(S)-3-(2-氨基-乙酰基氨基)-3-(3-溴-5-叔丁基-苯基)-丙酸乙酯盐酸盐的制备
向Boc-酯(28g，0.25mmol)于无水二烷(100ml)中的冰冷溶液中通入无水HCl-气体保持30分钟。然后使反应混合物回流4h。通过TLC监测反应并且在完成反应后，将混合物在真空下浓缩，得到呈灰白色固体形式的纯净产物(24g，98.6％)。
实施例I
(S)-3-(2-氨基-乙酰基氨基)-3-(3-氰基-5-叔丁基-苯基)-丙酸乙酯盐酸盐的制备
根据以下程序制备(S)-3-(2-氨基-乙酰基氨基)-3-(3-氰基-5-叔丁基-苯基)-丙酸乙酯盐酸盐：
步骤-1：(S)-3-(3-溴-5-叔丁基-苯基)-3-(2-叔丁氧基羰基氨基-乙酰基氨基)-丙酸乙酯的制备
向来自实施例H的产物(2gm，5.204mmol)于1，4-二烷(20ml)中的溶液中添加饱和NaHCO3水溶液(2.5ml)并且在RT下搅拌5min。然后在0℃将Boc-酸酐(1.36ml，6.245mmol)添加到其中并且将反应混合物在室温下搅拌2hr。将反应混合物浓缩，溶解于EtOAc(60ml)中并且用水(60ml)洗涤，经Na2SO4干燥，过滤且在减压下浓缩，获得粗制物，通过硅胶(100-200目)柱色谱用10％EtOAc洗脱来纯化该粗制物，获得呈无色液体形式的所需化合物(1.7g)。
步骤-2：(S)-3-(3-氰基-5-叔丁基-苯基)-3-(2-叔丁氧基羰基氨基-乙酰基氨基)-丙酸乙酯的制备
将来自步骤1的产物(250mg，0.515mmol)和Zn(6.7mg，0.103mmol)吸收于DMF(5ml)中并且将得到的悬浮液用氩气脱气10min。依次将Zn(CN)2(60.4mg，0.515mmol)、Pd(OAc)2(11.56mg，0.052mmol)和二-叔丁基-膦基-1，1-联萘(20.52mg，0.052mmol)添加到其中并且进一步用氩气脱气15min。在110℃搅拌3hr后，将反应物质冷却到室温，将2N NH4OH溶液(20mL)添加到其中。将得到的混合物用EtOAc(50ml×2)萃取。将合并的有机层经Na2SO4干燥，蒸发到干燥并且通过硅胶柱色谱纯化，获得所需化合物(100mg)。
步骤-3：(S)-3-(2-氨基-乙酰基氨基)-3-(3-叔丁基-5-氰基-苯基)-丙酸乙酯盐酸盐的制备
将来自步骤2的产物(100mg，0.232mmol)在0℃用4N二烷-HCl(2mL)处理2hr。将反应混合物浓缩并且将残余物与戊烷(2×5mL)研磨，获得呈灰白色粘性固体形式且呈HCl盐形式的所需化合物(150mg)。
实施例J
3-氨基-3-[3-(1-羟基-1-甲基-乙基)-5-三氟甲基-苯基]-丙酸乙酯盐酸盐的制备
根据以下程序制备3-氨基-3-[3-(1-羟基-1-甲基-乙基)-5-三氟甲基-苯基]-丙酸乙酯盐酸盐：
步骤-1：2-(3-溴-5-三氟甲基-苯基)-[1，3]二氧戊环的制备
在迪安-斯达克条件(Dean-stark condition)下将3-溴-5-三氟甲基苯甲醛(10gm，39.523mmol)、乙二醇(6.63ml，118.568mmol)和PTSA.H2O(150mg，0.79mmol)于无水甲苯(60ml)中的混合物加热到回流保持6h。将反应混合物用EtOAc(100ml)稀释并且用水(150ml)和盐水溶液(150ml)洗涤。将有机层经Na2SO4干燥，过滤并且在真空中蒸发，获得11g呈无色液体形式的粗制物，通过柱色谱(100-200目硅胶)纯化该粗制物，用己烷中的5％EtOAc洗脱，获得呈无色液体形式的所需化合物(10g)。
步骤-2：2-(3-三氟甲基-5-[1，3]二氧戊环-2-基-苯基)-丙-2-醇的制备
在-78℃向来自步骤1的化合物(5gm，16.831mmol)于无水乙醚(70mL)中的溶液中逐滴添加n-BuLi(2.17M，16.8mL，48.81mmol)，得到黄色悬浮液。在-78℃将反应混合物搅拌50min。在-78℃逐滴添加丙酮(3.9mL，67.324mmol)并且持续搅拌1hr。在完成反应后，将混合物用饱和NH4Cl溶液(100mL)骤冷。将反应混合物用乙醚(50mL)稀释并且将有机层分离，经Na2SO4干燥，过滤并浓缩，获得粗制浅黄色液体(7gm)。通过硅胶(100-200目)柱色谱、用己烷中的15％EtOAc洗脱来纯化粗制化合物，将收集的流分在减压下浓缩，获得呈无色液体形式的所需化合物(4gm)。
步骤-3：3-(1-羟基-1-甲基-乙基)-5-三氟甲基-苯甲醛的制备
向来自步骤2的化合物(1g，3.62mmol)于丙酮(10mL)中的溶液中添加PTSA.H2O(275mg，1.448mmol)并且将反应混合物在25℃搅拌4hr，得到橙红色溶液。在完成反应后，将混合物浓缩，用EtOAc(30mL)稀释并且用饱和NaHCO3水溶液(30ml)洗涤。将有机层经Na2SO4干燥，过滤并且在减压下浓缩，获得900mg粗制化合物，通过硅胶(100-200目)柱色谱通过用己烷中的10％EtOAc洗脱来纯化该粗制化合物，获得呈浅黄色粘性固体形式的所需化合物(450mg)。
步骤-4：3-氨基-3-[3-(1-羟基-1-甲基-乙基)-5-三氟甲基-苯基]-丙酸乙酯盐酸盐的制备
将来自步骤3的化合物(2.2g，11.891mmol)、丙二酸一乙酯(3.1mL，26.278mmol)和甲酸铵(3.9g，61.95mmol)于乙醇(20mL)中的混合物在50℃加热4hr。在完成反应后，将混合物溶解于DCM(75mL)中并过滤；将滤液在减压下浓缩，获得呈浅黄色液体形式的粗制物(2.5g)。在0℃将获得的粗制物用4N二烷-HCl(10mL)处理10min。将得到的混合物浓缩并且与50％Et2O/戊烷研磨，将由此获得的粗制盐溶解于水(50ml)中并且用Et2O(20mL×2)洗涤，将含水部分用固体NaHCO3碱化并且用EtOAc(50mL×2)萃取。将合并的有机部分经Na2SO4干燥，过滤并且蒸发，获得呈无色液体形式的游离氨基酯(970mg)。将这一化合物进一步在0℃用4N二烷-HCl(5mL)处理15min。将得到的混合物蒸发，与50％Et2O/戊烷研磨并且在真空下干燥，获得呈粘性固体形式且呈外消旋混合物形式的所需化合物(950mg)。
实施例K
(S)-3-氨基-3-(3-氯-5-(1-甲氧基-2-甲基丙-2-基)苯基)丙酸乙酯盐酸盐的制备
根据以下程序制备(S)-3-氨基-3-(3-氯-5-(1-甲氧基-2-甲基丙-2-基)苯基)丙酸乙酯盐酸盐：
步骤1
在氮气下将3，5-二-溴-氯苯(27g，100mmol)溶解于干燥烧瓶中的无水异丙醚(300.0mL)中。在氮气气氛下将反应混合物冷却到-78℃并搅拌。将n-BuLi于己烷(40mL，100mmol)中的2.6M溶液逐滴添加到上述溶液中，并且在完成n-BuLi添加后将反应混合物在-78℃搅拌30min。在-78℃搅拌30min后，将DMF(7.5g，100mmol)逐滴添加到上述反应混合物中，保持反应混合物低于-78℃。向反应混合物中添加80mL NH4Cl并且将反应混合物搅拌15min。将醚层分离，用水(2×250mL)洗涤，经无水NaSO4干燥，过滤并且在真空中蒸发。通过硅胶快速色谱纯化产物，得到所需产物(16g，67％)。
步骤2
在氮气下将来自步骤1的产物(10g，46mmol)与乙烷-1，2-二醇(8.5g，137mmol)的混合物、PTSA(0.18g，0.92mmol)溶解于干燥烧瓶中的无水甲苯(200.0mL)中。然后进行回流、TLC追踪，TLC显示反应完成。添加饱和NaHCO3溶液(100mL)，然后将甲苯层分离，经无水NaSO4干燥，过滤并且在真空中蒸发，得到呈黄色油状物形式的所需产物(14g，定量)。
步骤3
在-20℃在氩气下向二环己胺于甲苯中的溶液(8mL，15mmol)中逐滴添加nBuLi于己烷中的2.5N溶液(6mL，15mmol)。在0℃保持15min后，将异丁酸甲酯(2.1g，13mmol)逐滴添加到反应混合物中，使该混合物温热到25℃并且在25℃搅拌5min。然后，添加来自步骤2的产物(3g，11mmol)、Pd2(dba)3(0.20g，0.22mmol)和P(tBu)3(0.083g，0.22mmol)并且将反应混合物搅拌1h。将反应混合物用Et2O中的1N HCl骤冷以使二环己胺作为HCl盐沉淀。将反应混合物过滤并浓缩。在通过在硅胶上进行快速色谱纯化后获得所需化合物，得到所需产物(2.3g，70％)。
步骤4
向LiAlH4(0.4g，8.8mmol)于THF(10mL)中的溶液中逐滴添加来自步骤3的产物(2.3g，8mmol)溶解于THF(30mL)中的溶液。将反应混合物在25℃搅拌30min。将反应混合物用饱和酒石酸钾钠水溶液骤冷并且通过硅藻土垫过滤。将有机层用盐水洗涤，经Na2SO4干燥，过滤并浓缩。粗制的所需产物(2.1g，粗制物)按原样用于下一反应中。
步骤5
在25℃在氩气下向来自步骤4的粗制产物(2.1g，8mmol)于THF(20mL)中的溶液中添加NaH(0.64g，16mmol)。在25℃搅拌10min后，添加MeI(2.5g，16mmol)并且将溶液在80℃搅拌1h。添加20mL H2O，将混合物用EtOAc萃取。将有机层用水和盐水洗涤，经Na2SO4干燥，过滤并浓缩。粗制的所需产物(2.2g，粗制物)按原样用于下一反应中。
步骤6
在氮气下将来自步骤5的产物(2.2g，8mmol)和PTS(0.3g，1.6mmol)溶解于干燥烧瓶中的无水丙酮(100.0mL)中。然后在RT搅拌，进行TLC追踪，TLC显示反应完成。添加饱和NaHCO3溶液(10mL)，进行EtOAc(100mL×2)萃取，经无水Na2SO4干燥，过滤并且在真空中蒸发，得到所需粗制产物(1.7g，粗制物)。粗制产物按原样用于下一反应中。
步骤7
在回流下加热于无水乙醇(50.0mL)中的来自步骤6的粗制产物(2.2g，8mmol)、丙二酸一乙酯(5.2g，40mmol)和乙酸铵(5.6g，80mmol)7h，得到浅黄色溶液。将反应混合物冷却到室温并且在真空中蒸发溶剂，得到黄色粘性液体。使残余物在饱和NaHCO3水溶液(100mL)与乙酸乙酯(100mL)之间分配，并且取出有机层，经无水硫酸钠干燥，过滤并且在真空中蒸发。通过硅胶快速色谱纯化产物，得到呈外消旋体形式的所需产物(0.4g，15％)。
1H NMR：WH00420-070-01 400Hz CDCl3
δ7.20-7.30(m，3H)，4.35-4.40(m，1H)，4.23-4.30(q，2H)，3.37(s，1H)，3.31(s，1H)，2.26-264(m，2H)，1.30(s，6H)，1.25-1.27(t，3H)
步骤8
向来自步骤7的产物(0.2g，0.59mol)的溶液中添加DCM(10mL)中的2，6-二甲基吡啶(62.7mg，0.59mmol)和Boc2O(0.2g，0.59mol)。将混合物在室温下搅拌10h。向反应混合物中添加1M HCl(15mL)，将水层用DCM(10mL×3)萃取，将有机层用盐水洗涤，然后经Na2SO4干燥并浓缩。通过硅胶快速色谱纯化产物，得到呈黄色固体形式的所需经BOC保护的产物(0.25g，96％)。
步骤9
通过SFC分离来自步骤8的经BOC保护的外消旋产物，得到单个的(S)和(R)BOC对映异构体。
步骤10
重复步骤1到9，获得额外量的每种所需BOC对映异构体，那么：
向上述每种分离的BOC对映异构体(各1.7g)于乙酸乙酯中的溶液中添加HCl/EA(10mL)。1hr后，TLC显示反应完成。在真空中蒸发溶剂，得到1克每种所需对映异构体。通过用Amano脂肪酶PS(对(S)对映异构体进行选择性水解)进行(S)-选择性酶法拆分来分析鉴别所需(S)-对映异构体。
实施例L
(S)-3-氨基-3-(3-氯-5-(4-(甲氧基甲基)四氢-2H-吡喃-4-基)苯基)丙酸乙酯盐酸盐的制备
根据以下程序制备(S)-3-氨基-3-(3-氯-5-(4-(甲氧基甲基)四氢-2H-吡喃-4-基)苯基)丙酸乙酯盐酸盐：
步骤1
在氮气下将3-溴-5-氯苯甲醛(10g，46mmol)和乙烷-1，2-二醇(8.5g，137mmol)的混合物、PTS(0.18g，0.92mmol)溶解于干燥烧瓶中的无水甲苯(200.0mL)中。然后进行回流、TLC追踪，TLC显示反应完成。添加饱和NaHCO3溶液(100mL)。将甲苯层分离，经无水Na2SO4干燥，过滤并且在真空中蒸发，得到呈黄色油状物形式的所需产物(14g，定量)。
步骤2
在-20℃在氩气下向二环己胺于甲苯中的溶液(8mL，15mmol)中逐滴添加n-BuLi于己烷中的2.5N溶液(6mL，15mmol)。在0℃保持15min后，将四氢-2H-吡喃-4-甲酸甲酯(1.8g，13mmol)逐滴添加到反应混合物中，使该混合物温热到25℃并且在25℃搅拌5min。然后，添加来自步骤1的产物(3g，11mmol)、Pd2(dba)3(0.20g，0.22mmol)和P(t-Bu)3(0.083g，0.22mmol)并且将反应混合物搅拌1h。将反应混合物用Et2O中的1N HCl骤冷以使二环己胺作为HCl盐沉淀。将反应混合物过滤并浓缩。在通过在硅胶上进行快速色谱纯化后获得所需化合物，得到所需产物(2.3g，70％)。
步骤3
向LiAlH4(0.4g，8.8mmol)于THF(5mL)中的溶液中逐滴添加来自步骤3的产物(2.6g，8mmol)溶解于THF(20mL)中的溶液。将反应混合物在25℃搅拌30min。将反应混合物用饱和酒石酸钾钠水溶液骤冷并且通过硅藻土垫过滤。将有机层用盐水洗涤，经Na2SO4干燥，过滤并浓缩。粗制的所需产物(3g，粗制物)按原样用于下一反应中。
步骤4
在25℃在氩气下向来自步骤3的粗制产物(19g，63mmol)于THF(10mL)中的溶液中添加NaH。在25℃搅拌10min后，添加MeI并且将溶液在80℃搅拌1h。用EtOAc萃取反应混合物。将有机层用水和盐水洗涤，经Na2SO4干燥，过滤并浓缩。粗制的所需产物(20g，粗制物)按原样用于下一反应中。
步骤5
在氮气下将来自步骤4的粗制产物(20g，63mmol)和PTS(2.3g，12mmol)溶解于干燥烧瓶中的无水丙酮(200.0mL)中并且在RT下搅拌数小时。TLC显示反应完成。添加饱和NaHCO3溶液(50mL)，将混合物用EtOAc(200mL×2)萃取，经无水Na2SO4干燥，过滤并且在真空中蒸发，得到所需产物(17g，定量)。
步骤6
将无水乙醇(50.0mL)中的来自步骤5的产物(17g，63mmol)、丙二酸一乙酯(16g，126mmol)和乙酸铵(24g，315mmol)在回流下加热7h，得到浅黄色溶液。将反应混合物冷却到室温并且在真空中蒸发溶剂，得到黄色粘性液体。使残余物在饱和NaHCO3水溶液(100mL)与乙酸乙酯(100mL)之间分配。将有机层移出，经无水硫酸钠干燥，过滤并且在真空中蒸发。通过硅胶快速色谱纯化产物，得到呈外消旋体形式的所需产物(3.5g，17％)。
步骤7
向来自步骤6的外消旋体产物(3.5g，10mmol)于DCM(10mL)中的溶液中添加2，6-二甲基吡啶(0.7g，10mmol)和Boc2O(1.95g，10mol)。将混合物在室温下搅拌10h。向反应混合物中添加1M HCl(15mL)，将水层用DCM(10mL×3)萃取，将有机层用盐水洗涤，然后经Na2SO4干燥并浓缩。通过硅胶色谱纯化产物，得到呈黄色固体形式的所需经BOC保护的产物(4.3g，96％)。
步骤8
通过SFC分离来自步骤7的经BOC保护的外消旋产物，得到单个的(S)和(R)BOC对映异构体(每种对映异构体约1克)。
步骤9
向来自步骤8的每种经BOC保护的对映异构体1g于乙酸乙酯中的溶液中添加HCl/EA(10mL)。1h后，TLC显示反应完成。在真空中蒸发溶剂，得到约800mg每种所需对映异构体。通过用Amano脂肪酶PS(对(S)对映异构体进行选择性水解)进行(S)-选择性酶法拆分来分析鉴别所需(S)-对映异构体。
实施例M
(S)-3-氨基-3-(3-氯-5-(4-(氟甲基)四氢-2H-吡喃-4-基)苯基)丙酸乙酯盐酸盐的制备
根据以下程序制备(S)-3-氨基-3-(3-氯-5-(4-氟甲基)四氢-2H-吡喃-4-基)苯基)丙酸乙酯盐酸盐：
步骤1
在-60℃在氩气下向来自实施例L步骤3的产物(15g，mmol)于DCM(300mL)中的溶液中添加DAST(24g，150mmol)。在-60℃搅拌1小时后，添加水并且将溶液在20℃搅拌1h。用DCM萃取反应混合物。将有机层用水和盐水洗涤，经Na2SO4干燥，过滤并浓缩。粗制所需产物(12g，粗制物)按原样用于下一反应中。
步骤2
在氮气下将来自步骤1的产物(12g，40mmol)和PTS(2.3g，12mmol)溶解于干燥烧瓶中的无水丙酮(200.0mL)中并且在RT下搅拌数小时。TLC显示反应完成。添加饱和NaHCO3溶液(50mL)，将混合物用EtOAc(200mL×2)萃取，经无水Na2SO4干燥，过滤并且在真空中蒸发，得到所需产物(2.3g，18.7％产率)。
步骤3
将无水乙醇(50.0mL)中的来自步骤2的产物(2.3g，8.9mmol)、丙二酸一乙酯(5.2g，40mmol)和乙酸铵(5.6g，80mmol)在回流下加热7h，得到浅黄色溶液。将反应混合物冷却到室温并且在真空中蒸发溶剂，得到黄色粘性液体。使残余物在饱和NaHCO3水溶液(100mL)与乙酸乙酯(100mL)之间分配。将有机层移出，经无水硫酸钠干燥，过滤并且在真空中蒸发。通过硅胶快速色谱纯化产物，得到所需产物(0.7g)。
步骤4
将来自步骤3的产物(0.7g，2mol)、2，6-二甲基吡啶(0.3g，3mmol)和Boc2O(0.65g，3mol)于DCM(10mL)中的溶液在室温下搅拌10h。向反应混合物中添加1M HCl(15mL)，将水层用DCM(10mL×3)萃取，将有机层用盐水洗涤，然后经Na2SO4干燥并且浓缩。通过硅胶快速色谱纯化产物，得到呈黄色固体形式的所需经BOC保护的外消旋产物(0.3g，33％)。
步骤5
通过SFC分离来自步骤4的经BOC保护的外消旋产物，得到单个的(S)和(R)BOC对映异构体(每种对映异构体约110mg)。
步骤6
向来自步骤5的每种经BOC保护的对映异构体110mg于乙酸乙酯中的溶液中添加HCl/乙酸乙酯(10mL)。1h后，TLC显示反应完成。在真空中蒸发溶剂，得到约75mg每种所需对映异构体(76％)。通过用Amano脂肪酶PS(对(S)对映异构体进行选择性水解)进行(S)-选择性酶法拆分来分析鉴别所需(S)-对映异构体。
实施例N
外消旋-3-氨基-3-(3-氯-5-(1-氰基环丁基)苯基)丙酸乙酯的制备
根据以下程序制备外消旋-3-氨基-3-(3-氯-5-(1-氰基环丁基)苯基)丙酸乙酯：
步骤1
在20℃向化合物1(100g，1mol)于MeOH(300mL)中的溶液中逐滴添加浓H2SO4(6mL)。将混合物在70℃搅拌8h。将混合物在真空中在30℃浓缩，然后添加水，用DCM萃取，在真空下在30℃浓缩，得到油状物。将油状物蒸馏，得到产物化合物2(48g，42％)。
步骤2
在-20℃在氩气下向二环己胺于甲苯中的溶液(8mL，15mmol)中逐滴添加n-BuLi于己烷中的2.5N溶液(6mL，15mmol)。在0℃保持15min后，将化合物2(1.5g，13mmol)逐滴添加到反应混合物中，使该混合物温热到25℃并且在25℃搅拌15min。然后，添加化合物3(参见实施例K步骤2)(3g，11mmol)、Pd2(dba)3(0.20g，0.22mmol)和P(t-Bu)3(0.083g，0.22mmol)并且将反应混合物搅拌1h。将反应混合物用Et2O中的1N HCl骤冷以使二环己胺作为HCl盐沉淀。将反应混合物过滤并浓缩。在通过在硅胶上进行快速色谱纯化后获得标题化合物，得到产物化合物4(2g，53％)。
步骤3
向化合物4(2g，6mmol)于MeOH(20mL)中的溶液中添加NaOH水溶液(1N，30mL)，将混合物在80℃搅拌3h。将该溶液浓缩。然后，添加乙酸乙酯和H2O，分离水相。添加1N HCl以调节到pH 2-4。添加乙酸乙酯。将有机相分离，干燥并浓缩，得到产物化合物5(1.2g，70％)。
步骤4
将化合物5(1.2g，4.2mmol)和Et3N(0.76g，7.6mmol)溶解于无水THF(20mL)中。在0℃在干燥烧瓶中在氮气下逐滴添加ClCOOt-Bu(0.78g，5.8mmol)。将混合物在RT下搅拌2小时。TLC显示反应完成。然后添加NH3/THF(100mL)，并且将混合物在RT下搅拌2小时。将混合物浓缩，得到产物化合物6(1.8g，定量)。
步骤5
将化合物6(1.2g，4.2mmol)和Et3N(0.76g，7.6mmol)溶解于无水DCM(20mL)中。在0℃在干燥烧瓶中在氮气下逐滴添加TFAA(1.6g，7.6mmol)。然后，将混合物在RT下搅拌4小时。TLC显示反应完成。将混合物用1NHCl(30mL×2)洗涤，经无水Na2SO4干燥，过滤并且在真空中蒸发，得到化合物7(1.2g，定量)。
步骤6
在氮气下将化合物7(1.2g，4.5mmol)和PTSA(0.2g，1mmol)溶解于干燥烧瓶中的无水丙酮(20mL)中并且在RT下搅拌14小时。TLC显示反应完成。添加饱和NaHCO3(50mL)，将混合物用EtOAc(200mL×2)萃取，经无水NaSO4干燥，过滤并且在真空中蒸发，得到产物。在通过在硅胶上进行快速色谱纯化后获得标题化合物，得到产物化合物8(0.6g，61％)。
步骤7
将无水乙醇(100.0mL)中的化合物8(7g，32mmol)、丙二酸一乙酯(6.9g，52mmol)和乙酸铵(10g，130mmol)在80℃加热7h，得到浅黄色溶液。将反应混合物冷却到室温并且在真空中蒸发溶剂，得到黄色粘性液体。使残余物在饱和NaHCO3水溶液(100mL)与乙酸乙酯(100mL)之间分配；取出有机层，经无水硫酸钠干燥，过滤并且在真空中蒸发。通过硅胶快速色谱纯化产物，得到所需产物(2.1g，22％)。
实施例O
外消旋-3-氨基-3-(3-氯-5-(4-氰基四氢-2H-吡喃-4-基)苯基)丙酸乙酯的制备
根据以下程序制备外消旋-3-氨基-3-(3-氯-5-(4-氰基四氢-2H-吡喃-4-基)苯基)丙酸乙酯：
步骤1
在-20℃在氩气下向二环己胺于甲苯(8mL，15mmol)中的溶液中逐滴添加n-BuLi于己烷中的2.5N溶液(6mL，15mmol)。在0℃保持15min后，将四氢-2H-吡喃-4-甲酸甲酯(1.8g，13mmol)逐滴添加到反应混合物中，然后使该混合物温热到25℃并且然后在25℃搅拌5min。然后，添加化合物3(参见实施例K步骤2(3g，11mmol)、Pd2(dba)3(0.20g，0.22mmol)和P(t-Bu)3(0.083g，0.22mmol)并且将反应混合物搅拌1h。将反应混合物用Et2O中的1N HCl骤冷以使二环己胺作为HCl盐沉淀。将反应混合物过滤并浓缩。在通过在硅胶上进行快速色谱纯化后获得所需化合物，得到产物化合物4(2g，56％)。
步骤2
向化合物4(2g，6mmol)于MeOH(20mL)中的溶液中添加NaOH水溶液(1N，30mL)。将混合物在80℃搅拌3h。将溶液浓缩。然后，添加乙酸乙酯和H2O，分离水相。添加1N HCl以调节到pH 2-4。添加乙酸乙酯。将有机相分离，干燥并浓缩，得到产物化合物5(1.2g，63％)。
步骤3
将化合物5(1.2g，3.8mmol)和Et3N(0.76g，7.6mmol)溶解于无水THF(20mL)中。在0℃在干燥烧瓶中在氮气下逐滴添加ClCOOt-Bu(0.78g，5.8mmol)。将混合物在RT下搅拌2小时。TLC显示反应完成。然后添加NH3/THF(100mL)，并且将混合物在RT下搅拌2小时。将混合物浓缩，得到产物化合物6(1.8g，定量)。
步骤4
将化合物6(1.2g，3.8mmol)和Et3N(0.76g，7.6mmol)溶解于无水DCM(20mL)中。在0℃在干燥烧瓶中在氮气下逐滴添加TFAA(1.6g，7.6mmol)。然后，将混合物在RT下搅拌4小时。TLC显示反应完成。将混合物用1N HCl(30mL×2)洗涤，经无水Na2SO4干燥，过滤并且在真空中蒸发，得到化合物7(1.2g，定量)。
步骤5
在氮气下将化合物7(1.2g，4mmol)和PTSA(0.2g，1mmol)溶解于干燥烧瓶中的无水丙酮(20mL)中并且在RT下搅拌14小时。TLC显示反应完成。添加饱和NaHCO3(50mL)，将混合物用EtOAc(200mL×2)萃取，经无水NaSO4干燥，过滤并且在真空中蒸发，得到产物。在通过在硅胶上进行快速色谱纯化后获得标题化合物，得到产物化合物8(0.6g，61％)。
步骤6
将无水乙醇(100.0mL)中的化合物8(7g，28mmol)、丙二酸一乙酯(6.9g，52mmol)和乙酸铵(10g，130mmol)在80℃加热7h，得到浅黄色溶液。将反应混合物冷却到室温并且在真空中蒸发溶剂，得到黄色粘性液体。使残余物在饱和NaHCO3水溶液(100mL)与乙酸乙酯(100mL)之间分配；取出有机层，经无水硫酸钠干燥，过滤并且在真空中蒸发。通过硅胶快速色谱纯化产物，得到所需产物(2.1g，22％)。
实施例P
外消旋-3-氨基-3-(3-氯-5-(1，1，1-三氟-2-羟基丙-2-基)苯基)丙酸乙酯的制备
根据以下程序制备外消旋-3-氨基-3-(3-氯-5-(1，1，1-三氟-2-羟基丙-2-基)苯基)丙酸乙酯：
步骤1
在氮气下将化合物1(90g，0.333mol)溶解于干燥烧瓶中的无水异丙醚(500mL)中。在氮气气氛下将反应混合物冷却到-78℃并搅拌。将n-BuLi于己烷(133.3mL，0.333mol)中的2.5M溶液逐滴添加到上述溶液中，并且在完成n-BuLi添加后将反应混合物在-78℃搅拌30min。在-78℃搅拌30min后，将无水DMF(24.3g，0.333mol)逐滴添加到上述反应混合物中，保持该反应混合物在低于-60℃。在无水DMF的添加完成后，将反应混合物在-70℃搅拌(30min)，然后将反应混合物倒入400mL NH4Cl水溶液中并且将反应混合物搅拌15min。将异丙醚分离，经无水MgSO4干燥，过滤并且在真空中蒸发，得到呈白色固体形式的化合物2(43g，58％)。
步骤2
在氮气下将化合物2(10g，46mmol)、乙烷-1，2-二醇(8.5g，137mmol)和PTSA(0.18g，0.92mmol)溶解于干燥烧瓶中的无水甲苯(200.0mL)中。在回流下搅拌反应直到TLC显示反应完成。添加饱和NaHCO3(100mL)，将甲苯层分离，经无水NaSO4干燥，过滤并且在真空中蒸发，得到呈黄色油状物形式的产物化合物3(14g，定量)。
步骤3
在氮气下将化合物3(4.3g，16.2mmol)溶解于干燥烧瓶中的无水异丙醚(50.0mL)中。在氮气气氛下将反应混合物冷却到-78℃并搅拌。将t-BuLi于己烷中的1.3M溶液(12.5mL，16.2mmol)逐滴添加到上述溶液中，并且在完成n-BuLi添加后将反应混合物在-78℃搅拌30min。在-78℃搅拌30min后，将反应混合物温热到-30℃。将1，1，1-三氟丙酮(2.2g，20.0mmol)逐滴添加到上述反应混合物，保持反应混合物在低于-30℃。在添加完成后，将反应混合物缓慢地温热到-30℃(30min)并且然后在室温下搅拌。将反应混合物倒入40mLNH4Cl水溶液中并且将反应混合物搅拌15min。将异丙醚分离，经无水MgSO4干燥，过滤并且在真空中蒸发，得到呈浅黄色粘性液体形式的化合物4(4.0g，粗制物)。
步骤4
在氮气下将化合物4(4.0g，14mmol)和PTSA(0.5g，2.8mmol)溶解于干燥烧瓶中的无水丙酮(100.0mL)中。在R.T.下搅拌反应直到TLC显示反应完成。添加饱和NaHCO3溶液(100mL)并且将其用乙酸乙酯(100mL×2)萃取，经无水NaSO4干燥，过滤并且在真空中蒸发，得到产物化合物5(3.2g，粗制物)。
步骤5
在氮气下在70℃加热化合物5(22g，0.087mol)、丙二酸一乙酯(35.1g，0.266mmol)和乙酸铵(33.5g，0.435mol)于EtOH(50mL)中的溶液。TLC显示反应完成。添加饱和NaHCO3(100mL)，用乙酸乙酯(100mL×2)萃取，并且经无水NaSO4干燥，过滤并且在真空中蒸发。通过硅胶快速色谱纯化产物，得到所需产物化合物6(3.7g，12.5％)。
