KR20190100232A - 인테그린 길항제 - Google Patents

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KR20190100232A
KR20190100232A KR1020197019720A KR20197019720A KR20190100232A KR 20190100232 A KR20190100232 A KR 20190100232A KR 1020197019720 A KR1020197019720 A KR 1020197019720A KR 20197019720 A KR20197019720 A KR 20197019720A KR 20190100232 A KR20190100232 A KR 20190100232A
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KR
South Korea
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unsubstituted
substituted
alkyl
αvβ
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Application number
KR1020197019720A
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English (en)
Inventor
피터 지. 루민스키
데이비드 더블유. 그릭스
스콧 세이웰트
Original Assignee
세인트 루이스 유니버시티
인달로 테라퓨틱스, 인크.
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Publication date
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    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
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    • C07D471/02—Heterocyclic compounds containing nitrogen atoms as the only ring hetero atoms in the condensed system, at least one ring being a six-membered ring with one nitrogen atom, not provided for by groups C07D451/00 - C07D463/00 in which the condensed system contains two hetero rings
    • C07D471/04—Ortho-condensed systems
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Abstract

본 기재 내용은 이하의 화학식 (Ⅰ)의 화합물을 포함하는 약제를 제공한다:
Figure pct00197

상기의 변수가 본원에서 정의된다. 약학적 조성물, 키트, 및 이러한 약제를 포함하는 제조 물품도 또한 제공된다. 약제의 사용 방법도 또한 제공된다. 화합물은 인테그린 αvβ1 및/또는 α5β1의 저해 또는 길항작용을 위해 사용될 수 있다. 일부 구현예에서, 본원에 제공된 화합물은 인테그린 αvβ3, αvβ5, αvβ6, αvβ8, 및/또는 αIIbβ3의 저해 또는 길항 활성이 감소된 것으로 나타났다.

Description

인테그린 길항제
임의의 우선권 출원에 대한 참고로서의 포함
출원 데이터 시트 또는 이에 대한 임의의 보정서에서 확인된 임의의 또는 모든 우선권 주장은, 37 CFR 1.57 하에 본원에서 참고로 포함된다.
본 발명의 기술 분야
본원의 기재 내용은 약학, 의학 및 세포 생물학 분야에 관한 것이다. 더욱 구체적으로는, 이는 인테그린 길항제로서 유용한 약제(화합물)에 관한 것이다.
인테그린은 다른 세포들 및 세포외 메트릭스와의 상호작용을 매개하는 막관통 세포질 막 단백질의 부류이다. 최근, 인테그린 αvβ1은 다양한 섬유성 질환에 역할을 하는 것으로 밝혀졌다. 다른 인테그린, 예컨대 αvβ3 및 αvβ5도 또한 섬유성 질환과 연관되며, 이러한 2개의 인테그린을 저해하는 화합물은 이러한 질환들의 치료에 유용할 수 있다.
인테그린 α5β1은 제9 및 제10 타입의 III 피브로넥틴 반복부를 통합하는 부위에서 피브로넥틴에 결합한다고 여겨지며, 이들 중 후자는 인테그린 결합을 위한 RGD 모티프를 함유하는 것으로 여겨진다. 피브로넥틴 이외에, α5β1은 피브리노겐을 포함하는 다른 RGD-함유 세포외 매트릭스 단백질, 변성된 콜라겐, 및 피브릴린-1과 상호작용하는 것으로 보고되었다 (Bax 등, J. Biol. Chem., 278(36):34605-34616, 2003, 2003; Perdih, Curr. Med. Chem., 17(22):2371-2392, 2010; Suehiro 등, J. Biochem., 128(4):705-710, 2000). 이들 리간드는 일반적으로 조직에서의 상처 치유 반응의 일부로서 세포에 작용하는 가상의 매트릭스의 구성요소로서 분류된다. 이 반응의 구성요소들은 혈관형성 및 섬유증이다.
반대로, 일부 다른 인테그린, 예컨대 αvβ6 및 αvβ8의 저해는 원치않는 다양한 염증-관련된 부작용과 연관된다 (Huang, 등, 1996; Lacy-Hulbert, 등, 2007; Travis, 등, 2007; Worthington, 등, 2015). αvβ1, αvβ3, αvβ5, 및/또는 α5β1의 선택적인 저해는 일부 징후에 대해 바람직하다.
인테그린 αIIbβIII (또한, 당단백질 IIb/IIIa 또는 GPIIb/IIIa로도 알려짐)은 혈소판에서 발견되는 인테그린 복합체이다. 인테그린 αIIbβIII 저해는 혈소판 응집의 방해와 관련되는데, 이는 특정 질병 또는 장애의 치료시 독성 및/또는 사용금지와 관련된다. (King 등, 2016; Bennet, 2005; Giordano 등, 2016; Cook 등, 1997).
발명의 개요
본원의 기재 내용은 신규한 인테그린 수용체 길항제, 약학적 조성물, 및 이의 제조 방법, 및 이의 사용 방법을 제공한다.
일부 측면에서, 본원의 기재 내용은 이하의 화학식의 화합물:
Figure pct00001
또는 상기 화학식의 약학적으로 허용가능한 염, 용매화물 또는 호변이성질체를 제공하며, 여기에서: R1, R2, X, 및 Y는 본원에 기재된 값들 중 임의의 것을 갖는다.
일부 구현예에서, R1은 수소, 알킬(C≤8), 아릴(C≤12), 아랄킬(C≤12), 치환 알킬(C≤8), 치환 아릴(C≤8), 또는 치환 아랄킬(C≤12)이고;
R2은 수소, 알킬(C≤8), 치환 알킬(C≤8), 또는 생체내에서 수소로 전환될 수 있는 치환체이고;
X은 시아노, 할로, 알콕시(C≤8), 치환 알콕시(C≤8), 알킬(C≤8), 또는 치환 알킬(C≤8)이고; 그리고
Y은 수소, 시아노, 할로, 알콕시(C≤8), 치환 알콕시(C≤8), 알킬(C≤8), 또는 치환 알킬(C≤8)이다.
화학식 (I)의 일부 구현예에서, R1은 수소, 비치환 C1-8알킬, 치환 C1-8알킬, 비치환 C6 또는 10아릴, 치환 C6 또는 10아릴, 비치환 C7-12아랄킬, 또는 치환 C7-12아랄킬일 수 있고;
R2는 수소, 비치환 C1-8알킬, 또는 치환 C1-8알킬일 수 있고;
X는 수소, 할로, 시아노, 비치환 C1-12알킬, 치환 C1-12알킬, 비치환 C1-12알콕시, 치환 C1-12알콕시, 비치환 C6 또는 10아릴, 치환 C6 또는 10아릴, 비치환 C7-12아랄킬, 치환 C7-12아랄킬, 비치환 5-10 원의 헤테로아릴, 치환 5-10 원의 헤테로아릴, 비치환 3-10 원의 헤테로시클로알킬, 치환 3-10 원의 헤테로시클로알킬, 비치환 C6 또는 10아릴옥시, 치환 C6 또는 10아릴옥시, 비치환 C2-12아실옥시, 치환 C2-12아실옥시, 또는
Figure pct00002
일 수 있거나
(여기에서, R4 및 R5는 각각 독립적으로 비치환 C1-8알킬 또는 치환 C1-8알킬이고,
R6는 수소, -OH, -CN, -NH2, -CF3, -CF2H, -CH2F, -CO2H, -CO2-C1-8알킬, -C(=O)NH2, -CH2OH, -CH2O-C1-8알킬, 또는 C1-8알콕시일 수 있음), 또는
X은
Figure pct00003
이고,
(여기에서, A′은 -CF2-, -O-, C1-6알칸디일, C1-8알콕시디일, 또는 공유 결합이고, 이에 의해 시클로프로판 고리를 형성하고,
R7는 -OH, -CN, -NH2, -CO2H, -CO2-C1-8알킬, -C(=O)NH2, -CF3, -CF2H, -CH2F, -CH2OH, -CH2O-C1-8알킬, C1-8알킬 또는 C1-8알콕시일 수 있음);
Y는 t-부틸, 또는
Figure pct00004
일 수 있거나
(여기에서, R8 및 R9는 각각 독립적으로 비치환 C1-8알킬 또는 치환 C1-8알킬이고,
R10는 수소, -OH, -CN, -NH2, -CF3, -CF2H, -CFH2, -CO2H, -CO2- C1-8알킬, -C(=O)NH2, -CH2OH, -CH2O-C1-8알킬, 또는 C1-8알콕시일 수 있음), 또는
Y는
Figure pct00005
일 수 있다 (여기에서, A"은 -CF2-, -O-, C1-6알칸디일, C1-8알콕시디일, 또는 공유 결합이고, 이로 인해 시클로프로판 고리를 형성하고; R11은 -OH, -CN, -NH2, -CO2H, -CO2-C1-8알킬, -C(=O)NH2, -CF3, -CF2H, -CH2F, -CH2OH, -CH2O-C1-8알킬, C1-8알킬 또는 C1-8알콕시임).
화학식 (I) 또는 상기 화학식의 약학적으로 허용가능한 염 또는 호변이성질체의 일부 다른 구현예에서:
R1은 수소, 알킬(C≤8), 아릴(C≤12), 아랄킬(C≤12), 치환 알킬(C≤8), 치환 아릴(C≤8), 또는 치환 아랄킬(C≤12);
R2은 수소, 알킬(C≤8), 치환 알킬(C≤8) 또는 생체내에서 수소로 전환될 수 있는 치환체이고; 그리고
X 및 Y는 각각 독립적으로 시아노, 할로, 알콕시(C≤8)), 치환 알콕시(C≤8), 알킬(C≤8), 또는 치환 알킬(C≤8)이다.
일부 구현예에서, 이하와 같이 추가로 정의되는 화합물, 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염, 용매화물 또는 호변이성질체이 제공된다:
Figure pct00006
, 또는
Figure pct00007
,
(여기에서: R1, R2, X, 및 Y은 본원에 기재된 값들 중 어느 하나를 갖는다).
일부 구현예에서, 이하와 같이 추가로 정의되는 화합물, 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염, 용매화물 또는 호변이성질체이 제공된다:
Figure pct00008
또는
Figure pct00009
(여기에서: R1, R2, X, 및 Y은 본원에 기재된 값들 중 어느 하나를 갖는다. 일부 구현예에서, R1은 비치환 C1-8알킬, 치환 C1-8알킬, 비치환 C6 또는 10아릴, 치환 C6 또는 10아릴, 비치환 C7-10아랄킬, 또는 치환 C7-10아랄킬일 수 있고; R2는 수소, 비치환 C1-6알킬, 또는 치환 C1-6알킬일 수 있고; X는 할로, 시아노, 비치환 C1-12알킬, 치환 C1-12알킬, 비치환 C1-12알콕시, 치환 C1-12알콕시, 비치환 C6 또는 10아릴, 치환 C6 또는 10아릴, 비치환 C7-10아랄킬, 치환 C7-10아랄킬, 비치환 5-10 원의 헤테로아릴, 치환 5-10 원의 헤테로아릴, 비치환 3-10 원의 헤테로시클로알킬, 치환 3-10 원의 헤테로시클로알킬, 비치환 C6 또는 10아릴옥시, 치환 C6 또는 10아릴옥시, 비치환 C2-12아실옥시, 치환 C2-12아실옥시, 또는
Figure pct00010
일 수 있거나, 또는 X는
Figure pct00011
일 수 있고, 여기에서 A'은 -CF2-, -O-, C1-6알칸디일, C1-8알콕시디일, 또는 공유 결합이며, 이로 인해 시클로프로판 고리를 형성하고; R8 및 R9는 각각 독립적으로 비치환 C1-6알킬 또는 치환 C1-6알킬이고; R10은 수소, -OH, -CN, -NH2, -CF3, -CF2H, -CFH2, -CO2H, -CO2-C1-6알킬, -C(=O)NH2, -CH2OH, CH2O-C1-6알킬, 또는 C1-6알콕시일 수 있다).
일부 구현예에서, 이하와 같이 추가로 정의되는 화합물, 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염, 용매화물 또는 호변이성질체가 제공된다:
Figure pct00012
또는
Figure pct00013
, 여기에서: R1, R2, X, 및 Y는 본원에 기재된 값들 중 어느 하나를 갖는다.
일부 구현예에서, R1은 알킬(C=8), 예컨대 메틸이다. 일부 구현예에서, R2은 수소이다. 다른 구현예에서, R2은 생체내에서 수소로 전환될 수 있는 치환체이며, 전구-약물을 생성한다.
일부 구현예에서, X은 할로 예컨대 브로모, 플루오로, 또는 클로로이다. 다른 구현예에서, X은 시아노이다. 다른 구현예에서, X은 알킬(C≤8)이다. 일부 구현예에서, X은 알킬(C3-6), 예컨대 t-부틸. 다른 구현예에서, X은 알콕시(C≤8), 예컨대 메톡시이다.
일부 구현예에서, Y은 수소이다. 다른 구현예에서, Y은 할로, 예컨대 브로모, 플루오로, 또는 클로로이다. 다른 구현예에서, Y은 시아노이다. 다른 구현예에서, Y은 알킬(C≤8)이다. 일부 구현예에서, Y은 알킬 (C3-6), 예컨대 t-부틸이다. 다른 구현예에서, Y은 알콕시(C≤8), 예컨대 메톡시이다.
일부 구현예에서, 탄소 원자 21은 S 배열에 있다. 일부 구현예에서, X은 3 위치에 있다. 일부 구현예에서, Y은 4 또는 5 위치에 있다.
일부 구현예에서, R1는 비치환 C1-8알킬일 수 있다. 일부 구현예에서, R1는 메틸일 수 있다. 일부 구현예에서, R2는 수소일 수 있다. 일부 구현예에서, X는 수소, 할로, 시아노, 비치환 C1-12알킬, 치환 C1-12알킬, 비치환 C1-12알콕시, 치환 C1-12알콕시, 비치환 C6 또는 10아릴, 치환 C6 또는 10아릴, 비치환 C7-12아랄킬, 치환 C7-12아랄킬, 비치환 5-10 원의 헤테로아릴, 치환 5-10 원의 헤테로아릴, 비치환 3-10 원의 헤테로시클로알킬, 치환 3-10 원의 헤테로시클로알킬, 비치환 C6 또는 10아릴옥시, 치환 C6 또는 10아릴옥시, 비치환 C2-12아실옥시, 또는 치환 C2-12아실옥시일 수 있다. 일부 구현예에서, X은 수소, 할로, 시아노, 비치환 C1-12알콕시, 치환 C1-12알콕시, 비치환 C6 또는 10아릴, 치환 C6 또는 10아릴, 비치환 C7-12아랄킬, 치환 C7-12아랄킬, 비치환 5-10 원의 헤테로아릴, 치환 5-10 원의 헤테로아릴, 비치환 3-10 원의 헤테로시클로알킬, 치환 3-10 원의 헤테로시클로알킬, 비치환 C6 또는 10아릴옥시, 치환 C6 또는 10아릴옥시, 비치환 C2-12아실옥시, 치환 C2-12아실옥시 또는
Figure pct00014
이다. 일부 구현예에서, X는 할로일 수 있다. 일부 구현예에서, X는 브로모, 플루오로, 또는 클로로일 수 있다. 일부 구현예에서, X는 -CF3일 수 있다. 일부 구현예에서, X는 -OH 또는 시아노일 수 있다. 일부 구현예에서, X는 비치환 C1-8알킬일 수 있다. 일부 구현예에서, X는 비치환 C3-6알킬일 수 있다. 일부 구현예에서, X는 t-부틸일 수 있다. 일부 구현예에서, X는 비치환 C1-8알콕시일 수 있다. 일부 구현예에서, X는 메톡시 또는 이소프로폭시일 수 있다. 일부 구현예에서, Y는 t-부틸일 수 있다. 일부 구현예에서, Y는
Figure pct00015
일 수 있다. 일부 구현예에서, R8 및 R9는 각각 독립적으로 비치환 C2-8알킬이다. 일부 구현예에서, R8는 메틸일 수 있고, R9는 비치환 C2-8알킬일 수 있다. 일부 구현예에서, R8 및 R9는 각각 -CH3이다. 일부 구현예에서, R10는 -CF3, -CF2H, 또는 -CFH2이다. 일부 구현예에서, R10는 -CF3일 수 있다. 일부 구현예에서, R10는 수소 또는 -CH3일 수 있다. 일부 구현예에서, Y는
Figure pct00016
일 수 있다. 일부 구현예에서, A"는 C1-3알칸디일, C1-4알콕시디일, 또는 공유 결합이고, 이로 인해 시클로프로판 고리를 형성할 수 있다. 일부 구현예에서, A"는 공유 결합이고, 이로 인해 시클로프로판 고리를 형성할 수 있다. 일부 구현예에서, R11는 -CF3, -CF2H, -CH2F, -CH2O-C1-6알킬, C1-6알킬 또는 C1-8알콕시일 수 있다. 일부 구현예에서, R11는 -CF3, -CF2H, -CH2F, C1-6알킬 또는 C1-6알콕시일 수 있다. 일부 구현예에서, R11는 -CF3, -CF2H 또는 메톡시일 수 있다. 일부 구현예에서, R11는 -CF3 또는 -CF2H일 수 있다. 일부 구현예에서, R11는 -CH2O-CH3일 수 있다. 일부 구현예에서, X는 3 위치에 있을 수 있다. 일부 구현예에서, Y는 4 또는 5 위치에 있을 수 있다. 일부 구현예에서, 화합물은 인테그린 길항제일 수 있다. 일부 구현예에서, 인테그린은 α5β1 인테그린 길항제일 수 있다. 일부 구현예에서, 화합물은 α5β1 인테그린 기능에 대한 고체상 수용체 에세이에 의해 측정될 때, α5β1 인테그린에 의해 50 nM, 40 nM, 30 nM, 20 nM, 15 nm 또는 1 nM 미만, 또는 상기 어느 것에 의해 정의되는 범위의 IC50 값을 나타낸다. 일부 구현예에서, 인테그린은 αvβ1 인테그린 길항제이다. 일부 구현예에서, 화합물은 αvβ1 인테그린 기능에 대한 고체상 수용체 에세이에 의해 측정될 때, αvβ1 인테그린에 대해 15 nM 미만의 IC50 값을 나타낸다. 일부 구현예에서, 화합물은 αvβ3 인테그린 기능에 대한 고체상 수용체 에세이에 의해 측정될 때, αvβ3 인테그린에 대해 10 nM 미만의 IC50 값을 나타낸다. 일부 구현예에서, 화합물은 αvβ5 인테그린 기능에 대한 고체상 수용체 에세이에 의해 측정될 때, αvβ5 인테그린에 대해 10 nM 미만의 IC50 값을 나타낸다. 일부 구현예에서, 화합물은 αvβ1, αvβ3, 및 αvβ5 인테그린 기능에 대한 고체상 수용체 에세이에 의해 측정될 때, αvβ1, αvβ3, 및 αvβ5 인테그린에 대해 10 nM 미만의 IC50 값을 나타낸다. 일부 구현예에서, 화합물은 αvβ6 인테그린 기능에 대한 고체상 수용체 에세이에 의해 측정될 때, αvβ6 인테그린에 대해 10 nM 초과의 IC50 값을 나타낸다. 일부 구현예에서, 화합물은 αvβ8 인테그린 기능에 대한 고체상 수용체 에세이에 의해 측정될 때, αvβ8 인테그린에 대해 10 nM 초과의 IC50 값을 나타낸다. 일부 구현예에서, 화합물은 αvβ6 및 αvβ8 인테그린 기능에 대한 고체상 수용체 에세이에 의해 측정될 때, αvβ6 및 αvβ8 인테그린에 대해 10 nM 초과의 IC50 값을 나타낸다.
일부 구현예에서, 화합물은 인테그린 길항제, 예컨대 αvβ1 인테그린 길항제이다. 일부 구현예에서, 화합물은 αvβ1 인테그린 기능에 대한 고체상 수용체 에세이에 의해 측정될 때, αvβ1 인테그린에 대해 15 nM 미만의 IC50 값을 나타낸다. 일부 구현예에서, 화합물은 αvβ6 인테그린 기능에 대한 고체상 수용체 에세이에 의해 측정될 때, αvβ3 인테그린에 대해 10 nM 미만의 IC50 값을 나타낸다. 일부 구현예에서, 화합물은 αvβ5 인테그린 기능에 대한 고체상 수용체 에세이에 의해 측정될 때, αvβ5 인테그린에 대해 10 nM 미만의 IC50 값을 나타낸다. 일부 구현예에서, 화합물은 αvβ1, αvβ3, 및 αvβ5 인테그린 기능에 대한 고체상 수용체 에세이에 의해 측정될 때, αvβ1, αvβ3, 및 αvβ5 인테그린에 대해 10 nM 미만의 IC50 값을 나타낸다. 일부 구현예에서, 화합물은 αvβ1 인테그린 기능에 대한 고체상 수용체 에세이에 의해 측정될 때, αvβ6 인테그린에 대해 10 nM 초과의 IC50 값을 나타낸다. 일부 구현예에서, 화합물은 αvβ1 인테그린 기능에 대한 고체상 수용체 에세이에 의해 측정될 때, αvβ8 인테그린에 대해 10 nM 초과의 IC50 값을 나타낸다. 일부 구현예에서, 화합물은 αvβ6 및 αvβ8 인테그린 기능에 대한 고체상 수용체 에세이에 의해 측정될 때, αvβ6 및 αvβ8 인테그린에 대해 10 nM 초과의 IC50 값을 나타낸다.
일부 구현예에서, 이하와 같이 추가로 정의되는 화합물 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염이 제공된다:
Figure pct00017
일부 구현예에서, 이하와 같이 추가로 정의되는 화합물 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염이 제공된다:
Figure pct00018
일부 구현예에서, 화합물은 이하와 같이 추가로 정의되는 화합물, 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염, 용매화물 또는 호변이성질체가 제공된다:
Figure pct00019
일부 구현예에서, 이하와 같이 추가로 정의되는 화합물, 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염, 용매화물 또는 호변이성질체가 제공된다:
Figure pct00020
Figure pct00021
Figure pct00022
또 다른 측면에서, 본원의 기재 내용은 이하의 화학식의 화합물:
Figure pct00023
또는 이의 약학적으로 허용가능한 염을 제공한다. 일부 구현예에서, 이하와 같이 추가로 정의되는 화합물, 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염이 제공된다:
Figure pct00024
.
또 다른 측면에서, 본원의 기재 내용은 이하의 것들을 포함하는 약학적 조성물을 제공한다:
a) 본원에 기재되고 기술된 화합물; 및
b) 부형제.
일부 구현예에서, 약학적 조성물은 이하의 투여용으로 제형화될 수 있다: 경구, 지방내, 동맥내, 관절내, 두개내, 피부내, 병변내, 근육내, 비강내, 안구내, 심장내, 복강내, 늑막내, 전립선내, 직장내, 경막내, 기관내, 종양내, 탯줄내, 질내, 정맥내, 소포내, 유리체내, 리포좀, 국소적내(locally), 점막, 비경구적, 직장, 결막하, 피하, 설하, 국소적내, 볼점막, 경피적, 질내, 크림 중에(in cremes), 지질 조성물 내에서, 카테터를 통해, 세척을 통해, 연속 투입을 통해, 투입을 통해, 흡입을 통해, 주사를 통해, 국소 전달을 통해, 또는 국소 관류를 통한 투여. 약학적 조성물은 경구, 국소, 정맥내, 또는 유리체내 투여용으로 제형화될 수 있다. 일부 구현예에서, 약학적 조성물은 단위 투여량으로 제형화된다.
또 다른 측면에서, 본원의 기재 내용은 질병 또는 장애의 치료 및/또는 예방이 필요한 환자에서 질병 또는 장애를 치료 및/또는 예방하는 방법을 제공하는데, 상기 방법은 질병 또는 장애를 치료 및/또는 예방하기에 충분한 양의 본원에 기재된 화합물 또는 조성물을 환자에게 투여하는 단계를 포함한다. 일부 구현예에서, 질병 또는 장애는 섬유증과 관련된다. 질병 또는 장애는 폐, 간, 신장, 심장, 피부, 또는 췌장의 경피증 또는 섬유증일 수 있다. 일부 구현예에서, 질병 또는 장애는 폐의 섬유증이다. 다른 구현예에서, 질병 또는 장애는 간의 섬유증이다. 다른 구현예에서, 질병 또는 장애는 심장의 섬유증이다. 다른 구현예에서, 질병 또는 장애는 신장의 섬유증이다. 다른 구현예에서, 질병 또는 장애는 췌장의 섬유증이다. 다른 구현예에서, 질병 또는 장애는 피부의 섬유증이다. 일부 구현예에서, 질병 또는 장애는 경피증이다.
일부 구현예에서, 환자는 인간, 원숭이, 소, 말, 양, 염소, 개, 고양이, 마우스, 래트, 기니피그, 또는 이의 형질전환 종이다. 환자는 원숭이, 소, 말, 양, 염소, 개, 고양이, 마우스, 래트, 또는 기니피그일 수 있다. 대안적으로, 환자는 인간일 수 있다.
또 다른 측면에서, 본 기재 내용은 인테그린의 결합을 저해하는 방법을 제공하는데, 이는 인테그린과 본원에 기재된 화합물 또는 조성물을 접촉하게 하는 단계를 포함한다. 인테그린은 α5β1, αvβ1, αvβ3, 또는 αvβ5일 수 있다. 일부 구현예에서, 인테그린은 α5β1이다. 일부 또 다른 구현예에서, 인테그린은 αvβ1이다. 일부 구현예에서, 방법은 시험관 내에서 실시된다. 다른 구현예에서, 방법은 생체외 또는 생체내에서 실시된다. 일부 구현예에서, 결합의 저해는 환자에서 질병 또는 장애를 치료 또는 예방하기에 충분하다.
일부 구현예는 질병 또는 장애의 치료 및/또는 예방이 필요한 환자에서 질병 또는 장애를 치료 및/또는 예방하는 방법을 제공하는데, 이는 질병 또는 장애를 치료 및/또는 예방하는데 충분한 양의 본원에 개시되고 기재된 화합물 또는 조성물을 환자에게 투여하는 단계를 포함한다. 일부 구현예에서, 질병 또는 장애는 섬유증과 관련된다. 일부 구현예에서, 질병 또는 장애는 폐, 간, 신장, 심장, 피부, 또는 췌장의 경피증 또는 섬유증이다. 일부 구현예에서, 질병 또는 장애는 폐의 섬유증이다. 일부 구현예에서, 질병 또는 장애는 간의 섬유증이다. 일부 구현예에서, 질병 또는 장애는 심장의 섬유증이다. 일부 구현예에서, 질병 또는 장애는 신장의 섬유증이다. 일부 구현예에서, 질병 또는 장애는 췌장의 섬유증이다. 일부 구현예에서, 질병 또는 장애는 피부의 섬유증이다. 일부 구현예에서, 질병 또는 장애는 경피증이다. 일부 구현예에서, 환자는 인간, 원숭이, 소, 말, 양, 염소, 개, 고양이, 마우스, 래트, 기니피그, 또는 이의 형질전환 종이다. 일부 구현예에서, 환자는 원숭이, 소, 말, 양, 염소, 개, 고양이, 마우스, 래트, 또는 기니피그이다. 일부 구현예에서, 환자는 인간이다.
일부 구현예는 인테그린의 결합을 저해하는 방법을 제공하는데, 이는 인테그린을 본원에 개시 및 기술된 화합물 또는 조성물과 접촉하게 하는 단계를 포함한다. 일부 구현예에서, 인테그린은 α5β1, αvβ1, αvβ3, 또는 αvβ5이다. 일부 구현예에서, 인테그린은 αvβ1이다. 일부 구현예에서, 인테그린은 α5β1이다. 일부 구현예에서, 방법은 시험관 내에서 실시된다. 일부 구현예에서, 방법은 생체외 또는 생체내에서 실시된다. 일부 구현예에서, 결합의 저해는 환자에서 질병 또는 장애를 치료 또는 예방하는데 충분하다.
본원의 기재 내용의 다른 목적, 특징 및 장점은 이하의 상세한 설명에서 명백하게 나타날 것이다. 그러나, 본 기재 내용의 구체적인 구현예를 나타내는 상세한 설명 및 구체적인 실시예는 단지 예시의 방식으로 부여되는 것으로 이해되어야 하며, 이는 당업자는 본 기재 내용의 사상 및 범주 내에서 이러한 상세한 설명으로부터 다양한 변형 및 개질이 이루어질 수 있음이 명백할 것이기 때문이다. 단순히 하나의 특정 일반 화학식이 부여된 특정 화합물이 또한 다른 일반 화학식에 속할 수 없다는 것을 의미하는 것은 아니기 때문에 이를 유의하라.
발명의 상세한 설명
α5β1, 또는 αvβ1 인테그린 길항제로서 작용을 할 수 있는 신규한 화합물 및 조성물, 이들의 제조 방법, 및 인테그린에 의해 매개되는 질병 또는 장애의 치료 및/또는 예방을 포함하는 이들의 사용을 위한 방법이 본원에 기재되어 있다. 일부 구현예에서, 본원에 제공된 화합물은 인테그린 α5β1, αvβ1, αvβ3, 및/또는 αvβ5의 선택적인 저해 또는 길항작용에 사용될 수 있다. 일부 구현예에서, 본원에 제공된 화합물은 인테그린 αvβ6, αvβ8, 및/또는 αIIbβ3의 감소된 저해 또는 길항 활성을 나타낸다.
화합물 및 이의 합성 방법
본원의 기재 내용에 의해 제공되는 화합물은 이하에서 개략되고 실시예 섹션에서 더욱 상세히 기재된 방법을 사용하여 제조될 수 있다. 당업계의 숙련자들은 실시예에서 기재된 조건 및 방법의 공지된 변형예가 본원의 기재 내용의 화합물을 합성하는데 사용될 수 있다는 것을 용이하게 이해할 것이다. 사용된 개시 재료 및 장비들은 상업적으로 입수하였거나, 또는 이전에 보고되고 당업계의 숙련자들이 용이하게 재현할 수 있는 방법에 의해 제조된다. 이러한 원칙 및 기술은 예를 들어, 문헌 [March's Advanced Organic Chemistry: Reactions, Mechanisms, and Structure (2007)]에 교시되어 있고, 이는 본원에 참고로서 통합된다.
일부 구현예에서, 본원의 기재 내용의 화합물은 이하의 실시예 및 청구항에 기재된 화합물을 포함한다. 일부 구현예는 인테그린 αvβ1의 저해제로서 활성을 갖는 화합물, 예컨대 이하의 표 1에 나열된 화합물 (비-벌키한 X 및 Y 치환기를 함유함)을 포함한다. 일부 구현예는 인테그린 αvβ1의 저해제로서 활성을 갖고, 표 1의 화합물에 비해 인테그린 α5β1의 저해제로서 활성이 증가된 화합물, 예컨대 이하 표 2에서 나열된 화합물 (벌키한 Y 치환체를 함유함)을 포함한다.
표 1: 본원의 기재 내용의 예시적인 화합물
Figure pct00025
Figure pct00026
Figure pct00027
표 2: 본원의 기재 내용의 예시적인 화합물
Figure pct00028
Figure pct00029
Figure pct00030
Figure pct00031
Figure pct00032
본원의 기재 내용의 모든 화합물은 본원에서 논의되거나 또는 그렇지 않은 하나 이상의 질병 또는 장애의 예방 및 치료를 위해 유용할 수 있다. 일부 구현예에서, 본원에서 중간체, 대사 물질, 및/또는 전구 약물로서 특징화되거나 또는 예시된 화합물들 중 하나 이상은, 그럼에도 불구하고 또한 하나 이상의 질병 또는 장애의 예방 및 치료를 위해 유용할 수 있다. 명백히 반대로 기재된 경우가 아니라면, 본 발명의 모든 화합물은 활성 약학적 성분 (API)으로서의 용도를 위해 고려되는 "활성 화합물" 및 "치료 화합물"로 여겨진다. 인간 또는 수의학적 용도에 대한 실질적인 적합성은, 전형적으로 식품의약국 (FDA)에서 승인된 것과 같은 임상 시험 프로토콜 및 규정 절차의 조합을 사용하여 결정되었다. 미국에서, FDA는 인간 및 수의학적 약물, 백신 및 다른 생물학적 제품 및 의학 장치의 안전성, 효율성, 품질 및 보안을 보장함으로서, 공중 보건을 보호하는 역할을 한다.
일부 구현예에서, 본원의 기재 내용의 화합물은 이들이 본원에 명시된 징후에 대한 용도가 있는지 여부에 불문하고, 선행 기술에서 공지된 화합물보다 더 효능이 있고, 독성이 적으며, 더 오래 작용하고, 더욱 강력하나 부작용이 더 적고, 더욱 용이하게 흡수되고, 및/또는 더욱 개선된 약동학적 프로파일 (예를 들어 더 높은 경구 생체이용률 및/또는 낮은 청소율)을 갖고, 및/또는 선행 기술에서 공지된 화합물에 비해 다른 유용한 약학적, 물리적, 또는 화학적 특성들을 가질 수 있다는 장점을 갖는다.
본 기재 내용의 방법에서 사용된 화합물은 하나 이상의 비대칭-치환된 탄소 또는 질소 원자를 함유할 수 있고, 광학 활성 또는 라세미 형태로 분리될 수 있다. 따라서, 특이적인 입체 화학 또는 이성질체 형태가 구체적으로 지정되지 않는 경우, 구조의 모든 키랄, 부분 입체이성질체, 라세미 형태, 에피머 형태 및 모든 기하이성질체 형태가 의도된다. 화합물은 라세미체 및 라세미 혼합물, 단일 거울상 이성질체, 부분 입체이성질체 혼합물 및 개별적인 부분 입체이성질체로서 발생할 수 있다. 일부 구현예에서, 단일 부분 입체이성질체가 얻어진다. 본원의 기재내용의 화합물의 키랄 중심은 IUPAC 1974 권고에 의해 정의할 때, S 또는 R 배치를 가질 수 있다. 일부 구현예에서, 본원의 기재 내용의 화합물은 S 배열이다. 예를 들어, 입체이성질체의 혼합물은 이하의 실시예 섹션에서 교시된 기술, 뿐만 아니라 이의 변형을 사용하여 분리될 수 있다. 호변 이성질체 형태, 뿐만 아니라 이러한 이성질체 및 호변 이성질체의 약학적으로 허용가능한 염도 또한 포함된다.
본원의 기재 내용의 화합물을 구성하는 원자는, 이러한 원자의 모든 동위원소 형태를 포함하는 것으로 의도된다. 본원의 기재 내용의 화합물은 동위원소 개질 또는 농축된 하나 이상의 원자를 갖는 것들, 특히 약학적으로 허용가능한 동위 원소를 갖는 것들, 또는 약학적 연구에 유용한 것들을 포함한다. 본원에 사용된 동위 원소는, 동일한 원자 번호를 갖지만 상이한 질량수를 갖는 원자들을 포함한다. 전체적으로 예시의 방식으로 제한 없이, 수소의 동위원소는 중수소 및 삼중수소를 포함하고, 탄소 동위원소는 13C 및 14C를 포함한다. 유사하게, 본원의 기재 내용의 화합물의 하나 이상의 탄소 원자(들)은 실리콘 원자(들)에 의해 대체될 수 있다는 것을 고려한다. 추가로, 본원의 기재 내용의 화합물의 하나 이상의 산소 원자(들)이 황 또는 셀레늄 원자(들)에 의해 대체될 수 있다는 것을 고려한다.
본원의 기재 내용의 화합물은 또한 전구 약물 형태로도 존재할 수 있다. 전구 약물이 약제의 다수의 바람직한 품질(예를 들어 용해성, 생체이용성, 제조성 등)을 강화시킨다고 알려져있으므로, 본원의 기재 내용의 일부 방법에 이용되는 화합물은 원하는 경우, 전구 약물 형태로 전달될 수 있다. 따라서, 본원에서는 본원의 기재 내용의 화합물의 전구 약물, 뿐만 아니라 상기 전구 약물의 전달 방법도 고려한다. 본 기재 내용에 이용된 화합물의 전구 약물은 화합물 중의 관능기를 변형시킴으로서 제조될 수 있는데, 상기 변형은 통상의 조작시 또는 생체내에서 모 화합물로 분할되는 방식으로 이루어진다. 따라서, 전구 약물은 예를 들어, 전구 약물이 대상체에 투여되는 경우 히드록시, 아미노, 또는 카르복시기가 분할되어 각각 히드록시산, 아미노산, 또는 카르복실산을 형성하는 어느 기에 결합된 본원에 기재된 화합물을 포함한다.
본 기재 내용의 염의 일부를 구성하는 특정 음이온 또는 양이온은 그 염이 전체적으로 약학적으로 허용가능한 이상은 크게 중요하지 않다고 인식되어야 한다. 약학적으로 허용가능한 염 및 이들의 제조 및 사용 방법의 추가적인 예는, 문헌 [Handbook of Pharmaceutical Salts: Properties, and Use (2002)]에 제시되어 있고, 이는 본원에 전체가 참고로서 포함된다.
본원의 기재 내용의 화합물은 추가로 생체내에서 수소로 전환될 수 있는 치환체를 포함하도록 추가로 개질된 것을 포함한다고 인식되어야 할 것이다. 이것은 가수 분해 또는 수소 첨가 분해를 포함하나 이에 제한되지 않는 효소적 또는 화학적 수단에 의해 수소 원자로 변환될 수 있는 기들을 포함한다. 예로서는 가수분해성 기, 예컨대 아실기, 옥시카르보닐기, 아미노산 잔기, 펩티드 잔기, o-니트로페닐설페닐, 트리메틸실릴, 테트라히드로피라닐, 디페닐포스피닐 등을 갖는 기를 포함한다. 아실기의 예는 포르밀, 아세틸, 트리플루오로아세틸 등을 포함한다. 옥시카르보닐기를 갖는 기의 예는 에톡시카르보닐, tert-부톡시카르보닐 (-C(O)OC(CH3)3, Boc), 벤질옥시카르보닐, p-메톡시-벤질옥시카르보닐, 비닐옥시카르보닐, β-(p-톨루엔설포닐)에톡시카르보닐 등을 포함한다. 적합한 아미노산 잔기는 Gly (글리신), Ala (알라닌), Arg (아르기닌), Asn (아스파라긴), Asp (아스파트르산), Cys (시스테인), Glu (글루탐산), His (히스티딘), Ile (이소류신), Leu (류신), Lys (리신), Met (메티오닌), Phe (페닐알라닌), Pro (프롤린), Ser (세린), Thr (트레오닌), Trp (트립토판), Tyr (티로신), Val (발린), Nva (노르발린), Hse (호모세린), 4-Hyp (4-히드록시프롤린), 5-Hyl (5-히드록시리신), Orn (오르니틴) 및 β-Ala의 잔기를 포함하나, 이에 제한되지 않는다. 적합한 아미노산 잔기의 예는 또한 보호기로 보호되는 아미노산 잔기를 포함한다. 적합한 보호기의 예는 전형적으로 펩티드 합성에 이용되는 것들 [아실기 (예컨대, 포르밀 및 아세틸), 아릴메톡시카르보닐기 (예컨대, 벤질옥시카르보닐 및 p-니트로벤질옥시카르보닐), tert-부톡시카르보닐기 (-C(O)OC(CH3)3, Boc) 등 포함]을 포함한다. 적합한 펩티드 잔기는 2 내지 5개의 아미노산 잔기를 포함하는 펩티드 잔기를 포함한다. 이들 아미노산 또는 펩티드의 잔기들은 D-형태, L-형태 또는 이들의 혼합물의 입체이성질체 배치로 존재할 수 있다. 또한, 아미노산 또는 펩티드 잔기는 비대칭 탄소 원자를 가질 수 있다. 비대칭 탄소 원자를 갖는 아미노산 잔기의 예는, Ala, Leu, Phe, Trp, Nva, Val, Met, Ser, Lys, Thr 및 Tyr의 잔기를 포함한다. 비대칭 탄소 원자를 갖는 펩티드 잔기는 비대칭 탄소 원자를 갖는 하나 이상의 구성 아미노산 잔기를 갖는 펩티드 잔기를 포함한다. 적합한 아미노산 보호기의 예는, 전형적으로 펩티드 합성에 이용되는 것 [아실기 (예컨대, 포르밀 및 아세틸), 아릴메톡시카르보닐기 (예컨대 벤질옥시카르보닐 및 p-니트로벤질옥시카르보닐), tert-부톡시카르보닐기 (-C(O)OC(CH3)3) 등을 포함]들을 포함한다. "생체내에서 수소로 전환가능한" 치환체의 다른 예는, 환원적으로 제거가능한 가수분해성 기를 포함한다. 적합한 환원적으로 제거가능한 가수분해성 기의 예는, 아릴설포닐 기 (예컨대 o-톨루엔설포닐); 페닐 또는 벤질옥시 (예컨대, 벤질, 트리틸 및 벤질옥시메틸)로 치환된 메틸기; 아릴메톡시카르보닐기 (예컨대, 벤질옥시카르보닐 및 o-메톡시-벤질옥시카르보닐); 및 할로에톡시카르보닐기 (예컨대, β,β,β-트리클로로에톡시카르보닐 및 β-아이오도에톡시카르보닐)를 포함하나, 이에 제한되지 않는다.
