BR112019012515A2 - antagonistas de integrina - Google Patents

Abstract

a presente divulgação fornece agentes farmacêuticos, que incluem aqueles da fórmula em que as variáveis são definidas aqui. também são fornecidas composições farmacêuticas, kits e artigos de manufatura que compreendem tais agentes farmacêuticos. também são fornecidos métodos de utilização dos agentes farmacêuticos. os compostos podem ser utilizados para a inibição ou o antagonismo das integrinas avß1 e/ou a5ß1. em algumas modalidades, os compostos fornecidos aqui exibem atividade inibidora ou antagonista reduzida das integrinas avß3, avß5, avß6, avß8 e/ou aiibß3.

Description

“ANTAGONISTAS DE INTEGRINA”

RELATÓRIO DESCRITIVO

INCORPORAÇÃO COMO REFERÊNCIA

A QUAISQUER PEDIDOS DE PATENTES PRIORITÁRIOS

1. Quaisquer e todas as Reivindicações prioritárias identificadas na Folha de Dados do Pedido de Patente, ou qualquer correção na mesma, são incorporadas aqui como referência sob 37 CFR 1.57.

ANTECEDENTE DA INVENÇÃO

Campo da Invenção

2. A presente divulgação refere-se aos campos de produtos farmacêuticos, medicina e biologia celular. Mais especificamente, se refere a agentes farmacêuticos (compostos) que são úteis como antagonistas de integrina.

Descrição da Técnica Relacionada

3. As integrinas são uma família de proteínas integrais de membrana citoplasmática que medeiam as interações celulares com outras células e com a matriz extracelular. Recentemente, foi identificado que a integrina ανβι desempenha uma função em uma variedade de condições fibróticas. Outras integrinas, tais como ανβδ e ανβδ, também estão associadas a condições fibróticas e compostos que inibem estas duas integrinas podem ser úteis no tratamento destas condições.

4. Acredita-se que a integrina α₃βι se liga à fibronectina em uma região que incorpora a nona e a décima repetições de fibronectina

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2/197 do tipo III, das quais se acredita que a última contenha o motivo RGD para ligação com a integrina. Em adição à fibronectina, foi relatado que a αββι interage com outras proteínas extracelulares de matriz extracelular que contêm RGD incluindo fibrinogênio, colágeno desnaturado e fibrilina-1 (Bax et al., J. Biol. Chem., 278(36):3460534616, 2003, 2003; Perdih, Curr. Med. Chem., 17(22):2371-2392, 2010; Suehiro et al., J. Biochem., 128(4):705-710, 2000). Estes ligantes são geralmente classificados como componentes da matriz provisória que é depositada pelas células como parte da resposta de cicatrização de feridas nos tecidos. Os componentes desta resposta são angiogênese e fibrose.

5. Em contraste, a inibição de algumas outras integrinas, tais como ανβό e ανβδ, foi associada a uma variedade de efeitos colaterais relacionados à inflamação indesejados (Huang, et al., 1996; LacyHulbert, et al., 2007; Travis, et al., 2007; Worthington, et al., 2015). A inibição seletiva de ανβι, ανβ3, ανβδ e/ou αδβι é desejável para algumas indicações.

6. A integrina απδβπι (também conhecida como glicoproteína Ilb/IIIa ou GPIIb/IIIa) é um complexo de integrinas encontrado nas plaquetas. A inibição da integrina απδβπι está associada com a ruptura da agregação de plaquetas, que está associada à toxicidade e/ou contraindicada quando é tratada certa doença ou distúrbios (King et al., 2016; Bennet, 2005; Giordano etal., 2016; Cook etal., 1997).

SUMÁRIO

7. A presente divulgação fornece novos antagonistas de receptores de integrina, composições farmacêuticas e métodos para sua manufatura e métodos para seu uso.

8. Em alguns aspectos, a presente divulgação fornece

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3/197 compostos da fórmula:

9. ou um sal, um solvato ou um tautômero farmaceuticamente aceitável da fórmula anterior, em que: Ri, R2, X e Y possuem qualquer um dos valores descritos aqui.

10. Em algumas modalidades, Ri é hidrogênio, alquil(c<8), aril(c<i2), aralquil(c<i2), alquil(c<8) substituído, aril(c<8) substituído ou aralquil(c<i2) substituído;

11. R2 é hidrogênio, alquil(c<8), alquil(C<8) substituído ou um substituinte que pode ser convertido in vivo em hidrogênio;

12. X é ciano, halo, alcóxi(c<8), alcóxi(c<8) substituído, alquil(c<8) ou alquil(c<8) substituído; e

13. Y é hidrogênio, ciano, halo, alcóxi(c<8), alcóxi(c<8) substituído, alquil(c<8) ou alquil(c<8) substituído.

14. Em algumas outras modalidades da Fórmula (I), Ri pode ser hidrogênio, Ci-salquila não substituído, Ci-salquila substituído, Cõ ou íoarila não substituído, Cõ ou íoarila substituído, C7-i2aralquila não substituído ou C7-i2aralquila substituído;

15. R2 pode ser hidrogênio, Ci-salquila não substituído ou Cisalquila substituído;

16. X pode ser hidrogênio, halo, ciano, Ci-i2alquila não substituído, Ci-i2alquila substituído, Ci-i2alcóxi não substituído, Cii2alcóxi substituído, Cõ ou íoarila não substituído, Cõ ou íoarila

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4/197 substituído, C7-12aralquila não substituído, C7-12aralquila substituído, não substituído heteroarila de 5-10 membros, heteroarila de 5-10 membros substituído, heterocicloalquila de 3-10 membros não substituído, heterocicloalquila de 3-10 membros substituído, C6 ou lOarilóxi não substituído, C6 ou lOarilóxi substituído, C2-12acilóxi não

Λ

R₆ substituído, C2-12acilóxi substituído ou ^R5 ,

17. em que R4 e R5 são cada um independentemente Cl8alquila não substituído ou Cl-8alquila substituído e

18. Rõ pode ser hidrogênio, -OH, -CN, -NH2, -CF3, -CF2H, -CH₂F, -CO2H, -CO₂-Ci-₈alquila, -C(=O)NH₂, -CH₂OH, -CH2O-C1salquil ou Ci-₈alcóxi ou

19. X é ^R7

20. em que A' é -CF2-, -O-, Ci-õalcanodiila, Ci-₈alcoxidiila ou uma ligação covalente, formando assim um anel ciclopropano e

21. R₇ pode ser -OH, -CN, -NH₂, -CO₂H, -CO₂-Ci-₈alquila, -C(=O)NH₂, -CF3, -CF₂H, -CH₂F, -CH2OH, -CH₂O-Ci-₈alquila, Ci-₈alquil ou Ci-₈alcóxi;

. Λ \ ^R9

22. Y pode ser t-butila ou ^Rw , em que R₈ e R9 são cada um independentemente ClPetição 870190056160, de 17/06/2019, pág. 249/490

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8alquila não substituído ou Cl-8alquila substituído, e Rio pode ser hidrogênio, -OH, -CN, -NH2, -CF3, -CF2H, -CFH₂, -CO2H, -CO2- Ci-₈alquila, -C(=O)NH₂, -CH₂OH, -CH2O-Ci-8alquila ou Ci-₈alcóxi ou

Y pode ser ^11 , em que A é -CF2-, -O-, Ciõalcanodiila, Ci-₈alcoxidiila ou uma ligação covalente, formando assim um anel ciclopropano; e Rn é -OH, -CN, -NH2, -CO2H, -CO2-C1salquila, -C(=O)NH₂, -CF₃, -CF₂H, -CH₂F, -CH₂OH, -CH₂O-Ci-₈alquila, Ci-₈alquila ou Ci-₈alcóxi.

23. Em algumas outras modalidades da Fórmula (I):

Ri é hidrogênio, alquil(c<8), aril(c<i2), aralquil(c<i2), alquil(C<8) substituído, aril(C<8) substituído ou aralquil(C<12) substituído;

R2 é hidrogênio, alquil(c<8), alquil(C<8) substituído ou um substituinte que pode ser convertido in vivo em hidrogênio; e

X e Y são cada um independentemente ciano, halo, alcóxi(c<8), alcóxi(C<8) substituído, alquil(c<8) ou alquil(C<8) substituído;

ou um sal ou um tautômero farmaceuticamente aceitável da fórmula anterior.

24. Em algumas modalidades, os compostos são adicionalmente definidos como:

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ou um sal, um solvato ou um tautômero farmaceuticamente aceitável dos mesmos, em que: Ri, R₂, X e Y possuem qualquer um dos valores descritos aqui.

25. Em algumas modalidades, os compostos são adicionalmente definidos como:

ou um sal, um solvato ou um tautômero farmaceuticamente aceitável dos mesmos, em que: Ri, R₂, X e Y possuem qualquer um dos valores descritos aqui. Em algumas modalidades, Ri pode ser Cl8alquila não substituído, Cl-8alquila substituído, 06 ou lOarila não substituído, C6 ou lOarila substituído, C7-10aralquila não substituído ou C7-10aralquila substituído; R₂ pode ser hidrogênio, Cl-6alquila não substituído ou Cl-6alquila substituído; X pode ser halo, ciano, Cl

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12alquila não substituído, Cl-12alquila substituído, Cl-12alcóxi não substituído, Cl-12alcóxi substituído, C6 ou lOarila não substituído, C6 ou lOarila substituído, C7-10aralquila não substituído, C7-10aralquila substituído, heteroarila de 5-10 membros não substituído, heteroarila de 5-10 membros substituído, heterocicloalquila de 3-10 membros não substituído, heterocicloalquila de 3-10 membros substituído, C6 ou lOarilóxi não substituído, C6 ou lOarilóxi substituído, C2-12acilóxi não substituído, C2-12acilóxi substituído ou ou X pode ser ^tO^a’ ^7 , em que A' é -CF2-, -O-, Ci-õalcanodiila, Ci-salcoxidiila ou uma ligação covalente, formando assim um anel ciclopropano; Rs e R9 são cada um independentemente Cl-6alquila não substituído ou Clóalquila substituído; e Rio pode ser hidrogênio, -OH, -CN, -NH2, -CF3, -CF₂H, -CFH₂, -CO2H, -CO2-Ci-₆alquila, -C(=O)NH₂, -CH₂OH, CH2O-Ci-õalquila ou Ci-õalcóxi.

26. Em algumas modalidades, os compostos são adicionalmente definidos como:

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8/197 ou um sal, um solvato ou um tautômero farmaceuticamente aceitável dos mesmos, em que: Ri, R2, X e Y possuem qualquer um dos valores descritos aqui.

27. Em algumas modalidades, Ri é alquil(c<8) tal como metila. Em algumas modalidades, R2 é hidrogênio. Em outras modalidades, R2 é um substituinte que pode ser convertido in vivo em hidrogênio que resulta em um pró-fármaco.

28. Em algumas modalidades, X é halo tal como bromo, fluor ou cloro. Em outras modalidades, X é ciano. Em outras modalidades, X é alquil(c<8). Em algumas modalidades, X é alquil(C3-6) tal como t-butila. Em outras modalidades, X é alcóxi(C<8) tal como metóxi.

29. Em algumas modalidades, Y é hidrogênio. Em outras modalidades, Y é halo tal como bromo, fluor ou cloro. Em outras modalidades, Y é ciano. Em outras modalidades, Y é alquil(C<8). Em algumas modalidades, Y é alquil(C3-6) tal como t-butila. Em outras modalidades, Y é alcóxi(C<8) tal como metóxi.

30. Em algumas modalidades, o átomo de carbono 21 está na configuração S. Em algumas modalidades, X está na posição 3. Em algumas modalidades, Y está na posição 4 ou 5.

31. Em algumas modalidades, Ri pode ser Cl-8alquila não substituído. Em algumas modalidades, Ri pode ser metila. Em algumas modalidades, R2 pode ser hidrogênio. Em algumas modalidades, X pode ser hidrogênio, halo, ciano, Cl-12alquila não substituído, Cl-12alquila substituído, Cl-12alcóxi não substituído, Cl-12alcóxi substituído, 06 ou lOarila não substituído, C6 ou lOarila substituído, C7-12aralquila não substituído, C7-12aralquila substituído, heteroarila de 5-10 membros não substituído, heteroarila de 5-10 membros substituído, heterocicloalquila de 3-10 membros não substituído, heterocicloalquila

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9/197 de 3-10 membros substituído, C6 ou lOarilóxi não substituído, C6 ou lOarilóxi substituído, C2-12acilóxi não substituído ou Cs-isacilóxi substituído. Em algumas modalidades, X é hidrogênio, halo, ciano, Ciísalcóxi não substituído, Cl-12alcóxi substituído, C6 ou lOarila não substituído, C6 ou lOarila substituído, C7-12aralquila não substituído, C7-12aralquila substituído, heteroarila de 5-10 membros não substituído, heteroarila de 5-10 membros substituído, heterocicloalquila de 3-10 membros não substituído, heterocicloalquila de 3-10 membros substituído, C6 ou lOarilóxi não substituído, C6 ou lOarilóxi substituído, C2-12acilóxi não substituído, C2-12acilóxi substituído ou i \ ^R6 ^5 . Em algumas modalidades, X pode ser halo. Em algumas modalidades, X pode ser bromo, fluor ou cloro. Em algumas modalidades, X pode ser -CF3. Em algumas modalidades, X pode ser OH ou ciano. Em algumas modalidades, X pode ser Cl-8alquila não substituído. Em algumas modalidades, X pode ser C3-6alquila não substituído. Em algumas modalidades, X pode ser t-butila. Em algumas modalidades, X pode ser Cl-8alcóxi não substituído. Em algumas modalidades, X pode ser metóxi ou isopropóxi. Em algumas modalidades, Y pode ser t-butila. Em algumas modalidades, Y pode ser

-ξ \~^r9

R-IO .

32. Em algumas modalidades, Rs e R9 são cada um independentemente C2-8alquila não substituído. Em algumas modalidades, Rs pode ser metila e R9 pode ser C2-8alquila não substituído. Em algumas modalidades, Rs e R9 são cada um -CH3. Em algumas modalidades, Rio pode ser -CF3, -CF2H ou -CFH2. Em

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10/197 algumas modalidades, Rio pode ser -CF3. Em algumas modalidades, Rio pode ser hidrogênio ou -CH3. Em algumas modalidades, Y pode ser

R11

33. Em algumas modalidades, A pode ser Ci-3alcanodiila, Ci4alcoxidiila ou uma ligação covalente, formando assim um anel ciclopropano. Em algumas modalidades, A pode ser uma ligação covalente, formando assim um anel ciclopropano. Em algumas modalidades, Rn pode ser -CF3, -CF2H, -CH2F, -CFbO-Ci-õalquila, Ciõalquila ou Ci-salcóxi. Em algumas modalidades, Rn pode ser -CF3, -CF2H, -CH2F, Ci-õalquila ou Ci-õalcóxi. Em algumas modalidades, Rn pode ser -CF3, -CF2H ou metóxi. Em algumas modalidades, Rn pode ser -CF3 ou -CF2H. Em algumas modalidades, Rn pode ser -CH2O-CH3. Em algumas modalidades, X pode estar na posição 3. Em algumas modalidades, Y pode estar na posição 4 ou 5. Em algumas modalidades, o composto pode ser um antagonista de integrina. Em algumas modalidades, a integrina pode ser um antagonista de integrina α5β1. Em algumas modalidades, o composto exibe um valor de IC50 para a integrina α5β1 menor que 50 nM, 40 nM, 30 nM, 20 nM, 15 nm ou 1 nM ou uma faixa definida por qualquer um dos anteriores que é medida através de um ensaio de receptor em fase sólida em relação à função da integrina α5β1. Em algumas modalidades, a integrina é um antagonista de integrina ανβΐ. Em algumas modalidades, o composto exibe um valor de IC50 para a integrina αλ/βΐ menor que 15 nM que é medido através de um ensaio de receptor em fase sólida em relação à função da integrina ανβΐ. Em algumas modalidades, o composto exibe um valor de IC50 para uma integrina ανβ3 menor que 10 nM que é medido através de um ensaio de receptor em fase sólida em relação à

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11/197 função da integrina ανβ3. Em algumas modalidades, o composto exibe um valor de IC50 para uma ανβό integrina menor que 10 nM que é medido através de um ensaio de receptor em fase sólida em relação à função da ανβό integrina. Em algumas modalidades, o composto exibe um valor de IC50 para as ανβι, ανβ3 e ανβό integrinas menor que 10 nM que é medido através de um ensaio de receptor em fase sólida em relação à função das ανβι, ανβ3 e ανβό integrinas. Em algumas modalidades, o composto exibe um valor de IC50 para uma ανβό integrina maior que 10 nM que é medido através de um ensaio de receptor em fase sólida em relação à função da ανβό integrina. Em algumas modalidades, o composto exibe um valor de IC50 para uma ανβδ integrina maior que 10 nM que é medido através de um ensaio de receptor em fase sólida em relação à função da ανβδ integrina. Em algumas modalidades, o composto exibe um valor de IC50 para as ανβό e ανβδ integrinas maior que 10 nM que é medido através de ensaios de receptor em fase sólida em relação à função das ανβό e ανβδ integrinas.

34. Em algumas modalidades, o composto é um antagonista de integrina tal como um antagonista de integrina αλ/βΐ. Em algumas modalidades, o composto exibe um valor de IC50 para a integrina ανβΐ menor que 15 nM que é medido através de um ensaio de receptor em fase sólida em relação à função da integrina αλ/βΐ. Em algumas modalidades, o composto exibe um valor de IC50 para uma integrina ανβ3 menor que 10 nM que é medido através de um ensaio de receptor em fase sólida em relação à função da ανβό integrina. Em algumas modalidades, o composto exibe um valor de IC50 para uma ανβό integrina menor que 10 nM que é medido através de um ensaio de receptor em fase sólida em relação à função da ανβό integrina. Em algumas modalidades, o composto exibe um valor de IC00 para as ανβι, ανβ3 e ανβό integrinas menor que 10 nM que é medido através de um ensaio de receptor em fase sólidas em relação à função das ανβι, ανβ3 e

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12/197 ανβό integrinas. Em algumas modalidades, o composto exibe um valor de IC50 para uma ανβό integrina maior que 10 nM que é medido através de um ensaio de receptor em fase sólida em relação à função da integrina αλ/βΐ. Em algumas modalidades, o composto exibe um valor de IC50 para uma ανβδ integrina maior que 10 nM que é medido através de um ensaio de receptor em fase sólida em relação à função da integrina αλ/βΐ. Em algumas modalidades, o composto exibe um valor de IC50 para as ανβό e ανβδ integrinas maior que 10 nM que é medido através de ensaios de receptor em fase sólida em relação à função das ανβό e ανβδ integrinas.

35. Em algumas modalidades, os compostos são adicionalmente definidos como:

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37. ou um sal farmaceuticamente aceitável dos mesmos. Em algumas modalidades, os compostos são adicionalmente definidos como:

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14/197

38. ou um sal farmaceuticamente aceitável dos mesmos.

39. Em algumas modalidades, os compostos são adicionalmente definidos como:

ou um sal, um solvato ou

40.

um tautômero farmaceuticamente aceitável dos mesmos.

41. Em algumas modalidades, os compostos são adicionalmente definidos como:

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15/197

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16/197

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42. ou um sal, um solvato ou um tautômero farmaceuticamente aceitável dos mesmos.

43. Ainda em outro aspecto, a presente divulgação fornece compostos da fórmula:

44. ou um sal farmaceuticamente aceitável dos mesmos. Em algumas modalidades, os compostos são adicionalmente definidos como:

45. ou um sal farmaceuticamente aceitável dos mesmos.

46. Ainda em outro aspecto, a presente divulgação fornece

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21/197 composições farmacêuticas que compreendem:

um composto que é divulgado e descrito aqui; e um excipiente.

47. Em algumas modalidades, a composição farmacêutica é formulada para administração: de forma oral, intra-adiposa, intraarterial, intra-articular, intracraniana, intradérmica, intralesional, intramuscular, intranasal, intraocular, intrapericardial, intraperitoneal, intrapleural, intraprostática, intrarretal, intratecal, intratraqueal, intratumoral, intraumbilical, intravaginal, intravenosa, intravesicular, intravitrea, liposomal, local, mucosal, parenteral, retal, subconjuntival, subcutânea, sublingual, tópica, transbucal, transdérmica, vaginal, em cremes, em composições lipídicas, através de um catéter, através de uma lavagem, através de infusão contínua, através de infusão, através de inalação, através de injeção, através de fornecimento local ou através de perfusão localizada. A composição farmacêutica pode ser formulada para administração oral, tópica, intravenosa ou intravitrea. Em algumas modalidades, a composição farmacêutica é formulada na forma de uma dose unitária.

48. Ainda em outro aspecto, a presente divulgação fornece métodos para o tratamento e/ou para a prevenção de uma doença ou um distúrbio em um paciente que necessita dos mesmos, que compreendem a administração ao paciente de um composto ou uma composição descrita aqui em uma quantidade suficiente para tratar e/ou prevenir a doença ou o distúrbio. Em algumas modalidades, a doença ou o distúrbio está associado à fibrose. A doença ou o distúrbio pode ser escleroderma ou fibrose dos pulmões, do fígado, dos rins, do coração, da pele ou do pâncreas. Em algumas modalidades, a doença ou o distúrbio é fibrose dos pulmões. Em outras modalidades, a doença

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22/197 ou o distúrbio é fibrose do fígado. Em outras modalidades, a doença ou o distúrbio é fibrose do coração. Em outras modalidades, a doença ou o distúrbio é fibrose dos rins. Em outras modalidades, a doença ou o distúrbio é fibrose do pâncreas. Em outras modalidades, a doença ou o distúrbio é fibrose da pele. Em algumas modalidades, a doença ou o distúrbio é escleroderma.

49. Em algumas modalidades, o paciente é um ser humano, um macaco, um bovino, um equino, um ovino, um caprino, um cachorro, um gato, um camundongo, um rato, um porquinho da índia ou espécies transgênicas dos mesmos. O paciente pode ser um macaco, um bovino, um equino, um ovino, um caprino, um cachorro, um gato, um camundongo, um rato ou um porquinho da índia. Alternativamente, o paciente pode ser um ser humano.

50. Ainda em outro aspecto, a presente divulgação fornece métodos de inibição da ligação de uma integrina que compreendem o contato da integrina com um composto ou uma composição descrita aqui. A integrina pode ser Οδβι, ανβι, ανβ3 ou ανβδ. Em algumas modalidades, a integrina é Οδβι. Em algumas modalidades adicionais, a integrina é ανβι. Em algumas modalidades, o método é realizado in vitro. Em outras modalidades, o método é realizado ex vivo ou in vivo. Em algumas modalidades, a inibição da ligação é suficiente para tratar ou para prevenir uma doença ou um distúrbio em um paciente.

51. Algumas modalidades fornecem um método para o tratamento e/ou para a prevenção de uma doença ou um distúrbio em um paciente que necessita do mesmo, que compreende a administração ao paciente de um composto ou uma composição que é divulgada e descrita aqui em uma quantidade suficiente para tratar e/ou prevenir a doença ou o distúrbio. Em algumas modalidades, a doença ou o distúrbio está associado à fibrose. Em algumas modalidades, a doença

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23/197 ou o distúrbio é escleroderma ou fibrose dos pulmões, do fígado, dos rins, do coração, da pele ou do pâncreas. Em algumas modalidades, a doença ou o distúrbio é fibrose dos pulmões. Em algumas modalidades, a doença ou o distúrbio é fibrose do fígado. Em algumas modalidades, a doença ou o distúrbio é fibrose do coração. Em algumas modalidades, a doença ou o distúrbio é fibrose dos rins. Em algumas modalidades, a doença ou o distúrbio é fibrose do pâncreas. Em algumas modalidades, a doença ou o distúrbio é fibrose da pele. Em algumas modalidades, a doença ou o distúrbio é escleroderma. Em algumas modalidades, o paciente é um ser humano, um macaco, um bovino, um equino, um ovino, um caprino, um cachorro, um gato, um camundongo, um rato, um porquinho da índia ou espécies transgênicas dos mesmos. Em algumas modalidades, o paciente é um macaco, um bovino, um equino, um ovino, um caprino, um cachorro, um gato, um camundongo, um rato ou um porquinho da índia. Em algumas modalidades, o paciente é um ser humano.

52. Algumas modalidades fornecem um método de inibição da ligação de uma integrina que compreende o contato da integrina com um composto ou uma composição que é divulgada e descrita aqui. Em algumas modalidades, a integrina é α5β1, αλ/βΐ, αλ/ββ ou ανβ5. Em algumas modalidades, a integrina é αλ/βΐ. Em algumas modalidades, a integrina é α5β1. Em algumas modalidades, o método é realizado in vitro. Em algumas modalidades, o método é realizado ex vivo ou in vivo. Em algumas modalidades, a inibição da ligação é suficiente para tratar ou para prevenir uma doença ou um distúrbio em um paciente.

53. Outros objetivos, características e vantagens da presente divulgação se tornarão evidentes partindo da descrição detalhada a seguir. Deve ser entendido, entretanto, que a descrição detalhada e os exemplos específicos, embora indiquem modalidades específicas da

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24/197 divulgação, são fornecidos apenas com a finalidade de ilustração, uma vez que várias alterações e modificações dentro do espírito e do âmbito da divulgação se tornarão evidentes aos peritos na técnica partindo desta descrição detalhada. Observar que simplesmente o fato de um composto particular ser atribuído a uma fórmula genérica particular não significa que este não pode pertencer também a outra fórmula genérica.

DESCRIÇÃO DETALHADA

54. São divulgados aqui novos compostos e composições que podem agir como antagonista da integrina DsDi ou α_νβι, métodos para sua manufatura e métodos para seu uso, inclusive para o tratamento e/ou a prevenção de doenças ou distúrbios mediados pelas integrinas. Em algumas modalidades, os compostos fornecidos aqui podem ser utilizados para a inibição seletiva ou o antagonismo das integrinas □sDi, ανβι, ανβ3 e/ou ανβδ. Em algumas modalidades, os compostos fornecidos aqui exibem atividade inibidora ou antagonista reduzida das integrinas ανβό, ανβδ e/ou απόβ3.

Compostos e Métodos de Síntese

55. Os compostos fornecidos pela presente divulgação podem ser produzidos utilizando os métodos mostrados abaixo e adicionalmente descritos na seção de Exemplos. Os peritos na técnica entenderão facilmente que variações conhecidas das condições e dos processos descritos nos Exemplos podem ser utilizadas para sintetizar os compostos da presente divulgação. Os materiais de partida e o equipamento empregados eram disponíveis comercialmente preparados através de métodos previamente relatados e facilmente duplicados pelos peritos na técnica. Tais princípios e técnicas são ensinados, por exemplo, em March’s Advanced Organic Chemistry: Reactions,

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Mechanisms, and Structure (2007), que é incorporado aqui como referência.

56. Em algumas modalidades, os compostos da presente divulgação incluem os compostos descritos nos Exemplos e nas Reivindicações listadas abaixo. Algumas modalidades incluem compostos ativos como inibidores da integrina ανβΐ, tais como os compostos listados na Tabela 1 abaixo (que contêm grupos substituintes de X e Y não volumosos). Algumas modalidades incluem compostos ativos como inibidores da integrina ανβΐ, que também possuem em geral atividade aumentada como inibidores da integrina □ óDi quando comparados com os compostos na Tabela 1, tais como os compostos listados na Tabela 2 abaixo (que contêm um substituinte Y volumoso).

Tabela 1: Exemplos dos Compostos da Presente Divulgação

Número do Exemplo	Estrutura do Composto
Exemplo 1	^NH / \_M ° 1 Η3θ
Exemplo 2	/—NH < /5— N \___(/ \\___ \=/VO [f T /=> ° m3g / OH

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Número do Exemplo	Estrutura do Composto
Exemplo 3	/—NH / \ > OMe h3c
Exemplo 4	r“NH / \ M Br ά: h3c
Exemplo 5	r—NH H3C
Exemplo 6	r-NH < N \___(/ \\___ Br í T O u p-N m3u oh
Exemplo 7	/^NH Qx. A: Η3θ N'n<í^^Xs^xOH

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Número do Exemplo	Estrutura do Composto
Exemplo 8	^nh / \—M CN v & H3c
Exemplo 9	r—NH ( N \___// \\___ ^-o í T Ζ=λ ° LI p—N Us.
Exemplo 10	f3c CZK-Br n—\ J Η N \ /——\ ou 0 XrN u p O
Exemplo 11	F3CO Ν'-χ J 7~~~y^ H N-A__ 0 \rN U O
Exemplo 12	cf3 NC^J VoH h \__y

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Número do Exemplo	Estrutura do Composto
Exemplo 13	H ' \ í T T '7 y°H /N-n o
Exemplo 14	\ ZT 4 z // K o H ! o I
Exemplo 15	/—NH < )-N ?Me \___// \\___ ^-O f T /=i ° |_| Γ'-'Ν μ3^
Exemplo 46	\ ZT 4 z // \ y A vo o I
Exemplo 47	H2N / λ—c y-o H ° N<=\ | II T v )=o /N'N HO
Exemplo 48	H0 /r^ / \ / ° Η 0 \ i ii T v )=0 /N-N HO7

Tabela 2: Exemplos dos Compostos da Presente Divulgação

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Número do Exemplo	Estrutura do Composto
Exemplo 16	NH < y-N 1 \___// \\___ Br A Ύ T Λ=Λ ° H Jk
Exemplo 17	r—NH < N \ 1 \_// \\_ yk^^CN ^-O Y Y /=1 ° H3c N
Exemplo 18	NH < y-N μ Μ \___// \\___ T y=n 0 u p—N Á. m3u
Exemplo 19	E VV Qa JX H ν-Λ_#AA/oh 0 \rN A p O
Exemplo 20	\ ZI O \ P z íS A AjOcr o T

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Número do Exemplo	Estrutura do Composto
Exemplo 21	Η N' \ \ nu — O-XrN \\ O
Exemplo 22	R Qx H N \ Ox \\ N O
Exemplo 23	F\ — F \ L/ CF3 n-λ j H N X—-\ O-^ XN \\ N' b
Exemplo 24	T O u? | oJ 1l A I oH Z 7 TZ \

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Número do Exemplo	Estrutura do Composto
Exemplo 25	\CF3 FC-k / °x\ r3G \=/ y-οκ H \__y N 2 /n-n
Exemplo 26	\CF3 Br-/? °v\ Br X-V y-OH H \_/ OL/ /n-n
Exemplo 27	\CF3 Cl-/z 0K\ u \^=/ y-OH H \__7 /N-n
Exemplo 28	\CF3 NCO VoH H \__7 /N-n

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Número do Exemplo	Estrutura do Composto
Exemplo 29	\ ZT 4 z // \ /° Q 1 ,o \ o o / I
Exemplo 30	\ ZT 4 z // 1 ,o \ o o / I
Exemplo 31	/°~Ά f3c-V/ Voh H /N-n
Exemplo 32	H \ N \ | T Ύ V yOH /N-N O
Exemplo 33	H ' \ i ii T T y°H /N'N oz

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Número do Exemplo	Estrutura do Composto
Exemplo 34	O H N < i ii T ' y°H /N-N o7
Exemplo 35	\ ZT 4 z // x O H X 1 f J OxZ °X,Z O 1 I
Exemplo 36	f3co—ά Λ ο H Μ ΚθΗ Ν ^ΝνζΧ/Οχζίξ )-'
Exemplo 37	\ ΖΙ // Ο π \ / ω Λ ο I
Exemplo 38	\ ΖΙ // Η°Χ ο I

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Número do Exemplo	Estrutura do Composto
				\___//	—0
Exemplo 39	H N,				o	-OH
Exemplo 40	H N,	G-	/^^0,	Br~\ / ZN-N	o	-OH
Exemplo 41	H N.	jQí	F3C^	Br—/ /	0	-OH
					—OH
Exemplo 42	H N,	XX			0	-OH
				---\ /	—Cl
Exemplo 43	H .N„	n	^^O.	/N-rí	o	-OH
Exemplo 44	H N,			Xn7	o	-OH

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Número do Exemplo	Estrutura do Composto
Exemplo 45	Br—/ / H X=\ N \ 1 Η Ί A0H '/^N'N °Z
Exemplo 49	T o i M o x O z 7 IZ /
Exemplo 50	/--\/θ/===3 Ο. ΛΥ λ / H \ AM </~oh

57. Todos os compostos da presente divulgação podem ser úteis para a prevenção e o tratamento de uma ou mais doenças ou distúrbios discutidos aqui ou de outra maneira. Em algumas modalidades, um ou mais dos compostos caracterizados ou exemplificados aqui como um intermediário, um metabólito e/ou um pró-fármaco, podem, todavia, também ser úteis para a prevenção e o tratamento de uma ou mais doenças ou distúrbios. Desta maneira, a não ser que seja explicitamente mencionado o contrário, todos os compostos da presente invenção são considerados “compostos ativos” e “compostos terapêuticos” que são considerados para uso como

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36/197 ingredientes farmaceuticamente ativos (APIs). A adequação real para uso em humanos ou veterinário é tipicamente determinada utilizando uma combinação de protocolos de testes clínicos e procedimentos reguladores, tais como aqueles administrados pela Food and Drug Administration (FDA). Nos Estados Unidos da América, a FDA é responsável pela proteção da saúde pública garantindo a segurança, a eficácia, a qualidade e a seguridade de fármacos, vacinas e outros produtos biológicos e dispositivos médicos para uso em humanos e veterinário.

58. Em algumas modalidades, os compostos da presente divulgação possuem a vantagem de que podem ser mais eficazes que, menos tóxicos que, ter ação mais longa que, mais potentes que, produzir menos efeitos colaterais que, mais facilmente absorvidos que e/ou possuir um perfil farmacocinético melhor (por exemplo, maior disponibilidade biológica oral e/ou menor eliminação) que e/ou possuir outras propriedades farmacológicas, físicas ou químicas úteis sobre, compostos conhecidos na técnica anterior, para uso nas indicações citadas aqui ou de outra maneira.

59. Os compostos empregados nos métodos da divulgação podem conter um ou mais átomos de carbono ou nitrogênio substituídos de forma assimétrica e podem ser isolados na forma opticamente ativa ou racêmica. Assim, toda forma quiral, diastereomérica, racêmica, forma epimérica e todas as formas isoméricas geométricas de uma estrutura são pretendidas, a não ser que a estereoquímica ou a forma isomérica específica seja especificamente indicada. Os compostos podem ocorrer na forma de racematos e misturas racêmicas, enanciômeros individuais, misturas diastereoméricas e diastereoisômeros individuais. Em algumas modalidades, é obtido um diastereoisômeros individual. Os centros

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37/197 quirais dos compostos da presente divulgação podem ter a configuração S ou R, que é definida pelas IUPAC 1974 Recommendations. Em algumas modalidades, os compostos da presente divulgação estão na configuração S. Por exemplo, misturas de estereoisômeros podem ser separadas utilizando as técnicas ensinadas na seção de Exemplos abaixo, bem como modificações das mesmas. Também são incluídas formas tautoméricas bem como sais farmaceuticamente aceitáveis de tais isômeros e tautômeros.

60. Pretende-seque os átomos que constituem os compostos da presente divulgação incluam todas as formas isotópicas destes átomos. Os compostos da presente divulgação incluem aqueles com um ou mais átomos que foram isotopicamente modificados ou enriquecidos, em particular aqueles com isótopos farmaceuticamente aceitáveis ou aqueles úteis para pesquisa farmacêutica. Os isótopos, que são utilizados aqui, incluem os átomos que possuem o mesmo número atômico, mas números de massa diferentes. Com a finalidade de exemplo geral e sem limitação, os isótopos de hidrogênio incluem deutério e trício e os isótopos de carbono incluem ¹³C e ¹⁴C. Similarmente, é considerado que um ou mais átomos de carbono de um composto da presente divulgação podem ser substituídos por um(mais) átomo(s) de silício. Além disso, é considerado que um ou mais átomos de oxigênio de um composto da presente divulgação podem ser substituídos por um(mais) átomo(s) de enxofre ou selênio.

61. Os compostos da presente divulgação também podem existir na forma de pró-fármaco. Uma vez que é sabido que os prófármacos aprimoram inúmeras qualidades desejáveis dos produtos farmacêuticos (por exemplo, solubilidade, disponibilidade biológica, manufatura etc.), os compostos empregados em alguns métodos da divulgação podem, se desejado, ser fornecidos na forma de pró-fármaco.

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Assim, a divulgação considera pró-fármacos dos compostos da presente divulgação bem como métodos de fornecimento dos pró-fármacos. Os pró-fármacos dos compostos empregados na divulgação podem ser preparados através da modificação dos grupos funcionais presentes no composto de tal maneira que as modificações são clivadas, na manipulação de rotina ou in vivo, no composto original. Consequentemente, os pró-fármacos incluem, por exemplo, os compostos descritos aqui nos quais um grupo hidróxi, amino ou carbóxi é ligado a qualquer grupo que, quando o pró-fármaco é administrado a um indivíduo, se cliva para formar um hidróxi, um amino ou um ácido carboxílico, respectivamente.

62. Deve ser reconhecido que o ânion ou o cátion particular que constitui uma parte de qualquer sal desta divulgação não é crítico, contanto que o sal, como um todo, seja farmacologicamente aceitável. Exemplos adicionais de sais farmaceuticamente aceitáveis e seus métodos de preparação e uso são apresentados em Handbook of Pharmaceutical Sais: Properties and Use (2002), que é incorporado aqui como referência.

63. Deve ser ainda reconhecido que os compostos da presente divulgação incluem aqueles que foram adicionalmente modificados para compreender substituintes que são conversíveis em hidrogênio in vivo. Isto inclui aqueles grupos que podem ser convertidos em um átomo de hidrogênio por meios enzimológicos ou químicos que incluem, mas, sem limitação, hidrólise e hidrogenólise. Os exemplos incluem grupos hidrolisáveis, tais como grupos acila, grupos que possuem um grupo oxicarbonila, resíduos de aminoácidos, resíduos peptídicos, o-nitrofenilsulfenila, trimetilsilila, tetrahidropiranila, difenilfosfinila e similares. Os exemplos de grupos acila incluem formila, acetila, trifluoracetila e similares. Os exemplos de grupos que possuem um

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39/197 grupo oxicarbonila incluem etoxicarbonila, tert-butoxicarbonila (-C(O)OC(CH3)3, Boc), benziloxicarbonila, p-metoxibenziloxicarbonila, viniloxicarbonila, 3-(p-toluenossulfonil)etoxicarbonila e similares. Os resíduos de aminoácidos adequados incluem, mas, sem limitação, resíduos de Gly (glicina), Ala (alanina), Arg (arginina), Asn (asparagina), Asp (ácido aspártico), Cys (cisteína), Glu (ácido glutâmico), His (histidina), He (isoleucina), Leu (leucina), Lys (lisina), Met (metionina), Phe (fenilalanina), Pro (prolina), Ser (serina), Thr (treonina), Trp (triptofano), Tyr (tirosina), Vai (valina), Nva (norvalina), Hse (homosserina), 4-Hyp (4-hidroxiprolina), 5-Hyl (5-hidroxilisina), Orn (ornitina) e β-Ala. Os exemplos de resíduos de aminoácidos adequados também incluem resíduos de aminoácidos que estão protegidos com um grupo protetor. Os exemplos de grupos protetores adequados incluem aqueles tipicamente empregados na síntese de peptídeos, incluindo grupos acila (tais como formila e acetila), grupos arilmetoxicarbonila (tais como benziloxicarbonila e p-nitrobenziloxicarbonila), grupos tert-butoxicarbonila (-C(O)OC(CH₃)₃, Boc) e similares. Os resíduos peptídicos adequados incluem resíduos peptídicos que compreendem dois a cinco resíduos de aminoácidos. Os resíduos destes aminoácidos ou peptídeos podem estar presentes nas configurações estereoquímicas da forma D, da forma L ou de misturas das mesmas. Em adição, o resíduo de aminoácido ou peptídeo pode ter um átomo de carbono assimétrico. Os exemplos de resíduos de aminoácidos adequados que possuem um átomo de carbono assimétrico incluem resíduos de Ala, Leu, Phe, Trp, Nva, Vai, Met, Ser, Lys, Thr e Tyr. Os resíduos peptídicos que possuem um átomo de carbono assimétrico incluem resíduos peptídicos que possuem um ou mais resíduos de aminoácidos constituintes que possuem um átomo de carbono assimétrico. Os exemplos de grupos protetores de aminoácidos adequados incluem aqueles tipicamente empregados na síntese de peptídeos, incluindo

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40/197 grupos acila (tais como formila e acetila), grupos arilmetoxicarbonila (tais como benziloxicarbonila e p-nitrobenziloxicarbonila), grupos tertbutoxicarbonila (-C(O)OC(CH3)3) e similares. Outros exemplos de substituintes “que podem ser convertidos em hidrogênio in vivo” incluem grupos hidrogenolisáveis que podem ser eliminados de forma redutora. Os exemplos de grupos hidrogenolisáveis que podem ser eliminados de forma redutora adequados incluem, mas, sem limitação, grupos arilsulfonila (tal como o-toluenossulfonila); grupos metila substituídos com fenila ou benzilóxi (tais como benzila, tritila e benziloximetila); grupos arilmetoxicarbonila (tais como benziloxicarbonila e o-metóxi-benziloxicarbonila); e grupos haloetoxicarbonila (tais como β,β,β-tricloroetoxicarbonila e β-iodoetoxi-carbonila).

Atividade Biológica

64. É outro objetivo da divulgação fornecer novos compostos e composições que podem agir como antagonista das integrinas α_νβι e/ou αδβι, métodos para sua manufatura e métodos para seu uso, inclusive para o tratamento e/ou a prevenção de doenças ou distúrbios mediados pelas integrinas. Em algumas modalidades, os compostos podem ser utilizados para a inibição seletiva ou o antagonismo das integrinas αδβι, ανβι, ανβ3 e/ou ανβδ. Em algumas modalidades, os compostos fornecidos aqui exibem atividade inibidora ou antagonista reduzida das integrinas ανβ3, ανβδ, ανβό, ανβδ e/ou απδβ3. Em algumas modalidades adicionais, os compostos fornecidos aqui exibem atividade inibidora ou antagonista reduzida das integrinas ανβ3 e/ou ανβδ.

65. Tais compostos e composições são úteis na inibição ou na antagonização das integrinas e, portanto, em outra modalidade, a presente divulgação fornece métodos para a inibição ou a antagonização das integrinas αδβι, ανβΐ, ανβ3 e/ou ανβ5.

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66. Embora não limitado a nenhuma teoria particular, foi descoberto de forma inesperada que os compostos da Fórmula (I) que possuem pelo menos um substituinte volumoso no substituinte X e/ou Y exibem atividade significativamente maior contra a integrina αδβι. Os exemplos de substituintes volumosos incluem grupos alquila não substituídos, por exemplo, grupos alquila ramificados; grupos alquila substituídos; grupos cíclicos, por exemplo, cicloalquila; e grupos heterocicloalquila. Em algumas modalidades, pelo menos um substituinte volumoso está na posição meta no anel fenila. Os compostos anteriores que não possuem tais substituintes volumosos agiam primariamente sobre outros receptores de integrina, enquanto que a atividade contra α5β1 era relativamente baixa. Em algumas modalidades, um composto da Fórmula (I) que possui um grupo volumoso em X ou Y exibe maior atividade contra a integrina α5β1 comparado com um composto estruturalmente relacionado que não possui tal substituinte volumoso, por exemplo, comparando os compostos da Tabela 2 (que possuem um grupo Y volumoso) com aqueles da Tabela 1 (que não possuem o grupo X ou Y volumoso) e com os compostos de comparação da Tabela 3 abaixo.

Tabela 3: Compostos de Comparação

Número do Comparador	Estrutura do Composto
Comparador 1 (CC1)	Á. z çr I J ω ___' O 1 \=o o T

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Número do Comparador	Estrutura do Composto
Comparador 2 (CC2)	^-NH \___(/ \\___ A í Y 0 hnx Λ 1 JL OH

67. A diferença na atividade entre os compostos relacionados da Fórmula (I) que possuem pelo menos um grupo volumoso no substituinte X e/ou Y e aqueles que não possuem tal grupo volumoso é notável. Por exemplo, compostos análogos ao Comparador 2 (CC2), mas que possuem um pirazol (R¹) metila e um substituinte volumoso em X e/ou Y, forneceram maior atividade contra α5β1 comparados com o CC2. Especificamente, CC2 forneceu uma IC50 medida de 770 nM contra α5β1, enquanto que o Exemplo 21 (Y = ' ^CHF2) forneceu 12 nM, o Exemplo 24 (Y = ^CF3) forneceu 15 nM, o Exemplo 30 (Y = o-.