实施例Q
外消旋-3-氨基-3-(3-氯-5-(1，1，1-三氟-2-甲基丙-2-基)苯基)丙酸乙酯的制备
根据以下程序制备外消旋-3-氨基-3-(3-氯-5-(1，1，1-三氟-2-甲基丙-2-基)苯基)丙酸乙酯：
步骤1
在氮气下将化合物1(30g，100mmol)溶解于干燥烧瓶中的无水i-Pr2O(300.0mL)中。在氮气气氛下将反应混合物冷却到-78℃并搅拌。将n-BuLi于己烷中的2.5M溶液(40mL，100mmol)逐滴添加到上述溶液中，并且在完成n-BuLi添加后将反应混合物在-78℃搅拌30min。将N-甲氧基-N-甲基乙酰胺(12g，120.0mmol)添加到上述反应混合物中，同时保持反应混合物在低于-78℃。在完成N-甲氧基-N-甲基乙酰胺的添加后，将反应混合物缓慢地温热到室温且保持30min。将反应混合物倒入40mL NH4Cl水溶液中并且将反应混合物搅拌15min。将有机相分离，经无水MgSO4干燥，过滤并且在真空中蒸发，得到呈浅黄色粘性液体形式的化合物2(25g，粗制物)。
步骤2
在0℃向化合物2(25g，100mmol)和TMSCF3(14.2g，100mmol)于THF(200mL)中的混合物中添加TBAF(0.25g，1mmol)。将混合物在0℃搅拌1h。将溶液浓缩。然后，添加MeOH(200mL)和KF(10g)。将混合物在RT搅拌3h。将混合物浓缩。添加乙酸乙酯和H2O。将有机相分离，干燥并浓缩，得到产物化合物3(25g，粗制物)。
步骤3
在氮气下将化合物3(50g，0.167mol)与TEA(50g，0.5mol)的混合物溶解于干燥烧瓶中的DCM(500.0mL)中。在氮气气氛下将反应混合物冷却到-0℃并搅拌。将MsCl(22.8g，0.2mol)逐滴添加到上述溶液中并且在完成反应后将反应混合物在20℃搅拌3h。将反应混合物用DCM萃取，用水洗涤。将有机相分离，经无水MgSO4干燥，过滤并且在真空中蒸发，得到呈液体形式的化合物4(64g，粗制物)。
步骤4
在氮气下将化合物4(30g，0.079mol)溶解于干燥烧瓶中的无水DCM(300.0mL)中。在氮气气氛下将反应混合物冷却到-78℃并搅拌。将AlMe3于甲苯(80mL，0.16mmol)中的2.0M溶液逐滴添加到上述溶液中并且将反应混合物在25℃搅拌8h。将反应混合物倒入1LNH4Cl水溶液中并且将反应混合物搅拌15min。将有机相分离，经无水MgSO4干燥，并且通过硅胶柱纯化，得到呈液体形式的化合物5(20g，粗制物)。
步骤5
在氮气下将化合物5(10g，30mmol)溶解于干燥烧瓶中的无水i-Pr2O(100.0mL)中。在氮气气氛下将反应混合物冷却到-78℃并搅拌。将n-BuLi于己烷中的2.5M溶液(42mL，60mmol)逐滴添加到上述溶液中，并且在完成n-BuLi添加后将反应混合物在-78℃搅拌30min。将DMF(2.8g，36mmol)添加到上述反应混合物中，保持反应混合物在低于-78℃。在完成DMF的添加后，将反应混合物缓慢地温热到室温且保持30min。将反应混合物倒入40mLNH4Cl水溶液中并且将反应混合物搅拌15min。将有机相分离，经无水MgSO4干燥，过滤并且在真空中蒸发，得到呈液体形式的化合物6(10g，粗制物)。
步骤6
将无水乙醇(200.0mL)中的化合物6(8g，32mmol)、丙二酸一乙酯(9.2g，70mmol)和乙酸铵(14g，181mmol)在80℃加热7h。将反应混合物冷却到室温并且在真空中蒸发溶剂，得到黄色粘性液体。使残余物在饱和NaHCO3水溶液(100mL)与乙酸乙酯(100mL)之间分配；取出有机层，经无水硫酸钠干燥，过滤并且在真空中蒸发。通过硅胶快速色谱纯化产物，得到所需产物(1.4g，13％)。
实施例R
外消旋-3-氨基-3-(3-(1，1，1-三氟-2-羟基丙-2-基)-5-(三氟甲基)苯基)丙酸乙酯的制备
根据以下程序制备外消旋-3-氨基-3-(3-(1，1，1-三氟-2-羟基丙-2-基)-5-(三氟甲基)苯基)丙酸乙酯：
步骤1
在氮气下将化合物1(30g，100mmol)溶解于干燥烧瓶中的无水i-Pr2O(300.0mL)中。在氮气气氛下将反应混合物冷却到-78℃并搅拌。将n-BuLi于己烷中的2.5M溶液(40mL，100mmol)逐滴添加到上述溶液中，并且在完成n-BuLi添加后将反应混合物在-78℃搅拌30min。将N-甲氧基-N-甲基乙酰胺(12g，120.0mmol)添加到上述反应混合物中，同时保持反应混合物在低于-78℃。在完成N-甲氧基-N-甲基乙酰胺的添加后，将反应混合物缓慢地温热到室温且保持30min。将反应混合物倒入40mL NH4Cl水溶液中并且将反应混合物搅拌15min。将有机相分离，经无水MgSO4干燥，过滤并且在真空中蒸发，得到呈浅黄色粘性液体形式的化合物2(25g，粗制物)。
步骤2
在0℃向化合物2(25g，94mmol)和TMSCF3(14.2g，100mmol)于THF(200mL)中的混合物中添加TBAF(0.25g，1mmol)。将混合物在0℃搅拌1h。将溶液浓缩。然后，添加MeOH(200mL)和KF(10g)，并且将混合物在RT下搅拌3h。将混合物浓缩。添加乙酸乙酯和H2O。将有机相分离，干燥并浓缩，得到产物化合物3(25g，粗制物)。
步骤3
在氮气下将化合物3(10g，30mmol)溶解于干燥烧瓶中的无水i-Pr2O(100.0mL)中。在氮气气氛下将反应混合物冷却到-78℃并搅拌。将n-BuLi于己烷中的2.5M溶液(42mL，60mmol)逐滴添加到上述溶液中，并且在完成n-BuLi添加后将反应混合物在-78℃搅拌30min。将DMF(2.8g，36mmol)添加到上述反应混合物中，保持反应混合物在低于-78℃。在完成DMF的添加后，将反应混合物缓慢地温热到室温且保持30min。将反应混合物倒入40mLNH4Cl水溶液中并且将反应混合物搅拌15min。将有机相分离，经无水MgSO4干燥，过滤并且在真空中蒸发，得到呈液体形式的化合物4(10g，粗制物)。
步骤4
将无水乙醇(200.0mL)中的化合物4(10g，35mmol)、丙二酸一乙酯(9.2g，70mmol)和乙酸铵(14g，181mmol)在80℃加热7h。将反应混合物冷却到室温并且在真空中蒸发溶剂，得到黄色粘性液体。使残余物在饱和NaHCO3水溶液(100mL)与乙酸乙酯(100mL)之间分配；取出有机层，经无水硫酸钠干燥，过滤并且在真空中蒸发。通过硅胶快速色谱纯化产物，得到所需产物(2.8g，21％)。
实施例S
外消旋-3-氨基-3-(3-溴-5-(1-(二氟甲基)环丙基)苯基)丙酸乙酯的制备
根据以下程序制备外消旋-3-氨基-3-(3-溴-5-(1-(二氟甲基)环丙基)苯基)丙酸乙酯：
步骤1
在氮气下将1，3-二溴-苄醇(1)(20g，75.2mmol)溶解于干燥烧瓶中的无水DCM(200mL)中。在氮气气氛下将反应混合物冷却到0℃并搅拌。将DIPEA(25.8mL，150.4mmol)逐滴添加到上述溶液中，在0℃搅拌10分钟后，将甲磺酰氯(8.7mL，112.8mmol)逐滴添加到上述反应混合物中。最后，将反应混合物在RT下搅拌2hr。将反应混合物用DCM稀释，依次用水(100mL)、NaHCO3溶液和盐水洗涤，经无水Na2SO4干燥，过滤并且蒸发到干燥，得到21gm呈棕色液体形式的粗制产物(2)，将所述粗制产物按原样转入下一步骤。
步骤2
将1，3-二溴-5-氯甲基-苯(2)(21.0g，73.9mmol)、KCN(24.1g，369.7mmol)和18-冠-6(18-Crown-6)(1.95g，7.40mmol)于乙腈(250mL)中的悬浮液在rt下搅拌过夜。将反应混合物在减压下浓缩。将得到的残余物吸收于水中并且用DCM(3×150mL)萃取，将有机层经硫酸钠干燥，在减压下浓缩，获得25gm粗制物3，通过柱色谱[硅胶(100-200)和0.5％乙酸乙酯/己烷作为洗脱剂]纯化该粗制物，得到14.5gm呈灰白色固体形式的化合物3。
步骤3
在0℃向苄基三乙基氯化铵(TEBAC)(0.35gm，1.55mmol)于50％NaOH(50mL)中的搅拌溶液中添加(3，5-二溴-苯基)-乙腈(3)(8.5gm，30.9mmol)、1，2-二溴乙烷(7.9mL，91.5mmol)溶液。在rt下将得到的混合物搅拌5hr。将反应混合物倒入冰水中并且用乙酸乙酯(3×75mL)萃取。将有机层经硫酸钠干燥并且在减压下浓缩，获得10gm粗制产物。柱色谱[二氧化硅(100-200目)和0.5％乙酸乙酯/HA洗脱剂]制成6gm呈灰白色固体形式的化合物4。
步骤4
在-78℃向1-(3，5-二溴-苯基)-环丙烷碳甲腈(4)(6.8gm，22.6mmol)于DCM(250ml)中的搅拌溶液中添加DiBAl-H(16.9ml，25.9mmol，25％于甲苯中)。将得到的混合物在-78℃搅拌1hr。将反应混合物用2N HCl骤冷并且用DCM(3×200mL)萃取。将有机层依次用饱和NaHCO3溶液、盐水洗涤，经硫酸钠干燥并且在减压下浓缩，获得5.6gm呈灰白色固体形式的粗制化合物5。
步骤5
在0℃向1-(3，5-二溴-苯基)-环丙烷甲醛(5)(5.6gm，18.4mmol)于DCM(80ml)的搅拌溶液中缓慢地添加DAST(9.7mL，73.7mmol)。将得到的混合物在rt下搅拌2hr。将反应混合物用DCM(150mL)稀释并且用水洗涤。将有机层经硫酸钠干燥并且在减压下浓缩，获得5.8gm粗制产物，通过柱色谱[二氧化硅(100-200目)和己烷中的0.5％乙酸乙酯洗脱剂]纯化该粗制产物，获得4.5gm呈白色固体形式的化合物6。
步骤6
在-78℃向1，3-二溴-5-(1-二氟甲基-环丙基)-苯(6)(6gm，18.4mmol)于THF(90mL)中的搅拌溶液中逐滴添加n-BuLi(8.4mL，18.4mmol)。将得到的混合物在-78℃搅拌10min并且用DMF(2.1mL，27.6mmol)在-78℃骤冷，并且搅拌10min。将饱和NH4Cl添加到反应混合物中并且用乙酸乙酯(3×70ml)萃取。有机层经硫酸钠干燥并且在减压下浓缩，获得6.2gm呈浅棕色固体形式的粗制产物。柱色谱[硅胶(100-200)和0.2％乙酸乙酯/HA洗脱剂]制成3.8gm呈白色固体形式的化合物7。
步骤7
向(7)(3.8gm，13.8mmol)于EtOH(35mL)中的搅拌溶液中添加丙二酸(2.9gm，27.6mmol)、HCOONH4(1.8gm，27.6mmol)并且加热到回流且保持6hr。将反应物冷却到RT并且在减压下浓缩，获得4.3gm粗制中间体。使4.3g上述粗制中间体在乙醇HCl(40mL)中回流1hr。将反应混合物在减压下浓缩并且将得到的残余物溶解于水中且用饱和NaHCO3溶液中和，用乙酸乙酯(4×75mL)萃取，将有机层经硫酸钠干燥并且在减压下浓缩，获得4.5gm粗制产物，通过柱色谱[二氧化硅(100-200目)和DCM中的0.5％MeOH洗脱剂]纯化该粗制产物，获得1.3gm呈浅棕色液体形式的所需化合物8。
实施例1
(3S)-3-(3-溴-5-(叔丁基)-2-羟基苯基)-3-(2-(3-羟基-5-((5-羟基-1，4，5，6-四氢嘧啶-2-基)氨基)苯甲酰胺基)乙酰胺基)丙酸的制备
(S)-3-氨基-3-(3-溴-5-(叔丁基)-2-羟基苯基)丙酸乙酯.对-甲苯-4-磺酸的制备：
以下方案描述了β-氨基酸(S)-3-氨基-3-(3-溴-5-(叔丁基)-2-羟基苯基)丙酸乙酯-pTSA盐的合成，该盐将用于合成上述化合物(实施例1)：
步骤1
3-溴-5-叔丁基水杨醛的制备：
在15min内向5-叔丁基水杨醛(3.03g，16.97mmol)于乙酸(3.5mL)中的搅拌溶液中逐滴添加溴(0.90mL，17.56mmol)于乙酸(8.5mL)中的溶液。将反应混合物在室温下在50℃搅拌3h并且通过TLC(EA/庚烷：1∶4)和分析型HPLC分析来监测。在2.5h后对反应混合物进行的分析型HPLC分析显示约68％的所需产物和约32％的未反应起始材料。添加第二批乙酸(3mL)中的溴(0.15mL)并且将反应混合物在50℃再搅拌15h。在过夜搅拌后对反应混合物进行的分析型HPLC分析显示约96％的所需产物并且仍显示约4％的起始材料。将反应混合物用二氯甲烷(50mL)稀释并且将有机层用39％亚硫酸氢钠溶液(1×10mL)、水、饱和NaHCO3和盐水洗涤。将有机层经无水硫酸钠干燥，过滤并且在真空中蒸发，得到呈浅黄色结晶固体形式的粗制所需产物(4.6150g)。通过在硅胶柱上进行硅胶快速色谱并且用正庚烷中的0-5％乙酸乙酯洗脱来纯化该粗制产物，获得呈浅黄色结晶固体形式的所需产物(4.07g，93％产率)。1H NMR(400MHz，CDCl3)：δ1.33(s，9H，t-Bu-)，7.49(s，1H，H-4)，7.81(d，1H，H-6)，9.85(s，1H，-CHO)，11.41(s，1H，-OH)。分离产物的1H NMR与先前所报道的产物样品的1H NMR相同(Girsch等，2008)。以负模式对该产物的LC-MS分析显示所需产物的质量：m/z 255(79BrM+-H)和m/z 257(81BrM+-H)。以CI模式(甲烷)对产物的GC-MS分析显示所需产物的质量：m/z 256(79BrM+)和m/z 258(81BrM+)。
步骤2
3-溴-5-叔丁基-2-[(2-甲氧基乙氧基)甲氧基]苯甲醛的制备：
在氮气下在水浴(20℃)中搅拌3-溴-5-(叔丁基)-2-羟基苯甲醛(3.99g，15.51mmol)和无水碳酸钾(2.36g，17.10mmol)于无水DMF(20.0mL)中的混合物，得到橙黄色悬浮液。在搅拌20min后，将2-甲氧基乙氧基甲基氯(2.00mL，17.66mmol，工业级)逐滴添加(30min)到上述悬浮液中，同时维持20℃的内部温度。将反应混合物在室温下搅拌2.5h，得到黄橙色悬浮液。将反应混合物倒入冰水(150mL)中并且在室温下搅拌，得到黄色油状液体，没有观察到固体形成。在搅拌30min后，将反应混合物用二氯甲烷(2×100mL)萃取。将有机层移出，用水(1×50mL)洗涤并且经无水硫酸镁干燥，过滤并且在真空中蒸发，得到呈橙色粘性液体形式的极纯净产物(5.40g)。1H NMR(400MHz；CDCl3)：δ1.29(s，9H，(CH3)3C-)，3.33(s，3H，CH3-O-)，3.53(m，2H，-CH2-CH2-O-)，3.98(m，2H，-CH2-CH2-O-)，5.25(s，2H，-O-CH2-O-)，7.79(s，2H，H-4和H-6)，10.28(s，1H，-CHO)。样品的1H NMR谱与产物的提出结构一致。
步骤3
(S，E)-2-((3-溴-5-(叔丁基)-2-((2-甲氧基乙氧基)甲氧基)亚苄基)氨基)-2-苯基乙醇的制备：
在室温下将(S)-(+)-2-苯基甘氨醇(2.14g，15.63mmol)添加到3-溴-5-(叔丁基-2-[(2-甲氧基乙氧基)甲氧基]苯甲醛(5.38g，15.58mmol)于无水THF(25.0mL)中的溶液中并且在室温下搅拌反应混合物，得到橙色溶液。在室温下搅拌1h后，添加无水硫酸镁(4.00g)并且将反应混合物再搅拌2h，得到橙色溶液。在室温下再搅拌2h后，将反应混合物在多孔过滤器上过滤并且将滤饼用THF(1×15mL)洗涤。在真空中蒸发滤液和洗出物，获得含有所需亚胺的黄色粘性液体(7.83g)。对粗制产物的LC-MS分析显示所需产物的质量：m/z464(M+H)和m/z 486(M+Na)。1H NMR(400MHz，CDCl3)：样品的1H NMR谱与产物的提出结构一致。
步骤4
(S)-3-(3-溴-5-(叔丁基)-2-((2-甲氧基乙氧基)甲氧基)苯基)-3-((S)-2-羟基-1-苯基乙基)氨基)丙酸叔丁酯的制备：
步骤4.1
叔丁氧基羰基甲基溴化锌(雷福尔马茨基试剂)的制备：
BrZnCH2COOC(CH3)3
在氮气气氛下将锌金属(3.84g，58.80mmol)和无水THF(30mL)置于150mL配备有冷凝器的烧瓶中。在磁力搅拌下，添加1，2-二溴乙烷(152μL，1.76mmol)并且将锌于THF中的悬浮液加热到回流(65-70℃)且在此温度下保持1h。将反应混合物冷却到50℃，然后通过注射器按以下顺序逐滴装入溴乙酸叔丁酯(9.0mL，60.95mmol)：2.0mL、2.0mL和2.0mL。在搅拌下在氮气气氛下加热反应混合物。将反应混合物温热到58℃，并且在58℃加热几分钟(15-20min)内，观察到放热并且反应混合物开始沸腾，锌开始消失。在使该放热平息后，向反应混合物中装入剩余的溴乙酸叔丁酯(3.00mL)，无色固体开始沉淀并且随时间而增加。在60℃在搅拌下将反应混合物再加热1h，得到浅黄绿色溶液。1h后，将反应混合物冷却到室温，然后冷却到0℃，得到无色沉淀。将反应混合物在氮气气氛下在冷冻器(-20℃)中储存过夜。观察到具有浅黄绿色母液的无色到白色的结晶固体。通过双尖套管去除溶剂，得到无色到暗白色固体，仍含有残余的THF(2-3mL)。将固体沉淀与无水THF(10mL)研磨并且通过套管去除THF洗涤物，得到奶油色滤饼。粗制叔丁氧基羰基甲基溴化锌将按原样用于下一步骤。
步骤4.2
(S)-3-(3-溴-5-(叔丁基)-2-((2-甲氧基乙氧基)甲氧基)苯基)-3-((S)-2-羟基-1-苯基乙基)氨基)丙酸叔丁酯的制备
在氮气下在-10-15℃(冰/盐浴)下将来自步骤4-1的固体雷福尔马茨基试剂BrZnCH2COOC(CH3)t 3.THF溶解于的无水1-甲基-2-吡咯烷酮(NMP)(12.0mL)中，得到浅黄色溶液。在氮气气氛下将来自步骤3的粗制亚胺(7.82g，16.84mmol)单独地溶解于无水NMP(15.0mL)中。在30min内在氮气气氛下将亚胺于NMP(12.0mL)中的溶液在-15℃缓慢地添加到雷福尔马茨基试剂于NMP中的溶液中。首先将反应混合物在-10℃搅拌2h，然后在-5℃再搅拌1h。将反应混合物冷却到-10℃(盐/冰浴)。在10min内将浓HCl(1.0mL)于100mL饱和氯化铵溶液中的混合物缓慢地添加到上述冷反应混合物中，并且在0℃(冰浴)搅拌反应混合物，得到黄橙色溶液。在0℃将反应混合物搅拌15min后，将反应混合物温热到室温。添加MTBE(80mL)并且将反应混合物在室温下搅拌30min。终止搅拌并且分离各层。用MTBE(20mL)萃取水层。将两个有机层合并并且相继用饱和NH4Cl溶液(25mL)、水(25mL)和饱和氯化钠溶液(25mL)洗涤。将有机层用无水MgSO4干燥，过滤并且在真空中蒸发，获得橙色粘性液体(9.82g)。对该液体的LC-MS分析显示所需产物的质量：m/z 580(79BrM+H)和m/z 582(81BrM+H)。1H NMR(400MHz，CDCl3)：样品的1H NMR谱与产物的提出结构一致。上述粗制产物将按原样用于下一步骤。
步骤5
(S，E)-3-(亚苄基氨基)-3-(3-溴-5-(叔丁基)-2-((2-甲氧基乙氧基)甲氧基)苯基)丙酸叔丁酯的制备
在0℃(冰浴)将四乙酸铅(7.48g，16.88mmol)一次性添加到来自步骤4的粗制酯(9.80g，16.88mmol)于无水甲醇(100mL)中的溶液中。该溶液由橙黄色变成红橙色，然后回到黄橙色。将反应混合物在0℃搅拌3h，得到橙色溶液。再搅拌1/2h后，将15％NaOH水溶液(15mL)添加到反应混合物中，同时维持温度在低于5℃。在旋转蒸发器上在减压下去除大部分甲醇(约135mL)，得到稠的奶橙色残余物。添加另外一部分15％NaOH水溶液(80mL)并且用乙酸乙酯(3×100mL)萃取反应混合物。用水(1×100mL)和饱和NaCl溶液(1×50mL)洗涤有机层。将有机层移出，经无水MgSO4干燥并且经硅藻土过滤。在真空中蒸发滤液，获得含有所需产物的橙色粘性液体(9.050g)。上述粗制产物将按原样用于与对-甲苯磺酸的反应。
步骤6
(S)-3-氨基-3-(3-溴-5-(叔丁基)-2-羟基苯基)丙酸乙酯对-甲苯-4-磺酸的制备：
将对-甲苯磺酸单水合物添加到来自步骤5的粗制酯(9.05g，16.50mmol)于无水乙醇(25.0mL)中的溶液中。在回流条件下在氮气气氛下加热反应混合物，得到橙红棕色溶液。7h后停止加热并且将反应混合物冷却到室温。在真空中蒸发溶剂，获得深橙棕色粘性液体。将粗制产物溶解于THF(20.0mL)中并且缓慢地用庚烷(50.0mL)稀释，得到暗橙棕色胶状残余物。将这一混合物在冷冻器(-20℃)中储存过夜。暗奶油色胶状固体在黄橙色庚烷母液中沉淀出来。倾析掉庚烷层并且将残余物与庚烷(10mL)研磨。将庚烷层移出并且与倾析的庚烷层合并。无色沉淀开始在合并的庚烷层中沉积并且在室温下静置30min后固体的量显著增加。将沉淀的固体过滤，用庚烷洗涤并且在真空中干燥，获得白色固体(6.24g)。对上述粗制产物的LC-MS分析显示所需产物的质量：m/z 344(79BrM+H)和m/z 346(81BrM+H)，C15H22BrNO3的计算质量：344.24，p-TSA盐C15H22BrNO3.C7H8O3S的计算质量：516.44。1H NMR(400MHz，DMSO-d6)：δ1.13(t，J＝7.10Hz，3H，CH3CH2-)，1.36(s，6H，(CH3)2C-)，2.30(S，3H，4-CH3-(pTSA))，2.95(ABq，JAB＝16.42Hz和7.42Hz并且JAB＝16.42Hz和6.72Hz，2H，-(H2-COOC2H5)，4.05(q，J＝7.10Hz，2H，CH3CH2-)，5.01(apptq/m，J＝6.20Hz，1H，-NH-CH-CH2-COO-)，7.12(d，J＝8.40Hz，2H，pTSA-H-3&H-5)，7.30(d，J＝2.44Hz，1H)，7.47(s，1H)，7.48(d，J＝6.00Hz，2H，pTSA H-2和H-6)，8.26(brs，2H，-NH2)，9.02(brs，1H，-OH)。样品的1H NMR谱与产物的提出结构一致。
(S)-3-(3-溴-5-(叔丁基)-2-羟基苯基)-3-(2-((叔丁氧基羰基)氨基)乙酰胺基)丙酸乙酯的制备.
向(S)-3-氨基-3-(3-溴-5-(叔丁基)-2-羟基苯基)丙酸乙酯-p-TSA盐(2.71g，5.26mmol)和N-t-Boc-甘氨酸羟基丁二酰亚胺酯(1.45g，5.30mmol)的混合物于无水DMF(25mL)中的溶液中添加三乙胺(900μL，6.46mmol)并且将反应混合物在室温下在氮气气氛下搅拌过夜。在真空中蒸发溶剂，获得橙色粘性液体。使残余物在乙酸乙酯(50mL)、水(50mL)与饱和NaHCO3溶液(50mL)之间分配。取出乙酸乙酯层，用水(1×50mL)洗涤，经无水Na2SO4干燥，过滤并且在真空中蒸发，获得奶油色泡沫状固体(2.383g)。粗制产物将按原样用于t-Boc-基团的脱保护。
(S)-3-(2-氨基乙酰胺基)-3-(3-溴-5-(叔丁基)-2-羟基苯基)丙酸乙酯盐酸盐的制备.
在0℃(冰浴)将1，4-二烷(7.0mL)中的4M HCl添加到(S)-3-(3-溴-5-(叔丁基)-2-羟基苯基)-3-(2-((叔丁氧基羰基)氨基)乙酰胺基)丙酸乙酯的粗制样品(2.38g，4.75mmol)于1，4-二烷(6.0mL)中的溶液中并且将反应混合物在0℃搅拌30min，然后在室温下搅拌30min。然后在氮气气氛下将反应混合物在50℃加热2.5h，得到黄橙色悬浮液。在真空中蒸发溶剂，获得暗黄橙色泡沫状固体。将乙腈(25mL)添加到该固体中，搅拌5min，得到奶黄色悬浮液并且在真空中蒸发，获得暗黄色泡沫状固体。将泡沫状固体再溶解于乙腈(25mL)中，得到暗黄色悬浮液，过滤以去除无色不溶固体。在真空中蒸发滤液，获得黄橙色粘性液体。将该液体与乙酸乙酯/庚烷的混合物研磨，得到暗奶油色沉淀；在真空中去除溶剂，获得暗奶油色固体(2.00g)。对产物的LC/MS分析显示所需产物的质量：m/z 401(79BrM+H)和m/z403(81BrM+H)，C17H25BrN2O4的计算质量：401.29。1H NMR(400MHz，DMSO-d6)：δ1.12(t，J＝7.11Hz，3H，CH3-CH2-)，1.23(s，9H，(CH3)3C-)，2.76(ABq，J＝15.50Hz和9.20Hz并且J＝15.50Hz和5.56Hz，2H，-CH2-COOC2H5)，3.57(brs，2H，NH2-CH2-C＝O)，4.03(q，J＝7.07Hz，CH3-CH2-)，5.56(brm，1H，-NH2-CH-)，7.25(d，J＝2.30Hz，1H)，7.36(d，J＝2.30Hz，1H)，7.96(brs，2H，NH2-)，8.87(d，J＝8.46Hz，1H)，9.15(brs，1H，-OH)。样品的1H NMR谱与产物的提出结构一致。
(3S)-3-(3-溴-5-(叔丁基)-2-羟基苯基)-3-(2-(3-羟基-5-((5-羟基-1，4，5，6-四氢嘧啶-2-基)氨基)苯甲酰胺基)乙酰胺基)丙酸乙酯的制备.
向(S)-3-(2-氨基乙酰胺基)-3-(3-溴-5-(叔丁基)-2-羟基苯基)丙酸乙酯HCl盐(1.12g，0.995mmol)、3-羟基-5-((5-羟基-1，4，5，6-四氢嘧啶-2-基)氨基)苯甲酸(实施例A)(0.60g，2.41mmol)和1-羟基苯并三唑水合物(74.0mg，0.48mmol)于无水DMF(7.0mL)和DCM(7.0mL)中的混合物中添加N，N′-二异丙基碳化二亚胺(445μL，2.86mmol)并且将反应混合物在室温下在氮气气氛下搅拌过夜。在旋转蒸发器上蒸发溶剂，得到无色胶状残余物。将残余物溶解于乙腈(25mL)中，搅拌5min并且过滤以去除沉淀的脲(约300mg)。在真空中蒸发滤液得到几乎无色的胶状/粘性残余物(1.39g)。对粗制产物的LC/MS分析显示所需产物的质量：m/z 635(79BrM+H)和m/z 637(81BrM+H)，C28H36BrN5O7的计算质量：634.519。粗制产物将按原样用于利用氢氧化锂进行的皂化。
(3S)-3-(3-溴-5-(叔丁基)-2-羟基苯基)-3-(2-(3-羟基-5-((5-羟基-1，4，5，6-四氢嘧啶-2-基)氨基)苯甲酰胺基)乙酰胺基)丙酸的制备.
在室温下向粗制(3S)-3-(3-溴-5-(叔丁基)-2-羟基苯基)-3-(2-(3-羟基-5-((5-羟基-1，4，5，6-四氢嘧啶-2-基)氨基)苯甲酰胺基)乙酰胺基)丙酸乙酯(1.389g，2.19mmol)于乙腈/水(10.0mL)的1∶1混合物中的悬浮液中添加氢氧化锂单水合物(0.735g，17.51mmol)并且将反应混合物在室温下搅拌3h，获得浅黄色溶液。在旋转蒸发器上蒸发乙腈，得到浅黄色含水残余物。用二氯甲烷(2×25mL)萃取残余物以去除HOBt和DIPU。用TFA(3.0mL于5.0mL CH3CN中)中和水层并且在真空中蒸发混合物，得到浅色粘性残余物。通过反相HPLC在Biotage SP1系统上使用含有0.05％TFA的水中的梯度10-40％CH3CN来纯化粗制产物，获得无色玻璃状固体。将纯化产物溶解于含有几滴乙腈的水中并且冻干，获得无色粉末(778.0mg)。对纯化产物的LC/MS分析显示所需产物的质量：m/z 606(79BrM+H)和m/z608(81BrM+H)，C26H32BrN5O7的计算质量：606.466。1H NMR(400MHz，DMSO-d6)：δ1.25(s，9H，(CH3)3C-)，2.70(ABq，JAB＝16.00Hz和8.73Hz并且JAB＝15.95Hz和5.45Hz，2H，-CH2-COOH)，3.17(d，J＝12.0Hz，2H)，3.35(d，J＝11.0Hz，2H)，3.89(d，J＝6.0Hz，2H)，4.09(m，1H)，5.45(brm，1H，-NH-CH-CH2-COOH)，6.75(brt/m，J＝2.02Hz，1H)，7.13(dt，2H)，7.26(d，J＝2.30Hz，1H)，7.34(d，J＝2.32Hz，1H)，8.60(d，J＝8.26Hz，1H)，8.64(t，J＝5.85Hz，1H)，9.31(s，1H)，9.60(s，1H)，10.02(brs，1H)，12.27(brs，1H，-COOH)。样品的1H NMR谱与产物的提出结构一致。
实施例2
(3S)-3-(5-溴-3-(叔丁基)-2-羟基苯基)-3-(2-(3-羟基-5-((5-羟基-1，4，5，6-四氢嘧啶-2-基)氨基)苯甲酰胺基)乙酰胺基)丙酸的制备.