1. 생물학적 활성
본 기재 내용의 또 다르 목적은 αvβ1 및/또는 α5β1 인테그린 길항제로서 작용하는 신규한 화합물 및 조성물, 이의 제조 방법, 및 인테그린에 의해 매개되는 질병 또는 장애의 치료 및/또는 예방을 포함하는 이들의 사용 방법을 제공하는 것이다. 일부 구현예에서, 화합물은 인테그린 α5β1, αvβ1, αvβ3, 및/또는 αvβ5의 선택적인 저해 또는 길항작용을 위해 사용될 수 있다. 일부 구현예에서, 본원에 제공된 화합물은 인테그린 αvβ3, αvβ5, αvβ6, αvβ8, 및/또는 αIIbβ3의 감소된 저해 또는 길항 활성을 나타낸다. 일부 추가적인 구현예에서, 본원에 제공된 화합물은 인테그린 αvβ3 및/또는 αvβ5의 감소된 저해 또는 길항 활성을 나타낸다.
이러한 화합물 및 조성물은 인테그린을 저해하거나 또는 길항작용을 하는데 유용하며, 따라서 다른 구현예에서는 본원의 기재 내용에서 α5β1, αvβ1, αvβ3, 및/또는 αvβ5 인테그린을 저해하거나 또는 길항작용을 위한 방법을 제공한다.
어떠한 이론에도 구속되지 않고, 예기지 않게 치환체 X 및/또는 Y에 적어도 하나의 벌키한 치환체를 갖는 화학식 (I)의 화합물이 인테그린 α5β1에 대한 상당히 증가한 활성을 나타내는 것을 발견하였다. 벌키한 치환체의 예는 비치환 알킬기, 예를 들어 분기형 알킬기; 치환 알킬기; 사이클릭기, 예를 들어, 시클로알킬; 및 헤테로시클로알킬기를 포함한다. 일부 구현예에서, 적어도 하나의 벌키한 치환체는 페닐 고리 상의 메타 위치에 있다. 이러한 벌키한 치환체가 결여된 선행 화합물은 주로 다른 인테그린 수용체에 작용하나, α5β1에 대한 활성은 상대적으로 낮다. 일부 구현예에서, X 또는 Y에 벌키한 기((bulky group)를 갖는 화학식 (I)의 화합물은 이러한 벌키한 치환체가 결여된 구조적으로 관련된 화합물과 비교할 때, 예를 들어, 표 2의 화합물 (벌키한 Y 기를 가짐)를 표 1의 화합물(벌키한 X 또는 Y 기를 갖지 않음) 및 이하의 표 3의 비교체 화합물과 비교할 때, 인테그린 α5β1에 대한 증가된 활성을 나타내었다.
[표 3]
Figure pct00033
치환체 X 및/또는 Y에서 적어도 하나의 벌키한 기를 갖는 관련된 화학식 (I)의 화합물과 이러한 벌키한 기가 결여된 것들 사이에서의 활성의 차이는 주목할만하다. 예를 들어, 피라졸 (R1) 메틸 및 X 및/또는 Y에서의 벌키한 치환체를 갖는 것을 제외하고 비교체 2 (CC2)에 대한 유사 화합물은 CC2에 비해 α5β1에 대한 활성이 증가하였다. 구체적으로, CC2는 α5β1에 대한 측정된 IC50가 770 nM이었으나, 반면 실시예 21 (Y =
Figure pct00034
)에서는 12 nM이었고, 실시예 24 (Y =
Figure pct00035
)에서는 15 nM이었고, 실시예 30 (Y =
Figure pct00036
)에서는 12 nM이었고, 실시예 38 (Y = tert-부틸)에서는 23 nM이었다. 추가로, 실시예 6 (표 1)은 α5β1에 대하여 측정된 IC50가 158 nM이었으나, 반면 tert-부틸기가 첨가된 점만 상이한 실시예 16 (표 2)은 활성이 몇 배나 증가하여 α5β1에 대해 측정된 IC50가 30 nM이었다. 실시예 17 (표 2)과 실시예 9 (표 1)의 비교에서는 적어도 하나의 벌키한 기가 화학식 (I)의 화합물의 X 및/또는 Y에 포함된 경우, 활성에서 유사한 증가를 나타내었다. 구체적으로, 실시예 9는 α5β1에 대해 측정된 IC50가 110 nM이었으나, 실시예 17은 α5β1에 대해 측정된 IC50가 11 nM이었다.
따라서, 치환체 X 및/또는 Y에서 적어도 하나의 벌키한 기를 갖는 화학식 (I)의 화합물은, 인테그린 α5β1 활성에 관여하는 질환의 치료에 사용될 수 있다. α5β1을 발현하는 세포는 제9 및 제10의 유형 III 피브로넥틴 반복부를 포함하는 영역에서 피브로넥틴에 결합하는 것으로 여겨지며, 이들 중 후자는 인테그린 결합을 위한 RGD 모티프를 함유하는 것으로 여겨진다. 피브로넥틴 이외에, α5β1는 피브리노겐, 변성된 콜라겐, 및 피브릴린-1을 포함하는 다른 RGD-함유 세포외 매트릭스 단백질과 상호작용하는 것으로 보고되었다 (Bax 등, J. Biol. Chem., 278(36):34605-34616, 2003, 2003; Perdih, Curr. Med. Chem., 17(22):2371-2392, 2010; Suehiro 등, J. Biochem., 128(4):705-710, 2000). 이들 리간드는 일반적으로 조직에서 상처 치유 반응의 일부로서 세포가 축적하는 임시 매트릭스의 구성요소로서 분류된다. 이러한 반응의 구성요소는 급성 부상의 치유에 이롭지만, 많은 질병의 맥락에서 해로울 수 있는 혈관 형성 (신규한 혈관 형성) 및 섬유증 (흉터 형성)이다. 혈관형성에서의 α5β1의 중요성은 다수의 연구에서 뒷받침된다. 예를 들어, 이러한 인테그린이 결여된 마우스는 배아 및 배아외 맥관 구조 모두에서 결함을 포함하는 표현형을 나타내며, 10-11일차에 배아 치사율을 나타내었다 (Yang 등, Development, 119(4):1093-1105, 1993). 혈관 형성 사이토카인, 예컨대 bFGF, IL-8, TGFβ, 및 TNFα는 내피 세포에서 α5β1 발현을 시험관 내 및 생체내에서 상향 조정하는 것으로 여겨지며, 면역조직화학은 다양한 유형의 인간 종양 생검 및 동물에서의 이종이식 종양 유래의 혈관에서 α5β1 및 피브로넥틴 염색 모두가 공동 상승(coordinated increases)을 나타내었다 (Collo, J. Cell Sci., 112(Pt 4):569-578, 1999; Kim 등, Am. J. Pathol., 156(4):1345-1362, 2000). α5β1을 특이적으로 저해하는 단일클론 항체, 및 α5β1의 저해자로서 기재되어 왔던 화합물은, 일부 실험 모델에서 혈관 형성을 상당히 저해하는 것으로 관찰되었다 (Kim 등, Am. J. Pathol., 156(4):1345-1362, 2000; Bhaskar 등, J. Transl. Med., 5:61, 2007; Livant 등, J. Clin. Invest., 105(11):1537-1545, 2000; Zahn 등, Arch. Ophthalmol., 127(10):1329-1335, 2009).
α5β1 발현은 내피에 한정되지 않으며, 또한 혈관형성에서 다른 기능적인 역할을 가질 수도 있다. α5β1은 섬유아세포, 조혈모세포 및 면역 세포, 평활근 세포, 표피 세포, 및 종양 세포를 포함하는 많은 세포 유형에서 다양한 정도로 발현된다. 종양 세포 상의 발현은 종양 생장 및 전이의 전개와 관련된다 (Adachi 등, Clin. Cancer Res., 6(1):96-101, 2000, 2000; Blase 등, Int. J. Cancer, 60(6):860-866, 1995; Danen 등, Histopathology, 24(3):249-256, 1994; Edward, Curr. Opin. Oncol., 7(2):185-191, 1995). 인간 섬유아세포에서, α5β1은 이동성과 생존성을 촉진하는 것으로 밝혀졌다 (Lobert 등, Dev. Cell, 19(1):148-159, 2010). 췌장 성상 세포에서, α5β1은 접착, 이동, 및 섬유 생성을 촉진시키는 결합 조직 성장 인자와 상호작용을 한다 (Gao and Brigstock, Gut, 55:856-862, 2006). α5β1의 약학적 길항작용은 접착 이동, 및 인간 망막 표피 세포의 증식을 시험관 내에서 저해하며, 망막 분리를 갖는 토끼에 유리체강내(유리체내) 투여되는 경우, 망막 세포 증식 및 흉터를 감소시키는 것으로 나타났다 (Li 등, Invest. Ophthalmol. Vis. Sci., 50(12):5988-5996, 2009; Zahn 등, Invest. Ophthalmol. Vis. Sci., 51(2):1028-1035, 2010).
일부 구현예에서, 화학식 (I)의 화합물은 혈관형성, 및/또는 관련된 질환의 치료에 유용할 수 있다. 이러한 관련된 질환은 섬유증, 예를 들어, 섬유 생장, 및/또는 세포 증식의 질병, 예를 들어, 암을 포함한다. 일부 구현예는 섬유증 및 혈관형성 둘 다의 치료 또는 예방에 있어서 화학식 (I)의 화합물을 사용하는 것을 포함한다. 일부 구현예에서, 화학식 (I)의 화합물은 암에 걸린 환자에 투여된다. 추가적인 구현예에서, 화학식 (I)의 화합물은 섬유 성장을 겪고 있는 환자에 투여된다. 또 다른 추가적인 구현예에서, 화학식 (I)의 화합물은 유섬유종(fibroid)의 생장을 늦추거나, 유섬유종의 생장을 중단시키거나, 또는 유섬유종의 생장을 역전시킨다. 추가적인 구현예에서, 유섬유종은 종양이다.
용어 "종양"은 본원에서 비-선척적인 병적 국소 조직 생장을 의미하는데 넓게 사용된다. 종양은 양성, 예를 들어, 혈관종, 신경교종, 기형종 등일 수 있거나, 또는 악성, 예를 들어, 암종, 육종, 교모세포종, 성상세포종, 신경아세포종, 망막모세포종 등일 수 있다. 종양은 전이성이거나 또는 그렇지 않을 수 있다. 사용된 용어 "암"은 일반적으로 악성 종양의 출현을 수반하는 질병을 지칭한다. 종양은 예를 들어, 폐암, 췌장암, 전립선암, 자궁경부암, 췌장암, 결장암 또는 난소암, 또는 육종, 예를 들어, 골육종 또는 카포시 육종의 암종일 수 있다.
추가적인 구현예에서, 유섬유종은 섬유종이다. 섬유종은 예를 들어, 경질 섬유종 또는 연질 섬유종일 수 있다. 섬유종은 추가적인 예로서 혈관섬유종, 담낭 섬유종, 점액섬유종, 백악질 골화성 섬유종, 연골점액유사 섬유종, 결합조직형성 섬유종, 비-골화성 섬유종, 골화성 섬유종, 목덜미 섬유종, 콜라겐성 섬유종, 건초의 섬유종, 모낭주위 섬유종, 다형성 섬유종, 자궁 섬유종, 신경섬유종, 또는 난소 섬유종일 수 있다.
인테그린 αvβ1은 장기 섬유증의 주요 세포 매개자인 활성화된 근섬유아세포의 표면에서 발현된다 (Henderson, 등, 2013). 추가로, 최근의 연구는 세포-발현된 αvβ1이 시험관 내에서 전-섬유성 성장 인자인 형질전환 성장 인자-β1 (TGFβ)에 직접 결합하여 이를 활성화시킨다는 것을 나타내었다 (Reed, 등, 2015). 이러한 동일 연구는 또한 αvβ1의 선택적인 소분자 저해제에 의한 치료가 마우스의 폐 또는 간에서 손상-유도된 섬유증을 약화시킬 수 있다는 사실도 나타나었다. 이와 함께, 이들 데이터는 조직 섬유증에서 αvβ1에 대한 중요한 생체내 역할에 대한 증거를 제공한다.
αvβ1과 마찬가지로, 인테그린 αvβ3 및 αvβ5는 또한 시험관 내에서 잠재적인 TGF에 결합하여 이를 활성화시킬 수도 있다 (Tatler, 등, 2011; Wipff, 등, 2007). αvβ3의 특이적인 방해는 TGFβ 신호전달을 감소시키고, 세포에서 전-섬유성 유전자 발현 패턴을 정상화할 수 있다 (Wipff, 등, 2007; Asano, 등, 2005a; Patsenker, 등, 2007). 베타-3 서브 유닛 발현이 결핍되고, 따라서 αvβ3 발현이 부족한 마우스는, CCL18-유도성 폐 콜라겐 축적이 약화되고 (Luzina, 등, 2009), 경피증의 한 형태인 인간 "강직성 피부 증후군"의 마우스 모델 (Gerber, 등, 2013)에서 보호되는 것으로 나타났다. 세포 상의 인테그린 αvβ5 발현 수준을 조절하는 것은, TGFβ 신호 전달 경로의 구성 요소의 핵 국재화에 영향을 미치고, 및 섬유증 마커, 예컨대 알파 평활근 액틴 및 콜라겐의 발현을 변화시킨다 (Luzina, 등, 2009; Asano, 등, 2005b; Scotton, 등, 2009).
인테그린 αvβ3 및 αvβ5는 혈관형성을 촉진하는데 연관되어 있어서 (Avraamides 등, 2008), 다른 인테그린에 더하여 이들의 길항 작용은 또한 이 과정의 우수한 차단을 제공하는 것으로 예측될 수 있다. 인테그린 αvβ3도 또한 종양 세포 전이, 및 골다공증 및 일부 암과 관련된 골 재흡수 증가에 역할을 하는 것으로 알려져 있다 (Nakamura, 등, 2007; Schneider, 등, 2011).
추가로, 일부 측면에서, 본 기재 내용의 길항제는 다른 인테그린, 예컨대 αvβ6및 αvβ8의 감소된 활성을 나타낸다. 이들 특이적인 인테그린의 손실 또는 과다 저해는 마우스에서 면역-관련된 부작용 또는 자가면역의 발달과 관련된다 (Huang, 등, 1996; Lacy-Hulbert, 등, 2007; Travis, 등, 2007; Worthington, 등, 2015).
추가로, 일부 구현예에서, 본원의 기재 내용의 화합물은 혈소판 상에서 발견되는 인테그린 복합체인 인테그린 αIIbβIII에 대해 감소된 저해 또는 길항 활성을 나타낸다. 인테그린 αIIbβIII 저해는 혈소판 응집의 방해와 관련되며, 이는 특정 질병 또는 장애를 치료할 때 독성과 관련되거나 및/또는 사용 금지된다. 일부 구현예에서, 본원에 제공된 화합물은 비표적화 인테그린, 예를 들어 인테그린 αIIbβIII에 비해, 인테그린 αvβ1 및 α5β1 에 대한 증가된 특이성을 나타내었다. 일부 구현예에서, 본원에 제공된 화합물은 출혈 장애와 관련된 독성의 가능성을 최소화하는 항-섬유화제로서 사용될 수 있다.
이론에 구속되지 않고, 벌키한 X 및/또는 Y 치환체를 갖는 화학식 (I)의 특정 화합물 (여기에서, X, Y 치환 패턴은 2,5 이중-치환임)은, αvβ1 및 α5β1에 대해서는 저해 활성을 나타내었으나, αvβ3, αvβ5, αvβ6, 및/또는 αvβ8에 대해서는 그렇지 않다는 것이 예기치 않게 발견되었다. 예를 들어, 실시예 32는 αvβ1 및 α5β1 에서는 높은 저해성 활성을 나타내고, αvβ3, αvβ5, αvβ6 및 αvβ8에서는 낮은 활성을 나타내었다. 따라서, 일부 구현예는 화학식 (Iba)에 따른 화합물을 포함한다.
다수 유형의 인테그린이 있고, 많은 세포들이 이들 표면 상에 다수 유형을 갖는다. 인테그린은 모든 동물에서 매우 중요하며, 해면 동물로부터 포유류에 이르는 조사된 모든 동물에서 발견되었다. 이러한 화합물로서, 표적 인테그린은 반려 동물, 가축 동물, 동물원 동물, 뿐만 아니라 야생 동물을 포함하는 상이한 동물들에서 다양한 용도로 발견되었다. 인테그린은 인간에서 넓은 범위로 연구되어 왔다. 인테그린은 다른 단백질, 예컨대 캐드헤린, 면역글로불린 슈퍼패밀리 세포 접착 분자인 셀렌틴 및 신데칸과 함께 작용하여, 세포-세포 및 세포-메트릭스 상호작용 및 정보 교환을 매개한다. 인테그린은 세포 표면 및 ECM 성분, 예컨대 피브로넥틴, 비트로넥틴, 콜라겐, 및 라미닌과 결합한다.
각각의 인테그린은 알파 및 베타 당단백질 서브 유닛의 비-공유적인 이종이량체화에 의해 형성되며, 이들의 조합으로 확실한 생물학적 활성, 예컨대 세포 부착, 이동, 증식, 분화 및 생존을 부여한다. 현재, 18개의 α 서브 유닛과 8개의 β 서브 유닛이 쌍을 이루어 형성되는 24개의 인테그린이 포유 동물에서 기재되어 있으며, 표 4에 열거되어 있다:
표 4 - 인테그린
Figure pct00037
또한, 일부 서브유닛의 변이체는 차별적 스플라이싱에 의해 형성되며; 예를 들어, 4개의 베타-1 서브유닛 변이체가 존재한다. 이들 α 및 β 서브유닛의 상이한 조합을 통해, 약 24개의 고유한 인테그린이 생성되지만, 그 번호는 각각 다른 연구에 따라 달라진다.
일부 구현예에서, 화합물은 α5β1 인테그린 길항제와 같은 인테그린 길항제이다. 일부 구현예에서, 화합물은 α5β1 인테그린 기능에 대한 고체상 수용체 검정에 의해 측정될 때, α5β1 인테그린에 대한 IC50 값이 20 nM 미만, 15 nM 미만, 또는 10 nM 미만을 나타낸다. 일부 구현예에서, 화합물은 αVβ1 인테그린 길항제와 같은 인테그린 길항제이다. 일부 구현예에서, 화합물은 αVβ1 인테그린 기능에 대한 고체상 수용체 검정에 의해 측정될 때, αVβ1 인테그린에 대한 IC50 값이 15 nM 미만을 나타낸다. 일부 구현예에서, 화합물은 αVβ3 인테그린 기능에 대한 고체상 수용체 검정에 의해 측정될 때, αVβ3 인테그린에 대한 IC50 값이 10 nM 미만을 나타낸다. 일부 구현예에서, 화합물은 αVβ5 인테그린 기능에 대한 고체상 수용체 검정에 의해 측정될 때, αVβ5 인테그린에 대한 IC50 값이 10 nM 미만을 나타낸다. 일부 구현예에서, 화합물은 각각 αVβ1, αVβ3, 및 αVβ5 인테그린 기능에 대한 고체상 수용체 검정에 의해 측정될 때, αVβ1, αVβ3, 및 αVβ5 인테그린에 대한 IC50 값이 각각 10 nM 미만을 나타낸다. 일부 구현예에서, 화합물은 αVβ6 인테그린 기능에 대한 고체상 수용체 검정에 의해 측정될 때, αVβ6 인테그린에 대한 IC50 값이 10 nM 초과를 나타낸다. 일부 구현예에서, 화합물은 αVβ8 인테그린 기능에 대한 고체상 수용체 검정에 의해 측정될 때, αVβ8 인테그린에 대한 IC50 값이 10 nM 초과을 나타낸다. 일부 구현예에서, 화합물은 각각 αVβ6 및 αVβ8 인테그린 기능에 대한 고체상 수용체 검정에 의해 측정될 때, αVβ6 및 αVβ8 인테그린 각각에 대한 IC50 값이 10 nM 초과를 나타낸다. 일부 구현예에서, 화합물은 αIIbβ3 인테그린 기능에 대한 고체상 수용체 검정에 의해 측정될 때, αIIbβ3 인테그린에 대한 IC50 값이 2,000 nM 초과를 나타낸다. 일부 구현예에서, 화합물은 αIIbβ3 인테그린 기능에 대한 고체상 수용체 검정에 의해 측정될 때, αIIbβ3 인테그린에 대한 IC50 값이 5,000 nM 초과를 나타낸다.
II. 치료 방법
본 개시내용은 제약, 의약 및 세포 생물학 분야에 관한 것이다. 더 구체적으로, 본 개시내용은 α5β1, αvβ1, αvβ3, 및/또는 αvβ5 인테그린의 길항제와 같은 하나 이상의 특정 인테그린의 길항제로서 사용될 수 있는 약제 (화합물) 및 이의 약제학적 조성물에 관한 것이다. 이와 같이, 이들 화합물은 예를 들어, 이들 인테그린 중 하나 이상을 억제 또는 길항함으로써 그와 같은 인테그린 중 하나 이상에 의해 매개된 병태를 치료하기 위한 약제학적 조성물 및 방법에서 사용될 수 있다. 본 개시내용의 여러 측면에서, 본 명세서에서 제공된 화합물은 이들 인테그린 중 하나와 관련된 다양한 생물학적, 예방 또는 치료 영역에서 사용될 수 있다. 본 개시내용의 일부 측면에서, 본 명세서에 기재된 화합물은 또한 염증성 부작용에 연루되어 있는 αvβ6 및 αvβ8과 같은 다른 인테그린에서 감소된 활성을 나타낼 수 있다 (Huang, 등, 1996; Lacy-Hulbert, 등, 2007; Travis, 등, 2007; Worthington, 등, 2015).
또 다른 측면에서, 본 개시내용은 본 명세서에 개시된 화합물 중 하나 이상, 뿐만 아니라 이의 약제학적 조성물을 사용하여 α5β1, αvβ1, αvβ3, 및/또는 αvβ5 인테그린 중 하나 이상을 억제 또는 길항하는 방법을 제공한다. 그와 같은 약제학적 조성물은 하나 이상의 비-독성, 약제학적으로 허용가능한 담체 및/또는 희석제 및/또는 보조제 (총괄하여 본 명세서에서 "담체" 물질로 지칭됨) 및 원한다면 다른 활성 성분을 추가로 포함한다. 일부 구현예에서, 화합물은 약제학적으로 허용가능한 담체를 추가로 포함하는 약제학적 조성물의 일부로 투여된다. 일부 구현예에서, 화합물 및/또는 이의 약제학적 조성물은 경구로, 비경구로, 또는 흡입 스프레이에 의해, 또는 종래의 약제학적으로 허용가능한 담체, 보조제 및 비히클을 함유하는 단위 투약 제형으로 국소로 투여될 수 있다. 본 명세서에서 사용된 용어 "비경구"는, 예를 들어 피하, 정맥내, 유리체내, 근육내, 흉골내, 투입 기술 또는 복강내를 포함한다. 일부 구현예에서, 본 개시내용의 화합물은 임의의 적절한 경로에 의해 그와 같은 경로에 적합한 약제학적 조성물의 형태로 의도된 치료에 효과적인 용량으로 투여된다. 의학적인 질환의 진행을 예방 또는 저지하거나 의학적인 질환을 치료하는데 필요한 화합물의 치료적으로 효과적인 용량은, 의약 분야에 잘 알려진 전임상 및 임상적 접근법을 사용하여 당해 분야의 숙련가가 쉽게 확인할 수 있다.
당해 분야의 숙련가에게 잘 알려지고 인정되는 표준 실험실 실험 기술 및 절차, 뿐만 아니라 유용성이 알려진 화합물과의 비교에 기초하여, 상기 기재된 화합물은 상기 병리학적 질환로 고통받는 환자의 치료에 사용될 수 있다. 당해 분야의 숙련가는 본 개시의 가장 적절한 화합물의 선택이 당해 분야의 숙련가의 능력 내에 있으며 표준 검정 및 동물 모델에서 얻어진 결과의 평가를 포함하는 다양한 인자에 의존할 것이라는 것을 인식할 것이다.
본 개시내용의 여러 측면에서, 본 명세서에 제공된 화합물은 하나 이상의 α5β1, αvβ1, αvβ3, 및/또는 αvβ5 인테그린이 역할을 하는 것을 포함하는, 다양한 생물학적, 예방 또는 치료 분야에서 사용될 수 있다.
본 개시내용은 또한 폐 섬유증, 신장, 심장, 근육 및 간 섬유증, 경피증, 망막, 각막 및 피부 흉터와 같은 흉터와 같은, 섬유증 및 섬유성 질환과 관련된 병리학적 질환을 치료 또는 억제하는 것을 포함한다. 추가로, 그와 같은 인테그린 길항제는 비제한적으로 골다공증, 골형성 부전증, 파제트병(Paget's disease), 악성 체액성 고칼슘혈증, 원발성 및 전이성 골암 및 류마티스성 관절염을 포함하는 관절염을 포함하는, 증가되거나 과도한 골 손실을 특징으로 하는 질환의 치료에 유용할 수 있다. 또한, 그와 같은 약제는 암, 황반 변성, 유리체망막병증 및 당뇨병성 망막증과 같은 질환과 관련된 병리학적인 혈관신생 및 섬유증의 감소에 유용할 수 있다.
III. 약제학적 제형 및 투여 경로
그와 같은 치료가 필요한 동물 특히 포유동물에게 투여하기 위해, 치료적 유효량의 화합물은 통상적으로 지시된 투여 경로에 적합한 하나 이상의 부형제와 조합된다. 본 개시내용의 화합물은 수의학적 환자뿐만 아니라 인간 환자를 치료할 수 있는 방식으로 제형화되는 것으로 고려된다. 일부 구현예에서, 수의학적 환자는 반려 동물, 가축 동물, 동물원 동물, 및 야생 동물일 수 있다. 상기 화합물은 락토스, 수크로스, 전분 분말, 알칸산의 셀룰로스 에스테르, 셀룰로스 알킬 에스테르, 활석, 스테아르산, 스테아르산마그네슘, 산화마그네슘, 인산 및 황산의 나트륨 및 칼슘 염, 젤라틴, 아카시아, 알긴산나트륨, 폴리비닐피롤리돈, 및/또는 폴리비닐 알코올과 혼합될 수 있으며, 편리한 투여를 위해 정제화 또는 캡슐화된다. 대안적으로, 상기 화합물은 물, 폴리에틸렌 글리콜, 프로필렌 글리콜, 에탄올, 옥수수유, 면실유, 낙화생유, 참깨유, 벤질 알코올, 염화나트륨, 및/또는 다양한 완충액에 용해될 수 있다. 다른 부형제 및 투여 방식은 제약 분야에 널리 잘 알려져 있으며, 치료되는 동물의 유형에 따라 조정될 수 있다.
본 개시내용에 유용한 약제학적 조성물은, 멸균과 같은 종래의 약제학적 조작을 거칠 수 있고/있거나, 보존제, 안정제, 습윤제, 유화제, 완충액 등과 같은 종래의 약제학적 담체 및 부형제를 함유할 수 있다.
본 개시내용의 화합물은 다양한 방법에 의해, 예를 들어, 경구로 또는 주사에 의해 (예를 들어, 피하, 정맥내, 복강내 등) 투여될 수 있다. 투여 경로에 따라, 활성 화합물은 산의 작용 및 상기 화합물을 불활성화시킬 수 있는 기타 자연 조건(natural condition)으로부터 상기 화합물을 보호하는 물질로 코팅될 수 있다. 활성 화합물은 또한 질환이나 상처 부위의 지속적인 관류/주입에 의해 투여될 수 있다.
비경구 투여 이외의 방법으로 치료 화합물을 투여하기 위해, 상기 화합물을 이의 불활성화를 방지하기 위한 물질로 코팅하거나 상기 화합물을 상기 물질과 공-투여할 필요가 있을 수 있다. 예를 들어, 치료 화합물은 적절한 담체, 예를 들어, 리포좀 또는 희석제에서 환자에게 투여될 수 있다. 약제학적으로 허용가능한 희석제는 염수 및 수성 완충 용액을 포함한다. 리포좀은 수중유중수(water-in-oil-in-water) CGF 에멀젼뿐만 아니라 종래의 리포좀을 포함한다.
치료 화합물은 또한 비경구, 복강내, 척수내 또는 뇌내 투여될 수 있다. 분산액은 글리세롤, 액체 폴리에틸렌 글리콜, 및 이들의 혼합물 및 오일 중에서 제조될 수 있다. 일반적인 저장 및 사용 조건하에서, 이들 제제는 미생물의 성장을 방지하는 보존제를 함유할 수 있다.
약제학적 조성물은 멸균 수용액 (수용성인 경우) 또는 분산액 및 멸균 주사가능한 용액 또는 분산액의 즉석 제조를 위한 멸균 분말을 포함하는 주사제 용도에 적합할 수 있다. 모든 경우에, 상기 조성물은 무균이어야 하고 용이한 주사능(syringeability)이 존재할 정도로 유동적이어야 한다. 상기 조성물은 제조 및 저장 조건하에서 안정해야 하며 박테리아 및 진균과 같은 미생물의 오염 작용으로부터 보호되어야 한다. 상기 담체는, 예를 들어, 물, 에탄올, 폴리올 (예컨대, 글리세롤, 프로필렌 글리콜, 및 액체 폴리에틸렌 글리콜, 등), 이들의 적절한 혼합물, 및 식물성 오일을 함유하는 용매 또는 분산 매질일 수 있다. 적절한 유동성은 레시틴과 같은 코팅물의 사용, 분산될 때 필요한 입자 크기의 유지 및 계면활성제의 사용에 의해 유지될 수 있다. 미생물 작용의 방지는 다양한 항균제 및 항진균제, 예를 들어, 파라벤, 클로로부탄올, 페놀, 아스코르브산, 티메로살 등을 사용하여 달성될 수 있다. 많은 경우에, 등장제, 예를 들어, 당류, 염화나트륨 또는 다가알코올 예컨대 만니톨 및 소르비톨을 상기 조성물 내에 포함시키는 것이 유용할 수 있다. 주사용 조성물의 장시간 흡수는 흡수를 지연시키는 제제, 예를 들어, 모노스테아르산알루미늄 또는 젤라틴을 상기 조성물 내에 포함시킴으로써 이루어질 수 있다.
멸균 주사용 용액은 필요에 따라 상기 열거된 성분 중 하나 또는 상기 성분의 조합과 함께 적절한 용매 중에서 필요한 양의 치료 화합물을 혼입시킨 후 여과 멸균하여 제조될 수 있다. 일반적으로, 분산액은 치료 화합물을 염기성 분산 매질 및 상기 열거된 것들 중 필요한 다른 성분을 함유하는 멸균 담체에 혼입시킴으로써 제조된다. 멸균 주사용 용액의 제조를 위한 멸균 분말의 경우에, 제조 방법은 활성 성분 (즉, 치료 화합물) 및 임의의 추가의 원하는 성분의 분말을 이전에 멸균 여과된 용액으로부터 생성시키는 진공 건조 및 동결건조를 포함한다.
치료 화합물은, 예를 들어, 불활성 희석제 또는 동화성 식용 담체(assimilable edible carrier)와 함께 경구로 투여될 수 있다. 치료 화합물 및 기타 성분은 또한, 경질 또는 연질 쉘 젤라틴 캡슐에 봉입되거나, 정제로 압출되거나, 대상체의 식이에 바로 혼입될 수 있다. 경구 치료적 투여를 위해, 치료 화합물은 부형제와 혼입될 수 있고, 삼킬 수 있는 정제, 구강정(buccal tablet), 구내정(troche), 캡슐, 엘릭시르, 현탁액, 시럽, 웨이퍼 등의 형태로 사용될 수 있다. 조성물 및 제제 내 치료 화합물의 백분율은 물론 다양할 수 있다. 그와 같은 치료적으로 유용한 조성물 내 치료 화합물의 양은 적절한 투약량이 얻어질 수 있는 양이다.
투여의 용이성 및 투약량의 균일성을 위해 투약 단위 형태로 비경구 조성물을 제형화하는 것이 특히 유리하다. 본 명세서에서 사용된 투약 단위 형태는 치료하고자 하는 대상체에 대한 단일 투약량으로 적합한 물리적으로 분리된 단위를 지칭하며; 각 단위는 요구되는 약제학적 담체와 연합하여 원하는 치료 효과를 생성하도록 계산된 소정량의 치료 화합물을 함유한다. 본 개시내용의 투약 단위 형태에 대한 명세는 (a) 치료 화합물의 독특한 특성 및 달성될 특정 치료 효과, 및 (b) 환자에서 선택된 상태의 치료를 위한 그와 같은 치료 화합물을 화합하는 기술에 내재된 한계에 의해 결정되고 이에 직접적으로 의존한다.
치료 화합물은 또한, 피부, 눈, 또는 점막으로 국소적으로 또는 주사에 의해 투여될 수 있다. 대안적으로, 폐로의 국소 전달이 바람직하다면, 치료 화합물은 건조-분말 또는 에어로졸 제형으로 흡입에 의해 투여될 수 있다.
활성 화합물은 환자의 상태와 관련된 병태를 치료하는데 충분한 치료적으로 효과적인 투약량으로 투여된다. 예를 들어, 화합물의 효능은 실시예 및 도면에 도시된 모델 시스템과 같은 인간 또는 또 다른 동물에서 질환을 치료할 때에 효능을 예측할 수 있는 동물 모델 시스템에서 평가될 수 있다.
치료제의 유효 용량 범위는 여러 상이한 동물에 대한 동물 연구에서 결정된 유효 용량으로부터 외삽될 수 있다. 일반적으로, 다음 공식에 따라 mg/kg 단위의 인간 대응 용량 (human equivalent dose; HED)을 계산할 수 있다 (예를 들어, 본 명세서에 참고로 포함된 Reagan-Shaw 등, FASEB J., 22(3):659-661, 2008 참조):
HED (mg/kg) = 동물 용량 (mg/kg) Х (동물 K m /인간 K m )
변환에서 Km 인자를 사용하면 오직 체질량에 근거하기보다는 체표면적 (BSA)에 근거한 보다 정확한 HED 값을 얻는다. 인간 및 다양한 동물에 대한 Km 값은 잘 알려져 있다. 예를 들어, 평균 60 kg 인간 (BSA가 1.6 m2임)의 Km은 37인 반면, 20 kg 유아 (BSA 0.8 m2)는 Km이 25일 것이다. 하기를 포함하여, 일부 관련 동물 모델에 대한 Km도 잘 알려져 있다: 마우스 3의 Km (체중이 0.02 kg이고 BSA가 0.007인 경우); 햄스터 5의 Km (체중이 0.08 kg이고 BSA가 0.02인 경우); 랫트 6의 Km (체중이 0.15 kg이고 BSA가 0.025인 경우) 및 원숭이 12의 Km (체중이 3 kg이고 BSA가 0.24인 경우).
치료 조성물의 정확한 양은 의사의 판단에 의존하며 개개인에게 특유하다. 그럼에도 불구하고, 계산된 HED 용량은 일반적인 지침을 제공한다. 용량에 영향을 미치는 다른 인자는 환자의 신체 및 임상 상태, 투여 경로, 의도된 치료 목표 및 특정 치료 제형의 역가, 안정성 및 독성을 포함한다.
대상체에게 투여되는 본 개시내용의 화합물 또는 본 개시내용의 화합물을 포함하는 조성물의 실제 투약량은 치료되는 동물의 유형, 연령, 성별, 체중, 상태의 중증도, 치료되는 질환의 유형, 이전 또는 동시 치료 개입, 대상체의 특발성(idiopathy) 및 투여 경로와 같은 물리적 및 생리적 요인에 의해 결정될 수 있다. 이들 요인은 숙련가에 의해 결정될 수 있다. 투여를 담당하는 의사는 전형적으로 조성물 중의 활성 성분(들)의 농도 및 개별 대상체에게 적절한 용량(들)을 결정할 것이다. 투약량은 임의의 합병증이 있는 경우에 개별 의사가 조정할 수 있다.
유효량은 전형적으로 (물론 투여 방식 및 상기 논의된 인자에 따라) 1일 또는 수 일간 매일 1회 이상의 용량 투여에서 약 0.001 mg/kg 내지 약 1000 mg/kg, 약 0.01 mg/kg 내지 약 750 mg/kg, 약 100 mg/kg 내지 약 500 mg/kg, 약 1.0 mg/kg 내지 약 250 mg/kg, 약 10.0 mg/kg 내지 약 150 mg/kg으로 다양할 것이다. 다른 적합한 용량 범위는 1 mg 내지 10000 mg/일, 100 mg 내지 10000 mg/일, 500 mg 내지 10000 mg/일, 및 500 mg 내지 1000 mg/일을 포함한다. 일부 특정 구현예에서, 상기 양은 10,000 mg/일 미만이며, 그 범위는 750 mg 내지 9000 mg/일이다.
상기 유효량은 1 mg/kg/일 미만, 500 mg/kg/일 미만, 250 mg/kg/일 미만, 100 mg/kg/일 미만, 50 mg/kg/일 미만, 25 mg/kg/일 미만 또는 10 mg/kg/일 미만일 수 있다. 대안적으로, 상기 유효량은 1 mg/kg/일 내지 200 mg/kg/일의 범위일 수 있다. 예를 들어, 당뇨병 환자의 치료와 관련하여, 단위 투약량은 미치료된 대상체와 비교하여 혈당을 적어도 40% 감소시키는 양일 수 있다. 또 다른 구현예에서, 상기 단위 투약량은 비-당뇨병 대상체의 혈당 수준의 ± 10%인 수준으로 혈당을 감소시키는 양이다.
다른 비제한적인 예에서, 용량은 또한 투여당 약 1 마이크로그램/kg/체중, 약 5 마이크로그램/kg/체중, 약 10 마이크로그램/kg/체중, 약 50 마이크로그램/kg/체중, 약 100 마이크로그램/kg/체중, 약 200 마이크로그램/kg/체중, 약 350 마이크로그램/kg/체중, 약 500 마이크로그램/kg/체중, 약 1 밀리그램/kg/체중, 약 5 밀리그램/kg/체중, 약 10 밀리그램/kg/체중, 약 50 밀리그램/kg/체중, 약 100 밀리그램/kg/체중, 약 200 밀리그램/kg/체중, 약 350 밀리그램/kg/체중, 약 500 밀리그램/kg/체중, 내지 약 1000 mg/kg/체중 또는 그 이상, 및 이로부터 유도가능한 임의의 범위를 포함할 수 있다. 여기에 열거된 수로부터 유도가능한 범위의 비제한적인 예에서, 약 5 mg/kg/체중 내지 약 100 mg/kg/체중, 약 5 마이크로그램/kg/체중 내지 약 500 밀리그램/kg/체중, 등의 범위가 상기 기재된 수치에 근거하여 투여될 수 있다.