\ )

7v ,0..

') forneceu 12 nM e o Exemplo 38 (Y = tert-butila) forneceu 23 nM. Adicionalmente, o Exemplo 6 (da Tabela 1) forneceu uma IC50 medida de 158 nM contra α5β1, enquanto que o Exemplo 16 (da Tabela 2), diferindo apenas pela adição de um grupo tert-butila, forneceu uma IC50 medida de 30 nM contra α5β1, um aumento de várias vezes na atividade. A comparação do Exemplo 17 (da Tabela 2) com o Exemplo 9 (da Tabela 1) indica um aumento similar na atividade quando pelo menos um grupo volumoso é incluído em X e/ou Y de um composto da Fórmula (I). Especificamente, o Exemplo 9 forneceu uma IC50 medida de 110 nM contra α5β1, enquanto que o Exemplo 17 forneceu uma IC50 medida de 11 nM contra α5β1.

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68. Consequentemente, os compostos da Fórmula (I) que possuem pelo menos um grupo volumoso no substituinte X e/ou Y podem ser utilizados no tratamento de condições que envolvem atividade de integrina α5β1. Acredita-se que as células que expressam α5β1 se ligam à fibronectina em uma região que incorpora a nona e a décima repetições de fibronectina do tipo III, das quais acredita-se que a última contenha o motivo RGD para ligação com a integrina. Em adição à fibronectina, foi relatado que α5β1 interage com outras proteínas de matriz extracelular que contêm RGD incluindo fibrinogênio, colágeno desnaturado e fibrilina-1 (Bax et al., J. Biol. Chem., 278(36):3460534616, 2003, 2003; Perdih, Curr. Med. Chem., 17(22):2371-2392, 2010; Suehiro et al., J. Biochem., 128(4):705-710, 2000). Estes ligantes são geralmente classificados como componentes da matriz provisória que é depositada pelas células como parte da resposta de cicatrização de ferimentos nos tecidos. Os componentes desta resposta são angiogênese (formação de novos vasos sanguíneos) e fibrose (formação de cicatrizes) que são benéficos para a cicatrização de danos agudos, mas podem deletérios em muitos contextos de doença. A função importante de α5β1 na angiogênese é suportada por vários estudos. Por exemplo, camundongos que não possuem esta integrina exibem letalidade embrionária no dia 10-11 com um fenótipo que inclui defeitos tanto na vasculatura embrionária quanto extraembrionária (Yang et al., Development, 119(4):1093-1105, 1993). Acredita-se que as citocinas angiogênicas tais como bFGF, IL-8, ΤΟΕβ e TNFa aumentam a regulação da expressão de α5β1 sobre as células endoteliais in vitro e in vivo e a imunohistoquímica mostra aumentos coordenados tanto na coloração da α5β1 quanto da fibronectina nos vasos sanguíneos de vários tipos de biópsias de tumores humanos e tumores de xenoenxerto em animais (Collo, J. Cell Sci., 112(Pt 4):569-578, 1999; Kim et al., Am. J. Pathol., 156(4):1345-1362, 2000). Foi observado que anticorpos

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44/197 monoclonais que inibem especificamente α5β1 e compostos que foram descritos como inibidores de α5β1 reduzem significativamente a angiogênese em algums modelos experimentais (Kim et al., Am. J. Pathol., 156(4):1345-1362, 2000; Bhaskar et al., J. Transi. Med., 5:61, 2007; Livant et al., J. Clin. Invest., 105(11):1537-1545, 2000; Zahn et al., Arch. Ophthalmol., 127(10):1329-1335, 2009).

69. A expressão de α5β1 não fica confinada no endotélio e pode ter outros papéis funcionais em adição à angiogênese. A α5β1 é expressa em graus variáveis em muitos tipos de células incluindo fibroblastos, células hematopoiéticas e imunológicas, células musculares lisas, células epiteliais e células tumorais. A expressão sobre as células tumorais foi indicada na progressão de crescimento de tumor e metástase (Adachi et al., Clin. Cancer Res., 6(1):96-101, 2000, 2000; Blase et al., Int. J. Cancer, 60(6):860-866, 1995; Danen et al., Histopatologia, 24(3):249-256, 1994; Edward, Curr. Opin. Oncol., 7(2):185-191, 1995). Nos fibroblastos humanos, foi observado que a α5β1 promove mobilidade e sobrevivência (Lobert et al., Dev. Cell, 19(1):148-159, 2010). Nas células estreladas pancreáticas, α5β1 interage com o fator de crescimento de tecido conjuntivo para estimular adesão, migração e fibrogênese (Gao e Brigstock, Gut, 55:856-862, 2006). Foi mostrado que o antagonismo farmacológico de α5β1 inibe a ligação, a migração e a proliferação de células epiteliais da retina humana in vitro e reduz a proliferação de células da retina e a formação de cicatriz quando administrada de forma intravítrea a coelhos com descolamento de retina (Li et al., Invest. Ophthalmol. Vis. Sci., 50(12):5988-5996, 2009; Zahn et al., Invest. Ophthalmol. Vis. Sci., 51(2):1028-1035, 2010).

70. Em algumas modalidades, um composto da Fórmula (I) pode ser útil no tratamento da angiogênese e/ou de uma condição

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45/197 relacionada. Tais condições relacionadas incluem fibrose, por exemplo, crescimento fibroide e/ou uma doença de proliferação celular, por exemplo, câncer. Algumas modalidades incluem a utilização de um composto da Fórmula (I) no tratamento ou na prevenção tanto da fibrose quanto da angiogênese. Em algumas modalidades, um composto da Fórmula (I) é administrado a um paciente que sofre de câncer. Em modalidades adicionais, um composto da Fórmula (I) é administrado a um paciente que sofre de um crescimento fibrótico. Ainda em modalidades adicionais, um composto da Fórmula (I) retarda o crescimento de um fibroide, para o crescimento de um fibroide ou reverte o crescimento de um fibroide. Em modalidades adicionais, o fibroide é um tumor.

71. O termo “tumor” é utilizado amplamente aqui para significar qualquer crescimento de tecido não congênito, patológico, localizado. O tumor pode ser benigno, por exemplo, um hemangioma, um glioma, um teratoma e similares ou pode ser maligno, por exemplo, um carcinoma, um sarcoma, um glioblastoma, um astrocitoma, um neuroblastoma, um retinoblastoma e similares. O tumor pode ou não ser metastásico. O termo “câncer” é utilizado geralmente para se referir a uma doença que acompanha o aparecimento de um tumor maligno. O tumor pode ser um carcinoma, por exemplo, câncer de pulmão, câncer de mama, câncer de próstata, câncer cervical, câncer de pâncreas, câncer de cólon ou câncer de ovário ou um sarcoma, por exemplo, osteossarcoma ou sarcoma de Kaposi.

72. Em modalidades adicionais, o fibroide é um fibroma. O fibroma pode ser, por exemplo, um fibroma duro ou um fibroma mole. O fibroma pode ser, para exemplo adicional, um angiofibroma, um fibroma cístico, um mixofibroma, um fibroma cemento-ossificante, um fibroma condromixoide, um fibroma desmoplásico, um fibroma não

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46/197 ossificante, um fibroma ossificante, um fibroma nucal, um fibroma colagenoso, um fibroma da bainha do tendão, um fibroma perifolicular, um fibroma pleomórfico, um fibroma uterino, um neurofibroma ou um fibroma de ovário.

73. A integrina ανβΐ é expressa na superfície dos mediadores celulares principais da fibrose de órgãos, miofibroblastos ativados (Henderson, et al., 2013). Além disso, um estudo recente mostrou que a ανβΐ expressa pelas células se liga diretamente e ativa o fator de crescimento pró-fibrótico, o fator de crescimento transformante βΐ (ΤΘΕβΙ), in vitro (Reed, et al., 2015). Este mesmo estudo também mostrou que o tratamento terapêutico com um inibidor de molécula pequena seletivo de ανβΐ poderia atenuar a fibrose induzida por danos nos pulmões ou nos fígados de camundongos. Em conjunto, estes dados fornecem evidência para uma função in vivo crítica para ανβ 1 na fibrose de tecido.

74. Similarmente à ανβΐ, as integrinas ανβ3 e ανβ5 também são capazes de se ligar e ativar ΤΘΕβ latente in vitro (Tatler, et al., 2011; Wipff, et al, 2007). O bloqueio específico de ανβ3 reduz a sinalização de ΤΘΕβ e pode normalizar os padrões de expressão gênica pró-fibróticos nas células (Wipff, et al., 2007; Asano, et al., 2005a; Patsenker, et al., 2007). Os camundongos que são definciente na expressão da subunidade beta-3 e assim não possuem expressão de ανβ3, exibem acúmulo de colágeno pulmonar causado por CCL18 atenuado (Luzina, et al., 2009) e são protegidos em um modelo de camundongo da “stiff skin syndrome” humana, uma forma de escleroderma (Gerber, et al., 2013). A modulação do nível de expressão da integrina ανβ5 sobre as células afeta a localização nuclear dos componentes da via de sinalização de ΤΘΕβ e altera a expressão de marcadores de fibrose tais como a actina alfa do músculo liso e o colágeno (Luzina, et al., 2009;

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Asano, et al., 2005b; Scotton, et al., 2009).

75. As integrinas ανβ3 e ανβ5 foram implicadas na promoção da angiogênese (Avraamides et al., 2008), de forma que se pode prever que seu antagonismo em adição a outras integrinas fornece bloqueio superior deste processo. A integrina ανβ3 também é conhecida por desempenhar uma função na metástase de células tumorais e na reabsorção óssea elevada associada à osteoporose e alguns cânceres (Nakamura, etal., 2007; Schneider, etal., 2011).

76. Adicionalmente, em alguns aspectos, os antagonistas da presente divulgação exibem atividade reduzida em relação a outras integrinas tais como ανβ6 e ανβ8. A perda ou a inibição excessiva destas integrinas específicas foi associada aos efeitos colaterais relacionados à inflamação ou ao desenvolvimento de autoimunidade em camundongos (Huang, et al., 1996; Lacy-Hulbert, et al., 2007; Travis, et al., 2007; Worthington, etal., 2015).

77. Adicionalmente, em algumas modalidades, os compostos da presente divulgação exibem atividade inibidora ou antagonista reduzida em relação à integrina αι^βιπ, que é um complexo de integrinas encontrado nas plaquetas. A inibição da integrina αι^βιπ está associada com a ruptura da agregação das plaquetas, que está associada com a toxicidade e/ou é contraindicada quando se trata certa doença ou distúrbios. Em algumas modalidades, os compostos fornecidos aqui exibem maior especificidade em relação às integrinas ανβι e αββι relativa a uma integrina não direcionada, por exemplo, a integrina απόβιπ. Em algumas modalidades, os compostos fornecidos aqui podem ser utilizados como agentes antifibróticos que minimizam o potencial de toxicidades associadas aos distúrbios de sangramento.

78. Embora não seja limitado por qualquer teoria particular, foi

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48/197 descoberto de forma inesperada que certos compostos da Fórmula (I) que possuem um substituinte X e/ou Y volumoso, em que o padrão de substituição de X,Y é dissubstituição 2,5, exibem atividade inibidora para ανβι e αδβι enquanto poupam ανβδ, ανβδ, ανβδ e/ou ανβδ. Por exemplo, o Exemplo 32 exibe atividade inibidora alta em ανβι e αδβι e atividade baixa em ανβδ, ανβδ, ανβδ e ανβδ. Consequentemente, algumas modalidades incluem compostos de acordo com a Fórmula (Iba).

79. Há muitos tipos de integrina e muitas células possuem vários tipos sobre sua superfície. As integrinas são de importância vital para todos os animais e foram observadas em todos os animais investigados, de esponjas a mamíferos. Desta maneira, os compostos, que se direcionam às integrinas encontraram vários usos em animais diferentes incluindo animais de companhia, animais de criação, animais de zoológico bem como animais selvagens. As integrinas foram estudadas extensivamente em humanos. As integrinas atuam com outras proteínas tais como caderinas, moléculas de adesão celular da superfamília das imunoglobulinas, selectinas e syndecans para mediar a interação e a comunicação célula-célula e célula-matriz. As integrinas se ligam à superfície celular e aos componentes de ECM tais como fibronectina, vitronectina, colágeno e laminina.

80. Cada integrina é formada pela heterodimerização não covalente das subunidades de glicoproteínas alfa e beta, cuja combinação leva a atividades biológicas distintas tais como ligação, migração, proliferação, diferenciação e sobrevivência celular. Atualmente, há descritas em mamíferos 24 integrinas que são formadas através do pareamento de 18 subunidades α e 8 subunidades β e estão listadas na Tabela 4:

Tabela 4 - Integrinas

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Gene	Proteína	Sinônimo	Tipo
ITGA1	CD49a	VLA1	Alfa
ITGA2	CD49b	VLA2	Alfa
ITGA3	CD49c	VLA3	Alfa
ITGA4	CD49d	VLA4	Alfa
ITGA5	CD49e	VLA5	Alfa
ITGA6	CD49f	VLA6	Alfa
ITGA7	ITGA7	FLJ25220	Alfa
ITGA8	ITGA8		Alfa
ITGA9	ITGA9	RLC	Alfa
ITGA10	ITGA10		Alfa
ITGA11	ITGA11	HsT18964	Alfa
ITGAD	CD11D	FLJ39841	Alfa
ITGAE	CD 103	HUMINAE	Alfa
ITGAL	CD 11a	LFA1A	Alfa
ITGAM	CD 11b	MAC-1	Alfa
ITGAV	CD51	VNRA, MSK8	Alfa
ITGAW	ITGAW		Alfa
ITGAX	CD 11c		Alfa
ITGB1	CD29	FNRB, MSK12, MDF2	Beta

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Gene	Proteína	Sinônimo	Tipo
ITGB2	CD 18	LFA-1, MAC-1, MFI7	Beta
ITGB3	CD61	GP3A, GPIIIa	Beta
ITGB4	CD 104		Beta
ITGB5	ITGB5	FLJ26658	Beta
ITGB6	ITGB6		Beta
ITGB7	ITGB7		Beta
ITGB8	ITGB8		Beta

81. Em adição, variantes de algumas das subunidades são formados por splicing diferencial; por exemplo, há quatro variantes da subunidade beta-1. Através de combinações diferentes destas subunidades α e β, são geradas algumas das 24 integrinas únicas, embora o número varie de acordo com estudos diferentes.

82. Em algumas modalidades, o composto é um antagonista de integrina tal como um antagonista da integrina αββι. Em algumas modalidades, o composto exibe um valor de IC50 para a integrina αββι menor que 20 nM, menor que 15 nM ou menor que 10 nM que é medido através de um ensaio de receptor em fase sólida em relação à função da integrina αββι. Em algumas modalidades, o composto é um antagonista de integrina tal como um antagonista da integrina ανβι. Em algumas modalidades, o composto exibe um valor de IC50 para a integrina ανβι menor que 15 nM que é medido através de um ensaio de receptor em fase sólida em relação à função da integrina ανβι. Em algumas modalidades, o composto exibe um valor de IC50 para uma integrina ανβ3 menor que 10 nM que é medido através de um ensaio de receptor em fase sólida em relação à função da integrina ανβ3. Em algumas

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51/197 modalidades, o composto exibe um valor de IC50 para uma integrina ανβό menor que 10 nM que é medido através de um ensaio de receptor em fase sólida em relação à função da integrina ανβό. Em algumas modalidades, o composto exibe um valor de IC50 para cada uma das integrinas ανβι, ανβ3 e ανβό menor que 10 nM que é medido através de ensaios de receptor em fase sólida em relação à função das integrinas ανβι, ανβ3 e ανβό, respectivamente. Em algumas modalidades, o composto exibe um valor de IC50 para uma integrina ανβό maior que 10 nM que é medido através de um ensaio de receptor em fase sólida em relação à função da integrina ανβό. Em algumas modalidades, o composto exibe um valor de IC50 para uma integrina ανβδ maior que 10 nM que é medido através de um ensaio de receptor em fase sólida em relação à função da integrina ανβδ. Em algumas modalidades, o composto exibe um valor de IC50 para cada uma das integrinas ανβό e ανβδ maior que 10 nM que é medido através de ensaios de receptor em fase sólida em relação à função das integrinas ανβό e ανβδ, respectivamente. Em algumas modalidades, o composto exibe um valor de IC50 para uma integrina απόβ3 maior que 2.000 nM que é medido através de um ensaio de receptor em fase sólida em relação à função da integrina απόβ3. Em algumas modalidades, o composto exibe um valor de IC50 para uma integrina απόβ3 maior que 5.000 nM que é medido através de um ensaio de receptor em fase sólida em relação à função da integrina am^3.

Métodos Terapêuticos

83. A presente divulgação refere-se aos campos de produtos farmacêuticos, medicina e biologia celular. Mais especificamente, referese a agentes farmacêuticos (compostos) e composições farmacêuticas dos mesmos que podem ser utilizados como antagonistas de uma ou mais integrinas específicas, tal como antagonista das integrinas αόβι,

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52/197 □vDl, DvD3 e/ou DvD5. Desta maneira, estes compostos podem ser utilizados em composições farmacêuticas e em métodos para tratamento de condições mediadas por uma ou mais destas integrinas, por exemplo, através da inibição ou da antagonização de uma ou mais destas integrinas. Em vários aspectos da presente divulgação, os compostos fornecidos aqui podem ser utilizados em uma variedade de áreas biológicas, profiláticas ou terapêuticas que envolve uma destas integrinas. Em alguns aspectos da presente divulgação, os compostos descritos aqui também podem exibir atividade reduzida em outras integrinas, tais como DvD6 e DvD8, que foram implicadas em efeitos colaterais inflamatórios (Huang, et al., 1996; Lacy-Hulbert, et al., 2007; Travis, et al., 2007; Worthington, et al., 2015).

84. Em outro aspecto, esta divulgação fornece métodos de inibição ou antagonização de uma ou mais das integrinas αββι, DvDl, □vD3 e/ou DvD5 utilizando um ou mais dos compostos divulgados aqui, bem como composições farmacêuticas dos mesmos. Tais composições farmacêuticas compreendem ainda um ou mais carreadores e/ou diluentes e/ou adjuvantes farmaceuticamente aceitáveis não tóxicos (coletivamente referidos aqui como materiais “carreadores”) e se desejado outros ingredientes ativos. Em algumas modalidades, o composto é administrado como parte de uma composição farmacêutica que compreende ainda um carreador farmaceuticamente aceitável. Em algumas modalidades, os compostos e/ou as composições farmacêuticas dos mesmos podem ser administrados de forma oral, parenteral ou por spray de inalação ou tópica em formulações de dosagem unitária contendo carreadores, adjuvantes e veículos farmaceuticamente aceitáveis convencionais. O termo parenteral como utilizado aqui inclui, por exemplo, técnicas subcutâneas, intravenosas, intravítreas, intramusculares, intrasternais, de infusão ou intraperitoneais. Em algumas modalidades, os compostos

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53/197 da presente divulgação são administrados através de qualquer rota adequado na forma de uma composição farmacêutica adaptada para tal rota e em uma dose eficaz para o tratamento pretendido. As doses terapeuticamente eficazes dos compostos necessárias para prevenir ou interromper o progresso ou para tratar uma condição médica são facilmente determinadas por um perito comum na técnica utilizando abordagens pré-clínicas e clínicas familiares às técnicas medicinais.

85. Com base nas técnicas experimentais de laboratório padronizadas e nos procedimentos bem conhecidos e avaliados pelos peritos na técnica, bem como comparações com compostos de utilidade conhecida, os compostos descritos acima podem ser utilizados no tratamento de pacientes que sofrem das condições patológicas anteriores. Um perito na técnica reconhecerá que a seleção do composto mais apropriado da divulgação está dentro da capacidade de um perito comum na técnica e dependerá de uma variedade de fatores incluindo a avaliação dos resultados obtidos em ensaio padrão e modelos de animais.

86. Em vários aspectos da presente divulgação, os compostos fornecidos aqui podem ser utilizados em uma variedade de áreas biológicas, profiláticas ou terapêuticas, incluindo aquelas nas quais uma ou mais das integrinas α₃βι, DvDl, DvD3 e/ou DvD5 desempenha uma função.

87. A divulgação envolve ainda o tratamento ou a inibição de condições patológicas associadas com fibrose e doenças fibróticas tais como fibrose pulmonar, fibrose renal, cardíaca, muscular e do fígado, escleroderma, formação de cicatriz, tal como formação de cicatriz na retina, na córnea e na derme. Adicionalmente, tais antagonistas de integrina podem ser úteis para o tratamento de condições caracterizadas por perda óssea aumentada ou excessiva incluindo, mas,

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54/197 sem limitação, osteoporose, osteogênese imperfeita, doença de Paget, hipercalcemia humoral de malignidade, câncer primário e metastásico do osso e artrite incluindo artrite reumatoide. Ainda, tais agentes farmacêuticos podem ser úteis para a redução da angiogênese patológica e da fibrose associada a doenças tais como câncer, degeneração macular, vitreorretinopatia e retinopatia diabética.

Formulações Farmacêuticas e Rotas de Administração

88. Para administração a um animal especialmente um mamífero que necessita de tal tratamento, os compostos em uma quantidade terapeuticamente eficiente são comumente combinados com um ou mais excipientes apropriados para a rota de administração indicada. Ê considerado que os compostos da presente divulgação sejam formulados de uma maneira acessível para o tratamento de um paciente veterinário bem como de um paciente humano. Em algumas modalidades, o paciente veterinário pode ser um animal de companhia, animais de criação, animais de zoológico e animais selvagens. Os compostos podem ser misturados com lactose, sacarose, amido em pó, ésteres de celulose de ácidos alcanoicos, alquil ésteres de celulose, talco, ácido esteárico, estearato de magnésio, óxido de magnésio, sais de sódio e cálcio de ácidos fosfórico e sulfúrico, gelatina, acácia, alginato de sódio, polivinilpirrolidona e/ou álcool polivinílico e moldados em comprimidos ou encapsulados para administração conveniente. Alternativamente, os compostos podem ser dissolvidos em água, polietileno glicol, propileno glicol, etanol, óleo de milho, óleo de semente de algodão, óleo de amendoim, óleo de gergelim, álcool benzílico, cloreto de sódio e/ou vários tampões. Outros excipientes e modos de administração são bem e amplamente conhecidos na técnica farmacêutica e podem ser adaptados para o tipo de animal que será tratado.

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89. As composições farmacêuticas úteis na presente divulgação podem ser submetidas a operações farmacêuticas convencionais tais como esterilização e/ou podem conter carreadores e excipientes farmacêuticos convencionais tais como conservantes, estabilizantes, agentes umectantes, emulsificantes, tampões etc.

90. Os compostos da presente divulgação podem ser administrados através de uma variedade de métodos, por exemplo, de forma oral ou por injeção (por exemplo, subcutânea, intravenosa, intraperitoneal etc.). Dependendo da rota de administração, os compostos ativos podem ser revestidos em um material para proteger o composto da ação de ácidos e outras condições naturais que podem inativar o composto. Estes também podem ser administrados através de perfusão/infusão contínua do local da doença ou do ferimento.

91. Para administrar o composto terapêutico através de outra administração sem ser parenteral, pode ser necessário revestir o composto com ou coadministrar o composto com um material para prevenir sua inativação. Por exemplo, o composto terapêutico pode ser administrado ao um paciente em um carreador apropriado, por exemplo, lipossomos ou um diluente. Os diluentes farmaceuticamente aceitáveis incluem solução salina e soluções tamponantes aquosas. Os lipossomos incluem emulsões CGF de água-em-óleo-em-água bem como lipossomos convencionais.

92. O composto terapêutico também pode ser administrado de forma parenteral, intraperitoneal, intraespinhal ou intracerebral. As dispersões podem ser preparadas em glicerol, polietilenos glicóis líquidos e misturas dos mesmos e em óleos. Sob condições comuns de armazenamento e uso, estas preparações podem conter um conservante para prevenir o crescimento de micro-organismos.

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93. As composições farmacêuticas que podem ser adequadas para uso injetável incluem soluções aquosas (quando solúvel em água) ou dispersões estéreis e pós estéreis para a preparação extemporânea de soluções ou dispersões injetáveis estéreis. Em todos os casos, a composição tem que ser estéril e tem que ser fluida até a extensão que que haja seringabilidade. Esta tem que ser estável sob as condições de manufatura e armazenamento e tem que ser preservada contra a ação contaminante de micro-organismos tais como bactérias e fungos. O carreador pode ser um solvente ou um meio de dispersão que contém, por exemplo, água, etanol, poliol (tal como, glicerol, propileno glicol e polietileno glicol líquido e similares), misturas adequadas dos mesmos e óleo vegetal. A fluidez apropriada pode ser mantida, por exemplo, através do uso de um revestimento tal como lecitina, através da manutenção do tamanho de partícula requerido no caso de dispersão e através do uso de tensoativos. A prevenção da ação de microorganismos pode ser conseguida através de vários agentes antibacterianos e antifúngicos, por exemplo, parabenos, clorobutanol, fenol, ácido ascórbico, timerosal e similares. Em muitos casos, pode ser útil incluir agentes isotônicos, por exemplo, açúcares, cloreto de sódio ou poliálcools tais como manitol e sorbitol, na composição. A absorção prolongada das composições injetáveis pode ser causada através da inclusão na composição de um agente que retarda a absorção, por exemplo, monoestearato de alumínio ou gelatina.

94. As soluções injetáveis estéreis podem ser preparadas através da incorporação do composto terapêutico na quantidade requerida em um solvente apropriado com um ou uma combinação de ingredientes enumerados anteriormente, quando necessário, seguida pela esterilização por filtração. Geralmente, as dispersões são preparadas através da incorporação do composto terapêutico em um carreador estéril que contém um meio de dispersão básico e os outros

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57/197 ingredientes requeridos daqueles enumerados anteriormente. No caso de pós estéreis para a preparação de soluções injetáveis estéreis, os métodos de preparação incluem secagem a vácuo e secagem por congelamento que produzem um pó do ingrediente ativo (isto é, o composto terapêutico) mais qualquer ingrediente desejado adicional de uma solução previamente esterilizada por filtração do mesmo.

95. O composto terapêutico pode ser administrado de forma oral, por exemplo, com um diluente inerte ou um carreador comestível que pode ser assimilado. O composto terapêutico e outros ingredientes também podem ser colocados dentro de uma cápsula de gelatina dura ou macia, comprimido em comprimidos ou incorporado diretamente na dieta do indivíduo. Para administração terapêutica oral, o composto terapêutico pode ser incorporado a excipientes e utilizado na forma de comprimidos que podem ser ingeridos, comprimidos bucais, pastilhas, cápsulas, elixires, suspensões, xaropes, wafers e similares. A porcentagem do composto terapêutico nas composições e nas preparações pode, evidentemente, ser variada. A quantidade do composto terapêutico em tais composições terapeuticamente úteis é tal que uma dosagem adequada será obtida.

96. É especialmente vantajoso formular composições parenterais na forma de dosagem unitária para facilitar a administração e a uniformidade de dosagem. A forma de dosagem unitária que é utilizado aqui se refere a unidades fisicamente distintas adequadas como dosagens unitárias para os indivíduos que serão tratados; cada unidade contendo uma quantidade predeterminada de composto terapêutico calculada para produzir o efeito terapêutico desejado em associação com o carreador farmacêutico requerido. A especificação para as formas de dosagem unitárias da divulgação é determinada e dependente diretamente (a) das características únicas do composto

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58/197 terapêutico e do efeito terapêutico particular que será atingido e (b) das limitações inerentes da técnica de composição de tal composto terapêutico para o tratamento de uma condição selecionada em um paciente.

97. O composto terapêutico também pode ser administrado de forma tópica ou através de injeção na pele, nos olhos ou na mucosa. Alternativamente, se for desejado o fornecimento local nos pulmões o composto terapêutico pode ser administrado através da inalação de uma formulação de pó seco ou aerossol.

98. Os compostos ativos são administrados em uma dosagem terapeuticamente eficaz suficiente para tratar uma condição associada a um estado de saúde em um paciente. Por exemplo, a eficácia de um composto pode ser avaliada em um sistema de modelo de animal que pode prever a eficácia no tratamento da doença em um ser humano ou outro animal, tal como os sistemas de modelo mostrados nos exemplos e nos desenhos.

99. Uma faixa de dose eficaz de um composto terapêutico pode ser extrapolada de doses eficazes determinadas em estudos com animais para uma variedade de animais diferentes. Em geral, uma dose equivalente para humanos (HED) em mg/kg pode ser calculada de acordo com a fórmula a seguir (ver, por exemplo, Reagan-Shaw et dl., FASEB J., 22(3):659-661, 2008, que é incorporado aqui como referência):

100. HED (mg/kg) = Dose para o animal (mg/ kg) x (Animal K_m/ Ser Humano Km)

101. O uso dos fatores K_m na conversão resulta em valores de HED mais acurados, que são baseados na área de superfície do corpo (BSA) ao invés de somente na massa corporal. Os valores de K_m para

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59/197 humanos e vários animais são bem conhecidos. Por exemplo, o K_m para um ser humano com média de 60 kg (com uma BSA de 1,6 m²) é 37, enquanto que uma criança com 20 kg (BSA 0,8 m²) teria um K_m de 25. Os K_m para alguns modelos de animais relevantes também são bem conhecidos, incluindo: K_m de camundongos de 3 (considerando um peso de 0,02 kg e BSA de 0,007); K_m de hamster de 5 (considerando um peso de 0,08 kg e BSA de 0,02); K_m de rato de 6 (considerando um peso de 0,15 kg e BSA de 0,025) e K_m de macaco de 12 (considerando um peso de 3 kg e BSA de 0,24).

102. As quantidades precisas da composição terapêutica dependem do julgamento do profissional e são peculiares de cada indivíduo. Todavia, uma dose HED calculada fornece um guia geral. Outros fatores que afetam a dose incluem o estado físico e clínico do paciente, a rota de administração, o objetivo pretendido do tratamento e a potência, a estabilidade e a toxicidade da formulação terapêutica particular.

103. A quantidade de dose real de um composto da presente divulgação ou uma composição que compreende um composto da presente divulgação administrada a um indivíduo pode ser determinada através de fatores físicos e fisiológicos tais como o tipo de animal tratado, a idade, o sexo, o peso corporal, a gravidade da condição, o tipo de doenças que será tratado, as intervenções terapêuticas anteriores ou concorrentes, a idiopatia do indivíduo e a rota de administração. Estes fatores podem ser determinados por um perito na técnica. O profissional responsável pela administração irá tipicamente determinar a concentração de ingrediente(s) ativo(s) em uma composição e a(s) dose(s) apropriada(s) para o indivíduo em questão. A dosagem pode ser ajustada pelo médico individual no evento de qualquer complicação.

104. Uma quantidade eficaz tipicamente variará de

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60/197 aproximadamente 0,001 mg/kg a aproximadamente 1000 mg/kg,de aproximadamente 0,01 mg/kg a aproximadamente 750 mg/kg,de aproximadamente 100 mg/kg a aproximadamente 500 mg/kg,de aproximadamente 1,0 mg/kg a aproximadamente 250 mg/kg,de aproximadamente 10,0 mg/kg a aproximadamente 150 mg/kg em uma ou mais administrações de doses diariamente, para um ou vários dias (dependendo do curso do modo de administração e dos fatores discutidos acima). Outras faixas de doses adequadas incluem 1 mg a 10000 mg ao dia, 100 mg a 10000 mg ao dia, 500 mg a 10000 mg ao dia e 500 mg a 1000 mg ao dia. Em algumas modalidades particulares, a quantidade é menor que 10.000 mg ao dia com uma faixa de 750 mg a 9000 mg ao dia.

105. A quantidade eficaz pode ser menor que 1 mg/kg/dia, menor que 500 mg/kg/dia, menor que 250 mg/kg/dia, menor que 100 mg/kg/dia, menor que 50 mg/kg/dia, menor que 25 mg/kg/dia ou menor que 10 mg/kg/dia. Pode estar alternativamente na faixa de 1 mg/kg/dia a 200 mg/kg/dia. Por exemplo, considerando o tratamento de pacientes diabéticos, a dosagem unitária pode ser uma quantidade que reduz a glicose no sangue em pelo menos 40% quando comparada com a de um indivíduo não tratado. Em outra modalidade, a dosagem unitária é uma quantidade que reduz a glicose no sangue até um nível que é ± 10% do nível de glicose no sangue de um indivíduo não diabético.

106. Em outros exemplos não limitantes, uma dose também pode compreender de aproximadamente 1 micrograma/kg/peso corporal, aproximadamente 5 microgramas/kg/peso corporal, aproximadamente 10 microgramas/kg/peso corporal, aproximadamente 50 microgramas/kg/peso corporal, cerca de 100 microgramas/kg/peso corporal, aproximadamente 200 microgramas/kg/peso corporal,

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61/197 aproximadamente 350 microgramas/kg/peso corporal, aproximadamente 500 microgramas/kg/peso corporal, aproximadamente 1 miligrama/kg/peso corporal, aproximadamente 5

miligramas/kg/peso	corporal,	aproximadamente	10
miligramas/kg/peso	corporal,	aproximadamente	50
miligramas/kg/peso	corporal,	aproximadamente	100
miligramas/kg/peso	corporal,	aproximadamente	200
miligramas/kg/peso	corporal,	aproximadamente	350
miligramas/kg/peso	corporal,	aproximadamente	500

miligramas/kg/peso corporal, a aproximadamente 1000 mg/kg/peso corporal ou mais por administração e qualquer faixa que possa ser derivada da mesma. Nos exemplos não limitantes de uma faixa que pode ser derivada dos números listados aqui, uma faixa de aproximadamente 5 mg/kg/peso corporal a aproximadamente 100 mg/kg/peso corporal, aproximadamente 5 microgramas/kg/peso corporal a aproximadamente 500 miligramas/kg/peso corporal etc., pode ser administrada, com base nos números descritos acima.

107. Em certas modalidades, uma composição farmacêutica da presente divulgação pode compreender, por exemplo, pelo menos aproximadamente 0,1% de um composto da presente divulgação. Em outras modalidades, o composto da presente divulgação pode compreender entre aproximadamente 1% a aproximadamente 75% do peso da unidade ou entre aproximadamente 25% a aproximadamente 60%, por exemplo, e qualquer faixa que possa ser derivada da mesma.

108. São consideradas doses únicas ou múltiplas dos agentes. Os intervalos de tempo desejados para fornecimento de várias doses podem ser determinados por um perito comum na técnica empregando nada mais que experimentos rotineiros. Como um exemplo, os indivíduos podem receber a administração de duas doses diárias em

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62/197 intervalos de aproximadamente 12 horas. Em algumas modalidades, o agente é administrado uma vez ao dia.

109. O(s) agente(s) pode(m) ser administrado(s) em um planejamento de rotina. Como utilizado aqui, um planejamento de rotina refere-se a um período de tempo designado predeterminado. O planejamento de rotina pode abranger períodos de tempo que são idênticos ou que diferem em duração, contanto que o planejamento seja predeterminado. Por exemplo, o planejamento de rotina pode envolver a administração duas vezes ao dia, todos os dias, a cada dois dias, a cada três dias, a cada quatro dias, a cada cinco dias, a cada seis dias, em base semanal, em base mensal ou qualquer número determinado de dias ou semanas entre os mesmos. Alternativamente, o planejamento de rotina predeterminado pode envolver a administração em uma base de duas vezes ao dia durante a primeira semana, seguida por uma base diária durante vários meses etc. Em outras modalidades, a divulgação fornece que o(s) agente(s) pode(m) ser tomados oralmente e que seu momento é ou não é dependente da ingestão de alimentos. Assim, por exemplo, o agente pode ser tomado todas as manhãs e/ou todas as tardes, independentemente de quando o indivíduo se alimentou ou irá se alimentar.

Terapia de Combinação

110. Em adição ao fato de ser utilizados como uma monoterapia, os compostos da presente divulgação também podem encontrar uso nas terapias de combinação. Uma terapia de combinação eficaz pode ser obtida com uma única composição ou formulação farmacológica que inclui ambos os agentes ou com duas composições ou formulações distintas, administradas ao mesmo tempo, em que uma composição inclui um composto desta divulgação e a outra inclui o(s) segundo(s) agente(s). Alternativamente, a terapia pode preceder ou suceder o

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63/197 tratamento com o outro agente em intervalos que variam de minutos a meses.

111. Exemplos não limitantes de tal terapia de combinação incluem a combinação de um ou mais compostos da divulgação com outro agente, por exemplo, um agente anti-inflamatório, um agente quimioterapêutico, terapia de radiação, um antidepressivo, um agente antipsicótico, um anticonvulsivante, um estabilizador do humor, um agente anti-infectivo, um agente anti-hipertensivo, um agente de redução de colesterol ou outro modulador de lipídeos no sangue, um agente para promover a perda de peso, um agente antitrombótico, um agente para tratamento ou prevenção de eventos cardiovasculares tal como infarto do miocárdio ou derrame, um agente antidiabético, um agente para redução da rejeição de transplante ou doença enxertoversus-hospedeiro, um agente antiartrítico, um agente analgésico, um agente antiasmático ou outro tratamento para doenças respiratórias ou um agente para tratamento ou prevenção de distúrbios da pele. Os compostos da divulgação podem ser combinados com agentes planejados para aprimorar a resposta imunológica de um paciente a câncer, incluindo (mas, sem limitação) vacinas para câncer.

Definições

112. Quando utilizados no contexto de um grupo químico: “hidrogênio” significa -H; “hidróxi” significa -OH; “oxo” significa =0; “carbóxi” significa -C(=O)OH (também escrito como -COOH ou -CO2H); “halo” significa independentemente -F, -Cl, -Br ou -I; “amino” significa -NH2; “ciano” significa -CN; “azido” significa -N3; “mercapto” significa -SH; e “tio” significa =S.

113. No contexto de fórmulas químicas, o símbolo “-” significa uma ligação simples, “=” significa uma ligação dupla e “=” significa

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64/197 ligação tripla. O símbolo “----” representa uma ligação opcional, que se presente é simples ou dupla. O símbolo “==” representa uma ligação simples ou uma ligação dupla. Assim, a fórmula cobre, por exemplo, . E é entendido que que nenhum deste átomo de anel faz parte de mais de uma ligação dupla. Além disso, é observado que o símbolo de ligação covalente quando conecta um ou dois átomos estereogênicos, não indica qualquer estereoquímica preferida. Ao invés disso, cobre todos os estereoisômeros bem como misturas dos mesmos. O símbolo ”, quando desenhado perpendicularmente através de uma ligação (por exemplo, pCH₃ para metila) indica um ponto de ligação do grupo. Ê observado que o ponto de ligação é tipicamente identificado somente desta maneira para grupos maiores com a finalidade de auxiliar o leitor na identificação de forma não ambígua de um ponto de ligação. O símbolo significa uma ligação simples em que o grupo ligado à extremidade grossa da cunha está “fora da página”. O símbolo “......’” significa uma ligação simples em que o grupo ligado à extremidade grossa da cunha está “dentro da página”. O símbolo “άλλ ” significa uma ligação simples em que a geometria ao redor de uma ligação dupla (por exemplo, E ou 2) é indefinida. Ambas as opções, bem como suas combinações são, portanto, pretendidas. Qualquer valência indefinida sobre um átomo de uma estrutura mostrada neste pedido de patente representa implicitamente um átomo de hidrogênio ligado a tal átomo. Um ponto em negrito sobre um átomo de carbono indica que o hidrogênio ligado a tal carbono está orientado para fora do plano do papel.

114. Quando um grupo “R” for representado como um “grupo flutuante” em um sistema de anel, por exemplo, na fórmula:

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115. então R pode substituir qualquer átomo de hidrogênio ligado a qualquer um dos átomos do anel, incluindo um hidrogênio representado, implicado ou definido expressamente, contanto que seja formada uma estrutura estável. Quando um grupo “R” for representado como um “grupo flutuante” em um sistema de anel fundido, como, por exemplo, na fórmula:

116. Então, R pode substituir qualquer hidrogênio ligado a qualquer um dos átomos do anel de um dos anéis fundidos a não ser que seja especificado o contrário. Hidrogênios que podem ser substituídos incluem os hidrogênios representados (por exemplo, o hidrogênio ligado ao nitrogênio na fórmula acima), hidrogênios implicados (por exemplo, um hidrogênio da fórmula acima que não é mostrado, mas entendido como estando presente), hidrogênios definidos expressamente e hidrogênios opcionais cuja presente depende da identidade deum átomo do anel (por exemplo, um hidrogênio ligado ao grupo X, quando X for igual a -CH-), contanto que uma estrutura estável seja formada. No exemplo representado, R pode residir no anel de 5 membros ou no de 6 membros do sistema de anel fundido. Na fórmula acima, a letra subscrita “y” imediatamente após o grupo “R” encerrado entre parênteses, representa um número variável. A não ser que seja especificado o contrário, esta variável pode ser 0, 1, 2 ou qualquer número inteiro maior que 2, limitado apenas pelo número máximo de átomos de hidrogênio que podem ser substituídos do anel

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66/197 ou do sistema de anel.

117. Para os grupos químicos e as classes de compostos, o número de átomos de carbono no grupo ou na classe é indicado como a seguir: “Cn” define o número exato (n) de átomos de carbono no grupo/classe. “C<n” define o número máximo (n) de átomos de carbono que pode estar no grupo/classe, com o número mínimo menor possível para o grupo/classe em questão, por exemplo, é entendido que o número mínimo de átomos de carbono no grupo “alquenil(C<8)” ou na classe “alceno(C<8)” é dois. Comparar com “alcóxi(C<io)”, que designa grupos alcóxi que possuem de 1 a 10 átomos de carbono. “Cn-n'” define tanto o número mínimo (n) quanto o máximo (nj de átomos de carbono no grupo. Assim, “alquil(c2-io)” designa aqueles grupos alquila que possuem de 2 a 10 átomos de carbono. Estes indicadores de número de carbono podem preceder ou suceder os grupos químicos ou classe que modificam e podem ou não estar encerrados entre parênteses, sem significar qualquer alteração no significado. Assim, os termos “C5 olefina”, “C5-olefina”, “olefinafCs)” e “olefinacs” são todos sinônimos. Quando qualquer um dos grupos químicos ou das classes de compostos definidas aqui for modificado pelo termo “substituído”, qualquer(quaisquer) átomo(s) de carbono no grupamento que substitui um átomo de hidrogênio não é(são) contando(s). Assim, a metoxihexila, que possui um total de sete átomos de carbono, é um exemplo de um alquil(ci-6) substituído.

118. O termo “saturado” quando utilizado para modificar um composto ou um grupo químico significa que o composto ou o grupo químico não possui ligações duplas carbono-carbono e triplas carbonocarbono, exceto como citado a seguir. Quando o termo for utilizado para modificar um átomo, este significa que o átomo não faz parte de qualquer ligação dupla ou tripla. No caso de versões substituídas de

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67/197 grupos saturados, uma ou mais ligações duplas de carbono e oxigênio ou uma ligação dupla de carbono e nitrogênio pode estar presente. E quando tal ligação estiver presente, então as ligações duplas carbonocarbono que podem ocorrer como parte do tautomerismo de ceto-enol ou do tautomerismo de imina/enamina não são impedidas. Quando o termo “saturado” for utilizado para modificar uma solução de uma substância, significa que nada mais que aquela substância pode se dissolver naquela solução.

119. O termo “alifático” quando utilizado sem o modificador “substituído” significa que o composto ou o grupo químico modificado desta maneira é um composto ou um grupo hidrocarboneto acíclico ou cíclico, mas não aromático. Nos compostos/grupos alifáticos, os átomos de carbono podem ser unidos em cadeias retas, cadeias ramificadas ou anéis não aromáticos (alicíclicos). Os compostos/grupos alifáticos podem ser saturados, ou seja, ligados através de ligações simples carbono-carbono (alcanos/alquila) ou insaturados, com uma ou mais ligações duplas carbono-carbono (alcenos/alquenila) ou com uma ou mais ligação triplas carbono-carbono (alcinos/alquinila).

120. O termo “aromático” quando utilizado para modificar um composto ou um grupo químico refere-se a um anel insaturado planar de átomos com 4n +2 elétrons em um sistema π cíclico completamente conjugado.