(S)-3-氨基-3-(5-溴-3-(叔丁基)-2-羟基苯基)丙酸乙酯.对-甲苯-4-磺酸的制备：
以下方案描述了β-氨基酸(S)-3-氨基-3-(5-溴-3-(叔丁基)-2-羟基苯基)丙酸乙酯-pTSA盐的合成，该盐将用于合成上述化合物(实施例2)。
步骤1
5-溴-3-叔丁基水杨醛的制备：
在20min内向3-叔丁基水杨醛(5.13g，28.8mmol)于乙酸(15mL)中的搅拌溶液中逐滴添加溴(1.65mL，32.25mmol)于乙酸(7.0mL)中的溶液。将反应混合物在室温下搅拌3h。3h后的分析型HPLC分析显示约72％的所需产物和约28％的未反应起始材料。添加第二批乙酸(3mL)中的溴(0.5mL)并且将反应混合物在室温下再搅拌3h。3h后(总共6h)对反应混合物进行的分析型HPLC分析显示约85％的所需产物并且仍显示约15％的起始材料。在搅拌6h后，将反应混合物用二氯甲烷(50mL)稀释并且将有机层用39％亚硫酸氢钠溶液(1×10mL)、水、饱和NaHCO3和盐水洗涤。将有机层经无水硫酸钠干燥，过滤并且在真空中蒸发，得到呈浅黄色结晶固体形式的所需产物(7.2421g)。通过在硅胶柱上进行硅胶快速色谱并且用正庚烷中的0-5％乙酸乙酯洗脱来纯化，获得呈浅黄色结晶固体形式的所需产物(4.792g，64％产率)。以负模式对该产物的LC-MS分析显示所需产物的质量：m/z 255(79BrM+-H)和m/z 257(81BrM+-H)。以CI模式(甲烷)对产物的GC-MS分析显示所需产物的质量：m/z 256(79BrM+)和m/z 258(81BrM+)，C11H13BrO2的计算质量：257.124。1H NMR(400MHz，CDCl3)：δ1.39(s，9H，t-Bu-)，7.50(s，1H，H-4)，7.56(s，1H，H-6)，9.79(s，1H，-CHO)，11.70(s，1H，-OH)。分离产物的1H NMR与先前所报道的产物样品的1H NMR一致(Girsch等，2007)。
步骤2
5-溴-3-叔丁基-2-[(2-甲氧基乙氧基)甲氧基]苯甲醛的制备：
在氮气下在水浴(20℃)中搅拌5-溴-3-(叔丁基)-2-羟基苯甲醛(4.74g，18.42mmol)和无水碳酸钾(2.83g，20.45mmol)于无水DMF(20.0mL)中的混合物，得到橙黄色悬浮液。在搅拌20min后，将2-甲氧基乙氧基甲基氯(2.40mL，21.19mmol，工业级)逐滴添加(20min)到上述悬浮液中，同时维持20℃的内部温度。将反应混合物在室温下搅拌3h，得到淡黄色悬浮液。将反应混合物倒入冰水(150mL)中并且在室温下搅拌，得到黄色油状液体，没有观察到固体形成。在搅拌30min后，将反应混合物用二氯甲烷(2×75mL)萃取。将有机层移出，用水(1×50mL)洗涤并且经无水硫酸镁干燥，过滤并且在真空中蒸发，得到浅黄色粘性液体(6.7832g)。无需进行纯化并且将粗制产物(纯度＞97％)直接用于下一步骤3。
步骤3
(S，E)-2-((5-溴-3-(叔丁基)-2-((2-甲氧基乙氧基)甲氧基)亚苄基)氨基)-2-苯基乙醇的制备：
在室温下将(S)-(+)-2-苯基甘氨醇(2.71g，19.73mmol)添加到5-溴-3-(叔丁基-2-[(2-甲氧基乙氧基)甲氧基]苯甲醛(6.78g，19.64mmol)于无水THF(25.0mL)中的溶液中并且在室温下搅拌反应混合物，得到橙色溶液。在室温下搅拌1h后，添加无水硫酸镁(5.00g)并且将反应混合物再搅拌2h，得到橙色溶液。2h后对反应混合物的LC-MS分析显示所需产物的质量：m/z 464(79BrM+H)和m/z 466(81BrM+H)。将反应混合物在室温下再搅拌1h并且在多孔过滤器上过滤并用THF(3×25mL)洗涤滤饼。在真空中蒸发滤液和洗涤物，获得含有所需亚胺的黄色粘性液体(9.40g)。样品的1H NMR谱与产物的提出结构一致。无需进行纯化并且将粗制产物(纯度＞95％)直接用于下一步骤4。
步骤4
(S)-3-(5-溴-3-(叔丁基)-2-((2-甲氧基乙氧基)甲氧基)苯基)-3-((S)-2-羟基-1-苯基乙基)氨基)丙酸叔丁酯的制备：
步骤4.1
叔丁氧基羰基甲基溴化锌(雷佛马茨基试剂)的制备：
BrZnCH2COOC(CH3)3
在氮气气氛下将锌金属(3.44g，52.60mmol)和无水THF(30mL)置于150mL配备有冷凝器的烧瓶中。在磁力搅拌下，添加1，2-二溴乙烷(150μL，1.76mmol)并且将锌于THF中的悬浮液加热到回流(65-70℃)且在此温度下保持1h。将反应混合物冷却到50℃，然后通过注射器按以下顺序逐滴装入溴乙酸叔丁酯(7.80mL，52.80mmol)：2.0mL和2.0mL。在搅拌下在氮气气氛下加热反应混合物。将反应混合物温热到58℃，并且在58℃加热的几分钟(15-20min)内，观察到放热并且反应混合物开始沸腾，锌开始消失。在使该放热平息后，向反应混合物中装入剩余的溴乙酸叔丁酯(3.80mL)，无色固体开始沉淀并且随时间而增加。在60℃在搅拌下将反应混合物再加热1h，得到浅黄绿色溶液。1h后，将反应混合物冷却到室温，然后冷却到0℃，得到无色沉淀。将反应混合物在氮气气氛下在冷冻器(-20℃)中储存过夜。观察到具有浅黄绿色母液的无色到白色的结晶固体。通过双尖套管去除溶剂，得到无色到暗白色固体，仍含有残余的THF(2-3mL)。将固体沉淀与无水THF(10mL)研磨并且通过套管去除THF洗涤物，得到奶油色滤饼。将粗制叔丁氧基羰基甲基溴化锌按原样用于下一步骤。
步骤4.2
(S)-3-(5-溴-3-(叔丁基)-2-((2-甲氧基乙氧基)甲氧基)苯基)-3-((S)-2-羟基-1-苯基乙基)氨基)丙酸叔丁酯的制备：
在氮气下在-10℃到-15℃(冰/盐浴)下将来自步骤4-1的固体雷佛马茨基试剂BrZnCH2COOC(CH3)t 3.THF(52.0mmol)溶解于无水1-甲基-2-吡咯烷酮(NMP)(12.0mL)中，得到浅黄色溶液。在氮气气氛下将来自步骤3的粗制亚胺(9.40g，20.24mmol)单独地溶解于无水NMP(15.0mL)中。在30min内在氮气气氛下将亚胺于NMP中的溶液在-15℃缓慢地添加到雷佛马茨基试剂于NMP中的溶液中。首先将反应混合物在-10℃搅拌2h，然后在-5℃再搅拌1h。将反应混合物冷却到-10℃(盐/冰浴)。在10min内将浓HCl(1.0mL)于100mL饱和氯化铵溶液中的混合物缓慢地添加到上述冷反应混合物中，并且在0℃(冰浴)搅拌反应混合物，得到黄橙色溶液。在0℃将反应混合物搅拌15min后，将反应混合物温热到室温。添加MTBE(80mL)并且将反应混合物在室温下搅拌30min。终止搅拌并且分离各层。用MTBE(20mL)萃取水层。将两个有机层合并并且相继用饱和NH4Cl溶液(25mL)、水(25mL)和饱和氯化钠溶液(25mL)洗涤。将有机层用无水MgSO4干燥，过滤并且在真空中蒸发，获得橙色粘性液体(6.80g)。对该液体的LC-MS分析显示所需产物的质量：m/z 580(79BrM+H)和m/z 582(81BrM+H)，C28H38BrNO5的计算质量：548.509。上述粗制产物将按原样用于下一步骤5。
步骤5
(S，E)-3-(亚苄基氨基)-3-(5-溴-3-(叔丁基)-2-((2-甲氧基乙氧基)甲氧基)苯基)丙酸叔丁酯的制备：
在0℃(冰浴)将四乙酸铅(5.20g，11.75mmol)一次性添加到来自步骤4的粗制酯(6.80g，6.80mmol)于无水甲醇(100mL)中的溶液中。该溶液由橙黄色变成红橙色，然后回到黄橙色。将反应混合物在0℃搅拌3h，得到橙色溶液。再搅拌1/2h后，将15％NaOH水溶液(15mL)添加到反应混合物中，同时维持温度在低于5℃。在旋转蒸发器上在减压下去除大部分甲醇(约135mL)，得到稠的奶橙色残余物。添加另外一部分15％NaOH水溶液(80mL)并且用乙酸乙酯(3×100mL)萃取反应混合物。用水(1×100mL)和饱和NaCl溶液(1×50mL)洗涤有机层。将有机层移出，经无水MgSO4干燥并且经硅藻土过滤。在真空中蒸发滤液，获得含有所需产物的橙色粘性液体(5.4038g)。上述粗制产物将按原样在下一步骤6中用于与对-甲苯磺酸的反应。
步骤6
(S)-3-氨基-3-(5-溴-3-(叔丁基)-2-羟基苯基)丙酸乙酯对-甲苯-4-磺酸的制备：
将对-甲苯磺酸单水合物添加到来自步骤5的粗制酯(5.40g，9.84mmol)于无水乙醇(25.0mL)中的溶液中。在回流条件下在氮气气氛下加热反应混合物，得到橙红棕色溶液。7h后停止加热并且将反应混合物冷却到室温。在真空中蒸发溶剂，获得深橙棕色粘性液体。将粗制产物溶解于THF(10.0mL)中并且缓慢地用庚烷(50.0mL)稀释，得到奶棕色悬浮液。将这一混合物在冷冻器(-20℃)中储存过夜。暗奶油色胶状固体在黄橙色庚烷母液中沉淀出来。倾析掉庚烷层并且在真空中干燥残余物，得到暗米色泡沫状固体(4.56g)。还从庚烷层获得无色固体形式的第二批产物(290.0mg)。对上述粗制产物的LC-MS分析显示所需产物的质量：m/z 344(79BrM+H)和m/z 346(81BrM+H)，C15H22BrNO3的计算质量：344.24，p-TSA盐C15H22BrNO3.C7H8O3S的计算质量：516.44。1H NMR(400MHz，DMSO-d6)：δ1.13(t，J＝7.10Hz，3H，CH3CH2-)，1.36(s，6H，(CH3)2C-)，2.30(S，3H，4-CH3-(pTSA))，2.95(ABq，JAB＝16.42Hz和7.42Hz并且JAB＝16.42Hz和6.72Hz，2H，-CH2-COOC2H5)，4.05(q，J＝7.10Hz，2H，CH3CH2-)，5.01(apptq/m，J＝6.20Hz，1H，-NH-CH2-COO-)，7.12(d，J＝8.40Hz，2H，pTSA-H-3&H-5)，7.30(d，J＝2.44Hz，1H)，7.47(s，1H)，7.48(d，J＝6.00Hz，2H，pTSA H-2&H-6)，8.26(brs，2H，-NH2)，9.02(brs，1H，-OH)。样品的1HNMR谱与产物的提出结构一致。
(S)-3-(5-溴-3-(叔丁基)-2-羟基苯基)-3-(2-((叔丁氧基羰基)氨基)乙酰胺基)丙酸乙酯的制备.
向(S)-3-氨基-3-(5-溴-3-(叔丁基)-2-羟基苯基)丙酸乙酯-p-TSA盐(1.10g，2.90mmol)和N-t-Boc-甘氨酸羟基丁二酰亚胺酯(0.80g，2.95mmol)的混合物于无水DMF(20mL)中的溶液中添加三乙胺(485μL，3.48mmol)并且将反应混合物在室温下在氮气气氛下搅拌过夜。在真空中蒸发溶剂，获得橙色粘性液体。使残余物在乙酸乙酯(50mL)、水(50mL)与饱和NaHCO3溶液(50mL)之间分配。取出乙酸乙酯层，用水(1×50mL)洗涤，经无水Na2SO4干燥，过滤并且在真空中蒸发，获得粉红奶油色泡沫状固体(1.435g)。粗制产物将按原样用于t-Boc-基团的脱保护。
(S)-3-(2-氨基乙酰胺基)-3-(5-溴-3-(叔丁基)-2-羟基苯基)丙酸乙酯盐酸盐的制备.
在0℃(冰浴)将1，4-二烷(3.0mL)中的4M HCl添加到(S)-3-(5-溴-3-(叔丁基)-2-羟基苯基)-3-(2-((叔丁氧基羰基)氨基)乙酰胺基)丙酸乙酯的粗制样品(0.922g，1.84mmol)于1，4-二烷(3.0mL)中的溶液中并且将反应混合物在0℃搅拌30min，然后在室温下搅拌30min。然后在氮气气氛下将反应混合物在50℃加热2.5h，得到黄橙色悬浮液。在真空中蒸发溶剂，获得暗黄橙色泡沫状固体。将乙腈(25mL)添加到该固体中，搅拌5min，得到奶黄色悬浮液并且在真空中蒸发，获得暗奶油色固体(0.935g)。对产物的LC/MS分析显示所需产物的质量：m/z 402(79BrM+H)和m/z 404(81BrM+H)，C17H25BrN2O4的计算质量：401.29。
(3S)-3-(5-溴-3-(叔丁基)-2-羟基苯基)-3-(2-(3-羟基-5-((5-羟基-1，4，5，6-四氢嘧啶-2-基)氨基)苯甲酰胺基)乙酰胺基)丙酸乙酯的制备
向(S)-3-(2-氨基乙酰胺基)-3-(5-溴-3-(叔丁基)-2-羟基苯基)丙酸乙酯(0.607g，0.986mmol)、3-羟基-5-(1(5-羟基-1，4，5，6-四氢嘧啶-2-基)氨基)苯甲酸(实施例A)(0.330g，1.313mmol)和1-羟基苯并三唑水合物(40.2mg，0.26mmol)于无水DMF(5.0mL)和DCM(5.0mL)中的混合物中添加N，N′-二异丙基碳化二亚胺(240μL，1.55mmol)并且将反应混合物在室温下在氮气气氛下搅拌过夜。在旋转蒸发器上蒸发溶剂，得到无色胶状残余物。将残余物溶解于乙腈(15mL)中，搅拌5min并且过滤以去除沉淀的脲。在真空中蒸发滤液得到几乎无色的胶状/粘性残余物(0.855g)。粗制产物将按原样在下一步骤中用于利用氢氧化锂进行的皂化。
(3S)-3-(5-溴-3-(叔丁基)-2-羟基苯基)-3-(2-(3-羟基-5-((5-羟基-1，4，5，6-四氢嘧啶-2-基)氨基)苯甲酰胺基)乙酰胺基)丙酸的制备.
在室温下向粗制(3S)-3-(5-溴-3-(叔丁基)-2-羟基苯基)-3-(2-(2.5-羟基-5-((5-羟基-1，4，5，6-四氢嘧啶-2-基)氨基)苯甲酰胺基)乙酰胺基)丙酸乙酯(0.758g，1.195mmol)于乙腈/水的1∶1混合物(6.0mL)中的悬浮液中添加氢氧化锂单水合物(0.401g，9.56mmol)并且将反应混合物在室温下搅拌2.5h，获得浅黄色溶液。在旋转蒸发器上蒸发乙腈，得到浅黄色含水残余物。将残余物用水(10mL)稀释并且过滤以去除沉淀的脲。用TFA(1.0mL于5.0mL CH3CN中)中和水层并且在真空中蒸发混合物，得到浅黄奶油色泡沫状固体。通过反相HPLC使用含有0.05％TFA的水中的梯度10-40％CH3CN来纯化粗制产物，获得无色玻璃状固体。将纯化产物溶解于含有几滴乙腈的水中并且冻干，获得无色粉末(407.0mg)。对纯化产物的LC/MS分析显示所需产物的质量：m/z 606(79BrM+H)和m/z 608(81BrM+H)，C26H32BrN5O7的计算质量：606.466。样品的1H NMR谱与产物的提出结构一致。
实施例3
(3S)-3-(3-溴-5-(2-羟基丙-2-基)苯基)-3-(2-(3-羟基-5-((5-羟基-1，4，5，6-四氢嘧啶-2-基)氨基)苯甲酰胺基)乙酰胺基)丙酸的制备.
(S)-3-氨基-3-(3-溴-5-(2-羟基丙-2-基)苯基)丙酸乙酯的制备.
以下方案描述了β-氨基酸：(S)-3-氨基-3-(3-溴-5-(2-羟基丙-2-基)苯基)丙酸乙酯的合成，该酯将用于合成上述化合物(实施例3)。
步骤1
1，3-二溴-5-{(1-羟基-1-甲基)乙基}-苯的制备：
在-78℃(干冰-丙酮浴)在15min内向1，3，5-三溴苯(5.03g，15.96mmol)于无水乙醚(75.0mL)中的溶液/悬浮液中缓慢地添加叔丁基锂于戊烷(19.25mL，32.70mmol)中的1.70M溶液，得到紫色溶液/悬浮液。将反应混合物温热到-30℃并且在该温度下搅拌2h。将无水丙酮(1.25mL，17.0mmol)添加到溶液中，得到棕紫色溶液，并且将混合物在-30℃再搅拌3h。将反应混合物在-30℃用饱和NH4Cl水溶液(35.0mL)骤冷并且温热到室温，然后用乙醚(50mL)稀释。将有机层分离，用水洗涤，经无水MgSO4干燥，过滤并且在真空中蒸发，获得深橙红色粘性液体(4.50g)。通过使用Varian SF-40-120g Super Flash硅胶柱在BiotageSP1系统上进行硅胶快速色谱并且用正庚烷中的10-90％乙醚洗脱来纯化粗制产物。在真空中蒸发纯净流分混合物，获得呈棕黄色结晶固体形式的所需产物(2.50g)。对该固体的GC/MS分析显示所需产物的质量：m/z 292(79Br，79BrM+)、m/z 294(79Br，81BrM+)和m/z 296(81Br，81BrM+)，C9H10Br2O的计算质量：293.98。1H NMR(400MHz，CDCl3)：δ1.53(s，6H，(CH3)2C-OH)，1.71(brs，1H，(CH3)2C-OH)，7.52(d，J＝1.75Hz，1H，H-2)，7.54(d，J＝1.75Hz，2H，H-4和H-6)。样品的1H NMR谱与产物的提出结构一致。
步骤2
3-溴-5-(2-羟基丙-2-基)苯甲醛的制备.
在氮气下将来自步骤1的2-(3，5-二溴苯基)丙-2-醇(2.50g，8.50mmol)溶解于干燥烧瓶中的无水乙醚(20mL)中。在氮气气氛下将反应混合物冷却到-78℃(干冰-丙酮浴)并搅拌。在-78℃将正丁基锂于己烷(11.0mL，17.60mmol)中的1.6M溶液逐滴添加到上述溶液中，并且在完成n-BuLi的添加后将反应混合物在-78℃搅拌30min，得到红棕色溶液。在-78℃搅拌30min后，将反应混合物温热到-30℃，得到淡粉色悬浮液。将DMF(800μL，10.33mmol)逐滴添加到上述反应混合物中，保持反应混合物低于-20℃(5min)。在完成DMF的添加后，将反应混合物缓慢地温热到0℃(冰浴)(30min)，得浅粉色悬浮液。在室温下在氮气气氛下搅拌反应混合物。虽然反应在30min内完成，但在氮气下将反应混合物在室温下搅拌过夜，得到浅粉色悬浮液，将反应混合物倒入50mL冷却的10％HCl水溶液中并且将混合物搅拌15min。将醚层分离，然后用水(1×25mL)洗涤，经无水Na2SO4干燥，过滤并且在旋转蒸发器上蒸发，得到暗橙色结晶固体(2.18g)。通过在硅胶柱上进行硅胶快速色谱并且用正庚烷中的5-40％乙酸乙酯洗脱来纯化粗制产物，获得呈暗黄色固体形式的所需产物(1.054g)。对产物的GC-MS分析(CI模式/甲烷)显示所需产物的质量：m/z 242(79BrM+)和m/z 244(81BrM+)，C10H11BrO2的计算质量：243.097。1H NMR(400MHz，CDCl3)：δ1.59(s，6H，(CH3)2C-OH)，1.81(brs，1H，(CH3)2C-OH)，7.86(dd，J＝1.80Hz和1.50Hz，1H)，7.89(appt，J＝1.70Hz，1H)，7.91(appt，J＝1.80Hz，1H)，9.94(s，1H，-CHO)。样品的1H NMR谱与产物的提出结构一致。
步骤3
3-氨基-3-(3-溴-5-(2-羟基丙-2-基)苯基)丙酸乙酯的制备：
将3-溴-5-(2-羟基丙-2-基)苯甲醛(1.04g，4.28mmol)、丙二酸一乙酯(1.25g，9.46mmol)和乙酸铵(1.72g，22.30mmol)于无水乙醇(70.0mL)的溶液在回流下加热7h，得到浅黄色溶液。将反应混合物冷却到室温并且在真空中蒸发溶剂，得到黄色粘性液体。使残余物在饱和NaHCO3水溶液(25mL)与乙酸乙酯(25mL)之间分配，将有机层移出，经无水硫酸钠干燥，过滤并且在真空中蒸发，得到黄色粘性氨基酯液体(1.60g)。对粗制产物的LC-MS分析显示所需产物的质量：m/z 330(79BrM+)和m/z 332(81BrM+)，C14H20BrNO3的计算质量：330.21。
步骤4
(S)-3-氨基-3-(3-溴-5-(2-羟基丙-2-基)苯基)丙酸的制备：
外消旋混合物的酶法拆分。在室温下搅拌来自步骤3的粗制产物(270.0mg，0.82mmol)于50mM KH2PO4溶液(40.0mL)中的悬浮液并且通过添加1.0N NaOH溶液将水层的pH值调节为pH 8.20。将Amano PS添加到上述悬浮液中并且将反应混合物在室温下搅拌过夜。在过夜搅拌后获得具有几个黄橙色小珠粒的微浑溶液。没有获得固体或沉淀，所需(S)-酸可溶解于上述含水系统中。用MTBE(15mL)稀释上述混合物并且将反应混合物在室温下搅拌15min以萃取(R)-酯。在真空中蒸发水层获得含有(S)-酸以及Amano脂肪酶和磷酸盐缓冲盐的奶油色固体(735.0mg)。对粗制残余物的LC-MS分析显示所需(S)-酸的质量：m/z 302(79BrM+)和m/z 304(81BrM+)，C12H16BrNO3的计算质量：302.16。上述粗制残余物将按原样用于(S)-酯的制备。
步骤5
(S)-3-氨基-3-(3-溴-5-(2-羟基丙-2-基)苯基)丙酸乙酯的制备：
将来自步骤3的含有(S)-酸以及Amano脂肪酶和磷酸盐缓冲盐的粗制残余物悬浮于用干燥的HCl气体饱和的无水乙醇(10mL)中并且将反应混合物在回流下加热2h，得到暗粉黄色悬浮液。将反应混合物用乙腈(50mL)稀释，过滤并且在真空中蒸发，得到暗黄棕色油状残余物。将残余物用NaHCO3水溶液(25mL)处理并且用MTBE(2×25mL)萃取。在真空中蒸发溶剂得到黄棕色胶状残余物并且通过反相HPLC利用含有0.05％TFA的水中的梯度10-40％CH3CN纯化该残余物，在冻干后得到呈无色冻干固体形式的所需产物(18.4mg)。对纯化产物的LC/MS分析显示所需产物的质量：m/z 330(79BrM+H)和m/z332(81BrM+H)。1H NMR(400MHz，DMSO-d6)：δ1.10(t，J＝7.10Hz，3H，CH3CH2-)，1.42(s，6H，(CH3)2C-)，3.00(ABq，JAB＝16.15Hz和8.15Hz并且JAB＝16.15Hz和6.40Hz，2H，-CH2-COOC2H5)，4.03(dq，J＝7.10Hz和1.0Hz，2H，CH3CH2-)，4.65(appt，J＝7.16Hz，1H，-NH-CH-CH2-COO-)，5.30(s，1H，(CH3)2-C-OH)，7.57(appt，J＝1.60Hz，2H)，7.67(appt，J＝1.60Hz，1H)，8.42(brs，2H，-NH2)。样品的1HNMR谱与产物的提出结构一致。
步骤6
(3S)-3-(3-溴-5-(2-羟基丙-2-基)苯基)-3-(2-(3-羟基-5-((5-羟基-1，4，5，6-四氢嘧啶-2-基)氨基)苯甲酰胺基)乙酰胺基)丙酸的制备：
将2-(3-羟基-5-((5-羟基-1，4，5，6-四氢嘧啶-2-基)氨基)苯甲酰胺基)乙酸(实施例B)(20.13mg，0.065mmol)、(S)-3-氨基-3-(3-溴-5-(2-羟基丙-2-基)苯基)丙酸乙酯盐酸盐(19.60mg，0.059mmol)的混合物溶解于DMF(1.0mL)和二氯甲烷(1.0mL)中，得到奶油色悬浮液。将固体1-羟基苯并三唑水合物(2.0mg，0.013mmol)添加到上述反应混合物中并且将反应混合物在氮气气氛下搅拌10min。添加N，N′-二异丙基碳化二亚胺(12μL)并且将反应混合物在氮气气氛下在室温下搅拌过夜。在真空中蒸发溶剂，得到浅黄色粘性胶状残余物。将残余物溶解于乙腈(10mL)中，搅拌5min并且过滤以去除沉淀的脲。在真空中蒸发滤液得到以下产物的黄橙色胶状残余物：(3S)-3-(3-溴-5-(2-羟基丙-2-基)苯基)-3-(2-(3-羟基-5-((5-羟基-1，4，5，6-四氢嘧啶-2-基)氨基)苯甲酰胺基)乙酰胺基)丙酸乙酯(30.0mg)。
在室温下向上述产物于乙腈/水的1∶1混合物的混合物中的溶液中添加氢氧化锂单水合物(20.0mg)并且将反应混合物在室温下搅拌1.5h。用TFA(100μL于1.0mL CH3CN中)中和该混合物并且在真空中蒸发该混合物，得到浅色残余物。通过反相HPLC利用含有0.05％TFA的水中的梯度10-40％CH3CN纯化上述粗制产物，在冻干后得到呈无色冻干固体形式的所需产物(22.0mg)。对产物的LC/MS分析显示所需产物的质量：m/z 592(79BrM+)和m/z594(81BrM+)，C25H30BrN5O7的计算质量：592.43。1H NMR(400MHz，DMSO-d6)：δ1.39(s，12H，2×(CH3)2C-OH)，2.69(d，J＝7.81Hz，2H，-CH2-COOH)，3.15(d，J＝12.23Hz，2H)，3.33(d，J＝12.06Hz，2H)，3.86(d，J＝5.84Hz，2H)，4.07(appt/m，1H)，5.17(brm/q，1H，-NH-CH-CH2-COOH)，6.74(brt/m，1H)，7.11(dt，J＝10.4Hz，2H)，7.34(appt/m，1H)，7.39(appt/m，1H)，7.50(appt/m，1H)，8.14(brs，2H)，8.51(d，J＝8.20Hz，1H)，8.62(brt，J＝7.35Hz，1H)，9.69(s，1H)，10.01(brs，1H)，12.38(brs，1H，-COOH)。样品的1H NMR谱与产物的提出结构一致。
实施例4
(3S)-3-(3-氯-5-(2-羟基丙-2-基)苯基)-3-(2-(3-羟基-5-((5-羟基-1，4，5，6-四氢嘧啶-2-基)氨基)苯甲酰胺基)乙酰胺基)丙酸的制备
(S)-3-氨基-3-(3-氯-5-(2-羟基丙-2-基)苯基)丙酸乙酯的制备
以下方案描述了β-氨基酸(S)-3-氨基-3-(3-氯-5-(2-羟基丙-2-基)苯基)丙酸乙酯的合成：
步骤1
2-(3-溴-5-氯苯基)-1，3-二氧戊环的制备
在迪安-斯达克条件下将3-溴-5-氯苯甲醛(5.00g，22.80mmol)、乙二醇(3.82mL，68.90mmol)和对-甲苯磺酸水合物(88.0mg，0.45mmol)于无水甲苯中的混合物在回流下加热6h。将反应混合物冷却到室温并且用乙酸乙酯(50mL)稀释。用饱和NaHCO3溶液(25mL)洗涤乙酸乙酯层。将有机层移出并且用水(1×25mL)洗涤并用无水MgSO4干燥，过滤并且在真空中蒸发，得到几乎无色的粘性液体(6.05g)。对该液体的GC-MS分析(CI模式/甲烷)分析显示所需产物的质量：m/z 262(79Br，35ClM+)和m/z 264(81Br，37ClM+)，C9H8BrClO2的计算质量：263.51。1H NMR(400MHz，CDCl3)：δ3.98-4.04(m，2H，-CH2-O-)，4.04-4.10(m，2H，-CH2-O-)，5.69(s，1H，O-CH-O)，7.39(m，1H)，7.47-7.51(m，2H)。该液体的1H NMR谱与产物的提出结构一致。
步骤2
2-(3-氯-5-(1，3-二氧戊环-2-基)苯基)丙-2-醇的制备
在-78℃在氮气下向干燥烧瓶中的2-(3-溴-5-氯苯基)-1，3-二氧戊环(3.34g，12.68mmol)于无水乙醚(40mL)中的溶液中缓慢地添加叔丁基锂于戊烷(15.0mL，25.50mmol)中的1.70M溶液，得到粉黄色悬浮液。在氮气气氛下将反应混合物在-78℃搅拌45min。45min后，将反应混合物温热到-30℃并且在该温度下搅拌2h。将丙酮(2.0mL，25.35mmol)逐滴添加到上述溶液中并且将反应混合物在-30℃再搅拌3h。在-30℃将反应混合物用饱和NH4Cl溶液(20mL)骤冷并且将反应混合物缓慢地温热到室温(30min)，然后用乙醚(25.0mL)稀释。将醚层分离并且然后用水(1×25mL)洗涤，经无水Na2SO4干燥，过滤并且在旋转蒸发器上蒸发，得到浅黄色粘性液体(5.45g，来自两次操作)。对该产物的GC-MS分析(EI模式)显示所需产物的质量：m/z 241(35ClM+)和m/z 243(37ClM+)，C12H15BrClO3的计算质量：242.67。对粗制产物的LC-MS分析显示所需产物的质量：m/z 243(35ClM+H)、m/z245(37ClM+H)、m/z 225(35ClM+H-H2O)、m/z 227(37ClM+H-H2O)。1H NMR(400MHz，CDCl3)：δ1.54(s，6H，(CH3)2C-OH)，3.90-4.25(m，4H，2×-CH2-O-)，5.75(s，1H，O-CH-O)，7.34(s，1H)，7.43(d，2H)。样品的1H NMR谱与产物的提出结构一致。
步骤3
3-氯-5-(2-羟基丙-2-基)苯甲醛的制备
向2-(3-氯-5-(1，3-二氧戊环-2-基)苯基)丙-2-醇(5.45g，22.46mmol)于丙酮(50mL)中的溶液中添加对-甲苯磺酸水合物(0.85g，4.47mmol)并且将反应混合物在室温下搅拌1h，得到橙红色溶液。在真空中蒸发溶剂，得到橙棕色残余物。使残余物在饱和NaHCO3水溶液(25mL)与乙酸乙酯(50mL)之间分配，将有机层移出，用盐水(1×25mL)洗涤，经无水硫酸钠干燥，过滤并且在真空中蒸发，得到橙红色粘性液体(4.75g)。通过在硅胶柱上进行硅胶快速色谱并且用正己烷中的5-40％乙酸乙酯洗脱来纯化粗制产物，获得呈奶油色结晶固体形式的所需产物(2.35g)。1H NMR(400MHz，CDCl3)：δ1.59(s，6H，(CH3)2C-OH)，1.76(brs，1H，(CH3)2C-OH)，7.71(dd，J＝1.80Hz，1H)，7.75(appt，J＝1.80Hz，1H)，7.85(appt/dd，J＝1.40Hz，1H)，9.96(s，1H，-CHO)。该固体的1H NMR谱与产物的提出结构一致。
步骤4
外消旋3-氨基-3-(3-氯-5-(2-羟基丙-2-基)苯基)丙酸的制备
将3-氯-5-(2-羟基丙-2-基)苯甲醛(2.35g，11.83mmol)、丙二酸(1.50g，14.41mmol)和乙酸铵(1.85g，24.00mmol)于异丙醇(30.0mL)中的悬浮液在回流下在氮气气氛下加热4h，获得黄橙色溶液中的无色悬浮液。将热反应混合物过滤并且将固体用热异丙醇(2×25mL)洗涤并丢弃。在真空中蒸发滤液，获得呈奶黄色泡沫状固体形式的所需酸(40％)与副产物3-(3-氯-5-(2-羟基丙-2-基)苯基)丙烯酸(60％)的混合物。使该固体从乙酸乙酯中再结晶数次(×5)，获得呈无色固体形式的不含副产物杂质的纯净的所需产物(632.8mg)。对该固体的LC-MS分析显示所需产物的质量：m/z 258(35ClM+H)、m/z 260(37ClM+H)、m/z 240(35ClM+H-H2O)和m/z 242(37ClM+H-H2O)；C12H16ClNO3的计算质量：257.71。1H NMR(400MHz，DMSO-d6)：δ1.42(s，6H，(CH3)2C-)，2.30(dd，J＝8.0Hz和6.0Hz，2H，-CH2-COOH)，4.21(appt，J＝7.0Hz，1H，-NH-CH-CH2-COOH)，6.33(s，1H，(CH3)2-C-OH)，7.31(appt，J＝1.60Hz，1H)，7.38(appt，J＝1.70Hz，1H)，7.42((d，J＝9.0Hz，1H)。样品的1H NMR谱与产物的提出结构一致。