특정 구현예에서, 본 개시내용의 약제학적 조성물은, 예를 들어, 적어도 약 0.1%의 본 개시내용의 화합물을 포함할 수 있다. 다른 구현예에서, 본 개시내용의 화합물은 예를 들어 단위 중량의 약 1% 내지 약 75%, 또는 약 25% 내지 약 60%, 및 이로부터 유도가능한 임의의 범위를 포함할 수 있다.
단일 또는 다중 용량의 제제가 고려된다. 다중 용량의 전달을 위한 원하는 시간 간격은 당해 분야의 숙련가에 의해 일상적인 실험만을 사용하여 결정될 수 있다. 예로써, 대상체는 대략 12시간 간격으로 매일 2회 용량으로 투여될 수 있다. 일부 구현예에서, 상기 제제는 1일 1회 투여된다.
상기 제제(들)는 일상적인 스케줄에 따라 투여될 수 있다. 본 명세서에서 사용된 바와 같이 일상적인 스케줄은 미리 결정된 지정된 시간 기간을 지칭한다. 일상적인 스케줄은 상기 스케줄이 미리 결정되는 한 동일하거나 길이가 다른 기간을 포함할 수 있다. 예를 들어, 일상적인 스케줄은 1일 2회, 매일, 2일마다, 3일마다, 4일마다, 5일마다, 6일마다, 주 단위로, 월 단위로 또는 그 사이의 임의의 설정된 일수 또는 주수로 투여하는 것을 포함할 수 있다. 대안적으로, 미리 결정된 일상적인 스케줄은 첫 일주일 동안 매일 2회 투여되고, 이어서 수개월 동안 매일 등으로 투여하는 것을 포함할 수 있다. 다른 구현예에서, 본 개시내용은 제제(들)가 경구로 복용될 수 있고, 그 시기가 음식물 섭취에 의존적이거나 의존적이지 않다고 규정한다. 따라서, 예를 들어, 상기 제제는 대상체가 섭취했거나 섭취할 때와 상관없이 매일 아침 및/또는 매일 저녁에 복용할 수 있다.
IV. 병용 요법
단일요법으로 사용되는 것 이외에, 본 개시내용의 화합물은 또한 병용 요법에서 사용할 수 있다. 효과적인 병용 요법은 두 제제 모두를 포함하는 단일 조성물 또는 약리학적 제형, 또는 동시에 투여되는 두 개의 별개의 조성물 또는 제형으로 달성될 수 있으며, 여기서 하나의 조성물은 본 개시내용의 화합물을 포함하고, 다른 조성물은 제2 제제(들)를 포함한다. 대안적으로, 상기 요법은 수 분에서 수개월에 이르는 간격으로 다른 제제 치료를 선행하거나 후행할 수 있다.
그와 같은 병용 요법의 비제한적인 예는 하나 이상의 본 개시내용의 화합물과 또 다른 제제, 예를 들어, 항염증제, 화학 요법제, 방사선 요법, 항우울제, 항정신병제, 항경련제, 기분 안정제, 항감염제, 항고혈압제, 콜레스테롤-저하제 또는 다른 혈중 지질 조절제, 체중 감소 촉진 제제, 항혈전제, 심근경색 또는 뇌졸중과 같은 심혈관 사건을 치료 또는 예방하는 제제, 항당뇨병제, 이식 거부 또는 이식편 대 숙주 질환을 감소시키는 제제, 항관절염제, 진통제, 항천식제 또는 기타 호흡기 질환 치료제, 또는 피부 장애의 치료제 또는 예방제의 조합을 포함한다. 본 개시내용의 화합물은 (비제한적으로) 암 백신을 포함하여, 암에 대한 환자의 면역 반응을 향상시키도록 고안된 제제와 조합될 수 있다.
V. 정의
화학 기의 맥락에서 사용될 때: "수소"는 -H를 의미하고; "하이드록시"는 -OH를 의미하고; "옥소"는 =O를 의미하고; "카르복시"는 -C(=O)OH (또한 -COOH 또는 -CO2H로도 표기됨)를 의미하고; "할로"는 독립적으로 -F, -Cl, -Br 또는 -I를 의미하고; "아미노"는 -NH2를 의미하고; "시아노"는 -CN을 의미하고; "아지도"는 -N3을 의미하고; "머캅토"는 -SH를 의미하고; "티오"는 =S를 의미한다.
화학식의 맥락에서, 기호 "-"는 단일 결합을 의미하고, "="는 이중 결합을 의미하고, "≡"는 삼중 결합을 의미한다. 기호 "----"는 존재한다며 단일 또는 이중인 선택적인 결합을 나타낸다. 기호 "
Figure pct00038
"는 단일 결합 또는 이중 결합을 나타낸다. 따라서, 식
Figure pct00039
는 예를 들어,
Figure pct00040
,
Figure pct00041
및
Figure pct00042
를 포괄한다. 그리고 그와 같은 고리 원자는 하나 이상의 이중 결합의 일부를 형성하지 않는다는 것이 이해된다. 또한, 공유 결합 기호 "-"는 하나 또는 두 개의 입체 발생(stereogenic) 원자를 연결하는 경우 임의의 바람직한 입체화학을 나타내지 않는다는 것을 유의해야 한다. 대신, 그것은 모든 입체이성질체뿐만 아니라 이들의 혼합물을 포함한다. 기호 "
Figure pct00043
"는 결합을 가로질러 수직으로 그려질 때 (예를 들어, 메틸의 경우
Figure pct00044
) 화학기의 부착점을 나타낸다. 부착점은 전형적으로 부착점을 명확하게 식별하는 데 독자를 돕기 위해 큰 화학기에 대해서만 이 방식으로 식별된다는 것을 유의해야 한다. 기호 "
Figure pct00045
"는 웨지(wedge)의 두꺼운 끝 부분에 부착된 화학기가 "페이지 밖(out of the page)"인 단일 결합을 의미한다. 기호 "
Figure pct00046
"는 웨지의 두꺼운 끝 부분에 부착된 화학기가 "페이지에" 있는 단일 결합을 의미한다. 기호 "
Figure pct00047
"는 이중 결합 주위의 기하학 (예를 들어, E 또는 Z)이 정의되지 않은 단일 결합을 의미한다. 따라서 두 가지 옵션, 뿐만 아니라 이들의 조합이 의도된다. 본원에 도시된 구조의 원자 상의 임의의 정의되지 않은 원자가는 그 원자에 결합된 수소 원자를 암시적으로 나타낸다. 탄소 원자 상의 굵은 점은 그 탄소에 부착된 수소가 종이면 밖으로 향하고 있음을 나타낸다.
그룹 "R"이, 예를 들어, 하기 식에서 고리 시스템 상의 "플로팅(floating) 기"로 기재되는 경우:
Figure pct00048
,
R은 안정한 구조가 형성되는 한, 기재되거나, 암시된 또는 명확하게 정의된 수소를 포함하여, 임의의 고리 원자에 부착된 임의의 수소 원자를 대체할 수 있다. 그룹 "R"이, 예를 들어, 하기 식에서와 같이, 융합된 고리 시스템 상의 "플로팅 기"로 기재되는 경우:
Figure pct00049
R은 달리 명시되지 않는 한, 융합된 고리 중 어느 하나의 임의의 고리 원자에 부착된 임의의 수소를 대체할 수 있다. 대체가능한 수소는 기재된 수소 (예를 들어, 상기 화학식에서 질소에 부착된 수소), 암시된 수소 (예를 들어, 도시되지는 않았지만 존재하는 것으로 이해되는 상기 식의 수소), 명확하게 정의된 수소, 및 안정한 구조가 형성되는 한, 그 존재가 고리 원자의 신원(identity)에 의존하는 선택적인 수소 (예를 들어, X가 -CH-인 경우, X 기에 부착된 수소)를 포함한다. 기재된 예에서, R은 융합된 고리 시스템의 5원 또는 6원 고리 상에 존재할 수 있다. 상기 식에서, 괄호 안에 있는 그룹 "R" 바로 뒤에 오는 아래 첨자 "y"는 숫자 변수를 나타낸다. 달리 명시되지 않는 한, 이 변수는 0, 1, 2, 또는 2보다 큰 임의의 정수일 수 있으며, 고리 또는 고리 시스템의 대체가능한 수소 원자의 최대 수에 의해서만 제한된다.
화학기 및 화합물 부류의 경우, 화학기 또는 부류 내의 탄소 원자의 수는 다음과 같이 표시된다: "Cn"은 화학기/부류 내의 탄소 원자의 정확한 수 (n)를 규정한다. "C≤n"은 화학기/부류에 존재할 수 있는 탄소 원자의 최대 수 (n)를 규정하며, 최소 수는 해당 화학기/부류에 대해 가능한 한 작은 수이며, 예를 들어, "알케닐(C≤8)" 또는 부류 "알켄(C≤8)" 기 내의 탄소 원자의 최소 수는 2인 것으로 이해된다. 1 내지 10개의 탄소 원자를 갖는 알콕시기를 나타내는 "알콕시(C≤10)"와 비교한다. "Cn -n'"는 화학기 내 탄소 원자의 최소 수 (n) 및 최대 수 (n') 모두를 규정한다. 따라서 "알킬(C2-10)"은 2 내지 10개의 탄소 원자를 갖는 알킬기를 나타낸다. 이들 탄소 수 지시자는 수식하는 화학기 또는 부류에 선행하거나 후행할 수 있으며, 의미상 어떠한 변화도 나타내지 않고 괄호 안에 있거나 있지 않을 수 있다. 따라서, 용어 "C5 올레핀", "C5-올레핀", "올레핀(C5)", 및 "올레핀C5"는 모두 동의어이다. 본 명세서에 규정된 화학기 또는 화합물 부류 중 임의의 것이 용어 "치환된"으로 수식된 경우, 수소 원자를 대체하는 모이어티 내 임의의 탄소 원자(들)는 계산되지 않는다. 따라서 총 7개의 탄소 원자를 갖는 메톡시헥실은 치환된 알킬(C1-6)의 예이다.
화합물 또는 화학기를 수식하기 위해 사용되는 용어 "포화된"은 아래에 언급된 경우를 제외하고 화합물 또는 화학기에 탄소-탄소 이중 결합 및 탄소-탄소 삼중 결합이 없음을 의미한다. 상기 용어가 원자를 수식하는데 사용되는 경우, 원자는 임의의 이중 또는 삼중 결합의 일부가 아님을 의미한다. 포화된 그룹의 치환된 버전의 경우, 하나 이상의 탄소 산소 이중 결합 또는 탄소 질소 이중 결합이 존재할 수 있다. 그리고 그와 같은 결합이 존재하는 경우, 케토-엔올 호변이성질체화(tautomerism) 또는 이민/엔아민 호변이성질체화의 일부로서 발생할 수 있는 탄소-탄소 이중 결합은 배제되지 않는다. 용어 "포화된"이 물질의 용액을 수식하는데 사용되는 경우, 이는 그 물질이 더 이상 그 용액에 용해될 수 없음을 의미한다.
"치환된"이란 수식어 없이 사용되는 용어 "지방족"은, 이렇게 수식된 화합물 또는 화학기가 비환형 또는 환형이지만, 비-방향족 탄화수소 화합물 또는 화학기임을 의미한다. 지방족 화합물/그룹에서, 탄소 원자는 직쇄, 분지쇄, 또는 비-방향족 고리 (지환족)에서 함께 연결될 수 있다. 지방족 화합물/기는 탄소-탄소 결합 (알칸/알킬)에 의해 연결된 포화 상태이거나 하나 이상의 탄소-탄소 이중 결합 (알켄/알케닐) 또는 하나 이상의 탄소-탄소 삼중 결합 (알킨/알키닐)을 갖는 불포화 상태일 수 있다.
화합물 또는 화학기를 수식하기 위해 사용되는 용어 "방향족"은, 완전 공액 환형 π 시스템에서 4n +2 전자를 갖는 원자의 평면 불포화 고리를 지칭한다.
"치환된"이란 수식어 없이 사용되는 용어 "알킬"은, 부착점으로서 탄소 원자를 갖고, 선형 또는 분지형 비환형 구조를 가지며, 탄소와 수소 이외의 원자는 갖지 않는 1가 포화 지방족기를 지칭한다. 그룹 -CH3 (Me), -CH2CH3 (Et), -CH2CH2CH3 (n-Pr 또는 프로필), -CH(CH3)2 (i-Pr, i Pr 또는 이소프로필), -CH2CH2CH2CH3 (n-Bu), -CH(CH3)CH2CH3 (sec-부틸), -CH2CH(CH3)2 (이소부틸), -C(CH3)3 (tert-부틸, t-부틸, t-Bu 또는 t Bu), 및 -CH2C(CH3)3 (네오-펜틸)이 알킬기의 비제한적인 예이다. "치환된"이란 수식어 없이 사용되는 용어 "알칸디일"은, 부착 점(들)으로서 하나 또는 2개의 포화 탄소 원자(들)를 갖고, 선형 또는 분지형 비환형 구조를 가지며 탄소-탄소 이중 또는 삼중 결합을 갖지 않으며 탄소와 수소 이외의 원자는 갖지 않는 2가 포화 지방족 그룹을 지칭한다. -CH2- (메틸렌), -CH2CH2-, -CH2C(CH3)2CH2-, 및 -CH2CH2CH2- 기가 알칸디일 기의 비제한적인 예이다. "치환된"이란 수식어 없이 사용되는 용어 "알킬리덴"은, 2가 그룹 =CRR'를 지칭하며, 여기서 R 및 R'는 독립적으로 수소 또는 알킬이다. 알킬리덴 기의 비제한적인 예는 다음을 포함한다: =CH2, =CH(CH2CH3), 및 =C(CH3)2. "알칸"은 식 H-R을 갖는 화합물 부류를 지칭하며, 여기서 R은 이 용어가 상기 정의된 바와 같이 알킬이다. 이들 용어 중 임의의 것이 "치환된"이란 수식어와 함께 사용되는 경우, 하나 이상의 수소 원자는 독립적으로 -OH, -F, -Cl, -Br, -I, -NH2, -NO2, -CO2H, -CO2CH3, -CN, -SH, -OCH3, -OCH2CH3, -C(O)CH3, -NHCH3, -NHCH2CH3, -N(CH3)2, -C(O)NH2, -C(O)NHCH3, -C(O)N(CH3)2, -OC(O)CH3, -NHC(O)CH3, -S(O)2OH, 또는 -S(O)2NH2로 치환되었다. 하기 화학기는 치환된 알킬기의 비제한적인 예이다: -CH2OH, -CH2Cl, -CF3, -CH2CN, -CH2C(O)OH, -CH2C(O)OCH3, -CH2C(O)NH2, -CH2C(O)CH3, -CH2OCH3, -CH2OC(O)CH3, -CH2NH2, -CH2N(CH3)2, 및 -CH2CH2Cl. 용어 "할로알킬"은 치환된 알킬의 서브셋으로, 수소 원자의 치환은 탄소, 수소 및 할로겐을 제외한 다른 원자가 존재하지 않도록 할로 (즉, -F, -Cl, -Br 또는 -I)로 제한된다. -CH2Cl 기가 할로알킬의 비제한적인 예이다. 용어 "플루오로알킬"은 치환된 알킬의 서브셋으로, 수소 원자의 치환은 탄소, 수소 및 불소를 제외한 다른 원자가 존재하지 않도록 플루오로로 제한된다. 그룹 -CH2F, -CF3, 및 -CH2CF3이 플루오로알킬기의 비제한적인 예이다.
"치환된"이란 수식어 없이 사용되는 용어 "아릴"은, 부착점으로서 방향족 탄소 원자를 갖는 1가 불포화 방향족 그룹을 지칭하며, 상기 탄소 원자는 하나 이상의 6원 방향족 고리 구조의 일부를 형성하고, 여기서 고리 원자는 모두 탄소이고, 상기 그룹은 탄소와 수소 이외의 원자가 없다. 하나 초과의 고리가 존재한다면, 고리는 융합되거나 융합되지 않을 수 있다. 본 명세서에서 사용된 바와 같이, 상기 용어는 존재하는 제1 방향족 고리 또는 임의의 추가 방향족 고리에 부착된 하나 이상의 알킬, 사이클로알킬, 및/또는 아르알킬기 (탄소수 제한 허용)의 존재를 배제하지 않는다. 아릴 그룹의 비제한적인 예는 페닐 (Ph), 메틸페닐, (디메틸)페닐, -C6H4CH2CH3 (에틸페닐), 나프틸, 및 바이페닐로부터 유도된 1가 기를 포함한다. "치환된"이란 수식어 없이 사용되는 용어 "아렌디일"은, 부착점으로서 2개의 방향족 탄소 원자를 갖는 2가 방향족 그룹을 지칭하며, 상기 탄소 원자는 하나 이상의 6원 방향족 고리 구조(들)의 일부를 형성하고 여기서 상기 고리 원자는 모두 탄소이고, 1가 그룹은 탄소와 수소 이외의 원자가 없다. 본 명세서에서 사용된 상기 용어는, 존재하는 제1 방향족 고리 또는 임의의 추가 방향족 고리에 부착된 하나 이상의 알킬, 아릴 및/또는 아르알킬기 (탄소수 제한 허용)의 존재를 배제하지 않는다. 하나 초과의 고리가 존재한다면, 고리는 융합되거나 융합되지 않을 수 있다. 융합되지 않은 고리는 하기 중 하나 이상을 통해 연결될 수 있다: 공유 결합, 알칸디일, 또는 알켄디일 그룹 (탄소수 제한 허용). 아렌디일 기의 비제한적인 예는 하기를 포함한다:
Figure pct00050
"아렌"은 식 H-R을 갖는 화합물 부류를 지칭하며, 여기서 R은 그 용어가 상기 정의된 바와 같이 아릴이다. 벤젠 및 톨루엔이 아렌의 비제한적인 예이다. 이들 용어 중 임의의 것이 "치환된"이란 수식어와 함께 사용되는 경우, 방향족 고리(들) 또는 이에 부착된 임의의 알킬, 사이클로알킬, 및/또는 아랄킬 기 상의 하나 이상의 수소 원자는 독립적으로 -OH, -F, -Cl, -Br, -I, -NH2, -NO2, -CO2H, -CO2CH3, -CN, -SH, -OCH3, -OCH2CH3, -C(O)CH3, -NHCH3, -NHCH2CH3, -N(CH3)2, -C(O)NH2, -C(O)NHCH3, -C(O)N(CH3)2, -OC(O)CH3, -NHC(O)CH3, -S(O)2OH, 또는 -S(O)2NH2로 치환되었다.
"치환된"이란 수식어 없이 사용되는 용어 "아랄킬"은, 1가 그룹 -알칸디일-아릴을 지칭하며, 여기서 용어 알칸디일 및 아릴은, 각각 상기 제공된 정의와 일치하는 방식으로 사용된다. 비제한적인 예는 다음과 같다: 페닐메틸 (벤질, Bn) 및 2-페닐-에틸. 용어 아르알킬이 "치환된"이란 수식어와 함께 사용되는 경우, 알칸디일 및/또는 아릴 그룹으로부터의 하나 이상의 수소 원자는 독립적으로 -OH, -F, -Cl, -Br, -I, -NH2, -NO2, -CO2H, -CO2CH3, -CN, -SH, -OCH3, -OCH2CH3, -C(O)CH3, -NHCH3, -NHCH2CH3, -N(CH3)2, -C(O)NH2, -C(O)NHCH3, -C(O)N(CH3)2, -OC(O)CH3, -NHC(O)CH3, -S(O)2OH, 또는 -S(O)2NH2로 치환되었다. 치환된 아르알킬의 비제한적인 예는 다음과 같다: (3-클로로페닐)-메틸, 및 2-클로로-2-페닐-에트-1-일.
"치환된"이란 수식어 없이 사용되는 용어 "알콕시"는, -OR 기를 지칭하고, 여기서 R은 그 용어가 상기 정의된 바와 같이 알킬이다. 비제한적인 예는 하기를 포함한다: -OCH3 (메톡시), -OCH2CH3 (에톡시), -OCH2CH2CH3, -OCH(CH3)2 (이소프로폭시), -OC(CH3)3 (tert-부톡시), -OCH(CH2)2, -O-사이클로펜틸, 및 -O-사이클로헥실. "치환된"이란 수식어 없이 사용되는 용어 "알킬티오" 및 "아실티오"는, -SR 기를 지칭하며, 여기서 R은 각각 알킬 및 아실이다. 용어 "알코올"은 상기 정의된 바와 같은 알칸에 상응하며, 여기서 수소 원자 중 적어도 하나는 하이드록시 기로 치환되었다. 용어 "에테르"는 상기 정의된 바와 같은 알칸에 상응하며, 여기서 수소 원자 중 적어도 하나는 알콕시 그룹으로 치환되었다. 이들 용어 중 임의의 것이 "치환된"이란 수식어와 함께 사용되는 경우, 하나 이상의 수소 원자는 독립적으로 -OH, -F, -Cl, -Br, -I, -NH2, -NO2, -CO2H, -CO2CH3, -CN, -SH, -OCH3, -OCH2CH3, -C(O)CH3, -NHCH3, -NHCH2CH3, -N(CH3)2, -C(O)NH2, -C(O)NHCH3, -C(O)N(CH3)2, -OC(O)CH3, -NHC(O)CH3, -S(O)2OH, 또는 -S(O)2NH2로 치환되었다.
청구범위 및/또는 명세서에서 "포함하는"이란 용어와 함께 사용되는 경우, 단수 용어 ["a" 또는 "an"]의 사용은 "하나"를 의미할 수 있지만, 이는 또한 "하나 이상", "적어도 하나" 및 "하나 또는 그 이상"의 의미와 일치한다.
본 명세서 전체에 걸쳐 용어 "약"은 값이 디바이스의 고유한 오차 변동, 상기 값을 결정하는데 이용된 방법, 또는 연구 대상체들 간에 존재하는 변동을 포함한다는 것을 나타내는데 사용된다.
"활성 성분" (AI) (활성 화합물, 활성 물질, 활성제, 약제, 제제, 생물학적 활성 분자, 또는 치료 화합물로도 불림)은 생물학적으로 활성인 의약품(pharmaceutical drug) 또는 살충제의 성분이다. 유사한 용어 활성 약제학적 성분 (active pharmaceutical ingredient; API) 및 벌크 활성 물질(bulk active)도 의학에 사용되며, 용어 활성 물질은 살충제 제형에 사용될 수 있다.
용어 "포함하다(comprise)", "갖다(have)" 및 "포함하다(include)"는, 개방형 연결 동사이다. "포함하다(comprises)", "포함하는(comprising)", "갖다(has)", "갖는(having)", "포함하다(includes)" 및 "포함하는(including)"과 같은 이들 동사 중 하나 이상의 임의의 형태나 시제도 개방형이다. 예를 들어, 하나 이상의 단계를 "포함하는(comprises)", "갖는(has)" 또는 "포함하는(includes)" 임의의 방법은 이들 하나 이상의 단계만을 갖는 것으로 제한되지 않으며 다른 열거되지 않은 단계도 포함한다.
본 명세서 및/또는 청구범위에서 사용된 바와 같이 용어 "효과적인"은, 원하는, 기대된 또는 의도된 결과를 달성하기에 적절함을 의미한다. 화합물로 환자 또는 대상체를 치료하는 맥락에서 사용되는 경우 "유효량", "치료적 유효량" 또는 "약제학적 유효량"은 질환을 치료 또는 예방하기 위해 대상체 또는 환자에게 투여될 때 질환의 그러한 치료 또는 예방을 행하기에 충분한 양인 화합물의 양을 의미한다.
"부형제"는 약물, 약제학적 조성물, 제형, 또는 약물 전달 시스템의 활성 성분(들)과 함께 제형화된 약제학적으로 허용가능한 물질이다. 부형제는, 예를 들어, 조성물을 안정화시키거나, 조성물을 벌크 업(bulk up)하거나 (따라서 이러한 목적으로 사용되는 경우 종종 "벌킹제', "충전제" 또는 "희석제"라고 함) 또는 약물 흡수 촉진, 점도 감소 또는 용해도 향상과 같은 최종 투약 형태의 활성 성분에 대해 치료 강화를 부여하기 위해 사용될 수 있다. 부형제는 부착방지제(antiadherent), 결합제, 코팅제, 염료(color), 붕해제, 향료, 활택제, 윤활제, 방부제, 흡착제, 감미제 및 비히클의 약제학적으로 허용가능한 버전을 포함한다. 활성 성분을 전달하기 위한 매개체로서 작용하는 주요 부형제는 보통 비히클이라고 불린다. 부형제는 또한, 예를 들어, 예상 저장 수명 동안 변성 또는 응집 방지와 같은 시험관내 안정성을 돕는 것 이외에 예컨대 분말 유동성 또는 비-점착 특성을 촉진시킴으로써 활성 물질의 취급을 돕기 위해 제조 공정에서 사용될 수 있다. 부형제의 적합성은 전형적으로 투여 경로, 투약 형태, 활성 성분, 뿐만 아니라 기타 인자에 따라 달라질 것이다.
화합물에 대한 수식어로 사용되는 용어 "수화물"은, 화합물이 화합물의 고체 형태에서와 같이 각각의 화합물 분자와 결합된 하나 미만 (예를 들어, 반수화물), 하나 (예를 들어, 일수화물), 또는 하나 초과 (예를 들어, 이수화물)의 물 분자를 가짐을 의미한다.
본 명세서에 사용된 용어 "IC50"은, 수득된 최대 반응의 50%인 억제 용량을 지칭한다. 이 정량적 측정은 주어진 생물학적, 생화학적 또는 화학적 공정 (또는 공정의 구성 요소, 즉 효소, 세포, 세포 수용체 또는 미생물)을 절반만 억제하기 위해 특정 약물 또는 기타 물질 (억제제)이 얼마나 필요한지를 나타낸다.
제1 화합물의 "이성질체"는 각각의 분자가 제1 화합물과 동일한 구성 원자를 함유하지만 3차원에서 이들 원자의 배열이 다른 별개의 화합물이다.
본 명세서에 사용된 용어 "환자" 또는 "대상체"는, 인간, 원숭이, 소, 양, 염소, 개, 고양이, 마우스, 랫트, 기니아 피그, 또는 이들의 형질전환 종과 같은 살아있는 포유동물 유기체를 지칭한다. 특정 구현예에서, 상기 환자 또는 대상체는 영장류이다. 인간 환자의 비제한적인 예는 성인, 청소년, 유아 및 태아이다.
본 명세서에서 일반적으로 사용되는 "약제학적으로 허용가능한"은, 타당한 의학적 판단의 범위 내에서, 과도한 독성, 자극, 알레르기 반응, 또는 기타 문제 또는 합병증이 없이 인간과 동물의 조직, 기관 및/또는 체액과 접촉하여 사용하기에 적합하고 합리적인 이익/위험 비율에 상응하는 화합물, 물질, 조성물 및/또는 투약 형태를 지칭한다.
"약제학적으로 허용가능한 염"은 상기 정의된 바와 같이 약제학적으로 허용가능하고, 원하는 약리학적 활성을 갖는 본 발명의 화합물의 염을 의미한다. 그와 같은 염은 무기산 예컨대 염산, 브롬화수소산, 황산, 질산, 인산 등; 또는 유기산 예컨대 1,2-에탄디설폰산, 2-하이드록시에탄설폰산, 2-나프탈렌설폰산, 3-페닐프로피온산, 4,4'-메틸렌비스(3-하이드록시-2-엔-1-카르복실산), 4-메틸바이사이클로[2.2.2]옥트-2-엔-1-카르복실산, 아세트산, 지방족 모노카르복실산 및 디카르복실산, 지방족 황산, 방향족 황산, 벤젠설폰산, 벤조산, 캄포르설폰산, 탄산, 신남산, 시트르산, 사이클로펜탄프로피온산, 에탄설폰산, 푸마르산, 글루코헵톤산(glucoheptonic acid), 글루콘산, 글루탐산, 글리콜산, 헵탄산, 헥산산, 하이드록시나프토산, 락트산, 라우릴황산, 말레산, 말산, 말론산, 만델산, 메탄설폰산, 뮤콘산, o-(4-하이드록시벤조일)벤조산, 옥살산, p-클로로벤젠설폰산, 페닐-치환된 알칸산, 프로피온산, p-톨루엔설폰산, 피루브산, 살리실산, 스테아르산, 석신산, 타르타르산, 3차부틸아세트산, 트리메틸아세트산, 트리플루오로아세트산 등으로 형성된 산 부가염을 포함한다. 약제학적으로 허용가능한 염은 또한 존재하는 산성 양성자가 무기 또는 유기 염기와 반응할 수 있을 때 형성될 수 있는 염기 부가염을 포함한다. 허용가능한 무기 염기는 수산화나트륨, 탄산나트륨, 수산화칼륨, 수산화알루미늄 및 수산화칼슘을 포함한다. 허용가능한 유기 염기는 에탄올아민, 디에탄올아민, 트리에탄올아민, 트로메타민, N-메틸글루카민 등을 포함한다. 본 발명의 임의의 염의 일부를 형성하는 특정 음이온 또는 양이온은 염이 전체적으로 약리학적으로 허용되는 한 중요하지 않다는 것을 인식해야 한다. 약제학적으로 허용가능한 염의 추가의 예 및 이의 제조 및 사용 방법은 하기에 제시되어 있다: Handbook of Pharmaceutical Salts: Properties, and Use (P. H. Stahl & C. G. Wermuth eds., Verlag Helvetica Chimica Acta, 2002).
"약제학적으로 허용가능한 담체", "약물 담체" 또는 단순히 "담체"는, 화학 제제의 운반, 전달 및/또는 수송에 관여하는 활성 성분 약물과 함께 제형화된 약제학적으로 허용가능한 물질이다. 약물 담체는 예를 들어, 약물 생체이용률을 조절하고, 약물 대사를 감소시키며, 및/또는 약물 독성을 감소시키는 제어 방출 기술을 포함하여, 약물의 전달 및 유효성을 개선시키는데 사용될 수 있다. 일부 약물 담체는 특정한 표적 부위로의 약물 전달의 유효성을 증가시킬 수 있다. 담체의 예로는 하기를 포함한다: 리포좀, 미소구체 (예를 들어, 폴리(락틱-코-글리콜릭) 산으로 제조됨), 알부민 미소구체, 합성 폴리머, 나노섬유, 단백질-DNA 복합체, 단백질 접합체, 적혈구, 비로좀(virosome) 및 덴드리머.
"의약품" (파마슈티컬(pharmaceutical), 약제(pharmaceutical agent), 약제학적 제제, 약제학적 조성물, 약제학적 제형, 약제학적 산물(pharmaceutical product), 의약 제품(medicinal product), 의약(medicine), 약물(medication), 약제(medicament), 또는 단순히 약물(drug)이라고도 함)은, 질환을 진단, 치유, 치료 또는 예방하기 위해 사용되는 약물이다. 활성 성분 (AI) (상기 정의됨)은 생물학적으로 활성인 의약품 또는 살충제의 성분이다. 유사한 용어 활성 약제학적 성분 (API) 및 벌크 활성 물질도 의약에서 사용되며, 용어 활성 물질은 살충제 제형에 사용될 수 있다. 일부 약물 및 살충 제품은 하나 초과의 활성 성분을 함유할 수 있다. 활성 성분과 대조적으로, 비활성 성분은 약제학적 맥락에서 일반적으로 부형제 (상기 정의됨)라고 불린다.
"예방" 또는 "예방하는"은 하기를 포함한다: (1) 질환의 위험이 있고 및/또는 질환에 걸리기 쉬울 수 있지만 질환의 병리학 또는 증상의 일부 또는 전부를 아직 경험하거나 나타내지 않는 대상체 또는 환자에서 질환의 발병을 억제하는 것, (2) 질환의 위험이 있고 및/또는 질환에 걸리기 쉬울 수 있지만 질환의 병리학 또는 증상의 일부 또는 전부를 아직 경험하거나 나타내지 않는 대상체 또는 환자에서 질환의 병리학 또는 증상의 개시를 늦추는 것.
"프로드럭"은 생체내에서 본 발명에 따른 억제제로 대사적으로 전환될 수 있는 화합물을 의미한다. 프로드럭 자체는 주어진 표적 단백질에 대해 활성을 가질 수 있거나 갖지 않을 수도 있다. 예를 들어, 하이드록시 그룹을 포함하는 화합물은 생체내에서 가수분해에 의해 하이드록시 화합물로 전환되는 에스테르로 투여될 수 있다. 생체내에서 하이드록시 화합물로 전환될 수 있는 적합한 에스테르는 아세테이트, 시트레이트, 락테이트, 포스페이트, 타르트레이트, 말로네이트, 옥살레이트, 살리실레이트, 프로피오네이트, 석시네이트, 푸마레이트, 말레에이트, 메틸렌-비스-β-하이드록시나프토에이트, 겐티세이트, 이세티오네이트, 디-p-톨루오일타르트레이트, 메탄-설포네이트, 에탄설포네이트, 벤젠설포네이트, p-톨루엔설포네이트, 사이클로헥실-설파메이트, 퀴네이트, 아미노산의 에스테르 등을 포함한다. 유사하게, 아민 그룹을 포함하는 화합물은 생체내에서 가수분해에 의해 아민 화합물로 전환되는 아미드로 투여될 수 있다.
"입체이성질체" 또는 "광학 이성질체"는, 동일한 원자가 동일한 다른 원자에 결합되지만 3차원에서 이들 원자의 배열이 상이한 소정의 화합물의 이성질체이다. "에난티오머"는 왼손과 오른손과 같이 서로의 거울상 이미지인 소정의 화합물의 입체이성질체이다. "부분입체이성질체"는 에난티오머가 아닌 소정의 화합물의 입체이성질체이다. 키랄 분자는 입체중심(stereocenter) 또는 입체 중심(stereogenic center)이라고도 하는 키랄 중심을 함유하며, 이는 임의의 2개의 그룹의 상호교환이 입체이성질체를 유도하는 것과 같은 그룹을 지닌 분자 내의 임의의 지점이지만 반드시 원자일 필요는 없다. 유기 화합물에서, 키랄 중심은 전형적으로 탄소, 인 또는 황 원자이지만 유기 및 무기 화합물에서는 다른 원자가 입체중심이 될 수도 있다. 분자는 많은 입체이성질체를 제공하는 다수의 입체중심을 가질 수 있다. 입체이성질성(stereoisomerism)이 사면체 입체 중심 (예를 들어, 사면체 탄소)에 기인한 화합물에서, 가설에 근거해 가능한 입체이성질체의 총수는 2n을 초과하지 않을 것이며, 여기서 n은 사면체 입체중심의 수이다. 대칭성이 있는 분자는 종종 가능한 최대 입체이성질체의 수보다 적다. 에난티오머의 50:50 혼합물을 라세미 혼합물이라 한다. 대안적으로, 에난티오머의 혼합물은 하나의 에난티오머가 50% 초과의 양으로 존재하도록 에난티오머적으로 농축될 수 있다. 전형적으로, 에난티오머 및/또는 부분입체이성질체는 당업계에 공지된 기술을 사용하여 분해 또는 분리될 수 있다. 입체화학이 정의되지 않은 임의의 입체중심 또는 키랄성 축에 대하여, 입체중심 또는 키랄성 축은 R 형태, S 형태, 또는 라세미 및 비-라세미 혼합물을 포함하는 R 및 S 형태의 혼합물로 존재할 수 있다고 생각된다. 본 명세서에서 사용된 바와 같이 어구 "실질적으로 다른 입체이성질체가 없는"은 조성물이 15% 이하, 더 바람직하게는 10% 이하, 더욱 더 바람직하게는 5% 이하, 또는 가장 바람직하게는 1% 이하의 또 다른 입체이성질체(들)를 함유한다는 것을 의미한다.
"생체내에서 수소로 전환될 수 있는 치환체"는, 비제한적으로 가수분해 및 수소화분해를 포함하는 효소학적 또는 화학적 수단에 의해 수소 원자로 전환될 수 있는 임의의 그룹을 의미한다. 예로는 가수분해가능한 그룹, 예컨대 아실 그룹, 옥시카르보닐 그룹을 갖는 그룹, 아미노산 잔기, 펩타이드 잔기, o-니트로페닐설페닐, 트리메틸실릴, 테트라하이드로피라닐, 디페닐포스피닐 등이 포함된다. 아실 그룹의 예로는 포르밀, 아세틸, 트리플루오로아세틸 등이 포함된다. 옥시카르보닐 그룹을 갖는 그룹의 예로는 에톡시카르보닐, tert-부톡시카르보닐 (-C(O)OC(CH3)3), 벤질옥시카르보닐, p-메톡시-벤질옥시카르보닐, 비닐옥시카르보닐, β-(p-톨루엔설포닐)에톡시카르보닐 등이 포함된다. 적합한 아미노산 잔기는, 비제한적으로, Gly (글라이신), Ala (알라닌), Arg (아르기닌), Asn (아스파라긴), Asp (아스파르트산), Cys (시스테인), Glu (글루탐산), His (히스티딘), Ile (이소류신), Leu (류신), Lys (리신), Met (메티오닌), Phe (페닐알라닌), Pro (프롤린), Ser (세린), Thr (트레오닌), Trp (트립토판), Tyr (티로신), Val (발린), Nva (노르발린), Hse (호모세린), 4-Hyp (4-하이드록시프롤린), 5-Hyl (5-하이드록시리신), Orn (오르니틴) 및 β-Ala의 잔기를 포함한다. 적합한 아미노산 잔기의 예는 또한 보호기로 보호된 아미노산 잔기를 포함한다. 적합한 보호기의 예로는 아실 그룹 (예컨대 포르밀 및 아세틸), 아릴메톡시카르보닐 그룹 (예컨대 벤질옥시카르보닐 및 p-니트로벤질옥시카르보닐), tert-부톡시카르보닐 그룹 (-C(O)OC(CH3)3) 등을 포함하는, 펩타이드 합성에 전형적으로 이용되는 것들이 포함된다. 적합한 펩타이드 잔기는 2개 내지 5개의 아미노산 잔기를 포함하는 펩타이드 잔기를 포함한다. 이들 아미노산 또는 펩타이드의 잔기는 D-형태, L-형태 또는 이들의 혼합물의 입체화학적 배열로 존재할 수 있다. 또한, 아미노산 또는 펩타이드 잔기는 비대칭 탄소 원자를 가질 수 있다. 비대칭 탄소 원자를 갖는 적합한 아미노산 잔기의 예로는 Ala, Leu, Phe, Trp, Nva, Val, Met, Ser, Lys, Thr 및 Tyr의 잔기가 포함된다. 비대칭 탄소 원자를 갖는 펩타이드 잔기는 비대칭 탄소 원자를 갖는 하나 이상의 구성 아미노산 잔기를 갖는 펩타이드 잔기를 포함한다. 적합한 아미노산 보호기의 예로는 아실 그룹 (예컨대 포르밀 및 아세틸), 아릴메톡시카르보닐 그룹 (예컨대 벤질옥시카르보닐 및 p-니트로벤질옥시카르보닐), tert-부톡시카르보닐 그룹 (-C(O)OC(CH3)3) 등을 포함하는, 펩타이드 합성에 전형적으로 이용되는 것들이 포함된다. "생체내에서 수소로 전환될 수 있는" 치환체의 다른 예로는 환원적으로 제거될 수 있는 수소화가능한 그룹이 포함된다. 적합한 환원적으로 제거될 수 있는 수소화가능한 그룹의 예로는, 비제한적으로, 아릴설포닐 그룹 (예컨대 o-톨루엔설포닐); 페닐 또는 벤질옥시로 치환된 메틸그룹 (예컨대 벤질, 트리틸 및 벤질옥시메틸); 아릴메톡시카르보닐 그룹 (예컨대 벤질옥시카르보닐 및 o-메톡시-벤질옥시카르보닐); 및 할로에톡시카르보닐 그룹 (예컨대 β,β,β-트리클로로에톡시카르보닐 및 β-요오도에톡시카르보닐)이 포함된다.