121. O termo “alquila” quando utilizado sem o modificador “substituído” refere-se a um grupo alifático saturado monovalente com um átomo de carbono como o ponto de ligação, uma estrutura acíclica linear ou ramificada e nenhum átomo sem ser carbono e hidrogênio. Os grupos -CH3 (Me), -CH2CH3 (Et), -CH2CH2CH3 (n-Pr ou propila), -CH(CH₃)2 (i-Pr, 'Pr ou isopropila), -CH2CH2CH2CH3 (n-Bu), -ΟΗ(ΟΗ₃)ΟΗ₂ΟΗ3 (sec-butila), -ΟΗ₂ΟΗ(ΟΗ₃)2 (isobutila), -Ο(ΟΗ₃)₃ (tert-

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68/197 butila, t-butila, t-Bu ou ^fBu) e -CH₂C(CH3)3 (neo-pentila) são exemplos não limitantes de grupos alquila. O termo “alcanodiila” quando utilizado sem o modificador “substituído” refere-se a um grupo alifático saturado divalente, com um ou dois átomos de carbono saturados como o(s) ponto(s) de ligação, uma estrutura acíclica linear ou ramificada, nenhuma ligação dupla ou tripla carbono-carbono e nenhum átomo sem ser carbono e hidrogênio. Os grupos -CH₂- (metileno), -CH₂CH₂-, -CH₂C(CH3)₂CH₂- e -CH₂CH₂CH₂- são exemplos não limitantes de grupos alcanodiila. O termo “alquilideno” quando utilizado sem o modificador “substituído” refere-se ao grupo divalente =CRR' no qual R e R' são independentemente hidrogênio ou alquila. Os exemplos não limitantes de alquilideno grupos incluem: =CH₂, =CH(CH₂CH3) e =C(CH3)₂. Um “alcano” refere-se à classe de compostos que possuem a fórmula H-R, em que R é alquila como este termo é definido anteriormente. Quando qualquer um destes termos for utilizado com o modificador “substituído” um ou mais átomos de hidrogênio foram independentemente substituídos por -OH, -F, -Cl, -Br, -I, -NH₂, -NO₂, -CO₂H, -CO₂CH₃, -CN, -SH, -och₃, -OCH₂CH₃, -C(O)CH₃, -nhch₃, -NHCH₂CH₃, -N(CH₃)₂, -C(O)NH₂, -C(O)NHCH₃, -C(O)N(CH₃)₂,

-OC(O)CH3, -NHC(O)CH3, -S(O)₂OH ou -S(O)₂NH₂. Os grupos a seguir são exemplos não limitantes de grupos alquila substituídos: -CH₂OH, -CH₂C1, -CF3, -CH₂CN, -CH₂C(O)OH, -CH₂C(O)OCH₃, -CH₂C(O)NH₂, -CH₂C(O)CH₃, -ch₂och₃, -CH₂OC(O)CH₃, -ch₂nh₂, -CH₂N(CH₃)₂ e -CH₂CH₂C1. O termo “haloalquila” é um subconjunto de alquila substituído, no qual a substituição do átomo de hidrogênio é limitada a halo (isto é, -F, -Cl, -Br ou -I) de forma que nenhum outro átomo além de carbono, hidrogênio e halogênio esteja presente. O grupo, -CH₂C1 é um exemplo não limitante de um haloalquila. O termo “fluoralquila” é um subconjunto de alquila substituído, no qual a substituição do átomo de hidrogênio é limitada a fluor de forma que nenhum outro

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69/197 átomo além de carbono, hidrogênio e flúor esteja presente. Os grupos -CH2F, -CF3 e -CH2CF3 são exemplos não limitantes de grupos fluoralquila.

122. O termo “arila” quando utilizado sem o modificador “substituído” refere-se a um grupo aromático insaturado monovalente com um átomo de carbono aromático como o ponto de ligação, o dito átomo de carbono fazendo parte de uma ou mais estruturas de anel aromático de seis membros, em que os átomos do anel são todos carbono e em que o grupo consiste de nenhum átomo sem ser carbono e hidrogênio. Se mais de um anel estiver presente, os anéis podem ser fundidos ou não fundidos. Como utilizado aqui, o termo não impede a presença de um ou mais grupos alquila, cicloalquila e/ou aralquila (limitação do número de carbonos permitidos) ligados ao primeiro anel aromático ou qualquer anel aromático adicional presente. Os exemplos não limitantes de grupos arila incluem fenila (Ph), metilfenila, (dimetil)fenila, -C0H4CH2CH3 (etilfenil), naftila e um grupo monovalente derivado de bifenila. O termo “arenodiila” quando utilizado sem o modificador “substituído” refere-se a um grupo aromático divalente com dois átomos de carbono aromáticos como pontos de ligação, os ditos átomos de carbono fazendo parte de uma ou mais estruturas de anel aromático de seis membros em que os átomos do anel são todos carbono e em que o grupo monovalente consiste de nenhum átomo sem ser carbono e hidrogênio. Como utilizado aqui, o termo não impede a presença de um ou mais grupos alquila, aril e/ou aralquila (limitação do número de carbonos permitidos) ligados ao primeiro anel aromático ou qualquer anel aromático adicional presente. Se mais de um anel estiver presente, os anéis podem ser fundidos ou não fundidos. Os anéis não fundidos podem ser conectados através de um ou mais dos seguintes: uma ligação covalente, grupos alcanodiila ou alcenodiila (limitação do número de carbonos permitidos). Os exemplos não

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70/197 limitantes de grupos arenodiila incluem:

123. Um “areno” refere-se à classe de compostos que possuem a fórmula H-R, em que R é arila como o termo é definido acima. Benzeno e tolueno são exemplos não limitantes de arenos. Quando qualquer um destes termos for utilizado com o modificador “substituído” um ou mais átomos de hidrogênio em qualquer um do(s) anel(éis) aromático(s) ou qualquer grupo alquila, cicloalquila e/ou aralquila ligado aos mesmos foram independentemente substituídos por -OH, -F, -Cl, -Br, -I, -NH2, -NO2, -CO2H, -CO2CH3, -CN, -SH, -OCH3, -OCH2CH3, -C(O)CH₃, -NHCH3, -NHCH2CH3, -N(CH₃)2, -C(O)NH₂, -C(O)NHCH₃, -C(O)N(CH₃)2, -OC(O)CH₃, -NHC(O)CH₃, -S(O)₂OH ou -S(O)₂NH₂.

124. O termo “aralquila” quando utilizado sem o modificador “substituído” refere-se ao grupo monovalente -alcanodiil-arila, no qual cada um dos termos alcanodiila e arila é utilizado de uma maneira coerente com as definições fornecidas acima. Os exemplos não limitantes são: fenilmetila (benzila, Bn) e 2-fenil-etila. Quando o termo aralquila for utilizado com o modificador “substituído” um ou mais átomo de hidrogênio do grupo alcanodiila e/ou arila foram independentemente substituídos por -OH, -F, -Cl, -Br, -I, -NH2, -NO2, -CO2H, -CO2CH3, -CN, -SH, -OCH3, -OCH2CH3, -C(O)CH₃, -NHCH3, -NHCH2CH3, -N(CH₃)₂, -C(O)NH₂, -C(O)NHCH₃, -C(O)N(CH₃)2,

-OC(O)CH₃, -NHC(O)CH₃, -S(O)₂OH ou -S(O)₂NH₂. Os exemplos não limitantes de aralquilas substituídos são: (3-clorofenil)-metila e 2-cloro2-fenil-et-l-ila.

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125. O termo “alcóxi” quando utilizado sem o modificador “substituído” refere-se ao grupo -OR, no qual R é um alquila, como o termo é definido acima. Os exemplos não limitantes incluem: -OCH3 (metóxi), -OCH2CH3 (etóxi), -OCH2CH2CH3, -OCH(CH3)2 (isopropóxi), -OC(CH3)3 (tert-butóxi), -OCH(CH2)2, -O-ciclopentila e -O-ciclohexila. Os termos “alquiltio” e “aciltio” quando utilizados sem o modificador “substituído” referem-se ao grupo -SR, no qual R é uma alquila e um acila, respectivamente. O termo “álcool” corresponde a um alcano, como é definido anteriormente, em que pelo menos um dos átomos de hidrogênio foi substituído por um grupo hidróxi. O termo “éter” corresponde a um alcano, como é definido anteriormente, em que pelo menos um dos átomos de hidrogênio foi substituído por um grupo alcóxi. Quando qualquer um destes termos for utilizado com o modificador “substituído” um ou mais átomos de hidrogênio foram independentemente substituídos por -OH, -F, -Cl, -Br, -I, -NH2, -NO2, -CO2H, -CO2CH3, -CN, -SH, -OCH3, -OCH2CH3, -C(O)CH₃, -NHCH3, -NHCH2CH3, -N(CH₃)₂, -C(O)NH₂, -C(O)NHCH₃, -C(O)N(CH₃)2,

-OC(O)CH₃, -NHC(O)CH₃, -S(O)₂OH ou -S(O)₂NH₂.

126. O uso da palavra “um” ou “uma”, quando utilizada em conjunção com o termo “compreendendo” nas Reivindicações e/ou no relatório descritivo pode significar “umjaj”, mas também é coerente com o significado de “um(a) ou mais”, “pelo menos um(a)” e “um(a) ou mais de um(a)”.

127. Ao longo de todo este pedido de patente, o termo “aproximadamente” é utilizado para indicar que um valor inclui a variação inerente de erro para o dispositivo, o método que será empregado para determinar o valor ou a variação que existe entre os indivíduos do estudo.

128. Um “ingrediente ativo” (IA) (também referido como um

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72/197 composto ativo, uma substância ativa, um agente ativo, um agente farmacêutico, um agente, uma molécula biologicamente ativa ou um composto terapêutico) é o ingrediente em um fármaco farmacêutico ou um pesticida que é biologicamente ativo. Os termos similares ingrediente farmaceuticamente ativo (API) e composto ativo volumoso também são utilizados na medicina e o termo substância ativa pode ser utilizado para formulações de pesticida.

129. Os termos “compreendem”, “possuem” e “incluem” são verbos de ligação ilimitados. Quaisquer formas ou tempos verbais de um ou mais destes verbos, tais como “compreende”, “compreendendo”, “possui”, “possuindo”, “inclui” e “incluindo”, também são ilimitados. Por exemplo, qualquer método que “compreenda”, “possua” ou “inclua” uma ou mais etapas não é limitado a possuir apenas esta uma ou mais etapas e também cobre outras etapas não listadas.

130. O termo “eficaz”, como o termo é utilizado no relatório descritivo e/ou nas Reivindicações, significa adequado para a obtenção de um resultado desejado, esperado ou pretendido. “Quantidade eficaz”, “Quantidade terapeuticamente eficiente” ou “quantidade farmaceuticamente eficiente” quando utilizada no contexto de tratamento de um paciente ou um indivíduo com um composto significa a quantidade do composto que, quando administrada a um indivíduo ou um paciente para tratamento ou prevenção de uma doença, é uma quantidade suficiente para efetuar tal tratamento ou prevenção da doença.

131. Um “excipiente” é uma substância farmaceuticamente aceitável formulada junto com o(s) ingrediente(s) ativo(s) de uma medicação, uma composição farmacêutica, uma formulação ou um sistema de fornecimento de fármaco. Os excipientes podem ser utilizados, por exemplo, para estabilizar a composição, para aumentar o

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73/197 volume da composição (assim frequentemente referidos como “agentes de volume”, “recheios” ou “diluentes” quando utilizados para esta finalidade) ou para conferir um aprimoramento terapêutico sobre o ingrediente ativo na forma de dosagem final, tal como facilitar a absorção do fármaco, reduzir a viscosidade ou aprimorar a solubilidade. Os excipientes incluem versões farmaceuticamente aceitáveis de antiaderentes, agentes aglutinantes, revestimentos, corantes, desintegrantes, aromatizantes, agentes de deslizamento, lubrificantes, conservantes, agentes absorventes, adoçantes e veículos. O excipiente principal que serve como um meio para carregar o ingrediente ativo é geralmente chamado de veículo. Os excipientes também podem ser utilizados no processo de manufatura, por exemplo, para auxiliar a manipulação da substância ativa, tal como facilitando a fluxibilidade do pó ou propriedades de não grudar, em adição ao auxílio na estabilidade in vitro tal como prevenção de desnaturação ou agregação ao longo do tempo de validade esperado. A adequação de um excipiente irá tipicamente variar dependendo da rota de administração, da forma de dosagem, do ingrediente ativo, bem como outros fatores.

132. O termo “hidrato” quando utilizado como um modificador para um composto significa que o composto possui menos de uma (por exemplo, hemihidrato), uma (por exemplo, monohidrato) ou mais de uma (por exemplo, dihidrato) molécula de água associada a cada molécula de composto, tal como nas formas sólidas do composto.

133. Como utilizado aqui, o termo “IC50” refere-se a uma dose inibidora que é 50% da resposta máxima obtida. Esta medida quantitativa indica o quanto de um fármaco particular ou outra substância (inibidor) é necessário para inibir certo processo biológico, bioquímico ou químico (ou componente de um processo, isto é, uma enzima, uma célula, um receptor celular ou um micro-organismo) à

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74/197 metade.

134. Um “isômero” de um primeiro composto é um composto separado no qual cada molécula contém os mesmos átomos constituintes que o primeiro composto, mas no qual a configuração destes átomos em três dimensões é diferente.

135. Como utilizado aqui, o termo “paciente” ou “indivíduo” refere-se a um organismo mamífero vivo, tal como um ser humano, um macaco, um bovino, um ovino, um caprino, um cachorro, um gato, um camundongo, um rato, um porquinho da índia ou espécies transgênicas dos mesmos. Em certas modalidades, o paciente ou o indivíduo é um primata. Os exemplos não limitantes de pacientes humanos são adultos, adolescentes, crianças e fetos.

136. Como é geralmente utilizado aqui “farmaceuticamente aceitável” refere-se aos compostos, materiais, composições e/ou formas de dosagem que são, dentro do âmbito do julgamento médico correto, adequados para uso em contato com os tecidos, os órgãos e/ou fluidos corporais de seres humanos e animais sem toxicidade, irritação, resposta alérgica excessivas ou outros problemas ou complicações comensuradas com uma razão risco/benefício razoável.

137. “Sais farmaceuticamente aceitáveis” significam sais de compostos da presente invenção que são farmaceuticamente aceitáveis, como é definido anteriormente e que possuem a atividade farmacológica desejada. Tais sais incluem sais de adição de ácido formados com ácidos inorgânicos tais como ácido clorídrico, ácido bromídrico, ácido sulfúrico, ácido nítrico, ácido fosfórico e similares; ou com ácidos orgânicos tais como ácidos 1,2-etanodissulfônico, ácido 2-hidroxietanossulfônico, ácido 2-naftalenossulfônico, ácido 3-fenilpropiônico, 4,4'-metilenobis(ácido 3-hidróxi-2-eno-l-carboxílico), ácido

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4-metilbiciclo[2.2.2]oct-2-eno-l-carboxílico, ácido acético, ácidos monoe dicarboxílicos alifáticos, ácidos sulfúricos alifáticos, ácidos sulfúricos aromáticos, ácido benzenossulfônico, ácido benzoico, ácido canforsulfônico, ácido carbônico, ácido cinâmico, ácido cítrico, ácido ciclopentanopropiônico, ácido etanossulfônico, ácido fumárico, ácido glucoheptônico, ácido glucônico, ácido glutâmico, ácido glicólico, ácido heptanoico, ácido hexanoico, ácido hidroxinaftoico, ácido láctico, ácido laurilsulfúrico, ácido maleico, ácido málico, ácido malônico, ácido mandélico, ácido metanossulfônico, ácido mucônico, ácido o-(4-hidroxibenzoil)benzoico, ácido oxálico, ácido p-clorobenzenossulfônico, ácidos alcanoicos substituídos por fenila, ácido propiônico, ácido p-toluenossulfônico, ácido pirúvico, ácido salicílico, ácido esteárico, ácido succínico, ácido tartárico, ácido butilacético terciário, ácido trimetilacético, ácido trifluoracético e similares. Os sais farmaceuticamente aceitáveis também incluem sais de adição de base que podem ser formados quando os prótons ácidos presentes são capazes de reagir com bases inorgânicas ou orgânicas. As bases inorgânicas aceitáveis incluem hidróxido de sódio, carbonato de sódio, hidróxido de potássio, hidróxido de alumínio e hidróxido de cálcio. As bases orgânicas aceitáveis incluem etanolamina, dietanolamina, trietanolamina, trometamina, 7V-metilglucamina e similares. Deve ser reconhecido que o ânion ou o cátion particular que constitui uma parte de qualquer sal desta invenção não é crítico, contanto que o sal, como um todo, seja farmacologicamente aceitável. Exemplos adicionais de sais farmaceuticamente aceitáveis e seus métodos de preparação e uso são apresentados no Handbook of Farmacêuticos Salts: Properties, and Use (P. H. Stahl & C. G. Wermuth eds., Verlag Helvetica Chimica Acta, 2002).

138. Um “carreador farmaceuticamente aceitável”, um “carreador de fármaco” ou simplesmente “carreador” é uma substância

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76/197 farmaceuticamente aceitável formulada junto com a medicação de ingrediente ativo que está envolvida na condução, no fornecimento e/ou no transporte de um agente químico. Carreadores de fármacos podem ser utilizados para aprimorar o fornecimento e a efetividade dos fármacos, incluindo, por exemplo, a tecnologia de liberação controlada para modular a disponibilidade biológica do fármaco, para diminuir o metabolismo do fármaco e/ou para reduzir a toxicidade do fármaco. Alguns carreadores de fármacos podem aumentar a efetividade de fornecimento de fármaco para sítios alvos específicos. Os exemplos de carreadores incluem: lipossomos, microesferas (por exemplo, feitas de ácido poli(láctico-co-glicólico)), microesferas de albumina, polímeros sintéticos, nanofibras, complexos de proteína-DNA, conjugados de proteína, eritrócitos, virossomos e dendrímeros.

139. Um “fármaco farmacêutico” (também referido como um composto farmacêutico, um agente farmacêutico, uma preparação farmacêutica, uma composição farmacêutica, uma formulação farmacêutica, produto farmacêutico, produto medicinal, remédio, medicação ou simplesmente um fármaco) é um fármaco utilizado para diagnosticar, curar, tratar ou prevenir doença. Um ingrediente ativo (IA) (definido acima) é o ingrediente em um fármaco farmacêutico ou um pesticida que é biologicamente ativo. Os termos similares ingrediente farmaceuticamente ativo (API) e composto ativo volumoso também são utilizados na medicina e o termo substância ativa pode ser utilizado para formulações de pesticida. Algumas medicações e produtos pesticidas podem conter mais de um ingrediente ativo. Em contraste com os ingredientes ativos, os ingredientes inativos são geralmente chamados de excipientes (definidos acima) nos contextos farmacêuticos.

140. “Prevenção” ou “prevenir” inclui: (1) a inibição do início de uma doença em um indivíduo ou um paciente que pode estar em risco

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77/197 e/ou ser predisposto à doença, mas não sofre ou exibe ainda qualquer uma ou toda patologia ou sintomatologia da doença e/ou (2) o retardo do início da patologia ou sintomatologia de uma doença em um indivíduo ou um paciente que pode estar em risco e/ou ser predisposto à doença, mas não sofre ou exibe ainda qualquer ou toda a patologia ou sintomatologia da doença.

141. “Pró-fármaco” significa um composto que pode ser convertido metabolicamente in vivo em um inibidor de acordo com a presente invenção. O pró-fármaco por si mesmo pode ou não ter também atividade em relação a certa proteína alvo. Por exemplo, um composto que compreende um grupo hidróxi pode ser administrado na forma de um éster que é convertido através de hidrólise in vivo no composto hidróxi. Os ésteres adequados que podem ser convertidos in vivo em compostos hidróxi incluem acetatos, citratos, lactatos, fosfatos, tartaratos, malonatos, oxalatos, salicilatos, propionatos, succinatos, fumaratos, maleatos, metileno-bis-p-hidroxinaftoato, gentisatos, isetionatos, di-p-toluoiltartaratos, metanossulfonatos, etanossulfonatos, benzenossulfonatos, p-toluenossulfonatos, ciclohexilsulfamatos, quinatos, ésteres de aminoácidos e similares. Similarmente, um composto que compreende um grupo amina pode ser administrado na forma de uma amida que é convertida através de hidrólise in vivo no composto amina.

142. Um “estereoisômero” ou “isômero óptico” é um isômero de certo composto no qual os mesmos átomos estão ligados aos mesmos outros átomos, mas no qual a configuração destes átomos em três dimensões é diferente. “Enanciômeros” são estereoisômeros de certo composto que são imagens especulares um do outro, como levógiros e dextrógiros. “Diastereoisômeros” são estereoisômeros de certo composto que não são enanciômeros. Moléculas quirais contêm um centro quiral,

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78/197 também referido como um estereocentro ou um centro estereogênico, que é qualquer ponto, embora não necessariamente um átomo, em uma molécula que carrega grupos de forma que uma permuta de quaisquer dois grupos leva a um estereoisômero. Nos compostos orgânicos, o centro quiral é tipicamente um átomo de carbono, fósforo ou enxofre, embora também seja possível que outros átomos sejam estereocentros em compostos orgânicos e inorgânicos. Uma molécula pode ter vários estereocentros, fornecendo a esta muitos estereoisômeros. Nos compostos cujo estereoisomerismo é devido a centros estereogênicos tetraédricos (por exemplo, carbono tetraédrico), o número total de estereoisômeros hipoteticamente possíveis não excederá 2ⁿ, em que n é o número de estereocentros tetraédricos. Moléculas com simetria frequentemente possuem menos que o número máximo possível de estereoisômeros. Uma mistura 50:50 de enanciômeros é referida como uma mistura racêmica. Alternativamente, uma mistura de enanciômeros pode ser enriquecida enanciomericamente de forma que um enanciômero esteja presente em uma quantidade maior que 50%. Tipicamente, os enanciômeros e/ou os diastereoisômeros podem ser resolvidos ou separados utilizando técnicas conhecidas na técnica. Ê considerado que para qualquer estereocentro ou eixo de quiralidade para o qual a estereoquímica não foi definida, tal estereocentro ou eixo de quiralidade pode estar presente em sua forma R, sua forma S ou na forma de uma mistura das formas Re S, incluindo misturas racêmicas e não racêmicas. Como utilizado aqui, a expressão “substancialmente livre de outros estereoisômeros” significa que a composição contém < 15%, mais preferencialmente < 10%, ainda mais preferencialmente < 5% ou mais preferencialmente < 1% de outro(s) estereoisômero(s).

143. “Substituinte que pode ser convertido em hidrogênio in vivo” significa qualquer grupo que pode ser convertido em um átomo de hidrogênio através de meios enzimológicos ou químicos incluindo, mas,

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79/197 sem limitação, hidrólise e hidrogenólise. Os exemplos incluem grupos hidrolisáveis, tais como grupos acila, grupos que possuem um grupo oxicarbonila, resíduos de aminoácidos, resíduos peptídicos, onitrofenilsulfenila, trimetilsilila, tetrahidropiranila, difenilfosfinila e similares. Os exemplos de grupos acila incluem formila, acetila, trifluoracetila e similares. Os exemplos de grupos que possuem um grupo oxicarbonila incluem etoxicarbonila, tert-butoxicarbonila (-C(O)OC(CH3)3), benziloxicarbonila, p-metoxibenziloxicarbonila, viniloxicarbonila, 3-(p-toluenossulfonil)etoxicarbonila e similares. Os resíduos de aminoácidos adequados incluem, mas, sem limitação, resíduos de Gly (glicina), Ala (alanina), Arg (arginina), Asn (asparagina), Asp (ácido aspártico), Cys (cisteína), Glu (ácido glutâmico), His (histidina), lie (isoleucina), Leu (leucina), Lys (Usina), Met (metionina), Phe (fenilalanina), Pro (prolina), Ser (serina), Thr (treonina), Trp (triptofano), Tyr (tirosina), Vai (valina), Nva (norvalina), Hse (homosserina), 4-Hyp (4-hidroxiprolina), 5-Hyl (5-hidroxilisina), Orn (ornitina) e β-Ala. Os exemplos de resíduos de aminoácidos adequados também incluem resíduos de aminoácidos que são protegidos com um grupo protetor. Os exemplos de grupos protetores adequados incluem aqueles tipicamente empregados na síntese de peptídeos, incluindo grupos acila (tais como formila e acetila), grupos arilmetoxicarbonila (tais como benziloxicarbonila e p-nitrobenziloxicarbonila), grupos tert-butoxicarbonila (-C(O)OC(CH3)3) e similares. Os resíduos peptídicos adequados incluem resíduos peptídicos que compreendem dois a cinco resíduos de aminoácidos. Os resíduos destes aminoácidos ou peptídeos podem estar presentes em configurações estereoquímicas da forma D, da forma L ou misturas das mesmas. Em adição, o resíduo de aminoácido ou peptídeo pode ter um átomo de carbono assimétrico. Os exemplos de resíduos de aminoácidos adequados que possuem um átomo de carbono assimétrico incluem resíduos de Ala, Leu, Phe, Trp,

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Nva, Vai, Met, Ser, Lys, Thr e Tyr. Os resíduos peptídicos que possuem um átomo de carbono assimétrico incluem resíduos peptídicos que possuem um ou mais resíduos de aminoácidos constituintes que possuem um átomo de carbono assimétrico. Os exemplos de grupos protetores de aminoácidos adequados incluem aqueles tipicamente empregados na síntese de peptídeos, incluindo grupos acila (tais como formila e acetila), grupos arilmetoxicarbonila (tais como benziloxicarbonila e p-nitrobenziloxicarbonila), grupos tert-butoxicarbonila (-C(O)OC(CH3)3) e similares. Outros exemplos de substituintes “que podem ser convertidos em hidrogênio in uivo” incluem grupos hidrogenolisáveis que podem ser eliminados de forma redutora. Os exemplos de grupos hidrogenolisáveis adequados que podem ser eliminados de forma redutora incluem, mas, sem limitação, grupos arilsulfonila (tal como o-toluenossulfonila); grupos metila substituídos com fenila ou benzilóxi (tais como benzila, tritila e benziloximetila); grupos arilmetoxicarbonila (tais como benziloxi-carbonila e o-metóxibenziloxicarbonila); e grupos haloetoxicarbonila (tais como β,β,βtricloroetoxicarbonila e β-iodoetoxicarbonila).

144. “Tratamento” ou “tratar” inclui (1) a inibição de uma doença em um indivíduo ou um paciente que sofre ou exibe a patologia ou a sintomatologia da doença (por exemplo, interrupção do desenvolvimento adicional da patologia e/ou da sintomatologia), (2) a melhora de uma doença em um indivíduo ou um paciente que está sofrendo ou exibindo a patologia ou a sintomatologia da doença (por exemplo, reversão da patologia e/ou da sintomatologia) e/ou (3) a realização de qualquer redução mensurável em uma doença em um indivíduo ou um paciente que está sofrendo ou exibindo a patologia ou a sintomatologia da doença.

145. Outras abreviações utilizadas aqui são as seguintes: ^XH

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RMN é ressonância magnética nuclear de prótons, AcOH é ácido acético, AC2O é anidrido acético, ACN ou CH3CN é acetonitrila, br é amplo, d é dubleto, DCM é diclorometano, DIAD é azodicarboxilato de diisopropila, DMA é 7V,7V-dimetilacetamida, DMF é N,Ndimetilformamida, DMSO é dimetilsulfóxido, EtOAc ou AE é acetato de etila, EtOH é etanol, FAB MS é espectroscopia de massa com bombardeio de átomos rápidos, g é grama(s), GC-MS é cromatografia gasosa acoplada à espectroscopia de massa, HOBT é 1hidroxibenzotriazol hidratado, HPLC é cromatografia líquida de alto desempenho, L é litro, LAH é hidreto de alumínio e lítio, LC-MS é cromatografia líquida acoplada à espectroscopia de massa, LDA é diisopropilamida de lítio, LiHMDS é bis(trimetilsilil)amida de lítio, m é multipleto, MeOH é metanol, mg é miligrama, mL é mililitro, mL é mililitro, MS é espectroscopia de massa, N é normal, N2 é nitrogênio, Na2SO4 é sulfato de sódio, RMN é ressonância magnética nuclear, PE é éter de petróleo, q é quinteto, rt é tempo de retenção, t é tripleto, THF é tetrahidrofurano, TLC é cromatografia de camada fina e Δ significa aquecimento da mistura de reação.

146. As definições acima substituem qualquer definição conflitante em qualquer referência que é incorporada aqui como referência. O fato de que certos termos são definidos, entretanto, não deve ser considerado como indicativo de que qualquer termo que não é definido seja indefinido. Ao invés disso, acredita-se que todos os termos utilizados descrevam a divulgação em termos tais que um perito comum pode compreender o âmbito e a prática da presente divulgação.

Exemplos

147. Os exemplos a seguir são incluídos para demonstrar modalidades preferidas da divulgação. Deve ser considerado pelos peritos na técnica que as técnicas divulgadas nos exemplos a seguir

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82/197 representam técnicas descobertas pelo inventor como funcionando bem na prática da divulgação e assim podem ser consideradas como constituindo modos preferidos para sua prática. Entretanto, os peritos na técnica devem, à luz da presente divulgação, considerar que muitas alterações podem ser feitas nas modalidades específicas que são divulgadas e ainda obter um resultado parecido ou similar sem se afastar do espírito e do âmbito da divulgação.

Instrumentação e Métodos Gerais.

148. As análises de HPLC analítica foram realizadas em um sistema Agilent 1100 e as análises de LC-MS foram conduzidas no sistema de espectrometria de massa por eletrospray Agilent 1100 Series LC/MSD (G1946C). As purificações por HPLC preparatória de fase inversa foram realizadas em um sistema Biotage SP4 HPFC ou em um sistema CombiFlashR/ (Teledyne Isco) utilizando um detector de UV de comprimento de onda dual variável em uma coluna Biotage KP-C18-HS 120 g SNAP e em cartuchos Redisep Rf Gold C18 utilizando gradiente de acetonitrila/água contendo 0,05% de TEA. As purificações por HPLC preparatória de fase normal foram realizadas em um sistema Biotage SP4 HPFC ou em um sistema CombiFlashR/ (Teledyne Isco) utilizando um detector de UV de comprimento de onda dual variável em cartuchos Biotage KP-SIL SNAP e em cartuchos Redisep Rf silica gel (Isco).

149. Todos os compostos finais foram analisados por HPLC analítica utilizando uma coluna analítica C18 com um detector de arranjo de diodo e os picos foram monitorados em 210, 254 e 280 nm em relação a sua pureza. Os espectros de ^XH e ¹⁹F RMN foram registrados em solventes deuterados (DMSO-cfe, CD3OD e CDCI3) em um espectrômetro Bruker Avance-III / 400 MHz equipado com uma sonda Broad Band NMR. O sinal do solvente deuterado foi utilizado como uma referência interna. As alterações químicas são expressas em ppm (δ) e

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83/197 as constantes de acoplamento (J) são reportadas em hertz (Hz). As reações foram realizadas sob uma atmosfera de nitrogênio seco a não ser que seja determinado o contrário.

150. Os materiais de partida foram obtidos em fornecedores comerciais e utilizados sem purificação adicional após a verificação de suas purezas por análise de LC-MS. Os solventes eram de grau analítico e foram utilizados como fornecidos. Os materiais de partida não disponíveis comercialmente foram sintetizados seguindo os procedimentos na literatura e utilizados após purificação adicional e verificação de suas purezas por análises de ^XH RMN e LC-MS.

Preparação dos Compostos

Esquema 1

Procedimento Geral para preparação de ácidos 3-(mono e dissubstituído-fenil)-4-( l-metil-5-(2-(5,6,7,8-tetrahidro-1,8naftiridin-2-il)etóxi)-lH-pirazol-3-il) butanoico

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Exemplo A

151. Esquema 2: Preparação de 2-(5,6,7,8-tetrahidro-l,8naftiridin-2-il)etanol

E1OH, Calor

LÍHMDS, THF 'CÕÍÕEii*

20% Pd(QH}2/C«2

Ãfcooi stiSõo

Etapa 1. Preparação de 2-metil-l,8-naftiridina

152. Uma mistura de 2-aminopiridina-3-carboxialdeído (5,125 g, 42,0 mmoles), acetona (9,5 mL, 126,0 mmoles) e L-prolina (5,31 g, 46,2

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85/197 mmoles) em álcool etílico absoluto (70 mL) foi aquecida em refluxo durante toda a noite (15 h) sob atmosfera de nitrogênio. O solvente foi evaporado a vácuo para fornecer um sólido amarelo canário. O sólido foi dissolvido em diclorometano (50 mL) para fornecer um precipitado branco, filtrado, lavado com diclorometano e o filtrado combinado foi evaporado a vácuo para fornecer um resíduo amarelo alaranjado. O sólido foi dissolvido novamente em diclorometano (50 mL), lavado com água (1^χ50 mL), a camada orgânica foi separada e a camada aquosa foi extraída com diclorometano (1^χ25 mL). O extrato orgânico combinado foi lavado com salmoura (1^χ50 mL), seco sobre NaaSCk anidro, filtrado e evaporado a vácuo para fornecer um sólido amarelo sujo (6,04 g, 99% de rendimento). A análise de GC-MS do sólido mostra a massa do produto desejado: m/z 144 (M⁺); calculada para C9H8N2:144,17. ^XH RMN (400 MHz, CDCI3): δ 2,83 (s, 3H), 7,38 (d, J = 8,00 Hz, 1H), 7,45 (dd, 1H), 8,09 (d, J = 8,00 Hz, 1H), 8,16 (d, J = 8,00 Hz, 1H), 9,08 (s, 1H). O espectro de ^XH RMN da amostra era coerente com a estrutura sugerida do produto.

Etapa 2. Preparação de (E)-l-etóxi-2-(l,8-naftridin-2-il)etanol

OH

153. A uma solução de 2-metil-l,8-naftiridina (6,024 g, 41,8 mmoles) (da etapa 1) em THF anidro (140 mL) a -40 °C sob atmosfera de nitrogênio foi adicionada uma solução a 1,0 M de lítio bis(trimetilsilil)amida em THF (88,0 mL) e a mistura de reação foi agitada a -40 °C durante 30 min para fornecer uma solução vermelho sangue. Após agitar durante 30 min a -40 °C, carbonato de dietila puro (5,60 mL) foi adicionado em gotas à solução acima em 5 min e a mistura de reação foi aquecida até 0 °C (banho de gelo) e agitada a esta

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86/197 temperatura durante 2 h para fornecer uma solução cor de laranja avermelhada escura. A mistura de reação foi extinta com solução aquosa saturada de cloreto de amônio (60,0 mL) para fornecer uma solução vermelha alaranjada e o THF foi removido a vácuo para fornecer uma mistura vermelha alaranjada. A mistura resultante foi extraída com acetato de etila (3*50 mL). As camadas orgânicas foram combinadas, lavadas com salmoura, secas sobre NaaSCH anidro/MgSCH, filtradas e evaporadas a vácuo para fornecer um sólido cristalino vermelho alaranjado escuro (8,65 g). O resíduo bruto foi purificado por cromatografia flash em silica gel utilizando uma coluna de silica gel Varian SF-40-120 g Super Flash e eluição com 10-100% de acetato de etila em n-heptano para fornecer o produto desejado na forma de um sólido cristalino amarelo alaranjado (7,76 g, rendimento 85%). A análise de LC-MS do sólido mostra a massa do produto desejado: m/z 217 (M+H) e m/z 239 (M+Na); Calculada para C12H12N2O2: 216,23. ^XH RMN (400 MHz, DMSO-cfe): δ 1,21 (t, J = 7,0 Hz, 3H), 4,10 (q, 2H), 4,89 (s, 1H), 6,77 (d, J = 9,38 Hz, 1H), 7,14 (m, 1H), 7,46 (d, J = 9,36 Hz, 1H), 7,89 (d, 1H), 8,36 (d, 1H), 11,80 (brs, 1H, OH). A ^XH RMN do produto isolado era sobreponível àquela de uma amostra autêntica do produto.

Etapa 3. Preparação de 5,6,7,8-tetrahidro-l,8-naftiridin-2-ilacetato de etila

154. A uma solução desgaseificada de (E)-l-etóxi-2-(l,8naftiridin-2-il)etanol (5,18 g, 23,98 mmol) (da etapa 2) em etanol absoluto (100 mL) foi adicionado hidróxido de paládio em carvão ativado (1,44 g) e a mistura de reação foi agitada à temperatura ambiente sob

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87/197 um balão de gás hidrogênio durante toda a noite (16 h). A mistura de reação foi filtrada através de um bloco de Celite® para remover o Pd(OH)2/C. O resíduo foi lavado com etanol absoluto (2*25 mL) e o filtrado foi evaporado a vácuo para fornecer um líquido viscoso amarelo, cristalizado lentamente em um sólido amarelo pálido (5,30 g, rendimento 98%). A análise de LC-MS do produto mostra a massa do produto desejado: m/z 221 (M+H); Calculada para C12H10N2O2: 220,26. O produto será utilizado como tal na etapa seguinte.

Etapa 4. Preparação de 2-(5,6,7,8-tetrahidro-l,8-naftiridin-2-il) etanol

155. Ao THF anidro (95,0 mL) sob atmosfera de gás nitrogênio à temperatura ambiente foi adicionada uma solução a 1,0 M de hidreto de alumínio e lítio em THF (95,0 mL) com agitação. A temperatura da mistura de reação foi reduzida para 15 °C (banho de água com gelo) e uma solução de 2-(5,6,7,8-tetrahidro-l,8-naftiridin-2-il)acetato de etila (da etapa 3) em THF anidro (50,0 mL) foi adicionada em gotas ao longo de 30 min para fornecer uma solução amarela. A mistura de reação resultante foi agitada à temperatura ambiente durante 4 h. A mistura de reação foi resfriada a 0 °C (banho de gelo com sal) e a reação foi extinta lentamente com salmoura (25,0 mL). THF adicional (30,0 mL) foi adicionado durante a extinção para romper as emulsões. Após a adição completa de salmoura, a mistura de reação foi agitada à temperatura ambiente durante toda a noite. O sulfato de sódio anidro (25,0 g) foi adicionado à mistura de reação anterior e a mistura foi agitada à temperatura ambiente durante mais 30 min e filtrada. O resíduo de sais sólidos foi lavado com acetato de etila (3><30 mL). Os filtrados foram

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88/197 combinados e concentrados em aproximadamente 150 mL, secos novamente com sulfato de sódio anidro, filtrados e evaporados a vácuo para fornecer um líquido viscoso cor de laranja (4,8063 g). O produto bruto foi purificado por cromatografia flash em silica gel em uma coluna de silica gel SF-40-120 g Super Flash e eluição com 0-5% de metanol em acetato de etila para fornecer o produto desejado na forma de um líquido viscoso amarelo (3,504 g, rendimento 82%). A análise de LC-MS do líquido purificado mostra a massa do produto desejado: m/z 179 (M+H); Calculada para C10H14N2O: 178,23. O líquido se solidificou em um sólido ceroso/cristalino amarelo pálido no armazenamento em um refrigerador durante toda a noite.

Exemplo 1

Esquema 3: Preparação de ácido 3-(2,3-dihidrobenzo[b][l,4]dioxin-6il)-4-( l-metil-5-(2-(5,6,7,8-tetrahidro-l,8-naftiridin-2-il)etóxi)-1Hpirazol-3-il)butanoico

Acetoacetats dí etâa

Pipfíidina

.............................>PtÒK. íefLtKG.Íi h

Etapa 5

Etapa 6

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Etapa 1. Preparação de 2-(2,3-dihidrobenzo[b][l,4]dioxin-6-il)-4hidróxi-4-metil-6-oxociclohexano- 1,3-dicarboxilato de dietila

EtOOC.

COOEt

156. A uma solução de uma mistura de 2,3dihidrobenzo[b][l,4]dioxina-6-carbaldeído (15 g, 91,44 mmoles) e acetoacetato de etila (41,6 g, 320,04 mmoles) foi adicionada piperidina (2,73 g, 32 mmoles) em uma porção a 25 °C. Então a mistura foi agitada a 25 °C durante 72 h. A mistura de reação foi diluída com EtOH (200 mL) e resfriada a -20 °C e filtrada para fornecer o produto desejado na forma de um sólido cristalino branco (21,1 g rendimento 57%).

Etapa 2. Preparação de ácido 3-(2,3-dihidrobenzo[b][l,4]dioxin-6iljpentanodioico

O'

HOOC

COOH

157. A uma solução de 2-(2,3-dihidrobenzo[b][l,4]dioxin-6-il)-4hidróxi-4-metil-6-oxociclohexano-1,3-dicarboxilato de dietila (20,00 g, 49,24 mmoles) (da etapa 1) em EtOH (200 mL) foi adicionado NaOH (3,94 g, 98,48 mmoles) em uma porção. A mistura foi aquecida a 100 °C com agitação durante 1,5 h. A mistura de reação foi resfriada a 25 °C e concentrada sob pressão reduzida a 60 °C. Ao resíduo anterior foi adicionado HC1 cone, até pH 1 e então a mistura foi vertida na água (50 mL) e agitada durante 20 minutos. A fase aquosa foi extraída com acetato de etila (3^x100mL). A fase orgânica combinada foi lavada com

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90/197 solução de salmoura (2^χ100 mL), seca com Na2SO4 anidro, filtrada e evaporada a vácuo para fornecer o ácido na forma de um sólido marrom (10,00 g, rendimento 76,92%).

Etapa 3. Preparação de 4-(2,3-dihidrobenzo[b][l,4]dioxin-6-il) dihidro-27f-piran-2,6(37/)-diona

158. Uma solução de ácido 3-(2,3-dihidrobenzo[b][l,4]dioxin-6il)pentanodioico (8 g, 30,06 mmoles) (da etapa 2) em anidrido acético (217,4 g, 2,12 moles) foi aquecida com agitação a 140 °C durante 2,5 h. A mistura foi resfriada a 25 °C e então evaporada a vácuo para fornecer o produto desejado na forma de um óleo marrom (6,02 g, rendimento 80,04%).

Etapa 4. Preparação de ácido 3-(2,3-dihidrobenzo[b][l,4]dioxin-6-il)7-etóxi-5,7-dioxoheptanoico

159. A uma solução de 4-(2,3-dihidrobenzo[b][l,4]dioxin-6il)dihidro-2H-piran-2,6(3H)-diona (6,00 g, 24,19 mmoles) (da etapa 3) em THF (50 mL) foi adicionada LDA (5,18 g, 48,38 mmoles) em gotas a 78 °C ao longo de um período de 2 min sob N₂. Após agitar durante 1 h

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91/197 a -60 °C, EtOAc seco (4,25 g, 48,38 mmoles) foi adicionado em gotas a 78 °C ao longo de um periodo de 2 min sob N2. A mistura de reação foi agitada a -78 °C durante mais 5 h. A TLC (PE:EtOAc = 20:1) mostrou que o material de partida foi consumido completamente. A reação foi extinguida com 2 N HCI até pH =1 e então a mistura de reação foi extraída com EtOAc (3><80 mL). A fase orgânica combinada foi lavada com solução saturada de salmoura, seca sobre Na2SO4 anidro, filtrada e concentrada a vácuo para fornecer o produto desejado (6,50 g, rendimento 80,0 %) na forma de um líquido amarelo, que foi purificado por cromatografia em coluna em silica gel (PE: EA = 3:1).

Etapa 5. Preparação de 3-(2,3-dihidrobenzo[b][l,4]dioxin-6-il)-4-(5hidróxi-1-metil-17f-pirazol-3-il)butanoato de etila

HO

N

160. A uma solução de ácido 3-(2,3-dihidrobenzo[b][l,4]dioxin-6il)-7-etóxi-5,7-dioxoheptanoico (3 g, 8,9 mmoles) (da etapa 4) em EtOH (120 mL), metil hidrazina (450,34 mg, 9,79 mmoles) foi adicionada em porções a 40 °C sob N2. Então a mistura foi agitada a 100 °C durante 5 h. A TLC mostrou que a reação foi completa. A mistura foi resfriada a 25 °C e a mistura de reação foi concentrada a vácuo. Ao resíduo anterior foram adicionados EtOH (20 mL) e dioxano/HCl (20 mL) e foi permitido que a suspensão resultante fosse agitada à temperatura ambiente durante 12 h, então esta foi concentrada sob vácuo reduzido para fornecer o produto desejado (2,2 g, rendimento 71,45%) na forma de um óleo amarelo, que foi purificado por cromatografia em coluna em silica gel (DCM:EtOH = 8:1). ^XH RMN (400 MHz, CDCh): δ 1,10 - 1,19 (m, 3H), 2,02 - 2,08 (m, 1H), 2,53 - 2,73 (m, 2H), 2,89 - 3,05 (m, 2H),

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3,24 (s, 1 Η), 3,38 - 3,50 (m, 1H), 3,52 - 3,66 (m, 1H), 3,74 (br. s., 2H), 3,95 - 4,07 (m, 2H), 4,16 - 4,23 (m, 4H), 5,78 ( br, s, 1 H), 6,62 - 6,80 (m, 3H).