步骤5
外消旋3-氨基-3-(3-氯-5-(2-羟基丙-2-基)苯基)丙酸乙酯盐酸盐的制备
将用无水HCl气体饱和的无水乙醇(5mL)添加到3-氨基-3-(3-氯-5-(2-羟基丙-2-基)苯基)丙酸(632.0mg，2.45mmol)中并且将反应混合物在回流下加热2h，得到无色溶液。在真空中去除溶剂，得到无色固体。用乙醚和庚烷(2×25mL)将固体制成浆体。在倾析掉溶剂层后，在真空中干燥残余物，得到呈无色泡沫状固体形式的外消旋β-氨基酯盐酸盐(746mg)。对该固体的LC-MS分析显示所需产物的质量：m/z286(35ClM+H)、m/z 288(37ClM+H)、m/z 268(35ClM+H-H2O)和m/z 270(37ClM+H-H2O)；C14H20ClNO3的计算质量：285.77。
步骤6
(S)-3-氨基-3-(3-氯-5-(2-羟基丙-2-基)苯基)丙酸的制备
外消旋混合物的酶法拆分：
在室温下搅拌来自步骤5的粗制产物(270.0mg，0.82mmol)于50mM KH2PO4溶液(40.0mL)中的悬浮液并且通过添加1.0N NaOH溶液将水层的pH值调节为pH 8.20。将AmanoPS添加到上述悬浮液中并且将反应混合物在室温下搅拌过夜。在过夜搅拌后获得具有几个黄橙色小珠粒的微浑溶液。没有获得固体或沉淀，所需(S)-酸可溶解于上述含水系统中。用MTBE(15mL)稀释上述混合物并且将反应混合物在室温下搅拌15min以萃取(R)-酯。在真空中蒸发水层获得含有(S)-酸以及Amano脂肪酶和磷酸盐缓冲盐的奶油色固体(735.0mg)。对粗制残余物的LC-MS分析显示所需(S)-酸的质量：m/z 302(79BrM+)和m/z 304(81BrM+)，C12H16BrNO3的计算质量：302.16。上述粗制残余物将按原样用于(S)-酯的制备。
步骤7
(S)-3-氨基-3-(3-氯-5-(2-羟基丙-2-基)苯基)丙酸乙酯盐酸盐的制备
将来自步骤6的含有(S)-酸以及Amano脂肪酶和磷酸盐缓冲盐的粗制残余物悬浮于用干燥的HCl气体饱和的无水乙醇(5mL)中并且将反应混合物在室温下搅拌2h，得到无色溶液。对反应混合物的分析型HPLC分析显示所需产物以及痕量的副产物：3-(3-氯-5-(2-羟基丙-2-基)苯基)丙烯酸乙酯。在真空中蒸发溶剂得到无色残余物，通过反相HPLC利用含有0.05％TFA的水中的梯度10-45％CH3CN来纯化该无色残余物，在冻干后得到呈无色泡沫状固体形式的所需产物(170.0mg)(TFA盐)。对纯化产物的LC/MS分析显示所需产物的质量：m/z 286(35ClM+H)、m/z 288(37ClM+H)、m/z 268(35ClM+H-H2O)和m/z270(37ClM+H-H2O)；C14H20ClNO3的计算质量：285.77。将分离产物在用无水HCl气体饱和的无水乙醇(5.0mL)中搅拌30min并且在真空中蒸发，获得无色泡沫状固体(147.40mg)。HCl盐将按原样用于偶合反应。
(3S)-3-(3-氯-5-(2-羟基丙-2-基)苯基)-3-(2-(3-羟基-5-((5-羟基-1，4，5，6-四氢嘧啶-2-基)氨基)苯甲酰胺基)乙酰胺基)丙酸的制备
步骤1
(3S)-3-(3-氯-5-(2-羟基丙-2-基)苯基)-3-(2-(3-羟基-5-((5-羟基-1，4，5，6-四氢嘧啶-2-基)氨基)苯甲酰胺基)乙酰胺基)丙酸乙酯的制备
将2-(3-羟基-5-((5-羟基-1，4，5，6-四氢嘧啶-2-基)氨基)苯甲酰胺基)乙酸(实施例B)(151.0mg，49mmol)和(S)-3-氨基-3-(3-氯-5-(2-羟基丙-2-基)苯基)丙酸乙酯盐酸盐(147.40mg，0.46mmol)的混合物溶解于DMF(2.0mL)和二氯甲烷(2.0mL)中，得到无色悬浮液。将固体1-羟基苯并三唑水合物(14mg，0.10mmol)添加到上述反应混合物中并且将反应混合物在氮气气氛下搅拌10min。添加N，N′-二异丙基碳化二亚胺(205μL，1.33mmol)并且将反应混合物在氮气气氛下在室温下搅拌过夜。在真空中蒸发溶剂，得到以下产物的奶油色胶状残余物：(3S)-3-(3-氯-5-(2-羟基丙-2-基)苯基)-3-(2-(3-羟基-5-((5-羟基-1，4，5，6-四氢嘧啶-2-基)氨基)苯甲酰胺基)乙酰胺基)丙酸乙酯。对粗制残余物的LC-MS分析显示所需产物的质量：m/z 576(35ClM+H)和m/z 576(37ClM+H)。粗制残余物将按原样用于皂化(步骤2)。
步骤2
(3S)-3-(3-氯-5-(2-羟基丙-2-基)苯基)-3-(2-(3-羟基-5-((5-羟基-1，4，5，6-四氢嘧啶-2-基)氨基)苯甲酰胺基)乙酰胺基)丙酸的制备
在室温下向来自步骤1的粗制产物(0.46mmol)于乙腈/水的1∶1混合物的混合物(4mL)中的溶液中添加氢氧化锂单水合物(145mg，3.46mmol))并且将反应混合物在室温下搅拌1.5h。用TFA(250μL于1.0mL CH3CN中)中和该混合物并且在真空中蒸发该混合物，得到浅色残余物。通过反相HPLC利用含有0.05％TFA的水中的10-45％CH3CN的梯度来纯化上述粗制产物，在冻干后得到呈无色冻干固体形式的所需产物(实施例4)(160.0mg)。对产物的LC/MS分析显示所需产物的质量：m/z 548(35ClM+H)和m/z 550(37ClM+H)，C25H30ClN5O7的计算质量：547.99。1H NMR(400MHz，DMSO-d6)：δ1.40(s，6H，(CH3)2C-OH)，2.70(d，J＝7.30Hz，2H，-CH2-COOH)，3.16(d，J＝12.20Hz，2H)，3.33(d，J＝11.75Hz，2H)，3.86(d，J＝5.68Hz，2H)，4.08(appt/m，1H)，5.18(q，J＝7.30Hz，1H，-NH-CH-CH2-COOH)，6.74(brt/m，1H)，7.12(dt，J＝9.70Hz，2H)，7.22(appt/m，1H)，7.37(appt/m，2H)，8.18(brs，2H)，8.55(d，J＝8.20Hz，1H)，8.65(brt，J＝5.80Hz，1H)，9.73(s，1H)，10.08(brs，1H)，12.30(brs，1H，-COOH)。该固体的1H NMR谱与产物的提出结构一致。
实施例5
(S)-3-(3-溴-5-(叔丁基)苯基)-3-(2-(3-胍基苯甲酰胺基)乙酰胺基)丙酸的制备
步骤1
(S)-3-(3-溴-5-(叔丁基)苯基)-3-(2-(3-胍基苯甲酰胺基)乙酰胺基)丙酸乙酯的制备
将3-胍基苯甲酸(实施例C)(179.5mg，1.00mmol)、(S)-3-(2-氨基乙酰胺基)-3-(3-溴-5-叔丁基)苯基)丙酸乙酯盐酸盐(实施例H)(439.5mg，1.00mmol)和1-羟基苯并三唑水合物(31.2mg，0.20mmol)的混合物溶解于DMF(4mL)和二氯甲烷(4mL)中并且在室温下在氮气气氛下搅拌10min，得到无色悬浮液。添加N，N’-二异丙基碳化二亚胺(205uL，1.33mmol)并且将反应混合物在室温下在氮气气氛下搅拌过夜。在真空中蒸发溶剂，得到以下中间产物的黄色粘性残余物：(S)-3-(3-溴-5-(叔丁基)苯基)-3-(2-(3-胍基苯甲酰胺基)乙酰胺基)丙酸乙酯。对粗制残余物的LC-MS分析显示所需产物的质量：m/z 546(79BrM+H)、m/z 548(81BrM+H)；m/z 568(79BrM+Na)和m/z 570(81BrM+Na)；C25H32BrN5O4的计算质量：546.46。粗制残余物将按原样用于皂化(步骤2)。
步骤2
(S)-3-(3-溴-5-(叔丁基)苯基)-3-(2-(3-胍基苯甲酰胺基)乙酰胺基)丙酸的制备
向来自步骤1的粗制(S)-3-(3-溴-5-(叔丁基)苯基)-3-(2-(3-胍基苯甲酰胺基)乙酰胺基)丙酸乙酯(1.00mmol)于乙腈/水的1∶1混合物的混合物(6mL)中的悬浮液中添加氢氧化锂单水合物(245.6mg，5.85mmol)并且将反应混合物在室温下搅拌过夜。用TFA(1mL于3mLCH3CN中)中和反应混合物并且在真空中蒸发混合物，得到奶油色残余物。通过反相HPLC利用含有0.05％TFA的水中的梯度10-60％CH3CN来纯化粗制产物，在冻干后得到呈无色冻干固体形式的所需产物(实施例5)(510.2mg)。对产物的LC/MS分析显示所需产物的质量：m/z 518(79BrM+H)、m/z 520(81BrM+H)；m/z 540(79BrM+Na)和m/z542(81BrM+Na)；C23H28BrN5O4的计算质量：518.40。1H NMR(400MHz，DMSO-d6)：δ1.26(s，9H，(CH3)3C-)，2.70(d，J＝7.30Hz，2H，-CH2-COOH)，3.90(d，J＝5.80Hz，2H)，5.19(q，J＝7.53Hz，1H，-NH-CH-CH2-COOH)，7.34(br appt，1H)，7.36(br appt，1H)，7.39(br appt，1H)，7.49(brs，2H)，7.54(t，J＝7.8Hz，1H)，7.72(br appt，1H)，7.79(d，J＝7.90Hz，1H)，8.54(d，J＝8.3Hz，1H)，8.79(br appt，1H)，9.81(brs，1H)，12.33(brs，1H，-COOH)。样品的1H NMR谱与产物的提出结构一致。
实施例6
(S)-3-(3-溴-5-(叔丁基)苯基)-3-(2-(5-胍基烟酰胺基)乙酰胺基)丙酸的制备
步骤1
(S)-3-(3-溴-5-(叔丁基)苯基)-3-(2-(5-胍基烟酰胺基)乙酰胺基)丙酸乙酯的制备
将3-胍基烟酸(实施例F)(181.0mg，1.00mmol)、(S)-3-(2-氨基乙酰胺基)-3-(3-溴-5-叔丁基)苯基)丙酸乙酯盐酸盐(实施例H)(437.8mg，1.00mmol)和1-羟基苯并三唑水合物(32mg，0.21mmol)的混合物溶解于DMF(4mL)和二氯甲烷(4mL)中并且在室温下在氮气气氛下搅拌10min，得到无色悬浮液。添加N，N’-二异丙基碳化二亚胺(205uL，1.33mmol)并且将反应混合物在室温下在氮气气氛下搅拌过夜。在真空中蒸发溶剂，得到黄色到奶油色的结晶残余物。将该残余物悬浮/溶解于乙腈中，得到脲的无色结晶沉淀，过滤并且在真空中蒸发滤液，获得以下中间产物的浅黄色胶状固体：(S)-3-(3-溴-5-(叔丁基)苯基)-3-(2-(5-胍基烟酰胺基)乙酰胺基)丙酸乙酯。对粗制残余物的LC-MS分析显示所需产物的质量：m/z 547(79BrM+H)、m/z 549(81BrM+H)；m/z 569(79BrM+Na)和m/z 571(81BrM+Na)；C24H31BrN6O4的计算质量：547.44。粗制残余物将按原样用于皂化(步骤2)。
步骤2
(S)-3-(3-溴-5-(叔丁基)苯基)-3-(2-(5-胍基烟酰胺基)乙酰胺基)丙酸的制备
向来自步骤1的粗制(S)-3-(3-溴-5-(叔丁基)苯基)-3-(2-(5-胍基烟酰胺基)乙酰胺基)丙酸乙酯(1.00mmol)于乙腈/水的1∶1混合物的混合物(6mL)中的悬浮液中添加氢氧化锂单水合物(255mg，6.1mmol)并且将反应混合物在室温下搅拌过夜。用TFA(1mL于3mLCH3CN中)中和反应混合物并且在真空中蒸发混合物，得到浅黄色残余物。通过反相HPLC利用含有0.05％TFA的水中的梯度10-60％CH3CN来纯化粗制产物，在冻干后得到呈无色冻干固体形式的所需产物(实施例6)(541.0mg)。对产物的LC/MS分析显示所需产物的质量：m/z519(79BrM+H)、m/z 521(81BrM+H)；m/z 541(79BrM+Na)和m/z 543(81BrM+Na)；C22H27BrN6O4的计算质量：519.39。1H NMR(400MHz，DMSO-d6)：δ1.26(s，9H，(CH3)3C-)，2.70(d，J＝7.20Hz，2H，-CH2-COOH)，3.93(d，J＝5.80Hz，2H)，5.20(q，J＝7.00Hz，1H，-NH-CH-CH2-COOH)，7.34(br appt，1H)，7.36(br appt，1H)，7.39(br appt，1H)，7.75(brs，3H)，7.54(t，J＝7.8Hz，1H)，8.08(appt，J＝2.0Hz，1H)，8.56(d，J＝8.3Hz，1H)，8.62(d，J＝2.3Hz，1H)，8.93(d，J＝1.7Hz，1H)，9.03(brt，J＝5.8Hz，1H)，10.09(brs，1H)，12.30(brs，1H，-COOH)。样品的1HNMR谱与产物的提出结构一致。
实施例7
(S)-3-(3-溴-5-(叔丁基)苯基)-3-(2-(3-((4，5-二氢-1H-咪唑-2-基)氨基)苯甲酰胺基)乙酰胺基)丙酸的制备
步骤1
(S)-2-((3-((2-((1-(3-溴-5-(叔丁基)苯基)-3-乙氧基-3-氧代丙基)氨基)-2-氧代乙基)氨基甲酰基)苯基)氨基)-4，5-二氢-1H-咪唑-1-甲酸叔丁酯的制备
将3-((1-叔丁氧基羰基)-4，5-二氢-1H-咪唑-2-基)氨基)苯甲酸(实施例D)(305.8mg，1.00mmol)、(S)-3-(2-氨基乙酰胺基)-3-(3-溴-5-叔丁基)苯基)丙酸乙酯盐酸盐(实施例H)(437.8mg，1.00mmol)和1-羟基苯并三唑水合物(32mg，0.21mmol)的混合物溶解于DMF(4mL)和二氯甲烷(4mL)中并且在室温下在氮气气氛下搅拌10min，得到无色悬浮液。添加N，N’-二异丙基碳化二亚胺(205uL，1.33mmol)并且将反应混合物在室温下在氮气气氛下搅拌过夜。在真空中蒸发溶剂，得到无色胶状残余物。将该残余物悬浮/溶解于乙腈(10mL)中，得到脲的无色结晶沉淀，过滤并且在真空中蒸发滤液，获得以下中间产物的浅黄色胶状固体：(S)-2-((3-((2-((1-(3-溴-5-(叔丁基)苯基)-3-乙氧基-3-氧代丙基)氨基)-2-氧代乙基)氨基甲酰基)苯基)氨基)-4，5-二氢-1H-咪唑-1-甲酸叔丁酯。对粗制残余物的LC-MS分析显示所需产物的质量：m/z672(79BrM+H)、m/z 674(81BrM+H)；m/z 694(79BrM+Na)和m/z 696(81BrM+Na)；C32H42BrN5O6的计算质量：672.61。粗制残余物将按原样用于皂化(步骤2)。
步骤2
(S)-3-(3-溴-5-(叔丁基)苯基)-3-(2-(3-((1-(叔丁氧基羰基)-4，5-二氢-1H-咪唑-2-基)氨基)苯甲酰胺基)乙酰胺基)丙酸的制备
向来自步骤1的粗制(S)-2-((3-((2-((1-(3-溴-5-(叔丁基)苯基)-3-乙氧基-3-氧代丙基)氨基)-2-氧代乙基)氨基甲酰基)苯基)氨基)-4，5-二氢-1H-咪唑-1-甲酸叔丁酯(1.00mmol)于乙腈/水的1∶1混合物的混合物(6mL)中的悬浮液中添加氢氧化锂单水合物(248mg，5.91mmol)并且将反应混合物在室温下搅拌过夜。用TFA(1mL于3mL CH3CN中)中和反应混合物并且在真空中蒸发该混合物，得到以下中间产物的奶油色泡沫状残余物：(S)-3-(3-溴-5-(叔丁基)苯基)-3-(2-(3-((1-(叔丁氧基羰基)-4，5-二氢-1H-咪唑-2-基)氨基)苯甲酰胺基)乙酰胺基)丙酸。对粗制产物的LC/MS分析显示所需产物的质量：m/z 644(79BrM+H)和m/z646(81BrM+H)；C30H38BrN5O6的计算质量：644.56。粗制残余物将按原样用于Boc-基团的脱保护(步骤3)。
步骤3
(S)-3-(3-溴-5-(叔丁基)苯基)-3-(2-(3-((4，5-二氢-1H-咪唑-2-基)氨基)苯甲酰胺基)乙酰胺基)丙酸的制备
将来自步骤2的粗制(S)-3-(3-溴-5-(叔丁基)苯基)-3-(2-(3-((1-(叔丁氧基羰基)-4，5-二氢-1H-咪唑-2-基)氨基)苯甲酰胺基)乙酰胺基)丙酸溶解于乙腈中的20％TFA(10mL)中并且将反应混合物在室温下搅拌过夜，得到无色溶液。在真空中蒸发溶剂，得到无色粘性残余物。通过反相HPLC利用含有0.05％TFA的水中的梯度10-70％CH3CN来纯化粗制产物，在冻干后得到呈无色冻干固体形式的所需产物(实施例7)(364mg)。对产物的LC/MS分析显示所需产物的质量：m/z 544(79BrM+H)和m/z 546(81BrM+H)；C25H30BrN5O4的计算质量：544.44。1H NMR(400MHz，DMSO-d6)：δ1.27(s，9H，(CH3)3C-)，2.71(d，J＝7.30Hz，2H，-CH2-COOH)，3.68(brs，3H)，3.92(d，J＝5.80Hz，2H)，5.20(q，J＝7.5Hz，1H，-NH-CH-CH2-COOH)，7.36(brd，J＝9.8Hz，2H)，7.41(brd/m，2H)，7.55(t，J＝7.8Hz，1H)，7.73(brs，1H)，7.79(d，J＝7.8Hz，1H)，8.46(s，2H)，1H)，8.55(d，J＝7.30Hz，1H)，8.80(appt，J＝5.80Hz，1H)，10.62(s，1H)，12.37(brs，1H，-COOH)。样品的1H NMR谱与产物的提出结构一致。
实施例8
(3S)-3-(3-溴-5-(叔丁基)苯基)-3-(2-(5-((5-羟基-1，4，5，6-四氢嘧啶-2-基)氨基)烟酰胺基)乙酰胺基)丙酸的制备
步骤1
(3S)-3-(3-溴-5-(叔丁基)苯基)-3-(2-(5-((5-羟基-1，4，5，6-四氢嘧啶-2-基)氨基)烟酰胺基)乙酰胺基)丙酸乙酯的制备
将5-((5-羟基-1，4，5，6-四氢嘧啶-2-基)烟酸(实施例G)(236.8mg，1.00mmol)、(S)-3-(2-氨基乙酰胺基)-3-(3-溴-5-叔丁基)苯基)丙酸乙酯盐酸盐(实施例H)(434.7mg，1.00mmol)和1-羟基苯并三唑水合物(32mg，0.21mmol)的混合物溶解于DMF(4mL)和二氯甲烷(4mL)中并且在室温下在氮气气氛下搅拌10min，得到无色悬浮液。添加N，N’-二异丙基碳化二亚胺(205μL，1.33mmol)并且将反应混合物在室温下在氮气气氛下搅拌过夜。在真空中蒸发溶剂，得到黄色结晶/胶状残余物。将该残余物悬浮/溶解于乙腈(10mL)中，得到脲的无色结晶沉淀，过滤并且在真空中蒸发滤液，获得以下中间产物的黄色胶状固体：(3S)-3-(3-溴-5-(叔丁基)苯基)-3-(2-(5-((5-羟基-1，4，5，6-四氢嘧啶-2-基)氨基)烟酰胺基)乙酰胺基)丙酸乙酯。对粗制残余物的LC-MS分析显示所需产物的质量：m/z 603(79BrM+H)、m/z605(81BrM+H)；m/z 625(79BrM+Na)和m/z 627(81BrM+Na)；C27H35BrN6O6的计算质量：603.51。粗制残余物将按原样用于皂化(步骤2)。
步骤2
(3S)-3-(3-溴-5-(叔丁基)苯基)-3-(2-(5-((5-羟基-1，4，5，6-四氢嘧啶-2-基)氨基)烟酰胺基)乙酰胺基)丙酸的制备
向来自步骤1的粗制(3S)-3-(3-溴-5-(叔丁基)苯基)-3-(2-(5-((5-羟基-1，4，5，6-四氢嘧啶-2-基)氨基)烟酰胺基)乙酰胺基)丙酸乙酯(1.00mmol)于乙腈/水的1∶1混合物的混合物(6mL)中的悬浮液中添加氢氧化锂单水合物(247mg，5.88mmol)并且将反应混合物在室温下搅拌过夜。用TFA(1mL于3mL CH3CN中)中和反应混合物并且在真空中蒸发混合物，得到浅黄色残余物。通过反相HPLC利用含有0.05％TFA的水中的梯度10-70％CH3CN来纯化粗制产物，在冻干后得到呈无色冻干固体形式的所需产物(实施例8)(611.6mg)。对产物的LC/MS分析显示所需产物的质量：m/z 575(79BrM+H)、m/z 577(81BrM+H)；和m/z 541(79BrM+Na)；C25H31BrN6O5的计算质量：575.45。1H NMR(400MHz，DMSO-d6)：δ1.26(s，(CH3)3C-)，2.70(d，J＝7.2Hz，2H，-CH2-COOH)，3.17(dt，J＝12.4Hz，2H)，3.35(brd，J＝12.4Hz，2H)，3.93(d，J＝5.80Hz，2H)，4.10(appt/m，1H)，5.19(q，J＝7.5Hz，1H，-NH-CH-CH2-COOH)，7.34(s/appt，1H)，7.40(s/appt，1H)，8.02(s/appt，1H)，8.56(brs，2H)，8.90(d，J＝1.60Hz，1H)，9.02(t，J＝5.8Hz，1H)，9.87(s，1H)，12.38(brs，1H，-COOH)。样品的1H NMR谱与产物的提出结构一致。
实施例9
(S)-3-(3-溴-5-(叔丁基)苯基)-3-(2-(3-((4，5-二氢-1H-咪唑-2-基)氨基)-5-羟基苯甲酰胺基)乙酰胺基)丙酸的制备
步骤1
(S)-3-(3-溴-5-(叔丁基)苯基)-3-(2-(3-((4，5-二氢-1H-咪唑-2-基)氨基)-5-羟基苯甲酰胺基)乙酰胺基)丙酸乙酯的制备
将3-((4，5-二氢-1H-咪唑-2-基)氨基)-5-羟基苯甲酸甲酸盐(实施例E)(268.7mg，1.00mmol)、(S)-3-(2-氨基乙酰胺基)-3-(3-溴-5-叔丁基)苯基)丙酸乙酯盐酸盐(实施例H)(437.8mg，1.00mmol)和1-羟基苯并三唑水合物(32mg，0.21mmol)的混合物溶解于DMF(4mL)和二氯甲烷(4mL)中并且在室温下在氮气气氛下搅拌10min，得到无色悬浮液。添加N，N’-二异丙基碳化二亚胺(205μL，1.33mmol)并且将反应混合物在室温下在氮气气氛下搅拌过夜。在真空中蒸发溶剂，得到浅黄色胶状残余物。将该残余物悬浮/溶解于乙腈(10mL)中，得到脲的无色结晶沉淀，过滤并且在真空中蒸发滤液，获得中间产物的浅黄色胶状固体：(S)-3-(3-溴-5-(叔丁基)苯基)-3-(2-(3-((4，5-二氢-1H-咪唑-2-基)氨基)-5-羟基苯甲酰胺基)乙酰胺基)丙酸乙酯。对粗制残余物的LC-MS分析显示所需产物的质量：m/z 588(79BrM+H)、m/z 590(81BrM+H)；m/z 610(79BrM+Na)和m/z 612(81BrM+Na)；C27H34BrN5O5的计算质量：588.49。通过反相HPLC利用含有0.05％TFA的水中的梯度10-70％CH3CN来纯化粗制产物，得到呈无色泡沫状固体形式的所需产物(300mg)，该所需产物按原样用于皂化(步骤2)。
步骤2
(S)-3-(3-溴-5-(叔丁基)苯基)-3-(2-(3-((4，5-二氢-1H-咪唑-2-基)氨基)-5-羟基苯甲酰胺基)乙酰胺基)丙酸的制备
向来自步骤1的纯化的(S)-3-(3-溴-5-(叔丁基)苯基)-3-(2-(3-((4，5-二氢-1H-咪唑-2-基)氨基)-5-羟基苯甲酰胺基)乙酰胺基)丙酸乙酯(0.51mmol)中间体于乙腈/水的1∶1混合物的混合物(6mL)中的悬浮液中添加氢氧化锂单水合物(190mg，4.53mmol)并且将反应混合物在室温下搅拌过夜。用TFA(1mL TFA于4mL CH3CN中)中和反应混合物并且在真空中蒸发溶剂，得到奶油色泡沫状残余物。通过反相HPLC利用含有0.05％TFA的水中的梯度10-70％CH3CN来纯化粗制产物，在冻干后得到呈无色冻干固体形式的所需产物(实施例9)(83.0mg)。对产物的LC/MS分析显示所需产物的质量：m/z 560(79BrM+H)和m/z562(81BrM+H)；C25H30BrN5O5的计算质量：560.44。
1H NMR(400MHz，DMSO-d6)：δ1.26(s，9H，(CH3)3C-)，2.70(d，J＝7.40Hz，2H，-CH2-COOH)，3.66(s，4H，-CH2-CH2-)，3.87(d，J＝5.92Hz，2H)，5.18(q，J＝5.92Hz，1H，-NH-CH-CH2-COOH)，6.78(t/，J＝2.08Hz，1H)，7.13(t，J＝1.64Hz，1H)，7.16(t，J＝1.82Hz，1H)，7.34(t J＝1.48Hz，1H)，7.36(t，J＝1.47Hz，1H)，7.40(t，J＝1.75Hz，1H)，8.41(s，2H)，8.52(d，J＝8.25Hz，1H)，8.64(t，J＝5.95Hz，1H)，10.07(brs，1H)，10.54(s，1H)，12.35(brs，1H，-COOH)。样品的1H NMR谱与产物的提出结构一致。
实施例10
(S)-3-(3，5-二-叔丁基苯基)-3-(2-(5-胍基烟酰胺基)乙酰胺基)丙酸的制备
步骤1
3-氨基-3-(3，5-二-叔丁基苯基)丙酸的制备
将3，5-二-叔丁基苯甲醛(0.996g，4.56mmol)、丙二酸(0.572g，5.50mmol)和乙酸铵(0.710g，9.21mmol)于异丙醇(30mL)中的混合物在回流下在氮气下加热5h，获得无色固体。将固体过滤并且用热异丙醇(30mL)洗涤。将残余物在真空中干燥，得到呈无色固体形式的所需外消旋产物(0.340g)。
步骤2
3-氨基-3-(3，5-二-叔丁基苯基)丙酸乙酯盐酸盐的制备
将用无水HCl气体饱和的无水乙醇(100mL)添加到3-氨基-3-(3，5-二-叔丁基苯基)丙酸(2.558g，9.22mmol)中并且将反应混合物在回流下加热2h，得到无色溶液。在真空中去除溶剂，得到无色胶状固体。用乙醚将固体浆体化几次。在倾析掉溶剂后，在真空中干燥残余物，得到呈无色固体形式的外消旋β-氨基酯盐酸盐(2.48g)。
步骤3
(S)-3-氨基-3-(3，5-二-叔丁基苯基)丙酸乙酯盐酸盐的制备
外消旋混合物的酶法拆分：
通过逐滴添加用2.5N NaOH(pH值为约12)碱化3-氨基-3-(3，5-二-叔丁基苯基)丙酸乙酯盐酸盐(1.0g，2.92mmol)于水(5.0mL)中的悬浮液，得到奶油色油状残余物。通过添加50mM KH2PO4溶液将水层的pH值调节为pH 8.32。将Amano脂肪酶PS(1.20g)添加到上述反应混合物中并且将反应混合物在室温下搅拌过夜。23h后将反应混合物过滤并且用丙酮洗涤固体，得到拆分的(S)-酸的无色固体(376.5mg)。
将用无水HCl气体饱和的无水乙醇(50mL)添加到(S)-3-氨基-3-(3，5-二-叔丁基苯基)丙酸(0.916g，3.30mmol)中并且将反应混合物在回流下加热2h，得到无色溶液。在真空中去除溶剂，得到无色胶状固体。用乙醚将固体浆体化几次。在倾析掉溶剂后，在真空中干燥残余物，得到呈无色固体形式的所需外消旋(S)-β-氨基酯盐酸盐(1.19g)。
步骤4
(S)-3-(2-((叔丁氧基羰基)氨基)乙酰胺基)-3-(3，5-二-叔丁基苯基)丙酸乙酯的制备
向(S)-3-氨基-3-(3，5-二-叔丁基苯基)丙酸乙酯盐酸盐(112.0mg，0.33mmol)和Boc-Gly-Osu(95.0mg，0.35mmol)的混合物于无水DMF中的溶液中添加三乙胺(62μL，0.45mmol)并且将反应混合物在室温下在氮气气氛下搅拌过夜，得到无色溶液。在真空中蒸发溶剂并且使残余物在乙酸乙酯(25mL)、水(25mL)与饱和NaHCO3溶液(10mL)之间分配。将有机层去除，用水(1×10mL)洗涤，经无水Na2SO4干燥，过滤并且在真空中蒸发，获得奶油色泡沫状固体(163.4mg)。对该固体的LC-MS分析显示所需产物的质量：m/z 463(M+H)和m/.z485(M+Na)；C26H42N2O5的计算质量：462.62。上述产物将按原样用于Boc-脱保护。(步骤5)。
步骤5
(S)-3-(2-氨基乙酰胺基)-3-(3，5-二-叔丁基苯基)丙酸乙酯盐酸盐的制备
向S)-3-(2-((叔丁氧基羰基)氨基)乙酰胺基)-3-(3，5-二-叔丁基苯基)丙酸乙酯(163.4mg，0.35mmol)于1，4-二烷(2mL)中的溶液中添加1，4-二烷中的4.0M HCl溶液并且将反应混合物在室温下搅拌1h。在真空中蒸发溶剂并且使残余物从乙酸乙酯/己烷混合物中结晶，获得无色泡沫状固体(153.0mg)。对该固体的LC-MS分析显示所需产物的质量：m/z 363(M+H)和m/z 725(2M+H)；C21H34N2O3的计算质量：362.51。
步骤6
(S)-3-(3，5-二-叔丁基苯基)-3-(2-(5-胍基烟酰胺基)乙酰胺基)丙酸乙酯的制备
将5-胍基烟酸(实施例F)(70.8mg，0.39mmol)、(S)-3-(2-氨基乙酰胺基)-3-(3，5-二-叔丁基)苯基)丙酸乙酯盐酸盐(来自步骤5)(153.0mg，0.38mmol)和1-羟基苯并三唑水合物(12.2mg，0.08mmol)的混合物溶解于DMF(3mL)和二氯甲烷(3mL)中并且在室温下在氮气气氛下搅拌5min，得到奶油色悬浮液。向上述悬浮液中添加纯的N，N’-二异丙基碳化二亚胺(80μL，0.52mmol)并且将反应混合物在室温下在氮气气氛下搅拌过夜。在真空中蒸发溶剂，得到以下中间产物的奶油色胶状残余物：(S)-3-(3，5-二-叔丁基苯基)-3-(2-(5-胍基烟酰胺基)乙酰胺基)丙酸乙酯。对粗制残余物的LC-MS分析显示所需产物的质量：m/z 525(M+H)和m/z 547(M+Na)；C28H40N6O4的计算质量：524.66。粗制产物将按原样用于皂化(步骤7)。
步骤7
(S)-3-(3，5-二-叔丁基苯基)-3-(2-(5-胍基烟酰胺基)乙酰胺基)丙酸的制备
向来自步骤6的(S)-3-(3，5-二-叔丁基苯基)-3-(2-(5-胍基烟酰胺基)乙酰胺基)丙酸乙酯(0.39mmol)于乙腈/水的1∶1混合物的混合物(6mL)中的悬浮液中添加氢氧化锂单水合物(83mg，1.98mmol)并且将反应混合物在室温下搅拌过夜。在真空中蒸发溶剂，获得浅黄色结晶-胶状残余物。将残余物溶解于水(20mL)中并且用二氯甲烷(2×25mL)萃取以去除N，N′-二异丙基脲(DIPU)。将水层用TFA(1mL TFA于3mL CH3CN中)中和并且在真空中蒸发，得到奶油色胶状残余物。通过反相HPLC利用含有0.05％TFA的水中的梯度10-80％CH3CN来纯化粗制产物，在冻干后得到呈无色冻干固体形式的所需产物(实施例10)(122.3mg)。LC-MS分析显示所需产物的质量：m/z 497(M+H)和m/z 993(2M+H)；C26H36N6O4的计算质量：496.60。