"치료" 또는 "치료하는"은 (1) 질환의 병리학 또는 증상을 경험하거나 나타내는 대상체 또는 환자에서 질환을 억제하는 것 (예를 들어, 병리학 및/또는 증상의 추가 발달을 억제하는 것), (2) 질환의 병리학 또는 증상을 경험하거나 나타내는 대상체 또는 환자의 질환을 개선시키는 것 (예를 들어, 병리학 및/또는 증상을 역전시키는 것), 및/또는 (3) 질환의 병리학 또는 증상을 경험하거나 나타내는 대상체 또는 환자의 질환에서 임의의 측정가능한 감소를 초래하는 것을 포함한다.
본 명세서에 사용된 다른 약어는 다음과 같다: 1H NMR은 양성자 핵자기 공명이고, AcOH는 아세트산이고, Ac2O는 아세트산 무수물이고, ACN 또는 CH3CN은 아세토니트릴이고, br은 브로드이고, d는 이중선이고, DCM은 디클로로메탄이고, DIAD는 디이소프로필 아조디카르복실레이트이고, DMA는 N,N-디메틸아세트아미드이고, DMF는 N,N-디메틸포름아미드이고, DMSO는 디메틸설폭사이드이고, EtOAc 또는 EA는 에틸 아세테이트이고, EtOH는 에탄올이고, FAB MS는 고속 원자 충격 질량 분석법(fast atom bombardment mass spectroscopy)이고, g는 그램(들)이고, GC-MS는 기체 크로마토그래프 질량 분석법이고, HOBT는 1-하이드록시벤조트리아졸 수화물이고, HPLC는 고성능 액체 크로마토그래피이고, L은 리터이고, LAH는 수소화알루미늄리튬이고, LC-MS는 액체 크로마토그래프 질량 분석법이고, LDA는 리튬 디이소프로필아미드이고, LiHMDS는 리튬 비스(트리메틸실릴)아미드이고, m은 다중선이고, MeOH는 메탄올이고, mg는 밀리그램이고, ml은 밀리리터이고, mL은 밀리리터이고, MS는 질량 분석법이고, N은 노르말이고, N2는 질소이고, Na2SO4는 황산나트륨이고, NMR은 핵자기 공명이고, PE는 석유 에테르이고, q는 오중선이고, rt는 체류 시간이고, t는 삼중선이고, THF는 테트라하이드로푸란이고, TLC는 박막 크로마토그래피이고, Δ는 반응 혼합물을 가열함을 의미한다.
상기 정의는 본 명세서에서 참고로 포함된 임의의 참고문헌의 임의의 상반되는 정의에 우선한다. 그러나, 특정 용어가 정의된다는 사실은 정의되지 않은 임의의 용어가 불명확하다는 것을 나타내는 것으로 간주되어서는 안된다. 오히려, 사용되는 모든 용어는 숙련가가 본 개시내용의 범위 및 실시를 이해할 수 있도록 본 개시내용을 용어로 기술하는 것으로 믿어진다.
VI. 실시예
하기 실시예는 본 개시내용의 바람직한 구현예를 설명하기 위해 포함된다. 하기 실시예에 개시된 기술은 본 개시내용의 실시에서 잘 기능하기 위해 발명자에 의해 발견된 기술을 나타내므로, 그 실시를 위해 바람직한 모드를 구성하는 것으로 간주될 수 있다는 것이 당해 분야의 숙련가에게 이해되어야 한다. 그러나, 당해 분야의 숙련가는 본 개시내용에 비추어 개시된 특정 구현예에서 많은 변화가 이루어질 수 있고, 본 개시내용의 사상 및 범위를 벗어나지 않고 동일하거나 유사한 결과를 여전히 얻을 수 있다는 것을 이해해야 한다.
VII. 기기 및 일반 방법.
분석용 HPLC 분석은 Agilent 1100 시스템 상에서 수행되었고, LC-MS 분석은 Agilent 1100 시리즈 LC/MSD (G1946C) 전기분무 질량 분석계 시스템 상에서 수행되었다. 역상 제조용 HPLC 정제는 0.05% TFA를 함유하는 아세토니트릴/물 구배를 사용하는 Biotage KP-C18-HS 120 g SNAP 칼럼 상에서 및 Redisep Rf Gold C18 카트리지 상에서 가변 이중 파장 UV 검출기를 사용하여 Biotage SP4 HPFC 시스템 또는 CombiFlashRf (Teledyne Isco) 시스템 상에서 수행되었다. 정상 제조용 HPLC 정제는 Biotage KP-SIL SNAP 카트리지 및 Redisep Rf 실리카겔 (Isco) 카트리지 상에서 가변 이중 파장 UV 검출기를 사용하여 Biotage SP4 HPFC 시스템 또는 CombiFlashRf (Teledyne Isco) 시스템 상에서 수행되었다.
모든 최종 화합물을 다이오드 어레이 검출기가 있는 C18 분석용 칼럼을 사용하는 분석용 HPLC로 분석하였고, 피크는 210, 254 및 280 nm에서 그 순도를 모니터링하였다. 1H 및 19F NMR 스펙트럼은 광대역 NMR 프로브가 장착된 Bruker Avance-III/400 MHz 분광계 상에서 중수소화 용매 (DMSO-d 6 , CD3OD 및 CDCl3)에서 기록하였다. 중수소화 용매의 신호를 내부 기준으로 사용하였다. 화학적 이동은 ppm (δ)으로 표현되며, 결합 상수 (J)는 헤르츠 (Hz)로 보고된다. 달리 명시되지 않는 한, 반응은 건조 질소 분위기 하에서 수행되었다.
출발 물질은 상업적 공급원으로부터 입수하였고 LC-MS 분석으로 그 순도를 확인한 후 추가 정제 없이 사용하였다. 용매는 분석 등급이었고, 공급된 대로 사용하였다. 비 상업적으로 입수가능한 출발 물질은 문헌의 절차에 따라 합성하였고 추가 정제 및 1H NMR 및 LC-MS 분석으로 그 순도를 확인한 후 사용하였다.
VII. 화합물의 제조
반응식 1
3-( 일치환 및 이치환된 -페닐)-4-(1- 메틸 -5-(2-(5,6,7,8- 테트라하이드로 -1,8-나프티리딘-2-일)에톡시)-1H-피라졸-3-일) 부탄산의 일반적인 제조 절차
Figure pct00051
실시예 A
반응식 2: 2 -(5,6,7,8- 테트라하이드로 -1,8- 나프티리딘 -2-일)에탄올의 제조
Figure pct00052
단계 1. 2- 메틸 -1,8- 나프티리딘의 제조
Figure pct00053
절대 에틸 알코올 (70 mL) 중의 2-아미노피리딘-3-카르복시알데하이드 (5.125 g, 42.0 mmol), 아세톤 (9.5 mL, 126.0 mmol) 및 L-프롤린 (5.31 g, 46.2 mmol)의 혼합물을, 질소 분위기 하에 밤새 (15 h) 환류 하에 가열하였다. 용매를 진공에서 증발시켜 카나리 옐로(canary yellow) 고체를 수득하였다. 상기 고체를 디클로로메탄 (50 mL)에 용해시켜 백색 침전물을 수득하고, 여과하고, 디클로로메탄으로 세정하고, 합한 여액을 진공에서 증발시켜 황색-오렌지색 잔류물을 수득하였다. 상기 고체를 디클로로메탄 (50 mL)에 재용해시키고, 물 (1×50 mL)로 세정하고, 유기층을 분리하고, 수성 층을 디클로로메탄 (1×25 mL)으로 추출하였다. 합한 유기 추출물을 염수 (1×50 mL)로 세정하고, 무수 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고 진공에서 증발시켜 때묻은 황색 고체 (6.04 g, 수율 99%)를 수득하였다. 상기 고체의 GC-MS 분석은 다음의 원하는 생성물 질량을 나타낸다: m/z 144 (M+); C9H8N2에 대한 계산값: 1H NMR (400 MHz, CDCl3): δ 2.83 (s, 3H), 7.38 (d, J = 8.00 Hz, 1H), 7.45 (dd, 1H), 8.09 (d, J = 8.00 Hz, 1H), 8.16 (d, J = 8.00 Hz, 1H), 9.08 (s, 1H). 본 샘플의 1H NMR 스펙트럼은 생성물의 제안된 구조와 일관되었다.
단계 2. ( E )-1- 에톡시 -2-(1,8- 나프트리딘 -2-일)에탄올의 제조
Figure pct00054
질소 분위기 하에서 -40℃에서 무수 THF (140 mL) 중의 (단계 1로부터의) 2-메틸-1,8-나프티리딘 (6.024 g, 41.8 mmol)의 용액에, THF (88.0 mL) 중의 리튬 비스(트리메틸실릴)아미드의 1.0 M 용액을 첨가하고, 상기 반응 혼합물을 -40℃에서 30분 동안 교반시켜 선홍색 용액을 수득하였다. -40℃에서 30분간 교반 후, 순수한 탄산디에틸 (5.60 mL)을 상기 용액에 5분 내에 적가하고, 상기 반응 혼합물을 0℃까지 가온시키고 (빙욕) 그 온도에서 2시간 동안 교반시켜, 적색이 도는 주황색(reddish-orange) 용액을 수득하였다. 상기 반응 혼합물을 포화 염화암모늄 수용액 (60.0 mL)으로 켄칭시켜 오렌지색-적색 용액을 수득하고, THF를 진공에서 제거하여 오렌지색-적색 혼합물을 수득하였다. 생성된 혼합물을 에틸 아세테이트 (3×50 mL)로 추출하였다. 유기층을 합하고, 염수로 세정하고, 무수 Na2SO4/MgSO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 진공에서 증발시켜 어두운 오렌지색-적색 결정질 고체 (8.65 g)를 수득하였다. 조 잔류물을 Varian SF-40-120 g 수퍼 플래시 실리카겔 칼럼을 사용하고 n-헵탄 중의 10-100% 에틸 아세테이트로 용출되는 실리카겔 플래시 크로마토그래피로 정제하여, 원하는 생성물을 황색-오렌지색 결정질 고체 (7.76 g, 수율 85%)로 수득하였다. 상기 고체의 LC-MS 분석은 다음의 원하는 생성물 질량을 나타낸다: m/z 217 (M+H) 및 m/z 239 (M+Na); C12H12N2O2에 대한 계산값: 216.23. 1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6 ): δ 1.21 (t, J = 7.0 Hz, 3H), 4.10 (q, 2H), 4.89 (s, 1H), 6.77 (d, J = 9.38 Hz, 1H), 7.14 (m, 1H), 7.46 (d, J = 9.36 Hz, 1H), 7.89 (d, 1H), 8.36 (d, 1H), 11.80 (brs, 1H, -OH). 분리된 생성물의 1H NMR은 생성물의 진정 샘플의 경우와 중복되었다(superimposable).
단계 3. 에틸 5,6,7,8- 테트라하이드로 -1,8- 나프티리딘 -2- 일아세테이트의 제조
Figure pct00055
절대 에탄올 (100 mL) 중의 (단계 2로부터의) (E)-1-에톡시-2-(1,8-나프티리딘-2-일)에탄올 (5.18 g, 23.98 mmol)의 탈기 용액에, 활성탄 상의 수산화팔라듐 (1.44 g)을 첨가하고, 상기 반응 혼합물을 수소 기체의 벌룬(balloon) 하에 실온에서 밤새 (16 h) 교반시켰다. 상기 반응 혼합물을 Celite® 패드를 통해 여과하여 Pd(OH)2/C를 제거하였다. 잔류물을 절대 에탄올 (2×25 mL)로 세정하고, 여액을 진공에서 증발시켜 황색 점성 액체를 수득하였고, 서서히 결정화시켜 담황색 고체 (5.30 g, 수율 98%)를 수득하였다. 생성물의 LC-MS 분석은 다음의 원하는 생성물 질량을 나타낸다: m/z 221 (M+H); C12H16N2O2에 대한 계산값: 220.26. 상기 생성물은 다음 단계에서 그대로 사용될 것이다.
단계 4. 2-(5,6,7,8- 테트라하이드로 -1,8- 나프티리딘 -2-일)에탄올의 제조
Figure pct00056
실온에서 질소 기체 분위기 하에 무수 THF (95.0 mL)에, THF (95.0 mL) 중의 수소화알루미늄리튬의 1.0 M 용액을 교반하면서 첨가하였다. 반응 혼합물의 온도를 15℃로 낮추고 (물-빙욕) 무수 THF (50.0 mL) 중의 (단계 3으로부터의) 에틸 2-(5,6,7,8-테트라하이드로-1,8-나프티리딘-2-일)아세테이트의 용액을 30분에 걸쳐 적가하여 황색 용액을 수득하였다. 생성된 반응 혼합물을 실온에서 4시간 동안 교반시켰다. 상기 반응 혼합물을 0℃로 냉각시키고 (염-빙욕), 상기 반응물을 염수 (25.0 mL)로 서서히 켄칭시켰다. 추가의 THF (30.0 mL)를 켄칭 동안 첨가하여, 에멀젼을 분해시켰다. 염수를 완전히 첨가한 후, 상기 반응 혼합물을 실온에서 밤새 교반시켰다. 무수 황산나트륨 (25.0 g)을 상기 반응 혼합물에 첨가하고, 상기 혼합물을 실온에서 또 30분간 교반시키고, 여과하였다. 상기 고체 염 잔류물을 에틸 아세테이트 (3×30 mL)로 세정하였다. 여액을 합하고, 약 150 mL가 되도록 농축시키고, 무수 황산나트륨으로 다시 건조시키고, 여과하고 진공에서 증발시켜 오렌지색 점성 액체 (4.8063 g)를 수득하였다. 조 생성물을 SF-40-120 g 수퍼 플래시 실리카겔 칼럼 상에서 에틸 아세테이트 중의 0-5% 메탄올로 용출되는 실리카겔 플래시 크로마토그래피로 정제하여, 원하는 생성물을 황색 점성 액체 (3.504 g, 수율 82%)로 수득하였다. 정제된 액체의 LC-MS 분석은 다음의 원하는 생성물 질량을 나타낸다: m/z 179 (M+H); C10H14N2O에 대한 계산값: 178.23. 상기 액체는 냉장고에서 밤새 저장될 때 담황색 왁스/결정질 고체로 응고되었다.
실시예 1
반응식 3: 3 -(2,3- 디하이드로벤조[ b ][1,4]디옥신 -6-일)-4-(1- 메틸 -5-(2-(5,6,7,8-테트라하이드로-1,8-나프티리딘-2-일)에톡시)-1 H -피라졸-3-일)부탄산의 제조
Figure pct00057
단계 1. 디에틸 2-(2,3- 디하이드로벤조[ b ][1,4]디옥신 -6-일)-4- 하이드록시 -4-메틸-6-옥소사이클로헥산-1,3-디카르복실레이트의 제조
Figure pct00058
25℃에서 2,3-디하이드로벤조[b][1,4]디옥신-6-카브알데하이드 (15 g, 91.44 mmol)　및 에틸 아세토아세테이트 (41.6 g, 320.04 mmol)의 혼합물 용액에 피페리딘 (2.73 g, 32 mmol)을 한 번에 첨가하였다. 그 다음 혼합물을 25℃에서 72시간 동안 교반시켰다. 반응 혼합물을 EtOH (200 mL)로 희석하고, -20℃로 냉각시키고, 여과하여 원하는 생성물을 백색 결정질 고체 (21.1 g 수율 57%)로 수득하였다.
단계 2. 3-(2,3- 디하이드로벤조[ b ][1,4]디옥신 -6-일) 펜탄디오산의 제조
Figure pct00059
EtOH (200 mL) 중의 디에틸 2-(2,3-디하이드로벤조[b][1,4]디옥신-6-일)-4-하이드록시-4-메틸-6-옥소사이클로헥산-1,3-디카르복실레이트 (20.00 g, 49.24 mmol) (단계 1로부터)의 용액에, NaOH (3.94 g, 98.48 mmol)를 한 번에 첨가하였다. 상기 혼합물을 1.5시간 동안 교반하면서 100℃로 가열하였다. 상기 반응 혼합물을 25℃로 냉각시키고, 60℃에서 감압 하에 농축시켰다. 상기 잔류물에 진한 HCl을 pH 1가 될 때까지 첨가하고, 그 다음 상기 혼합물을 물 (50 mL)에 붓고 20분 동안 교반시켰다. 수상을 에틸 아세테이트 (3×100mL)로 추출하였다. 합한 유기상을 염수 용액 (2×100 mL)으로 세정하고, 무수 Na2SO4로 건조시키고, 여과하고 진공에서 증발시켜 산을 갈색 고체 (10.00 g, 수율 76.92%)로 수득하였다.
단계 3. 4-(2,3- 디하이드로벤조[ b ][1,4]디옥신 -6-일) 디하이드로 -2 H -피란-2,6(3 H )-디온의 제조
Figure pct00060
아세트산 무수물 (217.4 g, 2.12 mol) 중의 3-(2,3-디하이드로벤조[b][1,4]디옥신-6-일)펜탄디오산 (8 g, 30.06 mmol) (단계 2로부터)의 용액을 140℃에서 2.5시간 동안 교반하면서 가열하였다. 상기 혼합물을 25℃로 냉각시키고, 그 다음 진공에서 증발시켜 원하는 생성물을 갈색 오일로 수득하였다 (6.02 g, 수율 80.04%).
단계 4. 3-(2,3- 디하이드로벤조[ b ][1,4]디옥신 -6-일)-7- 에톡시 -5,7- 디옥소헵탄산의 제조
Figure pct00061
THF (50 mL) 중의 4-(2,3-디하이드로벤조[b][1,4]디옥신-6-일)디하이드로-2H-피란-2,6(3H)-디온 (6.00 g, 24.19 mmol) (단계 3으로부터)의 용액에, N2 하에 -78℃에서 2분의 기간에 걸쳐 LDA (5.18 g, 48.38 mmol)를 적가하였다. -60℃에서 1시간 동안 교반시킨 후, 무수 EtOAc (4.25 g, 48.38 mmol)를 N2 하에 -78℃에서 2분의 기간에 걸쳐 적가하였다. 상기 반응 혼합물을 -78℃에서 추가 5시간 동안 교반시켰다. TLC (PE:EtOAc = 20:1)는 출발 물질이 완전히 소모되었음을 보여주었다. 상기 반응물을 pH =1까지 2 N HCl로 켄칭시킨 다음, 상기 반응 혼합물을 EtOAc (3×80 mL)로 추출하였다. 합한 유기상을 포화 염수 용액으로 세정하고, 무수 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고 진공에서 농축시켜 원하는 생성물 (6.50 g, 수율 80.0%)을 황색 액체로 수득하였고, 이를 실리카겔 (PE: EA = 3:1) 상에서 칼럼 크로마토그래피로 정제하였다.
단계 5. 에틸 3-(2,3- 디하이드로벤조[ b ][1,4]디옥신 -6-일)-4-(5- 하이드록시 -1-메틸-1 H -피라졸-3-일)부타노에이트의 제조
Figure pct00062
N2 하에 40℃에서 EtOH (120 mL) 중의 (단계 4로부터의) 3-(2,3-디하이드로벤조[b][1,4]디옥신-6-일)-7-에톡시-5,7-디옥소헵탄산 (3 g, 8.9 mmol)의 용액에 메틸 하이드라진 (450.34 mg, 9.79 mmol)을 한 번에 첨가하였다. 그 다음 상기 혼합물을 100℃에서 5시간 동안 교반시켰다. TLC는 반응이 완료되었음을 보여주었다. 상기 혼합물을 25℃로 냉각시키고, 상기 반응 혼합물을 진공에서 농축시켰다. 상기 잔류물에 EtOH (20 mL) 및 디옥산/HCl (20 mL)을 첨가하고, 생성된 현탁액을 실온에서 12시간 동안 교반시킨 다음 감압하에 농축시켜 원하는 생성물 (2.2 g, 수율 71.45%)을 황색 오일로 수득하였고, 이를 실리카겔 (DCM:EtOH = 8:1) 상에서 칼럼 크로마토그래피로 정제하였다. 1H NMR (400 MHz, CDCl3): δ 1.10 - 1.19 (m, 3H), 2.02 - 2.08 (m, 1H), 2.53 - 2.73 (m, 2H), 2.89 - 3.05 (m, 2H), 3.24 (s, 1 H), 3.38 - 3.50 (m, 1H), 3.52 - 3.66 (m, 1H), 3.74 (br. s., 2H), 3.95 - 4.07 (m, 2H), 4.16 - 4.23 (m, 4H), 5.78 ( br, s, 1 H), 6.62 - 6.80 (m, 3H).
단계 6. 3-(2,3- 디하이드로벤조[ b ][1,4]디옥신 -6-일)-4-(1- 메틸 -5-(2-(5,6,7,8-테트라하이드로-1,8-나프티리딘-2-일)에톡시)-1 H -피라졸-3-일)부탄산 (실시예 1)의 제조
Figure pct00063
CH3CN (10 mL) 중의 (단계 5로부터의) 에틸 3-(2,3-디하이드로벤조[b][1,4]디옥신-6-일)-4-(5-하이드록시-1-메틸-1H-피라졸-3-일)부타노에이트 (1.0 g, 2.89 mmol,1.00 eq)의 용액에, (실시예 A, 단계 4로부터의) 2-(5,6,7,8-테트라하이드로-1,8-나프티리딘-2-일)에틸 4-메틸벤젠설포네이트 [960 mg, 2.89 mmol, 1.00 eq; 2-(5,6,7,8-테트라하이드로-1,8-나프티리딘-2-일)에탄올을 THF 중에서 토실 클로라이드 및 염기와 반응시켜 제조됨], 및 Cs2CO3 [1.88 g, 5.78 mmol, 2.00 eq]를 첨가한 다음, 상기 반응 혼합물을 80℃에서 8시간 동안 교반시키고, 상기 반응 혼합물을 여과하여 불용성 물질을 제거하고 여액을 진공에서 농축시켰다. 잔류물을 3 N HCl (10 mL)에서 현탁시킨 다음 100℃에서 또 8시간 동안 교반시켜, 원하는 생성물을 수득하였다. 조 생성물을 역상 제조용 HPLC로 정제하여, 실시예 1을 황색 오일 (48 mg, 수율 3.6%)로 수득하였다. 상기 액체를 역상 제조용 HPLC로 두 번째 정제하고 분획을 동결건조하여, 실시예 1을 무색 분말 (23.2 mg)로 수득하였다. 상기 고체의 LC-MS 분석은 다음의 원하는 생성물 질량을 나타냈다: m/z 479 (M+H) 및 m/z 501 (M+Na); C26H30N4O5에 대해 계산값: 478.54. 1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6 ): δ 1.75 - 1.86 (m, 2 H), 2.35 - 2.45 (m, 1 H), 2.62 (d, J =7.53 Hz, 2 H), 2.73 (t, J = 5.77 Hz, 2 H), 3.11 (t, J = 6.02 Hz, 3 H), 3.15 - 3.23 (m, 2 H), 4.18 (s, 4 H), 4.32 (t, J = 6.15 Hz, 2 H), 5.49 (s, 1 H), 6.64 - 6.69 (m, 2 H), 6.69 - 6.74 (m, 2 H) 7.61 (d, J = 7.28 Hz, 1 H), 8.15 (br s, 1 H), 14.34-14.55 (m, 1 H).
실시예 2
3-(3- 클로로 -5- 플루오로페닐 )-4-(1- 메틸 -5-(2-(5,6,7,8- 테트라하이드로 -1,8-나프티리딘-2-일)에톡시)-1 H -피라졸-3-일)부탄산의 제조
Figure pct00064
실시예 2는 반응식 3에서 필요한 벤즈알데하이드로서 3-클로로-5-플루오로벤즈알데하이드를 사용하여, 실시예 1과 유사한 방식으로 제조되었다. 조 생성물을 역상 제조용 HPLC로 정제하고 분획의 동결건조한 후, 표제 화합물을 무색 분말 (39.4 mg)로 수득하였다. 상기 고체의 LC-MS 분석은 rt 1.92분에서 순도가 >98%인 원하는 생성물을 나타내고, 다음의 원하는 생성물 질량을 나타냈다: m/z 473 (35ClM+H), m/z 475 (37ClM+H), m/z 495 (35ClM+Na) 및 m/z 497 (37ClM+Na); C24H26ClFN4O3에 대해 계산값: 472.94. 1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6 ): δ 1.81 (brs, 2 H), 2.54-2.64 (m, 2 H), 2.65- 2.77 (m, 5 H), 3.11 (brs, 3 H), 3.39 (brs, 6 H), 4.31 (brs, 2 H), 5.52 (s, 1 H), 6.66 (d, J = 6.78 Hz, 1 H), 7.13 (d, J = 9.91 Hz, 1 H), 7.16-7.22 (m, 2 H), 7.61 (d, J = 6.15 Hz, 1 H), 8.13 (brs, 1 H), 14.32-14.57 (m, 1 H).
실시예 3
3-(3- 플루오로 -4- 메톡시페닐 )-4-(1- 메틸 -5-(2-(5,6,7,8- 테트라하이드로 -1,8-나프티리딘-2-일)에톡시)-1 H -피라졸-3-일)부탄산의 제조
Figure pct00065
실시예 3은 반응식 3에서 필요한 벤즈알데하이드로서 3-플루오로-4-메톡시벤즈알데하이드를 사용하여 실시예 1과 유사한 방식으로 제조되었다. 조 생성물을 역상 제조용 HPLC로 정제하고 분획의 동결건조한 후, 표제 화합물을 크림색 분말 (26.6 mg)로 수득하였다. 상기 고체의 LC-MS 분석은 rt 1.76분에서 원하는 생성물을 나타내고, 다음의 원하는 생성물 질량을 나타냈다: m/z 469 (M+H), 및 m/z 491 (M+Na); C25H29FN4O4에 대한 계산값: 468.52. 1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6 ): δ 1.77 - 1.87 (m, 2 H), 2.54 - 2.69 (m, 3 H), 2.70 - 2.78 (m, 2 H), 3.09 (t, J = 6.09 Hz, 2 H), 3.17 - 3.29 (m, 1 H), 3.39 - 3.47 (m, 3 H), 3.78 (s, 4 H), 4.25 (t, J = 6.09 Hz, 2 H), 5.43 (s, 1 H), 6.69 (d, J = 7.28 Hz, 1 H), 6.95 - 7.06 (m, 2 H), 7.09 (dd, J = 12.86, 1.82 Hz, 1 H), 7.58 - 7.70 (m, 1 H), 8.26 (brs, 1 H).
실시예 4
3-(4- 브로모 -3- 플루오로페닐 )-4-(1- 메틸 -5-(2-(5,6,7,8- 테트라하이드로 -1,8-나프티리딘-2-일)에톡시)-1 H -피라졸-3-일)부탄산의 제조
Figure pct00066
실시예 4는 반응식 3에서 필요한 벤즈알데하이드로서 3-플루오로-4-브로모벤즈알데하이드를 사용하여 실시예 1과 유사한 방식으로 제조되었다. 조 생성물을 역상 제조용 HPLC로 정제하고 분획의 동결건조한 후, 실시예 5를 크림색 분말 (84.7 mg)로 수득하였다. 상기 고체의 LC-MS 분석은 rt 1.93분에서 원하는 생성물을 나타내고, 다음의 원하는 생성물 질량을 나타냈다: m/z 517 (79BrM+H), m/z 519 (81BrM+H), m/z 539 (79BrM+Na) 및 m/z 541 (81BrM+Na); C24H26BrFN4O3에 대한 계산값: 517.39. 1H NMR (300 MHz, CDCl3): δ 1.88 - 2.02 (m, 2 H), 2.46 - 2.72 (m, 2 H), 2.78 (d, J = 5.84 Hz, 2 H), 2.86 - 3.02 (m, 2 H), 3.15 (brs, 2 H), 3.51 (brs, 2 H), 3.60 (s, 3 H), 4.39 (brs, 2 H), 5.66 (s, 1 H), 6.43 (d, J = 6.97 Hz, 1 H), 6.95 (dd, J = 18.65, 8.29 Hz, 2 H), 7.34 - 7.50 (m, 2 H), 9.13 (brs, 3 H), 9.59 - 9.94 (m, 1 H), 15.27 (brs, 1 H).
실시예 5
3-(3- 브로모 -4- 플루오로페닐 )-4-(1- 메틸 -5-(2-(5,6,7,8- 테트라하이드로 -1,8-나프티리딘-2-일)에톡시)-1 H -피라졸-3-일)부탄산의 제조
Figure pct00067
실시예 5는 반응식 3에서 필요한 벤즈알데하이드로서 3-브로모-4-플루오로벤즈알데하이드를 사용하여, 실시예 1과 유사한 방식으로 제조되었다. 조 생성물을 역상 제조용 HPLC로 정제하고 분획의 동결건조한 후, 표제 화합물을 크림색 분말 (93.2 mg)로 수득하였다. 상기 고체의 LC-MS 분석은 rt 1.91분에서 원하는 생성물을 나타내고, 다음의 원하는 생성물 질량을 나타냈다: m/z 517 (79BrM+H), m/z 519 (81BrM+H), m/z 539 (79BrM+Na) 및 m/z 541 (81BrM+Na); C24H26BrFN4O3에 대한 계산값: 517.39. 1H NMR (400 MHz, CDCl3): δ 1.87 - 1.99 (m, 2 H), 2.55 - 2.72 (m, 2 H), 2.77 (t, J = 5.83 Hz, 2 H), 2.86 - 3.06 (m, 2 H), 3.13 (t, J = 5.90 Hz, 2 H), 3.38 - 3.45 (m, 1 H), 3.49 (brs, 2 H), 3.59 (s, 3 H), 4.37 (t, J = 6.02 Hz, 2 H), 5.68 (s, 1 H), 6.43 (d, J = 7.15 Hz, 1 H), 6.97 - 7.04 (m, 1 H), 7.13 (brs, 1 H), 7.27 (s, 1 H), 7.37 (d, J = 7.15 Hz, 2 H), 9.67 (brs, 1 H), 15.03 (brs, 1 H).
실시예 6
3-(3- 브로모페닐 )-4-(1- 메틸 -5-(2-(5,6,7,8- 테트라하이드로 -1,8- 나프티리딘 -2-일)에톡시)-1 H -피라졸-3-일)부탄산의 제조
Figure pct00068
실시예 6은 반응식 3에서 필요한 벤즈알데하이드로서 3-브로모 벤즈알데하이드를 사용하여, 실시예 1과 유사한 방식으로 제조되었다. 조 생성물을 역상 제조용 HPLC로 정제하고 분획의 동결건조한 후 표제 화합물을 크림색 분말 (64.9 mg)로 수득하였다. 상기 고체의 LC-MS 분석은 rt 1.89분에서 원하는 생성물을 나타내고, 다음의 원하는 생성물 질량을 나타냈다: m/z 499 (79BrM+H), m/z 501 (81BrM+H), m/z 521 (79BrM+Na) 및 m/z 523 (81BrM+Na); C24H27BrN4O3에 대해 계산값: 499.40. 1H NMR (300 MHz, CD3OD): δ 1.96 (brs, 2 H), 2.61 - 2.79 (m, 2 H), 2.84 (brs, 2 H), 2.93 - 3.09 (m, 1 H), 3.11 - 3.27 (m, 3 H), 3.52 (brs, 3 H), 3.61 - 3.78 (m, 3 H), 4.58 (brs, 2 H), 6.14 (brs, 1 H), 6.73 (d, J = 6.40 Hz, 1 H), 7.26 (brs, 2 H), 7.39 (d, J = 6.41 Hz, 1 H), 7.45 (s, 1 H), 7.63 (d, J = 5.65 Hz, 1 H).
하기 실시예 7, 8, 9 및 12는 N,N-디메틸아세트아미드 중의 아연 시아나이드에 의한 치환 반응에 의해 합성되었다. 실시예 5, 4, 11, 및 6은 각각 반응을 위한 전구체로서 사용되었다.
실시예 7
3-(3- 시아노 -4- 플루오로페닐 )-4-(1- 메틸 -5-(2-(5,6,7,8- 테트라하이드로 -1,8-나프티리딘-2-일)에톡시)-1 H -피라졸-3-일)부탄산의 제조
반응식 4
Figure pct00069
무수 N,N-디메틸아세트아미드 (DMA) (50 mL)를 고진공 하에서 탈기시키고, 사용전 30분 동안 N2로 교체하였다. 둥근 바닥 플라스크를 N2 분위기 하에서 Pd(OAc)2 (1.5 g, 6.8 mmol) 및 X-phos (6.38 g, 0.439 mmol)로 채우고, 이어서 탈기된 DMA를 넣었다. 그 다음 상기 혼합물을 80℃에서 60분 동안 가열하여, 어두운 색 용액을 수득하였다. 제2 둥근 바닥 플라스크를 N2 분위기 하에서 실시예 5 (500 mg, 0.919 m mol), Zn(CN)2 (118 mg, 1.01 m mol) 및 Zn (5 mg, cat.)로 채우고 이어서 탈기된 DMA (5 mL)를 넣었다. 25℃에서 촉매 용액을 상기 용액에 첨가하고, 생성된 혼합물을 90℃에서 1시간 동안 가열하였다. 상기 반응 혼합물을 25℃로 냉각시키고, 용매를 진공에서 증발시켜 제거하였다. 잔류물을 물 (20 mL)과 에틸 아세테이트 (20 mL) 사이에 분배시켰다. 상기 혼합물을 우선 Celite®를 통해 여과하고, 그 다음 층들을 분리했다. 수성 층을 에틸 아세테이트 (3×20 mL)로 추출하고, 합한 유기층을 물, 염수로 세정하고 Na2SO4 상에서 건조시키고 용매를 진공에서 증발시켰다. 조 잔류물에 3 N LiOH 수용액 (10 mL)을 첨가하고, 상기 반응 혼합물을 100℃에서 8시간 동안 교반시켰다. 조 잔류물을 역상 제조용 HPLC로 정제하고 동결건조한 후, 실시예 7을 황색 오일 (100.0 mg)로 수득하였다. 상기 액체를 역상 제조용 HPLC로 두 번째 정제하고 분획을 동결건조하여, 표제 화합물을 크림색 분말로 수득하였다. 상기 고체의 LC-MS 분석은 rt 1.80분에서 원하는 생성물을 나타내고, 다음의 원하는 생성물 질량을 나타냈다: m/z 464 (M+H), 및 m/z 486 (M+Na); C25H26N5O3에 대해 계산값: 463.50. 1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6 ): δ 1.78 - 1.86 (m, 2 H), 2.33 (brs, 1 H), 2.55 - 2.70 (m, 3 H), 2.71 - 2.78 (m, 3 H), 3.10 (t, J = 6.15 Hz, 2 H), 3.37 (brs, 5 H), 4.28 (t, J,=,6.27 Hz, 2 H), 5.44 (s, 1 H), 6.67 (d, J,=,7.40 Hz, 1 H), 7.41 (t, J,=,9.16 Hz, 1 H), 7.61 - 7.67 (m, 2 H), 7.81 - 7.87 (m, 1 H), 7.98 (brs, 1 H) 13.95 - 14.07 (m, 1 H).
실시예 8
3-(4- 시아노 -3- 플루오로페닐 )-4-(1- 메틸 -5-(2-(5,6,7,8- 테트라하이드로 -1,8-나프티리딘-2-일)에톡시)-1 H -피라졸-3-일)부탄산의 제조
Figure pct00070
실시예 8은 전구체로서 실시예 4를 사용하여 실시예 7 (반응식 4)과 유사한 방식으로 제조되었다. 조 생성물을 역상 제조용 HPLC로 정제하고 분획의 동결건조한 후, 원하는 표제 화합물을 무색 분말 (30.7 mg)로 수득하였다. 상기 고체의 LC-MS 분석은 rt 1.79분에서 원하는 생성물을 나타내고, 다음의 원하는 생성물 질량을 나타냈다: m/z 464 (M+H), 및 m/z 486 (M+Na); C25H26N5O3에 대한 계산값: 463.50. 1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6 ): δ 1.79 - 1.86 (m, 2 H), 2.53 - 2.70 (m, 3 H), 2.70 - 2.79 (m, 4 H), 3.08 (t, J= 5.96 Hz, 2 H), 3.33 - 3.45 (m, 8 H), 4.23 (t, J = 6.09 Hz, 2 H), 5.43 (s, 1 H), 6.68 (d, J = 7.28 Hz, 1 H), 7.28 (dd, J = 8.09 and 1.32 Hz, 1 H), 7.46 (d, J = 10.16 Hz, 1 H), 7.63 (d, J =7.40 Hz, 1 H), 7.80 (t, J = 7.53 Hz, 1 H) 8.08 (brs, 1 H).
실시예 9
3-(3- 시아노페닐 )-4-(1- 메틸 -5-(2-(5,6,7,8- 테트라하이드로 -1,8- 나프티리딘 -2-일)에톡시)-1 H -피라졸-3-일)부탄산의 제조
Figure pct00071
실시예 9는 전구체로서 실시예 6을 사용하여 실시예 7 (반응식 4)과 유사한 방식으로 제조되었다. 조 생성물을 역상 제조용 HPLC로 정제하고 분획의 동결건조한 후, 원하는 표제 화합물을 무색 분말 (65.5 mg)로 수득하였다. 상기 고체의 LC-MS 분석은 rt 1.72분에서 원하는 생성물을 나타내고, 다음의 원하는 생성물 질량을 나타냈다: m/z 446 (M+H), 및 m/z 468 (M+Na); C25H27N5O3에 대한 계산값: 445.51. 1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6 ): δ 1.78 - 1.86 (m, 2 H), 2.52 - 2.62 (m, 3 H), 2.63 - 2.78 (m, 6 H), 3.08 (t, J = 6.09 Hz, 2 H), 3.31 - 3.38 (m, 4 H), 3.39 - 3.47 (m, 3 H), 4.24 (t, J = 6.15 Hz, 4 H), 5.42 (s, 1 H), 6.68 (d, J = 7.28 Hz, 1 H), 7.43 - 7.49 (m, 1 H), 7.58 (d, J = 8.03 Hz, 1 H), 7.63 (d, J = 7.40 Hz, 2 H), 7.72 (s, 1 H), 8.17 (brs, 1 H).
실시예 10
3-(3- 브로모 -5-( 트리플루오로메틸 )페닐)-4-(1- 메틸 -5-(2-(5,6,7,8- 테트라 하이드로-1,8-나프티리딘-2-일)에톡시)-1H-피라졸-3-일)부탄산의 제조
Figure pct00072
실시예 10은 반응식 3에서 필요한 벤즈알데하이드로서 3-브로모-5-(트리플루오로메틸)벤즈알데하이드를 사용하여, 실시예 1과 유사한 방식으로 제조되었다. 조 생성물을 Prep-HPLC (칼럼: Phenomenex Gemini C18 250*50 10μ; 이동상: [물 (0.225%FA)-ACN]; B%: 15%-45%, 11.2분)로 정제하였다. HPLC 용출액을 동결건조하여, 백색 고체로서의 표제 화합물 (29 mg)과 회수된 출발 에스테르 (115 mg)를 수득하였다. 3-[3-브로모-5-(트리플루오로메틸)페닐]-4-[1-메틸-5-[2-(5,6,7,8-테트라하이드로-1,8-나프티리딘-2-일)에톡시]피라졸-3-일]부탄산 (29 mg, 51 μmol, 12% 수율, 99.5% 순도)을 백색 고체로서 수득하였다. 1H NMR (400 MHz, CD3OD) δ ppm 1.84 - 1.92 (m, 2 H) 2.53 - 2.63 (m, 1 H) 2.64 - 2.87 (m, 5 H) 2.94 - 3.09 (m, 2 H) 3.36 - 3.42 (m, 5 H) 3.46 - 3.56 (m, 1 H) 4.30 (t, J=6.39 Hz, 2 H) 5.48 (s, 1 H) 6.50 (d, J=7.28 Hz, 1 H) 7.31 (d, J=7.28 Hz, 1 H) 7.48 (s, 1 H) 7.62 (s, 1 H) 7.67 (s, 1 H).