Etapa 6. Preparação de ácido 3-(2,3-dihidrobenzo[b][l,4]dioxin-6-il)-

4-( l-metil-5-(2-(5,6,7,8-tetrahidro- l,8-naftiridin-2-il)etóxi)- 1Hpirazol-3-il)butanoico

Exemplo 1

161. A uma solução de 3-(2,3-dihidrobenzo[b] [1,4]dioxin-6-il)-4(5-hidróxi-l-metil-lH-pirazol-3-il)butanoato de etila (1,0 g, 2,89 mmoles, 1,00 eq) (da etapa 5) em CH3CN (10 mL), 4metilbenzenossulfonato de 2-(5,6,7,8-tetrahidro-1,8-naftiridin-2-il)etila (960 mg, 2,89 mmoles, 1,00 eq; produzido através da reação de 2(5,6,7,8-tetrahidro-l,8-naftiridin-2-il)etanol (do Exemplo A, etapa 4) com cloreto de tosila e base em THE) e CS2CO3 (1,88 g, 5,78 mmol, 2,00 eq) foram adicionados e então foi permitido que a mistura de reação fosse agitada durante 8 h a 80 °C. A mistura de reação foi filtrada para remover compostos insolúveis e o filtrado foi concentrado a vácuo. O resíduo foi suspenso em HC1 a 3 N (10 mL) e então foi permitido que fosse agitado durante mais 8 h a 100 °C para fornecer o produto desejado. O produto bruto foi purificado por HPLC preparatória de fase inversa para fornecer o Exemplo 1 na forma de um óleo amarelo (48 mg, rendimento 3,6%). A segunda purificação do líquido por HPLC preparatória de fase inversa e a liofilização das frações forneceram o Exemplo 1 na forma de um pó incolor (23,2 mg). A análise de LC-MS do

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93/197 sólido mostrou a massa do produto desejado: m/z 479 (M+H) e m/z 501 (M+Na); Calculada para C20H30N4O5: 478,54. ^XH RMN (400 MHz, DMSOcfe): δ 1,75 - 1,86 (m, 2 H), 2,35 - 2,45 (m, 1 H), 2,62 (d, J =7,53 Hz, 2 H), 2,73 (t, J = 5,77 Hz, 2 H), 3,11 (t, J = 6,02 Hz, 3 H), 3,15 - 3,23 (m, 2 H), 4,18 (s, 4 H), 4,32 (t, J = 6,15 Hz, 2 H), 5,49 (s, 1 H), 6,64 - 6,69 (m, 2 H), 6,69 - 6,74 (m, 2 H) 7,61 (d, J = 7,28 Hz, 1 H), 8,15 (br s, 1 H), 14,34-14,55 (m, 1 H).

Exemplo 2

Preparação de ácido 3-(3-cloro-5-fluorfenil)-4-(l-metil-5-(2-(5,6,7,8tetrahidro-1,8-naftiridin-2-il)etóxi)- 17f-pirazol-3-il)butanoico

162. O Exemplo 2 foi preparado de maneira análoga ao Exemplo 1, utilizando 3-cloro-5-fluorbenzaldeído como o benzaldeído requerido no Esquema de reação 3. O produto bruto foi purificado por HPLC preparatória de fase inversa e após a liofilização das frações forneceu o composto do título na forma de um pó incolor (39,4 mg). A análise de LC-MS do sólido mostrou o produto desejado no tempo de retenção de 1,92 min com uma pureza >98% e a massa do produto desejado: m/z 473 (^35C1M+H), m/z 475 (^37C1M+H), m/z 495 (^35C1M+Na) e m/z 497 (37ciM+Na); Calculada para C24H20CIFN4O3: 472,94. ^XH RMN (400 MHz, DMSO-cfe): δ 1,81 (brs, 2 H), 2,54-2,64 (m, 2 H), 2,65- 2,77 (m, 5 H), 3,11 (brs, 3 H), 3,39 (brs, 6 H), 4,31 (brs, 2 H), 5,52 (s, 1 H), 6,66 (d, J =

6,78 Hz, 1 H), 7,13 (d, J = 9,91 Hz, 1 H), 7,16-7,22 (m, 2 H), 7,61 (d, J = 6,15 Hz, 1 H), 8,13 (brs, 1 H), 14,32-14,57 (m, 1 H).

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Exemplo 3

Preparação de ácido 3-(3-fluor-4-metoxifenil)-4-(l-metil-5-(2(5,6,7,8-tetrahidro- l,8-naftiridin-2-il)etóxi)-lH-pirazol-3iljbutanoico

163. O Exemplo 3 foi preparado de maneira análoga ao Exemplo 1, utilizando 3-fluor-4-metoxibenzaldeído como o benzaldeído requerido no Esquema de reação 3. O produto bruto foi purificado por HPLC preparatória de fase inversa e após a liofilização das frações forneceu o composto do título na forma de um pó creme (26,6 mg). A análise de LC-MS do sólido mostrou o produto desejado no tempo de retenção de 1,76 min e a massa do produto desejado: m/z 469 (M+H) e m/z 491 (M+Na); Calculada para C25H29FN4O4: 468,52. ^XH RMN (400 MHz, DMSO-dõ): δ 1,77 - 1,87 (m, 2 H), 2,54 - 2,69 (m, 3 H), 2,70 - 2,78 (m, 2 H), 3,09 (t, J = 6,09 Hz, 2 H), 3,17 - 3,29 (m, 1 H), 3,39 - 3,47 (m, 3 H),

3,78 (s, 4 H), 4,25 (t, J = 6,09 Hz, 2 H), 5,43 (s, 1 H), 6,69 (d, J = 7,28 Hz, 1 H), 6,95 - 7,06 (m, 2 H), 7,09 (dd, J = 12,86, 1,82 Hz, 1 H), 7,58 7,70 (m, 1 H), 8,26 (brs, 1 H).

Exemplo 4

Preparação de ácido 3-(4-bromo-3-fluorfenil)-4-(l-metil-5-(2(5,6,7,8-tetrahidro-l,8-naftiridin-2-il)etóxi)-177-pirazol-3-il) butanoico

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164. O Exemplo 4 foi preparado de maneira análoga ao Exemplo 1, utilizando 3-fluor-4-bromobenzaldeído como o benzaldeído requerido no Esquema de reação 3. O produto bruto foi purificado por HPLC preparatória de fase inversa e após a liofilização das frações forneceu o Exemplo 5 na forma de um pó creme (84,7 mg). A análise de LC-MS do sólido mostrou o produto desejado no tempo de retenção de 1,93 min e a massa do produto desejado: m/z 517 (^79BrM+H), m/z 519 (^81BrM+H), m/z 539 (^79BrM+Na) e m/z 541 (^81BrM+Na); Calculada para C24H2õBrFN4O3: 517,39. ^XH RMN (300 MHz, CDC13): δ 1,88 - 2,02 (m, 2 H), 2,46 - 2,72 (m, 2 H), 2,78 (d, J = 5,84 Hz, 2 H), 2,86 - 3,02 (m, 2 H), 3,15 (brs, 2 H), 3,51 (brs, 2 H), 3,60 (s, 3 H), 4,39 (brs, 2 H), 5,66 (s, 1 H), 6,43 (d, J = 6,97 Hz, 1 H), 6,95 (dd, J = 18,65, 8,29 Hz, 2 H), 7,34 7,50 (m, 2 H), 9,13 (brs, 3 H), 9,59 - 9,94 (m, 1 H), 15,27 (brs, 1 H).

Exemplo 5

Preparação de ácido 3-(3-bromo-4-fluorfenil)-4-(l-metil-5-(2(5,6,7,8-tetrahidro- l,8-naftiridin-2-il)etóxi)-lH-pirazol-3iljbutanoico

165. O Exemplo 5 foi preparado de maneira análoga ao Exemplo 1, utilizando 3-bromo-4-fluorbenzaldeído como o benzaldeído requerido

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96/197 no Esquema de reação 3. O produto bruto foi purificado por HPLC preparatória de fase inversa e após a liofilização das frações forneceu o composto do título na forma de um pó creme (93,2 mg). A análise de LC-MS do sólido mostrou o produto desejado no tempo de retenção de 1,91 min e a massa do produto desejado: m/z 517 (^79BrM+H), m/z 519 (^81BrM+H), m/z 539 (^79BrM+Na) e m/z 541 (^81BrM+Na); Calculada para C24H2õBrFN4O3: 517,39. ^XH RMN (400 MHz, CDC13): δ 1,87 - 1,99 (m, 2 H), 2,55 - 2,72 (m, 2 H), 2,77 (t, J = 5,83 Hz, 2 H), 2,86 - 3,06 (m, 2 H), 3,13 (t, J = 5,90 Hz, 2 H), 3,38 - 3,45 (m, 1 H), 3,49 (brs, 2 H), 3,59 (s, 3 H), 4,37 (t, J = 6,02 Hz, 2 H), 5,68 (s, 1 H), 6,43 (d, J= 7,15 Hz, 1 H), 6,97 - 7,04 (m, 1 H), 7,13 (brs, 1 H), 7,27 (s, 1 H), 7,37 (d, J= 7,15 Hz, 2 H), 9,67 (brs, 1 H), 15,03 (brs, 1 H).

Exemplo 6

Preparação de ácido 3-(3-bromofenil)-4-(l-metil-5-(2-(5,6,7,8tetrahidro-1,8-naftiridin-2-il)etóxi)- lff-pirazol-3-il)butanoico

166. O Exemplo 6 foi preparado de maneira análoga ao Exemplo 1, utilizando 3-bromo benzaldeído como o benzaldeído requerido no Esquema de reação 3. O produto bruto foi purificado por HPLC preparatória de fase inversa e após a liofilização das frações forneceu o composto do título na forma de um pó creme (64,9 mg). A análise de LC-MS do sólido mostrou o produto desejado no tempo de retenção de 1,89 min e a massa do produto desejado: m/z 499 (^79BrM+H), m/z 501 (8iBrM+H), m/z 521 (^79BrM+Na) e m/z 523 (^81BrM+Na); Calculada para C₂4H27BrN₄O3: 499,40. ^XH RMN (300 MHz, CD3OD): δ 1,96 (brs, 2 H), 2,61 - 2,79 (m, 2 H), 2,84 (brs, 2 H), 2,93 - 3,09 (m, 1 H), 3,11 - 3,27

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97/197 (m, 3 Η), 3,52 (brs, 3 Η), 3,61 - 3,78 (m, 3 Η), 4,58 (brs, 2 Η), 6,14 (brs, 1 Η), 6,73 (d, J = 6,40 Hz, 1 H), 7,26 (brs, 2 H), 7,39 (d, J = 6,41 Hz, 1 H), 7,45 (s, 1 H), 7,63 (d, J = 5,65 Hz, 1 H).

167. Os Exemplos 7, 8, 9 e 12 a seguir foram sintetizados através da reação de deslocamento com cianeto de zinco na N,Ndimetilacetamida. Os Exemplos 5,4, 11 e 6 foram utilizados como os precursores para as reações respectivamente.

Exemplo 7

Preparação de ácido 3-(3-ciano-4-fluorfenil)-4-(l-metil-5-(2-(5,6,7,8tetrahidro-1,8-naftiridin-2-il)etóxi)- 17f-pirazol-3-il)butanoico

Esquema 4

Exemplo 5

Exemple 7

168. A Ν,Ν-Dimetilacetamida anidra (DMA) (50 mL) foi desgaseificada sob alto vácuo e alternada por N2 durante 30 min antes do uso. Um frasco de fundo arredondado foi carregado com Pd(OAc)2 (1,5 g, 6,8 mmoles) e X-phos (6,38 g, 0,439 mmol) sob atmosfera de N2 seguidos por DMA desgaseificada. Então a mistura foi aquecida a 80 °C durante 60 min para fornecer uma solução de coloração escura. Um segundo frasco de fundo arredondado foi carregado com o Exemplo 5 (500 mg, 0,919 m mol), Zn(CN)2 (118 mg, 1,01 mmol) e Zn (5 mg, cat.) sob atmosfera N2 e seguidos por DMA desgaseificada (5 mL). A solução catalisadora foi adicionada à solução anterior a 25 °C e a mistura resultante foi aquecida a 90 °C durante 1 h. A mistura de reação foi resfriada a 25 °C e o solvente foi removido por evaporação a vácuo. O

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98/197 resíduo foi fracionado entre água (20 mL) e acetato de etila (20 mL). A mistura foi primeiramente filtrada através de Celite® e então as camadas foram separadas. A camada aquosa foi extraída com acetato de etila (3*20 mL), a camada orgânica combinada foi lavada com água, salmoura, seca sobre NaaSCU e então o solvente foi evaporado a vácuo. Ao resíduo bruto foi adicionada uma solução aquosa de LiOH a 3 N (10 mL) e foi permitido que a mistura de reação fosse agitada a 100 °C durante 8 h. O resíduo bruto foi purificado por HPLC preparatória de fase inversa e após a liofilização forneceu o Exemplo 7 na forma de um óleo amarelo (100,0 mg). A segunda purificação do líquido por HPLC preparatória de fase inversa e a liofilização das frações forneceram o composto do título na forma de um pó creme. A análise de LC-MS do sólido mostrou o produto desejado no tempo de retenção de 1,80 min e a massa do produto desejado: m/z 464 (M+H) e m/z 486 (M+Na); Calculada para C25H20N5O3: 463,50. ^XH RMN (400 MHz, DMSO-d₆): δ

1,78 - 1,86 (m, 2 H), 2,33 (brs, 1 H), 2,55 - 2,70 (m, 3 H), 2,71 - 2,78 (m, 3 H), 3,10 (t, J = 6,15 Hz, 2 H), 3,37 (brs, 5 H), 4,28 (t, J,=,6,27 Hz, 2 H), 5,44 (s, 1 H), 6,67 (d, J,=,7,40 Hz, 1 H), 7,41 (t, J,=,9,16 Hz, 1 H), 7,61 - 7,67 (m, 2 H), 7,81 - 7,87 (m, 1 H), 7,98 (brs, 1 H) 13,95 - 14,07 (m, 1 H).

Exemplo 8

Preparação de ácido 3-(4-ciano-3-fluorfenil)-4-(l-metil-5-(2-(5,6,7,8tetrahidro-1,8-naftiridin-2-il)etóxi)- 17f-pirazol-3-il)butanoico

169. O Exemplo 8 foi preparado de maneira análoga ao Exemplo

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99/197 (Esquema 4) utilizando Exemplo 4 como o precursor. O produto bruto foi purificado por HPLC preparatória de fase inversa e após a liofilização das frações forneceu o composto do título desejado na forma de um pó incolor (30,7 mg). A análise de LC-MS do sólido mostrou o produto desejado no tempo de retenção de 1,79 min e a massa do produto desejado: m/z 464 (M+H) e m/z 486 (M+Na); Calculada para C25H20N5O3: 463,50. Ή RMN (400 MHz, DMSO-cfe): δ 1,79 - 1,86 (m, 2 H), 2,53 - 2,70 (m, 3 H), 2,70 - 2,79 (m, 4 H), 3,08 (t, J= 5,96 Hz, 2 H), 3,33 - 3,45 (m, 8 H), 4,23 (t, J= 6,09 Hz, 2 H), 5,43 (s, 1 H), 6,68 (d, J = 7,28 Hz, 1 H), 7,28 (dd, J= 8,09 e 1,32 Hz, 1 H), 7,46 (d, J= 10,16 Hz, 1 H), 7,63 (d, <7=7,40 Hz, 1 H), 7,80 (t, J= 7,53 Hz, 1 H) 8,08 (brs, 1 H).

Exemplo 9

Preparação de ácido 3-(3-cianofenil)-4-(l-metil-5-(2-(5,6,7,8tetrahidro-1,8-naftiridin-2-il)etóxi)- 177-pirazol-3-il)butanoico

170. O Exemplo 9 foi preparado de maneira análoga ao Exemplo 7 (Esquema 4) utilizando o Exemplo 6 como o precursor. O produto bruto foi purificado por HPLC preparatória de fase inversa e após a liofilização das frações forneceu o composto do título desejado na forma de um pó incolor (65,5 mg). A análise de LC-MS do sólido mostrou o produto desejado no tempo de retenção de 1,72 min e a massa do produto desejado: m/z 446 (M+H) e m/z 468 (M+Na); Calculada para C25H27N5O3: 445,51. Ή RMN (400 MHz, DMSO-cfe): δ 1,78 - 1,86 (m, 2 H), 2,52 - 2,62 (m, 3 H), 2,63 - 2,78 (m, 6 H), 3,08 (t, J= 6,09 Hz, 2 H), 3,31 - 3,38 (m, 4 H), 3,39 - 3,47 (m, 3 H), 4,24 (t, J= 6,15 Hz, 4 H),

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100/197

5,42 (s, 1 Η), 6,68 (d, J = 7,28 Hz, 1 H), 7,43 - 7,49 (m, 1 H), 7,58 (d, J = 8,03 Hz, 1 H), 7,63 (d, J = 7,40 Hz, 2 H), 7,72 (s, 1 H), 8,17 (brs, 1 H).

Exemplo 10

Preparação de ácido 3-(3-bromo-5-(trifluormetil)fenil)-4-(l-metil-5(2-(5,6,7,8-tetrahidro- l,8-naftiridin-2-il)etóxi)-lH-pirazol-3iljbutanoico

N

N

N H

171. O Exemplo 10 foi preparado de maneira análoga ao Exemplo 1, utilizando o 3-bromo-5-(trifluormetil)benzaldeído como o benzaldeído requerido no Esquema de reação 3. O produto bruto foi purificado por Prep-HPLC (coluna: Fenomenex Gemini C18 250*50 10μ; fase móvel: [água (0,225%FA)-ACN]; B%: 15%-45%, 11,2 min). O efluente da HPLC foi liofilizado para fornecer o composto do título na forma de um sólido branco (29 mg) e o éster de partida recuperado (115 mg). O ácido 3-[3-bromo-5-(trifluormetil)fenil]-4-[l-metil-5-[2-(5,6,7,8tetrahidro-l,8-naftiridin-2-il)etóxi]pirazol-3-il]butanoico (29 mg, 51 gmoles, 12% de rendimento, 99,5% de pureza) foi obtido na forma de um sólido branco. ^XH RMN (400 MHz, CD3OD) δ ppm 1,84 - 1,92 (m, 2 H) 2,53 - 2,63 (m, 1 H) 2,64 - 2,87 (m, 5 H) 2,94 - 3,09 (m, 2 H) 3,36 3,42 (m, 5 H) 3,46 - 3,56 (m, 1 H) 4,30 (t, J=6,39 Hz, 2 H) 5,48 (s, 1 H) 6,50 (d, J=7,28 Hz, 1 H) 7,31 (d, J=7,28 Hz, 1 H) 7,48 (s, 1 H) 7,62 (s, 1 H) 7,67 (s, 1 H).

Exemplo 11

Preparação de ácido 3-(3-bromo-5-(trifluormetóxi)fenil)-4-(l-metil-5Petição 870190056160, de 17/06/2019, pág. 345/490

101/197 (2-(5,6,7,8-tetrahidro-l,8-naftiridin-2-il)etóxi)-lH-pirazol-3-il) butanoico

172. O Exemplo 11 foi preparado de maneira análoga ao Exemplo 1, utilizando 3-bromo-5-(trifluormetóxi)benzaldeído como o benzaldeído requerido no Esquema de reação 3 com 3-[3-bromo-5(trifluormetóxi)fenil]-4-[l-metil-5-[2-(5,6,7,8-tetrahidro-l,8-naftiridin-2il)etóxi]pirazol-3-il]butanoato de etila como o precursor direto do composto do título. O produto bruto foi purificado por Prep-HPLC (Condição de TFA: Coluna: Boston pH-lex 150*25 lOgm; Água(O,l%TFA)-ACN de 22 - 52; Tempo de Gradiente(min): 8; Vazão(mL/min) 2). O composto do título foi obtido na forma de um sólido amarelo [LC-MS (ES7911-26-P1E), Ή RMN (ES7911-26-Ρ1Α_01), ¹⁹F RMN (ES7911-26-Ρ1Α_02), COSY (ES7911-26-P1C)]. A análise de LC-MS do sólido mostrou a massa do produto desejado: m/z 583,0 (M+H); ^XH RMN (400MHz, CD₃OD) 7,60 (d, J=7,6 Hz, 1H), 7,41 (t, J=l,6 Hz, 1H), 7,29 (s, 1H), 7,09 (s, 1H), 6,68 (d, J=7,2 Hz, 1H), 5,44 (s, 1H), 4,36 - 4,26 (m, 2H), 3,54 - 3,42 (m, 6H), 3,16 (t, J=6,0 Hz, 2H), 2,90 -

2,79 (m, 3H), 2,79 - 2,69 (m, 2H), 2,68 - 2,60 (m, 1H), 2,00 - 1,90 (m, 2H).

Exemplo 12

Preparação de ácido 3-(3-ciano-5-(trifluormetil)fenil)-4-(l-metil-5-(2(5,6,7,8-tetrahidro-l,8-naftiridin-2-il)etóxi)-lH-pirazol-3iljbutanoico

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Esquema 5

stapaz Exemplo 12

Exemplo 12

Etapa 1. Preparação de 3-(3-ciano-5-(trifluormetil)fenil)-4-(l-metil-

5-(2-(5,6,7,8-tetrahidro-l,8-naftiridin-2-il)etóxi)-lH-pirazol-3iljbutanoato de etila

173. Uma mistura de 3-[3-bromo-5-(trifluormetil)fenil]-4-[lmetil-5-[2-(5,6,7,8-tetrahidro-l,8-naftiridin-2-il)etóxi]pirazol-3-il]butanoato de etila (343 mg, 576 gmoles, 1 eq. do precursor direto do composto do título do Exemplo 10) e dicianozinco (203 mg, 1,73 mmol, 110 gL, 3 eq) em DMF (8 mL) em um frasco de micro-ondas de 25 mL foi evacuada e preenchida novamente com Ν₂(3χ). O trifenilfosfano de paládio (67 mg, 58 gmoles, 0,1 eq) foi adicionado. O frasco de reação foi selado e a mistura de reação foi desgaseificada de novo e preenchida novamente com N₂ (3x) e então agitada a 120°C durante 90 min sob

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103/197 irradiação de micro-ondas. O solvente foi removido sob vácuo para fornecer uma goma cinzenta. O resíduo foi purificado por cromatografia flash em silica gel (ISCO®; 12 g SepaFlash® Silica Flash Column, Eluente de 0-80% de gradiente de acetato de Etila/Éter de petróleo @ 35 mL/min) para fornecer a substância desejada na forma de uma goma marrom (181 mg). A LCMS mostrou que a pureza era de 77,5%. A análise de LC-MS do sólido mostra a massa do produto desejado: m/z 542 (M+H); calculada para C28H30F3N5O3: 541,23.

Etapa 2. Preparação de ácido 3-(3-ciano-5-(trifluormetil)fenil)-4-(lmetil-5-(2-(5,6,7,8-tetrahidro-l,8-naftiridin-2-il)etóxi)-lH-pirazol-3iljbutanoico

174. A uma solução agitada de 3-[3-ciano-5-(trifluormetil)fenil]4-[l-metil-5-[2-(5,6,7,8-tetrahidro-l,8-naftiridin-2-il)etóxi]pirazol-3il]butanoato de etila (90 mg, 166 μιηοΐ, 1 eq) em uma mistura de THF (3 mL) e MeOH (1 mL) foi adicionada uma solução de LÍOH-H2O (50 mg, 1,19 mmol, 7,17 eq) em H2O (2 mL), a agitação foi mantida a 25°C durante 3 h. O solvente orgânico foi removido sob vácuo e o resíduo aquoso foi acidificado com 1 mL de AcOH até pH<7. O solvente foi evaporado até a secura sob vácuo, então ressuspenso em MeOH (5 mL) e agitado durante 2 min. O sedimento não dissolvido foi extraído por filtração e o filtrado foi purificado por Prep-HPLC (coluna: Boston Green ODS 150*30 5μ; fase móvel: [água (0,1%TFA)-ACN]; B%: 28%-38%, 8 min). O efluente da HPLC foi liofilizado para fornecer o composto do título na forma de um sólido branco (43 mg, 69 μιηοΐεβ, 41% de

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104/197 rendimento, 100% de pureza, TFA). A análise de LC-MS do sólido mostra a massa do produto desejado: m/z 514 (M+H); calculada para C20H20F3N5O3: 513,20. Ή RMN (400 MHz, CD3OD) δ ppm 1,95 (dd, J=6,50, 5,18 Hz, 2 H) 2,68 - 2,86 (m, 5 H) 2,90 (d, J=6,61 Hz, 1 H) 3,15 (t, J=5,95 Hz, 2 H) 3,43 (s, 3 H) 3,45 - 3,52 (m, 2 H) 3,52 - 3,63 (m, 1 H) 4,31 (t, J=6,06 Hz, 2 H) 5,48 (s, 1 H) 6,69 (d, J=7,28 Hz, 1 H) 7,60 (d, J=7,50 Hz, 1 H) 7,77 (s, 1 H) 7,89 (d, J= 13,23 Hz, 2 H); ¹⁹FRMN (400 MHz, CD3OD) δ ppm -64,44 , -77,33.

Exemplo 13

Preparação de trifluoracetato de ácido 3-(2-metóxi-5(trifluormetil)fenil)-4-( l-metil-5-(2-(5,6,7,8-tetrahidro- 1,8-naftiridin-

2-il)etóxi)-lH-pirazol-3-il)butanoico

175. O Exemplo 13 foi preparado de maneira análoga ao Exemplo 1, utilizando 2-metóxi-5-(trifluormetil)benzaldeído como o benzaldeído requerido no Esquema de reação 3. O produto bruto foi purificado por Prep-HPLC (coluna: Boston Green ODS 150*30 5μ; fase móvel: [água (0,l%TFA)-ACN]; B%: 20%-50%, 8 min). O composto do título (120 mg, 189 pmoles, 55% de rendimento, 99,6% de pureza, TFA sal) foi obtido na forma de um sólido branco, que foi confirmado por LCMS, HPLC, ^XH RMN e ¹⁹F RMN. A análise de LC-MS do sólido mostrou a massa desejada: m/z 519,0 (M+H); calculada para C20H29N4O4F3: 518,53. ^XH RMN (CD3OD, 400MHz) 7,58 (d, J = 7,2 Hz, 1H), 7,49 (br d, J= 8,8 Hz, 1H), 7,36 (d, J = 1,6 Hz, 1H), 7,08 (d, J = 8,8 Hz, 1H), 6,66 (d, J = 7,6 Hz, 1H), 5,55 (s, 1H), 4,35 (t, J = 6,0 Hz, 2H),

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3,91 (s, 3H), 3,81 (quin, J = 7,6 Hz, 1H), 3,47-3,53 (m, 5H), 3,16 (t, J = 6,0 Hz, 2H), 2,86-2,97 (m, 2H), 2,82 (br t, J= 6,0 Hz, 2H), 2,65-2,78 (m, 2H), 1,95 (quin, J = 6,0 Hz, 2H). ¹⁹F RMN (CD₃OD, 376MHz) -62,86 (s, IF), -77,37 (s, IF).

Exemplo 14

Preparação de trifluoracetato de ácido 3-(5-bromo-2-metoxifenil)-4(l-metil-5-(2-(5,6,7,8-tetrahidro-1,8-naftiridin-2-il)etóxi)-lH-pirazol-

3-il) butanoico

176. O Exemplo 14 foi preparado de maneira análoga ao Exemplo 1, utilizando 5-bromo-2-metóxi-benzaldeído como o benzaldeído requerido no Esquema de reação 3. O produto bruto foi purificado por Prep-HPLC (coluna: Boston Green ODS 150*30 5μ; fase móvel: [água (0,l%TFA)-ACN]; B%: 20%-50%, 8 min). O composto do título (190 mg, 293 pmoles, 84% de rendimento, 99,4% de pureza, TFA) foi obtido na forma de um sólido branco, que foi confirmado por LCMS (m/z 529,0 (M+H)), HPLC, ^XH RMN e ¹⁹F RMN. ^XH RMN (CD3OD, 400MHz) 7,59 (d, J = 7,2 Hz, 1H), 7,29 (dd, J = 8,8, 2,4 Hz, 1H), 7,22 (d, J = 2,4 Hz, 1H), 6,86 (d, J = 8,8 Hz, 1H), 6,66 (d, J = 7,2 Hz, 1H), 5,55 (s, 1H), 4,37 (t, J = 6,0 Hz, 2H), 3,82 (s, 3H), 3,73 (quin, J = 7,6 Hz, 1H), 3,47-3,53 (m, 5H), 3,16 (t, J = 6,0 Hz, 2H), 2,85-2,94 (m, 2H), 2,82 (t, J = 6,4 Hz, 2H), 2,61-2,73 (m, 2H), 1,95 (quin, J = 6,0 Hz, 2H), ^X9F RMN (CD3OD, 376MHz) -77,32 (br s, 1F).

Exemplo 15

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Preparação de ácido (3S)-3-(3-fluor-4-metoxifenil)-4-(l-metil-5-(2(5,6,7,8-tetrahidro- l,8-naftiridin-2-il)etóxi)-lff-pirazol-3-il) butanoico

Esquema 6

cr

Ctatwfosfonâte de dietila.

Àsídü de ι:λ···^:

Etapa 5

Etapa $

Etapa 1. Preparação de 2-(3-fluor-4-metóxi-fenil)-4-hidróxi-4-metilPetição 870190056160, de 17/06/2019, pág. 351/490

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6-oxo-ciclohexano-l,3-dicarboxilato de dietila

177. A piperidina (310 μΕ, 3,13 mmoles) foi adicionada a uma solução de uma mistura de 3-fluor-4-metoxibenzaldeído (5,0 g, 31,14 mmoles) e acetoacetato de etila (8,75 g, 67,21 mmoles). A mistura de reação foi agitada à temperatura ambiente durante 72 h para fornecer um sólido microcristalino amarelo pálido. O produto bruto foi recristalizado através da dissolução do sólido em álcool etílico abs. em ebulição (70 mL) e do resfriamento da solução amarela à temperatura ambiente para fornecer um sólido cristalino amarelo pálido. O sólido foi filtrado, lavado com álcool etílico absoluto (2*100 mL) e seco a vácuo para fornecer um sólido cristalino incolor (9,59 g rendimento 78%). A análise de LC-MS do sólido mostrou a massa do produto desejado: m/z 397 (M+H), m/z 419 (M+Na) e m/z 815 (2M+Na); Calculada para C20H25FO7: 396,41. Ή RMN (400 MHz, DMSO-cfe): δ 0,89 (t, J= 7,09 Hz, 3 H, CH3-CH2-), 0,98 (t, J= 7,09 Hz, 3 H, CH3-CH2-), 1,24 (s, 3 H, CH3-), 2,33 (d, J= 3,45 Hz, 1 H, -CH- ), 2,88 (d, J= 13,45 Hz, 1 H, -CH), 3,27 (d, J= 11,98 Hz, 1 H, -CH-) 3,78 (s, 3 H, -O-CH3), 3,79 - 3,97 (m, 6 H, 2*-CH₂-CH₃ + -CH₂-C(CH₃)OH), 4,94 (s, 1 Η, -OH), 6,99 - 7,11 (m, 2 Η, H-5, H-6), 7,16 - 7,22 (m, 1 Η, H-2). O espectro de ^XH RMN do produto era coerente com a estrutura sugerida do produto.

Etapa 2. Preparação de ácido 3-(3-fluor-4-metóxifeniljpentanodioico

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C<

178. A uma suspensão de 2-(3-fluor-4-metóxi-fenil)-4-hidróxi-4metil-6-oxo-ciclohexano-l,3-dicarboxilato de dietila (4,05 g, 10,22 mmoles) da etapa 1 em álcool etílico absoluto (50,0 mL) foi adicionada a solução de hidróxido de sódio a 50% (20 mL) e a mistura de reação foi aquecida sob condições de refluxo durante 1 h para fornecer uma suspensão bege. Após 1,5 h, a mistura de reação foi resfriada à temperatura ambiente e o etanol foi evaporado a vácuo para fornecer um precipitado marrom suspenso em água. O acetato de etila (75 mL) foi adicionado à solução acima e foi agitado à temperatura ambiente durante 30 min. A camada aquosa e as camadas orgânicas foram separadas. A camada aquosa foi lavada com acetato de etila (1><25 mL) para remover subproduto residual. A camada aquosa foi acidificada com HCI cone, até pH = 1. O solvente foi evaporado a vácuo para fornecer um sólido incolor a creme. O sólido foi filtrado, lavado com água (2^χ10 mL) e seco a vácuo para fornecer um sólido cristalino creme amarelado (2,08 g, 79%). A análise de LC-MS do sólido mostrou o produto desejado no tempo de retenção de 1,51 min e a massa do produto desejado: m/z 239 (M+H-H2O), m/z 257 (M+H) e m/z 279 (M+Na); Calculada para C12H13FO5: 256,23. ^XH RMN (400 MHz, DMSOd₆Y δ 2,48 (dd, J = 15,90 Hz e 8,80 Hz, 2H, -CH-CH₂-COOH, parcialmente escondido sob o pico de DMSO), 2,61(dd, J = 15,90 Hz e 8,80 Hz, 2H, HOOC-CH2-CH-), 3,34-3,39 (m, 1H, parcialmente escondido sob o pico de água, -CH-CH2-COOH), 3,79 (s, 3H, CH3O-), 6,98-7,08 (dd/m, 2H, H-5 e H-6), 7,13 (dd, J = 12,84 e 1,83 Hz, Hz, 1H, H-2), 12,07 (s, 2H, 2^X -COOH); O espectro de ^XH RMN do produto era coerente com a estrutura sugerida do produto.

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Etapa 3. Preparação de 3-(3-fluor-4-metóxi-fenil)pentanodioato de dietila

179. A uma solução de ácido 3-(3-fluor-4-metóxi-fenil) pentanodioico (2,04 g, 794 mmoles) da etapa 2 em etanol absoluto (25 mL) foi adicionada uma solução de HCI a 2,0 M em éter dietílico (20 mL) e a mistura de reação foi agitada à temperatura ambiente durante toda a noite para fornecer uma solução amarela alaranjada. A evaporação do solvente a vácuo forneceu um líquido viscoso amarelo. O resíduo foi fracionado entre água (50 mL) e acetato de etila (50 mL). As camadas aquosas e orgânicas foram separadas. A camada orgânica foi lavada com uma solução saturada de NaHCCH (1*10 mL), salmoura (1*25 mL), seca sobre sulfato anidro, filtrada e evaporada a vácuo para fornecer um líquido viscoso amarelo alaranjado (2,382 g, rendimento 96%). A análise de LC-MS do líquido mostrou o produto desejado no tempo de retenção de 2,42 min e a massa do produto desejado: m/z 267 (M+HC2H5O-), m/z 313 (M+H), m/z 335 (M+Na); Calculada para C10H21FO5: 312,34. Ή RMN (400 MHz, CDCI3): δ 1,17 (t, J= 7,1 Hz, 6H, 2*CH₃CH2-), 2,53-2,74 (m, 4H, 2x-CH₂-C=O-), 3,59 (t, J = 7,58 Hz, 1H, -CH₂CH-CH2-), 3,86 (s, 3H, -OCH3), 3,99-4,12 ( m, 4H, 2xCH₃-CH₂-O-), 6,856,91 (m, 1H), 6,92-7,00 (m, 2H). O espectro de ^XH RMN do composto era coerente com a estrutura sugerida do produto.

Etapa 4. Preparação de ácido (S)-5-etóxi-3-(3-fluor-4-metoxifenil)-5oxopentanoico

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Ο

180. Uma suspensão de 3-(3-fluor-4-metóxi-fenil)pentanodioato de dietila (2,356 g, 7,52 mmoles) da etapa 3 em solução de KH2PO4 a 28 mM foi agitada à temperatura ambiente. O pH da fase aquosa foi ajustado em pH 7,30 através da adição de solução de NaOH a 1 N e solução de KH2PO4 a 50 mM. A resina acrílica de lipase de Candida antartica (203,0 mg) foi adicionada e a mistura de reação foi agitada à temperatura ambiente durante toda a noite. Uma suspensão creme amarelada, a análise de LC-MS da mistura de reação após agitação durante toda a noite (17 h) mostrou o produto desejado no tempo de retenção de 1,98 min (48%) e o material de partida não reagido no tempo de retenção de 2,42 min (52%). Após 46 h, outra porção de esferas de resina acrílica de Lipase (142,0 mg) foi adicionada e o pH da mistura de reação foi ajustado em 7,30 pela solução de NaOH a 1 N e a mistura de reação foi agitada à temperatura ambiente. A análise de LCMS da mistura de reação após agitar durante 6 dias (138 h) mostrou o produto desejado no tempo de retenção de 1,97 min (>98%) e o material de partida não reagido no tempo de retenção de 2,41 min (<2%). Após 144 h a mistura de reação foi filtrada em um papel de filtro Whatman # 1 para remover a resina acrílica de lipase. A análise de LC-MS do filtrado mostrou o produto desejado no tempo de retenção de 1,97 min (>99%) e um traço na linha de base do material de partida não reagido no tempo de retenção de 2,41 min (<1%). A análise de LC-MS também mostrou a massa do produto desejado: m/z 267 (M+H-H2O), m/z 285 (M+H) e m/z 307 (M+Na); uma mistura de reação razoavelmente pura. O filtrado foi acidificado com HCI a 3 N (5 mL) para fornecer uma suspensão incolor. A suspensão foi saturada com cloreto de sódio sólido

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111/197 para fornecer uma suspensão pastosa incolor. O cloreto de sódio foi extraído por filtração e o filtrado foi extraída com acetato de etila (2><50 mL). A camada de acetato de etila foi lavada com salmoura (2><50 mL), seca com NasSCU anidro, filtrada e evaporada a vácuo para fornecer um óleo viscoso amarelo pálido, iniciado para solidificar lentamente em um sólido cristalino amarelo pálido (2,14 g, 99% de rendimento). A análise de LC-MS do sólido mostrou o produto desejado no tempo de retenção de 1,97 min e a massa do produto desejado: m/z 267 (M+H-H2O), m/z 285 (M+H) e m/z 307 (M+Na); Calculada para C14H17FO5: 284,28. ^XH RMN (400 MHz, CDCI3): δ 1,18 (t, J = 7,09 Hz, 3 H, CH3-CH2-CO-), 2,532,82 (m, 4H, 2*-CH₂-), 3,59 (quin/m, 1H, -CH₂-CH-CH₂-), 3,87 (s, 3H, O-CH3), 4,06 (qd, <7=7,09 e 1,22 Hz, 2 H), 6,86-6,92 (m, 1H), 6,94-7,00 (m, 2 Η), o pico de -COOH estava escondido sob a linha de base. O espectro de Ή RMN do produto era coerente com a estrutura sugerida do produto.

Etapa 5. Preparação de (3S)-3-(3-fluor-4-metóxi-fenil)-5-oxoheptanodioato de dietila

181. A uma solução de ácido (S)-5-etóxi-3-(3-fluor-4-metóxifenil)-5-oxo-pentanoico (2,06 g, 7,246 mmoles) da etapa 4 e ácido de Meldrum (1,23 g, 114,13 mmoles) em DMF anidra (15,0 mL) sob atmosfera de nitrogênio e a 0 °C (banho de gelo) foi adicionado lentamente cianofosfonato de dietila (1,61 g, 163,11 mmoles), seguido por trietilamina (3,5 mL, 25,11 mmoles). A mistura de reação foi agitada a 0 °C durante 30 min para fornecer uma solução cor de laranja. Após

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112/197 min, a mistura de reação foi aquecida à temperatura ambiente e agitada à temperatura ambiente durante toda a noite sob atmosfera de nitrogênio. A mistura de reação foi extinta dentro de HC1 a 2 N gelado (20 mL) e agitada durante 5 min para fornecer um resíduo oleoso marrom. A mistura foi diluída com água (20 mL) e extraída com acetato de etila (4*25 mL). A camada orgânica foi combinada, lavada com água (1*50 mL), salmoura (1*50 mL), seco sobre NaaSCk anidro, filtrada e evaporada a vácuo para fornecer um óleo marrom alaranjado (6,21 g). O óleo foi dissolvido em etanol absoluto (80,0 mL) e a mistura de reação foi submetida ao refluxo durante 3 h para fornecer uma solução cor de laranja. O solvente foi evaporado a vácuo para fornecer um óleo marrom alaranjado (3,34 g). A análise de LC-MS do produto bruto mostrou o produto desejado no tempo de retenção de 2,36 min e um subproduto no tempo de retenção de 2,46 min. A LC-MS também mostrou a massa do produto desejado: m/z 309 (M+H-C2H5O-), m/z 355 (M+H), m/z 377 (M+Na) e a massa do subproduto: m/z 430 (M+H), m/z 452 (M+Na) e m/z 881 (2M+Na). O produto bruto foi dissolvido em diclorometano e aplicado na coluna 80 g RediSep Silica coluna e foi purificado por cromatografia flash em silica gel utilizando 0 a 60% de EtOAc em hexanos. As frações puras foram misturadas juntas e a mistura foi evaporada a vácuo para fornecer um líquido viscoso incolor até amarelo muito pálido (1,767 g, rendimento 69%). A análise de LC-MS do líquido mostrou o produto desejado no tempo de retenção de 2,35 min e a massa do produto desejado: m/z 309 (M+H-C2H5O-), m/z 355 (M+H), m/z 377 (M+Na); Calculada para C18H23FO0: 354,37. ^XH RMN (400 MHz, CDCI3): δ 1,17 (t, J = 7,21 Hz, 3 H, CH3-CH2-CO-), 1,25 (t, J= 7,21 Hz, 3 H, CH3-CH2-CO-), 2,48-2,72 (m, 4H), 2,83-3,00 (m, 2H), 3,86 (s, 3H, O-CH3), 4,05 (qd, J=7,13 e 1,83 Hz, 2 H), 4,12-4,22 (m, 2H), 4,28 (q, J = 7,25 Hz, 1H), 6,89 (d, J = 8,31 Hz, 1H), 6,92 - 6,94 (m, 2 H), 6,96 (t, J = 2,20 Hz, 1 Η, -OH). O espectro de ^XH RMN do produto era coerente

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113/197 com a estrutura sugerida do produto.

Etapa 6: Preparação de (3S)-3-(3-fluor-4-metóxi-fenil)-4-(5hidróxi- l-metil-pirazol-3-il)butanoato de etila

HO

N

182. A uma solução de (3S)-3-(3-fluor-4-metóxi-fenil)-5-oxoheptanodioato de dietila (1,756 g, 4,955 mmoles) da etapa 5 em álcool etílico absoluto foi adicionada metilhidrazina (300 qL, 5,697 nmmoles) à temperatura ambiente para fornecer uma solução amarela pálida. A mistura de reação foi aquecida sob condições de refluxo durante 1,5 h para fornecer uma solução amarela brilhante. A mistura de reação foi resfriada à temperatura ambiente e evaporada a vácuo para fornecer um resíduo pastoso amarelo (1,82 g). O produto bruto foi dissolvido em acetato de etila contendo um traço de etanol e aplicado na coluna 40 g RediSep Silica e foi purificado por cromatografia flash em silica gel utilizando 0 a 20% de metanol em EtOAc para fornecer um líquido viscoso amarelo muito pálido, seco em uma bomba a vácuo para fornecer um sólido espumoso amarelo pálido (1,347 g, rendimento 81%). A análise de LC-MS do sólido mostrou o produto desejado no tempo de retenção de 1,84 min e a massa do produto desejado: m/z 337 (M+H), m/z 359 (M+Na) e m/z 695 (2M+Na); Calculada para Ci₇H₂iFN₂O4: 336,36. Ή RMN (400 MHz, CDCI3): δ 1,18 (t, J = 7,21 Hz, 3 H, CH3-CH2-CO-), 2,55 - 2,62 (m, 1 H, -CHH-CH-CH2-), 2,63 - 2,71 (m, 2 H, -CHH-CH-CHH-), 2,74 - 2,82 (m, 1 H, -CHH-CH-CH2-), 3,23 (s, 3 H, N-CH3), 3,34 - 3,46 (m, 1 H, -CH2-CH-CH2-), 3,88 (s, 3 H,-OCH₃), 4,06 (q, <7=7,09 Hz, 2 H, CH3-CH2-CO- ), 6,85 - 6,92 (m, 3 H, Ph-H-2, H5, H-6), 6,92 - 6,94 (m, 1 H, Py-H-4), 6,96 (s, 1 Η, -OH). O espectro de ^XH

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RMN do produto era coerente com a estrutura sugerida do produto.