1H NMR(400MHz，DMSO-d6)：δ1.27(s，18H，2×(CH3)3C-)，2.68(d，J＝7.60Hz，2H，-CH2-COOH)，3.93(d，J＝7.40Hz，2H)，5.24(q，J＝7.45Hz，1H，-NH-CH-CH2-COOH)，7.17(d，J＝1.67Hz，2H)，7.26(appt，J＝1.75Hz，1H)，7.69(s，4H)，8.07(appt，J＝2.20Hz，1H)，8.53(d，J＝8.64Hz，1H)，8.61(d，J＝2.46Hz，1H)，8.93(d，J＝1.80Hz，1H)，9.00(t，J＝5.80Hz，1H)，9.96(s，1H)，12.26(brs，1H，-COOH)。样品的1H NMR谱与产物的提出结构一致。
实施例11
(3S)-3-(3-溴-5-(2-氰基丙-2-基)苯基)-3-(2-(3-羟基-5-((5-羟基-1，4，5，6-四氢嘧啶-2-基)氨基)苯甲酰胺基)乙酰胺基)丙酸的制备
步骤1
(S)-3-氨基-3-(3-溴-5-(2-氰基丙-2-基)苯基)丙酸乙酯盐酸盐的制备
以下方案描述了(S)-3-氨基-3-(3-溴-5-(2-氰基丙-2-基)苯基)丙酸乙酯的合成，该酯将用于合成实施例11：
步骤A
2-(3，5-二溴苯基)-1，3-二氧戊环的制备
在迪安-斯达克条件下将3，5-二溴苯甲醛(5.37g，20.37mmol)、乙二醇(3.40mL，61.10mmol)和对-甲苯磺酸单水合物(78mg，0.41mmol)于无水甲苯(30mL)中的混合物在回流下加热5h。将反应混合物冷却到室温并且用乙酸乙酯(25mL)稀释。用饱和NaHCO3溶液(25mL)洗涤乙酸乙酯层。将有机层去除并且用水(1×25mL)洗涤并用无水MgSO4干燥，过滤并且在真空中蒸发，得到无色的粘性液体(6.27g)。对该液体的GC-MS(CI/甲烷)分析显示所需产物的质量：m/z 306(79Br，79BrM+)、m/z 308(79Br，81BrM+)和m/z 310(81Br，81BrM+)；C9H8Br2O2的计算质量：307.96。1H NMR(400MHz，CDl3)：δ3.97-4.10(m，4H，2×-CH2-O-)，5.74(s，1H，O-CH-O)，7.53(d，J＝1.80Hz，2H)，7.63(appt，J＝1.80Hz，，1H)。该液体的1H NMR谱与产物的提出结构一致。
步骤B
2-(3-溴-5-(1，3-二氧戊环-2-基)苯基)乙腈的制备
向装有无水DMF(5.0mL)中的2-(3，5-二溴苯基)-1，3-二氧戊环(4.g，12.99mmol)、Xantphos(4，5-双二苯基膦-9，9-二甲基氧杂蒽)(0.15g，0.26mmol)、Pd2(dba)3的螺口小瓶(screw-capped vial)中添加三甲代甲硅烷基乙腈(2.20mL，16.07mmol)并且将反应混合物用氮气脱气15min，得到橙红色悬浮液。在氮气气氛下向上述混合物中添加ZnF2并且在氮气下用有PTFE/硅酮隔膜的盖将小瓶密封。在90℃油浴中在搅拌下加热非均匀混合物，得到橄榄绿色的悬浮液。将反应混合物在90℃搅拌22h，得到深棕色悬浮液/溶液。将反应混合物冷却到室温并且用乙醚(100mL)稀释。用水(2×75mL)洗涤得到的溶液。取出有机层并且在真空中蒸发，并将残余物溶解于乙酸乙酯(50mL)中，经无水Na2SO4干燥，过滤并且在真空中蒸发，获得橙红色粘性液体(3.65g)。通过在硅胶柱上进行硅胶快速色谱并且用己烷中的10-80％乙酸乙酯洗脱来纯化粗制产物，获得呈浅黄色粘性液体形式的所需产物(1.95g)。对该液体的LC-MS分析显示所需产物的质量：m/z 268(79BrM+H)、m/z 270(81BrM+H)、m/z 290(79BrM+Na)和m/z 292(81BrM+Na)；GC-MS(EI模式)分析也显示了所需产物的质量：m/z 266(79BrM+)和m/z 268(81BrM+)，C11H10BrNO2的计算质量：268.11。1H NMR(400MHz，CDCl3)：δ3.72(s，2H，-CH2CN)，3.98-4.05(m，2H，-CH2-O-)，4.064.13(m，2H，-CH2-O-)，5.75(s，1H，O-CH-O)，7.36(s，1H)，7.47(s，1H)，7.58(s，1H)。该液体的1H NMR谱与产物的提出结构一致。
步骤C
2-(3-溴-5-(1，3-二氧戊环-2-基)苯基)-2-甲基丙腈的制备
在氮气气氛下在-50℃在50-60min时期里向叔丁醇钾于THF(18mL，18mmol)中的1.0M溶液中添加2-(3-溴-5-(1，3-二氧戊环-2-基)苯基)乙腈(1.92g，7.16mmol)和碘甲烷(1.40mL，22.49mmol)的混合物于THF(10mL)中的溶液。1h后去除冷却浴并且将反应混合物温热到室温并且将反应混合物在室温下搅拌2h，得到淡米色悬浮液。将反应混合物用水(50mL)骤冷，得到橙棕色溶液。在真空中去除THF(约25mL)并且用乙酸乙酯(3×25mL)萃取水相。将合并的有机层用水(1×50mL)、盐水(1×25mL)洗涤并且经无水Na2SO4干燥，过滤并且在真空中蒸发，获得橙棕色粘性液体(1.9836g)。对该液体的LC-MS分析显示所需产物的质量：m/z 296(79BrM+H)、m/z 298(81BrM+H)、m/z 318(79BrM+Na)和m/z 320(81BrM+Na)；C13H14BrNO2的计算质量：296.16。粗制产物将按原样用于下一步骤。
步骤D
2-(3-溴-5-甲酰基苯基)-2-甲基丙腈的制备
向2-(3-溴-5-(1，3-二氧戊环-2-基)苯基)-2-甲基丙腈(1.9836g，6.70mmol)于丙酮(25mL)中的溶液中添加对-甲苯磺酸水合物(0.26g，1.36mmol)并且将反应混合物在室温下搅拌过夜，得到橙红色溶液。在真空中蒸发溶剂，得到橙棕色残余物。使残余物在饱和NaHCO3水溶液(25mL)与乙酸乙酯(50mL)之间分配，将有机层移出，用盐水(1×25mL)洗涤，经无水硫酸钠干燥，过滤并且在真空中蒸发，得到橙色粘性液体(2.08g)。通过在硅胶柱上进行硅胶快速色谱并且用正己烷中的5-40％乙酸乙酯洗脱来纯化粗制产物，获得呈浅黄色结晶固体形式的所需产物(0.89g)。对该固体的LC-MS分析显示所需产物的质量：m/z 252(79BrM+H)、m/z 254(81BrM+H)；C11H10BrNO的计算质量：252.11
步骤E
外消旋3-氨基-3-(3-溴-5-(2-氰基丙-2-基)苯基)丙酸乙酯的制备
将2-(3-溴-5-甲酰基苯基)-2-甲基丙腈(0.884g，3.51mmol)、丙二酸一乙酯(1.107g，8.38mmol)和乙酸铵(1.49g，19.33mmol)于无水乙醇(50mL)中的溶液在回流下加热8h，得到浅黄色溶液。将反应混合物冷却到室温并且在真空中蒸发溶剂，得到黄色粘性液体。使残余物在饱和NaHCO3水溶液(25mL)与乙酸乙酯(50mL)之间分配，将有机层取出，经无水硫酸钠干燥，过滤并且在真空中蒸发，得到黄色粘性氨基酯液体(1.18g)。对粗制产物的LC-MS分析显示所需产物的质量：m/z 339(79BrM+H)、m/z 341(81BrM+H)、m/z 361(79BrM+Na)和m/z 363(81BrM+Na)；C15H19BrN2O2的计算质量：339.23，LC-MS还显示了副产物(E)-3-(3-溴-5-(2-氰基丙-2-基)苯基)丙烯酸乙酯的质量：m/z 322(79BrM+H)和m/z 324(81BrM+H)；C15H16BrNO2的计算质量：322.20。通过反相HPLC利用含有0.05％TFA的水中的梯度10-50％CH3CN来纯化粗制产物，得到呈无色玻璃状固体形式的所需产物。将该固体溶解于用无水HCl气体饱和的无水乙醇(5mL)中并且将反应混合物搅拌2h且在真空中蒸发，获得无色结晶/泡沫状固体(0.4212g)(HCl盐)。
步骤F
(S)-3-氨基-3-(3-溴-5-(2-氰基丙-2-基)苯基)丙酸的制备
外消旋混合物的酶法拆分：
在室温下搅拌来自上述步骤E的产物(421.2mg，1.12mmol)于50mM KH2PO4溶液(40.0mL)中的悬浮液并且通过添加1.0N NaOH溶液将水层的pH值调节为pH 8.20。将Amano脂肪酶PS(523mg，过量)添加到上述悬浮液中并且将反应混合物在室温下搅拌过夜。在搅拌3天后获得微浑溶液。没有获得固体或沉淀，所需(S)-酸可溶解于上述含水系统中。用MTBE(2×25mL)稀释上述混合物并且将反应混合物在室温下搅拌15min以萃取(R)-酯。在真空中蒸发水层获得含有(S)-酸以及Amano脂肪酶和磷酸盐缓冲盐的奶油色固体。对粗制残余物的LC-MS分析显示所需(S)-酸的质量：m/z 311(79BrM+H)、m/z 313(81BrM+H)、m/z 333(79BrM+Na)和m/z 335(81BrM+Na)；C15H19BrN2O2的计算质量：311.17。通过反相HPLC利用含有0.05％TFA的水中的梯度10-40％CH3CN来纯化粗制产物，得到呈无色泡沫状固体形式的所需产物(0.253g)(TFA盐)。
步骤G
(S)-3-氨基-3-(3-溴-5-(2-氰基丙-2-基)苯基)丙酸乙酯的制备
将来自步骤F的产物溶解于用干燥HCl气体饱和的无水乙醇(5mL)中并且将反应混合物在回流下加热2h，得到无色溶液。在真空中蒸发溶剂得到无色玻璃状/粘性液体。将残余物与乙醚(10mL)研磨并且在真空中蒸发，获得无色泡沫状固体(221mg)。对固体的(HCl盐)LC/MS分析显示所需产物的质量：m/z 339(79BrM+H)、m/z 341(81BrM+H)、m/z 361(79BrM+Na)和m/z 363(81BrM+Na)；C15H19BrN2O2的计算质量：339.23。
步骤2
(3S)-3-(3-溴-5-(2-氰基丙-2-基)苯基)-3-(2-(3-羟基-5-((5-羟基-1，4，5，6-四氢嘧啶-2-基)氨基)苯甲酰胺基)乙酰胺基)丙酸乙酯的制备
将2-(3-羟基-5-((5-羟基-1，4，5，6-四氢嘧啶-2-基)氨基)苯甲酰胺基)乙酸(实施例B)(120.8mg，0.39mmol)、(S)-3-氨基-3-(3-溴-5-(2-氰基丙-2-基)苯基)丙酸乙酯盐酸盐(来自步骤1，步骤G)(145mg，0.039mmol)和1-羟基苯并三唑水合物(13mg，0.85mmol)的混合物溶解于DMF(3.0mL)和二氯甲烷(3.0mL)中并且在室温下在氮气气氛下搅拌10min，得到无色悬浮液。添加N，N’-二异丙基碳化二亚胺(80μL，0.52mmol)并且将反应混合物在室温下在氮气气氛下搅拌过夜。在真空中蒸发溶剂，得到以下中间产物的奶油色残余物：(3S)-3-(3-溴-5-(2-氰基丙-2-基)苯基)-3-(2-(3-羟基-5-((5-羟基-1，4，5，6-四氢嘧啶-2-基)氨基)苯甲酰胺基)乙酰胺基)丙酸乙酯。对粗制残余物的LC-MS分析显示所需产物的质量：m/z 629(79BrM+H)和m/z 631(81BrM+H)；C28H33BrN6O6的计算质量：629.50。粗制残余物将按原样用于皂化(步骤3)。
步骤3
(3S)-3-(3-溴-5-(2-氰基丙-2-基)苯基)-3-(2-(3-羟基-5-((5-羟基-1，4，5，6-四氢嘧啶-2-基)氨基)苯甲酰胺基)乙酰胺基)丙酸的制备
向(3S)-3-(3-溴-5-(2-氰基丙-2-基)苯基)-3-(2-(3-羟基-5-((5-羟基-1，4，5，6-四氢嘧啶-2-基)氨基)苯甲酰胺基)乙酰胺基)丙酸乙酯(约0.39mmol)(来自步骤2)于乙腈/水的1∶1混合物的混合物(6mL)中的悬浮液中添加氢氧化锂单水合物(84mg，2.0mmol)并且将反应混合物在室温下搅拌过夜。在真空中蒸发溶剂并且将残余物溶解于水(25mL)中且用二氯甲烷(2×25mL)萃取以去除脲。用TFA(1mL于3mL CH3CN中)中和水层并且在真空中蒸发混合物，得到无色残余物。通过反相HPLC利用含有0.05％TFA的水中的梯度10-50％CH3CN来纯化粗制产物，在冻干后得到呈无色冻干固体形式的所需产物(实施例11)(184.0mg)。对产物的LC/MS分析显示所需产物的质量：m/z 601(79BrM+H)、m/z 603(81BrM+H)；m/z 623(79BrM+Na)和m/z 625(81BrM+Na)；C26H29BrN6O6的计算质量：601.45。
1H NMR(400MHz，DMSO-d6)：δ1.70(s，6H，(CH3)2C-)，2.74(d，J＝7.20Hz，2H，-CH2-COOH)，3.17t(brd，2H)，3.35(brdt，2H)，3.88(d，J＝5.70Hz，2H)，4.09(appt，1H)，5.21(q，J＝7.46Hz，1H，-NH-CH-CH2-COOH)，5.44(brs，1H)，6.75(s，1H)，7.12(s，1H)，7.15(s，1H)，7.50(s，1H)，7.54(s，1H)，7.58(s，1H)，8.09(brs，2H)，8.58(d，J＝8.10Hz，1H)，8.65(brt，J＝5.80Hz，1H)，9.58(s，1H)，10.01(brs，1H)，12.43(brs，1H，-COOH)。该固体的1H NMR谱与产物的提出结构一致。
实施例12
(3S)-3-(3-(叔丁基)-5-氰基苯基)-3-(2-(3-羟基-5-((5-羟基-1，4，5，6-四氢-嘧啶-2-基)氨基)苯甲酰胺基)乙酰胺基)丙酸的制备
步骤1
(3S)-3-(3-(叔丁基)-5-氰基苯基)-3-(2-(3-羟基-5-((5-羟基-1，4，5，6-四氢嘧啶-2-基)氨基)苯甲酰胺基)乙酰胺基)丙酸乙酯的制备
将3-羟基-5-((5-羟基-1，4，5，6-四氢嘧啶-2-基)氨基苯甲酸(实施例A)(152.6mg，0.61mmol)、(S)-3-(2-氨基乙酰胺基)-3-(3-(叔丁基)-5-氰基苯基)丙酸乙酯盐酸盐(实施例I)(223.5mg，0.61mmol)和1-羟基苯并三唑水合物(19.6mg，0.128mmol)的混合物溶解于DMF(4mL)和二氯甲烷(4mL)中并且在室温下在氮气气氛下搅拌10min，得到无色悬浮液。添加N，N’-二异丙基碳化二亚胺(125μL，0.81mmol)并且将反应混合物在室温下在氮气气氛下搅拌过夜。在真空中蒸发溶剂，得到以下中间产物的黄色粘性残余物：(3S)-3-(3-(叔丁基)-5-氰基苯基)-3-(2-(3-羟基-5-((5-羟基-1，4，5，6-四氢嘧啶-2-基)氨基)苯甲酰胺基)乙酰胺基)丙酸乙酯。对粗制残余物的LC-MS分析显示所需产物的质量：m/z 565(M+H)；C29H36N6O6的计算质量：564.63。粗制残余物将按原样用于皂化(步骤2)。
步骤2
(3S)-3-(3-(叔丁基)-5-氰基苯基)-3-(2-(3-羟基-5-((5-羟基-1，4，5，6-四氢-嘧啶-2-基)氨基)苯甲酰胺基)乙酰胺基)丙酸的制备
向来自步骤1的粗制(3S)-3-(3-(叔丁基)-5-氰基苯基)-3-(2-(3-羟基-5-((5-羟基-1，4，5，6-四氢嘧啶-2-基)氨基)苯甲酰胺基)乙酰胺基)丙酸乙酯(约0.61mmol)于乙腈/水的1∶1混合物的混合物(6mL)中的悬浮液中添加氢氧化锂单水合物(130mg，3.1mmol)并且将反应混合物在室温下搅拌2h。在真空中蒸发溶剂并且将残余物溶解于水(10mL)中并且用二氯甲烷(2×25mL)萃取以去除脲。用TFA(1mL于3mL CH3CN中)中和水层并且在真空中蒸发混合物，得到无色残余物。通过反相HPLC利用含有0.05％TFA的水中的梯度10-60％CH3CN来纯化粗制产物，在冻干后得到呈无色冻干固体形式的所需产物(实施例12)(258.5mg)。对产物的LC/MS分析显示所需产物的质量：m/z 537(M+H)，C27H32N6O6的计算质量：536.58产物的质量：m/z 537(M+H)，C27H32N6O6的计算质量：536.58。
1H NMR(400MHz，DMSO-d6)：δ1.29(s，9H，(CH3)3C-)，2.74(d，J＝7.30Hz，2H，-CH2-COOH)，3.16(brd，J＝12.20Hz，2H)，3.33(brd，J＝11.70Hz，2H)，3.88(d，J＝5.80Hz，2H)，4.09(appt/m，1H)，5.23(q，J＝7.43Hz，1H，-NH-CH-CH2-COOH)，6.75(brt/m，1H)，7.11(appt，1H)，7.14(appt，1H)，7.60(brs，1H)，7.72(brs，2H)，8.08(s，2H)，8.56(d，J＝8.20Hz，1H)，8.64(t，J＝5.80Hz，1H)，9.55(s，1H)，10.00(brs，1H)，12.38(brs，1H，-COOH)。产物的1H NMR谱与产物的提出结构一致。
实施例13
(3S)-3-(2-(3-羟基-5-((5-羟基-1，4，5，6-四氢嘧啶-2-基)氨基)苯甲酰胺基)乙酰胺基)-3-(3-(2-羟基丙-2-基)-5-(三氟甲基)苯基)丙酸的制备
步骤1
(s)-3-氨基-3-(3-(2-羟基丙-2-基)-5-(三氟甲基)苯基)丙酸的制备
实施例J的酶法拆分：
通过逐滴添加用2.5N NaOH溶液(pH 12)碱化外消旋3-氨基-3-(3-(2-羟基丙-2-基)-5-(三氟甲基)苯基)丙酸乙酯盐酸盐(实施例J)(540.4mg，1.52mmol)于水(2.0mL)中的悬浮液，得到暗粉色油状残余物。通过添加50mom KH2PO4溶液(40.0mL)将水相的pH相调节为pH 8.20。将Amano脂肪酶PS(607.6mg)添加到上述悬浮液中并且将反应混合物在室温下搅拌63h，得到浅粉色悬浮液。用甲基叔丁基醚(MTBE)(50mL)稀释反应混合物并且将反应混合物在室温下搅拌30min。30min后，分离含有(R)-酯的有机层。在真空中蒸发水层获得含有(S)-酸以及Amano脂肪酶和磷酸盐缓冲盐的奶油色胶状固体。对粗制残余物的LC-MS分析显示所需(S)-酸的质量：m/z 292(M+H)、m/z 314(M+Na)和m/z 274(M+H-H2O)；C13H16F3NO3的计算质量：291.27。通过反相HPLC利用含有0.05％TFA的水中的梯度10-40％CH3CN来纯化粗制产物，在冻干后得到呈无色冻干固体形式的所需产物(324mg)(TFA盐)。
步骤2
(s)-3-氨基-3-(3-三氟甲基-5-(2-羟基丙-2-基)苯基)丙酸乙酯盐酸盐的制备
将来自步骤1的产物(324mg)溶解于用无水HCl气体饱和的无水乙醇(10mL)中并且将反应混合物在室温下搅拌2h并且在真空中蒸发溶剂，获得以下产物的无色泡沫状固体：(S)-3-氨基-3-(3-三氟甲基-5-(2-羟基丙-2-基)苯基)丙酸乙酯盐酸盐(289mg)。对该固体的LC-MS分析显示所需(S)-酯的质量：m/z 320(M+H)和m/z 342(M+Na)；C15H2oF3NO3的计算质量：319.22。该固体将按原样用于偶合反应(步骤3)。
步骤3
(3S)-3-(2-(3-羟基-5-((5-羟基-1，4，5，6-四氢嘧啶-2-基)氨基)苯甲酰胺基)乙酰胺基)-3-(3-(2-羟基丙-2-基)-5-(三氟甲基)苯基)丙酸乙酯的制备
将2-(3-羟基-5-((5-羟基-1，4，5，6-四氢嘧啶-2-基)氨基)苯甲酰胺基)乙酸(实施例B)(251mg，0.81mmol)、(S)-3-氨基-3-(3-三氟甲基-5-(2-羟基丙-2-基)苯基)丙酸乙酯盐酸盐(来自步骤2)(289mg，0.81mmol)和1-羟基苯并三唑水合物(25mg，0.16mmol)的混合物溶解于DMF(3mL)和二氯甲烷(3mL)中并且在室温下在氮气气氛下搅拌10min，得到奶油色悬浮液。添加N，N’-二异丙基碳化二亚胺(166μL，1.08mmol)并且将反应混合物在室温下在氮气气氛下搅拌过夜。在真空中蒸发溶剂，得到以下中间产物的奶油色粘性残余物：(3S)-3-(2-(3-羟基-5-((5-羟基-1，4，5，6-四氢嘧啶-2-基)氨基)苯甲酰胺基)乙酰胺基)-3-(3-(2-羟基丙-2-基)-5-(三氟甲基)苯基)丙酸乙酯。对粗制残余物的LC-MS分析显示所需产物的质量：m/z 610(M+H)和m/z 632(M+Na)；C28H34F3N5O7的计算质量：609.59。粗制残余物将按原样用于皂化(步骤4)。
步骤4
(3S)-3-(2-(3-羟基-5-((5-羟基-1，4，5，6-四氢嘧啶-2-基)氨基)苯甲酰胺基)乙酰胺基)-3-(3-(2-羟基丙-2-基)-5-(三氟甲基)苯基)丙酸的制备
向来自步骤3的(3S)-3-(2-(3-羟基-5-((5-羟基-1，4，5，6-四氢嘧啶-2-基)氨基)苯甲酰胺基)乙酰胺基)-3-(3-(2-羟基丙-2-基)-5-(三氟甲基)苯基)丙酸乙酯(0.70mmol)于乙腈/水的1∶1混合物的混合物(6mL)中的悬浮液中添加氢氧化锂单水合物(170mg，4.05mmol)并且将反应混合物在室温下搅拌2h。在真空中蒸发溶剂，获得浅黄色胶状残余物。将残余物溶解于水(20mL)中并且用二氯甲烷(2×25mL)萃取以去除N，N′-二异丙基脲。将水层用TFA(1mL TFA于3mL CH3CN中)中和并且在真空中蒸发，得到奶油色胶状残余物。通过反相HPLC利用含有0.05％TFA的水中的梯度10-50％CH3CN来纯化粗制产物，在冻干后得到呈无色冻干固体形式的所需产物(实施例13)(147mg)。对该固体的LC-MS分析显示所需产物的质量：m/z 582(M+H)；C26H30F3N5O7的计算质量：581.54。
1H NMR(400MHz，DMSO-d6)：δ1.44(s，6H，(CH3)2C-OH)，2.75(d，J＝7.70Hz，2H，-CH2-COOH)，3.16(dt，J＝12.10Hz和3.40Hz，2H)，3.33(dd，J＝12.10Hz和2.50Hz，2H)，3.87(d，J＝9.60Hz，2H)，4.08(appt，1H)，5.27(q，J＝7.50Hz，1H，-NH-CH-CH2-COOH)，6.74(t，J＝2.0Hz，1H)，7.12(dt，J＝12.0Hz和1.5Hz，2H)，7.52(s，1H)，7.69(brd，J＝8.70Hz，2H)，8.10(brs，2H)，8.60(d，J＝8.20Hz，1H)，8.63(brt，J＝8.14Hz，1H)，9.62(s，1H)，10.03(brs，1H)，12.37(brs，1H，-COOH)。样品的1H NMR谱与产物的提出结构一致。
实施例14
(3S)-3-(3-氯-5-(1-甲氧基-2-甲基丙-2-基)苯基)-3-(2-(3-羟基-5-((5-羟基-1，4，5，6-四氢嘧啶-2-基)氨基)苯甲酰胺基)乙酰胺基)丙酸的制备
步骤1
(3S)-3-(3-氯-5-(1-甲氧基-2-甲基丙-2-基)苯基)-3-(2-(3-羟基-5-((5-羟基-1，4，5，6-四氢嘧啶-2-基)氨基)苯甲酰胺基)乙酰胺基)丙酸乙酯的制备
将2-(3-羟基-5-((5-羟基-1，4，5，6-四氢嘧啶-2-基)氨基)苯甲酰胺基)乙酸(实施例B)(343.5mg，1.11mmol)、(S)-3-氨基-3-(3-氯-5-(1-甲氧基-2-甲基丙-2-基)苯基)丙酸乙酯盐酸盐(实施例K)(385.2mg，1.11mmol)和1-羟基苯并三唑水合物(35mg，0.23mmol)的混合物溶解于DMF(3mL)和二氯甲烷(3mL)中并且在室温下在氮气气氛下搅拌10min，得到奶油色悬浮液。添加纯的N，N’-二异丙基碳化二亚胺(180μL，1.16mmol)并且将反应混合物在室温下在氮气气氛下搅拌过夜。在真空中蒸发溶剂，得到以下中间产物的暗奶油色胶状残余物：(3S)-3-(3-氯-5-(1-甲氧基-2-甲基丙-2-基)苯基)-3-(2-(3-羟基-5-((5-羟基-1，4，5，6-四氢嘧啶-2-基)氨基)苯甲酰胺基)乙酰胺基)丙酸乙酯。对粗制残余物的LC-MS分析显示所需产物的质量：m/z604(35ClM+H)、m/z 606(37ClM+H)；m/z 626(35C1M+Na)和m/z 628(37ClM+Na)；C29H38ClN5O7的计算质量：604.09。粗制残余物将按原样用于皂化(步骤2)。
步骤2
(3S)-3-(3-氯-5-(1-甲氧基-2-甲基丙-2-基)苯基)-3-(2-(3-羟基-5-((5-羟基-1，4，5，6-四氢嘧啶-2-基)氨基)苯甲酰胺基)乙酰胺基)丙酸的制备
向来自步骤1的(3S)-3-(3-氯-5-(1-甲氧基-2-甲基丙-2-基)苯基)-3-(2-(3-羟基-5-((5-羟基-1，4，5，6-四氢嘧啶-2-基)氨基)苯甲酰胺基)乙酰胺基)丙酸乙酯(1.11mmol)于乙腈/水的1∶1混合物的混合物(8mL)中的悬浮液中添加氢氧化锂单水合物(234mg，5.58mmol)并且将将反应混合物在室温下搅拌2.5h。在真空中蒸发溶剂，获得浅黄色结晶-胶状残余物。将残余物溶解于水(20mL)中并且用二氯甲烷(2×25mL)萃取以去除N，N′-二异丙基脲。将水层用TFA(1mL TFA于3mL CH3CN中)中和并且在真空中蒸发，得到浅黄色粘性残余物。通过反相HPLC利用含有0.05％TFA的水中的梯度10-60％CH3CN来纯化粗制产物，在冻干后得到呈无色冻干固体形式的所需产物(实施例14)(352.0mg)。对该固体的LC-MS分析显示所需产物的质量：m/z 576(35ClM+H)、m/z 578(37ClM+H)；m/z 598(35ClM+Na)和m/z 600(37ClM+H)；C27H34ClN5O7的计算质量：576.04。
1H NMR(400MHz，DMSO-d6)：δ1.22(s，6H，-(CH3)2-CH2-OCH3)，2.70(d，J＝7.20Hz，2H，-CH2-COOH)，3.14(appt，J＝3.90Hz，1H)，3.17(appt，J＝3.50Hz，1H)，3.21(s，3H，-OCH3)，3.34(brd，2H)，3.87(d，J＝5.80Hz，2H)，4.08(appt，J＝3.0Hz，1H)，5.19(q，J＝7.50Hz，1H，-NH-CH-CH2-COOH)，6.74(t，J＝2.06Hz，1H)，7.11(appt，J＝1.80Hz，1H)，7.14(appt，J＝1.80Hz，1H)，7.21(appt，J＝1.50Hz，1H)，7.24(appt，J＝1.80Hz，1H)，7.29(appt，J＝1.40Hz，1H)，8.09(s，2H)，8.51(d，J＝8.38Hz，1H)，8.61(t，J＝5.80Hz，1H)，9.58(s，1H)，10.00(brs，1H)，12.33(brs，1H，-COOH)。样品的1H NMR谱与产物的提出结构一致。
实施例15
(3S)-3-(3-氯-5-(1-羟基-2-甲基丙-2-基)苯基)-3-(2-(3-羟基-5-((5-羟基-1，4，5，6-四氢嘧啶-2-基)氨基)苯甲酰胺基)乙酰胺基)丙酸的制备
在室温下向(3S)-3-(3-氯-5-(1-甲氧基-2-甲基丙-2-基)苯基)-3-(2-(3-羟基-5-((5-羟基-1，4，5，6-四氢嘧啶-2-基)氨基)苯甲酰胺基)丙酸TFA盐(实施例14)(138.4mg，0.20mmol)于无水二氯甲烷(2.0mL)中的溶液中添加用碘化钠饱和的15-冠-5(15-Crown-5)(267.0mg，1.212mmol)于二氯甲烷(7.0mL)中的溶液并且将反应混合物冷却到-30℃(干冰/CH3CN)并且添加二氯甲烷(650μL，0.65mmol)中的1.0M BBr3溶液并且将反应混合物在-30℃搅拌2h，得到橙色悬浮液。2hr后将反应混合物缓慢地温热到室温并且在室温下搅拌过夜，得到橙奶油色悬浮液。将悬浮液过滤，用二氯甲烷(2×10mL)洗涤并且在真空中干燥，得到黄奶油色残余物。通过反相HPLC利用含有0.05％TFA的水中的梯度10-60％CH3CN来纯化粗制产物，在冻干后得到呈无色冻干固体形式的所需产物(实施例15)(126.4mg)。对产物的LC/MS分析显示所需产物的质量：m/z 562(35ClM+H)、m/z 564(37ClM+H)、m/z 584(35ClM+Na)和m/z 586(37ClM+Na)，C26H32ClN5O7的计算质量：562.01。
1H NMR(400MHz，DMSO-d6)：δ1.20(s，6H，-(CH3)2-CH2-OH)，2.70(d，J＝7.30Hz，2H，-(H2-COOH)，3.16(appdt，J＝12.15Hz并且J＝3.50Hz，2H)，3.33(brd，J＝12.25Hz，2H)，3.87(d，J＝6.00Hz，2H)，4.08(appt，J＝3.10Hz，1H)，5.19(q，J＝7.64Hz，1H，-NH-CH-CH2-COOH)，5.42(brs，1H)，6.74(t，J＝2.06Hz，1H)，7.11(appt，J＝1.60Hz，1H)，7.13(appt，J＝1.80Hz，1H)，7.20(appt，J＝1.54Hz，1H)，7.25(appt，J＝1.80Hz，1H)，7.28(appt，J＝1.40Hz，1H)，8.10(s，2H)，8.51(d，J＝8.45Hz，1H)，8.61(t，J＝5.90Hz，1H)，9.60(s，1H)，10.00(brs，1H)，12.31(brs，1H，-COOH)。样品的1H NMR谱与产物的提出结构一致。
实施例16
(3S)-3-(3-氯-5-(4-(甲氧基甲基)四氢-2H-吡喃-4-基)苯基)-3-(2-(3-羟基-5-((5-羟基-1，4，5，6-四氢嘧啶-2-基)氨基)苯甲酰胺基)乙酰胺基)丙酸的制备
步骤1
(3S)-3-(3-氯-5-(4-(甲氧基甲基)四氢-2H-吡喃-4-基)苯基)-3-(2-(3-羟基-5-((5-羟基-1，4，5，6-四氢嘧啶-2-基)氨基)苯甲酰胺基)乙酰胺基)丙酸乙酯的制备
将2-(3-羟基-5-((5-羟基-1，4，5，6-四氢嘧啶-2-基)氨基)苯甲酰胺基)乙酸(实施例B)(277.0mg，0.90mmol)、(S)-3-氨基-3-(3-氯-5-(4-(甲氧基甲基)四氢-2H-吡喃-4-基)苯基)丙酸乙酯盐酸盐(实施例L)(342.1mg，0.87mmol)和1-羟基苯并三唑水合物(28mg，0.18mmol)的混合物溶解于DMF(3mL)和二氯甲烷(3mL)中并且在室温下在氮气气氛下搅拌10min，得到奶油色悬浮液。添加N，N’-二异丙基碳化二亚胺(180uL，1.16mmol)并且将反应混合物在室温下在氮气气氛下搅拌过夜。在真空中蒸发溶剂，得到以下中间产物的橙奶油色粘性残余物：(3S)-3-(3-氯-5-(4-(甲氧基甲基)四氢-2H-吡喃-4-基)苯基)-3-(2-(3-羟基-5-((5-羟基-1，4，5，6-四氢嘧啶-2-基)氨基)苯甲酰胺基)乙酰胺基)丙酸乙酯。对粗制残余物的LC-MS分析显示所需产物的质量：m/z 646(35ClM+H)和m/z 648(37ClM+H)；C31H40ClN5O8的计算质量：646.13。粗制残余物将按原样用于皂化(步骤2)。