실시예 11
3-(3- 브로모 -5-( 트리플루오로메톡시 )페닐)-4-(1- 메틸 -5-(2-(5,6,7,8- 테트 라하이드로-1,8-나프티리딘-2-일)에톡시)-1H-피라졸-3-일)부탄산의 제조
Figure pct00073
실시예 11은 표제 화합물의 직접적인 전구체로서 에틸 3-[3-브로모-5-(트리플루오로메톡시)페닐]-4-[1-메틸-5-[2-(5,6,7,8-테트라하이드로-1,8-나프티리딘-2-일)에톡시]피라졸-3-일]부타노에이트와 반응식 3에서 필요한 벤즈알데하이드로서 3-브로모-5-(트리플루오로메톡시)벤즈알데하이드를 사용하여, 실시예 1과 유사한 방식으로 제조되었다. 조 생성물을 Prep-HPLC (TFA 조건: 칼럼: Boston pH-lex 150*25 10μm; 물(0.1% TFA)-ACN 22부터 - 52; 구배 시간(분): 8; 유량(mL/min) 2)로 정제하였다. 표제 화합물을　황색 고체로서 수득하였다 [LC-MS (ES7911-26-P1E), 1H　NMR　(ES7911-26-P1A_01), 19F NMR　　(ES7911-26-P1A_02), COSY (ES7911-26-P1C)]. 상기 고체의 LC-MS 분석은 다음의 원하는 생성물 질량을 나타냈다: m/z 583.0 (M+H); 1H NMR (400MHz, CD3OD) 7.60 (d, J=7.6 Hz, 1H), 7.41 (t, J=1.6 Hz, 1H), 7.29 (s, 1H), 7.09 (s, 1H), 6.68 (d, J=7.2 Hz, 1H), 5.44 (s, 1H), 4.36 - 4.26 (m, 2H), 3.54 - 3.42 (m, 6H), 3.16 (t, J=6.0 Hz, 2H), 2.90 - 2.79 (m, 3H), 2.79 - 2.69 (m, 2H), 2.68 - 2.60 (m, 1H), 2.00 - 1.90 (m, 2H).
실시예 12
3-(3- 시아노 -5-( 트리플루오로메틸 )페닐)-4-(1- 메틸 -5-(2-(5,6,7,8- 테트라 하이드로-1,8-나프티리딘-2-일)에톡시)-1H-피라졸-3-일)부탄산의 제조
반응식 5
Figure pct00074
단계 1. 에틸 3-(3-시아노-5-(트리플루오로메틸)페닐)-4-(1-메틸-5-(2-(5,6,7,8-테트라하이드로-1,8-나프티리딘-2-일)에톡시)-1H-피라졸-3-일)부타노에이트의 제조
Figure pct00075
25 mL 마이크로파 바이알 중에서 DMF (8 mL) 중의 에틸 3-[3-브로모-5-(트리플루오로메틸)페닐]-4-[1-메틸-5-[2-(5,6,7,8-테트라하이드로-1,8-나프티리딘-2-일)에톡시]피라졸-3-일]부타노에이트 (343 mg, 576 μmol, 1 eq. 실시예 10의 표제 화합물의 직접적인 전구체) 및 디시아노아연 (203 mg, 1.73 mmol, 110 μL, 3 eq)의 혼합물을 배출시키고, N2(3×)로 역-충전시켰다. 팔라듐 트리페닐포스판 (67 mg, 58 μmol, 0.1 eq)을 첨가하였다. 반응 바이알을 밀봉하고, 상기 반응 혼합물을 다시 탈기하고 N2 (3×)로 역-충전시킨 다음 마이크로파 조사 하에 120℃에서 90분 동안 교반시켰다. 용매를 진공하에 제거하여 회색 검을 수득하였다. 잔류물을 플래시 실리카겔 크로마토그래피 (ISCO®; 12 g SepaFlash® 실리카 플래시 칼럼, 35 mL/min에서 0~80% 에틸 아세테이트/석유 에테르 구배의 용리액)로 정제하여, 원하는 물질을 갈색 검 (181 mg)으로 수득하였다. LCMS는 순도가 77.5%였음을 나타냈다. 상기 고체의 LC-MS 분석은 다음의 원하는 생성물 질량을 나타낸다: m/z 542 (M+H); C28H30F3N5O3에 대한 계산값: 541.23.
단계 2. 3-(3- 시아노 -5-( 트리플루오로메틸 )페닐)-4-(1- 메틸 -5-(2-(5,6,7,8-테트라하이드로-1,8-나프티리딘-2-일)에톡시)-1H-피라졸-3-일)부탄산의 제조
Figure pct00076
THF (3 mL)와 MeOH (1 mL)의 혼합물 중의 에틸 3-[3-시아노-5-(트리플루오로메틸)페닐]-4-[1-메틸-5-[2-(5,6,7,8-테트라하이드로-1,8-나프티리딘-2-일)에톡시]피라졸-3-일]부타노에이트 (90 mg, 166 μmol, 1 eq)의 교반 용액에, H2O (2 mL) 중의 LiOH·H2O (50 mg, 1.19 mmol, 7.17 eq)의 용액을 첨가하고, 교반하면서 25℃에서 3시간 동안 유지하였다. 유기 용매를 감압하에 제거하고, 잔류 수성물을 AcOH 1 mL로 pH<7까지 산성화시켰다. 용매를 진공하에 건조되도록 증발시킨 다음, MeOH (5 mL)에 재현탁시키고 2분 동안 교반시켰다. 용해되지 않은 침전물을 여과하고, 여액을 Prep-HPLC (칼럼: Boston Green ODS 150*30 5μ; 이동상: [물 (0.1% TFA)-ACN]; B%: 28%-38%, 8분)로 정제하였다. HPLC 용출액을 동결건조하여, 표제 화합물을 백색 고체 (43 mg, 69 μmol, 41% 수율, 100% 순도, TFA)로 수득하였다. 고체의 LC-MS 분석은 다음의 원하는 생성물 질량을 나타낸다: m/z 514 (M+H); C26H26F3N5O3에 대한 계산값: 513.20. 1H NMR (400 MHz, CD3OD) δ ppm 1.95 (dd, J=6.50, 5.18 Hz, 2 H) 2.68 - 2.86 (m, 5 H) 2.90 (d, J=6.61 Hz, 1 H) 3.15 (t, J=5.95 Hz, 2 H) 3.43 (s, 3 H) 3.45 - 3.52 (m, 2 H) 3.52 - 3.63 (m, 1 H) 4.31 (t, J=6.06 Hz, 2 H) 5.48 (s, 1 H) 6.69 (d, J=7.28 Hz, 1 H) 7.60 (d, J=7.50 Hz, 1 H) 7.77 (s, 1 H) 7.89 (d, J=13.23 Hz, 2 H); 19FNMR (400 MHz, CD3OD) δ ppm -64.44 , -77.33.
실시예 13
3-(2- 메톡시 -5-( 트리플루오로메틸 )페닐)-4-(1- 메틸 -5-(2-(5,6,7,8- 테트라 하이드로-1,8-나프티리딘-2-일)에톡시)-1H-피라졸-3-일)부탄산 트리플루오로아세 테이트의 제조
Figure pct00077
실시예 13은 반응식 3에서 필요한 벤즈알데하이드로서 2-메톡시-5-(트리플루오로메틸)벤즈알데하이드를 사용하여 실시예 1과 유사한 방식으로 제조되었다. 조 생성물을 Prep-HPLC (칼럼: Boston Green ODS 150*30 5μ; 이동상: [물 (0.1% TFA)-ACN]; B%: 20%-50%, 8분)로 정제하였다. 표제 화합물 (120 mg, 189 μmol, 55% 수율, 99.6% 순도, TFA 염)을 백색 고체로 수득하였고, 이를 LCMS, HPLC, 1H NMR 및 19F NMR로 확인하였다. 상기 고체의 LC-MS 분석은 다음의 원하는 질량을 나타냈다: m/z 519.0 (M+H); C26H29N4O4F3에 대한 계산값: 518.53. 1H NMR (CD3OD, 400MHz) 7.58 (d, J = 7.2 Hz, 1H), 7.49 (br d, J = 8.8 Hz, 1H), 7.36 (d, J = 1.6 Hz, 1H), 7.08 (d, J = 8.8 Hz, 1H), 6.66 (d, J = 7.6 Hz, 1H), 5.55 (s, 1H), 4.35 (t, J = 6.0 Hz, 2H), 3.91 (s, 3H), 3.81 (quin, J = 7.6 Hz, 1H), 3.47-3.53 (m, 5H), 3.16 (t, J = 6.0 Hz, 2H), 2.86-2.97 (m, 2H), 2.82 (br t, J = 6.0 Hz, 2H), 2.65-2.78 (m, 2H), 1.95 (quin, J = 6.0 Hz, 2H). 19F NMR (CD3OD, 376MHz) -62.86 (s, 1F), -77.37 (s, 1F).
실시예 14
3-(5- 브로모 -2- 메톡시페닐 )-4-(1- 메틸 -5-(2-(5,6,7,8- 테트라하이드로 -1,8-나프티리딘-2-일)에톡시)-1H-피라졸-3-일)부탄산 트리플루오로아세테이트의 제조
Figure pct00078
실시예 14는 반응식 3에서 필요한 벤즈알데하이드로서 5-브로모-2-메톡시-벤즈알데하이드를 사용하여 실시예 1과 유사한 방식으로 제조되었다. 조 생성물을 Prep-HPLC (칼럼: Boston Green ODS 150*30 5μ; 이동상: [물 (0.1% TFA)-ACN]; B%: 20%-50%, 8분)로 정제하였다. 표제 화합물 (190 mg, 293 μmol, 84% 수율, 99.4% 순도, TFA)을 백색 고체로 수득하였고, 이를 LCMS (m/z 529.0 (M+H)), HPLC, 1H NMR 및 19F NMR로 확인하였다. 1H NMR (CD3OD, 400MHz) 7.59 (d, J = 7.2 Hz, 1H), 7.29 (dd, J = 8.8, 2.4 Hz, 1H), 7.22 (d, J = 2.4 Hz, 1H), 6.86 (d, J = 8.8 Hz, 1H), 6.66 (d, J = 7.2 Hz, 1H), 5.55 (s, 1H), 4.37 (t, J = 6.0 Hz, 2H), 3.82 (s, 3H), 3.73 (quin, J = 7.6 Hz, 1H), 3.47-3.53 (m, 5H), 3.16 (t, J = 6.0 Hz, 2H), 2.85-2.94 (m, 2H), 2.82 (t, J = 6.4 Hz, 2H), 2.61-2.73 (m, 2H), 1.95 (quin, J = 6.0 Hz, 2H), 19F NMR (CD3OD, 376MHz) -77.32 (br s, 1F).
실시예 15
(3 S )-3-(3- 플루오로 -4- 메톡시페닐 )-4-(1- 메틸 -5-(2-(5,6,7,8- 테트라하이드 로-1,8-나프티리딘-2-일)에톡시)-1 H -피라졸-3-일)부탄산의 제조
Figure pct00079
반응식 6
Figure pct00080
단계 1. 디에틸 2-(3- 플루오로 -4- 메톡시 -페닐)-4- 하이드록시 -4- 메틸 -6-옥소-사이클로헥산-1,3-디카르복실레이트의 제조
Figure pct00081
피페리딘 (310 μL, 3.13 mmol)을 3-플루오로-4-메톡시벤즈알데하이드 (5.0 g, 31.14 mmol)　및 에틸 아세토아세테이트 (8.75 g, 67.21 mmol)의 혼합물 용액에 첨가하였다. 상기 반응 혼합물을 실온에서 72시간 동안 교반시켜 담황색 미세결정질 고체를 수득하였다. 상기 고체를 비등하는 절대 에틸 알코올 (70 mL)에 용해시키고 황색 용액을 실온으로 냉각시킴으로써, 조 생성물을 재결정화시켜, 담황색 결정질 고체를 수득하였다. 상기 고체를 여과하고, 절대 에틸 알코올 (2×100 mL)로 세정하고, 진공에서 건조시켜 무색 결정질 고체 (9.59 g 수율 78%)를 수득하였다. 상기 고체의 LC-MS 분석은 다음의 원하는 생성물 질량을 나타냈다: m/z 397 (M+H), m/z 419 (M+Na) 및 m/z 815 (2M+Na); C20H25FO7에 대한 계산값: 396.41. 1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6 ): δ 0.89 (t, J = 7.09 Hz, 3 H, CH 3 -CH2-), 0.98 (t, J = 7.09 Hz, 3 H, CH 3 -CH2-), 1.24 (s, 3 H, CH 3 -),　　2.33 (d, J = 3.45 Hz, 1 H, -CH- ), 2.88 (d, J = 13.45　　Hz, 1 H,　　-CH-),　　3.27 (d, J = 11.98 Hz, 1 H, -CH-) 3.78 (s, 3 H, -O-CH 3 ), 3.79 - 3.97 (m, 6 H, 2Х-CH 2 -CH3 + -CH 2 -C(CH3)OH), 4.94 (s, 1 H, -OH), 6.99 - 7.11 (m, 2 H, H-5, H-6), 7.16 - 7.22 (m, 1 H, H-2). 생성물의 1H NMR 스펙트럼은 생성물의 제안된 구조와 일관되었다.
단계 2. 3-(3- 플루오로 -4- 메톡시 -페닐) 펜탄디오산의 제조
Figure pct00082
절대 에틸 알코올 (50.0 mL) 중의 단계 1로부터의 디에틸 2-(3-플루오로-4-메톡시-페닐)-4-하이드록시-4-메틸-6-옥소-사이클로헥산-1,3-디카르복실레이트 (4.05 g, 10.22 mmol)의 현탁액에 50% 수산화나트륨 용액 (20 mL)을 첨가하고, 상기 반응 혼합물을 환류 조건하에 1시간 동안 가열하여, 베이지색 현탁액을 수득하였다. 1.5시간 후, 상기 반응 혼합물을 실온으로 냉각시키고, 에탄올을 진공에서 증발시켜, 물에 현탁된 갈색 침전물을 수득하였다. 상기 용액에 에틸 아세테이트 (75 mL)를 첨가하고 실온에서 30분 동안 교반시켰다. 수성 층 및 유기층을 분리했다. 수성 층을 에틸 아세테이트 (1×25 mL)로 세정하여, 잔여 부산물을 제거하였다. 수성 층을 진한 HCl로 pH = 1까지 산성화시켰다. 용매를 진공에서 증발시켜 무색 내지 크림색 고체를 수득하였다. 상기 고체를 여과하고, 물 (2×10 mL)로 세정하고 진공에서 건조시켜 크림색-황색 결정질 고체 (2.08 g, 79%)를 수득하였다. 상기 고체의 LC-MS 분석은 rt 1.51분에서 원하는 생성물을 나타내고, 다음의 원하는 생성물 질량을 나타냈다: m/z 239 (M+H-H2O), m/z 257 (M+H) 및 m/z 279 (M+Na); C12H13FO5에 대한 계산값: 256.23. 1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6 ): δ 2.48 (dd, J = 15.90 Hz 및 8.80 Hz, 2H, -CH-CH 2 -COOH, DMSO 피크 하에 부분적으로 숨겨짐,　 2.61(dd, J = 15.90 Hz 및 8.80 Hz, 2H, HOOC-CH 2 -CH-), 3.34-3.39 (m, 1H, 물 피크 하에 부분적으로 숨겨짐, -CH-CH2-COOH),　3.79 (s, 3H, CH 3 O-),　　6.98-7.08 (dd/m, 2H, H-5 및 H-6), 7.13 (dd, J = 12.84 및 1.83 Hz, Hz, 1H, H-2), 12.07 (s, 2H, 2Х -COOH); 생성물의 1H NMR 스펙트럼은 생성물의 제안된 구조와 일관되었다.
단계 3. 디에틸 3-(3- 플루오로 -4- 메톡시 -페닐) 펜탄디오에이트의 제조
Figure pct00083
절대 에탄올 (25 mL) 중의 단계 2로부터의 3-(3-플루오로-4-메톡시-페닐)펜탄디오산 (2.04 g, 794 mmol)의 용액에, 디에틸 에테르 (20 mL) 중의 2.0 M HCl 용액을 첨가하고, 상기 반응 혼합물을 실온에서 밤새 교반시켜 황색-오렌지색 용액을 수득하였다. 진공에서 용매를 증발시켜 황색 점성 액체를 수득하였다. 잔류물을 물 (50 mL)과 에틸 아세테이트 (50 mL) 사이에 분배시켰다. 수성 층 및 유기층을 분리했다. 유기층을 NaHCO3 (1×10 mL) 포화 용액, 염수 (1×25 mL)로 세정하고, 무수 설페이트 상에서 건조시키고, 여과하고 진공에서 증발시켜, 황색-오렌지색 점성 액체 (2.382 g, 수율 96%)를 수득하였다. 상기 액체의 LC-MS 분석은 rt 2.42분에서 원하는 생성물을 나타내고, 다음의 원하는 생성물 질량을 나타냈다: m/z 267 (M+H-C2H5O-), m/z 313 (M+H), m/z 335 (M+Na); C16H21FO5에 대한 계산값: 312.34 1H NMR (400 MHz, CDCl3): δ 1.17 (t, J = 7.1 Hz, 6H, 2ХCH 3 -CH2-), 2.53-2.74 (m, 4H, 2Х-CH 2 -C=O-), 3.59 (t, J = 7.58 Hz, 1H, -CH2-CH-CH2-), 3.86 (s, 3H, -OCH 3 ), 3.99-4.12 (m, 4H, 2ХCH3-CH 2 -O-), 6.85-6.91 (m, 1H), 6.92-7.00 (m, 2H). 생성물의 1H NMR 스펙트럼은 생성물의 제안된 구조와 일관되었다.
단계 4. ( S )-5- 에톡시 -3-(3- 플루오로 -4- 메톡시페닐 )-5- 옥소펜탄산의 제조
Figure pct00084
28 mM KH2PO4 용액 중의 단계 3으로부터의 디에틸 3-(3-플루오로-4-메톡시-페닐)펜탄디오에이트 (2.356 g, 7.52 mmol)의 현탁액을, 실온에서 교반시켰다. 수상의 pH는 1 N NaOH 용액과 50 mM KH2PO4 용액을 첨가하여 pH 7.30으로 조정하였다. 칸디다 안타르티카 ( Candida antartica ) 유래 리파제 아크릴 수지 (203.0 mg)를 첨가하고, 상기 반응 혼합물을 실온에서 밤새 교반시켰다. 크림색-황색 현탁액, 밤새 교반 (17시간) 후 상기 반응 혼합물의 LC-MS 분석은 rt 1.98분에서 원하는 생성물 (48%), 및 rt 2.42분에서 미반응 출발 물질 (52%)을 나타냈다. 46시간 후, 리파제 아크릴 수지 비드의 또 다른 부분 (142.0 mg)을 첨가하고 상기 반응 혼합물의 pH를 1N NaOH 용액으로 7.30으로 조정하고, 상기 반응 혼합물을 실온에서 교반시켰다. 6일 (138시간) 동안 교반시킨 후 상기 반응 혼합물의 LC-MS 분석은, rt 1.97분에서 원하는 생성물 (>98%) 및 rt 2.41분에서 미반응 출발 물질 (<2%)을 나타냈다. 144시간 후 상기 반응 혼합물을 와트만(Whatman) # 1 여과지 상에서 여과하여 리파제 아크릴 수지를 제거하였다. 여액의 LC-MS 분석은 rt 1.97분에서 원하는 생성물 (>99%) 및 rt 2.41분에서 기준 미량의 미반응 출발 물질 (<1%)을 나타냈다. LC-MS 분석은 또한 다음의 원하는 생성물 질량을 나타냈다: m/z 267 (M+H-H2O), m/z 285 (M+H) 및 m/z 307 (M+Na); 상당히 순수한 반응 혼합물. 여액을 3N HCl (5 mL)로 산성화시켜, 무색 현탁액을 수득하였다. 상기 현탁액을 고체 염화나트륨으로 포화시켜 무색 고무질 현탁액을 수득하였다. 염화나트륨을 여과하고 여액을 에틸 아세테이트 (2×50 mL)로 추출하였다. 에틸 아세테이트 층을 염수 (2×50 mL)로 세정하고, 무수 Na2SO4로 건조시키고, 여과하고 진공에서 증발시켜 담황색 점성 오일을 수득하고, 담황색 결정질 고체 (2.14 g, 수율 99%)로 서서히 응고되기 시작하였다. 상기 고체의 LC-MS 분석은 rt 1.97분에서 원하는 생성물을 나타내고, 다음의 원하는 생성물 질량을 나타냈다: m/z 267 (M+H-H2O), m/z 285 (M+H) 및 m/z 307 (M+Na); C14H17FO5에 대한 계산값: 284.28. 1H NMR (400 MHz, CDCl3): δ 1.18 (t, J = 7.09 Hz, 3 H, CH 3 -CH2-CO-), 2.53-2.82 (m, 4H, 2Х-CH 2 -), 3.59 (quin/m, 1H, -CH2-CH-CH2-), 3.87 (s, 3H, -O-CH 3 ), 4.06 (qd, J =7.09 및 1.22 Hz, 2 H), 6.86-6.92 (m, 1H), 6.94-7.00 (m, 2 H), -COOH 피크는 기준선 아래에 가려졌다. 생성물의 1H NMR 스펙트럼은 생성물의 제안된 구조와 일관되었다.
단계 5. 디에틸 (3 S )-3-(3- 플루오로 -4- 메톡시 -페닐)-5-옥소- 헵탄디오에이트의 제조
Figure pct00085
질소 분위기 하에 0℃ (빙욕)에서 무수 DMF (15.0 mL) 중의 단계 4로부터의 (S)-5-에톡시-3-(3-플루오로-4-메톡시-페닐)-5-옥소-펜탄산 (2.06 g, 7.246 mmol) 및 멜드럼산 (1.23 g, 114.13 mmol)의 용액에, 디에틸 시아노포스포네이트 (1.61 g, 163.11 mmol)를 서서히 첨가하고, 이어서 트리에틸아민 (3.5 mL, 25.11 mmol)을 첨가하였다. 상기 반응 혼합물을 0℃에서 30분 동안 교반시켜, 오렌지색 용액을 수득하였다. 30분 후, 상기 반응 혼합물을 실온으로 가온시키고, 질소 분위기 하에 실온에서 밤새 교반시켰다. 상기 반응 혼합물을 빙냉 2N HCl (20 mL)로 켄칭시키고, 5분 동안 교반시켜 갈색 유성 잔류물을 수득하였다. 상기 혼합물을 물 (20 mL)로 희석하고, 에틸 아세테이트 (4×25 mL)로 추출하였다. 유기층을 합하고, 물 (1×50 mL), 염수 (1×50 mL)로 세정하고, 무수 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고 진공에서 증발시켜 오렌지색-갈색 오일 (6.21 g)을 수득하였다. 오일을 절대 에탄올 (80.0 mL)에 용해시키고, 상기 반응 혼합물을 3시간 동안 환류시켜 오렌지색 용액을 수득하였다. 용매를 진공에서 증발시켜 오렌지색-갈색 오일 (3.34 g)을 수득하였다. 조 생성물의 LC-MS 분석은 rt 2.36분에서 원하는 생성물 및 rt 2.46분에서 부산물을 나타냈다. LC-MS는 또한 다음의 원하는 생성물 질량: m/z 309 (M+H-C2H5O-), m/z 355 (M+H), m/z 377 (M+Na), 및 다음의 부산물 질량: m/z 430 (M+H), m/z 452 (M+Na) 및 m/z 881 (2M+Na)을 나타냈다. 조 생성물을 디클로로메탄에 용해시키고 80 g RediSep 실리카 칼럼에 가하고, 헥산 중의 0 내지 60% EtOAc를 사용하여 실리카겔 플래시 크로마토그래피로 정제하였다. 순수한 분획을 함께 혼합하고 상기 혼합물을 진공에서 증발시켜, 무색 내지 매우 옅은 황색 점성 액체 (1.767 g, 수율 69%)를 수득하였다. 상기 액체의 LC-MS 분석은 rt 2.35분에서 원하는 생성물을 나타내고, 다음의 원하는 생성물 질량을 나타냈다: m/z 309 (M+H-C2H5O-), m/z 355 (M+H), m/z 377 (M+Na); C18H23FO6에 대한 계산값: 354.37. 1H NMR (400 MHz, CDCl3): δ 1.17 (t, J = 7.21 Hz, 3 H, CH 3 -CH2-CO-),　1.25 (t, J = 7.21 Hz, 3 H, CH 3 -CH2-CO-), 2.48-2.72 (m, 4H), 2.83-3.00 (m, 2H), 3.86 (s, 3H, -O-CH 3 ), 4.05 (qd, J =7.13 및 1.83 Hz, 2 H), 4.12-4.22 (m, 2H), 4.28 (q, J = 7.25 Hz, 1H), 6.89 (d, J = 8.31 Hz, 1H), 6.92 - 6.94 (m, 2 H),　6.96 (t, J = 2.20 Hz,1 H, -OH). 생성물의 1H NMR 스펙트럼은 생성물의 제안된 구조와 일관되었다.
단계 6: 에틸 (3 S )-3-(3- 플루오로 -4- 메톡시 -페닐)-4-(5- 하이드록시 -1- 메틸 -피라졸-3-일)부타노에이트의 제조
Figure pct00086
실온에서 절대 에틸 알코올 중의 단계 5로부터의 디에틸 (3S)-3-(3-플루오로-4-메톡시-페닐)-5-옥소-헵탄디오에이트 (1.756 g, 4.955 mmol)의 용액에, 메틸하이드라진 (300 μL, 5.697 nmmol)을 첨가하여, 담황색 용액을 수득하였다. 상기 반응 혼합물을 환류 조건하에서 1.5시간 동안 가열하여, 밝은 황색 용액을 수득하였다. 상기 반응 혼합물을 실온으로 냉각시키고 진공에서 증발시켜 황색 고무질 잔류물 (1.82 g)을 수득하였다. 조 생성물을 미량의 에탄올을 함유하는 에틸 아세테이트에 용해시키고, 40 g RediSep 실리카 칼럼에 가하고 EtOAc 중의 0 내지 20% 메탄올을 사용하는 실리카겔 플래시 크로마토그래피로 정제하여, 담황색 점성 액체를 수득하고, 진공 펌프에서 건조시켜 담황색 발포성 고체 (1.347 g, 수율 81%)를 수득하였다. 상기 고체의 LC-MS 분석은 rt 1.84분에서 원하는 생성물을 나타내고, 다음의 원하는 생성물 질량을 나타냈다: m/z 337 (M+H), m/z 359 (M+Na), 및 m/z 695 (2M+Na); C17H21FN2O4에 대한 계산값: 336.36. 1H NMR (400 MHz, CDCl3): δ 1.18 (t, J = 7.21 Hz, 3 H, CH 3 -CH2-CO-),　2.55 - 2.62 (m, 1 H, -CHH-CH-CH2-), 2.63 - 2.71 (m, 2 H, -CHH-CH-CHH-), 2.74 - 2.82 (m, 1 H, -CHH-CH-CH2-), 3.23 (s, 3 H, N-CH 3 ), 3.34 - 3.46 (m, 1 H, -CH2-CH-CH2-),　　3.88 (s, 3 H,-OCH 3 ), 4.06 (q, J =7.09 Hz, 2 H, CH3-CH 2 -CO- ), 6.85 - 6.92 (m, 3 H, Ph-H-2, H-5, H-6),　　6.92 - 6.94 (m, 1 H, Py-H-4),　6.96 (s,1 H, -OH). 생성물의 1H NMR 스펙트럼은 생성물의 제안된 구조와 일관되었다.
단계 7: 에틸 (3 S )-3-(3-플루오로-4-메톡시-페닐)-4-[1-메틸-5-[2-(5,6,7,8-테트라하이드로-1,8-나프티리딘-2-일)에톡시]피라졸-3-일]부타노에이트의 제조
Figure pct00087
-10℃ (염-빙욕)에서 무수 THF (15 mL) 중의 트리페닐포스핀 (1.15 g, 4.388 mmol)의 용액에, DIAD (900 μL, 4.57 mmol)를 적가하여 5-10분 이내에 황색 현탁액을 수득하였다. 상기 반응 혼합물을 -10℃에서 또 20분 동안 교반시켰다. 상기 반응 혼합물에 THF (5.0 mL) 중의 2-(5,6,7,8-테트라하이드로-1,8-나프티리딘-2-일)에탄올 (711.0 mg, 3.987 mmol) (반응식 2로부터)의 용액을 적가하였다. 상기 반응 혼합물을 -10℃에서 20분 동안 교반시키고, 무수 THF (5.0 mL) 중의 단계 6으로부터의 에틸 (3S)-3-(3-플루오로-4-메톡시-페닐)-4-(5-하이드록시-1-메틸-피라졸-3-일)부타노에이트 (1.341 g, 3.987 mmol)의 용액을 한 번에 첨가하여, 오렌지색 용액을 수득하였다. 상기 반응 혼합물을 -10℃에서 10분 동안 교반시킨 후, 실온으로 가온시키고, 실온에서 밤새 교반시켰다. 상기 반응 혼합물을 포화 NH4Cl 용액 (50 mL)으로 켄칭시키고 에틸 아세테이트 (2×50 mL)로 추출하였다. 합한 유기층을 염수 (1×50 mL)로 세정하고, 무수 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고 진공에서 증발시켜 황색 발포성/고무질 잔류물을 수득하였다. 조 생성물을 RediSep 80 g 실리카 칼럼 상에서 실리카겔 플래시 크로마토그래피로 정제하고, 에틸 아세테이트 중의 0-2% 메탄올로 용출시켜, 크림색 결정질 고체 (858.0 mg, 수율 44%)를 수득하였다. 상기 고체의 LC-MS 분석은 rt 2.04분에서 원하는 생성물을 나타내고, 다음의 원하는 생성물 질량을 나타냈다: m/z 497 (M+H) 및 m/z 519 (M+Na); C27H33FN4O4에 대한 계산값: 496.58. 1H NMR (400 MHz, CDCl3): δ 1.12 (t, J = 7.21 Hz, 3 H), 1.92 (dt, J = 11.68, 6.02 Hz, 1 H),　　2.52 (dd, J = 15.41, 10.03 Hz, 1 H),　　2.65-2.84 (m, 5 H),　　2.97 (t, J = 6.85 Hz, 2 H), 3.32 -3.39 (m, 1 H),　　3.40-3.46 (m, 2 H), 3.50 (s, 3 H),　　3.85 (s, 3 H),　　3.93-4.04 (m, 2 H), 4.26 (t, J = 6.85 Hz, 2 H), 4.89-5.03 (m, 1 H),　　4.96 (br s, 1 H), 5.22 (s, 1 H) 6.39 (d, J =7.09 Hz, 1 H),　　6.83-6.89 (m, 1 H), 6.91-6.98 (m, 2 H),　　7.09 (d, J = 7.34 Hz, 1 H). 생성물의 1H NMR 스펙트럼은 생성물의 제안된 구조와 일관되었다.
단계 8: (3 S )-3-(3- 플루오로 -4- 메톡시페닐 )-4-(1- 메틸 -5-(2-(5,6,7,8- 테트 라하이드로-1,8-나프티리딘-2-일)에톡시)-1 H -피라졸-3-일)부탄산의 제조
Figure pct00088
무수 THF (5 mL) 중의 단계 7로부터의 에틸 (3S)-3-(3-플루오로-4-메톡시-페닐)-4-[1-메틸-5-[2-(5,6,7,8-테트라하이드로-1,8-나프티리딘-2-일)에톡시]피라졸-3-일]부타노에이트 (806 mg, 1.623 mmol)의 용액에, 1.0 N NaOH 수용액 (8.0 mL)을 첨가하고, 생성된 현탁액을 50℃에서 교반시켜 황색 현탁액을 수득하였다. 8시간 동안 교반시킨 후, 상기 반응 혼합물의 LC-MS 분석은 rt 1.78분에서 원하는 생성물을 나타냈고; rt 2.04분에 출발 물질의 흔적이 존재하지 않았다. 용매를 진공에서 증발시켜 황색 고무질 잔류물을 수득하였다. 조 잔류물을 Biotage KP-C18-HS (120 g) 칼럼 상에서 0.05% TFA를 함유하는 물 중의 10-50% 아세토니트릴 구배를 사용하는 역상 제조용 HPLC로 정제하여, 원하는 표제 화합물 (실시예 15)을 담황색 고무질 잔류물로 수득하였다. 잔류물의 LC-MS 분석은 rt 1.77분에서 원하는 생성물을 나타내고, 다음의 원하는 생성물 질량을 나타냈다: m/z 469 (M+H) 및 m/z 491 (M+Na); C25H29FN4O4에 대한 계산값: 468.53. 상기 잔류물을 몇 방울의 아세토니트릴을 함유하는 물에 용해시키고 동결건조하여, 크림색 내지 담황색 동결건조된 분말 (708.0 mg, 수율 93%)을 수득하였다. 1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6 ): δ 1.77-1.87 (m, 2H), 2.40-2.48 (m, 1H), 2.54-2.62 (m, 1H), 2.65 (t, J = 6.97 Hz, 2H), 2.74 (t, J = 6.11 Hz, 2H), 3.09 (t, J = 6.11 Hz, 2H), 3.19-3.29 (m, 1H), 3.38 (s, 3H), 3.41 (t, J = 5.38 Hz,1H), 3.78 (s, 3H), 4.25 (t, J =6.11 Hz, 2H), 5.43 (s, 1H), 6.68 (d, J = 7.34 Hz, 1H), 6.94-7.05 (m, 2H), 7.09 (dd, J = 12.96 및 1.71 Hz, 1H), 7.62 (d, J = 7.34 Hz,　　1H), 8.44 (brs, 1H), 13.92 (brs, 1H). 19F NMR (376 MHz, DMSO-d 6 ): δ -135.81 (dd, J = 12.95 및 8.86 Hz, 1F, 3-F)도 또한 δ -74.35 (s, 3F, CF3COOH)에서 TFA를 나타내었다.
실시예 16
3-(3- 브로모 -5- tert -부틸-페닐)-4-(1- 메틸 -5-(2-(5,6,7,8- 테트라하이드로 -1,8-나프티리딘-2-일)에톡시)-1 H -피라졸-3-일)부탄산의 제조
Figure pct00089
실시예 16은 반응식 3에서 필요한 벤즈알데하이드로서 3-브로모-5-tert-부틸벤즈알데하이드를 사용하여 실시예 1과 유사한 방식으로 제조되었다. 조 생성물을 역상 제조용 HPLC로 정제하고, 분획의 동결건조한 후 표제 화합물을 무색 분말 (75.2 mg)로서 수득하였다. 상기 고체의 LC-MS 분석은 rt 2.20분에서 순도가 >95%인 원하는 생성물을 나타내고, 다음의 원하는 생성물 질량을 나타냈다: m/z 555 (79BrM+H), m/z 557 (81BrM+H), m/z 577 (79BrM+Na) 및 m/z 579 (81BrM+Na); C30H36BrN4O3에 대한 계산값: 555.51. 1H NMR (400 MHz, CD3OD): δ 1.24 -1.31 (m, 9 H), 1.92-2.01 (m, 2 H), 2.65- 2.78 (m, 2 H), 2.78- 2.88 (m, 2 H), 2.95 (dd, J = 14.62, 8.97 Hz, 1 H), 3.12 (dd, J =14.62, 6.59 Hz, 1 H), 3.24 (t, J = 5.90 Hz, 2 H) 3.43-3.55 (m, 3 H), 3.66 (s, 3 H), 4.54 (t, J = 5.77 Hz, 2 H), 6.06 (s, 1 H), 6.73 (d, J = 7.28 Hz, 1 H), 7.21 (s, 1 H), 7.26 (s, 1 H), 7.39 (s, 1 H), 7.63 (d, J =7.40 Hz, 1 H).
실시예 17
3-(3- tert -부틸-5- 시아노페닐 )-4-(1- 메틸 -5-(2-(5,6,7,8- 테트라하이드로 -1,8-나프티리딘-2-일)에톡시)-1 H -피라졸-3-일)부탄산의 제조
Figure pct00090
실시예 17은 전구체로서 실시예 16을 사용하여 실시예 7 (반응식 4)과 유사한 방식으로 제조되었다. 조 생성물을 역상 제조용 HPLC로 정제하고, 분획을 동결건조한 후, 표제 화합물을 무색 분말 (38.2 mg)로 수득하였다. 상기 고체의 LC-MS 분석은 rt 2.04분에서 원하는 생성물을 나타내고, 다음의 원하는 생성물 질량을 나타냈다: m/z 502 (M+H), 및 m/z 524 (M+Na); C29H35N5O3에 대한 계산값: 501.62. 1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6 ): δ 1.19 - 1.25 (m, 9 H), 1.78 - 1.88 (m, 2 H), 2.54 - 2.69 (m, 3 H), 2.70 - 2.80 (m, 3 H), 3.08 (t, J = 6.02 Hz, 2 H), 3.37 (s, 4 H), 3.39 - 3.45 (m, 4 H), 4.22 (t, J = 6.02 Hz, 2 H), 5.41 (s, 1 H), 6.68 (d, J = 7.40 Hz, 1 H), 7.50 (s, 1 H), 7.54 (s, 1 H), 7.59 (s, 1 H), 7.63 (d, J = 7.40 Hz, 1 H), 8.18 (brs, 1 H).
실시예 18
3-(3,5-디- tert -부틸페닐)-4-[1-메틸-5-[2-(5,6,7,8-테트라하이드로-1,8-나프티리딘-2-일)에톡시]피라졸-3-일]부탄산의 제조
Figure pct00091
반응식 7
Figure pct00092
단계 1. 디에틸 2-(3,5-디- tert -부틸페닐)-4-하이드록시-4-메틸-6-옥소-사이클로헥산-1,3-디카르복실레이트의 제조
Figure pct00093
피페리딘 (90 μL, 0.91 mmol)을 3,5-디-tert-부틸벤즈알데하이드 (1.774 g, 7.88 mmol)와 에틸 아세토아세테이트 (2.57 g, 19.76 mmol)의 혼합물 용액에 첨가하였다. 상기 반응 혼합물을 실온에서 92시간 동안 교반시켜, 카나리아색(canary yellow) 미세결정질 고체를 수득하였다. 상기 고체를 비등하는 헥산 (30 mL)에 용해시키고 황색 용액을 실온으로 냉각시킴으로써, 조 생성물을 재결정화시켜, 무색 결정질 고체를 수득하였다. 상기 고체를 여과하고, 헥산 (3×10 mL)으로 세정하고 진공에서 건조시켜 무색 결정질 고체 (2.70 g, 수율 74%)를 수득하였다. 상기 고체의 LC-MS 분석은 다음의 원하는 생성물 질량을 나타냈다: m/z 443 (M+H-H2O), m/z 461 (M+H), m/z 483 (M+Na) 및 m/z 943 (2M+Na); C27H40O6에 대한 계산값: 460.61. 1H NMR (400 MHz, CDCl3): δ 0.72 (t, J = 7.21 Hz, 3 H, CH 3 -CH2-), 1.01 (t, J = 7.09 Hz, 3 H, CH 3 -CH2-), 1.29 (s, 18H, 2Х t-C4H9-), 1.36 (s, 3 H, CH 3 -), 2.51 (dd, J = 14.18 Hz and 2.69 Hz, 1H, -CH- at C-2), 2.72 (d, J = 14.18 Hz, 1 H, -CH- at C-1 ), 3.03 (d, J = 12.23　　Hz, 1 H,-CH-, at C-3), 3.70 (d, J = 12.47 Hz, 1 H, -OH), 3.73-3.89 (m, 3H, -CH 2 -CH3 + -CHH-), 3.94-3.99 (s, 1 H, -CHH-), 4.01 (q, 2H, -CH 2 -CH3), 7.03 (d, J = 1.71 Hz, 1H, Ar-H-4), 7.19 - 7.32 (m, 2H, Ar-H-2, H-6). 생성물의 1H NMR 스펙트럼은 생성물의 제안된 구조와 일관되었다.