Etapa 7: Preparação de (3S)-3-(3-fluor-4-metóxi-fenil)-4-[l-metil-5[2-(5,6,7,8-tetrahidro- l,8-naftiridin-2-il)etóxi]pirazol-3-il]butanoato de etila

183. A uma solução de trifenilfosfino (1,15 g, 4,388 mmoles) em THF anidro (15 mL) a -10 °C (banho de gelo com sal) foi adicionado DIAD (900 pL, 4,57 mmoles) em gotas para fornecer uma suspensão amarela dentro de 5-10 min. A mistura de reação foi agitada a -10 °C durante mais 20 min. À mistura de reação anterior foi adicionada em gotas uma solução de 2-(5,6,7,8-tetrahidro-l,8-naftiridin-2-il)etanol (711,0 mg, 3,987 mmoles) (do Esquema 2) em THF (5,0 mL). A mistura de reação foi agitada a -10 °C durante 20 min e uma solução de (3S)-3(3-fluor-4-metóxi-fenil)-4-(5-hidróxi-l-metil-pirazol-3-il)butanoato de etila (1,341 g, 3,987 mmoles) da etapa 6 em THF anidro (5,0 mL) foi adicionada em uma porção para fornecer uma solução cor de laranja. A mistura de reação foi aquecida à temperatura ambiente após agitar durante 10 min a -10 °C e agitada durante toda a noite à temperatura ambiente. A mistura de reação foi extinta com uma solução saturada de NH4CI (50 mL) e extraída com acetato de etila (2*50 mL). A camada orgânica combinada foi lavada com salmoura (1^χ50 mL), seca sobre Na2SÜ4 anidro, filtrada e evaporada a vácuo para fornecer um resíduo espumoso/pastoso amarelo. O produto bruto foi purificado por cromatografia flash em silica gel em uma coluna de silica RediSep 80 g e eluição com 0-2% de metanol em acetato de etila para fornecer um

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115/197 sólido cristalino creme (858,0 mg, rendimento 44%). A análise de LC-MS do sólido mostrou o produto desejado no tempo de retenção de 2,04 min e a massa do produto desejado: m/z 497 (M+H) e m/z 519 (M+Na); Calculada para C27H33FN4O4: 496,58. ^XH RMN (400 MHz, CDCI3): δ 1,12 (t, J = 7,21 Hz, 3 H), 1,92 (dt, J = 11,68, 6,02 Hz, 1 H), 2,52 (dd, J = 15,41, 10,03 Hz, 1 H), 2,65-2,84 (m, 5 H), 2,97 (t, J = 6,85 Hz, 2 H), 3,32 -3,39 (m, 1 H), 3,40-3,46 (m, 2 H), 3,50 (s, 3 H), 3,85 (s, 3 H), 3,93-4,04 (m, 2 H), 4,26 (t, J = 6,85 Hz, 2 H), 4,89-5,03 (m, 1 H), 4,96 (br s, 1 H), 5,22 (s, 1 H) 6,39 (d, J =7,09 Hz, 1 H), 6,83-6,89 (m, 1 H), 6,91-6,98 (m, 2 H), 7,09 (d, J = 7,34 Hz, 1 Η). O espectro de ^XH RMN do produto era coerente com a estrutura sugerida do produto.

Etapa 8: Preparação de ácido (3S)-3-(3-fluor-4-metoxifenil)-4-(lmetil-5-(2-(5,6,7,8-tetrahidro-1,8-naftiridin-2-il)etóxi)- lH-pirazol-3iljbutanoico

184. A uma solução de (3S)-3-(3-fluor-4-metóxi-fenil)-4-[l-metil5-[2-(5,6,7,8-tetrahidro-l,8-naftiridin-2-il)etóxi]pirazol-3-il]butanoato de etila (806 mg, 1,623 mmol) da etapa 7 em THF anidro (5 mL) foi adicionada uma solução aquosa de NaOH a 1,0 N (8,0 mL) e a suspensão resultante foi agitada a 50 °C para fornecer uma suspensão amarela. A análise de LC-MS da mistura de reação após agitar durante 8 h mostrou o produto desejado no tempo de retenção de 1,78 min; nenhum traço do material de partida estava presente no tempo de retenção de 2,04 min. O solvente foi evaporado a vácuo para fornecer um resíduo pastoso amarelo. O resíduo bruto foi purificado por HPLC

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116/197 preparatória de fase inversa em uma coluna Biotage KP-C18-HS (120 g) e utilizando um gradiente de 10-50% de acetonitrila em água contendo 0,05% de TFA para fornecer o composto do título desejado (Exemplo 15) na forma de um resíduo pastoso amarelo pálido. A análise de LC-MS do resíduo mostrou o produto desejado no tempo de retenção de 1,77 min e a massa do produto desejado: m/z 469 (M+H) e m/z 491 (M+Na); Calculada para C25H29FN4O4: 468,53. O resíduo acima foi dissolvido em água contendo algumas gotas de acetonitrila e liofilizado para fornecer um pó liofilizado creme até amarelo pálido (708,0 mg, rendimento 93%). ^XH RMN (400 MHz, DMSO-cfe): δ 1,77-1,87 (m, 2H), 2,40-2,48 (m, 1H), 2,54-2,62 (m, 1H), 2,65 (t, J= 6,97 Hz, 2H), 2,74 (t, J = 6,11 Hz, 2H), 3,09 (t, J= 6,11 Hz, 2H), 3,19-3,29 (m, 1H), 3,38 (s, 3H), 3,41 (t, J = 5,38 Ηζ,ΙΗ), 3,78 (s, 3H), 4,25 (t, J=6,ll Hz, 2H), 5,43 (s, 1H), 6,68 (d, J = 7,34 Hz, 1H), 6,94-7,05 (m, 2H), 7,09 (dd, J = 12,96 e 1,71 Hz, 1H), 7,62 (d, J = 7,34 Hz, 1H), 8,44 (brs, 1H), 13,92 (brs, 1H). ¹⁹F RMN (376 MHz, DMSO-dõ): δ -135,81 (dd, J = 12,95 e 8,86 Hz, IF, 3-F); também mostrou TFA a δ -74,35 (s, 3F, CF3COOH).

Exemplo 16

Preparação de ácido 3-(3-bromo-5-tert-butil-fenil)-4-(l-metil-5-(2(5,6,7,8-tetrahidro-l,8-naftiridin-2-il)etóxi)-177-pirazol-3-il) butanoico

185.

O Exemplo 16 foi preparado de maneira análoga ao

Exemplo 1, utilizando 3-bromo-5-terí-butilbenzaldeído como o

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117/197 benzaldeído requerido no Esquema de reação 3. O produto bruto foi purificado por HPLC preparatória de fase inversa e após a liofilização das frações forneceu o composto do título na forma de um pó incolor (75,2 mg). A análise de LC-MS do sólido mostrou o produto desejado no tempo de retenção de 2,20 min com uma pureza >95% e a massa do produto desejado: m/z 555 (^79BrM+H), m/z 557 (^81BrM+H), m/z 577 (79BrM+Na) e rn/z 579 (8iBrM+Na); Calculada para C3oH3õBrN403: 555,51. ^XH RMN (400 MHz, CD3OD): δ 1,24 -1,31 (m, 9 H), 1,92-2,01 (m, 2 H), 2,65- 2,78 (m, 2 H), 2,78- 2,88 (m, 2 H), 2,95 (dd, J = 14,62, 8,97 Hz, 1 H), 3,12 (dd, J =14,62, 6,59 Hz, 1 H), 3,24 (t, J = 5,90 Hz, 2 H) 3,433,55 (m, 3 H), 3,66 (s, 3 H), 4,54 (t, J = 5,77 Hz, 2 H), 6,06 (s, 1 H), 6,73 (d, J = 7,28 Hz, 1 H), 7,21 (s, 1 H), 7,26 (s, 1 H), 7,39 (s, 1 H), 7,63 (d, J =7,40 Hz, 1 H).

Exemplo 17

Preparação de ácido 3-(3-tert-butil-5-cianofenil)-4-(l-metil-5-(2(5,6,7,8-tetrahidro- l,8-naftiridin-2-il)etóxi)-lff-pirazol-3-il) butanoico

186. O Exemplo 17 foi preparado de maneira análoga ao Exemplo 7 (Esquema 4) utilizando o exemplo 16 como o precursor. O produto bruto foi purificado por HPLC preparatória de fase inversa e após a liofilização das frações forneceu o composto do título na forma de um pó incolor (38,2 mg). A análise de LC-MS do sólido mostrou o produto desejado no tempo de retenção de 2,04 min e a massa do

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118/197 produto desejado: m/z 502 (M+H) e m/z 524 (M+Na); Calculada para C29H35N5O3: 501,62. ^XH RMN (400 MHz, DMSO-cfe): δ 1,19 - 1,25 (m, 9 H), 1,78 - 1,88 (m, 2 H), 2,54 - 2,69 (m, 3 H), 2,70 - 2,80 (m, 3 H), 3,08 (t, J = 6,02 Hz, 2 H), 3,37 (s, 4 H), 3,39 - 3,45 (m, 4 H), 4,22 (t, J = 6,02 Hz, 2 H), 5,41 (s, 1 H), 6,68 (d, J = 7,40 Hz, 1 H), 7,50 (s, 1 H), 7,54 (s, 1 H), 7,59 (s, 1 H), 7,63 (d, J = 7,40 Hz, 1 H), 8,18 (brs, 1 H).

Exemplo 18

Preparação de ácido 3-(3,5-di-tert-butilfenil)-4-[l-metil-5-[2-(5,6,7,8tetrahidro-1,8-naftiridin-2-il)etóxi]pirazol-3-il]butanoico

Esquema 7

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119/197

Etapa 1. Preparação de 2-(3,5-di-tert-butilfenil)-4-hidróxi-4-metil-6oxo-ciclohexano- 1,3-dicarboxilato de dietila

187. A piperidina (90 gL, 0,91 mmol) foi adicionada a uma solução de uma mistura de 3,5-di-tert-butilbenzaldeído (1,774 g, 7,88 mmoles) e acetoacetato de etila (2,57 g, 19,76 mmoles). A mistura de

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120/197 reação foi agitada à temperatura ambiente durante 92 h para fornecer um sólido microcristalino amarelo canário. O produto bruto foi recristalizado através da dissolução do sólido em hexanos em ebulição (30 mL) e do resfriamento da solução amarela à temperatura ambiente para fornecer um sólido cristalino incolor. O sólido foi filtrado, lavado com hexanos (3^χ10 mL) e seco a vácuo para fornecer um sólido cristalino incolor (2,70 g, rendimento 74%). A análise de LC-MS do sólido mostrou a massa do produto desejado: m/z 443 (M+H-H2O), m/z 461 (M+H), m/z 483 (M+Na) e m/z 943 (2M+Na); Calculada para C27H40O0: 460,61. ^XH RMN (400 MHz, CDCI3): δ 0,72 (t, J = 7,21 Hz, 3 H, CH3-CH2-), 1,01 (t, J = 7,09 Hz, 3 H, CH3-CH2-), 1,29 (s, 18H, 2x tC4H9-), 1,36 (s, 3 H, CH3-), 2,51 (dd, J = 14,18 Hz e 2,69 Hz, 1H, -CHem C-2), 2,72 (d, J = 14,18 Hz, 1 H, -CH- em C-l ), 3,03 (d, J = 12,23 Hz, 1 H,-CH-, em C-3), 3,70 (d, J = 12,47 Hz, 1 Η, -OH), 3,73-3,89 (m, 3H, -CH2-CH3 + -CHH-), 3,94-3,99 (s, 1 H, -CHH-), 4,01 (q, 2H, -CH₂CH₃), 7,03 (d, J = 1,71 Hz, 1H, Ar-H-4), 7,19 - 7,32 (m, 2H, Ar-H-2, H6). O espectro de ^XH RMN do produto era coerente com a estrutura sugerida do produto.

Etapa 2. Preparação de ácido 3-(3,5-di-tert-butilfenil)pentanodioico

188. A uma solução de 2-(3,5-di-tert-butil-fenil)-4-hidróxi-4metil-6-oxo-ciclohexano-l,3-dicarboxilato de dietila (2,70 g, 5,86 mmoles) da etapa 1 em álcool etílico absoluto (15,0 mL) foi adicionada uma solução de hidróxido de sódio a 50% (20 mL) e a mistura de reação foi aquecida sob condições de refluxo durante 1 h para fornecer uma suspensão bege. Após 1,5 h, a mistura de reação foi resfriada à

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121/197 temperatura ambiente e o etanol foi evaporado a vácuo para fornecer um precipitado creme bege. O precipitado foi dissolvido em água (50 mL) e diluído com acetato de etila (50 mL) e agitado à temperatura ambiente durante 15 min. A camada aquosa e as camadas orgânicas foram separadas. A camada aquosa foi lavada com acetato de etila (1x25 mL) para remover o subproduto residual. A camada aquosa foi acidificada com HC1 cone, até pH = 1 para fornecer um sólido cristalino creme. O sólido foi filtrado, lavado com água (3^χ25 mL) e seco a vácuo para fornecer um sólido cristalino creme amarelado (l,767g, rendimento 94%). A análise de LC-MS do sólido mostrou a massa do produto desejado: m/z 303 (M+H-H2O), m/z 321 (M+H) e m/z 343 (M+Na); Calculada para C19H28O4: 320,43. ^XH RMN (400 MHz, DMSO-cfe): δ 1,26 (s, 18H, 2x t-C₄Hp, 2,50 (dd J = 15,75 Hz e 7,0 Hz, 2H,-CH-CH₂-COOH, parcialmente escondido sob o pico de DMSO), 2,62 (dd, J = 15,75 Hz e 7,0 Hz, 2H, HOOC-CH2-CH-), 3,43 (quin, J = 7,52 Hz, 1H, -CH₂-CHCH2-COOH), 7,08 (d, J = 1,71 Hz, 2H, H-2 e H-6), 7,20 (t, J = 1,71 Hz, 1H, H-4), 12,04 (s, 2H, 2^X -COOH); O espectro de ^XH RMN do produto era coerente com a estrutura sugerida do produto.

Etapa 3. Preparação de 4-(3,5-di-tert-butilfenil)tetrahidropiran-2,6diona

189. Uma suspensão de ácido 3-(3,5-di-tert-butilfenil) pentanodioico (2,13 g, 6,647 mmoles) da etapa 2 em anidrido acético (40,0 mL) foi aquecida sob condições de refluxo para fornecer uma solução amarela alaranjada dentro de 10 min. O aquecimento foi

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122/197 descontinuado após 4 h e a mistura de reação foi resfriada à temperatura ambiente. O solvente foi evaporado a vácuo para fornecer um líquido viscoso marrom claro que se solidificou em um sólido cristalino marrom claro à temperatura ambiente. O produto bruto foi cristalizado partindo dos hexanos contendo diclorometano para fornecer um sólido cristalino quase incolor, o sólido foi filtrado, lavado com hexanos e seco a vácuo para fornecer um sólido cristalino quase incolor (1,90 g, rendimento 95%). A análise de LC-MS do sólido cristalizado mostrou a massa do produto desejado: m/z 303 (M+H) e m/z 325 (M+Na); Calculada para C19H20O3: 302,41. ^XH RMN (400 MHz, CDCI3): δ 1,33 (s, 18 H, 2^X tert-C₄H₉-), 2,89 (dd, J = 17,36, 11,49 Hz, 2 H, -CH₂-), 3,14 (dd, J = 17,36, 4,40 Hz, 2 H, -CH₂-), 3,42 (tt, J = 11,55, 4,34 Hz, 1 H, -CH2-CH-CH2-), 7,02 (d, J = 1,47 Hz, 2 Η, H-2, H-6), 7,40 (t, J = 1,71 Hz, 1 Η, H-3). O espectro de ^XH RMN do produto era coerente com a estrutura sugerida do produto.

Etapa 4. Preparação de ácido 3-(3,5-di-tert-butilfenil)-5-etóxi-5-oxopentanoico

190. Uma solução de 4-(3,5-di-tert-butilfenil)tetrahidropiran-2,6diona da etapa 3 em uma mistura de piridina anidra e álcool etílico absoluto foi aquecida sob refluxo durante 1,5 h para fornecer uma solução castanho claro. O solvente foi evaporado a vácuo para fornecer um resíduo viscoso castanho claro. O resíduo foi dissolvido em acetato de etila (25 mL). A camada de acetato de etila foi primeiramente lavada com HCI a 1 N (25 mL) e então com água (1^χ25 mL) e finalmente com salmoura (1^χ10 mL). A camada de acetato de etila foi seca sobre Na2SO₄

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123/197 anidro, filtrada e evaporada a vácuo para fornecer um líquido viscoso castanho claro que se solidificou em um sólido espumoso castanho claro até creme (618,0 mg, rendimento 98%). A análise de LC-MS do produto bruto mostrou o produto desejado com uma pureza >95% e a massa do produto desejado: m/z 331 (M+H-H2O), m/z 349 (M+H) e m/z 371 (M+Na); Calculada para C21H32O4: 348,48. ^XH RMN (400 MHz, CDCI3): δ 1,14 (t, J= 7,09 Hz, 3H, CH3-CH2-), 1,31 (s, 18 H, 2* tertC4H9-), 2,59-2,85 (m, 4H, -CH2-CH-CH2-), 3,64 (quin J =7,34 Hz, 1H, CH2-CH-CH2-), 4,05 (q, J = 7,09 Hz, 2H, -O-CH2-CH3), 7,05 (d, J = 1,71 Hz, 2 Η, H-2, H-6), 7,28 (s, 1 Η, H-4), o pico de -COOH estava escondido sob a linha de base. O espectro de ^XH RMN do produto era coerente com a estrutura sugerida do produto.

Etapa 5. Preparação de 3-(3,5-di-tert-butilfenil)-5-oxo-heptanodioato de dietila

191. A uma solução de ácido 3-(3,5-di-tert-butilfenil)-5-etóxi-5oxo-pentanoico (618,0 mg, 1,773 mmol) da etapa 4 e ácido de Meldrum (294,95 mg, 2,047 mmoles) em DMF anidra sob atmosfera de nitrogênio e a 0 °C (banho de gelo) foi adicionado lentamente cianofosfonato de dietila (290 gL, 1,911 mmol), seguido por trietilamina (900 qL, 6,457 mmoles) . A mistura de reação foi agitada a 0 °C durante 30 min para fornecer uma solução amarela alaranjada. Após 30 min, a mistura de reação foi aquecida à temperatura ambiente e agitada à temperatura ambiente durante toda a noite sob atmosfera de nitrogênio para fornecer uma solução cor de laranja escura. A mistura de reação foi extinguida em HCI a 2 N gelado (10 mL) e agitada durante 5 min para

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124/197 fornecer um resíduo ceroso creme. A mistura foi diluída com água (20 mL) e extraída com acetato de etila (2><25 mL). A camada orgânica foi combinada, lavada com água (1><23 mL), salmoura (1><25 mL), seca sobre NaaSCU anidro, filtrada e evaporada a vácuo para fornecer um líquido viscoso amarelo alaranjado.

192. O óleo viscoso foi dissolvido em etanol absoluto (20,0 mL) e a mistura de reação foi submetida ao reíluxo durante 3 h para fornecer uma solução cor de laranja. A análise de LC-MS da mistura de reação após 3 h mostrou a massa do produto desejado: m/z 373 (M+H-C2H5O), m/z 419 (M+H) e m/z 441 (M+Na). O solvente foi evaporado a vácuo para fornecer um resíduo viscoso amarelo alaranjado (696,3 mg). O produto bruto foi dissolvido em diclorometano e aplicado na coluna 24 g RediSep Silica e foi purificado em um CombiFlashR/ por cromatografia flash em silica gel utilizando 0 a 30% de EtOAc em hexanos. As frações puras foram misturadas juntas e a mistura foi evaporada a vácuo para fornecer um sólido espumoso incolor até amarelo muito pálido (430,5 mg, rendimento 58%). A análise de LC-MS do sólido mostrou o produto desejado com uma pureza >95% e a massa do produto desejado: m/z 373 (M+H-C2H5O-), m/z 419 (M+H), m/z 441 (M+Na); Calculada para C25H38O5: 418,57. ^XH RMN (400 MHz, CDCI3): δ 1,15 (t, J = 7,09 Hz, 3 H, CH3-CH₂-CO-),1,25 (t, J = 7,09 Hz, 3 H, CH3-CH2-CO-), 1,31 (s, 18 H, 2x tert-C₄H₉-), 2,59 - 2,74 (m, 2 H, -CH2-CH-CH2-), 2,86 - 3,04 (m, 2 H, -CH2-CH-CH2- ), 3,33 (s, 2H,b-CO-CH₂-CO-)> 3,70 (quin, J = 7,21 Hz, 1 H, -CH2-CH-CH2-), 4,04 (q, J = 7,09 Hz, 2 H, CH3-CH2-CO- ), 4,16 (q, J = 7,17 Hz, 2 H, CH3-CH2-CO- ), 7,02-7,06 (m, 2 H, Ph-H-2, H-6), 7,257,28 (m, 1 H, Ph-H-4). O espectro de ^XH RMN do produto era coerente com a estrutura sugerida do produto

Etapa 6. Preparação de 3-(3,5-di-tert-butilfenil)-4-(5-hidróxi-l-metilpirazol-3-il)butanoato de etila

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193. A uma solução de 3-(3,5-di-tert-butilfenil)-5-oxo-heptanodioato de dietila (430,50 mg, 1,028 mmol) da etapa 5 em álcool etílico absoluto (5,0 mL) foi adicionada metilhidrazina (70 qL, 1,33 mmol) à temperatura ambiente para fornecer uma solução incolor. A mistura de reação foi aquecida sob condições de refluxo durante toda a noite para fornecer uma solução amarela muito pálida. O solvente foi evaporado a vácuo para fornecer um sólido espumoso amarelo sujo. O produto bruto foi dissolvido em acetato de etila contendo um traço de DCM e aplicado na coluna 12 g RediSep Silica e foi purificado por cromatografia flash em silica gel utilizando 0 a 20% de metanol em EtOAc. As frações puras foram misturadas juntas e a mistura foi evaporada a vácuo para fornecer um líquido viscoso amarelo muito pálido, seca em uma bomba a vácuo para fornecer um sólido amarelo pálido a creme (355,5 mg, rendimento 86%). A análise de LC-MS do sólido mostrou a massa do produto desejado: m/z 401(M+H), m/z 423 (M+Na) e m/z 823 (2M+Na); Calculada para C24H30N2O3: 400,56. ^XH RMN (400 MHz, CDCI3): δ 1,18 (t, J = 7,09 Hz, 3 H, CH3-CH2-O-) 1,30 (s, 18 H, 2x tert-C₄H₉-), 2,64-2,88 (m, 4H,-CH2-CH-CH2-, dois diastereotópicos -CH2-), 2,81 (s, 1H, -OH), 3,24 (s, 3H, N-CH3), 3,46 (quin, J=7,52 Hz, 1H, -CH₂-CH-CH₂-), 4,07 (q, J = 7,10 Hz, 2H, -O-CH2-CH3), 7,02 (d, J = 1,71 Hz, 2 Η, H-2, H-6), 7,257,29 (m, 2 H, Py-H-4 e Ph-H4). O espectro de ^XH RMN do produto era coerente com a estrutura sugerida do produto.

Etapa 7. Preparação de 3-(3,5-di-tert-butilfenil)-4-[l-metil-5-[2(5,6,7,8-tetrahidro-l,8-naftiridin-2-il)etóxi]pirazol-3-il]butanoato de etila

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194. A uma solução de trifenilfosfino (262,5 mg, 1,00 mmol) em THF anidro (5 mL) a -10 °C (banho de gelo com sal) foi adicionado DIAD (200 pL, 1,02 mmol) em gotas para fornecer uma suspensão amarela dentro de 5 min. A mistura de reação foi agitada a -10 °C durante mais 20 min. À mistura de reação anterior foi adicionada em gotas uma solução de 2-(5,6,7,8-tetrahidro-l,8-naftiridin-2-il)etanol (155,7 mg, 0,874 mmol) em THF (4,0 mL). A mistura de reação foi agitada a -10 °C durante 20 min e então uma solução de 3-(3,5-di-tert-butilfenil)-4-(5hidróxi-l-metil-pirazol-3-il)butanoato de etila (350,0 mg, 0,874 mmol) da etapa 6 em THF anidro (5,0 mL) foi adicionada em uma porção para fornecer uma solução cor de laranja. A mistura de reação foi aquecida à temperatura ambiente após agitar durante 10 min a -10 °C e agitada durante toda a noite à temperatura ambiente. A mistura de reação foi extinguida com uma solução saturada de NH₄C1 (25 mL) e extraída com acetato de etila (2*25 mL). A camada orgânica combinada foi lavada com salmoura (1*25 mL), seca sobre NaaSCk anidro, filtrada e evaporada a vácuo para fornecer um resíduo espumoso/pastoso amarelo. O produto bruto foi primeiramente purificado por cromatografia flash em silica gel utilizando uma coluna de silica RediSep 24 g e eluição com 0-2% de metanol em acetato de etila para fornecer o produto desejado na forma de um sólido amarelo (1,092 g). A análise de LC-MS do produto mostrou o produto desejado com uma pureza >70%. A segunda purificação do produto impuro por HPLC preparatória de fase inversa utilizando uma coluna RediSep C18 e um gradiente de 10-60% de acetonitrila em água contendo 0,05% de TFA

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127/197 forneceu o produto desejado após a liofilização na forma de um sólido espumoso amarelo pálido (244,3 mg; rendimento 50%). A análise de LCMS do sólido mostrou a massa do produto desejado: m/z 561 (M+H) e m/z 583 (M+Na); Calculada para C34H48N4O3: 560,78. ^XH RMN (400 MHz, CDCI3): δ 1,08 (t, J = 7,09 Hz, 3 H), 1,29 (s, 18 H, 2x tert-C₄H₉-), 1,91-2,00 (m, 1 H), 2,56-2,72 (m, 2 H), 2,78 (t, J = 6,24 Hz, 2 H), 2,812,96 (m, 2 H), 3,16 (t, J = 5,99 Hz, 2 H), 3,38-3,47 (m, 1H), 3,52 (t,J = 4,65 Hz, 2H), 3,56 (s, 3 H, N-CH3), 3,97 (q, J= 7,17 Hz, 2H), 4,29 (t, J = 5,99 Hz, 2 H), 5,36 (s, 1H), 6,38 ( d, J = 7,34 Hz, 1 H), 7,04 (t, J = 1,71 Hz, 2 H), 7,24 (t, J = 1,71 Hz, 2 H),7,27 (s, 1H), 7,33 (d, J = 7,34 Hz, 1 H), 10,39 (brs, 1H). O espectro de ^XH RMN do produto era coerente com a estrutura sugerida do produto.

Etapa 8. Preparação de ácido 3-(3,5-di-tert-butilfenil)-4-[l-metil-5[2-(5,6,7,8-tetrahidro- l,8-naftiridin-2-il)etóxi]pirazol-3-il]butanoico

Exemplo 18

195. A uma solução de 3-(3,5-di-tert-butilfenil)-4-[l-metil-5-[2(5,6,7,8-tetrahidro-1,8-naftiridin-2-il)etóxi] pirazol-3-il]butanoato de etila (235,0 mg, 0,419 mmol) da etapa 7 em THF anidro (3 mL) foi adicionada uma solução aquosa de NaOH a 1 N (4,0 mL) e a solução resultante foi agitada a 50 °C durante toda a noite. A mistura de reação foi acidificada com HCI a 2 N e o solvente foi evaporado a vácuo para fornecer um resíduo cristalino/pastoso amarelo muito pálido. O resíduo bruto foi purificado por HPLC preparatória de fase inversa utilizando uma coluna RediSep C18 e um gradiente de 10-60% de acetonitrila em

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128/197 água contendo 0,05% de TFA. As frações puras foram misturadas juntas e a mistura foi evaporada a vácuo para fornecer um resíduo pastoso incolor. O resíduo foi dissolvido em uma mistura de água e acetonitrila e a solução foi liofilizada para fornecer o produto desejado, Exemplo 18, na forma de um pó liofilizado incolor (240 mg).

196. A análise de LC-MS do sólido mostrou a massa do produto desejado: m/z 533 (M+H) e m/z 555 (M+Na). Calculada para C32H44N4O3: 532,73. ^XH RMN (400 MHz, DMSO-d₆): δ 1,24 (s, 18H, 2x tert-C₄H9-), 1,78-1,87 (m, 2H), 2,58 (d, J = 5,62 Hz, 1H), 2,60-2,69 (m, 3H), 2,74 (t, J= 6,11 Hz, 2H), 3,09 (t, J = 5,99 Hz, 2H), 3,24-3,34 (m, 1H), 3,39 (s, 3H), 3,40-3,44 (m, 1H), 4,23 (t, J = 5,99 Hz, 2H), 5,40 (s, 2 H), 6,69 (d, J = 7,34 Hz, 1H), 7,02 (d, J = 1,71 Hz, 1H), 7,11-7,22 (m, 1H), 7,64 (d, J = 7,34 Ηζ,ΙΗ), 8,12 (brs, 1H), 13,67 (brs; 1H). O espectro de ^XH RMN do produto era coerente com a estrutura sugerida do produto.

Exemplo 19

Preparação de ácido 3-(3-bromo-5-(l-(difluormetil) ciclopropil) fenil)-4-( l-metil-5-(2-(5,6,7,8-tetrahidro- l,8-naftiridin-2-il)etóxi)-lHpirazol-3-il)butanoico

197. O Exemplo 19 foi preparado de maneira análoga ao Exemplo 1, utilizando 3-bromo-5-(l-(difluormetil)ciclo-propil) benzaldeído (sintetizado de acordo com o Esquema 8) como o benzaldeído requerido no Esquema de reação 3. O produto bruto foi

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129/197 purificado por prep-HPLC (coluna: Fenomenex Gemini C18 250*50 10μ; fase móvel: [água (0,225%FA)-ACN]; B%: 23%-53%, 11,2 min). O efluente da HPLC foi liofilizado para fornecer o composto do título na forma de um sólido branco (200 mg). A análise de LC-MS do sólido mostrou a massa do produto desejado: m/z 589 (M+H); calculada para C28H3iBrF₂N₄O3: 589,47. ^XH RMN (400 MHz, CD₃OD): δ ppm 0,91 (br d, J=2,21 Hz, 2 H) 1,08 - 1,15 (m, 2 H) 1,84 - 1,96 (m, 2 H) 2,51 - 2,61 (m, 1 H) 2,62 - 2,85 (m, 5 H) 2,94 - 3,10 (m, 2 H) 3,34 - 3,47 (m, 6 H) 4,28 (t, J=6,28 Hz, 2 H) 5,40 (s, 1 H) 5,45 - 5,80 (m, 1 H) 6,52 (d, J=7,28 Hz, 1 H) 7,20 (s, 1 H) 7,34 - 7,39 (m, 2 H). ¹⁹FRMN (400 MHz, CD3OD): δ ppm -117,89-118,04.

Esquema 8

Etapa 1. Preparação de l,3-dibromo-5-(clorometil)benzeno

Br

198. (3,5-Dibromofenil)metanol (10 g, 37,60 mmoles, 1 eq) foi dissolvido em DCM anidro (100 mL) em um frasco seco sob nitrogênio. A mistura de reação foi resfriada a 0°C e agitada sob atmosfera de

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130/197 nitrogênio. DIEA (9,72 g, 75,21 mmoles, 13,10 mL, 2 eq) foi adicionado em gotas à solução anterior, após 10 minutos de agitação a 0°C, MsCl (6,46 g, 56,41 mmoles, 4,37 mL, 1,5 eq) foi adicionado em gotas à mistura de reação acima. Finalmente, foi permitido que a mistura de reação fosse agitada a 26°C durante 2 h. A TLC (Éter de petróleo: EtOAc = 5:1, uv & corada por KMnCk) mostrou que o álcool de partida foi consumido e dois pontos novos foram formados. A mistura de reação foi lavada com água (80 mL) seguida pela solução de NaHCOs (80 mL) e salmoura (80 mL), seca sobre NaaSCU anidro, filtrada e evaporada até a secura para fornecer o produto desejado na forma de um líquido marrom (12,llg). O líquido anterior foi utilizado diretamente na etapa seguinte sem purificação adicional. ^XH RMN (400 MHz, CLOROFÓRMIOd) δ ppm 3,04 (s, 3 H) 4,49 (s, 2 H) 5,16 (s, 2 H) 7,48 (d, J=l,76 Hz, 2 H) 7,50 (d, J=l,76 Hz, 2 H) 7,63 (t, J=l,76 Hz, 1 H) 7,70 (t, J=l,76 Hz, 1 H).

Etapa 2. Preparação de 2-(3,5-dibromofenil)acetonitrila

Br

199. Uma suspensão de l,3-dibromo-5-(clorometil)benzeno (12,11 g, 42,58 mmoles, 1 eq), KCN (13,86 g, 212,92 mmoles, 9,12 mL, 5 eq) e 1,4,7,10,13,16-hexaoxaciclooctadecano (1,13 g, 4,26 mmoles, 0,1 eq) em CH3CN (150 mL) foi agitada durante 12 h a 28°C. Foi observada uma suspensão marrom. A TLC (éter de petróleo: acetato de etila=7:l, uv & corada por I2) mostrou que o material de partida foi consumido e um novo ponto principal foi formado. A mistura de reação foi concentrada sob pressão reduzida. O resíduo resultante foi coletado em água (100 mL) e extraído com acetato de etila (3 χ 80 mL), a camada orgânica foi seca sobre sulfato de sódio concentrada sob pressão

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131/197 reduzida para fornecer o produto bruto na forma de um resíduo marrom. O resíduo foi purificado por cromatografia flash em silica gel (ISCO®; 80 g SepaFlash® Silica Flash Column, Eluente de 0~9% de gradiente de acetato de etila/Êter de petróleo @30 mL/min) para fornecer o produto desejado na forma de um sólido amarelo claro (7,58 g, 27,57 mmoles, 65% de rendimento). ^XH RMN (400 MHz, CLOROFÓRMIO-d) δ ppm 3,73 (d, J=0,66 Hz, 2 H) 7,36 - 7,55 (m, 2 H) 7,67 (t, J=l,65 Hz, 1 H).

Etapa 3. Preparação de l-(3,5-dibromofenil)ciclopropanocarbonitrila

Br

200. A uma solução agitada de cloreto de benzil(trietil)amônio (303,21 mg, 1,33 mmol, 0,05 eq) em NaOH (43 mL, 50%) foi adicionado em uma solução de 2-(3,5-dibromofenil)acetonitrila (7,32 g, 26,62 mmoles, 1 eq), 1,2-dibromoetano (15 g, 79,87 mmoles, 6,03 mL, 3 eq) a 0°C. A mistura resultante foi agitada durante 12 h a 26°C. A TLC (éter de petróleo: acetato de etila=15:l) mostrou que o material de partida foi consumido e um novo ponto principal foi formado em cima. A mistura de reação foi vertida em água gelada (60 mL) e extraída com acetato de etila (3 x 80 mL). A camada orgânica foi seca sobre sulfato de sódio e concentrada sob pressão reduzida para fornecer um produto bruto marrom. O resíduo foi purificado por cromatografia flash em silica gel (ISCO®; 80 g SepaFlash® Silica Flash Column, Eluente de 0~5% de gradiente de acetato de Etila/Êter de petróleo @ 40 mL/min) para fornecer o produto desejado na forma de um sólido amarelo (7,1 g, 23,59 mmoles, 88,60% de rendimento). ^XH RMN (400 MHz, CLOROFÓRMIO-d) δ ppm 1,39 - 1,47 (m, 2 H) 1,75 - 1,83 (m, 2 H) 7,37 (d, J=l,76 Hz, 2 H) 7,61 (t, J=l,76 Hz, 1 H).

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Etapa 4. Preparação de l-(3,5-dibromofenil)ciclo-propanocarbaldeído

201. A uma solução agitada de l-(3,5-dibromofenil)ciclopropanocarbonitrila (8,3 g, 27,58 mmoles, 1 eq) em DCM (305 mL) foi adicionado DIBAL-H (1 M, 38,61 mL, 1,4 eq) a -78 °C. A mistura resultante foi agitada durante 2 h a -78 °C. TLC (Éter de petróleo: acetato de etila=4:0,2 mL, corada por KMnCk & UV) mostrou que um novo ponto foi formado abaixo do material de partida e o material de partida foi consumido. A mistura de reação foi extinguida com HC1 a 2 N (100 mL) e agitada durante 6 min, diluída com H2O (60 mL), então extraída com acetato de etila (3 ^x 150 mL). A camada orgânica foi lavada com solução saturada de NaHCCh (150 mL), seguida por salmoura (150 mL), seca sobre sulfato de sódio e concentrada sob pressão reduzida para fornecer 8,9 g do produto bruto na forma de um sólido amarelo. O produto bruto foi utilizado diretamente na etapa seguinte sem purificação adicional. ^XH RMN (400 MHz, CLOROFÓRMIOd) δ ppm 1,37 - 1,47 (m, 2 H) 1,55 - 1,69 (m, 2 H) 7,40 (d, J=l,76 Hz, 2 H) 7,63 (t, J=l,76 Hz, 1 H) 9,10 (s, 1 H).

Etapa 5. Preparação de l,3-dibromo-5-(l-(difluormetil) ciclopropil) benzeno

202. A uma solução agitada de l-(3,5-dibromo-fenil)

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133/197 ciclopropanocarbaldeído (8,9 g, 29,28 mmoles, 1 eq) em DCM (126 mL), DAST (18,88 g, 117,11 mmoles, 15,5 mL, 4 eq) foi adicionado lentamente a 0 °C. A mistura resultante foi agitada durante 12 h a 26°C. A TLC (Éter de petróleo: acetato de etila=20:l, UV & corada por I2) mostrou que o material de partida foi consumido e um novo ponto principal com baixa polaridade se formou acima. A mistura de reação foi lavada com água (80 mL*2). A camada orgânica foi seca sobre sulfato de sódio e concentrada sob pressão reduzida para fornecer um resíduo marrom. O resíduo foi purificado por cromatografia flash em silica gel (ISCO®; 20 g SepaFlash® Silica Flash Column, Eluente de 0~5% de gradiente de acetato de Etila/Êter de petróleo @ 30 mL/min) para fornecer o produto desejado na forma de um sólido esbranquiçado (5,92 g, 18,15 mmoles, 61,99% de rendimento). ^XHRMN (400 MHz, CLOROFÓRMIO-d) δ ppm 0,93 - 1,04 (m, 2 H) 1,13 - 1,22 (m, 2 H) 5,40 - 5,75 (m, 1 H) 7,49 (d, J=l,51 Hz, 2 H) 7,61 (t, J=l,63 Hz, 1 H); ^19FRMN (400 MHz, CLOROFÓRMIO-d) δ ppm -116,73.

Etapa 6. 3-bromo-5-(l-(difluormetil)ciclopropil)benzaldeído ck,h

203. A uma solução agitada de l,3-dibromo-5-[l-(difluormetil) ciclopropil]benzeno (5,52 g, 16,93 mmoles, 1 eq) em THF (82 mL) foi adicionado n-BuLi (2,5 M, 6,77 mL, 1,0 eq) em gotas a -78 °C. A mistura resultante foi agitada durante 10 min a -78 °C e extinguida com DMF (1,86 g, 25,4 mmoles, 1,95 mL, 1,5 eq) a -78 °C e agitada durante 1 h -78°C. A TLC (Éter de petróleo: acetato de etila=10:l, uv e KMnCH) mostrou que o material de partida foi consumido e um novo ponto principal foi formado abaixo. NH4CI sat. (15 mL) foi adicionado à

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134/197 mistura de reação e diluído com H2O (70 mL), então extraído com acetato de etila (3 χ 60 mL). A camada orgânica foi seca sobre sulfato de sódio e concentrada sob pressão reduzida para fornecer um resíduo amarelo claro. O resíduo foi purificado por cromatografia flash em silica gel (ISCO®; 12 g SepaFlash® Silica Flash Column, Eluente de 0-10% de gradiente de acetato de Etila/Êter de petróleo @ 30 mL/min) para fornecer o produto desejado na forma de um sólido esbranquiçado (1,5 g, 5,45 mmoles, 32,20% de rendimento). ^XH RMN (400 MHz, CLOROFÓRMIO-d) δ ppm 1,01-1,08 (m, 2 H) 1,21 - 1,28 (m, 2 H) 5,43 - 5,74 (m, 1 H) 7,83 (dt, J=ll,30, 1,63 Hz, 2 H) 7,94 - 7,98 (m, 1 H) 9,96 (s, 1 H).

Exemplo 20

Preparação de ácido 3-(3-ciano-5-(l-(difluormetil)ciclopropil)fenil)-4(l-metil-5-(2-(5,6,7,8-tetrahidro-1,8-naftiridin-2-il)etóxi)-lH-pirazol3-il)butanoico

Esquema 9

EseiBjtfe 19 Ei-asspk. 20

204. Uma mistura de ácido 3-[3-bromo-5-[l-(difluormetil) ciclo propil]fenil]-4-[l-metil-5-[2-(5,6,7,8-tetrahidro-l,8-naftiridin-2-il) etóxi] pirazol-3-il]butanoico (100 mg, 155,11 pmoles, 1 eq, FA) e dicianozinco (54,6 mg, 465,3 pmoles, 29,5 pL, 3 eq) em DMF (6 mL) em um frasco de micro-ondas de 25 mL foi evacuada e preenchida novamente com N2 (3x). O trifenilfosfano de paládio (17,9 mg, 15,5 pmoles, 0,1 eq) foi

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135/197 adicionado. O frasco de reação foi selado e a mistura de reação foi desgaseificada de novo e preenchida novamente com N2 (3x) e então agitada a 120°C durante 90 min sob irradiação de micro-ondas. A LCMS mostrou que o brometo de partida foi consumido e o produto desejado era o pico principal. A HPLC mostrou que 66% do produto desejado foram formados. O filtrado foi purificado por Pre-HPLC (coluna: Boston Green ODS 150*30 5μ; fase móvel: [água (0,l%TFA)ACN]; B%: 20%-50%, 7 min). Após a liofilização, 85 mg do produto desejado foram obtidos na forma de um sólido branco (85 mg, 129,28 pmoles, 83% de rendimento, 98,8% de pureza, TFA). A análise de LCMS do sólido mostra a massa do produto desejado: m/z 536 (M+H); Calculada para C29H31F2N5O3: 535,24. ^XH RMN (400 MHz, CD3OD) δ ppm 0,92 - 1,01 (m, 2 H) 1,13 - 1,20 (m, 2 H) 1,90 - 2,00 (m, 2 H) 2,62 2,94 (m, 6 H) 3,11 - 3,19 (m, 2 H) 3,42 - 3,53 (m, 6 H) 4,29 (td, J=6,06, 2,20 Hz, 2 H) 5,39 (s, 1 H) 5,45 - 5,78 (m, 1 H) 6,68 (d, J=7,50 Hz, 1 H) 7,48 - 7,53 (m, 2 H) 7,54 - 7,58 (m, 1 H) 7,60 (d, J=7,28 Hz, 1 H); ¹⁹FRMN (400 MHz, CD3OD) δ ppm -77,3 , -117,4.