步骤2
(3S)-3-(3-氯-5-(4-(甲氧基甲基)四氢-2H-吡喃-4-基)苯基)-3-(2-(3-羟基-5-((5-羟基-1，4，5，6-四氢嘧啶-2-基)氨基)苯甲酰胺基)乙酰胺基)丙酸的制备
向来自步骤1的(3S)-3-(3-氯-5-(4-(甲氧基甲基)四氢-2H-吡喃-4-基)苯基)-3-(2-(3-羟基-5-((5-羟基-1，4，5，6-四氢嘧啶-2-基)氨基)苯甲酰胺基)乙酰胺基)丙酸乙酯(0.87mmol)于乙腈/水的1∶1混合物的混合物(8mL)中的悬浮液中添加氢氧化锂单水合物(184mg，4.38mmol)并且将反应混合物在室温下搅拌过夜。在真空中蒸发溶剂，获得暗黄色结晶-胶状残余物。将残余物溶解于水(20mL)中并且用二氯甲烷(2×25mL)萃取以去除N，N′-二异丙基脲。将水层用TFA(1mL TFA于3mL CH3CN中)中和并且在真空中蒸发，得到黄橙色粘性残余物。通过反相HPLC利用含有0.05％TFA的水中的梯度10-60％CH3CN来纯化粗制产物，在冻干后得到呈无色冻干固体形式的所需产物(实施例16)(343.3mg)。对该固体的LC-MS分析显示所需产物的质量：m/z 618(35ClM+H)和m/z 620(37ClM+H)；C29H36ClN5O8的计算质量：618.08。
1H NMR(400MHz，DMSO-d6)：δ1.80-1.90(m，2H，-CH2-(C＝)-CH2-)，1.94-2.04(m，2H，-CH2-(C＝)-CH2-)，2.71(d，J＝7.20Hz，2H，-CH2-COOH)，3.12(s，3H，-OCH3)，3.13-3.20(dt/m，2H)，3.28-3.42(dt/m，4H)，3.62-3.72(dt/m，2H)，3.87(d，J＝6.00Hz，2H)，4.08(appt，J＝3.16Hz，1H)，5.21(q，J＝7.50Hz，1H，-NH-CH-CH2-COOH)，5.45(brs，1H)，6.75(appt，J＝2.05Hz，1H)，7.11(appt，J＝1.64Hz，1H)，7.14(appt，J＝1.80Hz，1H)，7.25(d，J＝1.40Hz，2H)，7.29(appt，，1H)，8.14(s，2H)，8.52(d，J＝8.30Hz，1H)，8.64(appt，J＝5.90Hz，1H)，9.67(s，1H)，10.03(brs，1H)，12.34(brs，1H，-COOH)。样品的1H NMR谱与产物的提出结构一致。
实施例17
(3S)-3-(3-氯-5-(4-(羟基甲基)四氢-2H-吡喃-4-基)苯基)-3-(2-(3-羟基-5-((5-羟基-1，4，5，6-四氢嘧啶-2-基)氨基)苯甲酰胺基)乙酰胺基)丙酸的制备
在室温下向(3S)-3-(3-氯-5-(4-(甲氧基甲基)四氢-2H-吡喃-4-基)苯基)-3-(2-(3-羟基-5-((5-羟基-1，4，5，6-四氢嘧啶-2-基)氨基)苯甲酰胺基)乙酰胺基)丙酸TFA盐(实施例16)(85.5mg，0.117mmol)于无水二氯甲烷(2.0mL)中的溶液中添加用碘化钠饱和的15-冠-5(155.0mg，0.702mmol)于二氯甲烷(6.0mL)中的溶液并且将反应混合物冷却到-30℃(干冰/CH3CN)并且添加二氯甲烷(350μL，0.35mmol)中的1.0M BBr3溶液并且将反应混合物在-30℃搅拌2h，得到橙色悬浮液。2hr后将反应混合物缓慢地温热到室温并且在室温下搅拌过夜，得到橙奶油色悬浮液。将悬浮液过滤，用二氯甲烷(2×10mL)洗涤并且在真空中干燥，得到黄奶油色固体。通过反相HPLC利用含有0.05％TFA的水中的梯度10-50％CH3CN来纯化粗制产物，在冻干后得到呈无色冻干固体形式的所需产物(实施例17)(64.5mg)。对产物的LC/MS分析显示所需产物的质量：m/z 604(35ClM+H)、m/z 606(37ClM+H)、m/z 626(35ClM+Na)和m/z 628(37ClM+Na)，C28H34ClN5O8的计算质量：604.05。
1H NMR(400MHz，DMSO-d6)：δ1.75-1.90(m，2H，-CH2-(C＝)-CH2-)，1.90-2.00(m，2H，-CH2-(C＝)-CH2-)，2.70(d，J＝7.30Hz，2H，-CH2-COOH)，3.12-3.20(dt/m，4H)，3.25-3.37(dt/m，2H)，3.62-3.72(dt/m，2H)，3.86(d，J＝5.80Hz，2H)，4.08(appt，J＝3.30Hz，1H)，5.21(q，J＝7.50Hz，1H，-NH-CH-CH2-COOH)，5.46(brs，1H)，6.75(appt，J＝1.80Hz，1H)，7.11(appt，J＝1.50Hz，1H)，7.14(appt，J＝1.75Hz，1H)，7.23(s，2H)，7.26(s，1H)，8.10(brs，2H)，8.51(d，J＝8.50Hz，1H)，8.62(appt，J＝5.80Hz，1H)，9.59(s，1H)，10.00(brs，1H)，12.32(brs，1H，-COOH)。样品的1H NMR谱与产物的提出结构一致。
实施例18
(3S)-3-(3-(叔丁基)-5-(吡啶-3-基)苯基)-3-(2-(3-羟基-5-((5-羟基-1，4，5，6-四氢嘧啶-2-基)氨基)苯甲酰胺基)乙酰胺基)丙酸的制备
步骤1
(S)-3-(3-溴-5-(叔丁基)苯基)-3-(2-((叔丁氧基羰基)氨基)乙酰胺基)丙酸乙酯的制备
在室温下在氮气气氛下向(S)-3-(2-氨基乙酰胺基)-3-(3-溴-5-(叔丁基)苯基)丙酸乙酯盐酸盐(实施例H)(1.50g，3.56mmol)于无水二氯甲烷(20mL)中的溶液中添加三乙胺(1.0mL，7.18mmol)。在将反应混合物搅拌5min后，添加二碳酸二叔丁酯并且将反应混合物在室温下搅拌过夜。在真空中蒸发溶剂，获得以下中间体的无色粘性/泡沫状残余物：(S)-3-(3-溴-5-(叔丁基)苯基)-3-(2-((叔丁氧基羰基)氨基)乙酰胺基)丙酸乙酯。对该残余物的LC-MS分析显示所需产物的质量：m/z 507(79BrM+Na)、m/z 509(81BrM+Na)、m/z 429(79BrM+H-t-Bu-)、m/z 431(81BrM+H-t-Bu-)、m/z 385(79BrM+H-t-Boc-)和m/z 387(81BrM+H-t-Boc-)；C22H33BrN2O5的计算质量：485.41。尝试利用乙酸乙酯/己烷或庚烷使所述中间体结晶数次，获得无色胶状固体(1.769g)。该胶状固体将按原样用于铃木偶合(Suzuki coupling)(步骤2)。
步骤2
(S)-3-(2-((叔丁氧基羰基)氨基)乙酰胺基)-3-(3-(叔丁基)-5-(吡啶-3-基)苯基)丙酸乙酯的制备
在氮气气氛下向(S)-3-(3-溴-5-(叔丁基)苯基)-3-(2-((叔丁氧基羰基)氨基)乙酰胺基)丙酸酯(来自步骤1)(268mg，0.55mmol)、吡啶-3-硼酸(137mg，1.12mmol)和Pd(PPh3)4(65mg，0.056mmol)于无水DMF(2.5mL)中的搅拌混合物中添加Cs2CO3(360mg，1.11mmol)于水(1.5mL)中的脱气溶液并且将反应混合物在80℃在氮气气氛下加热2h，得到灰色悬浮液。在真空中蒸发反应混合物并且将残余物溶解于水(25mL)中并且用乙酸乙酯(2×25mL)萃取混合物。将有机层分离，经无水Na2SO4干燥，过滤并且在真空中蒸发，得到以下中间产物的几乎无色的胶状残余物：(S)-3-(2-((叔丁氧基羰基)氨基)乙酰胺基)-3-(3-(叔丁基)-5-(吡啶-3-基)苯基)丙酸乙酯(276mg)。对该残余物的LC-MS分析显示所需产物的质量：m/z 484(M+H)、m/z 506(M+Na)、m/z 989(2M+Na)；C27H37N3O5的计算质量：483.60。粗制残余物将按原样用于皂化(步骤3)。
步骤3
(S)-3-(2-氨基乙酰胺基)-3-(3-(叔丁基)-5-(吡啶-3-基)苯基)丙酸乙酯盐酸盐的制备
在室温下向(S)-3-(2-((叔丁氧基羰基)氨基)乙酰胺基)-3-(3-(叔丁基)-5-(吡啶-3-基)苯基)丙酸乙酯(来自步骤2)(272mg，0.56mmol)于二氯甲烷(2.0mL)中的溶液中添加TFA于二氯甲烷(5.0mL)中的20％溶液并且将反应混合物在室温下搅拌2h。在真空中蒸发溶剂，获得浅黄色胶状残余物。对该固体的LC-MS分析显示所需产物的质量：m/z 384(M+H)、m/z 767(2M+H)和m/z 789(2M+Na)；C22H29N3O3的计算质量：383.48。将残余物与庚烷(3×10mL)研磨并且倾析掉庚烷层以去除PPh3O。将庚烷萃取后的残余物溶解于用无水HCl气体饱和的无水乙醇(10.0mL)中，在回流下加热30min并且在冷却到室温后，在真空中蒸发溶剂，获得以下产物的暗奶油色固体：(S)-3-(2-氨基乙酰胺基)-3-(3-(叔丁基)-5-(吡啶-3-基)苯基)丙酸乙酯盐酸盐(244.2mg)。该固体将按原样用于偶合反应(步骤4)。
步骤4
(3S)-3-(3-(叔丁基)-5-(吡啶-3-基)苯基)-3-(2-(3-羟基-5-((5-羟基-1，4，5，6-四氢嘧啶-2-基)氨基)苯甲酰胺基)乙酰胺基)丙酸乙酯的制备
将3-羟基-5-((5-羟基-1，4，5，6-四氢嘧啶-2-基)氨基苯甲酸(实施例A)(186mg，0.74mmol)、(S)-3-(2-氨基乙酰胺基)-3-(3-(叔丁基)-5-(吡啶-3-基)苯基)丙酸乙酯盐酸盐(来自步骤3)(311mg，0.74mmol)和1-羟基苯并三唑水合物(23mg，0.15mmol)的混合物溶解于DMF(3mL)和二氯甲烷(3mL)中并且在室温下在氮气气氛下搅拌10min，得到无色悬浮液。添加N，N’-二异丙基碳化二亚胺(125μL，0.81mmol)并且将反应混合物在室温下在氮气气氛下搅拌过夜。在真空中蒸发溶剂，得到以下中间产物的黄奶油色胶状残余物：(3S)-3-(3-(叔丁基)-5-(吡啶-3-基)苯基)-3-(2-(3-羟基-5-((5-羟基-1，4，5，6-四氢嘧啶-2-基)氨基)苯甲酰胺基)乙酰胺基)丙酸乙酯。对粗制残余物的LC-MS分析显示所需产物的质量：m/z 617(M+H)和m/z 309(M/2+H)；C33H40N6O6的计算质量：616.71。粗制残余物将按原样用于利用氢氧化锂进行的皂化(步骤5)。
步骤5
(3S)-3-(3-(叔丁基)-5-(吡啶-3-基)苯基)-3-(2-(3-羟基-5-((5-羟基-1，4，5，6-四氢嘧啶-2-基)氨基)苯甲酰胺基)乙酰胺基)丙酸的制备
向(3S)-3-(3-(叔丁基)-5-(吡啶-3-基)苯基)-3-(2-(3-羟基-5-((5-羟基-1，4，5，6-四氢嘧啶-2-基)氨基)苯甲酰胺基)乙酰胺基)丙酸乙酯(来自步骤4)(74mmol)于乙腈/水的1∶1混合物(6mL)中的悬浮液中添加氢氧化锂单水合物(156mg，3.72mmol)并且将反应混合物在室温下搅拌过夜。在真空中蒸发溶剂并且将残余物溶解于水(10mL)中且用二氯甲烷(2×25mL)萃取以去除脲。用TFA(1mL于3mL CH3CN中)中和水层并且在真空中蒸发混合物，得到浅黄橙色粘性残余物。通过反相HPLC利用含有0.05％TFA的水中的梯度10-60％CH3CN来纯化粗制产物，在冻干后得到呈无色冻干固体形式的所需产物(实施例18)(198.7mg)。对产物的LC/MS分析显示所需产物的质量：m/z 589(M+H)和m/z 295(M/2+H)；C31H36N6O6的计算质量：588.65。
1H NMR(400MHz，DMSO-d6)：δ1.34(s，9H，(CH3)3C-)，2.77(d，J＝7.00Hz，2H，-CH2-COOH)，3.15.50(dt，J＝12.50Hz和3.50Hz，2H)，3.33(d，J＝12.20Hz，2H)，4.08(t，J＝3.50Hz，1H)，5.31(q，J＝7.60Hz，1H，-NH-CH-CH2-COOH)，6.75(t，J＝2.05Hz，1H)，7.12(t，J＝1.62Hz，1H)，7.14(t，J＝1.82Hz，1H)，7.45(t，J＝1.37Hz，1H)，7.53(t，J＝1.45Hz，1H)，7.60(t，J＝1.69Hz，1H)，7.69(dd，J＝8.05Hz和5.0Hz，1H)，8.13(s，2H)，8.35(dt，J＝8.05Hz并且J＝1.8Hz，1H)，8.55(brd，J＝8.40Hz，1H)，8.66(t，J＝6.10Hz，1H)，8.69(dd，J＝5.10Hz并且J＝1.4Hz，1H)，9.03(d，J＝2.0Hz，1H)，9.66(s，1H)，10.01(brs，1H)，12.36(brs，1H，-COOH)。该固体的1HNMR谱与产物的提出结构一致。
实施例19
(3S)-3-(3-(叔丁基)-5-(嘧啶-5-基)苯基)-3-(2-(3-羟基-5-((5-羟基-1，4，5，6-四氢嘧啶-2-基)氨基)苯甲酰胺基)乙酰胺基)丙酸的制备
步骤1
(S)-3-(2-((叔丁氧基羰基)氨基)乙酰胺基)-3-(3-(叔丁基)-5-(嘧啶-5-基)苯基)丙酸乙酯的制备
在氮气气氛下向(S)-3-(3-溴-5-(叔丁基)苯基)-3-(2-((叔丁氧基羰基)氨基)乙酰胺基)丙酸乙酯(实施例18，步骤1)(314mg，0.65mmol)、嘧啶-5-硼酸(161mg，1.30mmol)和Pd(PPh3)4(81mg，0.07mmol)于无水DMF(2.5mL)中的搅拌混合物中添加Cs2CO3(424mg，1.30mmol)于水(1.5mL)中的脱气溶液并且将反应混合物在80℃在氮气气氛下加热2h，得到黑棕色悬浮液。在真空中蒸发反应混合物并且将残余物溶解于水(25mL)中并且用乙酸乙酯(2×25mL)萃取混合物。将有机层分离，经无水Na2SO4干燥，过滤并且在真空中蒸发，得到以下中间产物的橙黄色的胶状残余物：(S)-3-(2-((叔丁氧基羰基)氨基)乙酰胺基)-3-(3-(叔丁基)-5-(嘧啶-5-基)苯基)丙酸乙酯(273mg)。对该残余物的LC-MS分析显示所需产物的质量：m/z992(2M+Na)；m/z 485(M+H)、m/z 507(M+Na)、m/z 429(M+H-t-Bu-)和m/z 385(M+H-t-Boc-)；C26H36N4O5的计算质量：484.59。粗制残余物将按原样用于皂化(步骤2)。
步骤2
(S)-3-(2-氨基乙酰胺基)-3-(3-(叔丁基)-5-(嘧啶-5-基)苯基)丙酸乙酯盐酸盐的制备
在室温下向(S)-3-(2-((叔丁氧基羰基)氨基)乙酰胺基)-5-(3-(叔丁基)-5-(嘧啶-3-基)苯基)丙酸乙酯(来自步骤1)(266mg，0.55mmol)于二氯甲烷(2.0mL)中的溶液中添加TFA于二氯甲烷(5.0mL)中的20％溶液并且将反应混合物在室温下搅拌2h。在真空中蒸发溶剂，获得浅橙色胶状残余物。对该固体的LC-MS分析显示所需产物的质量：m/z 385(M+H)、m/z 407(M+Na)、m/z 769(2M+H)和m/z 791(2M+Na)；C21H28N4O3的计算质量：384.47。将残余物与庚烷(3×10mL)研磨并且倾析掉庚烷层以去除PPh3O。将三次庚烷萃取后的残余物溶解于用无水HCl气体饱和的无水乙醇(10.0mL)中，在回流下加热30min并且在冷却到室温后，在真空中蒸发溶剂，获得以下产物的黄奶油色结晶固体：(S)-3-(2-氨基乙酰胺基)-3-(3-(叔丁基)-5-(嘧啶-5-基)苯基)丙酸乙酯盐酸盐(176.4mg)。该固体将按原样用于偶合反应(步骤3)。
步骤3
(3S)-3-(3-(叔丁基)-5-(嘧啶-5-基)苯基)-3-(2-(3-羟基-5-((5-羟基-1，4，5，6-四氢嘧啶-2-基)氨基)苯甲酰胺基)乙酰胺基)丙酸乙酯的制备
将3-羟基-5-((5-羟基-1，4，5，6-四氢嘧啶-2-基)氨基苯甲酸(实施例A)(45mg，0.18mmol)、(S)-3-(2-氨基乙酰胺基)-3-(3-(叔丁基)-5-(嘧啶-5-基)苯基)丙酸乙酯盐酸盐(来自步骤2)(75.4mg，0.18mmol)和1-羟基苯并三唑水合物(6mg，0.039mmol)的混合物溶解于DMF(2mL)和二氯甲烷(2mL)中并且在室温下在氮气气氛下搅拌10min，得到浅黄色溶液。添加纯的N，N’-二异丙基碳化二亚胺(40μL，0.26mmol)并且将反应混合物在室温下在氮气气氛下搅拌过夜。在真空中蒸发溶剂，得到以下中间产物的黄奶油色胶状残余物：(3S)-3-(3-(叔丁基)-5-(嘧啶-5-基)苯基)-3-(2-(3-羟基-5-((5-羟基-1，4，5，6-四氢嘧啶-2-基)氨基)苯甲酰胺基)乙酰胺基)丙酸乙酯。对粗制残余物的LC-MS分析显示所需产物的质量：m/z 618(M+H)、m/z 640(M+Na)和m/z 309(M/2+H)；C32H39N7O6的计算质量：617.70。粗制残余物将按原样用于利用氢氧化锂进行的皂化(步骤4)。
步骤4
(3S)-3-(3-(叔丁基)-5-(嘧啶-5-基)苯基)-3-(2-(3-羟基-5-((5-羟基-1，4，5，6-四氢嘧啶-2-基)氨基)苯甲酰胺基)乙酰胺基)丙酸的制备
向(3S)-3-(3-(叔丁基)-5-(嘧啶-5-基)苯基)-3-(2-(3-羟基-5-((5-羟基-1，4，5，6-四氢嘧啶-2-基)氨基)苯甲酰胺基)乙酰胺基)丙酸乙酯(来自步骤3)(0.18mmol)于乙腈/水的1∶1混合物(6mL)中的悬浮液中添加氢氧化锂单水合物(38mg，0.91mmol)并且将反应混合物在室温下搅拌3.5h。在真空中蒸发溶剂并且将残余物溶解于水(20mL)中并且用二氯甲烷(2×25mL)萃取以去除脲。用TFA(1mL于3mL CH3CN中)中和水层并且在真空中蒸发混合物，得到浅黄橙色粘性残余物。通过反相HPLC利用含有0.05％TFA的水中的梯度10-60％CH3CN来纯化粗制产物，在冻干后得到呈无色冻干固体形式的所需产物(实施例19)(128.4mg)。对产物的LC/MS分析显示所需产物的质量：m/z 590(M+H)和m/z 295(M/2+H)；C30H35N7O6的计算质量：589.64。
1H NMR(400MHz，DMSO-d6)：δ1.34(s，9H，(CH3)3C-)，2.77(d，J＝7.50Hz，2H，-CH2-COOH)，3.10-3.20(brdt，2H)，3.28-3.38(brdt，2H)，4.08(t，J＝3.33Hz，1H)，5.31(q，J＝7.55Hz，1H，-NH-CH-CH2-COOH)，6.74(t，J＝2.05Hz，1H)，7.13(t，J＝1.66Hz，1H)，7.14(t，J＝1.82Hz，1H)，7.47(t，J＝1.45Hz，1H)，7.57(t，J＝1.40Hz，1H)，7.64(t，J＝1.68Hz，1H)，8.15(brs，2H)，8.54(d，J＝8.40Hz，1H)，8.67(t，J＝6.05Hz，1H)，9.17(s，1H)，9.19(s，1H)，9.70(s，1H)，10.03(brs，1H)，12.08(brs，1H，-COOH)。该固体的1H NMR谱与产物的提出结构一致。
实施例20
(3S)-3-(3-氯-5-(4-(氟甲基)四氢-2H-吡喃-4-基)苯基)-3-(2-(3-羟基-5-((5-羟基-1，4，5，6-四氢嘧啶-2-基)氨基)苯甲酰胺基)乙酰胺基)丙酸的制备
步骤1
(3S)-3-(3-氯-5-(4-(氟甲基)四氢-2H-吡喃-4-基)苯基)-3-(2-(3-羟基-5-((5-羟基-1，4，5，6-四氢嘧啶-2-基)氨基)苯甲酰胺基)乙酰胺基)丙酸乙酯的制备
将2-(3-羟基-5-((5-羟基-1，4，5，6-四氢嘧啶-2-基)氨基)苯甲酰胺基)乙酸(实施例B)(45.0mg，0.146mmol)、(S)-3-氨基-3-(3-氯-5-(4-(氟甲基)四氢-2H-吡喃-4-基)苯基)丙酸乙酯盐酸盐(实施例M)(55.5mg，0.146mmol)和1-羟基苯并三唑水合物(5mg，0.033mmol)的混合物溶解于DMF(2mL)和二氯甲烷(2mL)中并且在室温下在氮气气氛下搅拌10min，得到奶油色悬浮液。添加N，N’-二异丙基碳化二亚胺(35μL，0.226mmol)并且将反应混合物在室温下在氮气气氛下搅拌过夜。在真空中蒸发溶剂，得到以下中间产物的奶油色胶状残余物：(3S)-3-(3-氯-5-(4-(氟甲基)四氢-2H-吡喃-4-基)苯基)-3-(2-(3-羟基-5-((5-羟基-1，4，5，6-四氢嘧啶-2-基)氨基)苯甲酰胺基)乙酰胺基)丙酸乙酯。对粗制残余物的LC-MS分析显示所需产物的质量：m/z 634(35ClM+H)、m/z 636(37ClM+H)、m/z 656(35ClM+Na)和m/z 658(37ClM+Na)；C30H37ClFN5O7的计算质量：634.10。粗制残余物将按原样用于皂化(步骤2)。
步骤2
(3S)-3-(3-氯-5-(4-(氟甲基)四氢-2H-吡喃-4-基)苯基)-3-(2-(3-羟基-5-((5-羟基-1，4，5，6-四氢嘧啶-2-基)氨基)苯甲酰胺基)乙酰胺基)丙酸的制备
向(3S)-3-(3-氯-5-(4-(氟甲基)四氢-2H-吡喃-4-基)苯基)-3-(2-(3-羟基-5-((5-羟基-1，4，5，6-四氢嘧啶-2-基)氨基)苯甲酰胺基)乙酰胺基)丙酸乙酯(来自步骤1)(0.146mmol)于乙腈/水的1∶1混合物的混合物(6mL)中的悬浮液中添加氢氧化锂单水合物(32mg，0.763mmol)并且将反应混合物在室温下搅拌4h。在真空中蒸发溶剂，获得奶油色结晶-胶状残余物。将残余物溶解于水(20mL)中并且用二氯甲烷(2×25mL)萃取以去除N，N′-二异丙基脲。将水层用TFA(1mL TFA于3mL CH3CN中)中和并且在真空中蒸发，得到黄橙色粘性残余物。通过反相HPLC利用含有0.05％TFA的水中的梯度10-60％CH3CN来纯化粗制产物，在冻干后得到呈无色冻干固体形式的所需产物(实施例20)(50.5mg)。对该固体的LC-MS分析显示所需产物的质量：m/z 606(35ClM+H)和m/z 608(37ClM+H)；C28H33ClFN5O7的计算质量：606.04。
1H NMR(400MHz，DMSO-d6)：δ1.48-1.68(m，2H，-CH2-(C＝)-CH2-)，1.68-1.82(m，2H，-CH2-(C＝)-CH2-)，2.65-2.78(m，2H)，2.88-3.02(m，2H)，3.16(dt，J＝12.36Hz和3.80Hz，2H)，3.34(brd，J＝12.00Hz，2H)，3.42-3.54(dt/m，2H)，3.66-3.75(dt/m，2H)，3.86(d，J＝5.90Hz，2H)，4.08(appt，J＝3.30Hz，1H)，5.16(q，J＝7.40Hz，1H，-NH-CH-CH2-COOH)，5.54(brs，1H)，6.75(t，J＝2.06Hz，1H)，7.11(t，J＝1.65Hz，1H)，7.13(t，J＝1.84Hz，1H)，7.15(d，J＝5.50Hz，1H)，7.29(t，J＝1.66Hz，1H)，8.15(s，2H)，8.38(brs，1H)，8.51(d，J＝8.15Hz，1H)，8.61(t，J＝5.83Hz，1H)，9.69(s，1H)，10.03(brs，1H)，12.33(brs，1H，-COOH)。样品的1H NMR谱与产物的提出结构一致。
实施例21
(3S)-3-(3-氯-5-(1-氰基环丁基)苯基)-3-(2-(3-羟基-5-((5-羟基-1，4，5，6-四氢嘧啶-2-基)氨基)苯甲酰胺基)乙酰胺基)丙酸的制备
步骤1
(S)-3-氨基-3-(3-氯-5-(1-氰基环丁基)苯基)丙酸乙酯盐酸盐的制备
部分A
通过酶促脂肪酶催化的对外消旋混合物的水解来制备(S)-3-氨基-3-(3-氯-5-(1-氰基环丁基)苯基)丙酸
在50mM KH2PO4溶液(35mL)中搅拌外消旋-3-氨基-3-(3-氯-5-(1-氰基环丁基)苯基)丙酸乙酯(实施例N)(911.4mg，2.971mmol)的悬浮液。通过添加1N NaOH溶液和50mMKH2PO4溶液将水相的pH值调节为pH8.25。添加Amano脂肪酶PS(981.5mg)并且在室温下在氮气气氛下搅拌反应混合物。用MTBE(25mL)稀释搅拌5天后的反应混合物并且将混合物在室温下搅拌15min。分离水层与MTBE层；用MTBE(1×25mL)萃取水层。将合并的MTBE层经无水Na2SO4干燥，过滤并且在真空中蒸发，获得浅黄色粘性液体(477.3mg)。对该液体的LC-MS分析显示(R)-3-氨基-3-(3-氯-5-(1-氰基环丁基)苯基)丙酸乙酯的质量：m/z 307(35ClM+H)、m/z 309(37ClM+H)、m/z 329(35ClM+Na)和m/z 331(37ClM+Na)；C16H19ClN2O2的计算质量：306.79。在真空中蒸发MTBE萃取后的水层，获得含有(S)-COOH、Amano脂肪酶-PS和磷酸盐缓冲液的无色到奶油色的胶状残余物(1.9965g)。对粗制残余物的LC-MS分析显示所需产物(S)-3-氨基-3-(3-氯-5-(1-氰基环丁基)苯基)丙酸的质量：m/z 279(35ClM+H)、m/z 281(37ClM+H)、m/z 301(35ClM+Na)和m/z 303(37ClM+Na)、m/z 557(35Cl，35Cl2M+Na)、m/z 559(35Cl ，37Cl2M+Na)和m/z 561(37Cl，37Cl2M+Na)；C14H15ClN2O2的计算质量：278.73。粗制残余物按原样用于用无水HCl气体饱和的无水乙醇的酯化(步骤B)。
部分B
(S)-3-氨基-3-(3-氯-5-(1-氰基环丁基)苯基)丙酸乙酯盐酸盐的制备
向来自上述步骤A的含有(S)-3-氨基-3-(3-氯-5-(1-氰基环丁基)苯基)丙酸(约1.485mml，粗制残余物)、Amano脂肪酶-PS和磷酸盐缓冲液的残余物于无水乙醇(5mL)中的悬浮液中添加用无水HCl气体饱和的无水乙醇(15mL)并且将反应混合物在回流下在氮气下加热2h，得到含有无色悬浮液的淡棕色溶液。在真空中蒸发溶剂，得到粗制产物的棕色粘性液体(1.9965g)。通过反相制备型HPLC在Biotage 40+M(100g)C18HS柱上并且利用含有0.05％TFA的水中的梯度10-60％乙腈来纯化粗制产物。将纯净流分混合在一起并且在真空中蒸发，获得浅黄色粘性残余物。将残余物溶解于用无水HCl气体饱和的无水乙醇(5mL)中，在室温下搅拌5min并且在真空中蒸发，获得浅黄色粘性残余物，与乙醚(5mL)研磨并且在真空中蒸发，获得奶油色泡沫状固体(345.2mg)。对该固体的LC-MS分析显示所需(S)-3-氨基-3-(3-氯-5-(1-氰基环丁基)苯基)丙酸乙酯的质量：m/z 307(35ClM+H)、m/z 309(37ClM+H)、m/z 329(35ClM+Na)和m/z 331(37ClM+Na)；C16H19ClN2O2的计算质量：306.79
步骤2
(3S)-3-(3-氯-5-(1-氰基环丁基)苯基)-3-(2-(3-羟基-5-((5-羟基-1，4，5，6-四氢嘧啶-2-基)氨基)苯甲酰胺基)乙酰胺基)丙酸乙酯的制备
将2-(3-羟基-5-((5-羟基-1，4，5，6-四氢嘧啶-2-基)氨基)苯甲酰胺基)乙酸(实施例B)(314.5mg，1.02mmol)、(S)-3-氨基-3-(3-氯-5-(1-氰基环丁基)苯基)丙酸乙酯盐酸盐(来自上述步骤1)(345.15mg，1.006mmol)和1-羟基苯并三唑水合物(31.2mg，0.204mmol)的混合物溶解于DMF/DCM(1∶1)的混合物(8mL)中并且在室温下在氮气气氛下搅拌10min，得到奶油色悬浮液。将N，N’-二异丙基碳化二亚胺(225μL，1.453mmol)添加到上述悬浮液中并且将反应混合物在室温下在氮气气氛下搅拌过夜(19h)。在真空中蒸发溶剂，得到黄橙色胶状残余物。对该胶状残余物的LC-MS分析显示所需产物(3S)-3-(3-氯-5-(1-氰基环丁基)苯基)-3-(2-(3-羟基-5-((5-羟基-1，4，5，6-四氢嘧啶-2-基)氨基)苯甲酰胺基)乙酰胺基)丙酸乙酯的质量：m/z 597(35ClM+H)、m/z 599(37ClM+H)、m/z 619(35ClM+Na)和m/z 621(37ClM+Na)；C29H33ClN6O6的计算质量：597.06。粗制残余物按原样用于利用氢氧化锂单水合物进行的皂化(步骤3)。
步骤3
(3S)-3-(3-氯-5-(1-氰基环丁基)苯基)-3-(2-(3-羟基-5-((5-羟基-1，4，5，6-四氢嘧啶-2-基)氨基)苯甲酰胺基)乙酰胺基)丙酸的制备
向(3S)-3-(3-氯-5-(1-氰基环丁基)苯基)-3-(2-(3-羟基-5-((5-羟基-1，4，5，6-四氢嘧啶-2-基)氨基)苯甲酰胺基)乙酰胺基)丙酸乙酯(来自上述步骤2)(1.006mmol，粗制残余物)于乙腈/水(1∶1)的混合物(6mL)中的悬浮液中添加氢氧化锂单水合物(212mg，5.052mmol)并且将反应混合物在室温下搅拌过夜(16h)。在真空中蒸发溶剂，获得黄橙色粘性残余物。将残余物溶解于水(25mL)中并且与二氯甲烷(50mL)搅拌。将DCM层取出并在通过LC-MS分析后丢弃，LC-MS显示仅有DIPU、副产物和基线杂质。将水层用TFA(1mL于3mL ACN中)酸化并且在真空中蒸发，获得浅色粘性残余物。通过反相制备型HPLC在Biotage 40+M(100g)C18HS柱上并且利用含有0.05％TFA的水中的梯度10-60％乙腈来纯化粗制残余物。将纯净流分混合在一起并且在真空中蒸发，在冻干后，得到呈无色冻干粉末形式的所需产物(305mg)。对该固体的LC-MS分析显示所需产物(3S)-3-(3-氯-5-(1-氰基环丁基)苯基)-3-(2-(3-羟基-5-((5-羟基-1，4，5，6-四氢嘧啶-2-基)氨基)苯甲酰胺基)乙酰胺基)丙酸的质量：m/z 569(35ClM+H)和m/z 571(37ClM+H)；C27H29ClN6O6的计算质量：569.01