단계 2. 3-(3,5-디-tert-부틸페닐)펜탄디오산의 제조
Figure pct00094
절대 에틸 알코올 (15.0 mL) 중의 단계 1로부터의 디에틸 2-(3,5-디-tert-부틸-페닐)-4-하이드록시-4-메틸-6-옥소-사이클로헥산-1,3-디카르복실레이트 (2.70 g, 5.86 mmol)의 용액에, 50% 수산화나트륨 용액 (20 mL)을 첨가하고, 상기 반응 혼합물을 환류 조건하에서 1시간 동안 가열하여, 베이지색 현탁액을 수득하였다. 1.5시간 후, 상기 반응 혼합물을 실온으로 냉각시키고, 에탄올을 진공에서 증발시켜 크림색-베이지색 침전물을 수득하였다. 상기 침전물을 물 (50 mL)에 용해시키고 에틸 아세테이트 (50 mL)로 희석하고, 실온에서 15분 동안 교반시켰다. 수성 층 및 유기층을 분리했다. 수성 층을 에틸 아세테이트 (1×25 mL)로 세정하여, 잔여 부산물을 제거하였다. 수성 층을 진한 HCl로 pH = 1까지 산성화시켜, 크림색 결정질 고체를 수득하였다. 상기 고체를 여과하고, 물 (3×25 mL)로 세정하고 진공에서 건조시켜, 크림색-황색 결정질 고체 (1.767g, 수율 94%)를 수득하였다. 상기 고체의 LC-MS 분석은 다음의 원하는 생성물 질량을 나타냈다: m/z 303 (M+H-H2O), m/z 321 (M+H) 및 m/z 343 (M+Na); C19H28O4에 대한 계산값: 320.43. 1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6 ): δ 1.26 (s, 18H, 2Х t-C 4 H 9 -), 2.50 (dd J = 15.75 Hz 및 7.0 Hz, 2H,-CH-CH 2 -COOH, 부분적으로 DMSO 피크 아래에 가려짐), 2.62 (dd, J = 15.75 Hz 및 7.0 Hz, 2H, HOOC-CH 2 -CH-), 3.43 (quin, J = 7.52 Hz, 1H, -CH2-CH-CH2-COOH), 7.08 (d, J = 1.71 Hz, 2H, H-2 및 H-6), 7.20 (t, J = 1.71 Hz, 1H, H-4), 12.04 (s, 2H, 2Х -COOH); 생성물의 1H NMR 스펙트럼은 생성물의 제안된 구조와 일관되었다.
단계 3. 4-(3,5-디-tert-부틸페닐)테트라하이드로피란-2,6-디온의 제조
Figure pct00095
아세트산 무수물 (40.0 mL) 중의 단계 2로부터의 3-(3,5-디-tert-부틸페닐)펜탄디오산 (2.13 g, 6.647 mmol)의 현탁액을 환류 조건하에서 가열하여, 황색-오렌지색 용액을 10분 이내에 수득하였다. 가열은 4시간 후 중단되었고, 상기 반응 혼합물을 실온으로 냉각시켰다. 용매를 진공에서 증발시켜 밝은 갈색 점성 액체를 수득하였고. 이를 실온에서 밝은 갈색 결정질 고체로 응고시켰다. 디클로로메탄을 함유하는 헥산으로부터 조 생성물을 결정화시켜, 거의 무색 결정질 고체를 수득하였고, 상기 고체를 여과하고, 헥산으로 세정하고 진공에서 건조시켜, 거의 무색 결정질 고체 (1.90 g, 수율 95%)를 수득하였다. 결정화된 고체의 LC-MS 분석은 다음의 원하는 생성물 질량을 나타냈다: m/z 303 (M+H) 및 m/z 325 (M+Na); C19H26O3에 대한 계산값: 302.41. 1H NMR (400 MHz, CDC13): δ 1.33 (s, 18 H, 2Х tert-C 4 H 9 -), 2.89 (dd, J = 17.36, 11.49 Hz, 2 H, -CH 2 -), 3.14 (dd, J = 17.36, 4.40 Hz, 2 H, -CH 2 -), 3.42 (tt, J =11.55, 4.34 Hz, 1 H, -CH2-CH-CH2-), 7.02 (d, J = 1.47 Hz, 2 H, H-2, H-6), 7.40 (t, J = 1.71 Hz, 1 H, H-3). 생성물의 1H NMR 스펙트럼은 생성물의 제안된 구조와 일관되었다.
단계 4. 3-(3,5-디-tert-부틸페닐)-5-에톡시-5-옥소-펜탄산의 제조
Figure pct00096
무수 피리딘과 절대 에틸 알코올의 혼합물 중의 단계 3으로부터의 4-(3,5-디-tert-부틸페닐)테트라하이드로피란-2,6-디온의 용액을 환류 하에서 1.5시간 동안 가열하여, 밝은 황갈색 용액을 수득하였다. 용매를 진공에서 증발시켜 밝은 황갈색 점성 잔류물을 수득하였다. 상기 잔류물을 에틸 아세테이트 (25 mL)에 용해시켰다. 에틸 아세테이트 층을 우선 1N HCl (25 mL)로 세정한 다음, 물 (1×25 mL) 및 마지막으로 염수 (1×10 mL)로 세정하였다. 에틸 아세테이트 층을 무수 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고 진공에서 증발시켜 밝은 황갈색 점성 액체를 수득하였고, 이를 밝은 황갈색 내지 크림색의 발포성 고체 (618.0 mg, 수율 98%)로 응고시켰다. 조 생성물의 LC-MS 분석은 순도가 >95%인 원하는 생성물을 나타내고, 다음의 원하는 생성물 질량을 나타냈다: m/z 331 (M+H-H2O), m/z 349 (M+H) 및 m/z 371 (M+Na); C21H32O4에 대한 계산값: 348.48. 1H NMR (400 MHz, CDCl3): δ 1.14 (t, J = 7.09 Hz, 3H, CH 3 -CH2-), 1.31 (s, 18 H, 2Х tert-C 4 H 9 -), 2.59-2.85 (m, 4H, -CH 2 -CH-CH 2 -), 3.64 (quin J =7.34 Hz, 1H, -CH2-CH-CH2-), 4.05 (q, J = 7.09 Hz, 2H, -O-CH 2 -CH3), 7.05 (d, J = 1.71 Hz, 2 H, H-2, H-6), 7.28 (s,1 H, H-4), -COOH 피크는 기준선 아래에 가려졌다. 생성물의 1H NMR 스펙트럼은 생성물의 제안된 구조와 일관되었다.
단계 5. 디에틸 3-(3,5-디-tert-부틸페닐)-5-옥소-헵탄디오에이트의 제조
Figure pct00097
질소 분위기 하에 0℃ (빙욕)에서 무수 DMF 중의 단계 4로부터의 3-(3,5-디-tert-부틸페닐)-5-에톡시-5-옥소-펜탄산 (618.0 mg, 1.773 mmol) 및 멜드럼산 (294.95 mg, 2.047 mmol)의 용액에, 디에틸 시아노포스포네이트 (290 μL, 1.911 mmol)를 서서히 첨가하고, 이어서 트리에틸아민 (900 μL, 6.457 mmol)을 첨가하였다. 상기 반응 혼합물을 0℃에서 30분 동안 교반시켜, 황색-오렌지색 용액을 수득하였다. 30분 후, 상기 반응 혼합물을 실온으로 가온시키고, 질소 분위기 하에 실온에서 밤새 교반시켜 어두운 오렌지색 용액을 수득하였다. 상기 반응 혼합물을 빙냉 2 N HCl (10 mL)로 켄칭시키고, 5분 동안 교반시켜 크림색 왁스 잔류물을 수득하였다. 상기 혼합물을 물 (20 mL)로 희석하고, 에틸 아세테이트 (2Х25 mL)로 추출하였다. 유기층을 합하고, 물 (1×23 mL), 염수 (1×25 mL)로 세정하고, 무수 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고 진공에서 증발시켜 황색-오렌지색 점성 액체를 수득하였다.
점성 오일을 절대 에탄올 (20.0 mL)에 용해시키고, 상기 반응 혼합물을 3시간 동안 환류시켜, 오렌지색 용액을 수득하였다. 3시간 후 상기 반응 혼합물의 LC-MS 분석은 다음의 원하는 생성물 질량을 나타냈다: m/z 373 (M+H-C2H5O-), m/z 419 (M+H), 및 m/z 441 (M+Na). 용매를 진공에서 증발시켜 황색-오렌지색 점성 잔류물 (696.3 mg)을 수득하였다. 조 생성물을 디클로로메탄에 용해시키고, 24 g RediSep 실리카 칼럼에 가하고, 헥산 중의 0 내지 30% EtOAc를 사용하는 실리카겔 플래시 크로마토그래피로 CombiFlashRf 상에서 정제하였다. 순수한 분획을 함께 혼합하고, 상기 혼합물을 진공에서 증발시켜, 무색 내지 매우 옅은 황색 발포성 고체 (430.5 mg, 수율 58%)를 수득하였다. 상기 고체의 LC-MS 분석은 순도가 >95%인 원하는 생성물을 나타내고, 다음의 원하는 생성물 질량을 나타냈다: m/z 373 (M+H-C2H5O-), m/z 419 (M+H), m/z 441 (M+Na); C25H38O5에 대한 계산값: 418.57. 1H NMR (400 MHz, CDCl3): δ 1.15 (t, J = 7.09 Hz, 3 H, CH 3 -CH2-CO-),1.25 (t, J = 7.09 Hz, 3 H, CH 3 -CH2-CO-), 1.31 (s, 18 H, 2Х tert-C 4 H 9 -), 2.59 - 2.74 (m, 2 H, -CH 2 -CH-CH2-), 2.86 - 3.04 (m, 2 H, -CH2-CH-CH 2 - ), 3.33 (s, 2H,b-CO-CH 2 -CO-), 3.70 (quin, J = 7.21 Hz, 1 H, -CH2-CH-CH2-), 4.04 (q, J = 7.09 Hz, 2 H, CH3-CH 2 -CO- ), 4.16 (q, J = 7.17 Hz, 2 H, CH3-CH 2 -CO- ), 7.02-7.06 (m, 2 H, Ph-H-2, H-6), 7.25-7.28 (m, 1 H, Ph-H-4). 생성물의 1H NMR 스펙트럼은 생성물의 제안된 구조와 일관되었다.
단계 6. 에틸 3-(3,5-디-tert-부틸페닐)-4-(5-하이드록시-1-메틸-피라졸-3-일)부타노에이트의 제조
Figure pct00098
실온에서 절대 에틸 알코올 (5.0 mL) 중의 단계 5로부터의 디에틸 3-(3,5-디-tert-부틸페닐)-5-옥소-헵탄디오에이트 (430.50 mg, 1.028 mmol)의 용액에, 메틸하이드라진 (70 μL, 1.33 mmol)을 첨가하여 무색 용액을 수득하였다. 상기 반응 혼합물을 환류 조건하에서 밤새 가열하여, 매우 옅은 황색 용액을 수득하였다. 용매를 진공에서 증발시켜 때묻은 황색 발포성 고체를 수득하였다. 조 생성물을 미량의 DCM을 함유하는 에틸 아세테이트에 용해시키고, 12 g RediSep 실리카 칼럼에 가하고 EtOAc 중의 0 내지 20% 메탄올을 사용하는 실리카겔 플래시 크로마토그래피로 정제하였다. 순수한 분획을 함께 혼합하고, 상기 혼합물을 진공에서 증발시켜, 매우 옅은 황색 점성 액체를 수득하였고, 진공 펌프에서 건조시켜 담황색 내지 크림색 고체 (355.5 mg, 수율 86%)를 수득하였다. 상기 고체의 LC-MS 분석은 다음의 원하는 생성물 질량을 나타냈다: m/z 401(M+H), m/z 423 (M+Na), 및 m/z 823 (2M+Na); C24H36N2O3에 대한 계산값: 400.56. 1H NMR (400 MHz, CDCl3): δ 1.18 (t, J = 7.09 Hz, 3 H, CH 3 -CH2-O-) 1.30 (s, 18 H, 2Х tert-C 4 H 9 -), 2.64-2.88 (m, 4H,-CH 2 -CH-CH 2 -, 2개의 부분입체이성질체 자리의 -CH2-), 2.81 (s, 1H, -OH), 3.24 (s, 3H, N-CH 3 ), 3.46 (quin, J =7.52 Hz, 1H, -CH2-CH-CH2-), 4.07 (q, J = 7.10 Hz, 2H, -O-CH 2 -CH3), 7.02 (d, J = 1.71 Hz, 2 H, H-2, H-6), 7.25-7.29 (m, 2 H, Py-H-4 및 Ph-H4). 생성물의 1H NMR 스펙트럼은 생성물의 제안된 구조와 일관되었다.
단계 7. 에틸 3-(3,5-디-tert-부틸페닐)-4-[1-메틸-5-[2-(5,6,7,8-테트라하이드로-1,8-나프티리딘-2-일)에톡시]피라졸-3-일]부타노에이트의 제조
Figure pct00099
-10℃ (염-빙욕)에서 무수 THF (5 mL) 중의 트리페닐포스핀 (262.5 mg, 1.00 mmol)의 용액에, DIAD (200 μL, 1.02 mmol)를 적가하여, 황색 현탁액을 5분 이내에 수득하였다. 상기 반응 혼합물을 -10℃에서 또 20분 동안 교반시켰다. 상기 반응 혼합물에, THF (4.0 mL) 중의 2-(5,6,7,8-테트라하이드로-1,8-나프티리딘-2-일)에탄올 (155.7 mg, 0.874 mmol)의 용액을 적가하였다. 상기 반응 혼합물을 -10℃에서 20분 동안 교반시킨 다음, 무수 THF (5.0 mL) 중의 단계 6으로부터의 에틸 3-(3,5-디-tert-부틸페닐)-4-(5-하이드록시-1-메틸-피라졸-3-일)부타노에이트(350.0 mg, 0.874 mmol)의 용액을 한 번에 첨가하여, 오렌지색 용액을 수득하였다. 상기 반응 혼합물을 -10℃에서 10분 동안 교반시킨 후 실온으로 가온시키고, 실온에서 밤새 교반시켰다. 상기 반응 혼합물을 포화 NH4Cl 용액 (25 mL)으로 켄칭시키고, 에틸 아세테이트 (2×25 mL)로 추출하였다. 합한 유기층을 염수 (1×25 mL)로 세정하고, 무수 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고 진공에서 증발시켜 황색 발포성/고무질 잔류물을 수득하였다. 조 생성물은 우선 RediSep 24 g 실리카 칼럼을 사용하고 에틸 아세테이트 중의 0-2% 메탄올로 용출되는 실리카겔 플래시 크로마토그래피로 정제되어 원하는 생성물을 황색 고체 (1.092 g)로 수득하였다. 상기 생성물의 LC-MS 분석 결과 순도가 >70%인 원하는 생성물을 나타냈다. 상기 순수하지 않은 생성물을 RediSep C18 칼럼 및 0.05% TFA를 함유하는 물 중의 10-60% 아세토니트릴 구배를 사용하는 역상 제조용 HPLC로 두 번째 정제하고 동결건조한 후, 원하는 생성물을 담황색 발포성 고체 (244.3 mg; 수율 50%)로 수득하였다. 상기 고체의 LC-MS 분석은 다음의 원하는 생성물 질량을 나타냈다: m/z 561 (M+H) 및 m/z 583 (M+Na); C34H48N4O3에 대한 계산값: 560.78. 1H NMR (400 MHz, CDCl3): δ 1.08 (t, J = 7.09 Hz, 3 H), 1.29 (s, 18 H, 2Х tert-C 4 H 9 -), 1.91-2.00 (m, 1 H), 2.56-2.72 (m, 2 H), 2.78 (t, J = 6.24 Hz, 2 H), 2.81-2.96 (m, 2 H), 3.16 (t, J = 5.99 Hz, 2 H), 3.38-3.47 (m, 1H), 3.52 (t,J = 4.65 Hz, 2H), 3.56 (s, 3 H, N-CH 3 ), 3.97 (q, J = 7,17 Hz, 2H), 4.29 (t, J = 5.99 Hz, 2 H), 5.36 (s, 1H), 6.38 ( d, J = 7.34 Hz, 1 H), 7.04 (t, J = 1.71 Hz, 2 H), 7.24 (t, J = 1.71 Hz, 2 H),7.27 (s, 1H), 7.33 (d, J = 7.34 Hz, 1 H), 10.39 (brs, 1H). 생성물의 1H NMR 스펙트럼은 생성물의 제안된 구조와 일관되었다.
단계 8. 3-(3,5-디-tert-부틸페닐)-4-[1-메틸-5-[2-(5,6,7,8-테트라하이드로-1,8-나프티리딘-2-일)에톡시]피라졸-3-일]부탄산 ( 실시예 18)의 제조
Figure pct00100
무수 THF (3 mL) 중의 단계 7로부터의 에틸 3-(3,5-디-tert-부틸페닐)-4-[1-메틸-5-[2-(5,6,7,8-테트라하이드로-1,8-나프티리딘-2-일)에톡시] 피라졸-3-일]부타노에이트 (235.0 mg, 0.419 mmol)의 용액에, 1 N NaOH 수용액 (4.0 mL)을 첨가하고, 생성된 용액을 50℃에서 밤새 교반시켰다. 상기 반응 혼합물을 2 N HCl로 산성화시키고, 용매를 진공에서 증발시켜, 매우 옅은 황색 결정질/고무질 잔류물을 수득하였다. 조 잔류물을 RediSep C18 칼럼 및 0.05% TFA를 함유하는 물 중의 10-60% 아세토니트릴 구배를 사용하는 역상 제조용 HPLC로 정제하였다. 순수한 분획을 함께 혼합하고 상기 혼합물을 진공에서 증발시켜 무색 고무질 잔류물을 수득하였다. 상기 잔류물을 물과 아세토니트릴의 혼합물에 용해시키고, 상기 용액을 동결건조시켜 원하는 생성물, 실시예 18을 무색 동결건조된 분말 (240 mg)로 수득하였다.
상기 고체의 LC-MS 분석은 다음의 원하는 생성물 질량을 나타냈다: m/z 533 (M+H) 및 m/z 555 (M+Na). C32H44N4O3에 대한 계산값: 532.73. 1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6 ): δ 1.24 (s, 18H, 2Х tert-C 4 H 9 -), 1.78-1.87 (m, 2H), 2.58 (d, J = 5.62 Hz, 1H), 2.60-2.69 (m, 3H), 2.74 (t, J = 6.11 Hz, 2H), 3.09 (t, J = 5.99 Hz, 2H), 3.24-3.34 (m, 1H), 3.39 (s, 3H), 3.40-3.44 (m, 1H), 4.23 (t, J = 5.99 Hz, 2H), 5.40 (s, 2 H), 6.69 (d, J = 7.34 Hz, 1H), 7.02 (d, J = 1.71 Hz, 1H), 7.11-7.22 (m, 1H), 7.64 (d, J = 7.34 Hz,1H), 8.12 (brs, 1H), 13.67 (brs; 1H). 생성물의 1H NMR 스펙트럼은 생성물의 제안된 구조와 일관되었다.
실시예 19
3-(3- 브로모 -5-(1-( 디플루오로메틸 )사이클로프로필)페닐)-4-(1- 메틸 -5-(2-(5,6,7,8-테트라하이드로-1,8-나프티리딘-2-일)에톡시)-1H-피라졸-3-일)부탄산의 제조
Figure pct00101
실시예 19는 반응식 3에서 필요한 벤즈알데하이드로서 3-브로모-5-(1-(디플루오로메틸)사이클로프로필)벤즈알데하이드 (반응식 8에 따라 합성됨)를 사용하여, 실시예 1과 유사한 방식으로 제조되었다. 조 생성물을 prep-HPLC (칼럼: Phenomenex Gemini C18 250*50 10μ; 이동상: [물 (0.225%FA)-ACN]; B%: 23%-53%, 11.2분)로 정제하였다. HPLC 용출액을 동결건조시켜, 표제 화합물을 백색 고체 (200 mg)로 수득하였다. 상기 고체의 LC-MS 분석은 다음의 원하는 생성물 질량을 나타냈다: m/z 589 (M+H); C28H31BrF2N4O3에 대한 계산값: 589.47. 1H NMR (400 MHz, CD3OD): δ ppm 0.91 (br d, J=2.21 Hz, 2 H) 1.08 - 1.15 (m, 2 H) 1.84 - 1.96 (m, 2 H) 2.51 - 2.61 (m, 1 H) 2.62 - 2.85 (m, 5 H) 2.94 - 3.10 (m, 2 H) 3.34 - 3.47 (m, 6 H) 4.28 (t, J=6.28 Hz, 2 H) 5.40 (s, 1 H) 5.45 - 5.80 (m, 1 H) 6.52 (d, J=7.28 Hz, 1 H) 7.20 (s, 1 H) 7.34 - 7.39 (m, 2 H). 19FNMR (400 MHz, CD3OD): δ ppm -117.89-118.04.
반응식 8
Figure pct00102
단계 1. 1,3- 디브로모 -5-( 클로로메틸 )벤젠의 제조
Figure pct00103
(3,5-디브로모페닐)메탄올 (10 g, 37.60 mmol, 1 eq)을　질소 하에서 건조된 플라스크 내 무수　DCM (100 mL)에 용해시켰다. 상기 반응 혼합물을 0℃로 냉각시키고, 질소 분위기 하에서 교반시켰다. 상기 용액에 DIEA (9.72 g, 75.21 mmol, 13.10 mL, 2 eq)를 적가하고, 0℃에서 10분간 교반한 후 상기 반응 혼합물에 MsCl (6.46 g, 56.41 mmol, 4.37 mL, 1.5 eq)을 적가하였다. 마지막으로, 상기 반응 혼합물을 26℃에서 2시간 동안 교반시켰다. TLC (석유 에테르 : EtOAc = 5:1, uv & KMnO4로 염색됨)는, 출발 알코올이 소모되고 2개의 새로운 반점이 형성되었음을 나타냈다. 반응 혼합물을 물 (80 mL)로 세정하고 이어서 NaHCO3 (80 mL) 용액 및 염수 (80 mL)로 세정하고, 무수 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고 건조되도록 증발시켜, 원하는 생성물을 갈색 액체 (12.11g)로 수득하였다. 상기 액체를 추가 정제 없이 다음 단계에서 바로 사용하였다. 1H NMR (400 MHz, 클로로포름-d) δ ppm 3.04 (s, 3 H) 4.49 (s, 2 H) 5.16 (s, 2 H) 7.48 (d, J=1.76 Hz, 2 H) 7.50 (d, J=1.76 Hz, 2 H) 7.63 (t, J=1.76 Hz, 1 H) 7.70 (t, J=1.76 Hz, 1 H).
단계 2. 2-(3,5- 디브로모페닐 ) 아세토니트릴의 제조
Figure pct00104
CH3CN (150 mL)　 중의 1,3-디브로모-5-(클로로메틸)벤젠 (12.11 g, 42.58 mmol, 1 eq), KCN (13.86 g, 212.92 mmol, 9.12 mL, 5 eq) 및 1,4,7,10,13,16-헥사옥사사이클로옥타데칸 (1.13 g, 4.26 mmol, 0.1 eq)의 현탁액을, 28℃에서 12시간 동안 교반시켰다. 갈색 현탁액이 관측되었다. TLC (석유 에테르: 에틸 아세테이트=7:1, uv & I2로 염색됨)는 출발 물질이 소모되고 하나의 새로운 주요 반점이 형성되었음을 나타냈다. 상기 반응 혼합물을 감압하에 농축시켰다. 생성된 잔류물을 물 (100 mL)에 용해시키고 에틸 아세테이트　(3 ×　80 mL)로 추출하고, 유기층을 황산나트륨 상에서 건조시키고 감압하에 농축시켜, 조 생성물을 갈색 잔류물로 수득하였다. 상기 잔류물을 플래시 실리카겔 크로마토그래피 (ISCO®;　80 g SepaFlash® 실리카 플래시 칼럼, 30 mL/min에서의 0~9% 에틸 아세테이트/석유 에테르 구배의 용리액)로 정제하여, 원하는 생성물을 밝은 황색 고체 (7.58 g, 27.57 mmol, 65% 수율)로 수득하였다. 1H NMR (400 MHz, 클로로포름-d) δ ppm 3.73 (d, J=0.66 Hz, 2 H) 7.36 - 7.55 (m, 2 H) 7.67 (t, J=1.65 Hz, 1 H).
단계 3. 1-(3,5- 디브로모페닐 ) 사이클로프로판카르보니트릴의 제조
Figure pct00105
NaOH (43 mL, 50%) 중의 벤질(트리에틸)암모늄;클로라이드 (303.21 mg, 1.33 mmol, 0.05 eq)의 교반 용액에, 2-(3,5-디브로모페닐)아세토니트릴 (7.32 g, 26.62 mmol, 1 eq), 1,2-디브로모에탄 (15 g, 79.87 mmol, 6.03 mL, 3 eq)　용액을, 0℃에서 첨가하였다. 생성된 혼합물을 26℃에서 12시간 동안 교반시켰다. TLC (석유 에테르: 에틸 아세테이트=15:1)는 출발 물질이 소모되고 하나의 새로운 주요 반점이 위에 형성되었음을 나타냈다. 상기 반응 혼합물을 빙수 (60 mL)에 붓고 에틸 아세테이트 (3×80 mL)로 추출하였다. 유기층을 황산나트륨 상에서 건조시키고 감압하에 농축시켜, 갈색 조 생성물을 수득하였다. 상기 잔류물을 플래시 실리카겔 크로마토그래피 (ISCO®;　80 g SepaFlash® 실리카 플래시 칼럼, 40 mL/min에서 0~5% 에틸 아세테이트/석유 에테르 구배의 용리액)로 정제하여, 원하는 생성물을 황색 고체 (7.1 g, 23.59 mmol, 88.60% 수율)로 수득하였다. 1H NMR (400 MHz, 클로로포름-d) δ ppm 1.39 - 1.47 (m, 2 H) 1.75 - 1.83 (m, 2 H) 7.37 (d, J=1.76 Hz, 2 H) 7.61 (t, J=1.76 Hz, 1 H).
단계 4. 1-(3,5- 디브로모페닐 ) 사이클로프로판카브알데하이드의 제조
Figure pct00106
DCM (305 mL)　중의 1-(3,5-디브로모페닐)사이클로프로판카르보니트릴 (8.3 g, 27.58 mmol, 1 eq)의 교반 용액에, DIBAL-H (1 M, 38.61 mL, 1.4 eq)를 -78℃에서 첨가하였다. 생성된 혼합물을 -78℃에서 2시간 동안 교반시켰다. TLC (석유 에테르: 에틸 아세테이트=4:0.2 mL, KMnO4로 염색됨 & UV)는 새로운 반점이 출발 물질 아래에 형성되고 출발 물질이 소모되었음을 나타냈다. 상기 반응 혼합물을 2N HCl (100 mL)로 켄칭시키고 6분 동안 교반시키고, H2O (60 mL)로 희석하고, 그 다음 에틸 아세테이트 (3×150 mL)로 추출하였다. 유기층을 포화 NaHCO3 용액 (150 mL)으로 세정하고, 이어서 염수 (150 mL)로 세정하고, 황산나트륨 상에서 건조시키고 감압하에 농축시켜, 8.9 g의 조 생성물을 황색 고체로 수득하였다. 조 물질을 추가 정제 없이 다음 단계에서 바로 사용하였다. 1H NMR (400 MHz, 클로로포름-d) δ ppm 1.37 - 1.47 (m, 2 H) 1.55 - 1.69 (m, 2 H) 7.40 (d, J=1.76 Hz, 2 H) 7.63 (t, J=1.76 Hz, 1 H) 9.10 (s, 1 H).
단계 5. 1,3- 디브로모 -5-(1-( 디플루오로메틸 ) 사이클로프로필 )벤젠의 제조
Figure pct00107
DCM (126 mL) 중의 1-(3,5-디브로모페닐)사이클로프로판카브알데하이드 (8.9 g, 29.28 mmol, 1 eq)의 교반 용액에, DAST (18.88 g, 117.11 mmol, 15.5 mL, 4 eq)를 0℃에서 서서히 첨가하였다. 생성된 혼합물을 26℃에서 12시간 동안 교반시켰다. TLC (석유 에테르: 에틸 아세테이트=20:1, UV & I2로 염색됨)는 출발 물질이 소모되고 극성이 낮은 새로운 주요 반점이 위에 형성되었음을 나타냈다. 상기 반응 혼합물을 물 (80 mL*2)로 세정하였다. 유기층을 황산나트륨 상에서 건조시키고 감압하에 농축시켜 갈색 잔류물을 수득하였다. 상기 잔류물을 플래시 실리카겔 크로마토그래피 (ISCO®; 20 g SepaFlash® 실리카 플래시 칼럼, 30 mL/min에서 0~5% 에틸 아세테이트/석유 에테르 구배의 용리액)로 정제하여, 원하는 생성물을 황백색(off-white) 고체 (5.92 g, 18.15 mmol, 61.99% 수율)로 수득하였다. 1HNMR (400 MHz, 클로로포름-d) δ ppm 0.93 - 1.04 (m, 2 H) 1.13 - 1.22 (m, 2 H) 5.40 - 5.75 (m, 1 H) 7.49 (d, J=1.51 Hz, 2 H) 7.61 (t, J=1.63 Hz, 1 H); 19FNMR (400 MHz, 클로로포름-d) δ ppm -116.73.
단계 6. 3-브로모-5-(1-(디플루오로메틸)사이클로프로필)벤즈알데하이드
Figure pct00108
THF (82 mL) 중의 1,3-디브로모-5-[1-(디플루오로메틸)사이클로프로필]벤젠 (5.52 g, 16.93 mmol, 1 eq)의 교반 용액에, n-BuLi (2.5 M, 6.77 mL, 1.0 eq)을 -78℃에서 적가하였다. 생성된 혼합물을 -78℃에서 10분 동안 교반시키고, -78℃에서 DMF (1.86 g, 25.4 mmol, 1.95 mL, 1.5 eq)로 켄칭시키고, -78℃에서 1시간 동안 교반시켰다. TLC (석유 에테르: 에틸 아세테이트=10:1, uv 및 KMnO4)는 출발 물질이 소모되고 하나의 새로운 주요 반점이 아래에 형성되었음을 나타냈다. 포화 NH4Cl (15 mL)을 상기 반응 혼합물에 첨가하고 H2O (70 mL)로 희석하고, 그 다음 에틸 아세테이트 (3×60 mL)로 추출하였다. 유기층을 황산나트륨 상에서 건조시키고 감압하에 농축시켜 밝은 황색 잔류물을 수득하였다. 상기 잔류물을 플래시 실리카겔 크로마토그래피 (ISCO®; 12 g SepaFlash® 실리카 플래시 칼럼, 30 mL/min에서 0~10% 에틸 아세테이트/석유 에테르 구배의 용리액)로 정제하여, 원하는 생성물을 황백색 고체 (1.5 g, 5.45 mmol, 32.20% 수율)로 수득하였다. 1H NMR (400 MHz, 클로로포름-d) δ ppm 1.01 - 1.08 (m, 2 H) 1.21 - 1.28 (m, 2 H) 5.43 - 5.74 (m, 1 H) 7.83 (dt, J=11.30, 1.63 Hz, 2 H) 7.94 - 7.98 (m, 1 H) 9.96 (s, 1 H).
실시예 20
3-(3- 시아노 -5-(1-( 디플루오로메틸 ) 사이클로프로필 )페닐)-4-(1- 메틸 -5-(2-(5,6,7,8-테트라하이드로-1,8-나프티리딘-2-일)에톡시)-1H-피라졸-3-일)부탄산의 제조
반응식 9
Figure pct00109
25 mL 마이크로파 바이알에서 DMF (6 mL) 중의 3-[3-브로모-5-[1-(디플루오로메틸)사이클로프로필]페닐]-4-[1-메틸-5-[2-(5,6,7,8-테트라하이드로-1,8-나프티리딘-2-일)에톡시]피라졸-3-일]부탄산 (100 mg, 155.11 μmol, 1 eq, FA) 및 디시아노아연 (54.6 mg, 465.3 μmol, 29.5 μL, 3 eq)의 혼합물을 배출시키고, N2 (3×)로 역-충전시켰다. 팔라듐 트리페닐포스판 (17.9 mg, 15.5 μmol, 0.1 eq)을 첨가하였다. 반응 바이알을 밀봉하고, 상기 반응 혼합물을 다시 탈기하고 N2 (3×)로 역-충전시킨 다음, 마이크로파 조사 하에 120℃에서 90분 동안 교반시켰다. LCMS는 출발 브로마이드가 소모되고, 원하는 생성물이 주요 피크였음을 나타냈다. HPLC는 66%의 원하는 생성물이 형성되었음을 나타냈다. 여액을 Pre-HPLC (칼럼: Boston Green ODS 150*30 5μ; 이동상: [물 (0.1% TFA)-ACN]; B%: 20%-50%, 7분)로 정제하였다. 동결건조한 후, 85 mg의 원하는 생성물이 백색 고체 (85 mg, 129.28 μmol, 83% 수율, 98.8% 순도, TFA)로 수득되었다. 상기 고체의 LC-MS 분석은 다음의 원하는 생성물 질량을 나타낸다: m/z 536 (M+H); C29H31F2N5O3에 대한 계산값: 535.24. 1H NMR (400 MHz, CD3OD) δ ppm 0.92 - 1.01 (m, 2 H) 1.13 - 1.20 (m, 2 H) 1.90 - 2.00 (m, 2 H) 2.62 - 2.94 (m, 6 H) 3.11 - 3.19 (m, 2 H) 3.42 - 3.53 (m, 6 H) 4.29 (td, J=6.06, 2.20 Hz, 2 H) 5.39 (s, 1 H) 5.45 - 5.78 (m, 1 H) 6.68 (d, J=7.50 Hz, 1 H) 7.48 - 7.53 (m, 2 H) 7.54 - 7.58 (m, 1 H) 7.60 (d, J=7.28 Hz, 1 H); 19F NMR (400 MHz, CD3OD) δ ppm -77.3 , -117.4.
실시예 21
3-(3-(1-( 디플루오로메틸 ) 사이클로프로필 )-5- 플루오로페닐 )-4-(1- 메틸 -5-(2-(5,6,7,8-테트라하이드로-1,8-나프티리딘-2-일)에톡시)-1H-피라졸-3-일)부탄산의 제조
Figure pct00110
실시예 21은 반응식 8에서 3,5-디브로모페닐)메탄올 대신에 (3-브로모-5-플루오로페닐)메탄올을 사용하여, 실시예 19와 유사한 방식으로 제조되었다. 조 생성물을 prep-HPLC (조건:칼럼: Boston pH-lex 150*25 10μm;이동상: [물(0.1% TFA)-ACN]; B%: 31%-61%, 8분)로 정제하여, 원하는 화합물 (118.6 mg, 수율 45%, 순도 97.2%)을 백색 고체로 수득하였다. 상기 고체의 LC-MS 분석은 다음의 원하는 생성물 질량을 나타냈다: m/z 529.1 (M+H); C28H31F3N4O3에 대한 계산값: 528.57. 1H NMR (400MHz, CD3OD) : δ ppm = 7.60 (d, J=7.5 Hz, 1H), 7.01 (s, 1H), 6.96 - 6.87 (m, 2H), 6.67 (d, J=7.3 Hz, 1H), 5.78 - 5.45 (m, 1H), 5.39 (s, 1H), 3.52 - 3.47 (m, 2H), 3.46 - 3.40 (m, 3H), 3.14 (t, J=5.8 Hz, 2H), 2.89 - 2.57 (m, 7H), 1.98 - 1.90 (m, 2H), 1.14 - 1.07 (m, 2H), 0.92 (br d, J=2.2 Hz, 2H). 19F NMR (376MHz, CD3OD) : δ ppm = -77.39 (br s, 1F), -115.84 (t, J=9.5 Hz, 1F), -117.83 - -117.96 (m, 1F), -117.97 - -118.09 (m, 1F).
실시예 22
3-(3- 클로로 -5-(1-( 디플루오로메틸 ) 사이클로프로필 )페닐)-4-(1- 메틸 -5-(2-(5,6,7,8-테트라하이드로-1,8-나프티리딘-2-일)에톡시)-1H-피라졸-3-일)부탄산의 제조
Figure pct00111
실시예 22는 반응식 8에서 3,5-디브로모페닐)메탄올 대신에 (3-브로모-5-클로로페닐)메탄올을 사용하여, 실시예 19와 유사한 방식으로 제조되었다. 조 생성물을 prep-HPLC 조건: 칼럼: Boston Green ODS 150*30 5μ;이동상: [물 (0.1% TFA)-ACN];B%: 25%-55%, 8분)로 정제하여, 표제 화합물 (88 mg, 133 μmol, 44% 수율, 100% 순도, TFA)을 백색 고체로 수득하였다. 상기 액체의 LC-MS 분석은 다음의 원하는 생성물 질량을 나타낸다: m/z 545 (M+H) 1H NMR (400MHz, CD3OD) : δ ppm = 7.57 (d, J = 7.3 Hz, 1H), 7.20 (t, J = 1.7 Hz, 1H), 7.16 (t, J = 1.7 Hz, 1H), 7.10 (s, 1H), 6.64 (d, J = 7.3 Hz, 1H), 5.74 - 5.55 (m, 1H), 5.43 (s, 1H), 4.35 - 4.23 (m, 2H), 3.51 - 3.46 (m, 2H), 3.42 - 3.33 (m, 1H), 3.29 (td, J = 1.6, 3.3 Hz, 3H), 3.17 - 3.08 (m, 2H), 2.91 - 2.60 (m, 6H), 1.93 (td, J = 6.1, 11.9 Hz, 2H), 1.14 - 1.06 (m, 2H), 0.95 - 0.85 (m, 2H).
실시예 23
3-(3-(1-( 디플루오로메틸 ) 사이클로프로필 )-5-( 트리플루오로메틸 )페닐)-4-(1-메틸-5-(2-(5,6,7,8-테트라하이드로-1,8-나프티리딘-2-일)에톡시)-1H-피라졸-3-일)부탄산의 제조
Figure pct00112
실시예 23은 반응식 8에서 3,5-디브로모페닐)메탄올 대신에 (3-브로모-5-(트리플루오로메틸)페닐)메탄올을 사용하여, 실시예 19와 유사한 방식으로 제조되었다. 조 생성물을 prep-HPLC (TFA 조건: 칼럼: Boston Green ODS 150*30 5μ; 이동상: [물 (0.1% TFA)-ACN]; B%: 20%-50%, 8분)로 정제하였다. 표제 화합물 (55 mg, 95 μmol, 60% 수율, 100% 순도)을 백색 고체로 수득하였다. 1H NMR, 19F NMR, LC-MS, 및 HMBC는 표제 화합물 구조와 일치하였다. 1H NMR (400MHz, CD3OD) δ ppm 7.60 (d, J = 7.5 Hz, 1H), 7.49 (s, 1H), 7.46 (s, 1H), 7.42 (s, 1H), 6.67 (d, J = 7.3 Hz, 1H), 5.80 - 5.45 (m, 1H), 5.42 (s, 1H), 4.34 - 4.24 (m, 2H), 3.53 - 3.47 (m, 3H), 3.45 (s, 3H), 3.14 (t, J = 6.1 Hz, 2H), 2.94 - 2.64 (m, 6H), 1.95 (quin, J = 6.0 Hz, 2H), 1.20 - 1.14 (m, 2H), 1.00 -0.93 (m, 2H); 19F NMR (376 MHz, CD3OD) -63.9, -77.4, -117.4, -117.6.