Exemplo 21

Preparação de ácido 3-(3-( l-(difluormetil)ciclopropil)-5-fluorfenil)-4(l-metil-5-(2-(5,6,7,8-tetrahidro-1,8-naftiridin-2-il)etóxi)-lH-pirazol3-il) butanoico

205. O Exemplo 21 foi preparado de maneira análoga ao Exemplo 19, utilizando (3-bromo-5-fluorfenil)metanol no lugar do 3,5

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136/197 dibromofenil)metanol no Esquema de reação 8. O produto bruto foi purificado por prep-HPLC (Condição:coluna: Boston pH-lex 150*25 10qm;fase móvel: [água(0,1%TFA)-ACN]; B%: 31%-61%, 8 min) para fornecer o composto desejado (118,6 mg, rendimento 45%, pureza 97,2%) na forma de um sólido branco. A análise de LC-MS do sólido mostrou a massa do produto desejado: m/z 529,1 (M+H); calculada para C28H31F3N4O3: 528,57. ^XH RMN (400MHz, CD3OD) : δ ppm = 7,60 (d, J=7,5 Hz, 1H), 7,01 (s, 1H), 6,96 - 6,87 (m, 2H), 6,67 (d, J=7,3 Hz, 1H), 5,78 - 5,45 (m, 1H), 5,39 (s, 1H), 3,52 - 3,47 (m, 2H), 3,46 - 3,40 (m, 3H), 3,14 (t, J=5,8 Hz, 2H), 2,89 - 2,57 (m, 7H), 1,98 - 1,90 (m, 2H), 1,14 - 1,07 (m, 2H), 0,92 (br d, J=2,2 Hz, 2H). 19F RMN (376MHz, CD3OD) : δ ppm = -77,39 (br s, IF), -115,84 (t, J=9,5 Hz, 1F), -117,83 -117,96 (m, IF), -117,97 - -118,09 (m, 1F).

Exemplo 22

Preparação de ácido 3-(3-cloro-5-(l-(difluormetil)ciclopropil)fenil)-4(l-metil-5-(2-(5,6,7,8-tetrahidro-1,8-naftiridin-2-il)etóxi)-lH-pirazol3-il)butanoico

206. O Exemplo 22 foi preparado de maneira análoga ao Exemplo 19, utilizando (3-bromo-5-clorofenil)metanol no lugar de 3,5dibromofenil)metanol no Esquema de reação 8. O produto bruto foi purificado por prep-HPLC Condição: coluna: Boston Green ODS 150*30 5q;fase móvel: [água (0,l%TEA)-ACN];B%: 25%-55%, 8 min) para fornecer o composto do título (88 mg, 133 qmoles, 44% de rendimento,

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100% de pureza, TFA) que foi obtido na forma de um sólido branco. A análise de LC-MS do líquido mostra a massa do produto desejado: m/z 545 (M+H) ^XH RMN (400MHz, CD₃OD) : δ ppm = 7,57 (d, J = 7,3 Hz,

1H), 7,20 (t, J = 1,7 Hz, 1H), 7,16 (t, J = 1,7 Hz, 1H), 7,10 (s, 1H), 6,64 (d, J = 7,3 Hz, 1H), 5,74 - 5,55 (m, 1H), 5,43 (s, 1H), 4,35 - 4,23 (m,

2H), 3,51 - 3,46 (m, 2H), 3,42 - 3,33 (m, 1H), 3,29 (td, J = 1,6, 3,3 Hz,

3H), 3,17 - 3,08 (m, 2H), 2,91 - 2,60 (m, 6H), 1,93 (td, J = 6,1, 11,9 Hz, 2H), 1,14 - 1,06 (m, 2H), 0,95 - 0,85 (m, 2H).

Exemplo 23

Preparação de ácido 3-(3-( l-(difluormetil)ciclopropil)-5(trifluormetil)fenil)-4-( l-metil-5-(2-(5,6,7,8-tetrahidro- 1,8-naftiridin2-il)etóxi)-lH-pirazol-3-il)butanoico

207. O Exemplo 23 foi preparado de maneira análoga ao Exemplo 19, utilizando (3-bromo-5-(trifluormetil)fenil)metanol no lugar de 3,5-dibromofenil)metanol no Esquema de reação 8. O produto bruto foi purificado por prep-HPLC (Condição de TFA: coluna: Boston Green ODS 150*30 5μ; fase móvel: [água (0,1%TFA)-ACN]; B%: 20%-50%, 8 min). O composto do título (55 mg, 95 pmoles, 60% de rendimento, 100% de pureza) foi obtido na forma de um sólido branco. ^XH RMN, ¹⁹F RMN, LC-MS e HMBC eram coerentes com a estrutura do composto do título. Ή RMN (400MHz, CD3OD) δ ppm 7,60 (d, J = 7,5 Hz, 1H), 7,49 (s, 1H), 7,46 (s, 1H), 7,42 (s, 1H), 6,67 (d, J = 7,3 Hz, 1H), 5,80 - 5,45 (m, 1H), 5,42 (s, 1H), 4,34 - 4,24 (m, 2H), 3,53 - 3,47 (m, 3H), 3,45 (s,

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3H), 3,14 (t, J = 6,1 Hz, 2H), 2,94 - 2,64 (m, 6H), 1,95 (quin, J = 6,0 Hz, 2H), 1,20 - 1,14 (m, 2H), 1,00 -0,93 (m, 2H); ¹⁹F RMN (376 MHz, CD₃OD) -63,9, -77,4, -117,4, -117,6.

Exemplo 24

Preparação de ácido 3-(3-fluor-5-(l,l>14rifluor-2-metilpropan-2il)fenil)-4-(l-metil-5-(2-(5,6,7,8-tetrahidro-l,8-naftiridin-2-il)etóxi)lH-pirazol-3-il)butanoico

208. O Exemplo 24 foi preparado de maneira análoga ao Exemplo 1, utilizando 3-fluor-5-(l, 1, l-trifluor-2-metilpropan-2il)benzaldeído (sintetizado de acordo com o Esquema 10) como o benzaldeído requerido no Esquema de reação 3. O produto bruto foi purificado por prep-HPLC (coluna: Boston Green ODS 150*30 5μ; fase móvel: [água(0,l%TEA)-ACN]; B%: 30%-56%,7 min). O efluente da HPLC foi liofilizado para fornecer o produto desejado na forma de um sólido branco (350 mg, 528 μιηοΐεβ, 65% de rendimento, 100% de pureza, TEA). A análise de LC-MS do sólido mostrou a massa do produto desejado: m/z 549 (M+H); calculada para C28H32F4N4O3: 548,24. ^XH RMN (400 MHz, CD3OD) ppm 1,52 (s, 6 H) 1,95 (dd, J=6,50, 5,18 Hz, 2 H) 2,59 - 2,93 (m, 6 H) 3,15 (t, J=5,95 Hz, 2 H) 3,41 - 3,54 (m, 6 H) 4,30 (td, J=6,01, 1,87 Hz, 2 H) 5,45 (s, 1 H) 6,67 (d, J=7,50 Hz, 1 H) 6,98 (dt, J=9,48, 1,76 Hz, 1 H) 7,04 - 7,09 (m, 1 H) 7,04 - 7,13 (m, 1 H) 7,59 (d,J=7,28 Hz, 1 H); ¹⁹F RMN (400 MHz, CD3OD) ppm -77,3, -115,1.

Esquema 10

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Etapa 1. Preparação de l-(3-bromo-5-fluorfenil)etanona

Br

209. l,3-Dibromo-5-fluor-benzeno (20 g, 78,77 mmoles, 1 eq) foi dissolvido em i-PraO (200 mL) em um frasco seco sob nitrogênio. A mistura de reação foi resfriada a -78 °C e agitada sob atmosfera de nitrogênio. n-BuLi (2,5 M, 31,5 mL, 1 eq) foi adicionado em gotas à solução anterior e a mistura de reação foi agitada a -78 °C durante 30 min. Após a adição completa de n-BuLi, N-metóxi-N-metil-acetamida (9,75 g, 94,5 mmoles, 10,05 mL, 1,2 eq) foi gotejada na mistura de reação anterior, enquanto que a mistura de reação era mantida abaixo de -78 °C. Após a adição, a mistura de reação foi aquecida lentamente a 30 °C durante 30 min. A mistura de reação foi vertida na água (150 mL) e a mistura de reação foi agitada durante 15 min. A fase orgânica foi separada e a fase aquosa foi extraída com acetato de etila (150 mL), fase orgânica combinada, seca sobre NaaSCU anidro, filtrada e evaporada a vácuo para fornecer o resíduo (16 g bruto). O resíduo foi purificado por cromatografia flash em silica gel (ISCO®; 120 g CombiFlash® Silica Flash Column, Eluente de 0-10% de gradiente de acetato de Etila/Êter de petróleo @ 85 mL/min). O composto foi obtido na forma de um sólido esbranquiçado (11,3 g, rendimento 66%). ^XH RMN (400 MHz, CDCH) δ

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140/197 ppm 7,91 - 7,84 (m, 1H), 7,63 - 7,54 (m, 1H), 7,45 (td, J=2,0, 7,8 Hz, 1H), 2,63 - 2,55 (m, 3H).

Etapa 2. Preparação de 2-(3-bromo-5-fluorfenil)-l,l,l-trifluorpropan-2-ol

OH

CF₃

OH

CF₃

210. A uma solução agitada de l-(3-bromo-5-fluor-fenil)etanona (11,2 g, 51,60 mmoles, 1 eq) e TMSCF3 (14,68 g, 103,2 mmoles, 2 eq) em DMF (100 mL) foi adicionado CS2CO3 (33,63 g, 103,2 mmoles, 2 eq) em porções a 0°C resultando em uma suspensão marrom. A mistura de reação foi então agitada a 30°C durante 4 h. A mistura de reação foi extinguida com água (100 mL) e separada e extraída com acetato de etila (200 mL*2), a camada orgânica foi lavada com água (200 mL*2) e salmoura (200 mL). A mistura de reação foi seca sobre Na₂SO₄ anidro, filtrada e evaporada a vácuo para fornecer o resíduo. O resíduo foi purificado por cromatografia flash em silica gel (ISCO®; 220 g CombiFlash® Silica Flash Column, Eluente de 0-30% de gradiente de acetato de Etila/Éter de petróleo @ 100mL/min). O composto foi obtido na forma de um líquido preto amarronzado (18,4 g, bruto). ^XH RMN (400 MHz, CDCI3) δ ppm 7,37 (s, 1H), 7,16 - 7,03 (m, 2H), 1,60 (s, 3H).

Etapa 3. Preparação de metanossulfonato de 2-(3-bromo-5fluorfenil)-1,14 -trifluorpropan-2-ila

OMs

CF₃

CF·

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211. Uma mistura de 2-(3-bromo-5-fluor-fenil)-l,l,l-trifluorpropan-2-ol (18 g, 62,71 mmoles, 1 eq) e TEA (19,04 g, 188,1 mmoles, 26,2 mL, 3 eq) foi dissolvida em DCM (180 mL) em um frasco seco sob nitrogênio. A mistura de reação foi resfriada a 0 °C e agitada sob a atmosfera de nitrogênio. MsCl (8,9 g, 77,7 mmoles, 6 mL, 1,24 eq) foi adicionado em gotas à solução anterior e a mistura de reação foi agitada a 30 °C durante 3 h. A mistura de reação foi extinguida através da adição de H2O (100 mL) e então separada e extraída com DCM (250 mL). Camadas orgânicas combinadas e secas sobre Na2SO₄, filtradas e concentradas sob pressão reduzida para fornecer um resíduo (15,6 g). O resíduo foi purificado por cromatografia flash em silica gel (ISCO®; 120 g CombiFlash® Silica Flash Column, Eluente de 0-10% de gradiente de acetato de Etila/Êter de petróleo @ 85 mL/min). O composto foi obtido na forma de um sólido amarelo (11,6 g, rendimento 50,66%), 1H RMN (400 MHz, CDCI3) δ ppm 7,48 (s, 1H), 7,38 - 7,32 (m, 1H), 7,30 - 7,22 (m, 1H), 3,22 - 3,17 (m, 3H), 2,28 (d, J=l,l Hz, 3H).

Etapa 4. Preparação de l-bromo-3-fluor-5-( 1,1,1 -trifluor-2metilpropan-2-il)benzeno

CF

212. A uma solução agitada de [l-(3-bromo-5-fluor-fenil)-2,2,2trifluor-l-metil-etil] metanossulfonato (1000 mg, 2,74 mmoles, 1 eq) em DCM seco (10 mL) foi adicionado em gotas trimetilalumínio (1 M, 5,48 mL, 2 eq) a -78°C sob N2. A mistura de reação foi aquecida lentamente à temperatura ambiente (26°C) durante lhe agitada a esta temperatura durante 1 h. A TLC (éter de petróleo) mostrou o material de partida foi consumido e dois novos pontos foram formados acima. A mistura foi vertida em NH₄C1 sat. (30 mL) lentamente, então agitada durante 15

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142/197 min. O sedimento não dissolvido foi extraído por filtração através de um bloco de celite. O filtrado e as lavagens foram lavados com salmoura (15 mL), secos sobre sulfato de sódio e concentrados a vácuo para fornecer o produto bruto. O resíduo foi purificado por cromatografia flash em silica gel (ISCO®; 12 g SepaFlash® Silica Flash Column, Eluente de 100% de gradiente de Éter de petróleo @ 32 mL/min) para fornecer o produto desejado na forma de um óleo incolor (649 mg, 2,28 mmoles, 83% de rendimento). ^XH RMN (400 MHz, CDCH) δ ppm 1,56 (s, 6 H) 7,13 - 7,20 (m, 1 H) 7,23 (dt, J=7,83, 1,93 Hz, 1 H) 7,42 (s, 1 H); RMN (400 MHz, CLOROFÓRMIO-d)) ppm -76,1, -110,5.

Etapa 5. Preparação de 3-fluor-5-(l,l>l~'t¹'i^uor-2-metilpropan-2-il) benzaldeído

213. A uma solução agitada de l-bromo-3-fluor-5-(2,2,2-trifluorl,l-dimetil-etil)benzeno (3900 mg, 13,68 mmoles, 1 eq) em éter diisopropílico (45 mL) foi adicionado n-BuLi (2,5 M, 10,94 mL, 2 eq) em gotas a -78 °C resultando em uma suspensão amarela. A mistura resultante foi agitada durante 30 min a -78 °C e extinguida com DMF (2 g, 27,36 mmoles, 2,11 mL, 2 eq) a -78 °C resultando em uma solução translúcida amarela, então aquecida lentamente à temperatura ambiente (26°C) durante 30 min. A TLC (Éter de petróleo, corada por KMnO₄) mostrou que o material de partida foi consumido e um novo ponto importante foi encontrado abaixo. NH4CI (50 mL) sat. foi adicionado à mistura de reação e diluído com H2O (15 mL), agitado durante 15 min, então extraído com acetato de etila (3 χ 40 mL). A camada orgânica foi seca sobre sulfato de sódio e concentrada sob

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143/197 pressão reduzida para fornecer um resíduo amarelo claro. O resíduo foi purificado por cromatografia flash em silica gel (ISCO®; 24 g SepaFlash® Silica Flash Column, Eluente de 0~5% de gradiente de acetato de Etila/Êter de petróleo @ 30 mL/min) para fornecer o produto desejado na forma de um óleo amarelo claro (1,0 g, 4,27 mmoles, 31% de rendimento). ^XH RMN (400 MHz, CDC1₃) ppm 1,63 (s, 7 H) 7,46 - 7,51 (m, 1 H) 7,51 - 7,57 (m, 1 H) 7,82 (s, 1 H) 10,01 (d, J=l,76 Hz, 1 H); ^X9F RMN (400 MHz, CDCh) ppm -76,1, -110,8.

Exemplo 25

Preparação de ácido 4-[l-metil-5-[2-(5,6,7,8-tetrahidro-l,8naftiridin-2-il)etóxi]pirazol-3-il]-3-[3-(2,2,2-trifluor-1,1-dimetiletil)5-(trifluormetil)fenil]butanoico

214. O Exemplo 25 foi preparado de maneira análoga ao Exemplo 24, utilizando l,3-dibromo-5-(trifluormetil)benzeno no lugar de l,3-dibromo-5-fluor-benzeno no Esquema de reação 10. O produto bruto foi purificado por prep-HPLC (coluna: Xbridge 150*30mm*10gm; fase móvel: [água (0,05% de hidróxido de amônia v/v)-ACN];B%: 11%51%, 12 min). O composto do título (4,9 mg, 8,19 gmoles, 3,42% de rendimento, 100% de pureza) foi obtido na forma de um sólido branco. ^XH RMN (400 MHz, DMSO-cfe) δ ppm 1,55 (d, J=2,5 Hz, 6 H), 1,70 - 1,78 (m, 2 H), 2,61 - 2,66 (m, 2 H), 2,69 - 2,79 (m, 2 H), 2,82 (t, J=6,5 Hz, 2 H), 3,24 (br s, 2 H), 3,35 (s, 3 H), 3,44 - 3,55 (m, 1 H), 4,19 (t, J=6,8 Hz, 2 H), 5,37 (s, 1 H), 6,25 - 6,36 (m, 2 H), 7,05 (d, J=7,3 Hz, 1 H), 7,59 (br

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144/197 d, J=5,0 Hz, 2 H), 7,66 (s, 1 Η). A análise de LC-MS do sólido mostra a massa do produto desejado: m/z 599 (M+H).

Exemplo 26

Preparação de ácido 3-[3-bromo-5-(2,2,2-trifluor-l,l-dimetiletil)fenil]-4-[l-metil-5-[2-(5,6,7,8-tetrahidro- l,8-naftiridin-2il)etóxi]pirazol-3-il]butanoico

Br n-n

H N. _N

215. O Exemplo 26 foi preparado de maneira análoga ao Exemplo 24, utilizando 1,3,5-tribromobenzeno no lugar de 1,3-dibromo5-fluor-benzeno no Esquema de reação 10. O produto bruto foi purificado por prep-HPLC (coluna: Boston Green ODS 150*30 5μ; fase móvel: [água(0,l%TFA)-ACN]; B%: 25%-55%, 8 min). O composto do título (20 mg, 33 qmoles, 52% de rendimento) foi obtido na forma de um sólido branco. A análise de LC-MS do líquido mostra a massa do produto desejado: m/z 611(M+H). ^XH RMN (400MHz, CD₃OD) 7,59 (d, <7=7,5 Hz, 1H), 7,46 (s, 1H), 7,37 - 7,36 (m, 1H), 7,25 (s, 1H), 6,67 (d, J=7,3 Hz, 1H), 5,41 (s, 1H), 4,32 - 4,26 (m, 2H), 3,51 - 3,48 (m, 2H), 3,44 (s, 3H), 3,42 - 3,37 (m, 1H), 3,14 (t, J=6,0 Hz, 2H), 2,86 - 2,62 (m, 6H), 1,98 - 1,92 (m, 2H), 1,50 (s, 6H); ¹⁹F RMN (376 MHz, CD3OD) 77,32, -77,36.

Exemplo 27

Preparação de ácido 3-(3-cloro-5-(l,l,l-trifluor-2-metilpropan-2il)fenil)-4-(l-metil-5-(2-(5,6,7,8-tetrahidro-l,8-naftiridin-2-il)etóxi)lH-pirazol-3-il)butanoico

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216. O Exemplo 27 foi preparado de maneira análoga ao Exemplo 24, utilizando l,3-dibromo-5-cloro-benzeno no lugar de 1,3dibromo-5-fluor-benzeno no Esquema de reação 10.0 produto bruto foi purificado por prep-HPLC (Condição de TEA: coluna: Boston Green CDS 150*30 5q;fase móvel: [água (O,1%TFA)-ACN];B%: 15%-45%, 8 min). O composto do título (128 mg, 226 qmoles, 80% de rendimento, 100% de pureza) foi obtido na forma de um sólido branco. ^XH RMN (400MHz, CD₃OD) 7,60 (d, <7=7,3 Hz, 1H), 7,33 (s, 1H), 7,26 - 7,19 (m, 2H), 6,68 (d, <7=7,3 Hz, 1H), 5,44 (s, 1H), 4,34 - 4,26 (m, 2H), 3,52 - 3,48 (m, 2H), 3,46 (s, 3H), 3,45 - 3,38 (m, 1H), 3,15 (t, J=5,9 Hz, 2H), 2,92 - 2,85 (m, 1H), 2,83 (t, <7=6,3 Hz, 2H), 2,78 - 2,70 (m, 2H), 2,69 - 2,60 (m, 1H), 1,99 - 1,91 (m, 2H), 1,52 (s, 6H); ^X9F RMN (376 MHz, CD3OD) -77,36. LCMS (massa: m/z 565,1 (M+H)).

Exemplo 28

Preparação de trifluoracetato de ácido 3-[3-ciano-5-(2,2,2-trifluor1, l-dimetil-etil)fenil]-4-[l-metil-5-[2-(5,6,7,8-tetrahidro-1,8naftiridin-2-il)etóxi]pirazol-3-il]butanoico

Esquema 11

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Ef 1

E.wfapkh 26 _x c&_:;.

Etapa 2

Ε.ΐΈΏΐρΙϋ 2S

Etapa 1. Preparação de 3-[3-ciano-5-(2,2,2-trifluor-l,l-dimetiletil)fenil]-4-[l-metil-5-[2-(5,6,7,8-tetrahidro- l,8-naftiridin-2il)etóxi]pirazol-3-il]butanoato de etila

217. Uma mistura de 3-[3-bromo-5-(2,2,2-trifluor-l,l-dimetiletil)fenil]-4-[l-metil-5-[2-(5,6,7,8-tetrahidro-l,8-naftiridin-2il)etóxi]pirazol-3-il]butanoato de etila (50 mg, 78 gmoles, 1 eq) e Zn(CN)2 (27,6 mg, 235 umoles, 14,93 gL, 3 eq) em DMF (3 mL) em um frasco de micro-ondas de 25 mL foi evacuada e preenchida novamente com N2 três vezes. Pd(PPh3)4 (9,06 mg, 7,8 gmoles, 0,1 eq) foi adicionado. O frasco de reação foi selado e a mistura de reação foi desgaseificada de novo e preenchida novamente com N2 (3 vezes) e então agitada a 120 °C durante 1,5 h sob irradiação de micro-ondas. A LC-MS mostrou que a maior parte do 3-[3-bromo-5-(2,2,2-trifluor-l,l-dimetil-etil)fenil]-4-[lmetil-5-[2-(5,6,7,8-tetrahidro-l,8-naftiridin-2-il)etóxi]pirazol-3-il]buta

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147/197 noato de etila foi consumida e a massa desejada (m/z 584,2 (M+H)) foi detectada. A mistura de reação foi concentrada sob pressão reduzida para fornecer um resíduo. O resíduo foi purificado por prep-HPLC (coluna: Fenomenex Gemini C18 250*50mm*10 μιη; fase móvel: [água (0,05% HC1)-ACN]; B%: 30%-60%,lOmin). O composto do título (40 mg, 69 pmoles, 87% de rendimento) foi obtido na forma de um sólido branco. A análise de LC-MS do líquido mostra a massa do produto desejado: m/z 584,2 (M+H).

Etapa 2. Preparação de trifluoracetato de ácido 3-[3-ciano-5-(2,2,2trifluor-1, l-dimetil-etil)fenil]-4-[l-metil-5-[2-(5,6,7,8-tetrahidro-l,8naftiridin-2-il)etóxi]pirazol-3-il]butanoico

218. A uma solução de 3-[3-ciano-5-(2,2,2-trifluor-l,l-dimetiletil)fenil]-4-[l-metil-5-[2-(5,6,7,8-tetrahidro-l,8-naftiridin-2il)etóxi]pirazol-3-il]butanoato de etila (40 mg, 68,54 umoles, 1 eq) em THF (2 mL) foi adicionado LiOH-HaO (1 M, 2,06 mL, 30 eq). A mistura foi agitada a 60 °C durante 16 h. A LC-MS mostrou que o 3-[3-ciano-5(2,2,2-trifluor-l,l-dimetil-etil)fenil]-4-[l-metil-5-[2-(5,6,7,8-tetrahidrol,8-naftiridin-2-il)etóxi]pirazol-3-il]butanoato de etila foi consumido completamente e a massa desejada (m/z 556,1 (M+H)) foi detectada. A mistura de reação foi concentrada sob pressão reduzida para remover o THF. O resíduo foi diluído com AcOH até pH (~5) e extraído com EtOAc 50 mL (25 mL * 2). As camadas orgânicas combinadas foram concentradas sob pressão reduzida para fornecer um resíduo. O resíduo foi purificado por prep-HPLC (coluna: Boston Green ODS 150*30 5μ;

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148/197 fase móvel: [água(O,l%TFA)-ACN]; B%: 30%-56,25%, 7 min). O composto do título (8,8 mg, 15,5 gmoles, 23% de rendimento, 98% de pureza) foi obtido na forma de um sólido branco. A análise de LC-MS do líquido mostra a massa do produto desejado: m/z 556,1 (M+H). ^XH RMN (400MHz, CD₃OD) 7,71 (s, 1H), 7,64 - 7,60 (m, 3H), 6,71 (d, J = 7,5 Hz, 1H), 5,42 (s, 1H), 4,33 -4,26 (m, 2H), 3,54 (br s, 1H), 3,52 (br d, J= 6,0 Hz,2H), 3,45 (s, 3H), 3,16 (t, J = 5,9 Hz, 2H), 2,95 - 2,71 (m, 1H), 2,95 2,71 (m, 5H), 2,00 - 1,94 (m, 2H), 1,57 (s, 6H). ¹⁹F RMN (376MHz, CD3OD) -77,37 (s, IF), -77,41 (s, 1F).

Exemplo 29

Preparação de ácido 3-(3-cloro-5-(4-(metoximetil)tetrahidro-2Hpiran-4-il)fenil)-4-( l-metil-5-(2-(5,6,7,8-tetrahidro- l,8-naftiridin-2iljetóxi)-lH-pirazol-3-il)butanoico

219. O Exemplo 29 foi preparado de maneira análoga ao Exemplo 1, utilizando 3-cloro-5-(4-(metoximetil)tetrahidro-2H-piran-4il)benzaldeído (sintetizado de acordo com o Esquema 12) como o benzaldeído requerido no Esquema de reação 3. O produto bruto foi purificado por prep-HPLC (coluna: Boston Green ODS 150*30 5μ; fase móvel: [água(0,l%TFA)-ACN]; B%: 15%-45%, 8 min). O composto do título foi obtido na forma de um sólido amarelo claro (112,5 mg, rendimento 83%). A análise de LC-MS do composto mostrou a massa do produto desejado: m/z 583 (M+1); ^XH RMN (400 MHz, CD3OD) δ = 7,61 (d, J = 7,5 Hz, 1H), 7,18 (t, J = 1,8 Hz, 1H), 7,13 (s, 1H), 7,05 (s, 1H),

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6,70 (d, J = 7,5 Hz, 1H), 5,43 (s, 1H), 4,30 (t, J= 6,1 Hz, 2H), 3,75 3,62 (m, 2H), 3,53 - 3,47 (m, 2H), 3,47 - 3,32 (m, 6H), 3,29 - 3,12 (m, 5H), 2,92 - 2,80 (m, 3H), 2,77 - 2,60 (m, 3H), 2,07 - 1,84 (m, 6H).

Esquema 12

Etapa 1. Preparação de 2-(3-bromo-5-clorofenil)-l,3-dioxolano

220. Uma mistura de 3-bromo-5-cloro-benzaldeído (10 g, 45,57 mmoles, 1 eq) e etileno glicol (8,48 g, 136,70 mmoles, 7,64 mL, 3 eq), PTSA (156,93 mg, 911,32 umoles, 0,02 eq) foram dissolvidos em tolueno anidro (100 mL) em um frasco seco sob nitrogênio. A mistura de reação foi submetida ao refluxo a 140°C durante 2 h. Uma solução saturada de NaHCOs (100 mL) foi adicionada. A camada de tolueno foi separada, lavada com solução de NaCl (150 mL) seca sobre Na2SO4 anidro, filtrada e evaporada a vácuo. O composto do título foi obtido na forma de um líquido amarelo claro (12,8 g, bruto). ^XH RMN (400MHz, CD3OD) δ = 7,59 - 7,48 (m, 2H), 7,42 (d, J=l,3 Hz, 1H), 5,77 (s, 1H), 4,19 - 3,97 (m, 4H).

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Etapa 2. Preparação de 4-(3-cloro-5-(l,3-dioxolan-2il)fenil)tetrahidro-2H-piran-4-carboxilato de metila

221. A uma mistura de N-ciclohexilciclohexanamina (6,26 g, 34,53 mmoles, 6,88 mL, 1,3 eq) em tolueno (70 mL) foi adicionado nBuLi (2,5 M, 13,8 mL, 1,3 eq) a -20 °C sob Na. A mistura foi aquecida até 0 °C e agitada durante 20 min, o tetrahidropiran-4-carboxilato de metila (3,83 g, 26,56 mmoles, 3,55 mL, 1 eq) foi adicionado e agitado a 28 °C durante 10 min. Então 2-(3-bromo-5-cloro-fenil)-l,3-dioxolano (7 g, 26,56 mmoles, 1 eq), Pd(dba)a (458 mg, 797 gmoles, 0,03 eq) e t-BusP (1,61 g, 796,92 gmoles, 1,87 mL, 10% de pureza, 0,03 eq) foram adicionados. A mistura foi agitada a 28 °C durante 12 h. A mistura foi extinguida através da adição de NH₄C1 sat. (50 mL) a 28°C e então diluída com EtOAc (50 mL) e extraída com EtOAc (1500 mL * 2). As camadas orgânicas combinadas foram lavadas com salmoura (150 mL), secas sobre NaaSCU, filtradas e concentradas sob pressão reduzida para fornecer um resíduo. O resíduo foi purificado por cromatografia flash em silica gel (ISCO®; 80 g CombiFlash® Silica Flash Column, Eluente de 0-50% de gradiente de acetato de Etila/Êter de petróleo @ 65 mL/min). O composto foi obtido na forma de um líquido amarelo claro (3,7 g, rendimento 43%). ^XH RMN (400MHz, CD₃OD) 0=7,41 - 7,39 (m, 1H), 7,35 (d, J=l,8 Hz, 2H), 5,77 (s, 1H), 4,15 - 4,09 (m, 2H), 4,08 - 4,01 (m, 2H), 3,94 (td, J=3,6, 12,0 Hz, 2H), 3,68 (s, 3H), 3,55 (dt, J=2,0, 11,7 Hz, 2H), 2,52 (dd, J=2,3, 13,6 Hz, 2H), 2,02 - 1,90 (m, 2H).

Etapa 3. Preparação de (4-(3-cloro-5-(l,3-dioxolan-2Petição 870190056160, de 17/06/2019, pág. 395/490

151/197 il)fenil)tetrahidro-2H-piran-4-il)metanol

Ο. Ό

222. A uma mistura de LAH (859,5 mg, 22,7 mmoles, 2 eq) em THF (20 mL). Uma mistura de 4-[3-cloro-5-(l,3-dioxolan-2il)fenil]tetrahidropiran-4-carboxilato de metila (3,7 g, 11,32 mmoles, 1 eq) foi dissolvida em THF (40 mL) e adicionada a 25 °C sob Na. A mistura de reação foi agitada a 25 °C durante 8 h. A mistura de reação foi extinguida com HaO (50 mL) e extraída com acetato de etila (2*100 mL). A fase orgânica combinada foi lavada com solução de salmoura (120 mL), seca com NaaSCk anidro, filtrada e evaporada a vácuo. O resíduo foi purificado por cromatografia flash em silica gel (ISCO®; 40 g CombiFlash® Silica Flash Column, Eluente de 0-50% de gradiente de acetato de Etila/Éter de petróleo @ 35mL/min). O composto foi obtido na forma de um sólido branco (2,4 g, rendimento 71%). ^XH RMN (400MHz, CD3OD) 5=7,41 (t, J=l,5 Hz, 1H), 7,33 (d, J=l,5 Hz, 2H), 5,78 (s, 1H), 4,16 - 4,09 (m, 2H), 4,08 - 4,02 (m, 2H), 3,80 (ddd, J=3,9, 5,7, 11,8 Hz, 2H), 3,63 (s, 2H), 3,57 (ddd, J=3,0, 8,8, 11,8 Hz, 2H), 2,15 2,06 (m, 2H), 1,98 - 1,90 (m, 2H).

Etapa 4. Preparação de 4-(3-cloro-5-(l,3-dioxolan-2-il)fenil)-4(metoximetil)tetrahidro-2H-pirano

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223. Sob uma atmosfera de argônio, NaH (803 mg, 20,1 mmoles, 60% de pureza, 2,5 eq) foi adicionado a uma solução de [4-[3-cloro-5(1,3- dioxolan-2-il)fenil]tetrahidropiran-4-il]metanol (2,4 g, 8,03 mmoles, 1 eq) foi dissolvido em THF anidro (30 mL) e a mistura resultante foi agitada a 0°C durante 30 min. CH3I (6,9 g, 48,61 mmoles, 3,03 mL, 6,05 eq) foi adicionado em gotas à solução de reação e a mistura resultante foi agitada a 25 °C durante 2 h. A mistura de reação foi extinguida com salmoura (20 mL) lentamente e então extraída com acetato de etila (50 mL*3). A fase orgânica combinada foi lavada com salmoura (100 mL), seca sobre NaaSCk anidro, filtrada e concentrada a vácuo. O resíduo foi purificado por cromatografia flash em silica gel (ISCO®; 40 g CombiFlash® Silica Flash Column, Eluente de 0-50% de gradiente de acetato de Etila/Éter de petróleo @ 35 mL/min). O composto do título foi obtido na forma de um líquido amarelo claro (2,3 g, rendimento 92%). Ή RMN (400MHz, CLOROFÓRMIO-d) δ = 7,37 (d, J=l,5 Hz, 1H), 7,31 (s, 2H), 5,79 (s, 1H), 4,16 - 4,10 (m, 2H), 4,09 - 4,02 (m, 2H), 3,82 - 3,74 (m, 2H), 3,55 (ddd, J=3,0, 8,7, 11,7 Hz, 2H), 3,36 (s, 2H), 3,21 (s, 3H), 2,07 - 2,03 (m, 2H), 2,03 - 1,95 (m, 2H).

Etapa 5. Preparação de 3-cloro-5-(4-(metoximetil)tetrahidro-2Hpiran-4-il)benzaldeído

224. 4-[3-Cloro-5-(l,3-dioxolan-2-il)fenil]-4-(metoximetil)tetrahidropirano (2,3 g, 7,35 mmoles, 1 eq) e PTSA (253 mg, 1,47 mmol, 0,2 eq) foram dissolvidos em acetona (30 mL) em um frasco seco sob nitrogênio e agitados a 25°C durante 12 h. NaHCOs saturado (30 mL*2)

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153/197 foi adicionado, a mistura foi extraída com EtOAc (50 mL χ 2), seca sobre Na2SÜ4 anidro, filtrada e evaporada a vácuo para fornecer o resíduo. O composto do título foi obtido na forma de um líquido amarelo claro (1,9 g, rendimento 96%). ^XH RMN (400MHz, CD₃OD) 5=10,01 - 9,94 (m, 1H), 7,74 (td, J=l,5, 8,0 Hz, 2H), 7,58 (t, J=l,9 Hz, 1H), 3,80 (ddd, J=3,8, 6,3, 11,8 Hz, 2H), 3,62 - 3,53 (m, 2H), 3,42 (s, 2H), 3,26 - 3,19 (m, 3H), 2,14 - 2,07 (m, 2H), 2,04 - 1,97 (m, 2H).

Exemplo 30

Preparação de ácido 3-(3-fluor-5-(4-(metoximetil)tetrahidro-2Hpiran-4-il)fenil)-4-(l-metil-5-(2-(5,6,7,8-tetrahidro-l,8-naftiridin-2iljetóxi)-lH-pirazol-3-il)butanoico

225. O Exemplo 30 foi preparado de maneira análoga ao Exemplo 29, utilizando 3-bromo-5-íluorbenzaldeído no lugar de 3bromo-5-cloro-benzaldeído no Esquema de reação 12. O produto bruto foi purificado por prep-HPLC (coluna: Boston Green ODS 150*30 5μ; fase móvel: [água (0,l%TFA)-ACN]; B%: 15%-45%, 8 min). O composto do título (6,7 mg, 9,8 qmoles, 37% de rendimento, 100% de pureza, TFA) foi obtido na forma de um sólido branco. A análise de LC-MS do sólido mostrou a massa do produto desejado: m/z 567,1 (M+H); Calculada para C31H39FN4O5: 566,66. ^XH RMN (CD3OD, 400 MHz) 7,60 (d, <7=7,2 Hz, 1H), 6,90-6,96 (m, 2H), 6,85-6,90 (m, 1H), 6,69 (d, J=7,2 Hz, 1H), 5,46 (s, 1H), 4,30 (t, J=6,0 Hz, 2H), 3,61-3,75 (m, 2H), 3,463,55 (m, 3H), 3,45 (s, 3H), 3,32-3,44 (m, 4H), 3,12-3,19 (m, 5H), 2,60-

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2,91 (m, 6H), 1,85-2,06 (m, 6H).

Exemplo 31

Preparação de ácido 3-(3-(4-(metoximetil)tetrahidro-2H-piran-4-il)5-(trifluormetil)fenil)-4-( l-metil-5-(2-(5,6,7,8-tetrahidro-1,8naftiridin-2-il)etóxi|-lH-pirazol-3-il)butanoico

226. O Exemplo 31 foi preparado de maneira análoga ao Exemplo 29, utilizando 3-bromo-5-(trifluormetil)benzaldeído no lugar de 3-bromo-5-cloro-benzaldeído no Esquema de reação 12. O produto bruto foi purificado por prep-HPLC (coluna: Boston Green ODS 150*30 5μ; fase móvel: [água (0,l%TFA)-ACN]; B%: 25%-51,25%). O composto do título (19 mg, 26 gmoles, 15% de rendimento, 100% de pureza, TEA) foi obtido na forma de um sólido amarelo. ^XH RMN (400MHz, CD3OD) : δ ppm = 7,58 (d, J=7,3 Hz, 1H), 7,43 (s, 1H), 7,37 (br d, J=4,2 Hz, 2H), 6,66 (d, J=7,5 Hz, 1H), 5,45 (s, 1H), 4,28 (t, J=6,0 Hz, 2H), 3,75 - 3,61 (m, 2H), 3,53 - 3,46 (m, 3H), 3,43 (s, 3H), 3,33 (s, 1H), 3,29 (d, J=l,3 Hz, 3H), 3,21 - 3,07 (m, 5H), 2,90 (dd, J=6,6, 14,3 Hz, 1H), 2,84 - 2,62 (m, 5H), 2,11 - 1,99 (m, 2H), 1,99 - 1,86 (m, 4H).

Exemplo 32

Preparação de ácido 3-(5-(tert-butil)-2-metoxifenil)-4-(l-metil-5-(2(5,6,7,8-tetrahidro-l,8-naftiridin-2-il)etóxi|-lH-pirazol-3-il) butanoico

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227. O Exemplo 32 foi preparado de maneira análoga ao Exemplo 1, utilizando 5-(tert-butil)-2-metoxibenzaldeído (sintetizado de acordo com o Esquema 13) como o benzaldeído requerido no Esquema de reação 3. O produto bruto foi purificado por prep-HPLC (coluna: Boston Green ODS 150*30 5μ; fase móvel: [água(0,1%TFA)-ACN]; B%: 25%-55%, 8 min). O composto do título (93 mg, 149 gmoles, 27% de rendimento, 100% de pureza, TFA) foi obtido na forma de um sólido branco. A análise de LC-MS do líquido mostra a massa do produto desejado: m/z 507 (M+H) ^XH RMN (400 MHz, DMSO-cfe) δ ppm 1,16 (s, 9 H), 1,74 - 1,83 (m, 2 H), 2,51 (br dd, J=7,5, 4,6 Hz, 2 H), 2,55 - 2,67 (m, 2 H), 2,69 - 2,74 (m, 2 H), 3,05 (t, J=6,l Hz, 2 H), 3,34 (s, 3 H), 3,36 3,42 (m, 2 H), 3,52 - 3,63 (m, 2 H), 3,72 (s, 3 H), 4,19 (t, J=6,l Hz, 2 H), 5,29 (s, 1 H), 6,65 (d, J=7,3 Hz, 1 H), 6,79 (d, J=9,3 Hz, 1 H), 7,05 7,11 (m, 2 H), 7,59 (d, J=7,3 Hz, 1 H), 8,43 (br s, 1 H).

Esquema 13

Preparação de 5-(tert-butil)-2-metoxibenzaldeído

228. A uma solução de l-tert-butil-4-metóxi-benzeno (3 g, 18,27 mmoles, 1 eq) em TFA (30 mL) foi adicionada metenamina (5,12 g, 36,53 mmoles, 6,83 mL, 2 eq). A mistura foi agitada a 80 °C durante 16 h. A LC-MS mostrou que o composto desejado foi detectado. A mistura de reação foi concentrada sob pressão reduzida para fornecer um

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156/197 resíduo. O resíduo foi purificado por cromatografia flash em silica gel (ISCO®; 40 g SepaFlash® Silica Flash Column, Eluente de 0~3% de gradiente de acetato de etila/Êter de petróleo @ 30mL/min). 5-Tertbutil-2-metóxi-benzaldeído (2,4 g, 12,5 mmoles, 68% de rendimento) foi obtido na forma de um líquido amarelo. A análise de LC-MS do líquido mostra a massa do produto desejado: m/z 193 (M+H) ^XH RMN (400 MHz, DMSO-d6) δ ppm 1,26 (s, 9 H), 2,43 - 2,57 (m, 3 H), 3,89 (s, 3 H), 7,16 (d, J=8,8 Hz, 1 H), 7,63 - 7,73 (m, 2 H), 10,28 - 10,38 (m, 1 H).

Exemplo 33

Preparação de ácido 3-(3-(tert-butil)-2-metoxifenil)-4-(l-metil-5-(2(5,6,7,8-tetrahidro-l,8-naftiridin-2-il)etóxi|-lH-pirazol-3-il) butanoico

229. O Exemplo 33 foi preparado de maneira análoga ao Exemplo 1, utilizando 3-(tert-butil)-2-metoxibenzaldeído (sintetizado de acordo com o Esquema 14) como o benzaldeído requerido no Esquema de reação 3. O produto bruto foi purificado por prep-HPLC (coluna: Boston Green ODS 150*30 5μ; fase móvel: [água (0,1%TFA)-ACN]; B%: 25%-55%, 8 min). O composto do título (136,3 mg, 219,25 pmoles, 66% de rendimento, 99,8% de pureza, TFA) foi obtido na forma de um sólido branco. A análise de LC-MS do óleo mostrou a massa do produto desejado: m/z 507,1 (M+H); Calculada para C29H38N4O4: 506,64. ^XH RMN (CD3OD, 400MHz) δ ppm 7,59 (d, J=7,2 Hz, 1H), 7,17 (d, J=7,6 Hz, 2H), 7,00-7,05 (m, 1H), 6,67 (d, J=7,2 Hz, 1H), 5,46 (s, 1H), 4,31 (t, J=6,0 Hz, 2H), 3,86-3,95 (m, 1H), 3,77 (s, 3H), 3,47-3,53 (m, 5H), 3,15

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157/197 (t, J=6,0 Hz, 2H), 2,93 (dd, J=14,4, 6,4 Hz, 1H), 2,83 (t, J=6,4 Hz, 2H), 2,64-2,79 (m, 3H), 1,95 (quin, J=6,0 Hz, 2H), 1,30 (s, 9H).

Esquema 14

Mel,K₂CO₃

Preparação de 3-(tert-butil)-2-metoxibenzaldeido

230. 3-Tert-butil-2-hidróxi-benzaldeído (5 g, 28,05 mmoles, 1 eq) em THF anidro (75 mL) foi tratado com CS2CO3 (18,28 g, 56,11 mmoles, 2 eq) sob uma atmosfera de argônio e a mistura foi agitada a 20 °C durante 30 min. Subsequentemente, CH3I (17,9 g, 126,11 mmoles, 7,85 mL, 4,50 eq) foi adicionado em gotas à mistura e a mistura resultante foi agitada a 20 °C durante 16 h. A TLC (Éter de petróleo: acetato de etila=15:l, Rf=0,45) indicou que o 3-tert-butil-2-hidróxi-benzaldeído foi consumido completamente e um novo ponto se formou. A mistura foi vertida na água (100 mL) e extraída com acetato de etila (100 mL*3). A fase orgânica combinada foi lavada com salmoura (150 mL), seca com Na2SÜ4 anidro, filtrada e concentrada a vácuo. O resíduo foi purificado por cromatografia flash em silica gel (ISCO®; 80 g SepaFlash® Silica Flash Column, Eluente de 0~5% de gradiente de acetato de Etila/Éter de petróleo @ 60 mL/min). O composto do título (4,2 g, 21,7 mmoles, 77% de rendimento, 99% de pureza) foi obtido na forma de um óleo amarelo. A análise de LC-MS do óleo mostrou a massa do produto desejado: m/z 193,0 (M+H); calculada para C12H10O2: 192,25. ^XH RMN (CDCI3, 400MHz) δ ppm 10,35 (s, 1H), 7,71 (dd, J=7,6, 2,0 Hz, 1H), 7,58 (dd, J=8,0, 1,6 Hz, 1H), 7,15 (t, J=7,6 Hz, 1H), 3,95 (s, 3H), 1,42 (s, 9H).