1H NMR(400MHz，DMSO-d6)：δ1.94-2.06(m，1H)，2.20-2.34(dp，J＝11.3，8.8Hz，1H)，2.55-2.80(m，6H)，3.16(dt，J＝12.3，3.6Hz，2H)，3.28-3.38(dd/m，2H)，3.87(d，J＝5.8Hz，2H)，4.09(q，J＝3.3Hz，1H)，5.21(q，J＝7.5，1H)，5.43(brs，1H)，6.74(t，J＝2.1Hz，1H)，7.12(dt，J＝12.0Hz和1.5Hz，2H)，7.40(dt，J＝2.1，1.2Hz，3H)，8.12(brs，2H)，8.57(d，J＝8.20Hz，1H)，8.65(brt，J＝8.2Hz，1H)，9.64(s，1H)，10.02(brs，1H)，12.38(brs，1H)。样品的1H NMR谱与所需标题产物的结构一致。
实施例22
(3S)-3-(3-氯-5-(4-氰基四氢-2H-吡喃-4-基)苯基)-3-(2-(3-羟基-5-((5-羟基-1，4，5，6-四氢嘧啶-2-基)氨基)苯甲酰胺基)乙酰胺基)丙酸的制备
步骤1
(S)-3-氨基-3-(3-氯-5-(4-氰基四氢-2H-吡喃-4-基)苯基)丙酸乙酯盐酸盐的制备
部分A
通过酶促脂肪酶催化的对外消旋混合物的水解来制备(S)-3-氨基-3-(3-氯-5-(4-氰基四氢-2H-吡喃-4-基)苯基)丙酸
在50mM KH2PO4溶液(35mL)中搅拌外消旋-3-氨基-3-(3-氯-5-(4-氰基四氢-2H-吡喃-4-基)苯基)丙酸乙酯(实施例O)(943.4mg，2.801mmol)的悬浮液并且通过添加1N NaOH溶液和50mM KH2PO4溶液将水相的pH值调节为pH 8.32。添加Amano脂肪酶PS(1.0276g)并且将反应混合物在室温下搅拌5天。用MTBE(25mL)稀释反应混合物并且将混合物在室温下搅拌15min。分离水层与MTBE层；用MTBE(1×25mL)萃取水层。将MTBE层经无水Na2SO4干燥，过滤并且在真空中蒸发，获得浅黄色粘性液体(530.6mg)。对该液体的LC-MS分析显示(R)-3-氨基-3-(3-氯-5-(4-氰基四氢-2H-吡喃-4-基)苯基)丙酸乙酯的质量：m/z 337(35ClM+H)、m/z339(37ClM+H)、m/z 359(35ClM+Na)和m/z 361(37ClM+Na)；C17H21ClN2O3的计算质量：336.81。
在真空中蒸发MTBE萃取后的水层，获得含有(S)-COOH、Amano脂肪酶-PS和磷酸盐缓冲液的无色到奶油色的片状/胶状残余物(1.8270g)。对该残余物的LC-MS分析显示(S)-3-氨基-3-(3-氯-5-(4-氰基四氢-2H-吡喃-4-基)苯基)丙酸的质量：m/z 309(35ClM+H)、m/z311(37ClM+H)、m/z 331(35ClM+Na)和m/z 333(37ClM+Na)，m/z 617(35Cl，35Cl2M+Na)、m/z 619(35Cl，37Cl2M+Na)和m/z 621(37Cl，37Cl2M+Na)。上述粗制残余物将按原样用于酯化以合成：(S)-3-氨基-3-(3-氯-5-(4-氰基四氢-2H-吡喃-4-基)苯基)丙酸乙酯盐酸盐(步骤B)。
部分B
(S)-3-氨基-3-(3-氯-5-(4-氰基四氢-2H-吡喃-4-基)苯基)丙酸乙酯盐酸盐的制备
向来自上述步骤A的含有(S)-COOH(1.4mmol)、Amano脂肪酶-PS和磷酸盐缓冲液的粗制产物于无水乙醇(5mL)中的悬浮液中添加用无水HCl气体饱和的无水乙醇并且将反应混合物在回流下在氮气下加热6h，得到含有无色悬浮液的淡棕色溶液。将反应混合物冷却到室温并且过滤以去除不溶性悬浮液。在真空中蒸发滤液，得到棕色粘性液体(2.054g)。通过反相制备型HPLC在Biotage 40+M(100g)C18HS柱上并且利用含有0.05％TFA的水中的梯度10-60％乙腈来纯化上述粗制产物，获得呈浅黄色粘性残余物的所需产物。将残余物溶解于用无水HCl气体饱和的无水乙醇(5mL)中，在室温下搅拌5min并且在真空中蒸发，获得浅黄色粘性残余物，与乙醚(5mL)研磨并且在真空中蒸发，获得浅粉色泡沫状固体(314.3mg)。对该泡沫状固体的LC-MS分析显示所需产物(S)-3-氨基-3-(3-氯-5-(4-氰基四氢-2H-吡喃-4-基)苯基)丙酸乙酯的质量：m/z 337(35ClM+H)、m/z 339(37ClM+H)、m/z 359(35ClM+Na)和m/z 361(37ClM+Na)；C17H21ClN2O3的计算质量：336.81。
步骤2
(3S)-3-(3-氯-5-(4-氰基四氢-2H-吡喃-4-基)苯基)-3-(2-(3-羟基-5-((5-羟基-1，4，5，6-四氢嘧啶-2-基)氨基)苯甲酰胺基)乙酰胺基)丙酸乙酯的制备
将2-(3-羟基-5-((5-羟基-1，4，5，6-四氢嘧啶-2-基)氨基)苯甲酰胺基)乙酸(实施例B)(264.7mg，0.859mmol)、(S)-3-氨基-3-(3-氯-5-(4-氰基四氢-2H-吡喃-4-基)苯基)丙酸乙酯盐酸盐(来自上述步骤1)(314.3mg，0.842mmol)和1-羟基苯并三唑水合物(27.4mg，0.179mmol)的混合物溶解于DMF/DCM(1∶1)的混合物(8mL)中并且在室温下在氮气气氛下搅拌10min，得到奶油色悬浮液。将纯的N，N’-二异丙基碳化二亚胺(175μL，1.13mmol)添加到上述悬浮液上并且将反应混合物在室温下在氮气气氛下搅拌过夜。在真空中蒸发溶剂，得到浅黄奶色胶状残余物。对粗制残余物的LC-MS分析显示所需产物(3S)-3-(3-氯-5-(4-氰基四氢-2H-吡喃-4-基)苯基)-3-(2-(3-羟基-5-((5-羟基-1，4，5，6-四氢嘧啶-2-基)氨基)苯甲酰胺基)乙酰胺基)丙酸乙酯的质量：m/z 627(35ClM+H)和m/z 629(37ClM+H)；C30H35ClN6O7的计算质量：627.09。粗制残余物按原样用于利用氢氧化锂单水合物进行的皂化(步骤3)。
步骤3
(3S)-3-(3-氯-5-(4-氰基四氢-2H-吡喃-4-基)苯基)-3-(2-(3-羟基-5-((5-羟基-1，4，5，6-四氢嘧啶-2-基)氨基)苯甲酰胺基)乙酰胺基)丙酸的制备
向(3S)-3-(3-氯-5-(4-氰基四氢-2H-吡喃-4-基)苯基)-3-(2-(3-羟基-5-((5-羟基-1，4，5，6-四氢嘧啶-2-基)氨基)苯甲酰胺基)乙酰胺基)丙酸乙酯(来自上述步骤2)(0.842mmol，粗制残余物)于乙腈/水(1∶1)的混合物(6mL)中的悬浮液中添加氢氧化锂单水合物(180.0mg，4.289mmol)并且将反应混合物在室温下搅拌过夜。在真空中蒸发溶剂，获得黄橙色粘性残余物。将残余物溶解于水(25mL)中并且与二氯甲烷(50mL)搅拌。将水层分离并且用TFA(1mL于3mL ACN中)酸化并且在真空中蒸发，获得浅橙色粘性残余物。通过反相制备型HPLC在Biotage 40+M(100g)C18HS柱上并且利用含有0.05％TFA的水中的梯度10-60％乙腈来纯化粗制残余物，在冻干后，得到呈无色冻干粉末形式的所需产物(305mg)。对该固体的LC-MS分析显示所需产物的质量：m/z 599(35ClM+H)和m/z 601(37ClM+H)；C28H31ClN6O7的计算质量：599.03。
1H NMR(400MHz，DMSO-d6)：δ2.00-2.18(m，4H)，2.70-2.80(m，2H)，3.16(dt，J＝12.3，3.5Hz，2H)，3.33(brd，J＝12.7Hz，2H)，3.57-3.74(m，2H)，3.87(d，J＝5.9Hz，2H)，3.96-4.04(m，2H)，4.08(appt，1H)，5.22(q，J＝7.5Hz，1H)，6.75(t，J＝2.1Hz，1H)，7.12(dt，J＝12.0Hz和1.5Hz，2H)，7.43(t，J＝1.5Hz，1H)，7.46-7.53(m，2H)，8.11(d，J＝3.2HZ，2H)，8.57(d，J＝8.1Hz，1H)，8.66(t，J＝5.9Hz，1H)，9.62(s，1H)，10.02(brs，1H)，12.39(brs，1H)。样品的1H NMR谱与所需标题产物的结构一致。
实施例23
(3S)-3-(3-氯-5-(1，1，1-三氟-2-羟基丙-2-基)苯基)-3-(2-(3-羟基-5-((5-羟基-1，4，5，6-四氢嘧啶-2-基)氨基)苯甲酰胺基)乙酰胺基)丙酸的制备
步骤1
(S)-3-氨基-3-(3-氯-5-(1，1，1-三氟-2-羟基丙-2-基)苯基)丙酸乙酯盐酸盐的制备
部分A
通过酶促脂肪酶催化的对外消旋混合物的水解来制备(3S)-3-氨基-3-(3-氯-5-(1，1，1-三氟-2-羟基丙-2-基)苯基)丙酸
在室温下搅拌外消旋-3-氨基-3-(3-氯-5-(1，1，1-三氟-2-羟基丙-2-基)苯基)丙酸乙酯(实施例P)(1121.5mg，3.301mmol)于50mM KH2PO4溶液(40.0mL)中的悬浮液并且通过添加1.0N NaOH溶液将水层的pH值调节为pH 8.34。将Amano脂肪酶(1.20g)添加到上述悬浮液中并且在室温下搅拌反应混合物。在室温下搅拌6天后，用MTBE(25mL)稀释反应混合物并且在室温下搅拌反应混合物以萃取(R)-酯。分离水层与MTBE层并且用甲基叔丁基醚(MTBE)(1×25mL)萃取含有无色悬浮液/沉淀的水层。将合并的MTBE层用水(1×25mL)洗涤，经无水Na2SO4干燥，过滤并且在真空中蒸发，获得黄橙色粘性液体(502.0mg)。对该液体的LC-MS分析显示(3R)-3-氨基-3-(3-氯-5-(1，1，1-三氟-2-羟基丙-2-基)苯基)丙酸乙酯的质量：m/z340(35ClM+H)、m/z 342(37ClM+H)、m/z 362(35ClM+Na)和m/z 364(37ClM+Na)；C14H17ClF3NO3的计算质量：339.74。在真空中蒸发水层，获得含有(S)-COOH、Amano脂肪酶-PS和磷酸盐缓冲液的无色到奶油色的固体(2.2231g)。对该残余物的LC-MS分析还显示所需产物(3S)-3-氨基-3-(3-氯-5-(1，1，1-三氟-2-羟基丙-2-基)苯基)丙酸的质量：m/z 312(35ClM+H)、m/z314(37ClM+H)、m/z 334(35ClM+Na)和m/z 336(37ClM+Na)；C12H13ClF3NO3的计算质量：311.68。上述粗制残余物将按原样用于用无水HCl气体饱和的无水乙醇的酯化以合成：(3S)-3-氨基-3-(3-氯-5-(1，1，1-三氟-2-羟基丙-2-基)苯基)丙酸乙酯盐酸盐(步骤B)。
部分B
(S)-3-氨基-3-(3-氯-5-(1，1，1-三氟-2-羟基丙-2-基)苯基)丙酸乙酯盐酸盐的制备
向来自上述步骤A的含有(S)-酸、Amano脂肪酶和磷酸盐缓冲盐的粗制产物于无水乙醇(5mL)中的悬浮液中添加用无水HCl气体饱和的无水乙醇(15mL)并且在回流下在氮气下加热反应混合物，得到含有无色到灰色的悬浮液的棕色溶液。将反应混合物冷却到室温并且过滤以去除不溶性悬浮液。在真空中蒸发滤液，得到棕色泡沫状-胶状残余物(2.45g)。通过反相制备型HPLC在Biotage 40+M(100g)C18HS柱上并且利用含有0.05％TFA的水中的梯度10-60％乙腈来纯化粗制产物。将纯净流分混合在一起并且在真空中蒸发，获得浅黄色泡沫状粘性残余物(771.0mg)。将残余物溶解于用无水HCl气体饱和的无水乙醇(10mL)中，在回流下加热10min并且在真空中蒸发，获得浅黄色粘性残余物。将残余物与乙醚(10mL)研磨并且在真空中蒸发，得到奶油色泡沫状固体(622.0mg)。对该泡沫状固体的LC-MS分析显示所需产物(S)-3-氨基-3-(3-氯-5-(1，1，1-三氟-2-羟基丙-2-基)苯基)丙酸乙酯的质量：m/z 340(35ClM+H)、m/z 342(37ClM+H)、m/z362(35ClM+Na)和m/z 364(37ClM+Na)；C14H17ClF3NO3的计算质量：339.74。
步骤2
(3S)-3-(3-氯-5-(1，1，1-三氟-2-羟基丙-2-基)苯基)-3-(2-(3-羟基-5-((5-羟基-1，4，5，6-四氢嘧啶-2-基)氨基)苯甲酰胺基)乙酰胺基)丙酸乙酯的制备
将2-(3-羟基-5-((5-羟基-1，4，5，6-四氢嘧啶-2-基)氨基)苯甲酰胺基)乙酸(实施例B)(328.3mg，1.065mmol)、(3S)-3-氨基-3-(3-氯-5-(1，1，1-三氟-2-羟基丙-2-基)苯基)丙酸乙酯盐酸盐(来自上述步骤1)(364.2mg，0.968mmol)和1-羟基苯并三唑水合物(31.5mg，0.206mmol)的混合物溶解于DMF/DCM的混合物(1∶1)中并且在室温下在氮气气氛下搅拌10min，得到奶油色悬浮液。将N，N’-二异丙基碳化二亚胺(210μL，1.356mmol)添加到上述悬浮液中并且将反应混合物在室温下在氮气气氛下搅拌过夜(19h)。在真空中蒸发溶剂，得到黄奶油色胶状残余物。对粗制残余物的LC-MS分析显示所需产物(3S)-3-(3-氯-5-(1，1，1-三氟-2-甲基丙-2-基)苯基)-3-(2-(3-羟基-5-((5-羟基-1，4，5，6-四氢嘧啶-2-基)氨基)苯甲酰胺基)乙酰胺基)丙酸乙酯的质量：m/z 630(35ClM+H)和m/z 632(37ClM+H)；C27H31ClF3N5O7的计算质量：630.01。粗制残余物按原样用于利用氢氧化锂单水合物进行的皂化(步骤3)。
步骤3
(3S)-3-(3-氯-5-(1，1，1-三氟-2-羟基丙-2-基)苯基)-3-(2-(3-羟基-5-((5-羟基-1，4，5，6-四氢嘧啶-2-基)氨基)苯甲酰胺基)乙酰胺基)丙酸的制备
向(3S)-3-(3-氯-5-(1，1，1-三氟-2-羟基丙-2-基)苯基)-3-(2-(3-羟基-5-((5-羟基-1，4，5，6-四氢嘧啶-2-基)氨基)苯甲酰胺基)乙酰胺基)丙酸乙酯(来自上述步骤2)(0.968mmol，粗制残余物)于乙腈/水(1∶1)的混合物(8mL)中的悬浮液中添加氢氧化锂单水合物(203.1mg，4.84mmol)并且将反应混合物在室温下搅拌过夜(15h)。在真空中蒸发溶剂，获得黄橙色粘性残余物。将残余物溶解于水(25mL)中并且与二氯甲烷(50mL)搅拌。将DCM层取出并在通过LC-MS分析后丢弃。用TFA(1mL于3mL ACN中)中和水层并且在真空中蒸发，获得浅色粘性残余物。通过反相制备型HPLC在Biotage 40+M(100g)C18HS柱上并且利用含有0.05％TFA的水中的梯度10-60％乙腈来纯化粗制残余物，在冻干后，获得呈无色冻干粉末形式的所需产物(439.2mg)。对该固体的LC-MS分析显示所需产物(3S)-3-(3-氯-5-(1，1，1-三氟-2-羟基丙-2-基)苯基)-3-(2-(3-羟基-5-((5-羟基-1，4，5，6-四氢嘧啶-2-基)氨基)苯甲酰胺基)乙酰胺基)丙酸的质量：m/z 602(35ClM+H)和m/z 604(37ClM+H)；C25H27ClF3N5O7的计算质量：601.96。1H NMR(400MHz，DMSO-d6)：δ1.69(s，3H)，2.72(d，J＝7.0Hz，2H)，3.16(d，J＝12.8Hz，2H)，3.33(d，J＝12.7Hz，2H)，3.87(d，J＝5.3Hz，2H)，4.08(s，1H)，5.21(appq，1H)，5.45(brs，1H)，6.74(brs，1H)，6.79(brs，1H)，7.12(dt/m，2H)，7.41(s，1H)，7.49(brs，2H)，8.14(brs，2H)，8.58(dd/m，1H)，8.63(brt，1H)，9.67(brs，1H)，10.03(brs，1H)，12.40(brs，1H)。样品的1H NMR谱与所需标题产物的结构一致。
实施例24
(3S)-3-(3-氯-5-(1，1，1-三氟-2-甲基丙-2-基)苯基)-3-(2-(3-羟基-5-((5-羟基-1，4，5，6-四氢嘧啶-2-基)氨基)苯甲酰胺基)乙酰胺基)丙酸的制备
步骤1
(S)-3-氨基-3-(3-氯-5-(1，1，1-三氟-2-甲基丙-2-基)苯基)丙酸乙酯盐酸盐的制备
部分A
通过酶促脂肪酶催化的对外消旋混合物的水解来制备(S)-3-氨基-3-(3-氯-5-(1，1，1-三氟-2-甲基丙-2-基)苯基)丙酸
在50mM KH2PO4溶液(40mL)中搅拌外消旋-3-氨基-3-(3-氯-5-(1，1，1-三氟-2-甲基丙-2-基)苯基)丙酸乙酯(实施例Q)(921.7mg，2.729mmol)的悬浮液。通过添加1N NaOH溶液和50mM KH2PO4溶液将水相的pH值调节为pH 8.32。将Amano脂肪酶PS洋葱伯霍尔德杆菌(Burkholderia cepacia)(1.15g)添加到上述反应混合物中并且在室温下搅拌反应混合物。用MTBE(25mL)稀释搅拌7天后的反应混合物，在室温下搅拌15min并且将混合物过滤以去除沉淀的固体。用丙酮(2×25mL)洗涤固体并且在真空中干燥，获得白色粉末(252.8mg)。对该固体的LC-MS分析显示所需产物(S)-3-氨基-3-(3-氯-5-(1，1，1-三氟-2-甲基丙-2-基)苯基)丙酸的质量：m/z 310(35ClM+H)、m/z 312(37ClM+H)、m/z 332(35ClM+Na)和m/z 334(37ClM+Na)；C13H15ClF3NO2的计算质量：309.71。分离水层与MTBE层；用MTBE(1×25mL)萃取水层。将合并的MTBE层经无水Na2SO4干燥，过滤并且在真空中蒸发，获得浅黄色粘性液体(465mg)。对该液体的LC-MS分析显示(R)-3-氨基-3-(3-氯-5-(1，1，1-三氟-2-甲基丙-2-基)苯基)丙酸乙酯的质量：m/z 338(35ClM+H)、m/z 340(37ClM+H)、m/z 360(35ClM+Na)和m/z362(37ClM+Na)；C15H19ClF3NO2的计算质量：337.77。在真空中蒸发MTBE萃取后的水层，获得含有(S)-COOH、Amano脂肪酶-PS和磷酸盐缓冲液的无色到奶油色的胶状残余物(1.9845g)。将残余物与水和乙腈的混合物研磨，获得无色沉淀，过滤，用水和乙腈洗涤并且在真空中干燥，获得(S)-3-氨基-3-(3-氯-5-(1，1，1-三氟-2-甲基丙-2-基)苯基)丙酸的无色微晶固体(146.3mg，第2批)。将第2批去除后的滤液在真空中蒸发，获得含有(S)-COOH、Amano脂肪酶-PS和磷酸盐缓冲液的无色胶状残余物。通过反相制备型HPLC在Biotage 40+M(100g)C18HS柱上并且利用含有0.05％TFA的水中的梯度10-60％乙腈来纯化该残余物。将纯净流分混合在一起并且在真空中蒸发，获得无色结晶固体(46.4mg，第3批)。
部分B
(S)-3-氨基-3-(3-氯-5-(1，1，1-三氟-2-甲基丙-2-基)苯基)丙酸乙酯盐酸盐的制备
将用无水HCl气体饱和的无水乙醇(10mL)添加到(S)-3-氨基-3-(3-氯-5-(1，1，1-三氟-2-甲基丙-2-基)苯基)丙酸(来自上述步骤A)(252.8mg，0.816mmol)于无水乙醇(5mL)中的悬浮液中并且将反应混合物在回流下加热4h，得到无色溶液。在真空中去除溶剂，得到无色胶状固体。用乙醚将固体浆体化几次(2×5mL)。在倾析掉溶剂后，将残余物在真空中干燥，得到呈奶油色泡沫状固体形式的所需(S)-3-氨基-3-(3-氯-5-(1，1，1-三氟-2-甲基丙-2-基)苯基)丙酸乙酯盐酸盐(293.76mg)。对该固体的LC-MS分析显示所需产物的质量：m/z338(35ClM+H)、m/z 340(37ClM+H)、m/z 360(35ClM+Na)和m/z 362(37ClM+Na)；C15H19ClF3NO2的计算质量：337.77。
步骤2
(3S)-3-(3-氯-5-(1，1，1-三氟-2-甲基丙-2-基)苯基)-3-(2-(3-羟基-5-((5-羟基-1，4，5，6-四氢嘧啶-2-基)氨基)苯甲酰胺基)乙酰胺基)丙酸乙酯的制备
将2-(3-羟基-5-((5-羟基-1，4，5，6-四氢嘧啶-2-基)氨基)苯甲酰胺基)乙酸(实施例B)(242mg，0.785mmol)、(S)-3-氨基-3-(3-氯-5-(1，1，1-三氟-2-甲基丙-2-基)苯基)丙酸乙酯盐酸盐(来自上述步骤1)(293.76mg，0.785mmol)和1-羟基苯并三唑水合物(24.1mg，0.157mmol)的混合物溶解于DMF/DCM的混合物(1∶1)(8mL)中并且在室温下在氮气气氛下搅拌10min，得到奶油色悬浮液。将N，N’-二异丙基碳化二亚胺(170μL，1.098mmol)添加到上述悬浮液中并且将反应混合物在室温下在氮气气氛下搅拌过夜(19h)。在真空中蒸发溶剂，得到浅黄色粘性胶状残余物(917.0mg)。对粗制残余物的LC-MS分析显示所需产物(3S)-3-(3-氯-5-(1，1，1-三氟-2-甲基丙-2-基)苯基)-3-(2-(3-羟基-5-((5-羟基-1，4，5，6-四氢嘧啶-2-基)氨基)苯甲酰胺基)乙酰胺基)丙酸乙酯的质量：m/z 628(35ClM+H)和m/z630(37ClM+H)；C28H33ClF3N5O6的计算质量：628.04。粗制残余物将按原样用于利用氢氧化锂单水合物进行的皂化。(步骤3)。
步骤3
(3S)-3-(3-氯-5-(1，1，1-三氟-2-甲基丙-2-基)苯基)-3-(2-(3-羟基-5-((5-羟基-1，4，5，6-四氢嘧啶-2-基)氨基)苯甲酰胺基)乙酰胺基)丙酸的制备
向(3S)-3-(3-氯-5-(1，1，1-三氟-2-甲基丙-2-基)苯基)-3-(2-(3-羟基-5-((5-羟基-1，4，5，6-四氢嘧啶-2-基)氨基)苯甲酰胺基)乙酰胺基)丙酸乙酯(来自上述步骤2)(0.785mmol，粗制残余物)于乙腈/水(1∶1)的混合物(6mL)中的悬浮液中添加氢氧化锂单水合物(165mg，3.932mmol)并且将反应混合物在室温下搅拌过夜。在真空中蒸发溶剂，获得黄橙色粘性残余物并且将残余物溶解于水(25mL)中且与二氯甲烷(50mL)搅拌15min。将水层分离，用TFA(1mL于3mL ACN中)酸化并且在真空中蒸发，获得浅色粘性残余物。通过反相制备型HPLC在Biotage 40+M(100g)C18HS柱上并且利用含有0.05％TFA的水中的梯度10-60％乙腈来纯化粗制残余物，在冻干后，获得呈无色冻干粉末形式的所需产物(277.7mg)。对该残余物的LC-MS分析显示所需产物(3S)-3-(3-氯-5-(1，1，1-三氟-2-甲基丙-2-基)苯基)-3-(2-(3-羟基-5-((5-羟基-1，4，5，6-四氢嘧啶-2-基)氨基)苯甲酰胺基)乙酰胺基)丙酸的质量：m/z 600(35ClM+H)和m/z 602(37ClM+H)；C26H29ClF3N5O6的计算质量：599.99。
1H NMR(400MHz，DMSO-d6)：δ1.55(s，6H)，2.72(dd，J＝7.9，3.4Hz，2H)，3.16(d，J＝12.6Hz，2H)，3.34(d，J＝12.7Hz，2H)，3.86(appt，2H)，4.08(s，1H)，4.08(s，1H)，5.22(q，J＝8.2Hz，1H)，5.54(brs，1H)，6.75(brs，1H)，7.12(dd，J＝11.0，3.2Hz，2H)，7.42(dd，J＝11.0，3.2Hz，2H)，7.47(s，1H)，8.15(d，J＝3.9Hz，2H)，)，8.15(s，2H)，8.57(brd，1H)，8.64(brm，1H)，9.68(s，1H)，10.03(s，1H)，12.38(brs，1H，-COOH)。样品的1H NMR谱与所需标题产物的结构一致。
实施例25
(3S)-3-(2-(3-羟基-5-((5-羟基-1，4，5，6-四氢嘧啶-2-基)氨基)苯甲酰胺基)乙酰胺基)-3-(3-(1，1，1-三氟-2-羟基丙-2-基)-5-(三氟甲基)苯基)丙酸的制备
步骤1
(3S)-3-氨基-3-(3-(1，1，1-三氟-2-羟基丙-2-基)-5-(三氟甲基)苯基)丙酸乙酯盐酸盐的制备
部分A
通过酶促脂肪酶催化的对外消旋混合物的水解来制备(3S)-3-氨基-3-(3-(1，1，1-三氟-2-羟基丙-2-基)-5-(三氟甲基)苯基)丙酸
在50mM KH2PO4溶液(35mL)中搅拌外消旋-3-氨基-3-(3-(1，1，1-三氟-2-羟基丙-2-基)-5-(三氟甲基)苯基)丙酸乙酯(实施例R)(1.001g，2.682mmol)的悬浮液并且通过添加1N NaOH溶液和50mM KH2PO4溶液将水相的pH调节为pH 8.25。添加Amano脂肪酶PS(1.1522g)并且将反应混合物在室温下搅拌6天，得到微浑溶液。用MTBE(25mL)稀释反应混合物并且将混合物在室温下搅拌15min。分离水层与MTBE层，并且用MTBE(1×25mL)萃取水层。将合并的MTBE层经无水Na2SO4干燥，过滤并且在真空中蒸发，获得浅黄色粘性液体(552.2mg)。对该液体的LC-MS分析显示(3R)-3-氨基-3-(3-(1，1，1-三氟-2-羟基丙-2-基)-5-(三氟甲基)苯基)丙酸乙酯的质量：m/z 374(M+H)和m/z 396(M+Na)；C15H17F6NO3的计算质量：373.29。
在真空中蒸发水层，获得含有(S)-COOH以及Amano脂肪酶和磷酸盐缓冲盐的无色到奶油色的胶状固体(2.2554g)。对该固体的LC-MS分析显示所需(3S)-3-氨基-3-(3-(1，1，1-三氟-2-羟基丙-2-基)-5-(三氟甲基)苯基)丙酸的质量：m/z 346(M+H)和m/z 368(M+Na)；C13H13F6NO3的计算质量：345.24。粗制固体将按原样用于合成β-氨基酯。(步骤B)。
部分B
(3S)-3-氨基-3-(3-(1，1，1-三氟-2-羟基丙-2-基)-5-(三氟甲基)苯基)丙酸乙酯盐酸盐的制备
向来自上述步骤A的含有(S)-COOH(约1.34mmol)、Amano脂肪酶-PS和磷酸盐缓冲液的粗制产物于无水乙醇(5mL)中的悬浮液中添加用无水HCl气体饱和的无水乙醇(10mL)并且将反应混合物在回流下在氮气下加热3h，得到含有无色悬浮液的淡棕色溶液。将反应混合物冷却到室温，过滤并且将滤液在真空中蒸发，得到淡黄棕色粘性液体(2.4556g)。通过反相制备型HPLC在Biotage 40+M(100g)C18HS柱上并且利用含有0.05％TFA的水中的梯度10-60％乙腈来纯化粗制产物，获得呈浅黄色粘性液体的所需产物。将残余物溶解于用无水HCl气体饱和的无水乙醇(5mL)中，在室温下搅拌5min并且在真空中蒸发，获得浅黄色粘性残余物，与乙醚(5mL)研磨并且在真空中蒸发，获得浅粉奶油色泡沫状固体(483.4mg)。对该固体的LC-MS分析显示所需产物(3S)-3-氨基-3-(3-(1，1，1-三氟-2-羟基丙-2-基)-5-(三氟甲基)苯基)丙酸乙酯的质量：m/z 374(M+H)和m/z396(M+Na)；C15H17F6NO3的计算质量：373.29。
步骤2
(3S)-3-(2-(3-羟基-5-((5-羟基-1，4，5，6-四氢嘧啶-2-基)氨基)苯甲酰胺基)乙酰胺基)-3-(3-(1，1，1-三氟-2-羟基丙-2-基)-5-(三氟甲基)苯基)丙酸乙酯的制备
将2-(3-羟基-5-((5-羟基-1，4，5，6-四氢嘧啶-2-基)氨基)苯甲酰胺基)乙酸(实施例B)(232.4mg，0.754mmol)、(3S)-3-氨基-3-(3-(1，1，1-三氟-2-羟基丙-2-基)-5-(三氟甲基)苯基)丙酸乙酯盐酸盐(来自上述步骤1)(290.0mg，0.708mmol)和1-羟基苯并三唑水合物(22.2mg，0.145mmol)的混合物溶解于DMF/DCM(1∶1)的混合物(8mL)中并且在室温下在氮气气氛下搅拌10min，得到奶油色悬浮液。添加N，N’-二异丙基碳化二亚胺(150μL，0.969mmol)并且将反应混合物在室温下在氮气气氛下搅拌过夜。在真空中蒸发溶剂，得到以下中间产物的浅黄奶色胶状残余物：(3S)-3-(2-(3-羟基-5-((5-羟基-1，4，5，6-四氢嘧啶-2-基)氨基)苯甲酰胺基)乙酰胺基)-3-(3-(1，1，1-三氟-2-羟基丙-2-基)-5-(三氟甲基)苯基)丙酸乙酯。对粗制残余物的LC-MS分析显示所需产物的质量：m/z 664(M+H)和m/z686(M+Na)；C28H31F6N5O7的计算质量：663.57。粗制残余物将不进一步纯化即用于利用LiOH单水合物进行的皂化(步骤3)。
步骤3
(3S)-3-(2-(3-羟基-5-((5-羟基-1，4，5，6-四氢嘧啶-2-基)氨基)苯甲酰胺基)乙酰胺基)-3-(3-(1，1，1-三氟-2-羟基丙-2-基)-5-(三氟甲基)苯基)丙酸的制备
向(3S)-3-(2-(3-羟基-5-((5-羟基-1，4，5，6-四氢嘧啶-2-基)氨基)苯甲酰胺基)乙酰胺基)-3-(3-(1，1，1-三氟-2-羟基丙-2-基)-5-(三氟甲基)苯基)丙酸乙酯(来自上述步骤2)(约708mmol，粗制残余物)于乙腈/水(1∶1)的混合物(6mL)中的悬浮液中添加氢氧化锂单水合物(150mg，3.575mmol)并且将反应混合物在室温下搅拌过夜。在真空中蒸发溶剂，获得黄橙色粘性残余物。将残余物溶解于水(25mL)中并且与二氯甲烷(50mL)搅拌以去除脲。将水层用TFA(1mL于3mL ACN中)中和并且在真空中蒸发，获得浅色粘性残余物。通过反相制备型HPLC在Biotage 40+M(100g)C18HS柱上并且利用含有0.05％TFA的水中的梯度10-60％乙腈来纯化粗制残余物，在冻干后，得到呈无色冻干粉末形式的所需产物(287.8mg)。对该固体的LC-MS分析显示所需产物的质量：m/z 636(M+H)；C26H27F6N5O7的计算质量：635.51
1H NMR(400MHz，DMSO-d6)：δ1.74(s，3H)，2.68-2.85(m，2H)，3.15(dt，J＝12.2，3.7Hz，2H)，3.33(d，J＝12.6Hz，2H)，3.80-3.96(m，2H)，4.09(q，J＝3.5Hz，1H)，5.29(q，J＝7.2Hz，1H)，6.74(t，J＝2.0Hz，1H)，6.91(brs，1H)，7.10(brt，1H)，7.13(brt，1H)，7.52(s，1H)，7.71(t，J＝1.6Hz，1H)，7.81(dd，J＝26.3，4.6Hz，2H)，8.13(brs，2H)，8.55-8.75(m，2H)，9.65(s，1H)，10.02(brs，1H)，12.40(brs，1H)。样品的1H NMR谱与所需标题产物的结构一致。