실시예 24
3-(3- 플루오로 -5-(1,1,1- 트리플루오로 -2- 메틸프로판 -2-일)페닐)-4-(1- 메틸 -5-(2-(5,6,7,8-테트라하이드로-1,8-나프티리딘-2-일)에톡시)-1H-피라졸-3-일)부탄산의 제조
Figure pct00113
실시예 24는 반응식 3에서 필요한 벤즈알데하이드로서 3-플루오로-5-(1,1,1-트리플루오로-2-메틸프로판-2-일)벤즈알데하이드 (반응식 10에 따라 합성됨)를 사용하여, 실시예 1과 유사한 방식으로 제조되었다. 조 생성물을 prep-HPLC (칼럼: Boston Green ODS 150*30 5μ; 이동상: [물(0.1% TFA)-ACN]; B%: 30%-56%,7분)로 정제하였다. HPLC 용출액을 동결건조시켜, 원하는 생성물을 백색 고체 (350 mg, 528 μmol, 65% 수율, 100% 순도, TFA)로 수득하였다. 상기 고체의 LC-MS 분석은 다음의 원하는 생성물 질량을 나타냈다: m/z 549 (M+H); C28H32F4N4O3에 대한 계산값: 548.24. 1H NMR (400 MHz, CD3OD) ppm 1.52 (s, 6 H) 1.95 (dd, J=6.50, 5.18 Hz, 2 H) 2.59 - 2.93 (m, 6 H) 3.15 (t, J=5.95 Hz, 2 H) 3.41 - 3.54 (m, 6 H) 4.30 (td, J=6.01, 1.87 Hz, 2 H) 5.45 (s, 1 H) 6.67 (d, J=7.50 Hz, 1 H) 6.98 (dt, J=9.48, 1.76 Hz, 1 H) 7.04 - 7.09 (m, 1 H) 7.04 - 7.13 (m, 1 H) 7.59 (d,J=7.28 Hz, 1 H); 19F NMR (400 MHz, CD3OD) ppm -77.3, -115.1.
반응식 10
Figure pct00114
단계 1. 1-(3- 브로모 -5- 플루오로페닐 ) 에타논의 제조
Figure pct00115
1,3-디브로모-5-플루오로-벤젠 (20 g, 78.77 mmol, 1 eq)을 질소 하에서 건조 플라스크 내 i-Pr2O (200 mL)에 용해시켰다. 상기 반응 혼합물을 -78℃로 냉각시키고 질소 분위기 하에서 교반시켰다. 상기 용액에 n-BuLi (2.5 M, 31.5 mL, 1 eq)을 적가하고, 상기 반응 혼합물을 -78℃에서 30분 동안 교반시켰다. n-BuLi의 첨가 완료 후, 상기 반응 혼합물에 N-메톡시-N-메틸-아세트아미드 (9.75 g, 94.5 mmol, 10.05 mL, 1.2 eq)를 적하하고, 이때 상기 반응 혼합물을 -78℃ 미만으로 유지시켰다. 첨가 후, 상기 반응 혼합물을 30분 동안 30℃로 서서히 가온시켰다. 상기 반응 혼합물을 물 (150 mL)에 붓고, 상기 반응 혼합물을 15분 동안 교반시켰다. 유기상을 분리하고, 수상을 에틸 아세테이트 (150 mL)로 추출하고, 유기상을 합하고, 무수 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고 진공에서 증발시켜, 잔류물 (16 g 조 물질)을 수득하였다. 상기 잔류물을 플래시 실리카겔 크로마토그래피 (ISCO®; 120 g CombiFlash® 실리카 플래시 칼럼, 85 mL/min에서 0~10% 에틸 아세테이트/석유 에테르 구배의 용리액)로 정제하였다. 화합물을　황백색 고체 (11.3 g, 수율 66%)로 수득하였다. 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ ppm 7.91 - 7.84 (m, 1H), 7.63 - 7.54 (m, 1H), 7.45 (td, J=2.0, 7.8 Hz, 1H), 2.63 - 2.55 (m, 3H).
단계 2. 2-(3- 브로모 -5- 플루오로페닐 )-1,1,1- 트리플루오로프로판 -2-올의 제조
Figure pct00116
DMF (100 mL) 중의 1-(3-브로모-5-플루오로-페닐)에타논 (11.2 g, 51.60 mmol, 1 eq) 및 TMSCF3 (14.68 g, 103.2 mmol, 2 eq)의 교반 용액에, Cs2CO3 (33.63 g, 103.2 mmol, 2 eq)을 0℃에서 분획으로 첨가하여, 갈색 현탁액을 수득하였다. 그 다음 상기 반응 혼합물을 30℃에서 4시간 동안 교반시켰다. 상기 반응 혼합물을 물 (100 mL)로 켄칭하여 분리하고, 에틸 아세테이트 (200 mL*2)로 추출하고, 유기층을 물 (200 mL*2) 및 염수 (200 mL)로 세정하였다. 상기 혼합물 반응물을 무수 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고 진공에서 증발시켜, 잔류물을 수득하였다. 상기 잔류물을 플래시 실리카겔 크로마토그래피 (ISCO®; 220 g CombiFlash® 실리카 플래시 칼럼, 100mL/min에서 0~30% 에틸 아세테이트/석유 에테르 구배의 용리액)로 정제하였다. 화합물을 흑갈색 액체 (18.4 g, 조 물질)로 수득하였다. 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ ppm 7.37 (s, 1H), 7.16 - 7.03 (m, 2H), 1.60 (s, 3H).
단계 3. 2-(3- 브로모 -5- 플루오로페닐 )-1,1,1- 트리플루오로프로판 -2-일 메탄설포네이트의 제조
Figure pct00117
2-(3-브로모-5-플루오로-페닐)-1,1,1-트리플루오로-프로판-2-올 (18 g, 62.71 mmol, 1 eq)과 TEA (19.04 g, 188.1 mmol, 26.2 mL, 3 eq)의 혼합물을, 질소 하에서 건조된 플라스크 내 DCM (180 mL)에 용해시켰다. 상기 반응 혼합물을 0℃로 냉각시키고, 질소 분위기 하에서 교반시켰다. 상기 용액에 MsCl (8.9 g, 77.7 mmol, 6 mL, 1.24 eq)을 적가하고, 상기 반응 혼합물을 30℃에서 3시간 동안 교반시켰다. 상기 반응 혼합물을 H2O (100 mL) 첨가로 켄칭시키고, 그 다음 분리하고 DCM (250 mL)으로 추출하였다. 유기층을 합하고 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고 감압하에 농축시켜, 잔류물 (15.6 g)을 수득하였다. 상기 잔류물을 플래시 실리카겔 크로마토그래피 (ISCO®; 120 g CombiFlash® 실리카 플래시 칼럼, 85 mL/min에서 0~10% 에틸 아세테이트/석유 에테르 구배의 용리액)로 정제하였다. 화합물을 황색 고체 (11.6 g, 수율 50.66%)로 수득하였다. 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ ppm 7.48 (s, 1H), 7.38 - 7.32 (m, 1H), 7.30 - 7.22 (m, 1H), 3.22 - 3.17 (m, 3H), 2.28 (d, J=1.1 Hz, 3H).
단계 4. 1- 브로모 -3- 플루오로 -5-(1,1,1- 트리플루오로 -2-메틸프로판 -2-일)벤젠의 제조
Figure pct00118
무수 DCM (10 mL) 중의 [1-(3-브로모-5-플루오로-페닐)-2,2,2-트리플루오로-1-메틸-에틸] 메탄설포네이트 (1000 mg, 2.74 mmol, 1 eq)의 교반 용액에, 트리메틸알루미늄 (1 M, 5.48 mL, 2 eq)을 N2 하에 -78℃에서 적가하였다. 상기 반응 혼합물을 1시간에 걸쳐 주위 온도 (26℃)로 서서히 가온시키고, 이 온도에서 1시간 동안 교반시켰다. TLC (석유 에테르)는 출발 물질이 소모되고 2개의 새로운 반점이 위에 형성되었음을 나타냈다. 상기 혼합물을 포화 NH4Cl (30 mL)에 서서히 붓고, 그 다음 15분 동안 교반시켰다. 용해되지 않은 침전물을 셀라이트 패드를 통해 여과했다. 여액 및 세정액을 염수 (15 mL)로 세정하고, 황산나트륨 상에서 건조시키고, 진공에서 농축시켜, 조 생성물을 수득하였다. 상기 잔류물을 플래시 실리카겔 크로마토그래피 (ISCO®; 12 g SepaFlash® 실리카 플래시 칼럼, 32 mL/min에서 100% 석유 에테르 구배의 용리액)로 정제하여, 원하는 생성물을 무색 오일 (649 mg, 2.28 mmol, 83% 수율)로 수득하였다. 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ ppm 1.56 (s, 6 H) 7.13 - 7.20 (m, 1 H) 7.23 (dt, J=7.83, 1.93 Hz, 1 H) 7.42 (s, 1 H); 19F NMR (400 MHz, 클로로포름-d)) ppm -76.1, -110.5.
단계 5. 3- 플루오로 -5-(1,1,1- 트리플루오로 -2- 메틸프로판 -2-일) 벤즈알데하이드의 제조
Figure pct00119
디이소프로필 에테르 (45 mL) 중의 1-브로모-3-플루오로-5-(2,2,2-트리플루오로-1,1-디메틸-에틸)벤젠 (3900 mg, 13.68 mmol, 1 eq)의 교반 용액에, n-BuLi (2.5 M, 10.94 mL, 2 eq)을 -78℃에서 적가하여, 황색 현탁액을 수득하였다. 생성된 혼합물을 -78℃에서 30분 동안 교반시키고, -78℃에서 DMF (2 g, 27.36 mmol, 2.11 mL, 2 eq)로 켄칭시켜 황색 맑은 용액을 수득하였고, 그 다음 30분 동안 실온 (26℃)으로 서서히 가온시켰다. TLC (석유 에테르, KMnO4로 염색됨)는 출발 물질이 소모되고 하나의 새로운 주요 반점이 아래에서 발견되었음을 나타냈다. 포화 NH4Cl (50 mL)을 상기 반응 혼합물에 첨가하고 H2O (15 mL)로 희석하고, 15분 동안 교반시키고, 그 다음 에틸 아세테이트 (3×40 mL)로 추출하였다. 유기층을 황산나트륨 상에서 건조시키고 감압하에 농축시켜, 밝은 황색 잔류물을 수득하였다. 상기 잔류물을 플래시 실리카겔 크로마토그래피 (ISCO®; 24 g SepaFlash® 실리카 플래시 칼럼, 30 mL/min에서 0~5% 에틸 아세테이트/석유 에테르 구배의 용리액)로 정제하여, 원하는 생성물을 밝은 황색 오일 (1.0 g, 4.27 mmol, 31% 수율)로 수득하였다. 1H NMR (400 MHz, CDCl3) ppm 1.63 (s, 7 H) 7.46 - 7.51 (m, 1 H) 7.51 - 7.57 (m, 1 H) 7.82 (s, 1 H) 10.01 (d, J=1.76 Hz, 1 H); 19F NMR (400 MHz, CDCl3) ppm -76.1, -110.8.
실시예 25
4-[1- 메틸 -5-[2-(5,6,7,8- 테트라하이드로 -1,8- 나프티리딘 -2-일) 에톡시 ] 피라졸 -3-일]-3-[3-(2,2,2-트리플루오로-1,1-디메틸에틸)-5-(트리플루오로메틸)페닐]부탄산의 제조
Figure pct00120
실시예 25는 반응식 10에서 1,3-디브로모-5-플루오로-벤젠 대신에 1,3-디브로모-5-(트리플루오로메틸)벤젠을 사용하여, 실시예 24와 유사한 방식으로 제조되었다. 조 생성물을 prep-HPLC (칼럼: Xbridge 150*30mm*10μm; 이동상: [물 (0.05% 수산화 암모니아 v/v)-ACN];B%: 11%-51%, 12분)로 정제하였다. 표제 화합물 (4.9 mg, 8.19 μmol, 3.42% 수율, 100% 순도)을 백색 고체로 수득하였다. 1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6 ) δ ppm 1.55 (d, J=2.5 Hz, 6 H), 1.70 - 1.78 (m, 2 H), 2.61 - 2.66 (m, 2 H), 2.69 - 2.79 (m, 2 H), 2.82 (t, J=6.5 Hz, 2 H), 3.24 (br s, 2 H), 3.35 (s, 3 H), 3.44 - 3.55 (m, 1 H), 4.19 (t, J=6.8 Hz, 2 H), 5.37 (s, 1 H), 6.25 - 6.36 (m, 2 H), 7.05 (d, J=7.3 Hz, 1 H), 7.59 (br d, J=5.0 Hz, 2 H), 7.66 (s, 1 H). 고체의 LC-MS 분석은 원하는 생성물의 질량: m/z 599 (M+H)을 나타내었다.
실시예 26
3-[3- 브로모 -5-(2,2,2- 트리플루오로 -1,1-디메틸-에틸)페닐]-4-[1- 메틸 -5-[2-(5,6,7,8-테트라하이드로-1,8-나프티리딘-2-일)에톡시]피라졸-3-일]부탄산의 제조
Figure pct00121
실시예 26은 반응식 10에서 1,3-디브로모-5-플루오로-벤젠 대신에 1,3,5-트리브로모벤젠을 사용하여, 실시예 24와 유사한 방식으로 제조되었다. 조 생성물을 prep-HPLC (칼럼: Boston Green ODS 150*30 5μ; 이동상: [물(0.1% TFA)-ACN]; B%: 25%-55%, 8분)로 정제하였다. 표제 화합물 (20 mg, 33 μmol, 52% 수율)을 백색 고체로 수득하였다. 상기 액체의 LC-MS 분석은 다음의 원하는 생성물 질량을 나타낸다: m/z 611(M+H). 1H NMR (400MHz, CD3OD) 7.59 (d, J=7.5 Hz, 1H), 7.46 (s, 1H), 7.37 - 7.36 (m, 1H), 7.25 (s, 1H), 6.67 (d, J=7.3 Hz, 1H), 5.41 (s, 1H), 4.32 - 4.26 (m, 2H), 3.51 - 3.48 (m, 2H), 3.44 (s, 3H), 3.42 - 3.37 (m, 1H), 3.14 (t, J=6.0 Hz, 2H), 2.86 - 2.62 (m, 6H), 1.98 - 1.92 (m, 2H), 1.50 (s, 6H); 19F NMR (376 MHz, CD3OD) -77.32, -77.36.
실시예 27
3-(3- 클로로 -5-(1,1,1- 트리플루오로 -2- 메틸프로판 -2-일)페닐)-4-(1- 메틸 -5-(2-(5,6,7,8-테트라하이드로-1,8-나프티리딘-2-일)에톡시)-1H-피라졸-3-일)부탄산의 제조
Figure pct00122
실시예 27은 반응식 10에서 1,3-디브로모-5-플루오로-벤젠 대신에 1,3-디브로모-5-클로로-벤젠을 사용하여, 실시예 24와 유사한 방식으로 제조되었다. 조 생성물을 prep-HPLC (TFA 조건: 칼럼: Boston Green ODS 150*30 5μ;이동상: [물 (0.1% TFA)-ACN];B%: 15%-45%, 8분)로 정제하였다. 표제 화합물 (128 mg, 226 μmol, 80% 수율, 100% 순도)을 백색 고체로 수득하였다. 1H NMR (400MHz, CD3OD) 7.60 (d, J=7.3 Hz, 1H), 7.33 (s, 1H), 7.26 - 7.19 (m, 2H), 6.68 (d, J=7.3 Hz, 1H), 5.44 (s, 1H), 4.34 - 4.26 (m, 2H), 3.52 - 3.48 (m, 2H), 3.46 (s, 3H), 3.45 - 3.38 (m, 1H), 3.15 (t, J=5.9 Hz, 2H), 2.92 - 2.85 (m, 1H), 2.83 (t, J=6.3 Hz, 2H), 2.78 - 2.70 (m, 2H), 2.69 - 2.60 (m, 1H), 1.99 - 1.91 (m, 2H), 1.52 (s, 6H); 19F NMR (376 MHz, CD3OD) -77.36. LCMS (질량: m/z 565.1 (M+H)).
실시예 28
3-[3- 시아노 -5-(2,2,2- 트리플루오로 -1,1-디메틸-에틸)페닐]-4-[1- 메틸 -5-[2-(5,6,7,8-테트라하이드로-1,8-나프티리딘-2-일)에톡시]피라졸-3-일]부탄산 트리플루오로아세테이트의 제조
반응식 11
Figure pct00123
단계 1. 에틸 3-[3-시아노-5-(2,2,2-트리플루오로-1,1-디메틸-에틸)페닐]-4-[1-메틸-5-[2-(5,6,7,8-테트라하이드로-1,8-나프티리딘-2-일)에톡시]피라졸-3-일]부타노에이트의 제조
Figure pct00124
25 mL 마이크로파 바이알에서 DMF (3 mL) 중의 에틸 3-[3-브로모-5-(2,2,2-트리플루오로-1,1-디메틸-에틸)페닐]-4-[1-메틸-5-[2-(5,6,7,8-테트라하이드로-1,8-나프티리딘-2-일)에톡시]피라졸-3-일]부타노에이트 (50 mg, 78 μmol, 1 eq) 및 Zn(CN)2 (27.6 mg, 235 umol, 14.93 μL, 3 eq)의 혼합물을 배출시키고, N2로 3회 역-충전시켰다. Pd(PPh3)4 (9.06 mg, 7.8 μmol, 0.1 eq)를 첨가하였다. 반응 바이알을 밀봉하고, 상기 반응 혼합물을 다시 탈기하고 N2 (3회)로 역-충전시킨 다음, 마이크로파 조사 하에 120℃에서 1.5시간 동안 교반시켰다. LC-MS는 에틸 3-[3-브로모-5-(2,2,2-트리플루오로-1,1-디메틸-에틸)페닐]-4-[1-메틸-5-[2-(5,6,7,8-테트라하이드로-1,8-나프티리딘-2-일)에톡시]피라졸-3-일]부타노에이트의 대부분이 소모되고, 원하는 질량 (m/z 584.2 (M+H))이 검출되었음을 나타냈다. 상기 반응 혼합물을 감압하에 농축시켜 잔류물을 수득하였다. 상기 잔류물을 prep-HPLC (칼럼: Phenomenex Gemini C18 250*50mm*10 μm; 이동상: [물 (0.05% HCl)-ACN]; B%: 30%-60%,10분)로 정제하였다. 표제 화합물 (40 mg, 69 μmol, 87% 수율)을 백색 고체로 수득하였다. 상기 액체의 LC-MS 분석은 다음의 원하는 생성물 질량을 나타낸다: m/z 584.2 (M+H).
단계 2. 3-[3-시아노-5-(2,2,2-트리플루오로-1,1-디메틸-에틸)페닐]-4-[1-메틸-5-[2-(5,6,7,8-테트라하이드로-1,8-나프티리딘-2-일)에톡시]피라졸-3-일]부탄산 트리플루오로아세테이트의 제조
Figure pct00125
THF (2 mL) 중의 에틸 3-[3-시아노-5-(2,2,2-트리플루오로-1,1-디메틸-에틸)페닐]-4-[1-메틸-5-[2-(5,6,7,8-테트라하이드로-1,8-나프티리딘-2-일)에톡시]피라졸-3-일]부타노에이트 (40 mg, 68.54 umol, 1 eq)의 용액에 LiOH·H2O (1 M, 2.06 mL, 30 eq)를 첨가하였다. 상기 혼합물을 60℃에서 16시간 동안 교반시켰다. LC-MS는 에틸 에틸 3-[3-시아노-5-(2,2,2-트리플루오로-1,1-디메틸-에틸)페닐]-4-[1-메틸-5-[2-(5,6,7,8-테트라하이드로-1,8-나프티리딘-2-일)에톡시]피라졸-3-일]부타노에이트가 완전히 소모되고, 원하는 질량 (m/z 556.1 (M+H))이 검출되었음을 나타냈다. 상기 반응 혼합물을 감압하에 농축시켜, THF를 제거하였다. 상기 잔류물을 AcOH로 pH (~5)로 희석하고, EtOAc 50 mL (25 mL * 2)로 추출하였다. 합한 유기층을 감압하에 농축시켜, 잔류물을 수득하였다. 상기 잔류물을 prep-HPLC (칼럼: Boston Green ODS 150*30 5μ; 이동상: [물(0.1% TFA)-ACN]; B%: 30%-56.25%,7분)로 정제하였다. 표제 화합물 (8.8 mg, 15.5 μmol, 23% 수율, 98% 순도)을 백색 고체로 수득하였다. 상기 액체의 LC-MS 분석은 다음의 원하는 생성물 질량을 나타낸다: m/z 556.1 (M+H). 1H NMR (400MHz, CD3OD) 7.71 (s, 1H), 7.64 - 7.60 (m, 3H), 6.71 (d, J = 7.5 Hz, 1H), 5.42 (s, 1H), 4.33 -4.26 (m, 2H), 3.54 (br s, 1H), 3.52 (br d, J = 6.0 Hz,2H), 3.45 (s, 3H), 3.16 (t, J = 5.9 Hz, 2H), 2.95 - 2.71 (m, 1H), 2.95 - 2.71 (m, 5H), 2.00 - 1.94 (m, 2H), 1.57 (s, 6H). 19F NMR (376MHz, CD3OD) -77.37 (s, 1F), -77.41 (s, 1F).
실시예 29
3-(3- 클로로 -5-(4-( 메톡시메틸 ) 테트라하이드로 -2H-피란-4-일)페닐)-4-(1-메틸-5-(2-(5,6,7,8-테트라하이드로-1,8-나프티리딘-2-일)에톡시)-1H-피라졸-3-일)부탄산의 제조
Figure pct00126
실시예 29는 반응식 3에서 필요한 벤즈알데하이드로서 3-클로로-5-(4-(메톡시메틸)테트라하이드로-2H-피란-4-일)벤즈알데하이드 (반응식 12에 따라 합성됨)를 사용하여, 실시예 1과 유사한 방식으로 제조되었다. 조 생성물을 prep-HPLC (칼럼: Boston Green ODS 150*30 5μ; 이동상: [물(0.1% TFA)-ACN]; B%: 15%-45%, 8분)로 정제하였다. 표제 화합물을 밝은 황색 고체 (112.5 mg, 수율 83%)로 수득하였다. 상기 화합물의 LC-MS 분석은 다음의 원하는 생성물 질량을 나타냈다: m/z 583 (M+1); 1H NMR (400 MHz, CD3OD) δ = 7.61 (d, J = 7.5 Hz, 1H), 7.18 (t, J = 1.8 Hz, 1H), 7.13 (s, 1H), 7.05 (s, 1H), 6.70 (d, J = 7.5 Hz, 1H), 5.43 (s, 1H), 4.30 (t, J = 6.1 Hz, 2H), 3.75 - 3.62 (m, 2H), 3.53 - 3.47 (m, 2H), 3.47 - 3.32 (m, 6H), 3.29 - 3.12 (m, 5H), 2.92 - 2.80 (m, 3H), 2.77 - 2.60 (m, 3H), 2.07 - 1.84 (m, 6H).
반응식 12
Figure pct00127
단계 1. 2-(3- 브로모 -5- 클로로페닐 )-1,3- 디옥솔란의 제조
Figure pct00128
3-브로모-5-클로로-벤즈알데하이드 (10 g, 45.57 mmol, 1 eq) 및 에틸렌 글리콜 (8.48 g, 136.70 mmol, 7.64 mL, 3 eq), PTSA (156.93 mg, 911.32 umol, 0.02 eq)의 혼합물을, 질소 하에서 건조된 플라스크 내 무수 톨루엔 (100 mL)에 용해시켰다. 상기 반응 혼합물을 140℃에서 2시간 동안 환류시켰다. 포화 NaHCO3 용액 (100 mL)을 첨가하였다. 톨루엔 층을 분리하고, NaCl 용액 (150 mL)으로 세정하고, 무수 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고 진공에서 증발시켰다. 표제 화합물을 밝은 황색 액체 (12.8 g, 조 물질)로 수득하였다. 1H NMR (400MHz, CD3OD) δ = 7.59 - 7.48 (m, 2H), 7.42 (d, J=1.3 Hz, 1H), 5.77 (s, 1H), 4.19 - 3.97 (m, 4H).
단계 2. 메틸 4-(3- 클로로 -5-(1,3- 디옥솔란 -2-일)페닐) 테트라하이드로 -2H-피란-4-카르복실레이트의 제조
Figure pct00129
톨루엔 (70 mL) 중의 N-사이클로헥실사이클로헥산아민 (6.26 g, 34.53 mmol, 6.88 mL, 1.3 eq)의 혼합물에 N2 하에 -20℃에서 n-BuLi (2.5 M, 13.8 mL, 1.3 eq)을 첨가하였다. 상기 혼합물을 0℃로 가온시키고, 20분 동안 교반시키고, 메틸 테트라하이드로피란-4-카르복실레이트 (3.83 g, 26.56 mmol, 3.55 mL, 1 eq)를 첨가하고 28℃에서 10분 동안 교반시켰다. 그 다음 2-(3-브로모-5-클로로-페닐)-1,3-디옥솔란 (7 g, 26.56 mmol, 1 eq), Pd(dba)2 (458 mg, 797 μmol, 0.03 eq) 및 t-Bu3P (1.61 g, 796.92 μmol, 1.87 mL, 10% 순도, 0.03 eq)를 첨가하였다. 상기 혼합물을 28℃에서 12시간 동안 교반시켰다. 상기 혼합물을 28℃에서 포화 NH4Cl (50 mL) 첨가로 켄칭시키고, 그 다음 EtOAc (50 mL)로 희석하고, EtOAc (1500 mL * 2)로 추출하였다. 합한 유기층을 염수 (150 mL)로 세정하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고 감압하에 농축시켜 잔류물을 수득하였다. 상기 잔류물을 플래시 실리카겔 크로마토그래피 (ISCO®;　80 g CombiFlash® 실리카 플래시 칼럼, 65 mL/min에서 0~50% 에틸아세테이트/석유 에테르 구배의 용리액)로 정제하였다. 화합물을 밝은 황색 액체 (3.7 g, 수율 43%)로 수득하였다. 1H NMR (400MHz, CD3OD) δ=7.41 - 7.39 (m, 1H), 7.35 (d, J=1.8 Hz, 2H), 5.77 (s, 1H), 4.15 - 4.09 (m, 2H), 4.08 - 4.01 (m, 2H), 3.94 (td, J=3.6, 12.0 Hz, 2H), 3.68 (s, 3H), 3.55 (dt, J=2.0, 11.7 Hz, 2H), 2.52 (dd, J=2.3, 13.6 Hz, 2H), 2.02 - 1.90 (m, 2H).
단계 3. (4-(3- 클로로 -5-(1,3- 디옥솔란 -2-일)페닐) 테트라하이드로 -2H-피란-4-일)메탄올의 제조
Figure pct00130
THF (20 mL) 중의 LAH (859.5 mg, 22.7 mmol, 2 eq)의 혼합물에. 메틸 4-[3-클로로-5-(1,3-디옥솔란-2-일)페닐]테트라하이드로피란-4-카르복실레이트 (3.7 g, 11.32 mmol, 1 eq)의 혼합물을 THF (40 mL)에서 용해시키고, N2 하에 25℃에서 첨가하였다. 상기 반응 혼합물을 25℃에서 8시간 동안 교반시켰다. 상기 반응 혼합물을 H2O (50 mL)로 켄칭시키고, 에틸 아세테이트 (2*100 mL)로 추출하였다. 합한 유기상을 염수 용액 (120 mL)으로 세정하고, 무수 Na2SO4로 건조시키고, 여과하고 진공에서 증발시켰다. 상기 잔류물을 플래시 실리카겔 크로마토그래피 (ISCO®;　40 g CombiFlash® 실리카 플래시 칼럼, 35mL/min에서 0~50% 에틸아세테이트/석유 에테르 구배의 용리액)로 정제하였다. 화합물을　백색 고체 (2.4 g, 수율 71%)로 수득하였다. 1H NMR (400MHz, CD3OD) δ=7.41 (t, J=1.5 Hz, 1H), 7.33 (d, J=1.5 Hz, 2H), 5.78 (s, 1H), 4.16 - 4.09 (m, 2H), 4.08 - 4.02 (m, 2H), 3.80 (ddd, J=3.9, 5.7, 11.8 Hz, 2H), 3.63 (s, 2H), 3.57 (ddd, J=3.0, 8.8, 11.8 Hz, 2H), 2.15 - 2.06 (m, 2H), 1.98 - 1.90 (m, 2H).
단계 4. 4-(3- 클로로 -5-(1,3- 디옥솔란 -2-일)페닐)-4-( 메톡시메틸 ) 테트라하이드로 -2H-피란의 제조
Figure pct00131
아르곤 분위기 하에서, NaH (803 mg, 20.1 mmol, 60% 순도, 2.5 eq)를 무수 THF (30 mL)에 용해된 [4-[3-클로로-5-(1,3- 디옥솔란-2-일)페닐]테트라하이드로피란-4-일]메탄올 (2.4 g, 8.03 mmol, 1 eq)의 용액에 첨가하고, 생성된 혼합물을 0℃에서 30분 동안 교반시켰다. 상기 반응 용액에 CH3I (6.9 g, 48.61 mmol, 3.03 mL, 6.05 eq)를 적가하고, 생성된 혼합물을 25℃에서 2시간 동안 교반시켰다. 상기 반응 혼합물을 염수 (20 mL)로 서서히 켄칭시킨 다음, 에틸 아세테이트 (50 mL*3)로 추출하였다. 합한 유기상을 염수 (100 mL)로 세정하고, 무수 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고 진공에서 농축시켰다. 상기 잔류물을 플래시 실리카겔 크로마토그래피 (ISCO®; 40 g CombiFlash® 실리카 플래시 칼럼, 35 mL/min에서 0~50% 에틸아세테이트/석유 에테르 구배의 용리액)로 정제하였다. 표제 화합물을 밝은 황색 액체 (2.3 g, 수율 92%)로 수득하였다. 1H NMR (400MHz, 클로로포름-d) δ = 7.37 (d, J=1.5 Hz, 1H), 7.31 (s, 2H), 5.79 (s, 1H), 4.16 - 4.10 (m, 2H), 4.09 - 4.02 (m, 2H), 3.82 - 3.74 (m, 2H), 3.55 (ddd, J=3.0, 8.7, 11.7 Hz, 2H), 3.36 (s, 2H), 3.21 (s, 3H), 2.07 - 2.03 (m, 2H), 2.03 - 1.95 (m, 2H).
단계 5. 3- 클로로 -5-(4-( 메톡시메틸 ) 테트라하이드로 -2H-피란-4-일) 벤즈알데하이드의 제조
Figure pct00132
4-[3-클로로-5-(1,3-디옥솔란-2-일)페닐]-4-(메톡시메틸)테트라하이드로피란 (2.3 g, 7.35 mmol, 1 eq) 및 PTSA (253 mg, 1.47 mmol, 0.2 eq)를, 질소 하에서 건조된 플라스크 내 아세톤 (30 mL)에 용해시키고, 25℃에서 12시간 동안 교반시켰다. 포화 NaHCO3 (30 mL*2)을 첨가하고, 상기 혼합물을 EtOAc (50 mL×2)로 추출하고, 무수 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고 진공에서 증발시켜 잔류물을 수득하였다. 표제 화합물을 밝은 황색 액체 (1.9 g, 수율 96%)로 수득하였다. 1H NMR (400MHz, CD3OD) δ=10.01 - 9.94 (m, 1H), 7.74 (td, J=1.5, 8.0 Hz, 2H), 7.58 (t, J=1.9 Hz, 1H), 3.80 (ddd, J=3.8, 6.3, 11.8 Hz, 2H), 3.62 - 3.53 (m, 2H), 3.42 (s, 2H), 3.26 - 3.19 (m, 3H), 2.14 - 2.07 (m, 2H), 2.04 - 1.97 (m, 2H).
실시예 30
3-(3- 플루오로 -5-(4-( 메톡시메틸 ) 테트라하이드로 -2H-피란-4-일)페닐)-4-(1-메틸-5-(2-(5,6,7,8-테트라하이드로-1,8-나프티리딘-2-일)에톡시)-1H-피라졸-3-일)부탄산의 제조
Figure pct00133
실시예 30은 반응식 12에서 3-브로모-5-클로로-벤즈알데하이드 대신에 3-브로모-5-플루오로벤즈알데하이드를 사용하여, 실시예 29와 유사한 방식으로 제조되었다. 조 생성물을 prep-HPLC (칼럼: Boston Green ODS 150*30 5μ; 이동상: [물 (0.1% TFA)-ACN]; B%: 15%-45%, 8분)로 정제하였다. 표제 화합물　(6.7 mg, 9.8 μmol, 37% 수율, 100% 순도, TFA)을　백색 고체로 수득하였다. 상기 고체의 LC-MS 분석은 다음의 원하는 생성물 질량을 나타냈다: m/z 567.1 (M+H); C31H39FN4O5에 대한 계산값: 566.66. 1H NMR (CD3OD, 400 MHz) 7.60 (d, J=7.2 Hz, 1H), 6.90-6.96 (m, 2H), 6.85-6.90 (m, 1H), 6.69 (d, J=7.2 Hz, 1H), 5.46 (s, 1H), 4.30 (t, J=6.0 Hz, 2H), 3.61-3.75 (m, 2H), 3.46-3.55 (m, 3H), 3.45 (s, 3H), 3.32-3.44 (m, 4H), 3.12-3.19 (m, 5H), 2.60-2.91 (m, 6H), 1.85-2.06 (m, 6H).
실시예 31
3-(3-(4-( 메톡시메틸 ) 테트라하이드로 -2H-피란-4-일)-5-( 트리플루오로메틸 )페닐)-4-(1-메틸-5-(2-(5,6,7,8-테트라하이드로-1,8-나프티리딘-2-일)에톡시)-1H-피라졸-3-일)부탄산의 제조
Figure pct00134
실시예 31은 반응식 12에서 3-브로모-5-클로로-벤즈알데하이드 대신에 3-브로모-5-(트리플루오로메틸)벤즈알데하이드를 사용하여, 실시예 29와 유사한 방식으로 제조되었다. 조 생성물을 prep-HPLC (칼럼: Boston Green ODS 150*30 5μ; 이동상: [물 (0.1% TFA)-ACN]; B%: 25%-51.25%)로 정제하였다. 표제 화합물　(19 mg, 26 μmol, 15% 수율, 100% 순도, TFA)을 황색 고체로 수득하였다. 1H NMR (400MHz, CD3OD): δ ppm = 7.58 (d, J=7.3 Hz, 1H), 7.43 (s, 1H), 7.37 (br d, J=4.2 Hz, 2H), 6.66 (d, J=7.5 Hz, 1H), 5.45 (s, 1H), 4.28 (t, J=6.0 Hz, 2H), 3.75 - 3.61 (m, 2H), 3.53 - 3.46 (m, 3H), 3.43 (s, 3H), 3.33 (s, 1H), 3.29 (d, J=1.3 Hz, 3H), 3.21 - 3.07 (m, 5H), 2.90 (dd, J=6.6, 14.3 Hz, 1H), 2.84 - 2.62 (m, 5H), 2.11 - 1.99 (m, 2H), 1.99 - 1.86 (m, 4H).
실시예 32
3-(5-( tert -부틸)-2- 메톡시페닐 )-4-(1- 메틸 -5-(2-(5,6,7,8- 테트라하이드로 -1,8-나프티리딘-2-일)에톡시)-1H-피라졸-3-일)부탄산의 제조
Figure pct00135
실시예 32는 반응식 3에서 필요한 벤즈알데하이드로서 5-(tert-부틸)-2-메톡시벤즈알데하이드 (반응식 13에 따라 합성됨)를 사용하여, 실시예 1과 유사한 방식으로 제조되었다. 조 생성물을 prep-HPLC (칼럼: Boston Green ODS 150*30 5μ; 이동상: [물(0.1% TFA)-ACN]; B%: 25%-55%, 8분)로 정제하였다. 표제 화합물 (93 mg, 149 μmol, 27% 수율, 100% 순도, TFA)을 백색 고체로 수득하였다. 상기 액체의 LC-MS 분석은 다음의 원하는 생성물 질량을 나타낸다: m/z 507 (M+H) 1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6 ) δ ppm 1.16 (s, 9 H), 1.74 - 1.83 (m, 2 H), 2.51 (br dd, J=7.5, 4.6 Hz, 2 H), 2.55 - 2.67 (m, 2 H), 2.69 - 2.74 (m, 2 H), 3.05 (t, J=6.1 Hz, 2 H), 3.34 (s, 3 H), 3.36 - 3.42 (m, 2 H), 3.52 - 3.63 (m, 2 H), 3.72 (s, 3 H), 4.19 (t, J=6.1 Hz, 2 H), 5.29 (s, 1 H), 6.65 (d, J=7.3 Hz, 1 H), 6.79 (d, J=9.3 Hz, 1 H), 7.05 - 7.11 (m, 2 H), 7.59 (d, J=7.3 Hz, 1 H), 8.43 (br s, 1 H).
반응식 13
Figure pct00136
5-( tert -부틸)-2- 메톡시벤즈알데하이드의 제조
TFA (30 mL) 중의 1-tert-부틸-4-메톡시-벤젠 (3 g, 18.27 mmol, 1 eq)의 용액에, 메텐아민 (5.12 g, 36.53 mmol, 6.83 mL, 2 eq)을 첨가하였다. 상기 혼합물을 80℃에서 16시간 동안 교반시켰다. LC-MS는 원하는 화합물이 검출되었음을 나타냈다. 상기 반응 혼합물을 감압하에 농축시켜 잔류물을 수득하였다. 상기 잔류물을 플래시 실리카겔 크로마토그래피 (ISCO®; 40 g SepaFlash® 실리카 플래시 칼럼, 30mL/min에서 0~3% 에틸 아세테이트/석유 에테르 구배의 용리액)로 정제하였다. 5-Tert-부틸-2-메톡시-벤즈알데하이드 (2.4 g, 12.5 mmol, 68% 수율)를 황색 액체로 수득하였다. 상기 액체의 LC-MS 분석은 다음의 원하는 생성물 질량을 나타낸다: m/z 193 (M+H) 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ ppm 1.26 (s, 9 H), 2.43 - 2.57 (m, 3 H), 3.89 (s, 3 H), 7.16 (d, J=8.8 Hz, 1 H), 7.63 - 7.73 (m, 2 H), 10.28 - 10.38 (m, 1 H).
실시예 33
3-(3-( tert -부틸)-2- 메톡시페닐 )-4-(1- 메틸 -5-(2-(5,6,7,8- 테트라하이드로 -1,8-나프티리딘-2-일)에톡시)-1H-피라졸-3-일)부탄산의 제조
Figure pct00137
실시예 33은 반응식 3에서 필요한 벤즈알데하이드로서 3-(tert-부틸)-2-메톡시벤즈알데하이드 (반응식 4에 따라 합성됨)를 사용하여, 실시예 1과 유사한 방식으로 제조되었다. 조 생성물을 prep-HPLC (칼럼: Boston Green ODS 150*30 5μ; 이동상: [물 (0.1% TFA)-ACN]; B%: 25%-55%, 8분)로 정제하였다. 표제 화합물 (136.3 mg, 219.25 μmol, 66% 수율, 99.8% 순도, TFA)을 백색 고체로 수득하였다. 오일의 LC-MS 분석은 다음의 원하는 생성물 질량을 나타냈다: m/z 507.1 (M+H); Calcd for C29H38N4O4: 506.64. 1H NMR (CD3OD, 400MHz) δ ppm 7.59 (d, J=7.2 Hz, 1H), 7.17 (d, J=7.6 Hz, 2H), 7.00-7.05 (m, 1H), 6.67 (d, J=7.2 Hz, 1H), 5.46 (s, 1H), 4.31 (t, J=6.0 Hz, 2H), 3.86-3.95 (m, 1H), 3.77 (s, 3H), 3.47-3.53 (m, 5H), 3.15 (t, J=6.0 Hz, 2H), 2.93 (dd, J=14.4, 6.4 Hz, 1H), 2.83 (t, J=6.4 Hz, 2H), 2.64-2.79 (m, 3H), 1.95 (quin, J=6.0 Hz, 2H), 1.30 (s, 9H).