Exemplo 34

Preparação de ácido 3-(4-(tert-butil)-2-metoxifenil)-4-(l-metil-5-(2Petição 870190056160, de 17/06/2019, pág. 402/490

158/197 (5,6,7,8-tetrahidro-l,8-naftiridin-2-il)etóxi)-lH-pirazol-3-il) butanoico

231. O Exemplo 34 foi preparado de maneira análoga ao Exemplo 33, utilizando 4-tert-butil-2-hidróxi-benzaldeído no lugar de 3tert-butil-2-hidróxi-benzaldeído no Esquema de reação 14. O produto bruto foi purificado por prep-HPLC (Condição de TFA: coluna: Boston Green ODS 150*30 5μ; fase móvel: [água (0,1%TFA)-ACN]; B%: 30%60%, 8 min). O composto do título (88 mg, 138,6 gmoles, 74% de rendimento, 98% de pureza, TFA) foi obtido na forma de um sólido branco. A análise de LCMS mostrou a massa do produto desejado: m/z 507,1 (M+H). ^XH RMN, ¹⁹F RMN e HMBC eram coerentes com o composto do título. ^XH RMN (400 MHz, CD3OD) δ ppm 7,60 (br d, J = 6,8 Hz, 1H), 7,04 (d, J = 8,0 Hz, 1H), 6,97 - 6,85 (m, 2H), 6,67 (br d, J = 7,2 Hz, 1H), 5,49 (br s, 1H), 4,34 (br s, 2H), 3,84 (s, 3H), 3,71 (br t, J = 7,2 Hz, 1H), 3,55 - 3,44 (m, 5H), 3,15 (br t, J = 6,0 Hz, 2H), 2,83 (br t, J = 6,0 Hz, 4H), 2,74 - 2,57 (m, 2H), 2,02 - 1,89 (m, 2H), 1,29 (s, 9H); ¹⁹F RMN (376 MHz, CD3OD) -77,44 (s, 3F).

Exemplo 35

Preparação de trifluoracetato de ácido 3-(5-tert-butil-2-isopropóxifenil)-4-[l-metil-5-[2-(5,6,7,8-tetrahidro- l,8-naftiridin-2il)etóxi]pirazol-3-il]butanoico

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232. O Exemplo 35 foi preparado de maneira análoga ao Exemplo 33, utilizando 5-tert-butil-2-hidróxi-benzaldeído no lugar de 3tert-butil-2-hidróxi-benzaldeído e 2-bromopropano no lugar de CH3I no Esquema de reação 14. O produto bruto foi purificado por prep-HPLC (coluna: Boston Green ODS 150*30 5μ; fase móvel: [água(0,1%TFA)ACN]; B%: 30%-60%, 8 min). O composto do título (78,5 mg, 119 gmoles, 44% de rendimento, 98% de pureza, TEA) foi obtido na forma de um sólido branco. A análise de LC-MS do líquido mostra a massa do produto desejado: m/z 535,1 (M+H). ^XH RMN (400MHz, CD3OD) 7,58 (d, J = 7,3 Hz, 1H), 7,13 (dd, J = 2,4, 8,6 Hz, 1H), 7,09 (d, J = 2,4 Hz, 1H), 6,81 (d, J = 8,6 Hz, 1H), 6,66 (d, J = 7,3 Hz, 1H), 5,40 (s, 1H), 4,63 4,54 (m, 1H), 4,29 (t, J = 6,0 Hz, 2H), 3,69 (quin, J = 7,4 Hz, 1H), 3,49 (d, J = 5,6 Hz, 1H), 3,52 - 3,48 (m, 1H), 3,47 (s, 3H), 3,13 (t, J=6,0 Hz, 2H), 2,89 - 2,61 (m, 6H), 1,93 (quin, J=6,0 Hz, 2H), 1,32 (dd, J = 6,0, 7,7 Hz, 6H), 1,22 (s, 9H). ¹⁹F RMN (376 MHz, CD3OD) -77,36 (s, 1F).

Exemplo 36

Preparação de ácido 3-[3-tert-butil-5-(trifluormetóxi)fenil]-4-[lmetil-5-[2-(5,6,7,8-tetrahidro-l,8-naftiridin-2-il)etóxi]pirazol-3-il] butanoico

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233. O Exemplo 36 foi preparado de maneira análoga ao Exemplo 1, utilizando 3-tert-butil-5-(trifluormetóxi)benzaldeído (sintetizado de acordo com o Esquema 15) como o benzaldeído requerido no Esquema de reação 3. O produto bruto foi purificado por prep-HPLC (coluna: Boston pH-lex 150*25 ΙΟμιη; fase móvel: [água (0,l%TFA)-ACN]; B%: 35%-65%, 8 min). O composto do título (14 mg, 25 gmoles, 37% de rendimento, 100% de pureza) foi obtido na forma de um sólido branco. A análise de LC-MS do líquido mostra a massa do produto desejado: m/z 561,3. ^XH RMN (400 MHz, DMSO-cZõ) δ ppm 1,20 (s, 9 H), 1,72 - 1,84 (m, 2 H), 2,58 - 2,76 (m, 6 H), 3,06 (t, J=5,8 Hz, 2 H), 4,18 (t, J=6,l Hz, 2 H), 5,36 (s, 1 H), 6,66 (d, J=7,3 Hz, 1 H), 6,96 7,01 (m, 1 H), 7,05 (s, 1 H), 7,20 (s, 1 H), 7,61 (d, J=7,l Hz, 1 H).

Esquema 15

Etapa 1. Preparação de 2-[3-bromo-5-(trifluormetóxi)fenil]propan-2ol

Br

234. A uma solução de l,3-dibromo-5-(trifluormetóxi)benzeno (25 g, 78,15 mmoles, 1 eq) em i-Pr₂O (50 mL) foi adicionado n-BuLi (2,5

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Μ, 32 mL, 1,02 eq) a -78°C durante 0,5 h, então a acetona (7,9 g, 136 mmoles, 10 mL, 1,74 eq) foi adicionada. A mistura foi agitada a 20°C durante 2 h. A mistura de reação foi vertida em 100 mL de NH4CI aquoso e a mistura resultante foi agitada durante 15 min. A fase orgânica foi separada, seca sobre Na₂SO₄ anidro, filtrada e evaporada a vácuo para fornecer um resíduo. O resíduo foi purificado por cromatografia flash em silica gel (ISCO®; 80 g SepaFlash® Silica Flash Column, Eluente de 0~l% de gradiente de acetato de Etila/Êter de petróleo @ 50 mL/min). O composto do título (8 g, 26,75 mmoles, 34% de rendimento) foi obtido na forma de um líquido amarelo. ^XH RMN (400 MHz, DMSO-c/õ) δ ppm 1,94 (s, 6 H), 5,90 (s, 1 H), 7,91 - 8,01 (m, 2 H), 8,19 - 8,25 (m, 1 H).

Etapa 2. Preparação de l-bromo-3-( 1 -cloro- l-metil-etil)-5(trifluormetóxi)benzeno

Br

235. A uma solução de 2-[3-bromo-5-(trifluormetóxi) fenil] propan-2-ol (8 g, 26,75 mmoles, 1 eq) foi adicionado HC1 (54,2 g, 535 mmoles, 53,1 mL, 36% de pureza, 20 eq). A mistura foi agitada a 20 °C durante 2 h. A TLC (Éter de petróleo: acetato de etila=20:l, UV) mostrou que o 2-[3-bromo-5-(trifluormetóxi)fenil]propan-2-ol foi consumido completamente e um ponto foi detectado. A mistura de reação foi vertida em 100 mL de H₂O a 0°C. Então a mistura foi extraída com DCM (50 mL * 3). As camadas orgânicas combinadas foram concentradas sob pressão reduzida para fornecer um produto sem purificação adicional. O composto do título (7 g, 22 mmoles, 82% de rendimento) foi obtido na forma de um líquido amarelo. ^XH RMN (400 MHz, DMSO-c/õ) δ ppm 1,84 - 2,01 (m, 6 H), 7,59 (br d, J=12,8 Hz, 2 H),

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7,81 (t, J=l,5 Hz, 1 H).

Etapa 3. Preparação de l-bromo-3-tert-butil-5(trifluormetóxi)benzeno

236. A uma solução de l-bromo-3-(l-cloro-l-metil-etil)-5(trifluormetóxi)benzeno (6 g, 18,90 mmoles, 1 eq) em DCM (60 mL) foi adicionado Al(CHs)3 (em hexano) (1 M, 37,79 mL, 2 eq) a -78°C. A mistura foi agitada a 20°C durante 2 h. A TLC (Éter de petróleo: acetato de etila = 1:0, UV) indicou que o l-bromo-3-(l-cloro-l-metil-etil)-5(trifluormetóxi)benzeno foi consumido completamente e um novo ponto com polaridade menor foi detectado. A mistura de reação foi vertida em 100 mL de NH4CI aquoso e a mistura de reação foi agitada durante 15 min. A fase orgânica foi separada, seca sobre NaaSCH anidro, filtrada e evaporada a vácuo para fornecer um resíduo. O resíduo foi purificado por cromatografia flash em silica gel (ISCO®; 80 g SepaFlash® Silica Flash Column, Eluente de 0-1% de gradiente de acetato de Etila/Êter de petróleo @ 100 mL/min). O composto do título (4,6 g, 15,5 mmoles, 82% de rendimento) foi obtido na forma de um líquido amarelo 1H RMN (400 MHz, DMSO-cfe) δ ppm 1,27 (s, 9 H), 7,36 (s, 1 H), 7,47 (s, 1 H), 7,61 (t, J=l,6 Hz, 1 H).

Etapa 4. Preparação de 3-tert-butil-5-(trifluormetóxi)benzaldeído

237. A uma solução de l-bromo-3-tert-butil-5-(trifluormetóxi)

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163/197 benzeno (5,7 g, 19,18 mmoles, 1 eq) em i-PraO (50 mL) foi adicionado nBuLi (2,5 M, 10 mL, 1,30 eq) e agitado 0,5 h a -78°C, então DMF (2,1 g, 28,8 mmoles, 2,21 mL, 1,5 eq) foi adicionada. A mistura foi agitada a 20 °C durante 2 h. A TLC (Éter de petróleo: acetato de etila=20:1,UV) mostrou que o l-bromo-3-tert-butil-5-(trifluormetóxi)benzeno foi consumido completamente e um ponto foi detectado. A mistura de reação foi vertida em 50 mL de H2O a 0°C. Então a mistura foi extraída com DCM (50 mL * 3). As camadas orgânicas combinadas foram concentradas sob pressão reduzida para fornecer um produto resíduo. O resíduo foi purificado por cromatografia flash em silica gel (ISCO®; 40 g SepaFlash® Silica Flash Column, Eluente de 0-1,5% de gradiente de acetato de Etila/Éter de petróleo @ 60 mL/min). O composto do título (1,95 g, 7,92 mmoles, 41% de rendimento) foi obtido na forma de um líquido amarelo. ^XH RMN (400 MHz, DMSO-cfe) δ ppm 1,29 (s, 9 H), 7,63 (br d, J=6,4 Hz, 2 H), 7,97 (t, J=l,4 Hz, 1 H), 9,90 - 10,06 (m, 1 H).

Exemplo 37

Preparação de ácido 3-[3-tert-butil-5-(trifluormetil)fenil]-4-[l-metil5-(2-(5,6,7,8-tetrahidro-l,8-naftiridin-2-il)etóxi]pirazol-3-il] butanoico

O.

H N

238. O Exemplo 37 foi preparado de maneira análoga ao Exemplo 36, utilizando l,3-dibromo-5-(trifluormetil)benzeno no lugar de l,3-dibromo-5-(trifluormetóxi)benzeno no Esquema de reação 15. O produto bruto foi purificado por prep-HPLC (coluna: Boston Green ODS 150*30 5μ; fase móvel: [água (0,l%TFA)-ACN]; B%: 35%-65%, 8 min). O

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164/197 composto do título (12,4 mg, 22,25 gmoles, 51% de rendimento, 98% de pureza) foi obtido na forma de um sólido branco. A análise de LC-MS do líquido mostra a massa do produto desejado: m/z 545,3. ^XH RMN (400 MHz, CD₃OD) δ ppm 1,28 (s, 9 H), 1,87 - 1,97 (m, 2 H), 2,65 - 2,88 (m, 6 H), 3,13 (t, J=6,l Hz, 2 H), 3,43 (s, 3 H), 3,44 - 3,55 (m, 4 H), 4,28 (t, J=5,7 Hz, 2 H), 5,42 (s, 1 H), 6,68 (d, J=7,5 Hz, 1 H), 7,27 (s, 1 H), 7,44 (s, 2 H), 7,59 (d, J=7,3 Hz, 1 H).

Exemplo 38

Preparação de ácido 3-(3-(tert-butil)-5-fluorfenil)-4-(l-metil-5-(2(5,6,7,8-tetrahidro-l,8-naftiridin-2-il)etóxi)-lH-pirazol-3-il) butanoico

O.

H N

239. O Exemplo 38 foi preparado de maneira análoga ao Exemplo 1, utilizando 3-tert-butil-5-fluor-benzaldeído como o benzaldeído requerido no Esquema de reação 3. O produto bruto foi purificado por prep-HPLC (coluna: Boston Green ODS 150*30 5μ; fase móvel: [água(0,l%TFA)-ACN]; B%: 30%-56,25%,7 min). O composto do título foi obtido na forma de um sólido branco (57 mg, rendimento 41%). A análise de LC-MS do composto mostrou a massa do produto desejado: m/z 495(M+H); ^XH RMN (400MHz, CD3OD) δ = 7,59 (d, J=7,3 Hz, 1H), 7,00 (s, 1H), 6,92 (br d, J=ll,0 Hz, 1H), 6,79 (br d, J=9,8 Hz, 1H), 6,68 (d, J=7,3 Hz, 1H), 5,56 (s, 1H), 4,35 (t, J=6,0 Hz, 2H), 3,52 3,37 (m, 5H), 3,17 (t, J=5,9 Hz, 2H), 2,94 - 2,57 (m, 6H), 1,95 (quin, J=5,9 Hz, 2H), 1,25 (s, 9H).

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Exemplo 39

Preparação de trifluoracetato de ácido 3-(5-isopropil-2-metoxifenil)-

4-( l-metil-5-(2-(5,6,7,8-tetrahidro-1,8-naftiridin-2-il)etóxi)- 1Hpirazol-3-il)butanoico

240. O Exemplo 39 foi preparado de maneira análoga ao Exemplo 1, utilizando 5-isopropil-2-metóxi-benzaldeído como o benzaldeído requerido no Esquema de reação 3. O produto bruto foi purificado por prep-HPLC (coluna: Boston Green ODS 150*30 5μ; fase móvel: [água (0,l%TFA)-ACN]; B%: 25%-55%, 8 min). O composto do título (105 mg, 172 qmoles, 55% de rendimento, 99,1% de pureza, TEA) foi obtido na forma de um sólido branco, que foi confirmado por LCMS (m/z 493,1 (M+H)), HPLC, Ή RMN e ¹⁹F RMN. Ή RMN (CD₃OD, 400MHz) 7,59 (d, J = 7,2 Hz, 1H), 7,02 (dd, J = 8,4, 2,4 Hz, 1H), 6,96 (d, J = 2,0 Hz, 1H), 6,84 (d, J = 8,4 Hz, 1H), 6,67 (d, J = 7,2 Hz, 1H), 5,50 (s, 1H), 4,34 (t, J = 6,0 Hz, 2H), 3,80 (s, 3H), 3,73 (quin, J = 7,6 Hz, 1H), 3,47-3,53 (m, 5H), 3,16 (t, J = 6,0 Hz, 2H), 2,85-2,96 (m, 2H), 2,74-2,85 (m, 3H), 2,61-2,74 (m, 2H), 1,95 (quin, J = 6,0 Hz, 2H), 1,16 (d, J = 7,2 Hz, 6H); ¹⁹F RMN (CD3OD, 376MHz) -77,31 (s, 1F).

Exemplo 40

Preparação de trifluoracetato de ácido 3-(3-bromo-5-isopropil-fenil)4-[l-metil-5-[2-(5,6,7,8-tetrahidro- l,8-naftiridin-2-il)etóxi]pirazol-3il]butanoico

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241. O Exemplo 40 foi preparado de maneira análoga ao Exemplo 1, utilizando 3-bromo-5-isopropil-benzaldeído como o benzaldeído requerido no Esquema de reação 3. O produto bruto foi purificado por prep-HPLC (coluna: Boston Green ODS 150*30 5μ; fase móvel: [água (0,l%TFA)-ACN]; B%: 35%-59,4%, 6,5 min). O composto do título foi obtido na forma de um sólido branco que foi confirmado por LCMS (m/z 543,0 (M+H)), HPLC, Ή RMN e ¹⁹F RMN. Ή RMN (CD₃OD, 400MHz) 7,60 (d, J=7,3 Hz, 1H), 7,19 (d, J=7,3 Hz, 2H), 7,04 (s, 1H), 6,68 (d, <7=7,3 Hz, 1H), 5,57 - 5,42 (m, 1H), 4,45 -4,26 (m, 2H), 3,54 3,33 (m, 5H), 3,17 (t, J=6,0 Hz, 2H), 2,92 - 2,54 (m, 7H), 1,95 (quin, <7=5,9 Hz, 2H), 1,19 (dd, J=l,4, 6,9 Hz, 6H). ¹⁹F RMN (CD3OD, 376MHz) -77,33 (s, 1F).

Exemplo 41

Preparação de trifluoracetato de ácido 3-(3-bromo-5-tert-butil-fenil)4-[5-[2-(5,6,7,8-tetrahidro-l,8-naftiridin-2-il)etóxi]-1-(2,2,2trifluoretil)pirazol-3-il]butanoico

242.

O Exemplo 41 foi preparado de maneira análoga ao

Exemplo 1, utilizando 3-bromo-5-íert-butilbenzaldeído como o

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167/197 benzaldeído requerido e (2,2,2-trifluoretil)hidrazina no lugar de metil hidrazina no Esquema de reação 3. O produto bruto foi purificado por prep-HPLC (Condição de TFA: coluna: Boston Green ODS 150*30 5μ; fase móvel: [água(0,l%TFA)-ACN]; B%: 38%-68%, 8 min). O composto do título (105 mg, 134 μιηοΐεβ, 51% de rendimento, 95% de pureza, TFA) foi obtido na forma de um sólido branco. ^XH RMN (400 MHz, CD3OD) 7,60 (br d, J= 7,6 Hz, 1H), 7,31 (s, 1H), 7,16 (dd, J = 1,6, 4,0 Hz, 2H), 6,72 - 6,63 (m, 1H), 5,47 (s, 1H), 4,50 (q, J = 8,8 Hz, 2H), 4,32 (t, J = 6,0 Hz, 2H), 3,53 - 3,46 (m, 2H), 3,44 - 3,35 (m, 1H), 3,15 (t, J = 6,0 Hz, 2H), 2,89 - 2,79 (m, 3H), 2,79 - 2,66 (m, 2H), 2,65 - 2,56 (m, 1H), 1,94 (quin, J = 6,0 Hz, 2H), 1,24 (s, 9H). ¹⁹F RMN (376MHz, CD3OD) -72,69 (t, J = 8,8 Hz, 3F), -77,33 (br s, 3F). A análise de LC-MS mostra a massa do produto desejado: m/z 625,1 (M+H); calculada para: C29H34BrF3N₄O3: 624,17.

Exemplo 42

Preparação do sal de sódio do ácido 3-(5-tert-butil-2-hidróxi-fenil)4-[l-metil-5-[2-(5,6,7,8-tetrahidro-l,8-naftiridin-2-il)etóxi]pirazol-3il]butanoico

Esquema 16

ΕχβΒψΙβ 42·

Exemplo 42

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Etapa 1. Preparação de 6-tert-butil-4-[[l-metil-5-[2-(5,6,7,8tetrahidro-l,8-naftiridin-2-il)etóxi]pirazol-3-il]metil]croman-2-ona

243. A uma solução de 3-(5-tert-butil-2-metóxi-fenil)-4-[l-metil5-[2-(5,6,7,8-tetrahidro-l,8-naftiridin-2-il)etóxi]pirazol-3-il]butanoato de etila (30 mg, 56 pmoles, 1 eq) em CH2CI2 (10 mL) foi adicionado BBrs (14,06 mg, 56 pmoles, 5,4 pL, 1 eq) em CH2CI2 (5 mL) a -78 °C. A mistura foi aquecida a 25°C e agitada a esta temperatura durante 2 h. A LC-MS mostrou que o 3-(5-tert-butil-2-metóxi-fenil)-4-[l-metil-5-[2(5,6,7,8-tetrahidro-1,8-naftiridin-2-il)etóxi]pirazol-3-il]butanoato de etila foi consumido completamente e a massa desejada (m/z 475,1 (M+H)) foi detectada. A mistura de reação foi vertida na água (60 mL) e a camada aquosa resultante foi extraída com CH2CI2 (20 mL*3). Os extratos orgânicos foram secos com Na2SO4 anidro e o solvente foi evaporado sob vácuo para fornecer um resíduo sem purificação adicional. O composto do título (25 mg, 53 pmoles, 94% de rendimento) foi obtido uma goma amarela. A análise de LC-MS do líquido mostra a massa do produto desejado: m/z 475,1 (M+H).

Etapa 2. Preparação do sal de sódio do ácido 3-(5-tert-butil-2hidróxi-fenil)-4-[l-metil-5-[2-(5,6,7,8-tetrahidro-l,8-naftiridin-2il)etóxi]pirazol-3-il]butanoico

244.

A uma solução de 6-tert-butil-4-[[l-metil-5-[2-(5,6,7,8Petição 870190056160, de 17/06/2019, pág. 413/490

169/197 tetrahidro-1,8-naftiridin-2-il)etóxi]pirazol-3-il]metil]croman-2-ona (25 mg, 53 gmoles, 1 eq) em THF (1 mL) foi adicionado NaOH (1 M, 1,58 mL, 30 eq) . A mistura foi agitada a 60 °C durante 16 h. A LC-MS mostrou que a 6-tert-butil-4-[[l-metil-5-[2-(5,6,7,8-tetrahidro-l,8naftiridin-2 -il) etóxi] pirazol-3 -il] metil] croman-2 -ona foi completamente consumida e a massa desejada (m/z 493,1 (M+H)) foi detectada. A mistura de reação foi concentrada sob pressão reduzida para remover o THF para fornecer um resíduo. O resíduo foi purificado por prep-HPLC (coluna: Xbridge 150*30mm*10um; fase móvel: [água (0,05% de hidróxido de amônia v/v)-ACN]; B%: 20%-60%, 7 min). O composto do título foi obtido na forma de um sólido branco. A análise de LC-MS do líquido mostra a massa do produto desejado: m/z 493,1 (M+H). ^XH RMN (400MHz, CD₃OD) 7,24 (d, J = 7,3 Hz, 1H), 7,13 (d, J = 2,3 Hz, 1H), 7,03 (dd, J = 2,4, 8,4 Hz, 1H), 6,69 (d, J = 8,5 Hz, 1H), 6,45 (d, J = 7,3 Hz, 1H), 5,40 (s, 1H), 4,28 (t, J = 6,4 Hz, 2H), 3,75 (quin, J = 7,3 Hz, 1H), 3,42 (br s, 2H), 3,40 (s, 3H), 3,04 - 2,81 (m, 4H), 2,77 - 2,59 (m, 4H), 1,90 (quin, J= 5,9 Hz, 2H), 1,25 (s, 9H).

Exemplo 43

Preparação de trifluoracetato de ácido 3-(5-(tert-butil)-2-clorofenil)4-( l-metil-5-(2-(5,6,7,8-tetrahidro-1,8-naftiridin-2-il)etóxi)- 1Hpirazol-3-il)butanoico

245. O Exemplo 43 foi preparado de maneira análoga ao Exemplo 1, utilizando 5-(tert-butil)-2-clorobenzaldeído (sintetizado de acordo com o Esquema 17) como o benzaldeído requerido no Esquema

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170/197 de reação 3. O produto bruto foi purificado por Prep-HPLC (coluna: Boston Green ODS 150*30 5μ; fase móvel: [água (0,1%TFA)-ACN]; B%: 30%-60%,8 min). O composto do título (50,5 mg, 97,95 qmoles, 41% de rendimento, 99% de pureza) foi obtido na forma de um sólido branco que foi confirmado por LCMS (m/z 511,1 (M+H)), HPLC, HMBC, Ή RMN e ¹⁹F RMN. ^XH RMN (CD₃OD, 400 MHz) δ 7,61 (d, J=7,5 Hz, 1H), 7,30 7,23 (m, 2H), 7,22 - 7,18 (m, 1H), 6,69 (d, J = 7,3 Hz, 1H), 5,40 (s, 1H), 4,31 (t, J = 6,0 Hz, 2H), 3,96 (quin, J = 7,4 Hz, 1H), 3,54 - 3,44 (m, 5H), 3,15 (t, J = 6,0 Hz, 2H), 2,92 - 2,64 (m, 6H), 1,96 (quin, J = 5,9 Hz, 2H), 1,27 (s, 9H). ¹⁹F RMN (CD3OD, 376 MHz) -77,37 (br s, 1F).

Esquema 17

NH, l₂. Ab_?SO₄. MeOH

rutfitor de isaawila , CilCU, ItôeCNi etapa 2

í-PrMgCIs.THF. DMF etapa 3

Etapa 1. Preparação de 4-(tert-butil)-2-iodoanilina

246. Ο I2 (17,01 g, 67,01 mmoles, 13,5 mL, 1 eq) foi adicionado a uma mistura de 4-tert-butilanilina (10 g, 67,01 mmoles, 10,6 mL, 1 eq), Ag₂SO₄ (20,89 g, 67,01 mmoles, 11,4 mL, 1 eq) em MeOH (300 mL). A mistura resultante foi agitada a 15 °C durante 2 h. A mistura foi filtrada

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171/197 e o filtrado foi concentrado. O concentrado foi fracionado entre NaaSCh saturado (150 mL) e EtaO (200 mL). A camada aquosa foi separada e extraída com EtaO (2*150 mL). Os extratos orgânicos combinados foram lavados com salmoura (200 mL), secos sobre NaaSO4 e concentrados a vácuo para fornecer o resíduo. O resíduo foi purificado por cromatografia flash em silica gel (ISCO®; 120 g CombiFlash® Silica Flash Column, Eluente de 0-10% de gradiente de acetato de Etila/Êter de petróleo @ 80 mL/min). O composto do título (14,6 g, 53,07 mmoles, 79% de rendimento) foi obtido na forma de um líquido preto amarronzado que foi confirmado por ^XH RMN. ^XH RMN (CDCh, 400 MHz) 7,63 (d, <7=2,0 Hz, 1H), 7,17 (dd, J=2,l, 8,4 Hz, 1H), 6,70 (d, J=8,3 Hz, 1H), 4,06 - 3,85 (m, 2H), 1,26 (s, 9H).

Etapa 2. Preparação de 4-(tert-butil)-l-cloro-2-iodobenzeno

i

247. O nitrito de tert-butila (2,81 g, 27,26 mmoles, 3,24 mL, 1,5 eq) foi adicionado a uma mistura de CuCb (2,93 g, 21,81 mmoles, 1,2 eq) em CH3CN (30 mL) sob N2. A mistura resultante foi tratada com uma solução de 4-tert-butil-2-iodo-anilina (5 g, 18,17 mmoles, 1 eq) in CH3CN (30 mL) e então a mistura foi aquecida a 65°C durante 2 h. A mistura foi diluída com EtOAC (50 mL) e lavada com água (50 mL). A camada aquosa foi extraída com EtOAC (100*2 mL). A camada orgânica combinada foi seca sobre NaaSCH e concentrada a vácuo. O resíduo foi purificado por cromatografia flash em silica gel (ISCO®; 80 g CombiFlash® Silica Flash Column, Eluente de 0% de gradiente de acetato de Etila/Êter de petróleo @ 65 mL/min). O composto do título (3,9 g, 13,24 mmoles, 73% de rendimento) foi obtido na forma de um líquido vermelho que foi confirmado por ^XH RMN. ^XH RMN (CDCI3, 400

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MHz) 7,91 - 7,81 (m, 1H), 7,39 - 7,33 (m, 1H), 7,33 - 7,28 (m, 1H), 1,32 - 1,27 (m, 9H).

Etapa 3. Preparação de 5-(tert-butil)-2-clorobenzaldeido

248. A uma solução agitada de 4-tert-butil-l-cloro-2-iodobenzeno (3,9 g, 13,24 mmoles, 1 eq) em THF (20 mL) e EtOAc (20 mL) foi adicionado i-PrMgCl (2,0 M, 6,62 mL, 1 eq) em gotas a -78 °C. A mistura resultante foi agitada durante 2 h a -78 °C e então tratada com DMF (1,94 g, 26,48 mmoles, 2,04 mL, 2 eq) em gotas a -78°C. Após a adição completa, a mistura foi aquecida lentamente a 15°C ao longo de 12 h. A mistura de reação foi extinguida com água (20 mL), a camada orgânica foi separada e a camada aquosa foi extraída com EtOAc (30mL*3), as camadas orgânicas combinadas foram lavadas com salmoura (100 mL) e secas sobre Na2SO4 e evaporação. O resíduo foi purificado por cromatografia flash em silica gel (ISCO®; 40g CombiFlash® Silica Flash Column, Eluente de 0% de gradiente de acetato de Etila/Éter de petróleo @35 mL/min). O composto do título (1,3 g, 6,61 mmoles, 50% de rendimento) foi obtido na forma de um líquido incolor que foi confirmado por ^XH RMN. ^XH RMN (CDCH, 400MHz) 10,52 - 10,44 (m, 1H), 7,95 (d, J=2,5 Hz, 1H), 7,57 (dd, J=2,5, 8,5 Hz, 1H), 7,38 (d, J=8,5 Hz, 1H), 1,38 - 1,3l(m, 9H).

Exemplo 44

Preparação de trifluoracetato de ácido 3-(5-tert-butil-2-metil-fenil)4-[l-metil-5-[2-(5,6,7,8-tetrahidro- l,8-naftiridin-2-il)etóxi]pirazol-3il]butanoico

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249. O Exemplo 44 foi preparado de maneira análoga ao Exemplo 1, utilizando 5-tert-butil-2-metil-benzaldeído (sintetizado de acordo com o Esquema 18) como o benzaldeído requerido no Esquema de reação 3. O produto bruto foi purificado por Prep-HPLC (coluna: Xbridge BEH C18, 250*50mm, ΙΟμιη; fase móvel: [água (O,1%TFA)ACN]; B%: 25%-41%, 9 min). O composto do título 52 mg, 87 μιηοΐεβ, 15,5% de rendimento, TFA) foi obtido na forma de um sólido amarelo. ^XH RMN (400MHz, CD₃OD): δ ppm = 7,60 (d, J=7,3 Hz, 1H), 7,21 (d, J=2,0 Hz, 1H), 7,11 - 7,06 (m, 1H), 7,03 - 6,98 (m, 1H), 6,67 (d, J=7,3 Hz, 1H), 5,35 (s, 1H), 4,34 - 4,25 (m, 2H), 3,71 (quin, J=7,5 Hz, 1H), 3,57 - 3,45 (m, 5H), 3,14 (t, J=6,0 Hz, 2H), 2,83 (br t, J=6,l Hz, 2H), 2,77 (dd, J=2,8, 7,5 Hz, 2H), 2,69 - 2,63 (m, 2H), 2,27 (s, 3H), 1,95 (td, J=6,0, 11,8 Hz, 2H), 1,31 - 1,23 (m, 9H). ¹⁹F RMN (376MHz, CD3OD) = 77,34 (s, 1F).

Esquema 18

Etapa 1. Preparação de 2-bromo-4-tert-butil-l-metil-benzeno

Br

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250. A uma solução de Br₂ (12,94 g, 80,95 mmoles, 4,17 mL, 1,2 eq) foi adicionada uma solução de l-tert-butil-4-metil-benzeno (10 g, 67,46 mmoles, 11,66 mL, 1 eq) em HOAc (30 mL) em gotas a 20°C. A mistura resultante foi aquecida a 50°C durante 120 h. Foi permitido que a mistura resfriasse à temperatura ambiente e então água (100 mL) e bissulfito de sódio aquoso foram adicionados. A mistura foi extraída com acetato de etila (100 mL). Os extratos combinados foram lavados com água, secos sobre sulfato de sódio e filtrados. A evaporação giratória do filtrado forneceu um resíduo. O resíduo foi purificado por cromatografia flash em silica gel (ISCO®; 120 g SepaFlash® Silica Flash Column, Eluente de 100% de gradiente de Éter de petróleo @ 40 mL/min). O composto do título (12,5 g, 54,9 mmoles, 81% de rendimento) foi obtido na forma de um líquido incolor.

Etapa 2. Preparação de 5-tert-butil-2-metil-benzaldeído

251. A uma solução agitada de 2-bromo-4-tert-butil-l-metilbenzeno (12,5 g, 54,9 mmoles, 1 eq) em THE (170 mL) foi adicionado nBuLi (2,5 M, 26,35 mL, 1,2 eq) em gotas a -78 °C. A mistura resultante foi agitada durante 10 min a -78 °C e extinguida com DMF (6,02 g, 82,35 mmoles, 6,34 mL, 1,5 eq) a -78 °C e agitada durante 1 h. Após aquecer à temperatura ambiente, NH4CI sat. (lOOmL) foi adicionado à mistura. A mistura aquosa resultante foi extraída com acetato de etila (3 x lOOmL). O extrato orgânico foi seco sobre sulfato de sódio e concentrado sob pressão reduzida. O resíduo foi purificado por cromatografia flash em silica gel (ISCO®; 40 g SepaFlash® Silica Flash Column, Eluente de 100% de gradiente de Éter de petróleo @ 35

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175/197 mL/min). O composto do título (4,09 g, 23,2 mmoles, 42% de rendimento) foi obtido na forma de um líquido amarelo claro.

Exemplo 45

Preparação de trifluoracetato de ácido 3-(3-bromo-5-tert-butil-fenil)4-[l-tert-butil-5-[2-(5,6,7,8-tetrahidro-l,8-naftiridin-2il)etóxi]pirazol-3-il]butanoico

252. O Exemplo 45 foi preparado de maneira análoga ao Exemplo 1, utilizando 3-bromo-5-terí-butilbenzaldeído como o benzaldeído requerido e tert-butilhidrazina no lugar de metil hidrazina no Esquema de reação 3. O produto bruto foi purificado por prep-HPLC (Condição de TFA: coluna: X bridge BEH C18, 250*50mm, ΙΟμιη; fase móvel: [água(0,l%TFA)-ACN]; B%: 25%-55%, 9 min). O composto do título (0,016 g, 21,81 qmoles, 44% de rendimento, 97% de pureza, TFA) foi obtido na forma de um sólido branco. A análise de LC-MS mostra a massa do produto desejado: m/z 599,1 (M+3H); Calculada para: C32H₄3BrN₄O3: 596,24. LCMS e HPLC, Ή RMN e ¹⁹F RMN, 2D RMN confirmaram que era o produto alvo. ^XH RMN (400 MHz, CD3OD) δ 7,60 (d, J = 7,2 Hz, 1H), 7,34 - 7,30 (m, 1H), 7,16 (d, J = 12,0 Hz, 2H), 6,69 (d, J = 7,6 Hz, 1H), 5,50 (s, 1H), 4,31 (t, J = 6,0 Hz, 2H), 3,54 - 3,47 (m, 2H), 3,39 (quin, J = 7,6 Hz, 1H), 3,19 (t, J = 6,0 Hz, 2H), 2,89 - 2,56 (m, 6H), 1,94 (quin, J = 6,0 Hz, 2H), 1,40 (s, 9H), 1,26 (s, 9H). ¹⁹F RMN (376 MHz, CD3OD) -77,24 (br s, 3F).

Os Exemplos 46, 47 e 48 são preparadas de acordo com o Esquema

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Esquema 19

êsterpercursor dü Exemplo· 14

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Exeuiplo- -S

Etapa 1. Preparação de 3-(5-ciano-2-metoxifenil)-4-(l-metil-5-(2(5,6,7,8-tetrahidro- l,8-naftiridin-2-il)etóxi)-lH-pirazol-3iljbutanoato de etila

253. Uma mistura de 3-(5-bromo-2-metóxi-fenil)-4-[l-metil-5-[2(5,6,7,8-tetrahidro-1,8-naftiridin-2-il)etóxi]pirazol-3-il]butanoato de etila (380 mg, 666 gmoles, 1 eq), preparado durante a síntese do Exemplo 14 e Zn(CN)2 (234 mg, 2 mmoles, 1267 gL, 3 eq) em DMF (5 mL) em um frasco de micro-ondas foi evacuada e preenchida novamente com N2 (3x). Pd(PPh3)4 (77 mg, 67 gmoles, 0,1 eq) foi adicionado. O frasco de reação foi selado e a mistura de reação foi desgaseificada de novo e

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177/197 preenchida novamente com N2 (3x) e então agitada a 120 °C durante 1,5 h sob irradiação de micro-ondas. A mistura foi então vertida dentro da água (80 mL) e extraída com EtOAc (3*50 mL). A camada orgânica combinada foi lavada com salmoura (50 mL), seca sobre sulfato de sódio e evaporada para fornecer o resíduo. O resíduo foi purificado por cromatografia flash em silica gel (ISCO®; 12 g SepaFlash® Silica Flash Column, Eluente de 0-100% de gradiente de acetato de Etila/Êter de petróleo @ 30 mL/min). O título (135 mg, 245 gmoles, 37% de rendimento, 91% de pureza) foi obtido na forma de um óleo incolor, que foi confirmado por LCMS {m/z 526,1 (M+Na)).

Etapa 2. Preparação dos Exemplos 46, 47 e 48

254. A uma solução de 3-(5-ciano-2-metóxi-fenil)-4-[l-metil-5-[2(5,6,7,8-tetrahidro-1,8-naftiridin-2-il)etóxi]pirazol-3-il]butanoato de etila, da etapa 1 acima, (135 mg, 245 gmoles, 1 eq) em THF (5 mL) foi adicionado LiOH (1 M, 8 mL, 32,69 eq). A mistura de reação foi agitada a 60 °C durante 16 h. A LC-MS mostrou 13,8% de ácido 3-(5-ciano-2metóxi-fenil)-4-[l-metil-5-[2-(5,6,7,8-tetrahidro-l,8-naftiridin-2-il)etóxi]pirazol-3-il]butanoico (Exemplo 46), 54,2% de ácido 3-(5-carbamoil-2metóxi-fenil)-4-[l-metil-5-[2-(5,6,7,8-tetrahidro-l,8-naftiridin-2-il)etóxi]pirazol-3-il]butanoico (Exemplo 47), 22,8% de ácido 3-[l-(carboximetil)2-[l-metil-5-[2-(5,6,7,8-tetrahidro-l,8-naftiridin-2-il)etóxi]pirazol-3-il]etil]-4-metóxi-benzoico (Exemplo 48). A mistura foi concentrada sob pressão reduzida para fornecer um resíduo, o resíduo foi ajustado em pH=5 com AcOH e extraído com acetato de etila (10 mL * 2). A fase orgânica combinada foi concentrada a vácuo. O resíduo foi purificado por prep-HPLC (coluna: Xbridge BEH C18, 250*50mm, ΙΟμιη; fase móvel: [água (0,l%TFA)-ACN]; B%: 15%-45%, 9 min). O composto do Exemplo 46 (16,2 mg, 27 μιηοΐάβ, 11% de rendimento, 98% de pureza, TEA) foi obtido na forma de um sólido branco; o composto do Exemplo

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178/197 (53 mg, 86 pmoles, 35% de rendimento, 99% de pureza, TFA) foi obtido na forma de um sólido branco; e o composto do Exemplo 48 (20 mg, 30 pmoles, 12% de rendimento, 91% de pureza, TFA) foi obtido na forma de um sólido branco.

Exemplo 46

Preparação de trifluoracetato de ácido 3-(5-ciano-2-metoxifenil)-4(l-metil-5-(2-(5,6,7,8-tetrahidro-1,8-naftiridin-2-il)etóxi)-lH-pirazol3-il)butanoico

255. O Exemplo 46 foi preparado utilizando 3-(5-bromo-2metóxi-fenil)-4-[l-metil-5-[2-(5,6,7,8-tetrahidro-l,8-naftiridin-2il)etóxi]pirazol-3-il]butanoato de etila, preparado durante a síntese do Exemplo 14, como mostrado no Esquema de reação 19, (16,2 mg, 27 pmoles, 11% de rendimento, 98% de pureza, TFA) foi obtido na forma de um sólido branco.

256. Ή RMN (CD₃OD, 400MHz) δ 7,55-7,62 (m, 2H), 7,46 (d, <7=2,0 Hz, 1H), 7,09 (d, J=8,4 Hz, 1H), 6,67 (d, J=7,6 Hz, 1H), 5,56 (s, 1H), 4,33-4,39 (m, 2H), 3,92 (s, 3H), 3,73-3,84 (m, 1H), 3,47-3,53 (m, 5H), 3,17 (t, 7=6,0 Hz, 2H), 2,78-2,96 (m, 4H), 2,63-2,77 (m, 2H), 1,911,99 (m, 2H). (m/z 476,1 (M+H)).

Exemplo 47

Preparação de trifluoracetato de ácido 3-(5-carbamoil-2metoxifenil)-4-( l-metil-5-(2-(5,6,7,8-tetrahidro- l,8-naftiridin-2iljetóxi)-lH-pirazol-3-il)butanoico

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257. O Exemplo 47 foi preparado utilizando 3-(5-bromo-2metóxi-fenil)-4-[ 1-metil-5-[2-(5,6,7,8-tetrahidro-l,8-naftiridin-2-il)etóxi]pirazol-3-il]butanoato de etila, preparado durante a síntese do Exemplo 14, como mostrado no Esquema de reação 19, (53 mg, 86 gmoles, 35% de rendimento, 99% de pureza, TEA) foi obtido na forma de um sólido branco.

258. Ή RMN (DMSO-dõ, 400MHz) 13,88 (br s, 1H), 8,40 (br s, 1H), 7,83 (br s, 1H), 7,70-7,77 (m, 2H), 7,62 (d, J=7,6 Hz, 1H), 7,16 (br s, 1H), 6,94-7,01 (m, 1H), 6,67 (d, J=7,2 Hz, 1H), 5,36 (s, 1H), 4,24 (br t, <7=6,0 Hz, 2H), 3,82 (s, 3H), 3,68 (quin, J=7,6 Hz, 1H), 3,34-3,44 (m, 5H), 3,08 (br t, J=6,0 Hz, 2H), 2,52-2,78 (m, 6H), 1,77-1,86 (m, 2H) ¹⁹F RMN (DMSO-dõ, 376MHz) -74,61 (s, IF). LCMS (m/z 494,1 (M+H)).

Exemplo 48

Preparação de trifluoracetato de ácido 3-(l-carbóxi-3-(l-metil-5-(2(5,6,7,8-tetrahidro-l,8-naftiridin-2-il)etóxi)-lH-pirazol-3-il)propan2-il)-4-metoxibenzoico

259. O Exemplo 48 foi preparado utilizando 3-(5-bromo-2metóxi-fenil)-4-[ l-metil-5-[2-(5,6,7,8-tetrahidro-1,8-naftiridin-2-il)etóxi]pirazol-3-il]butanoato de etila, preparado durante a síntese do Exemplo

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14, como mostrado no Esquema de reação 19, (20 mg, 30 μιηοΐ, 12% de rendimento, 91% de pureza, TFA) foi obtido na forma de um sólido branco.