实施例26
(3S)-3-(3-溴-5-(1-(二氟甲基)环丙基)苯基)-3-(2-(3-羟基-5-((5-羟基-1，4，5，6-四氢嘧啶-2-基)氨基)苯甲酰胺基)乙酰胺基)丙酸的制备
步骤1
(S)-3-氨基-3-(3-溴-5-(1-(二氟甲基)环丙基)苯基)丙酸乙酯盐酸盐的制备
部分A
通过酶促脂肪酶催化的对外消旋混合物的水解来制备(S)-3-氨基-3-(3-溴-5-(1-(二氟甲基)环丙基)苯基)丙酸
在50mM KH2PO4溶液(40mL)中搅拌外消旋-3-氨基-3-(3-溴-5-(1-(二氟甲基)环丙基)苯基)丙酸乙酯(实施例S)(1010.2mg，2.789mmol)的悬浮液。通过添加1N NaOH溶液和50mM KH2PO4溶液将水相的pH值调节为pH 8.32。添加来自洋葱伯霍尔德杆菌的Amano脂肪酶PS(1.2152g)并且将反应混合物在室温下搅拌26h。用MTBE(50mL)稀释反应混合物并且在室温下搅拌该混合物并且分离水层与MTBE层。用MTBE(1×25mL)萃取含有无色悬浮液/沉淀的水层。将合并的MTBE层用水(1×25mL)洗涤，经无水Na2SO4干燥，过滤并且在真空中蒸发，获得黄橙色粘性液体(567mg)。对该液体的LC-MS分析显示(R)-3-氨基-3-(3-溴-5-(1-(二氟甲基)环丙基)苯基)丙酸乙酯的质量：m/z 362(79BrM+H)、m/z 364(81BrM+H)、m/z 384(79BrM+Na)和m/z 386(81BrM+Na)；C15H18BrF2NO2的计算质量：362.21。将MTBE萃取后的水层过滤以去除沉淀的(S)-COOH，用水与乙腈的混合物(1∶1)洗涤该固体并且在真空中干燥，获得无色粉末(225.5mg)。对该固体的LC-MS分析显示所需(S)-3-氨基-3-(3-溴-5-(1-(二氟甲基)环丙基)苯基)丙酸的质量：m/z 334(79BrM+H)、m/z 336(81BrM+H)、m/z 356(79BrM+Na)和m/z 358(81BrM+Na)；C13H14BrF2NO2的计算质量：334.16。上述固体将按原样用于用无水HCl气体饱和的无水乙醇的酯化。(步骤B)。
部分B
(S)-3-氨基-3-(3-溴-5-(1-(二氟甲基)环丙基)苯基)丙酸乙酯盐酸盐的制备
向(S)-3-氨基-3-(3-溴-5-(1-(二氟甲基)环丙基)苯基)丙酸(来自上述步骤A)(225.5mg，0.675mmol)于无水乙醇(3mL)中的溶液中添加用无水HCl气体饱和的无水乙醇(7mL)并且将反应混合物在回流下在氮气下加热3h，得到无色溶液。在真空中蒸发溶剂，得到无色粘性液体。将残余物与乙醚(10mL)研磨并且在真空中蒸发溶剂，得到呈无色泡沫状固体形式的所需(S)-3-氨基-3-(3-溴-5-(1-(二氟甲基)环丙基)苯基)丙酸乙酯盐酸盐(253.0mg)。对该固体的LC-MS分析显示所需产物的质量：m/z 362(79BrM+H)、m/z 364(81BrM+H)、m/z 384(79BrM+Na)和m/z 386(81BrM+Na)；)；C15H18BrF2NO2的计算质量：362.21。该分离固体将按原样用于下一步骤。
步骤2
(3S)-3-(3-溴-5-(1-(二氟甲基)环丙基)苯基)-3-(2-(3-羟基-5-((5-羟基-1，4，5，6-四氢嘧啶-2-基)氨基)苯甲酰胺基)乙酰胺基)丙酸乙酯的制备
将2-(3-羟基-5-((5-羟基-1，4，5，6-四氢嘧啶-2-基)氨基)苯甲酰胺基)乙酸(实施例B)(197.22mg，0.64mmol)、(S)-3-氨基-3-(3-溴-5-(1-(二氟甲基)环丙基)苯基)丙酸乙酯盐酸盐(来自上述步骤1)(253mg，0.635mmol)和1-羟基苯并三唑水合物(19.44mg，0.127mmol)的混合物溶解于DMF/DCM(1∶1)的混合物(8mL)中并且在室温下在氮气气氛下搅拌10min，得到奶油色悬浮液。将N，N’-二异丙基碳化二亚胺(142μL，0.917mmol)添加到上述悬浮液中并且将反应混合物在室温下在氮气气氛下搅拌过夜(16h)。在真空中蒸发溶剂，得到以下中间产物的黄色胶状残余物：LC-MS分析显示所需产物：(3S)-3-(3-溴-5-(1-(二氟甲基)环丙基)苯基)-3-(2-(3-羟基-5-((5-羟基-1，4，5，6-四氢嘧啶-2-基)氨基)苯甲酰胺基)乙酰胺基)丙酸乙酯的质量：m/z652(79BrM+H)、m/z 654(81BrM+H)。粗制残余物将按原样用于利用氢氧化锂单水合物进行的皂化(步骤3)。
步骤3
(3S)-3-(3-溴-5-(1-(二氟甲基)环丙基)苯基)-3-(2-(3-羟基-5-((5-羟基-1，4，5，6-四氢嘧啶-2-基)氨基)苯甲酰胺基)乙酰胺基)丙酸的制备
向(3S)-3-(3-溴-5-(1-(二氟甲基)环丙基)苯基)-3-(2-(3-羟基-5-((5-羟基-1，4，5，6-四氢嘧啶-2-基)氨基)苯甲酰胺基)乙酰胺基)丙酸乙酯(来自上述步骤2)(0.635mmol，粗制残余物)于乙腈/水(1∶1)的混合物(6mL)中的悬浮液中添加氢氧化锂单水合物(135mg，3.217mmol)并且将反应混合物在室温下搅拌过夜。在真空中蒸发溶剂，获得浅黄色结晶残余物。将残余物溶解于水(25mL)中并且与二氯甲烷(50mL)搅拌以去除脲。将水层用TFA(1mL于3mL ACN中)中和并且在真空中蒸发，获得浅黄色粘性残余物。通过反相制备型HPLC在Biotage 40+M(100g)C18HS柱上并且利用含有0.05％TFA的水中的梯度10-60％乙腈来纯化粗制残余物，在冻干后，得到呈无色冻干粉末形式的所需产物(94.0mg)。对产物的LC-MS分析显示所需产物的质量：m/z 624(79BrM+H)和m/z 626(81BrM+H)；C26H28BrF2N5O6的计算质量：624.43。
1H NMR(400MHz，DMSO-d6)：δ1.00(d，J＝8.9Hz，2H)，1.12(q，J＝4.2，3.2Hz，2H)，2.70(d，J＝7.2Hz，2H)，3.15(d，J＝12.6Hz，2H)，3.33(d，J＝12.8Hz，2H)，3.85(d，J＝5.8Hz，2H)，4.08(appt，1H)，5.17(q，J＝7.5Hz，1H)，5.45(brs，1H)，5.89(t，J＝56.1Hz，1H)，6.74(t，J＝2.0Hz，1H)，7.12(dt，J＝10.2，1.6Hz，2H)，7.32(t，J＝1.6Hz，1H)，7.44(dt，J＝16.9，1.7Hz，1H)，8.13(d，J＝2.4Hz，2H)，8.54(d，J＝8.2Hz，1H)，8.63(t，J＝5.9Hz，1H)，9.65(s，1H)，10.03(brs，1H)，12.4(brs，1H)。样品的1H NMR谱与所需标题产物的结构一致。
实施例27-生物测定结果
在以下测定中测试本发明的化合物的活性：表2中显示结果：
针对α5β1功能的固相受体测定.将在TBS+缓冲液(25mM Tris 7.4，137mM NaCl，2.7mM KCl，1mM CaCl2，1mM MgCl2，1mM MnCl2)中稀释成2μg/mL的纯化的人纤连蛋白(R&DSystems，1918-FN)添加到96孔半孔透明微量滴定板(Greiner 675061)的孔(50μL/孔)中并且在4℃孵育过夜。用150μL TBS+将孔洗涤3次并且添加150μl阻断缓冲液(具有1％牛血清白蛋白(Sigma A7906)的TBS+)。将该板在37℃孵育1hr并且然后用TBS+缓冲液洗涤3×。将重组人整合素α5β1(R&D Systems，3230-A5)在TBS+/0.1％牛血清白蛋白中稀释成0.1μg/mL。将化合物以1∶100稀释到整合素溶液中并且然后根据标准模板将50μL添加到经洗涤的纤连蛋白涂覆板的空孔中，每个样品以一式三份重复。在室温下孵育两小时后，用150μLTBS+缓冲液将板洗涤3×。向每个孔中添加以0.5ug/mL于TBS+/0.1％BSA中的50μL生物素化的抗α5抗体(R&D Systems，BAF 1864)并且将板覆盖且在室温下孵育1hr。用150μL TBS+缓冲液将板洗涤3×后，将在TBS+阻断缓冲液中稀释的50μL抗生蛋白链菌素缀合的辣根过氧化物酶(R&D Systems，DY998)添加到孔中并且将板在室温下孵育20min。用TBS+缓冲液将板洗涤3×，之后将50μL室温TMB底物(Sigma，T444)添加到各孔中并且将板在室温下孵育20min。任选地利用25μL终止溶液(Sigma S5689)终止反应。通过比色检测在650nm波长下使用Tecan Safire II板读取器读取板。通过非线性回归(最佳拟合)分析构建浓度响应曲线，并且计算每种化合物的IC50值。
针对αvβ1功能的固相受体测定.将在TBS+缓冲液(25mM Tris 7.4，137mM NaCl，2.7mM KCl，1mM CaCl2，1mM MgCl2，1mM MnCl2)中稀释成5μg/mL的纯化的人纤连蛋白(R&DSystems，1918-FN)添加到96孔半孔透明微量滴定板(Greiner 675061)的孔(50μL/孔)中并且在4℃孵育过夜。用150μl TBS+将孔洗涤3次并且添加150μL阻断缓冲液(具有1％牛血清白蛋白(Sigma A7906)的TBS+)。将该板在37℃孵育1hr并且然后用TBS+缓冲液洗涤3×。将重组人整合素αvβ1(R&D Systems.6579-AV)在TBS+/0.1％牛血清白蛋白中稀释成2.0μg/mL。将化合物以1∶100稀释到整合素溶液中并且根据标准模板将50μL添加到经洗涤的纤连蛋白涂覆板的空孔中，每个样品以一式三份重复。在室温下孵育两小时后，用150μL TBS+缓冲液将板洗涤3×。向每个孔中添加以1μg/mL于TBS+/0.1％BSA中的50μL生物素化的抗αv抗体(R&D Systems，BAF1219)并且将板覆盖且在室温下孵育1hr。用150μL TBS+缓冲液将板洗涤3×后，将在TBS+阻断缓冲液中稀释的50μL抗生蛋白链菌素缀合的辣根过氧化物酶(R&DSystems，DY998)添加到孔中并且将板在室温下孵育20min。用TBS+缓冲液将板洗涤3×，之后将50μL TMB底物(Sigma，T444)添加到各孔中并且将板在室温下孵育20min。任选地利用25μL终止溶液(Sigma S5689)终止反应。通过比色检测在650nm波长下使用Tecan SafireII板读取器读取板。通过非线性回归(最佳拟合)分析构建浓度响应曲线，并且计算每种化合物的IC50值。
针对αvβ3功能的固相受体测定.将在TBS+缓冲液(25mM Tris 7.4，137mM NaCl，2.7mM KCl，1mM CaCl2，1mM MgCl2，1mM MnCl2)中稀释成1μg/mL的重组人类玻连蛋白(R&DSystems，2308-VN)添加到96孔半孔透明微量滴定板(Greiner 675061)的孔(50μL/孔)中并且在4℃孵育过夜。用150μL TBS+将孔洗涤3次并且添加150μL阻断缓冲液(具有1％牛血清白蛋白(Sigma A7906)的TBS+)。将该板在37℃孵育1hr并且然后用TBS+缓冲液洗涤3×。将重组人整合素αvβ3(R&D Systems，3050-AV)在TBS+/0.1％牛血清白蛋白中稀释成1μg/mL。将化合物以1∶100稀释到整合素溶液中并且然后根据标准模板将50μL添加到经洗涤的玻连蛋白涂覆板的空孔中，每个样品以一式三份重复。在室温下孵育两小时后，用150μL TBS+缓冲液将板洗涤3×。向每个孔中添加以0.5μg/mL于TBS+/0.1％BSA中的50μL生物素化的抗αv抗体(R&D Systems，BAF1219)并且将板覆盖且在室温下孵育1hr。用150μL TBS+缓冲液将板洗涤3×后，将在TBS+阻断缓冲液中稀释的50μL抗生蛋白链菌素缀合的辣根过氧化物酶(R&D Systems，DY998)添加到孔中并且将板在室温下孵育20min。用TBS+缓冲液将板洗涤3×，之后将50μL TMB底物(Sigma，T444)添加到各孔中并且将板在室温下孵育20min。任选地利用25μL终止溶液(Sigma S5689)终止反应。通过比色检测在650nm波长下使用Tecan SafireII板读取器读取板。通过非线性回归(最佳拟合)分析构建浓度响应曲线，并且计算每种化合物的IC50值。
针对αvβ5功能的固相受体测定.将以0.25μg/mL在TBS+缓冲液(25mM Tris 7.4，137mM NaCl，2.7mM KCl，1mM CaCl2，1mM MgCl2，1mM MnCl2)中的重组人玻连蛋白(R&DSystems，2308-VN)添加到96孔半孔透明微量滴定板(Greiner 675061)的孔(50μL/孔)中并且在4℃孵育过夜。用150μL TBS+将孔洗涤3次并且添加150μL阻断缓冲液(具有1％牛血清白蛋白(Sigma A7906)的TBS+)。将该板在37℃孵育1hr并且然后用TBS+缓冲液洗涤3×。将重组人整合素αvβ5(R&D Systems，2528-AV)在TBS+/0.1％牛血清白蛋白中稀释成0.1μg/mL。将化合物以1∶100稀释到整合素溶液中并且然后根据标准模板将50μL添加到经洗涤的玻连蛋白涂覆板的空孔中，每个样品以一式三份重复。在室温下孵育两小时后，用150μLTBS+缓冲液将板洗涤3×。向每个孔中添加以0.5μg/mL于TBS+/0.1％BSA中的50μL生物素化的抗αv抗体(R&D Systems，BAF1219)并且将板覆盖且在室温下孵育1hr。用150μL TBS+缓冲液将板洗涤3×后，将在TBS+阻断缓冲液中稀释的50μL抗生蛋白链菌素缀合的辣根过氧化物酶(R&D Systemsm，DY998)添加到孔中并且将板在室温下孵育20min。用TBS+缓冲液将板洗涤3×，之后将50μL TMB底物(Sigma，T444)添加到各孔中并且将板在室温下孵育20min。任选地利用25μL终止溶液(Sigma S5689)终止反应。通过比色检测在650nm波长下使用Tecan Safire II板读取器读取板。通过非线性回归(最佳拟合)分析构建浓度响应曲线，并且计算每种化合物的IC50值。
针对αvβ6功能的固相受体测定.将在TBS+缓冲液(25mM Tris 7.4，137mM NaCl，2.7mM KCl，1mM CaCl2，1mM MgCl2，1mM MnCl2)中稀释成0.25μg/mL的重组人LAP(R&DSystems，246-LP)添加到96孔半孔透明微量滴定板(Greiner 675061)的孔(50μL/孔)中并且在4℃孵育过夜。用150μL TBS+将孔洗涤3次并且添加150μl阻断缓冲液(具有1％牛血清白蛋白(Sigma A7906)的TBS+)。将该板在37℃孵育1hr并且然后用TBS+缓冲液洗涤3×。将重组人整合素αvβ6(R&D Systems，3817-AV)在TBS+/0.1％牛血清白蛋白中稀释成0.1μg/mL。将化合物以1∶100稀释到整合素溶液中并且然后根据标准模板将50μL添加到经洗涤的LAP涂覆板的空孔中，每个样品以一式三份重复。在室温下孵育两小时后，用150μL TBS+缓冲液将板洗涤3×。向每个孔中添加以0.5μg/mL于TBS+/0.1％BSA中的50μL生物素化的抗αv抗体(R&D Systems，BAF1219)并且将板覆盖且在室温下孵育1hr。用150μL TBS+缓冲液将板洗涤3×后，将在TBS+阻断缓冲液中稀释的50μL抗生蛋白链菌素缀合的辣根过氧化物酶(R&D Systems，DY998)添加到孔中并且将板在室温下孵育20min。用TBS+缓冲液将板洗涤3×，之后将50μL TMB底物(Sigma，T444)添加到各孔中并且将板在室温下孵育20min。任选地利用25μL终止溶液(Sigma S5689)终止反应。通过比色检测在650nm波长下使用Tecan SafireII板读取器读取板。通过非线性回归(最佳拟合)分析构建浓度响应曲线，并且计算每种化合物的IC50值。
针对αvβ8功能的固相受体测定.将在TBS+缓冲液(25mM Tris 7.4，137mM NaCl，2.7mM KCl，1mM CaCl2，1mM MgCl2，1mM MnCl2)中稀释成0.5μg/mL的重组人LAP(R&DSystems公司，246-LP)添加到96孔半孔透明微量滴定板(Greiner 675061)的孔(50μL/孔)中并且在4℃孵育过夜。用150μL TBS+将孔洗涤3次并且添加150μl阻断缓冲液(具有1％牛血清白蛋白(Sigma A7906)的TBS+)。将该板在37℃孵育1hr并且然后用TBS+洗涤3×。将重组人整合素αvβ8(R&D Systems，4135-AV)在TBS+/0.1％牛血清白蛋白中稀释成0.1μg/mL。将化合物以1∶100稀释到整合素溶液中并且根据标准模板将50μL添加到经洗涤的LAP涂覆板的空孔中，每个样品以一式三份重复。在室温下孵育两小时后，用150μL TBS+将板洗涤3×。向每个孔中添加以1μg/mL于TBS+/0.1％BSA中的50μL生物素化的抗αv抗体(R&DSystems，BAF1219)并且将板覆盖且在室温下孵育1hr。用150μLTBS+缓冲液将板洗涤3×后，将在TBS+阻断缓冲液中稀释的50μL抗生蛋白链菌素缀合的辣根过氧化物酶(R&D Systems，DY998)添加到孔中并且将板在室温下孵育20min。用TBS+将板洗涤3×，之后将50μL TMB底物(Sigma，T444)添加到各孔中并且将板在室温下孵育20min。任选地利用25μL终止溶液(Sigma S5689)终止反应。通过比色检测在650nm波长下使用Tecan Safire II板读取器读取板。通过非线性回归(最佳拟合)分析构建浓度响应曲线，并且计算每种化合物的IC50值。
表2-生物测定结果
NT＝未测试
参考文献
以下参考文献以引用方式明确地并入本文中，其程度为它们提供补充本文所陈述的那些细节的示例性程序性细节或其它细节。
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Claims (117)

1.一种下式的化合物或其药学上可接受的盐或互变异构体：
其中：
W是其中：
RA是-H或-F；
RB是-H、-OH、-F，其中如果RA是-F，那么RB是-H或-F；
A是C-R″或N，其中：
R″是-H、-OH，
X是：
卤代、叔丁基、CF3、CF2H或氰基,
或其中
R4和R5各自独立地为烷基C≤8或其中一个或多个氢原子已被-OH、-F、-Cl、-Br、-I、-NH2、-NO2、-CO2H、-CO2CH3、-CN、-SH、-OCH3、-OCH2CH3、–C(O)CH3、-N(CH3)2、–C(O)NH2、–OC(O)CH3或–S(O)2NH2独立地替代的被取代的烷基C≤8；
R6是-OH、-CN、-NH2、-CF3、-CF2H、-CO2H、-CO2-烷基C≤8、-C(＝O)NH2、-CH2OH或烷氧基C≤8，前提条件是若R4和R5各自为CF3，那么R6是OH；
或其中n是1或2；
或其中：
A′是共价键，由此形成环丙烷环、烷二基C≤6或烷氧基二基C≤8；
并且
R7是-OH、-CN、-NH2、-CO2H、-CO2-烷基C≤8、-C(＝O)NH2、-CF3、-CF2H或烷氧基C≤8；
Y是：
叔丁基，
其中
R8和R9各自独立地为烷基C≤8或其中一个或多个氢原子已被-OH、-F、-Cl、-Br、-I、-NH2、-NO2、-CO2H、-CO2CH3、-CN、-SH、-OCH3、-OCH2CH3、–C(O)CH3、-N(CH3)2、–C(O)NH2、–OC(O)CH3或–S(O)2NH2独立地替代的被取代的烷基C≤8；
R10是-OH、-CN、-NH2、-CF3、-CF2H、-CO2H、-CO2-烷基C≤8、-C(＝O)NH2、-CH2OH或烷氧基C≤8，前提条件是若R8和R9各自为CF3，那么R10是OH；
或其中n″是1或2；
或
其中：
A″是共价键，由此形成环丙烷环、烷二基C≤6或烷氧基二基C≤8；并且
R11是-OH、-CN、-NH2、-CO2H、-CO2-烷基C≤8、-C(＝O)NH2、-CF3、-CF2H或烷氧基C≤8；并且
Z是氢或羟基并且连接到碳原子2或6；
前提条件是如果W是那么X和Y各自不均为叔丁基；进一步的前提条件是如果W是A是C-OH、Z是氢并且X是溴代或碘代，那么Y不是叔丁基。
2.根据权利要求1所述的化合物，其中标记为β的碳原子呈R构型。
3.根据权利要求1所述的化合物，其中标记为β的碳原子呈S构型。
4.根据权利要求1所述的化合物，其中Y是：
其中R8-R10如权利要求1中所定义。
5.根据权利要求1所述的化合物，其中W是
6.根据权利要求5所述的化合物，其中A是C-OH。
7.根据权利要求5所述的化合物，其中A是N。
8.根据权利要求5所述的化合物，其中X是卤代。
9.根据权利要求8所述的化合物，其中X是溴代。
10.根据权利要求8所述的化合物，其中X是氯代。
11.根据权利要求5所述的化合物，其中X是烷基C≤8或其中一个或多个氢原子已被-OH、-F、-Cl、-Br、-I、-NH2、-NO2、-CO2H、-CO2CH3、-CN、-SH、-OCH3、-OCH2CH3、–C(O)CH3、-N(CH3)2、–C(O)NH2、–OC(O)CH3或–S(O)2NH2独立地替代的被取代的烷基C≤8。
12.根据权利要求11所述的化合物，其中X是叔丁基。
13.根据权利要求11所述的化合物，其中X是2-羟基-异丙基。
14.根据权利要求11所述的化合物，其中X是-CF3。
15.根据权利要求5所述的化合物，其中X是氰基。
16.根据权利要求5所述的化合物，其中X是杂芳基C≤8。
17.根据权利要求16所述的化合物，其中X是嘧啶基。
18.根据权利要求16所述的化合物，其中X是吡啶基。
19.根据权利要求5所述的化合物，其中Y是叔丁基。
20.根据权利要求5所述的化合物，其中Y是2-羟基-异丙基。
21.根据权利要求5所述的化合物，其中Y是其中R8-R10如权利要求1中所定义。
22.根据权利要求21所述的化合物，其中R8和R9是烷基C≤8。
23.根据权利要求22所述的化合物，其中R8和R9是甲基。
24.根据权利要求21所述的化合物，其中R10是-CN、-CH2OH、-CH2O-烷基C≤8或-CF3。
25.根据权利要求24所述的化合物，其中R10是-CH2O-CH3。
26.根据权利要求5所述的化合物，其中Y是
27.根据权利要求5所述的化合物，其中Y是
28.根据权利要求5所述的化合物，其中Y是
29.根据权利要求5所述的化合物，其中Y是
30.根据权利要求5所述的化合物，其中R8是烷基C≤8。
31.根据权利要求30所述的化合物，其中R8是甲基。
32.根据权利要求21所述的化合物，其中R9是其中一个或多个氢原子已被-OH、-F、-Cl、-Br、-I、-NH2、-NO2、-CO2H、-CO2CH3、-CN、-SH、-OCH3、-OCH2CH3、–C(O)CH3、-N(CH3)2、–C(O)NH2、–OC(O)CH3或–S(O)2NH2独立地替代的被取代的烷基C≤8。
33.根据权利要求32所述的化合物，其中R9是-CF3。
34.根据权利要求21所述的化合物，其中R10是-OH。
35.根据权利要求5所述的化合物，其中Y是
36.根据权利要求5所述的化合物，其中Y是
37.根据权利要求36所述的化合物，其中A″是共价键。
38.根据权利要求36所述的化合物，其中A″是烷氧基二基C≤8。
39.根据权利要求38所述的化合物，其中A″是–CH2OCH2-。
40.根据权利要求36所述的化合物，其中A″是烷二基C≤6。
41.根据权利要求40所述的化合物，其中A″是–CH2-。
42.根据权利要求36所述的化合物，其中R11是-CN、-CH2OH、-CH2O-烷基C≤8、–CF2H或–CFH2。
43.根据权利要求42所述的化合物，其中R11是-CH2OCH3。
44.根据权利要求5所述的化合物，其中Y是
45.根据权利要求5所述的化合物，其中Y是
46.根据权利要求5所述的化合物，其中Y是
47.根据权利要求5所述的化合物，其中Y是
48.根据权利要求5所述的化合物，其中Y是
49.根据权利要求5所述的化合物，其中Y是
50.根据权利要求5所述的化合物，其中Z是氢。
51.根据权利要求5所述的化合物，其中Z是羟基并且连接到碳原子2。
52.根据权利要求5所述的化合物，其中Z是羟基并且连接到碳原子6。
53.根据权利要求5所述的化合物，其中Z是氟并且连接到碳原子2。
54.根据权利要求5所述的化合物，其中Z是氟并且连接到碳原子6。
55.根据权利要求5所述的化合物，其中R′是氢。
56.根据权利要求1所述的化合物，其中W是
57.根据权利要求56所述的化合物，其中A是C-OH。
58.根据权利要求56所述的化合物，其中A是C-H。
59.根据权利要求56所述的化合物，其中A是N。
60.根据权利要求56所述的化合物，其中R′是氢。
61.根据权利要56所述的化合物，其中Z是氢。
62.根据权利要求56所述的化合物，其中Y是烷基C≤8。
63.根据权利要求56所述的化合物，其中Y是叔丁基。
64.根据权利要求56所述的化合物，其中X是卤代。
65.根据权利要求64所述的化合物，其中X是溴代。
66.根据权利要求56所述的化合物，其中X是烷基C≤8。
67.根据权利要求56所述的化合物，其中X是叔丁基。
68.根据权利要求1所述的化合物，其中W是
69.根据权利要求68所述的化合物，其中A是C-OH。
70.根据权利要求68所述的化合物，其中A是C-H。
71.根据权利要求68所述的化合物，其中R′是氢。
72.根据权利要求68所述的化合物，其中Z是氢。
73.根据权利要求68所述的化合物，其中Y是烷基C≤8。
74.根据权利要求68所述的化合物，其中Y是叔丁基。
75.根据权利要求68所述的化合物，其中X是卤代。
76.根据权利要求75所述的化合物，其中X是溴代。
77.根据权利要求1所述的化合物，所述化合物进一步被定义为：
或其药学上可接受的盐或互变异构体。
78.根据权利要求1所述的化合物，所述化合物进一步被定义为：
或其药学上可接受的盐或互变异构体。
79.一种药物组合物，其包含：
a)根据权利要求1-78任一项所述的化合物；和
b)赋形剂。
80.根据权利要求1-78任一项所述的化合物在制备用于治疗和/或预防有需要的患者的与纤维化和/或血管生成相关的疾病或病症的药物中的用途。
81.根据权利要求80所述的用途，其中所述疾病或病症与血管生成相关。
82.根据权利要求80所述的用途，其中所述疾病或病症与纤维化相关。
83.根据权利要求80-82任一项所述的用途，其中所述疾病或病症是肺纤维化、肝纤维化、肾纤维化、心脏纤维化和胰腺纤维化、硬皮病、瘢痕形成、早产儿视网膜病变、家族性渗出性玻璃体视网膜病变、增生性玻璃体视网膜病变、黄斑变性、糖尿病视网膜病变、癌症、骨质疏松症、自身免疫疾病、恶性肿瘤的体液性高钙血症、佩吉特氏病、牙周病、银屑病、关节炎、再狭窄和感染。
84.根据权利要求83所述的用途，其中所述疾病或病症是肺纤维化。
85.根据权利要求83所述的用途，其中所述疾病或病症是肝纤维化。
86.根据权利要求83所述的用途，其中所述疾病或病症是心脏纤维化。
87.根据权利要求83所述的用途，其中所述疾病或病症是肾纤维化。
88.根据权利要求83所述的用途，其中所述疾病或病症是胰腺纤维化。
89.根据权利要求83所述的用途，其中所述疾病或病症是硬皮病。
90.根据权利要求83所述的用途，其中所述疾病或病症是瘢痕形成。
91.根据权利要求90所述的用途，其中所述瘢痕形成是皮肤瘢痕形成。
92.根据权利要求90所述的用途，其中所述瘢痕形成是视网膜瘢痕形成。
93.根据权利要求90所述的用途，其中所述瘢痕形成是角膜瘢痕形成。
94.根据权利要求83所述的用途，其中所述疾病或病症是早产儿视网膜病变。
95.根据权利要求83所述的用途，其中所述疾病或病症是家族性渗出性玻璃体视网膜病变。
96.根据权利要求83所述的用途，其中所述疾病或病症是增生性玻璃体视网膜病变。
97.根据权利要求83所述的用途，其中所述疾病或病症是黄斑变性。
98.根据权利要求83所述的用途，其中所述疾病或病症是糖尿病视网膜病变。
99.根据权利要求83所述的用途，其中所述疾病或病症是癌症。
100.根据权利要求99所述的用途，其中所述癌症包括实体瘤生长或瘤形成。
101.根据权利要求99所述的用途，其中所述癌症包括肿瘤转移。
102.根据权利要求99所述的用途，其中所述癌症是膀胱癌、血癌、骨癌、脑癌、乳癌、中枢神经系统癌、子宫颈癌、结肠癌、子宫内膜癌、食道癌、胆囊癌、生殖器癌、生殖泌尿道癌、头癌、肾癌、喉癌、肝癌、肺癌、肌肉组织癌、颈癌、口腔粘膜癌或鼻粘膜癌、卵巢癌、胰腺癌、前列腺癌、皮肤癌、脾脏癌、小肠癌、大肠癌、胃癌、睾丸癌或甲状腺癌。
103.根据权利要求99所述的用途，其中所述癌症是上皮细胞癌、肉瘤、淋巴瘤、白血病、黑素瘤、间皮瘤、多发性骨髓瘤或精原细胞瘤。
104.根据权利要求83所述的用途，其中所述疾病或病症是骨质疏松症。
105.根据权利要求83所述的用途，其中所述疾病或病症是自身免疫疾病。
106.根据权利要求105所述的用途，其中所述自身免疫病症是多发性硬化。
107.根据权利要求83所述的用途，其中所述疾病或病症是恶性肿瘤的体液性高钙血症。
108.根据权利要求83所述的用途，其中所述疾病或病症是佩吉特氏病。
109.根据权利要求83所述的用途，其中所述疾病或病症是牙周病。
110.根据权利要求83所述的用途，其中所述疾病或病症是银屑病。
111.根据权利要求83所述的用途，其中所述疾病或病症是关节炎。
112.根据权利要求111所述的用途，其中所述关节炎是类风湿性关节炎。
113.根据权利要求83所述的用途，其中所述疾病或病症是再狭窄。
114.根据权利要求83所述的用途，其中所述疾病或病症是感染。
115.根据权利要求80-82和84-114任一项所述的用途，其中所述患者是人类、猴、牛、马、绵羊、山羊、狗、猫、小鼠、大鼠、豚鼠或其转基因物种。
116.根据权利要求115所述的用途，其中所述患者是猴、牛、马、绵羊、山羊、狗、猫、小鼠、大鼠或豚鼠。
117.根据权利要求115所述的用途，其中所述哺乳动物是人类。
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