260. Ή RMN (DMSO-dõ, 400MHz) δ 13,88 (br s, 1H), 8,38 (br s, 1H), 7,79 (dd, J=8,4, 2,0 Hz, 1H), 7,72 (d, J=2,0 Hz, 1H), 7,62 (d, J=7,2 Hz, 1H), 7,04 (d, <7=8,4 Hz, 1H), 6,67 (d, J=7,6 Hz, 1H), 5,38 (s, 1H), 4,25 (t, <7=6,0 Hz, 2H), 3,86 (s, 3H), 3,66 (quin, J=7,6 Hz, 1H), 3,36-3,44 (m, 5H), 3,08 (t, J=6,0 Hz, 2H), 2,54-2,77 (m, 6H), 1,77-1,86 (m, 2H) ¹⁹F RMN (DMSO-dõ, 376MHz) -74,74 (s, IF). LCMS [m/z 495,1 (M+H)).

Exemplo 49

Preparação de trifluoracetato de 3-(3-tert-butilfenil)-4-[l-metil-5-[2(5,6,7,8-tetrahidro-l,8-naftiridin-2-il)etóxi]pirazol-3-il]butanoico

261. O exemplo 49 foi preparado de maneira análoga ao Exemplo 1, utilizando 3-tert-butilbenzaldeído como o benzaldeído requerido no Esquema de reação 3. O produto bruto foi purificado por Prep-HPLC (coluna: Boston Green ODS 150*30 5μ; fase móvel: [água (O,1%TFA)ACN]; B%: 25%-50%, 8 min). O composto do título (21,7 mg, 45 μιηοΐεβ, 99,7% de pureza, sal de TFA) foi obtido na forma de um sólido branco. ^XH RMN (400 MHz, CD₃OD): δ 7,59 (br d, J=7,6 Hz, 1H), 7,24 - 7,13 (m, 3H), 7,04 (br d, J=6,4 Hz, 1H), 6,67 (d, J=7,2 Hz, 1H), 5,62 - 5,43 (m, 1H), 4,34 (br d, J=3,2 Hz, 2H), 3,54 - 3,45 (m, 5H), 3,44 - 3,34 (m, 1H), 3,16 (t, <7=6,0 Hz, 2H), 2,96 - 2,75 (m, 4H), 2,75 - 2,56 (m, 2H), 2,02 1,88 (m, 2H), 1,31 - 1,19 (m, 9H). ¹⁹F RMN (376MHz, CD3OD) -77,33 (br

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181/197 d, <7=5,6 Hz, 3F) LCMS (m/z 477,1 (M+H)).

Exemplo 50

Preparação de ácido 3-[2-metóxi-5-(4-metoxitetrahidropiran-4il)fenil]-4-[l-metil-5-[2-(5,6,7,8-tetrahidro-l,8-naftiridin-2il)etóxi]pirazol-3-il]butanoico

262. O Exemplo 50 foi preparado de maneira análoga ao Exemplo 1, utilizando 2-metóxi-5-(4-metoxitetrahidro-2H-piran-4il)benzaldeído como o benzaldeído requerido no Esquema de reação 3. O produto bruto foi purificado por prep-HPLC (Condição de TEA: coluna: Boston Prime C18 150*30mm 5qm; fase móvel: [água (0,05% de hidróxido de amônia v/v)-ACN]; B%: 20%-50%,7 min. O composto do título (55,5 mg, 94,6 qmoles, 97% de pureza, sal de sódio) foi obtido na forma de um sólido branco. ^XH RMN (400MHz, CD3OD) δ 7,19 (d, <7=7,3 Hz, 1H), 7,15 (dd, J=2,0, 8,5 Hz, 1H), 7,11 (d, J=2,0 Hz, 1H), 6,89 (d, <7=8,5 Hz, 1H), 6,41 (d, J=7,3 Hz, 1H), 5,32 (s, 1H), 4,21 (t, J=6,5 Hz, 2H), 3,82 (s, 3H), 3,80 - 3,78 (m, 1H), 3,77 - 3,64 (m, 4H), 3,38 - 3,34 (m, 2H), 3,33 (s, 3H), 2,99 - 2,80 (m, 4H), 2,79 (s, 3H), 2,70 (br t, J=6,l Hz, 2H), 2,63 (d, J=7,3 Hz, 2H), 1,94 - 1,88 (m, 4H), 1,88 - 1,82 (m, 2H).

263. 2-Metóxi-5-(4-metoxitetrahidro-2H-piran-4-il)benzaldeído foi sintetizado de uma maneira similar à do benzaldeído no Esquema 12, substituindo 5-bromo-2-metoxibenzaldeído por 3-bromo-5-clorobenzaldeído e tetrahidro-4H-piran-4-ona por tetrahidropiran-4carboxilato de metila.

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IX. Resultados dos Ensaios Biológicos

264. As atividades de inibição de integrina dos compostos da presente divulgação são mostradas na Tabela 5 junto com os dados dos Compostos de Comparação 1 e 2 (CC1 e CC2), que são representados na Tabela 3.

265. Os métodos para a realização de cada ensaio são descritos abaixo.

Tabela 5: Dados do Ensaio de Inibição de Integrina

Exemplo	ανβι SPRA IC50 (nM)	ανββ SPRA IC50 (nM)	ανβδ SPRA IC50 (nM)	ανββ SPRA IC50 (nM)	ανββ SPRA IC50 (nM)	αββι SPRA IC50 (nM)
Exemplo 1	6	5	0,9	35	52	229
Exemplo 2	5	4	0,3	43	32	192
Exemplo 3	5	3	0,4	99	114	114
Exemplo 4	5	3	0,5	189	79	343
Exemplo 5	11	6	0,4	73	16	140
Exemplo 6	10	5	0,4	8	19	158
Exemplo 7	7	7	0,6	50	23	224
Exemplo 8	12	6	1	52	48	166
Exemplo 9	9	6	0,2	12	62	110
Exemplo 10	17	3,6	1	25	12	120

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Exemplo	ανβι SPRA IC50 (nM)	ανββ SPRA IC50 (nM)	ανβδ SPRA IC50 (nM)	ανββ SPRA IC50 (nM)	ανββ SPRA IC50 (nM)	αββι SPRA IC50 (nM)
Exemplo 11	11	6	0,8	60	42	150
Exemplo 12	4,5	4,3	0,1	27	14	NT
Exemplo 13	5,8	11	16	51	26	59
Exemplo 14	5	6,7	7,9	22	12	44
Exemplo 15	3,8	2,6	0,3	49	90	85
Exemplo 16	3	7,7	3,1	80	7,8	30
Exemplo 17	4,4	7,4	0,4	28	6,9	11
Exemplo 18	1,4	84	180	620	85	6,4
Exemplo 19	6,3	6,4	1,2	45	8,5	15
Exemplo 20	3,9	3,6	0,2	17	14	5,5

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Exemplo	ανβι SPRA IC50 (nM)	ανββ SPRA IC50 (nM)	ανβδ SPRA IC50 (nM)	ανββ SPRA IC50 (nM)	ανββ SPRA IC50 (nM)	αββι SPRA IC50 (nM)
Exemplo 21	3,7	2,5	0,2	47	53	12
Exemplo 22	2,2	3,3	0,6	26	17	8,8
Exemplo 23	3,8	7,5	6,5	38	7,9	8,8
Exemplo 24	4,4	4,5	0,2	110	89	15
Exemplo 25	3,1	4,6	2,9	25	12	12
Exemplo 26	6,8	9,6	1,8	45	9,3	16
Exemplo 27	4,4	5,6	0,5	47	11	18
Exemplo 28	3,9	10	0,8	15	3,5	8,5
Exemplo 29	9,4	5,3	0,5	52	9,5	5,1
Exemplo 30	6,6	8,1	0,5	180	81	12

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Exemplo	ανβι SPRA IC50 (nM)	ανββ SPRA IC50 (nM)	ανβδ SPRA IC50 (nM)	ανββ SPRA IC50 (nM)	ανββ SPRA IC50 (nM)	αββι SPRA IC50 (nM)
Exemplo 31	1,4	6,5	3,3	63	9,9	12
Exemplo 32	0,9	380	280	230	87	33
Exemplo 33	2400	150	3,1	2400	970	3900
Exemplo 34	47	4,6	2,3	130	42	550
Exemplo 35	7,6	10000	10000	1100	120	75
Exemplo 36	6,5	10	1,1	120	40	7,1
Exemplo 37	7,5	7,3	6,2	140	18	7,9
Exemplo 38	4,5	7,9	0,3	110	140	23
Exemplo 39	3,2	290	96	230	110	31
Exemplo 40	6,3	7,2	1,1	79	9	21

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Exemplo	ανβι SPRA IC50 (nM)	ανββ SPRA IC50 (nM)	ανβδ SPRA IC50 (nM)	ανββ SPRA IC50 (nM)	ανββ SPRA IC50 (nM)	αββι SPRA IC50 (nM)
Exemplo 41	4,5	9	2,2	85	6,9	6,5
Exemplo 42	2,4	18	6,6	20	3,1	2,1
Exemplo 43	7,3	94,4	16,6	800	88	77
Exemplo 44	14	270	76	7100	360	230
Exemplo 45	3	7,7	3,1	80	7,8	30
Exemplo 46	8,1	9,9	1	30	31	51
Exemplo 47	4,9	4,9	0,3	77	3,6	13
Exemplo 48	19	5	0,7	680	92	230
Exemplo 49	4,4	7	0,4	94	73	12
CC1	7	3	0,3	132	100	79
CC2	19	3,1	0,2	54	680	770

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NT = Não Testado

Ensaio de Receptor em Fase Sólida (SPRA) para a Função de α5β1

266. A fibronectina humana purificada (R&D Systems, 1918-FN) diluída até 2 gg/mL em tampão TBS+ (25 mM de Tris pH 7,4, 137 mM de NaCl, 2,7 mM de KC1, 1 mM de CaCl₂, 1 mM de MgCl₂, 1 mM de MnCl₂) foi adicionada nos poços (50 μΕ/poço) de uma placa de microtitulação transparente de meio-poço de 96 poços (Costar 3690) e incubada durante toda a noite a 4 °C. Os poços foram lavados 3 vezes com 150 μΕ de TBS+ e então 150 μΕ de tampão de bloqueio (TBS+ com 1% de albumina do soro bovino, Sigma A7906) foram adicionados. A placa foi incubada durante 1 h a 37 °C e, então, lavada 3χ com tampão TBS+. A integrina α5β1 humana recombinante (R&D Systems, 3230-A5) foi diluída até 0,1 gg/mL em TBS+/0,l% de albumina do soro bovino e 49 μΕ foram adicionados em cada poço. Os compostos foram diluídos até 20 μΜ e então 1 μΕ foi adicionado em cada poço da placa de acordo com um molde padronizado com cada amostra repetida em triplicata. Após a incubação durante duas horas à temperatura ambiente, a placa foi lavada 3^X com 150 μΕ de tampão TBS+. Em cada poço, 50 μΕ de anticorpo anti-a5 biotinilado (R&D Systems, BAF1864) a 0,5 μg/mL em TBS+/O,1% de BSA foram adicionados e a placa foi coberta e incubada durante 1 h à temperatura ambiente. Após lavar a placa 3^X com 150 μΕ de tampão TBS+, 50 μΕ de peroxidase de raiz forte conjugada à estreptavidina (R&D Systems, DY998) diluída em tampão TBS+ de bloqueio foram adicionados nos poços e a placa foi incubada durante 20 min à temperatura ambiente. A placa foi lavada 3^X com tampão TBS+ seguido por 50 μΕ de substrato TMB à temperatura ambiente (Sigma, T4444) adicionados em cada poço na escuridão e a placa foi incubada durante 25 min à temperatura ambiente. 25 μΕ de ácido fosfórico a 1,0 M foram adicionados como uma solução de interrupção e as placas

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188/197 foram lidas em 450 nm utilizando uma leitora de placas Spectramax. Curvas de resposta à concentração foram construídas através da análise de regressão não linear (melhor ajuste) e os valores de IC50 foram calculados para cada composto.

Ensaio de Receptor em Fase Sólida (SPRA) para a Função de ανβΐ

267. A fibronectina humana purificada (R&D Systems, 1918-FN) diluída até 5 gg/mL em tampão TBS+ (25 mM de Tris pH 7,4, 137 mM de NaCl, 2,7 mM de KC1, 1 mM de CaCh, 1 mM de MgCh, 1 mM de MnCh) foi adicionada nos poços (50 μΕ/poço) da placa de microtitulação transparente de meio-poço de 96 poços (Costar 3690) e incubada durante toda a noite a 4 °C. Os poços foram lavados 3 vezes com 150 μΕ de TBS+ e então 150 μΕ de tampão de bloqueio (TBS+ com 1% de albumina do soro bovino, Sigma A7906) foram adicionados. A placa foi incubada durante 1 h a 37 °C e então lavada 3* com tampão TBS+. A integrina ανβΐ humana recombinante (R&D Systems. 6579-AV) foi diluída até 2,0 gg/mL em TBS+/O,1% de albumina do soro bovino e 49 μΕ foram adicionados em cada poço. Os compostos foram diluídos até 20 μΜ e 1 μΕ foi adicionado em cada poço da placa de acordo com um molde padronizado com cada amostra repetida em triplicata. Após a incubação durante duas horas à temperatura ambiente, a placa foi lavada 3* com 150 μΕ de tampão TBS+. Em cada poço, 50 μΕ de anticorpo anti-αν biotinilado (R&D Systems, BAF1219) a 1 μg/mL em TBS+/O,1% de BSA foram adicionados e a placa foi coberta e incubada durante 1 h à temperatura ambiente. Após lavar a placa 3* com 150 μΕ de tampão TBS+, 50 μΕ de peroxidase de raiz forte conjugada à estreptavidina (R&D Systems, DY998) diluída em tampão TBS+ de bloqueio foram adicionados nos poços e a placa foi incubada durante 20 min à temperatura ambiente. A placa foi lavada 3* com tampão TBS+ seguido por 50 μΕ de substrato TMB (Sigma, T4444) adicionados em

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189/197 cada poço na escuridão e a placa foi incubada durante 25 min à temperatura ambiente. 25 qL de ácido fosfórico a 1,0 M foram adicionados como uma solução de interrupção e as placas foram lidas em 450 nm utilizando uma leitora de placas Spectramax. Curvas de resposta à concentração foram construídas através da análise de regressão não linear (melhor ajuste) e os valores de IC50 foram calculados para cada composto.

Ensaio de Receptor em Fase Sólida (SPRA) para a Função de ανβ3

268. A vitronectina humana recombinante (R & D Systems, 2308-VN) diluída até 1 qg/mL em tampão TBS+ (25 mM de Tris pH 7,4, 137 mM de NaCl, 2,7 mM de KC1, 1 mM de CaCl₂, 1 mM de MgCl₂, 1 mM de MnCl₂) foi adicionada nos poços (50 qL/poço) da placa de microtitulação transparente de meio-poço de 96 poços (Costar 3690) e incubada durante toda a noite a 4 °C. Os poços foram lavados 3 vezes com 150 qL de TBS+ e então 150 qL de tampão de bloqueio (TBS+ com 1% de albumina do soro bovino, Sigma A7906) foram adicionados. A placa foi incubada durante lha 37°C e então lavada 3* com tampão TBS+. A integrina humana recombinante ανβ3 (R&D Systems, 3050-AV) foi diluída até 1 qg/mL em TBS+/O,1% de albumina do soro bovino e 49 qL foram adicionados em cada poço. Os compostos foram diluídos até 20 qM e então 1 qL foi adicionado em cada poço da placa de acordo com um molde padronizado com cada amostra repetida em triplicata. Após a incubação durante duas horas à temperatura ambiente, a placa foi lavada 3* com 150 qL de tampão TBS+. Em cada poço, 50 qL de anticorpo anti-αν biotinilado (R&D Systems, BAF1219) a 0,5 qg/mL em TBS+/O,1% de BSA foram adicionados e a placa foi coberta e incubada durante 1 h à temperatura ambiente. Após lavar a placa 3* com 150 qL de tampão TBS+, 50 qL de peroxidase de raiz forte conjugada à estreptavidina (R&D Systems, DY998) diluída em tampão TBS+ de

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190/197 bloqueio foram adicionados nos poços e a placa foi incubada durante 20 min à temperatura ambiente. A placa foi lavada 3* com tampão TBS+ seguido por 50 qL de substrato TMB (Sigma, T4444) adicionados em cada poço na escuridão e a placa foi incubada durante 25 min à temperatura ambiente. 25 qL de ácido fosfórico a 1,0 M foram adicionados como uma solução de interrupção e as placas foram lidas em 450 nm utilizando uma leitora de placas Spectramax. Curvas de resposta à concentração foram construídas através da análise de regressão não linear (melhor ajuste) e os valores de IC50 foram calculados para cada composto.

Ensaio de Receptor em Fase Sólida (SPRA) para a Função de ανβ5

269. A vitronectina humana recombinante (R& D Systems, 2308-VN) a 0,25 qg/mL em tampão TBS+ (25 mM de Tris pH 7,4, 137 mM de NaCl, 2,7 mM de KC1, 1 mM de CaCh, 1 mM de MgCh, 1 mM de MnCh) foi adicionada nos poços (50 qL/poço) da placa de microtitulação transparente de meio-poço de 96 poços (Costar 3690) e incubada durante toda a noite a 4 °C. Os poços foram lavados 3 vezes com 150 qL de TBS+ e então 150 qL de tampão de bloqueio (TBS+ com 1% de albumina do soro bovino, Sigma A7906) foram adicionados. A placa foi incubada durante 1 h a 37 °C e então lavada 3* com tampão TBS+. A integrina humana recombinante ανβ5 (R&D Systems, 2528-AV) foi diluída até 0,1 qg/mL em TBS+/0,l% de albumina do soro bovino e 49 qL foram adicionados em cada poço. Os compostos foram diluídos até 20 μΜ e então 1 qL foi adicionado em cada poço da placa de acordo com um molde padronizado com cada amostra repetida em triplicata. Após a incubação durante duas horas à temperatura ambiente, a placa foi lavada 3* com 150 qL de tampão TBS+. Em cada poço, 50 qL de anticorpo anti-αν biotinilado (R&D Systems, BAF1219) a 0,5 qg/mL em TBS+/O,1% de BSA a 0,5 qg/mL foram adicionados e a placa foi coberta

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191/197 e incubada durante 1 h à temperatura ambiente. Após lavar a placa 3χ com 150 qL de tampão TBS+, 50 qL de peroxidase de raiz forte conjugada à estreptavidina (R&D Systems, DY998) diluída em tampão TBS+ de bloqueio foram adicionados nos poços e a placa foi incubada durante 20 min à temperatura ambiente. A placa foi lavada 3* com tampão TBS+ seguido por 50 qL de substrato TMB (Sigma T4444) adicionados em cada poço na escuridão e a placa foi incubada durante 5 min à temperatura ambiente. 25 qL de ácido fosfórico a 1,0 M foram adicionados como uma solução de interrupção e as placas foram lidas em 450 nm utilizando uma leitora de placas Spectramax. Curvas de resposta à concentração foram construídas através da análise de regressão não linear (melhor ajuste) e os valores de IC50 foram calculados para cada composto.

Ensaio de Receptor em Fase Sólida (SPRA) para a Função de ανβ6

270. LAP humana recombinante (R&D Systems, 246-LP) diluída até 0,25 qg/mL em tampão TBS+ (25 mM de Tris pH 7,4, 137 mM de NaCl, 2,7 mM de KC1, 1 mM de CaCl₂, 1 mM de MgCl₂, 1 mM de MnCl₂) foi adicionada nos poços (50 qL/poço) da placa de microtitulação transparente de meio-poço de 96 poços (Costar 3690) e incubada durante toda a noite a 4 °C. Os poços foram lavados 3 vezes com 150 qL de TBS+ e então 150 qL de tampão de bloqueio (TBS+ com 1% de albumina do soro bovino, Sigma A7906) foram adicionados. A placa foi incubada durante 1 h a 37 °C e então lavada 3* com tampão TBS+. A integrina humana recombinante ανβ6 (R&D Systems, 3817-AV) foi diluída até 0,1 qg/mL em TBS+/O,1% de albumina do soro bovino e 49 qL foram adicionados em cada poço. Os compostos foram diluídos até 20 qM e então 1 qL foi adicionado em cada poço da placa de acordo com um molde padronizado com cada amostra repetida em triplicata. Após a incubação durante duas horas à temperatura ambiente, a placa foi

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192/197 lavada 3^χ com 150 qL de tampão TBS+. Em cada poço, 50 qL de anticorpo anti-αν biotinilado (R&D Systems, BAF1219) a 0,5 qg/mL em TBS+/O,1% de BSA foram adicionados e a placa foi coberta e incubada durante 1 h à temperatura ambiente. Após lavar a placa 3x com 150 qL de tampão TBS+, 50 qL de peroxidase de raiz forte conjugada à estreptavidina (R&D Systems, DY998) diluída em tampão TBS+ de bloqueio foram adicionados nos poços e a placa foi incubada durante 20 min à temperatura ambiente. A placa foi lavada 3* com tampão TBS+ seguido por 50 qL de substrato TMB (Sigma T4444) adicionados em cada poço na escuridão e a placa foi incubada durante 10 min à temperatura ambiente. 25 qL de ácido fosfórico a 1,0 M foram adicionados como uma solução de interrupção e as placas foram lidas em 450 nm utilizando uma leitora de placas Spectramax. Curvas de resposta à concentração foram construídas através da análise de regressão não linear (melhor ajuste) e os valores de IC50 foram calculados para cada composto.

Ensaio de Receptor em Fase Sólida (SPRA) para a Função de ανβδ

271. A proteína LAP humana recombinante (R&D Systems, Inc, 246-LP) diluída até 0,5 qg/mL em tampão TBS+ (25 mM de Tris pH 7,4, 137 mM de NaCl, 2,7 mM de KC1, 1 mM de CaCl₂, 1 mM de MgCl₂, 1 mM de MnCl₂) foi adicionada nos poços (50 qL/poço) da placa de microtitulação transparente de meio-poço de 96 poços (Costar 3690) e incubada durante toda a noite a 4 °C. Os poços foram lavados 3 vezes com 150 qL de TBS+ e, então, 150 qL de tampão de bloqueio (TBS+ com 1% de albumina do soro bovino, Sigma A7906) foram adicionados. A placa foi incubada durante 1 h a 37 °C e então lavada 3* com TBS+. A integrina humana recombinante ανβ8 (R&D Systems, 4135-AV) foi diluída até 0,1 qg/mL em TBS+/0,l% de albumina do soro bovino e 49 qL foram adicionados em cada poço. Os compostos foram diluídos até

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193/197 μΜ e 1 μΕ foi adicionado em cada poço da placa de acordo com um molde padronizado com cada amostra repetida em triplicata. Após a incubação durante duas horas à temperatura ambiente, a placa foi lavada 3* com 150 μΕ de TBS+. Em cada poço, 50 μΕ de anticorpo antiαν biotinilado (R&D Systems, BAF1219) a 1 μg/mL em TBS+/O,1% de BSA foram adicionados e a placa foi coberta e incubada durante 1 h à temperatura ambiente. Após lavar a placa 3* com 150 μΕ de tampão TBS+, 50 μΕ de peroxidase de raiz forte conjugada à estreptavidina (R&D Systems, DY998) diluído em tampão TBS+ de bloqueio foram adicionados nos poços e a placa foi incubada durante 20 min à temperatura ambiente. A placa foi lavada 3* com TBS+ seguido por 50 μΕ de substrato TMB (Sigma T4444) adicionados em cada poço na escuridão e a placa foi incubada durante 10 min à temperatura ambiente. 25 μΕ de ácido fosfórico a 1,0 M foram adicionados como uma solução de interrupção e as placas foram lidas em 450 nm utilizando uma leitora de placas Spectramax. Curvas de resposta à concentração foram construídas através da análise de regressão não linear (melhor ajuste) e os valores de IC50 foram calculados para cada composto.

272. Enquanto que a divulgação pode ter se concentrado em várias modalidades ou pode ter sido descrita em termos de modalidades preferidas, será evidente para os peritos na técnica que variações e modificações podem ser aplicadas nos compostos, nas composições e nos métodos sem se afastar do espírito, do âmbito e do conceito da invenção. Todas as variações e as modificações evidentes para os peritos na técnica são consideradas como estando dentro do espírito, do âmbito e do conceito da invenção que são definidos pelas Reivindicações em anexo.

REFERÊNCIAS

273. As referências a seguir até a extensão que fornecem

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194/197 exemplos de procedimentos ou outros detalhes suplementares aos apresentados aqui, são especificamente incorporadas aqui como referência.

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Claims (74)

1. REIVINDICAÇÕES

   1. Composto, da fórmula:

   

   ou um sal ou um tautômero farmaceuticamente aceitável do mesmo, caracterizado por que:

   Ri é hidrogênio, Ci-salquila não substituído, Ci-salquila substituído, Cõ ou íoarila não substituído, Cõ ou warila substituído, C7i₂aralquila não substituído ou C7-i₂aralquila substituído;

   R₂ é hidrogênio, Ci-salquila não substituído ou Ci-salquila substituído;

   X é hidrogênio, halo, ciano, Ci-i₂alquila não substituído, Cii₂alquila substituído, Ci-i₂alcóxi não substituído, Ci-i₂alcóxi substituído, Cõ ou warila não substituído, Cõ ou warila substituído, C7i₂aralquila não substituído, C7-i₂aralquila substituído, heteroarila de 510 membros não substituído, heteroarila de 5-10 membros substituído, heterocicloalquila de 3-10 membros não substituído, heterocicloalquila de 3-10 membros substituído, Cõ ou íoarilóxi não substituído, Cõ ou íoarilóxi substituído, C₂-i₂acilóxi não substituído, C₂-i₂acilóxi r₆ substituído ou ^5 , em que R₄ e Rs são cada um independentemente Ci-salquila

   Petição 870190056160, de 17/06/2019, pág. 471/490
2. 2/20 não substituído ou Ci-₈alquila substituído e

   Rõ é hidrogênio, -OH, -CN, -NH₂, -CF₃, -CF₂H, -CH₂F, -CO₂H, -CO₂-Ci-₈alquila, -C(=O)NH₂, -CH₂OH, -CH₂O-Ci-₈alquila ou Ci-₈alcóxi ou em que A' é -CF₂-, -O-, Ci-õalcanodiila, Ci-₈alcoxidiila ou uma ligação covalente, formando assim um anel ciclopropano e

   R₇ é -OH, -CN, -NH₂, -CO₂H, -CO₂-Ci-₈alquila, -C(=O)NH₂, -CF₃, -CF₂H, -CH₂F, -CH₂OH, -CH₂O-Ci-₈alquila, Cisalquila ou Ci-₈alcóxi;

   Y é t-butila ou em que R₈ e R9 são cada um independentemente Cl8alquila não substituído ou Cl-8alquila substituído e Rio é hidrogênio, -OH, -CN, -NH₂, -CF₃, -CF₂H, -CFH₂, -CO₂H, -CO₂- Ci-₈alquila, -C(=O)NH₂, -CH₂OH, CH₂O-Ci-₈alquila ou Ci-₈alcóxi ou

   Y é ^R11 , em que A é -CF₂-, -O-, Ci-õalcanodiila,

   Ci-₈alcoxidiila ou uma ligação covalente, formando assim um anel ciclopropano; e Rn é -OH, -CN, -NH₂, -CO₂H, -CO₂-Ci-₈alquila,

   Petição 870190056160, de 17/06/2019, pág. 472/490
3. 3/20

   -C(=O)NH₂, -CF₃, -CF₂H, -CH₂F, -CH₂OH, -CH₂O-Ci-₈alquila, Cisalquila ou Ci-₈alcóxi.

   2. Composto, de acordo com a Reivindicação 1, caracterizado por que é definido adicionalmente como:

   

   ou um sal ou um tautômero farmaceuticamente aceitável do mesmo.

   3. Composto, de acordo com a Reivindicação 1, definido adicionalmente como:

   

   (laa) ou

   

   ou um sal ou um tautômero farmaceuticamente aceitável do mesmo,

   Petição 870190056160, de 17/06/2019, pág. 473/490
4. 4/20 caracterizado por que:

   Ri é Ci-salquila não substituído, Ci-salquila substituído, Cõ ou íoarila não substituído, Cõ ou íoarila substituído, Cz-ioaralquila não substituído ou Cy-ioaralquila substituído;

   R₂ é hidrogênio, Ci-õalquila não substituído ou Ci-õalquila substituído;

   X é halo, ciano, Ci-i₂alquila não substituído, Ci-i₂alquila substituído, Ci-i₂alcóxi não substituído, Ci-i₂alcóxi substituído, Cõ ou íoarila não substituído, Cõ ou íoarila substituído, C7-ioaralquila não substituído, C7-ioaralquila substituído, heteroarila de 5-10 membros não substituído, heteroarila de 5-10 membros substituído, heterocicloalquila de 3-10 membros não substituído, heterocicloalquila de 3-10 membros substituído, Cõ ou íoarilóxi não substituído, Cõ ou íoarilóxi substituído, C₂-i₂acilóxi não substituído, C₂-i₂acilóxi r₆

   

   

   em que A' é -CF₂-, -O-, Ci-õalcanodiila, Ci-salcoxidiila ou uma ligação covalente, formando assim um anel ciclopropano;

   Rs e R9 são cada um independentemente Ci-õalquila não substituído ou Ci-õalquila substituído; e e Rio é hidrogênio, -OH, -CN, -NH₂, -CF₃, -CF₂H, -CFH₂, -CO₂H, -CO₂-Ci-₆alquila, -C(=O)NH₂, -CH₂OH, CH₂O-Ci-_Õalquila ou

   Petição 870190056160, de 17/06/2019, pág. 474/490
5. 5/20

   Ci-õalcóxi.

   4. Composto, de acordo com a Reivindicação 1, caracterizado por que é definido adicionalmente como:

   

   ou um sal ou um tautômero farmaceuticamente aceitável do mesmo.

   5. Composto, de acordo com qualquer uma das Reivindicações 1-4, caracterizado por que Ri é Ci-salquila não substituído.
6. 6. Composto, de acordo com a Reivindicação 5, caracterizado por que Ri é metila.
7. 7. Composto, de acordo com qualquer uma das Reivindicações 1-6, caracterizado por que R2 é hidrogênio.
8. 8. Composto, de acordo com qualquer uma das Reivindicações 1-7, caracterizado por que X é hidrogênio, halo, ciano, Ci-i2alquila não substituído, Ci-i2alquila substituído, Ci-i2alcóxi não substituído, Cii2alcóxi substituído, Cõ ou warila não substituído, Cõ ou warila substituído, não substituído C7-i2aralquila, C7-i2aralquila substituído, heteroarila de 5-10 membros não substituído, heteroarila de 5-10 membros substituído, heterocicloalquila de 3-10 membros não substituído, heterocicloalquila de 3-10 membros substituído, Cõ ou

   Petição 870190056160, de 17/06/2019, pág. 475/490

   6/20 íoarilóxi não substituído, Cõ ou warilóxi substituído, Ca-isacilóxi não substituído ou C2-i2acilóxi substituído.
9. 9. Composto, de acordo com qualquer uma das Reivindicações 1-7, caracterizado por que X é hidrogênio, halo, ciano, Ci-i2alcóxi não substituído, Ci-i2alcóxi substituído, Cõ ou warila não substituído, Cõ ou íoarila substituído, C7-i2aralquila não substituído, C7-i2aralquila substituído, heteroarila de 5-10 membros não substituído, heteroarila de 5-10 membros substituído, heterocicloalquila de 3-10 membros não substituído, heterocicloalquila de 3-10 membros substituído, Cõ ou íoarilóxi não substituído, Cõ ou íoarilóxi substituído, C2-i2acilóxi não

   5 Λ ^r6 substituído, C2-i2acilóxi substituído ou ^5
10. 10. Composto, de acordo com qualquer uma das Reivindicações 1-7, caracterizado por que X é halo.
11. 11. Composto, de acordo com a Reivindicação 8, caracterizado por que X é bromo, fluor ou cloro.
12. 12. Composto, de acordo com qualquer uma das Reivindicações 1-7, caracterizado por que X é -CF3.
13. 13. Composto, de acordo com qualquer uma das Reivindicações 1-7, caracterizado por que X é -OH ou ciano.
14. 14. Composto, de acordo com qualquer uma das Reivindicações 1-7, caracterizado por que X é Ci-salquila não substituído.
15. 15. Composto, de acordo com a Reivindicação 14, caracterizado por que X é Cs-õalquila não substituído.
16. 16. Composto, de acordo com a Reivindicação 15, caracterizado por

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    7/20 que X é t-butila.
17. 17. Composto, de acordo com qualquer uma das Reivindicações 1-7, caracterizado por que X é Ci-salcóxi não substituído.
18. 18. Composto, de acordo com a Reivindicação 17, caracterizado por que X é metóxi ou isopropóxi.
19. 19. Composto, de acordo com qualquer uma das Reivindicações 1-3 e 5-18, caracterizado por que Y é t-butila.
20. 20. Composto, de acordo com qualquer uma das Reivindicações 1-3 e > Λ r₉

    5-18, caracterizado por que Y é ^10
21. 21. Composto, de acordo com a Reivindicação 20, caracterizado por que Rs e R9 são cada um independentemente Ca-salquila não substituído.
22. 22. Composto, de acordo com a Reivindicação 20, caracterizado por que Rs é metila e R9 é Ca-salquila não substituído.
23. 23. Composto, de acordo com a Reivindicação 20, caracterizado por que Rs e R9 são cada um -CH3.
24. 24. Composto, de acordo com qualquer uma das Reivindicações 20-23, caracterizado por que Rio é -CF3, -CF2H ou -CFH2.
25. 25. Composto, de acordo com a Reivindicação 24, caracterizado por que Rio é -CF3.
26. 26. Composto, de acordo com a Reivindicação 20, caracterizado por que Rio é hidrogênio ou -CH3.
27. 27. Composto, de acordo com qualquer uma das Reivindicações 1-3 e

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    8/20

    

    5-18, caracterizado por que Y é ^11
28. 28. Composto, de acordo com a Reivindicação 27, caracterizado por que A é Ci-salcanodiila, Ci-4alcoxidiila ou uma ligação covalente, formando assim um anel ciclopropano.
29. 29. Composto, de acordo com a Reivindicação 27, caracterizado por que A é uma ligação covalente, formando assim um anel ciclopropano.
30. 30. Composto, de acordo com qualquer uma das Reivindicações 27 -

    29, caracterizado por que Ru é -CF3, -CF2H, -CH2F, -CH2O-C1õalquila, Ci-õalquila ou Ci-salcóxi.
31. 31. Composto, de acordo com qualquer uma das Reivindicações 27-30, caracterizado por que Ru é -CF3, -CF2H, -CH2F, Ci-õalquila ou Ciõalcóxi.
32. 32. Composto, de acordo com a Reivindicação 31, caracterizado por que Ru é -CF3, -CF2H ou metóxi.
33. 33. Composto, de acordo com a Reivindicação 32, caracterizado por que Ru é -CF3 ou -CF2H.
34. 34. Composto, de acordo com a Reivindicação 32, caracterizado por que Ru é -CH2O-CH3.
35. 35. Composto, de acordo com qualquer uma das Reivindicações 1-34, caracterizado por que o átomo de carbono 21 está na configuração S.
36. 36. Composto, de acordo com qualquer uma das Reivindicações 1 e 335, caracterizado por que X está na posição 3.
37. 37. Composto, de acordo com qualquer uma das Reivindicações 1 e 5

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    9/20

    36, caracterizado por que Y está na posição 4 ou 5.
38. 38. Composto, de acordo com qualquer uma das Reivindicações 1-37, caracterizado por que o composto é um antagonista de integrina.
39. 39. Composto, de acordo com a Reivindicação 38, caracterizado por que a integrina é um antagonista de integrina αδβι.
40. 40. Composto, de acordo com a Reivindicação 39, caracterizado por que o composto exibe um valor de IC50 para a integrina α5β1 menor que 50 nM, 40 nM, 30 nM, 20 nM, 15 nm ou 1 nM ou uma faixa definida por qualquer um dos anteriores que é medida através de um ensaio de receptor em fase sólida em relação à função da integrina αδβι.
41. 41. Composto, de qualquer uma das Reivindicações 38-40, caracterizado por que a integrina é um antagonista da integrina ανβι.
42. 42. Composto, de acordo com qualquer uma das Reivindicações 1-39, caracterizado por que o composto exibe um valor de IC50 para a integrina αλ/βΐ menor que 15 nM que é medida através de um ensaio de receptor em fase sólida em relação à função da integrina αλ/βΐ.
43. 43. Composto, de acordo com qualquer uma das Reivindicações 1-42, caracterizado por que o composto exibe um valor de IC50 para uma integrina αΎββ menor que 10 nM que é medido através de um ensaio de receptor em fase sólida em relação à função da integrina αλ/ββ.
44. 44. Composto, de acordo com qualquer uma das Reivindicações 1-4β, caracterizado por que o composto exibe um valor de IC50 para uma integrina ανβ5 menor que 10 nM que é medido através de um ensaio de receptor em fase sólida em relação à função da integrina αΎβ5.
45. 45. Composto, de acordo com qualquer uma das Reivindicações 1-44, caracterizado por que o composto exibe um valor de IC50 para as

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    10/20 integrinas ανβι, ανβ3 e ανβ5 menor que 10 nM que é medido através de um ensaio de receptor em fase sólida em relação à função das integrinas ανβι, ανβ3 e ανβ5.
46. 46. Composto, de acordo com qualquer uma das Reivindicações 1-45, caracterizado por que o composto exibe um valor de IC50 para uma integrina ανβό maior que 10 nM que é medido através de um ensaio de receptor em fase sólida em relação à função da integrina ανβό.
47. 47. Composto, de acordo com qualquer uma das Reivindicações 1-46, caracterizado por que o composto exibe um valor de IC50 para uma integrina ανβδ maior que 10 nM que é medido através de um ensaio de receptor em fase sólida em relação à função da integrina ανβδ.
48. 48. Composto, de acordo com qualquer uma das Reivindicações 1-47, caracterizado por que o composto exibe um valor de IC50 para as integrinas ανβό e ανβδ maior que 10 nM que é medido através de ensaios de receptor em fase sólida em relação à função das integrinas ανβό e ανβδ.
49. 49. Composto, de acordo com a Reivindicação 1, caracterizado por que o composto é definido adicionalmente como:

    

    ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo.

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    11/20
50. 50. Composto, de acordo com a Reivindicação 1, caracterizado por que é definido adicionalmente como:

    

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    12/20

    

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    13/20

    

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    14/20

    

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    15/20

    

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    16/20

    

    ou um sal farmaceuticamente aceitável dos mesmos.
51. 51. Composição Farmacêutica, caracterizada por que compreende:

    a) o composto conforme definido em qualquer uma das Reivindicações 1-50; e

    b) um excipiente.
52. 52. Composição Farmacêutica, de acordo com a Reivindicação 51, caracterizada por que a composição farmacêutica é formulada para administração: de forma oral, intra-adiposa, intra-arterial, intraarticular, intracraniana, intradérmica, intralesional, intramuscular, intranasal, intraocular, intrapericardial, intraperitoneal, intrapleural, intraprostática, intrarretal, intratecal, intratraqueal, intratumoral, intraumbilical, intravaginal, intravenosa, intravesicular, intravitrea, liposomal, local, mucosal, parenteral, retal, subconjuntival, subcutânea, sublingual, tópica, transbucal, transdérmica, vaginal, em cremes, em composições lipídicas, através de um catéter, através de uma lavagem, através de infusão contínua, através de infusão, através de inalação, através de injeção, através de fornecimento local ou através de perfusão localizada.

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    17/20
53. 53. Composição Farmacêutica, de acordo com a Reivindicação 51 ou 52, caracterizada por que a composição farmacêutica é formulada para administração oral, tópica, intravenosa ou intravítrea.
54. 54. Composição Farmacêutica, de acordo com qualquer uma das Reivindicações 51-53, caracterizada por que a composição farmacêutica é formulada na forma de uma dose unitária.
55. 55. Método Para Tratamento e/ou Para Prevenção de Doença ou Distúrbio em Paciente Que Necessite do Mesmo, caracterizado por que compreende a administração ao paciente de um composto ou uma composição de acordo com qualquer uma das Reivindicações 1-54 em uma quantidade suficiente para tratar e/ou prevenir a doença ou o distúrbio.
56. 56. Método Para Tratamento e/ou Para Prevenção de Doença ou Distúrbio em Paciente Que Necessite do Mesmo, de acordo com a Reivindicação 55, caracterizado por que a doença ou o distúrbio está associado à fibrose.
57. 57. Método Para Tratamento e/ou Para Prevenção de Doença ou Distúrbio em Paciente Que Necessite do Mesmo, de acordo com a Reivindicação 55 ou 56, caracterizado por que a doença ou o distúrbio é escleroderma ou fibrose dos pulmões, do fígado, dos rins, do coração, da pele ou do pâncreas.
58. 58. Método Para Tratamento e/ou Para Prevenção de Doença ou Distúrbio em Paciente Que Necessite do Mesmo, de acordo com a Reivindicação 57, caracterizado por que a doença ou o distúrbio é fibrose dos pulmões.
59. 59. Método Para Tratamento e/ou Para Prevenção de Doença ou Distúrbio em Paciente Que Necessite do Mesmo, de acordo com a Reivindicação 57, caracterizado por que a doença ou o distúrbio é

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    18/20 fibrose do fígado.
60. 60. Método Para Tratamento e/ou Para Prevenção de Doença ou Distúrbio em Paciente Que Necessite do Mesmo, de acordo com a Reivindicação 57, caracterizado por que a doença ou o distúrbio é fibrose do coração.
61. 61. Método Para Tratamento e/ou Para Prevenção de Doença ou Distúrbio em Paciente Que Necessite do Mesmo, de acordo com a Reivindicação 57, caracterizado por que a doença ou o distúrbio é fibrose dos rins.
62. 62. Método Para Tratamento e/ou Para Prevenção de Doença ou Distúrbio em Paciente Que Necessite do Mesmo, de acordo com a Reivindicação 57, caracterizado por que a doença ou o distúrbio é fibrose do pâncreas.
63. 63. Método Para Tratamento e/ou Para Prevenção de Doença ou Distúrbio em Paciente Que Necessite do Mesmo, de acordo com a Reivindicação 57, caracterizado por que a doença ou o distúrbio é fibrose da pele.
64. 64. Método Para Tratamento e/ou Para Prevenção de Doença ou Distúrbio em Paciente Que Necessite do Mesmo, de acordo com a Reivindicação 57, caracterizado por que a doença ou o distúrbio é escleroderma.
65. 65. Método Para Tratamento e/ou Para Prevenção de Doença ou Distúrbio em Paciente Que Necessite do Mesmo, de acordo com a Reivindicação 55-64, caracterizado por que o paciente é um ser humano, um macaco, um bovino, um equino, um ovino, um caprino, um cachorro, um gato, um camundongo, um rato, um porquinho da índia ou espécies transgênicas dos mesmos.

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66. 66. Método Para Tratamento e/ou Para Prevenção de Doença ou Distúrbio em Paciente Que Necessite do Mesmo, de acordo com a Reivindicação 65, caracterizado por que o paciente é um macaco, um bovino, um equino, um ovino, um caprino, um cachorro, um gato, um camundongo, um rato ou um porquinho da índia.
67. 67. Método Para Tratamento e/ou Para Prevenção de Doença ou Distúrbio em Paciente Que Necessite do Mesmo, de acordo com a Reivindicação 65, caracterizado por que o paciente é um ser humano.
68. 68. Método de Inibição da Ligação de Integrina, caracterizado por que compreende o contato da integrina com um composto ou uma composição conforme definida em qualquer uma das Reivindicações 154.
69. 69. Método de Inibição da Ligação de Integrina, de acordo com a Reivindicação 68, caracterizado por que a integrina é αββι, ανβι, ανβ3 ou ανβδ.
70. 70. Método de Inibição da Ligação de Integrina, de acordo com a Reivindicação 69, caracterizado por que a integrina é ανβι.
71. 71. Método de Inibição da Ligação de Integrina, de acordo com a Reivindicação 69, caracterizado por que a integrina é αββι.
72. 72. Método de Inibição da Ligação de Integrina, de acordo com qualquer uma das Reivindicações 68-71, caracterizado por que o método é realizado in vitro.
73. 73. Método de Inibição da Ligação de Integrina, de acordo com qualquer uma das Reivindicações 68-71, caracterizado por que o método é realizado ex vivo ou in vivo.
74. 74. Método de Inibição da Ligação de Integrina, de acordo com qualquer uma das Reivindicações 68-71 e 73, caracterizado por que a

    Petição 870190056160, de 17/06/2019, pág. 489/490

    20/20 inibição da ligação é suficiente para tratar ou para prevenir uma doença ou um distúrbio em um paciente.