반응식 14
Figure pct00138
3-( tert -부틸)-2- 메톡시벤즈알데하이드의 제조
무수 THF (75 mL) 중의 3-tert-부틸-2-하이드록시-벤즈알데하이드 (5 g, 28.05 mmol, 1 eq)를 아르곤 분위기 하에서 Cs2CO3 (18.28 g, 56.11 mmol, 2 eq)로 처리하고, 상기 혼합물을 20℃에서 30분 동안 교반시켰다. 그 후에, 상기 혼합물에 CH3I (17.9 g, 126.11 mmol, 7.85 mL, 4.50 eq)를 적가하고, 생성된 혼합물을 20℃에서 16시간 동안 교반시켰다. TLC (석유 에테르:에틸 아세테이트=15:1, Rf=0.45)는 3-tert-부틸-2-하이드록시-벤즈알데하이드가 완전히 소모되고, 하나의 새로운 반점이 형성되었음을 나타냈다. 상기 혼합물을 물 (100 mL)에 붓고, 에틸 아세테이트 (100 mL*3)로 추출하였다. 합한 유기상을 염수 (150 mL)로 세정하고, 무수 Na2SO4로 건조시키고, 여과하고 진공에서 농축시켰다. 상기 잔류물을 플래시 실리카겔 크로마토그래피 (ISCO®;　80 g SepaFlash® 실리카 플래시 칼럼, 60 mL/min에서 0~5% 에틸 아세테이트/석유 에테르 구배의 용리액)로 정제하였다. 표제 화합물　(4.2 g, 21.7 mmol, 77% 수율, 99% 순도)을　황색 오일로 수득하였다. 상기 오일의 LC-MS 분석은 다음의 원하는 생성물 질량을 나타냈다: m/z 193.0 (M+H); C12H16O2에 대한 계산값: 192.25. 1H NMR (CDCl3, 400MHz) δ ppm 10.35 (s, 1H), 7.71 (dd, J=7.6, 2.0 Hz, 1H), 7.58 (dd, J=8.0, 1.6 Hz, 1H), 7.15 (t, J=7.6 Hz, 1H), 3.95 (s, 3H), 1.42 (s, 9H).
실시예 34
3-(4-( tert -부틸)-2- 메톡시페닐 )-4-(1- 메틸 -5-(2-(5,6,7,8- 테트라하이드로 -1,8-나프티리딘-2-일)에톡시)-1H-피라졸-3-일)부탄산의 제조
Figure pct00139
실시예 34는 반응식 14에서 3-tert-부틸-2-하이드록시-벤즈알데하이드 대신에 4-tert-부틸-2-하이드록시-벤즈알데하이드를 사용하여, 실시예 33과 유사한 방식으로 제조되었다. 조 생성물을 prep-HPLC (TFA 조건: 칼럼: Boston Green ODS 150*30 5μ; 이동상: [물 (0.1% TFA)-ACN]; B%: 30%-60%, 8분)로 정제하였다. 표제 화합물 (88 mg, 138.6 μmol, 74% 수율, 98% 순도, TFA)을 백색 고체로 수득하였다. LCMS 분석은 다음의 원하는 생성물 질량을 나타냈다: m/z 507.1 (M+H). 1H NMR, 19F NMR 및 HMBC는 표제 화합물과 일치하였다. 1H NMR (400 MHz, CD3OD) δ ppm 7.60 (br d, J = 6.8 Hz, 1H), 7.04 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 6.97 - 6.85 (m, 2H), 6.67 (br d, J = 7.2 Hz, 1H), 5.49 (br s, 1H), 4.34 (br s, 2H), 3.84 (s, 3H), 3.71 (br t, J = 7.2 Hz, 1H), 3.55 - 3.44 (m, 5H), 3.15 (br t, J = 6.0 Hz, 2H), 2.83 (br t, J = 6.0 Hz, 4H), 2.74 - 2.57 (m, 2H), 2.02 - 1.89 (m, 2H), 1.29 (s, 9H); 19F NMR (376 MHz, CD3OD) -77.44 (s, 3F).
실시예 35
3-(5- tert -부틸-2- 이소프로폭시 -페닐)-4-[1- 메틸 -5-[2-(5,6,7,8- 테트라하이드로 -1,8-나프티리딘-2-일)에톡시]피라졸-3-일]부탄산 트리플루오로아세테이트의 제조
Figure pct00140
실시예 35는 반응식 14에서 3-tert-부틸-2-하이드록시-벤즈알데하이드 대신에 5-tert-부틸-2-하이드록시-벤즈알데하이드를 사용하고, CH3I 대신에 2-브로모프로판을 사용하여, 실시예 33과 유사한 방식으로 제조되었다. 조 생성물을 prep-HPLC (칼럼: Boston Green ODS 150*30 5μ; 이동상: [물(0.1% TFA)-ACN]; B%: 30%-60%, 8분)로 정제하였다. 표제 화합물 (78.5 mg, 119 μmol, 44% 수율, 98% 순도, TFA)을 백색 고체로 수득하였다. 상기 액체의 LC-MS 분석은 다음의 원하는 생성물 질량을 나타낸다: m/z 535.1 (M+H). 1H NMR (400MHz, CD3OD) 7.58 (d, J = 7.3 Hz, 1H), 7.13 (dd, J = 2.4, 8.6 Hz, 1H), 7.09 (d, J = 2.4 Hz, 1H), 6.81 (d, J = 8.6 Hz, 1H), 6.66 (d, J = 7.3 Hz, 1H), 5.40 (s, 1H), 4.63 - 4.54 (m, 1H), 4.29 (t, J = 6.0 Hz, 2H), 3.69 (quin, J = 7.4 Hz, 1H), 3.49 (d, J = 5.6 Hz, 1H), 3.52 - 3.48 (m, 1H), 3.47 (s, 3H), 3.13 (t, J=6.0 Hz, 2H), 2.89 - 2.61 (m, 6H), 1.93 (quin, J=6.0 Hz, 2H), 1.32 (dd, J = 6.0, 7.7 Hz, 6H), 1.22 (s, 9H). 19F NMR (376 MHz, CD3OD) -77.36 (s, 1F).
실시예 36
3-[3- tert -부틸-5-( 트리플루오로메톡시 )페닐]-4-[1- 메틸 -5-[2-(5,6,7,8- 테트라하이드로 -1,8-나프티리딘-2-일)에톡시]피라졸-3-일]부탄산의 제조
Figure pct00141
실시예 36은 반응식 3에서 필요한 벤즈알데하이드로서 3-tert-부틸-5-(트리플루오로메톡시)벤즈알데하이드 (반응식 15에 따라 합성됨)를 사용하여, 실시예 1과 유사한 방식으로 제조되었다. 조 생성물을 prep-HPLC (칼럼: Boston pH-lex 150*25 10μm; 이동상: [물 (0.1% TFA)-ACN]; B%: 35%-65%, 8분)로 정제하였다. 표제 화합물 (14 mg, 25 μmol, 37% 수율, 100% 순도)을 백색 고체로 수득하였다. 상기 액체의 LC-MS 분석은 다음의 원하는 생성물 질량을 나타낸다: m/z 561.3. 1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6 ) δ ppm 1.20 (s, 9 H), 1.72 - 1.84 (m, 2 H), 2.58 - 2.76 (m, 6 H), 3.06 (t, J=5.8 Hz, 2 H), 4.18 (t, J=6.1 Hz, 2 H), 5.36 (s, 1 H), 6.66 (d, J=7.3 Hz, 1 H), 6.96 - 7.01 (m, 1 H), 7.05 (s, 1 H), 7.20 (s, 1 H), 7.61 (d, J=7.1 Hz, 1 H).
반응식 15
Figure pct00142
단계 1. 2-[3- 브로모 -5-( 트리플루오로메톡시 )페닐]프로판-2-올의 제조
Figure pct00143
i-Pr2O (50 mL) 중의 1,3-디브로모-5-(트리플루오로메톡시)벤젠 (25 g, 78.15 mmol, 1 eq)의 용액에, n-BuLi (2.5 M, 32 mL, 1.02 eq)을 -78℃에서 0.5시간 동안 첨가한 다음, 아세톤 (7.9 g, 136 mmol, 10 mL, 1.74 eq)을 첨가하였다. 상기 혼합물을 20℃에서 2시간 동안 교반시켰다. 상기 반응 혼합물을 100 mL의 수성 NH4Cl에 붓고, 생성된 혼합물을 15분 동안 교반시켰다. 유기상을 분리하고, 무수 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고 진공에서 증발시켜 잔류물을 수득하였다. 상기 잔류물을 플래시 실리카겔 크로마토그래피 (ISCO®; 80 g SepaFlash® 실리카 플래시 칼럼, 50 mL/min에서 0~1% 에틸아세테이트/석유 에테르 구배의 용리액)로 정제하였다. 표제 화합물 (8 g, 26.75 mmol, 34% 수율)을 황색 액체로 수득하였다. 1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6 ) δ ppm 1.94 (s, 6 H), 5.90 (s, 1 H), 7.91 - 8.01 (m, 2 H), 8.19 - 8.25 (m, 1 H).
단계 2. 1- 브로모 -3-(1- 클로로 -1- 메틸 -에틸)-5-( 트리플루오로메톡시 )벤젠의 제조
Figure pct00144
2-[3-브로모-5-(트리플루오로메톡시)페닐]프로판-2-올 (8 g, 26.75 mmol, 1 eq)의 용액에, HCl (54.2 g, 535 mmol, 53.1 mL, 36% 순도, 20 eq)을 첨가하였다. 상기 혼합물을 20℃에서 2시간 동안 교반시켰다. TLC (석유 에테르 : 에틸 아세테이트=20:1, UV)는 2-[3-브로모-5-(트리플루오로메톡시)페닐]프로판-2-올이 완전히 소모되고, 하나의 반점이 검출되었음을 나타냈다. 상기 반응 혼합물을 0℃에서 100 mL의 H2O에 부었다. 그 다음 상기 혼합물을 DCM (50 mL * 3)으로 추출하였다. 합한 유기층을 감압하에 농축시켜, 추가 정제 없이 생성물을 수득하였다. 표제 화합물 (7 g, 22 mmol, 82% 수율)을 황색 액체로 수득하였다. 1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6 ) δ ppm 1.84 - 2.01 (m, 6 H), 7.59 (br d, J=12.8 Hz, 2 H), 7.81 (t, J=1.5 Hz, 1 H).
단계 3. 1- 브로모 -3- tert -부틸-5-( 트리플루오로메톡시 )벤젠의 제조
Figure pct00145
DCM (60 mL) 중의 1-브로모-3-(1-클로로-1-메틸-에틸)-5-(트리플루오로메톡시)벤젠 (6 g, 18.90 mmol, 1 eq)의 용액에, (헥산 중의) Al(CH3)3 (1 M, 37.79 mL, 2 eq)을 -78℃에서 첨가하였다. 상기 혼합물을 20℃에서 2시간 동안 교반시켰다. TLC (석유 에테르 : 에틸 아세테이트 = 1:0, UV)는 1-브로모-3-(1-클로로-1-메틸-에틸)-5-(트리플루오로메톡시)벤젠이 완전히 소모되고, 극성이 낮은 하나의 새로운 반점이 검출되었음을 나타냈다. 상기 반응 혼합물을 100 mL의 수성 NH4Cl에 붓고, 상기 반응 혼합물을 15분 동안 교반시켰다. 유기상을 분리하고, 무수 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고 진공에서 증발시켜 잔류물을 수득하였다. 상기 잔류물을 플래시 실리카겔 크로마토그래피 (ISCO®; 80 g SepaFlash® 실리카 플래시 칼럼, 100 mL/min에서 0-1% 에틸아세테이트/석유 에테르 구배의 용리액)로 정제하였다. 상기 잔류물을 플래시 실리카겔 크로마토그래피 (ISCO®; 80 g SepaFlash® 실리카 플래시 칼럼, 100 mL/min에서 0-1% 에틸아세테이트/석유 에테르 구배의 용리액)로 정제하였다. 표제 화합물 (4.6 g, 15.5 mmol, 82% 수율)을 황색 액체로 수득하였다 1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6 ) δ ppm 1.27 (s, 9 H), 7.36 (s, 1 H), 7.47 (s, 1 H), 7.61 (t, J=1.6 Hz, 1 H).
단계 4. 3- tert -부틸-5-( 트리플루오로메톡시 ) 벤즈알데하이드의 제조
Figure pct00146
i-Pr2O (50 mL) 중의 1-브로모-3-tert-부틸-5-(트리플루오로메톡시)벤젠 (5.7 g, 19.18 mmol, 1 eq)의 용액에 n-BuLi (2.5 M, 10 mL, 1.30 eq)을 첨가하고, -78℃에서 0.5시간 동안 교반시킨 다음, DMF (2.1 g, 28.8 mmol, 2.21 mL, 1.5 eq)를 첨가하였다. 상기 혼합물을 20℃에서 2시간 동안 교반시켰다. TLC (석유 에테르 : 에틸 아세테이트=20:1, UV)는 1-브로모-3-tert-부틸-5-(트리플루오로메톡시)벤젠이 완전히 소모되고, 하나의 반점이 검출되었음을 나타냈다. 상기 반응 혼합물을 0℃에서 50 mL의 H2O에 부었다. 그 다음 상기 혼합물을 DCM (50 mL * 3)으로 추출하였다. 합한 유기층을 감압하에 농축시켜, 생성물 잔류물을 수득하였다. 상기 잔류물을 플래시 실리카겔 크로마토그래피 (ISCO®; 40 g SepaFlash® 실리카 플래시 칼럼, 60 mL/min에서 0~1.5% 에틸아세테이트/석유 에테르 구배의 용리액)로 정제하였다. 표제 화합물 (1.95 g, 7.92 mmol, 41% 수율)을 황색 액체로 수득하였다. 1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6 ) δ ppm 1.29 (s, 9 H), 7.63 (br d, J=6.4 Hz, 2 H), 7.97 (t, J=1.4 Hz, 1 H), 9.90 - 10.06 (m, 1 H)
실시예 37
3-[3- tert -부틸-5-( 트리플루오로메틸 )페닐]-4-[1- 메틸 -5-[2-(5,6,7,8- 테트라하이드로 -1,8-나프티리딘-2-일)에톡시]피라졸-3-일]부탄산의 제조
Figure pct00147
실시예 37은 반응식 15에서 1,3-디브로모-5-(트리플루오로메톡시)벤젠 대신에 1,3-디브로모-5-(트리플루오로메틸)벤젠을 사용하여, 실시예 36과 유사한 방식으로 제조되었다. 조 생성물을 prep-HPLC (칼럼: Boston Green ODS 150*30 5μ; 이동상: [물 (0.1% TFA)-ACN]; B%: 35%-65%, 8분)로 정제하였다. 표제 화합물 (12.4 mg, 22.25 μmol, 51% 수율, 98% 순도)을 백색 고체로 수득하였다. 상기 액체의 LC-MS 분석은 다음의 원하는 생성물 질량을 나타낸다: m/z 545.3. 1H NMR (400 MHz, CD3OD) δ ppm 1.28 (s, 9 H), 1.87 - 1.97 (m, 2 H), 2.65 - 2.88 (m, 6 H), 3.13 (t, J=6.1 Hz, 2 H), 3.43 (s, 3 H), 3.44 - 3.55 (m, 4 H), 4.28 (t, J=5.7 Hz, 2 H), 5.42 (s, 1 H), 6.68 (d, J=7.5 Hz, 1 H), 7.27 (s, 1 H), 7.44 (s, 2 H), 7.59 (d, J=7.3 Hz, 1 H)
실시예 38
3-(3-( tert -부틸)-5- 플루오로페닐 )-4-(1- 메틸 -5-(2-(5,6,7,8- 테트라하이드로 -1,8-나프티리딘-2-일)에톡시)-1H-피라졸-3-일)부탄산의 제조
Figure pct00148
실시예 38은 반응식 3에서 필요한 벤즈알데하이드로서 3-tert-부틸-5-플루오로-벤즈알데하이드를 사용하여, 실시예 1과 유사한 방식으로 제조되었다. 조 생성물을 prep-HPLC (칼럼: Boston Green ODS 150*30 5μ; 이동상: [물(0.1% TFA)-ACN]; B%: 30%-56.25%, 7분)로 정제하였다. 표제 화합물을 백색 고체 (57 mg, 수율 41%)로 수득하였다. 상기 화합물의 LC-MS 분석은 다음의 원하는 생성물 질량을 나타냈다: m/z 495(M+H); 1H NMR (400MHz, CD3OD) δ = 7.59 (d, J=7.3 Hz, 1H), 7.00 (s, 1H), 6.92 (br d, J=11.0 Hz, 1H), 6.79 (br d, J=9.8 Hz, 1H), 6.68 (d, J=7.3 Hz, 1H), 5.56 (s, 1H), 4.35 (t, J=6.0 Hz, 2H), 3.52 - 3.37 (m, 5H), 3.17 (t, J=5.9 Hz, 2H), 2.94 - 2.57 (m, 6H), 1.95 (quin, J=5.9 Hz, 2H), 1.25 (s, 9H).
실시예 39
3-(5-이소프로필-2- 메톡시페닐 )-4-(1- 메틸 -5-(2-(5,6,7,8- 테트라하이드로 -1,8-나프티리딘-2-일)에톡시)-1H-피라졸-3-일)부탄산 트리플루오로아세테이트의 제조
Figure pct00149
실시예 39는 반응식 3에서 필요한 벤즈알데하이드로서 5-이소프로필-2-메톡시-벤즈알데하이드를 사용하여, 실시예 1과 유사한 방식으로 제조되었다. 조 생성물을 prep-HPLC (칼럼: Boston Green ODS 150*30 5μ; 이동상: [물 (0.1% TFA)-ACN]; B%: 25%-55%, 8분)로 정제하였다. 표제 화합물 (105 mg, 172 μmol, 55% 수율, 99.1% 순도, TFA)을 백색 고체로 수득하였고, 이를 LCMS (m/z 493.1 (M+H)), HPLC, 1H NMR 및 19F NMR로 확인하였다. 1H NMR (CD3OD, 400MHz) 7.59 (d, J = 7.2 Hz, 1H), 7.02 (dd, J = 8.4, 2.4 Hz, 1H), 6.96 (d, J = 2.0 Hz, 1H), 6.84 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 6.67 (d, J = 7.2 Hz, 1H), 5.50 (s, 1H), 4.34 (t, J = 6.0 Hz, 2H), 3.80 (s, 3H), 3.73 (quin, J = 7.6 Hz, 1H), 3.47-3.53 (m, 5H), 3.16 (t, J = 6.0 Hz, 2H), 2.85-2.96 (m, 2H), 2.74-2.85 (m, 3H), 2.61-2.74 (m, 2H), 1.95 (quin, J = 6.0 Hz, 2H), 1.16 (d, J = 7.2 Hz, 6H); 19F NMR (CD3OD, 376MHz) -77.31 (s, 1F).
실시예 40
3-(3- 브로모 -5-이소프로필-페닐)-4-[1- 메틸 -5-[2-(5,6,7,8- 테트라하이드로 -1,8-나프티리딘-2-일)에톡시]피라졸-3-일]부탄산 트리플루오로아세테이트의 제조
Figure pct00150
실시예 40은 반응식 3에서 필요한 벤즈알데하이드로서 3-브로모-5-이소프로필-벤즈알데하이드를 사용하여, 실시예 1과 유사한 방식으로 제조되었다. 조 생성물을 prep-HPLC (칼럼: Boston Green ODS 150*30 5μ; 이동상: [물 (0.1% TFA)-ACN]; B%: 35%-59.4%, 6.5분)로 정제하였다. 표제 화합물을 백색 고체로 수득하였고, 이를 LCMS (m/z 543.0 (M+H)), HPLC, 1H NMR 및 19F NMR로 확인하였다. 표제 화합물은 LCMS (m/z 543.0 (M+H)), HPLC, 1H NMR 및 19F NMR에 의해 확인되는 백색 고체로 수득되었다. 1H NMR (CD3OD, 400MHz) 7.60 (d, J=7.3 Hz, 1H), 7.19 (d, J=7.3 Hz, 2H), 7.04 (s, 1H), 6.68 (d, J=7.3 Hz, 1H), 5.57 - 5.42 (m, 1H), 4.45 -4.26 (m, 2H), 3.54 - 3.33 (m, 5H), 3.17 (t, J=6.0 Hz, 2H), 2.92 - 2.54 (m, 7H), 1.95 (quin, J=5.9 Hz, 2H), 1.19 (dd, J=1.4, 6.9 Hz, 6H). 19F NMR (CD3OD, 376MHz) -77.33 (s, 1F).
실시예 41
3-(3- 브로모 -5- tert -부틸-페닐)-4-[5-[2-(5,6,7,8- 테트라하이드로 -1,8- 나 프티리딘-2-일)에톡시]-1-(2,2,2- 트리플루오로에틸 ) 피라졸 -3-일]부탄산 트리플루오로아세테이트의 제조
Figure pct00151
실시예 41은 반응식 3에서 필요한 벤즈알데하이드로서 3-브로모-5-tert-부틸벤즈알데하이드를 사용하고, 메틸 하이드라진 대신에 (2,2,2-트리플루오로에틸)하이드라진을 사용하여, 실시예 1과 유사한 방식으로 제조되었다. 조 생성물을 prep-HPLC (TFA 조건: 칼럼: Boston Green ODS 150*30 5μ; 이동상: [물(0.1% TFA)-ACN]; B%: 38%-68%, 8분)로 정제하였다. 표제 화합물 (105 mg, 134 μmol, 51% 수율, 95% 순도, TFA)을 백색 고체로 수득하였다. 1H NMR (400 MHz, CD3OD) 7.60 (br d, J = 7.6 Hz, 1H), 7.31 (s, 1H), 7.16 (dd, J = 1.6, 4.0 Hz, 2H), 6.72 - 6.63 (m, 1H), 5.47 (s, 1H), 4.50 (q, J = 8.8 Hz, 2H), 4.32 (t, J = 6.0 Hz, 2H), 3.53 - 3.46 (m, 2H), 3.44 - 3.35 (m, 1H), 3.15 (t, J = 6.0 Hz, 2H), 2.89 - 2.79 (m, 3H), 2.79 - 2.66 (m, 2H), 2.65 - 2.56 (m, 1H), 1.94 (quin, J = 6.0 Hz, 2H), 1.24 (s, 9H). 19F NMR (376MHz, CD3OD) -72.69 (t, J = 8.8 Hz, 3F), -77.33 (br s, 3F). LC-MS 분석은 원하는 생성물의 질량을 나타내었다: m/z 625.1 (M+H); C29H34BrF3N4O3에 대한 계산값: 624.17.
실시예 42
3-(5- tert -부틸-2- 하이드록시 -페닐)-4-[1- 메틸 -5-[2-(5,6,7,8- 테트라하이 드로-1,8-나프티리딘-2-일)에톡시]피라졸-3-일]부탄산 나트륨 염의 제조
반응식 16
Figure pct00152
단계 1. 6- tert -부틸-4-[[1- 메틸 -5-[2-(5,6,7,8- 테트라하이드로 -1,8- 나프티리딘 -2-일)에톡시]피라졸-3-일]메틸]크로만-2-온의 제조
Figure pct00153
CH2Cl2 (10 mL) 중의 에틸 3-(5-tert-부틸-2-메톡시-페닐)-4-[1-메틸-5-[2-(5,6,7,8-테트라하이드로-1,8-나프티리딘-2-일)에톡시]피라졸-3-일]부타노에이트 (30 mg, 56 μmol, 1 eq)의 용액에, CH2Cl2 (5 mL) 중의 BBr3 (14.06 mg, 56 μmol, 5.4 μL, 1 eq)을 -78℃에서 첨가하였다. 상기 혼합물을 25℃로 가온시키고, 이 온도에서 2시간 동안 교반시켰다. LC-MS는 에틸 3-(5-tert-부틸-2-메톡시-페닐)-4-[1-메틸-5-[2-(5,6,7,8-테트라하이드로-1,8-나프티리딘-2-일)에톡시]피라졸-3-일]부타노에이트가 완전히 소모되고, 원하는 질량 (m/z 475.1 (M+H))이 검출되었음을 나타냈다. 상기 반응 혼합물을 물 (60 mL)에 붓고, 생성된 수성 층을 CH2Cl2 (20 mL*3)로 추출하였다. 유기 추출물을 무수 Na2SO4로 건조시키고, 용매를 진공 하에 증발시켜, 추가 정제 없이 잔류물을 수득하였다. 표제 화합물 (25 mg, 53 μmol, 94% 수율)을 황색 검으로 수득하였다. 상기 액체의 LC-MS 분석은 다음의 원하는 생성물 질량을 나타낸다: m/z 475.1 (M+H).
단계 2. 3-(5- tert -부틸-2- 하이드록시 -페닐)-4-[1- 메틸 -5-[2-(5,6,7,8- 테 트라하이드로-1,8-나프티리딘-2-일)에톡시]피라졸-3-일]부탄산 나트륨 염의 제조
Figure pct00154
THF (1 mL) 중의 6-tert-부틸-4-[[1-메틸-5-[2-(5,6,7,8-테트라하이드로-1,8-나프티리딘-2-일)에톡시]피라졸-3-일]메틸]크로만-2-온 (25 mg, 53 μmol, 1 eq)의 용액에, NaOH (1 M, 1.58 mL, 30 eq)를 첨가하였다. 상기 혼합물을 60℃에서 16시간 동안 교반시켰다. LC-MS는 6-tert-부틸-4-[[1-메틸-5-[2-(5,6,7,8-테트라하이드로-1,8-나프티리딘-2-일)에톡시]피라졸-3-일]메틸]크로만-2-온이 완전히 소모되며, 원하는 질량 (m/z 493.1 (M+H))이 검출되었음을 나타냈다. 상기 반응 혼합물을 감압하에 농축시켜 THF를 제거하고, 잔류물을 수득하였다. 상기 잔류물을 prep-HPLC (칼럼: Xbridge 150*30mm*10um; 이동상: [물 (0.05% 수산화 암모니아 v/v)-ACN]; B%: 20%-60%, 7분)로 정제하였다. 표제 화합물을 백색 고체로 수득하였다. 상기 액체의 LC-MS 분석은 다음의 원하는 생성물 질량을 나타낸다: m/z 493.1 (M+H). 1H NMR (400MHz, CD3OD) 7.24 (d, J = 7.3 Hz, 1H), 7.13 (d, J = 2.3 Hz, 1H), 7.03 (dd, J = 2.4, 8.4 Hz, 1H), 6.69 (d, J = 8.5 Hz, 1H), 6.45 (d, J = 7.3 Hz, 1H), 5.40 (s, 1H), 4.28 (t, J = 6.4 Hz, 2H), 3.75 (quin, J = 7.3 Hz, 1H), 3.42 (br s, 2H), 3.40 (s, 3H), 3.04 - 2.81 (m, 4H), 2.77 - 2.59 (m, 4H), 1.90 (quin, J = 5.9 Hz, 2H), 1.25 (s, 9H).
실시예 43
3-(5-( tert -부틸)-2- 클로로페닐 )-4-(1- 메틸 -5-(2-(5,6,7,8- 테트라하이드로 -1,8-나프티리딘-2-일)에톡시)-1H-피라졸-3-일)부탄산 트리플루오로아세테이트의 제조
Figure pct00155
실시예 43은 반응식 3에서 필요한 벤즈알데하이드로서 5-(tert-부틸)-2-클로로벤즈알데하이드 (반응식 17에 따라 합성됨)를 사용하여, 실시예 1과 유사한 방식으로 제조되었다. 조 생성물을 Prep-HPLC (칼럼: Boston Green ODS 150*30 5μ; 이동상: [물 (0.1% TFA)-ACN]; B%: 30%-60%, 8분)로 정제하였다. 표제 화합물 (50.5 mg, 97.95 μmol, 41% 수율, 99% 순도)를 백색 고체로 수득하였고, 이를 LCMS (m/z 511.1 (M+H)), HPLC, HMBC, 1H NMR 및 19F NMR로 확인하였다. 1H NMR (CD3OD, 400 MHz) δ 7.61 (d, J=7.5 Hz, 1H), 7.30 - 7.23 (m, 2H), 7.22 - 7.18 (m, 1H), 6.69 (d, J = 7.3 Hz, 1H), 5.40 (s, 1H), 4.31 (t, J = 6.0 Hz, 2H), 3.96 (quin, J = 7.4 Hz, 1H), 3.54 - 3.44 (m, 5H), 3.15 (t, J = 6.0 Hz, 2H), 2.92 - 2.64 (m, 6H), 1.96 (quin, J = 5.9 Hz, 2H), 1.27 (s, 9H). 19F NMR (CD3OD, 376 MHz) -77.37 (br s, 1F).
반응식 17
Figure pct00156
단계 1. 4-( tert -부틸)-2- 요오도아닐린의 제조
Figure pct00157
I2 (17.01 g, 67.01 mmol, 13.5 mL, 1 eq)를 MeOH (300 mL) 중의 4-tert-부틸아닐린 (10 g, 67.01 mmol, 10.6 mL, 1 eq), Ag2SO4 (20.89 g, 67.01 mmol, 11.4 mL, 1 eq)의 혼합물에 첨가하였다. 생성된 혼합물을 15℃에서 2시간 동안 교반시켰다. 상기 혼합물을 여과하고, 여액을 농축시켰다. 농축액을 포화 Na2SO3 (150 mL)와 Et2O (200 mL) 사이에 분배시켰다. 수성 층을 분리하고, Et2O (2*150 mL)로 추출하였다. 합한 유기 추출물을 염수 (200 mL)로 세정하고, Na2SO4 상에서 건조시키고 진공에서 농축시켜, 잔류물을 수득하였다. 상기 잔류물을 플래시 실리카겔 크로마토그래피 (ISCO®; 120 g CombiFlash® 실리카 플래시 칼럼, 80 mL/min에서 0~10% 에틸 아세테이트/석유 에테르 구배의 용리액)로 정제하였다. 표제 화합물 (14.6 g, 53.07 mmol, 79% 수율)을 흑갈색 액체로 수득하였고, 이를 1H NMR로 확인하였다. 1H NMR (CDCl3, 400 MHz) 7.63 (d, J=2.0 Hz, 1H), 7.17 (dd, J=2.1, 8.4 Hz, 1H), 6.70 (d, J=8.3 Hz, 1H), 4.06 - 3.85 (m, 2H), 1.26 (s, 9H).
단계 2. 4-( tert -부틸)-1- 클로로 -2- 요오도벤젠의 제조
Figure pct00158
tert-부틸 아질산염 (2.81 g, 27.26 mmol, 3.24 mL, 1.5 eq)을, N2 하에서 CH3CN (30 mL) 중의 CuCl2 (2.93 g, 21.81 mmol, 1.2 eq)의 혼합물에 첨가하였다. 생성된 혼합물을 CH3CN (30 mL) 중의 4-tert-부틸-2-요오도-아닐린 (5 g, 18.17 mmol, 1 eq)의 용액으로 처리한 다음, 상기 혼합물을 65℃에서 2시간 동안 가열하였다. 상기 혼합물을 EtOAC (50 mL)로 희석하고, 물 (50 mL)로 세정하였다. 수성 층을 EtOAC (100*2 mL)로 추출하였다. 합한 유기물을 Na2SO4 상에서 건조시키고, 진공에서 농축시켰다. 상기 잔류물을 플래시 실리카겔 크로마토그래피 (ISCO®; 80 g CombiFlash® 실리카 플래시 칼럼, 65 mL/min에서 0% 에틸 아세테이트/석유 에테르 구배의 용리액)로 정제하였다. 표제 화합물 (3.9 g, 13.24 mmol, 73% 수율)을 적색 액체로 수득하였고, 이를 1H NMR로 확인하였다. 1H NMR (CDCl3, 400 MHz) 7.91 - 7.81 (m, 1H), 7.39 - 7.33 (m, 1H), 7.33 - 7.28 (m, 1H), 1.32 - 1.27 (m, 9H).
단계 3. 5-( tert -부틸)-2- 클로로벤즈알데하이드의 제조
Figure pct00159
THF (20 mL) 및 EtOAc (20 mL) 중의 4-tert-부틸-1-클로로-2-요오도-벤젠 (3.9 g, 13.24 mmol, 1 eq)의 교반 용액에, i-PrMgCl (2.0 M, 6.62 mL, 1 eq)을 -78℃에서 적가하였다. 생성된 혼합물을 -78℃에서 2시간 동안 교반시킨 다음, -78℃에서 DMF (1.94 g, 26.48 mmol, 2.04 mL, 2 eq)로 적가 처리하였다. 첨가 완료 후, 상기 혼합물을 12시간에 걸쳐 15℃로 서서히 가온시켰다. 상기 반응 혼합물을 물 (20 mL)로 켄칭시키고, 유기층을 분리하고 수성 층을 EtOAc (30mL*3)로 추출하고, 합한 유기층을 염수 (100 mL)로 세정하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 증발시켰다. 상기 잔류물을 플래시 실리카겔 크로마토그래피 (ISCO®; 40g CombiFlash® 실리카 플래시 칼럼, 35 mL/min에서 0% 에틸 아세테이트/석유 에테르 구배의 용리액)로 정제하였다. 표제 화합물 (1.3 g, 6.61 mmol, 50% 수율)을 무색 액체로 수득하였고, 이를 1H NMR로 확인하였다. 1H NMR (CDCl3, 400MHz) 10.52 - 10.44 (m, 1H), 7.95 (d, J=2.5 Hz, 1H), 7.57 (dd, J=2.5, 8.5 Hz, 1H), 7.38 (d, J=8.5 Hz, 1H), 1.38 - 1.31(m, 9H).
실시예 44
3-(5- tert -부틸-2- 메틸 -페닐)-4-[1- 메틸 -5-[2-(5,6,7,8- 테트라하이드로 -1,8-나프티리딘-2-일)에톡시]피라졸-3-일]부탄산 트리플루오로아세테이트의 제조
Figure pct00160
실시예 44는 반응식 3에서 필요한 벤즈알데하이드로서 5-tert-부틸-2-메틸-벤즈알데하이드 (반응식 18에 따라 합성됨)를 사용하여, 실시예 1과 유사한 방식으로 제조되었다. 조 생성물을 Prep-HPLC (칼럼: Xbridge BEH C18, 250*50mm, 10μm; 이동상: [물 (0.1% TFA)-ACN]; B%: 25%-41%, 9분)로 정제하였다. 표제 화합물 52 mg, 87 μmol, 15.5% 수율, TFA)를 황색 고체로 수득하였다. 1H NMR (400MHz, CD3OD): δ ppm = 7.60 (d, J=7.3 Hz, 1H), 7.21 (d, J=2.0 Hz, 1H), 7.11 - 7.06 (m, 1H), 7.03 - 6.98 (m, 1H), 6.67 (d, J=7.3 Hz, 1H), 5.35 (s, 1H), 4.34 - 4.25 (m, 2H), 3.71 (quin, J=7.5 Hz, 1H), 3.57 - 3.45 (m, 5H), 3.14 (t, J=6.0 Hz, 2H), 2.83 (br t, J=6.1 Hz, 2H), 2.77 (dd, J=2.8, 7.5 Hz, 2H), 2.69 - 2.63 (m, 2H), 2.27 (s, 3H), 1.95 (td, J=6.0, 11.8 Hz, 2H), 1.31 - 1.23 (m, 9H). 19F NMR (376MHz, CD3OD) = -77.34 (s, 1F).
반응식 18
Figure pct00161
단계 1. 2- 브로모 -4- tert -부틸-1- 메틸 -벤젠의 제조
Figure pct00162
Br2 (12.94 g, 80.95 mmol, 4.17 mL, 1.2 eq)의 용액에, HOAc (30 mL) 중의 1-tert-부틸-4-메틸-벤젠 (10 g, 67.46 mmol, 11.66 mL, 1 eq)의 용액을, 20℃에서 적가하였다. 생성된 혼합물을 50℃에서 120시간 동안 가열하였다. 상기 혼합물을 실온으로 냉각시킨 다음, 물 (100 mL) 및 수성 아황산수소나트륨을 첨가하였다. 상기 혼합물을 에틸 아세테이트 (100 mL)로 추출하였다. 합한 추출물을 물로 세정하고, 황산나트륨 상에서 건조시키고, 여과하였다. 상기 여액을 회전 증발시켜 잔류물을 수득하였다. 상기 잔류물을 플래시 실리카겔 크로마토그래피 (ISCO®; 120 g SepaFlash® 실리카 플래시 칼럼, 40 mL/min에서 100% 석유 에테르 구배의 용리액)로 정제하였다. 표제 화합물 (12.5 g, 54.9 mmol, 81% 수율)을 무색 액체로 수득하였다.
단계 2. 5- tert -부틸-2- 메틸 - 벤즈알데하이드의 제조
Figure pct00163
THF (170 mL) 중의 2-브로모-4-tert-부틸-1-메틸-벤젠 (12.5 g, 54.9 mmol, 1 eq)의 교반 용액에, n-BuLi (2.5 M, 26.35 mL, 1.2 eq)을 -78℃에서 적가하였다. 생성된 혼합물을 -78℃에서 10분 동안 교반시키고, -78℃에서 DMF (6.02 g, 82.35 mmol, 6.34 mL, 1.5 eq)로 켄칭시키고, 1시간 동안 교반시켰다. 실온으로 가온시킨 후, 포화 NH4Cl (100mL)을 상기 혼합물에 첨가하였다. 생성된 수성 혼합물을 에틸 아세테이트 (3×100mL)로 추출하였다. 유기 추출물을 황산나트륨 상에서 건조시키고 감압하에 농축시켰다. 상기 잔류물을 플래시 실리카겔 크로마토그래피 (ISCO®; 40 g SepaFlash® 실리카 플래시 칼럼, 35 mL/min에서 100% 석유 에테르 구배의 용리액)로 정제하였다. 표제 화합물 (4.09 g, 23.2 mmol, 42% 수율)을 밝은 황색 액체로 수득하였다.
실시예 45
3-(3- 브로모 -5- tert -부틸-페닐)-4-[1- tert -부틸-5-[2-(5,6,7,8- 테트라하이드로 -1,8-나프티리딘-2-일)에톡시]피라졸-3-일]부탄산 트리플루오로아세테이트의 제조
Figure pct00164
실시예 45는 반응식 3에서 필요한 벤즈알데하이드로서 3-브로모-5-tert-부틸벤즈알데하이드를 사용하고, 메틸 하이드라진 대신에 tert-부틸하이드라진을 사용하여, 실시예 1과 유사한 방식으로 제조되었다. 조 생성물을 prep-HPLC (TFA 조건: 칼럼: X bridge BEH C18, 250*50mm, 10μm; 이동상: [물(0.1% TFA)-ACN]; B%: 25%-55%, 9분)으로 정제하였다. 표제 화합물 (0.016 g, 21.81 μmol, 44% 수율, 97% 순도, TFA)을 백색 고체로 수득하였다. LC-MS 분석은 다음의 원하는 생성물 질량을 나타낸다: m/z 599.1 (M+3H); C32H43BrN4O3에 대한 계산값: 596.24. LCMS 및 HPLC, 1H NMR 및 19F NMR, 2D NMR에 의해 그것이 표적 생성물이었음을 확인하였다. 1H NMR (400 MHz, CD3OD) δ 7.60 (d, J = 7.2 Hz, 1H), 7.34 - 7.30 (m, 1H), 7.16 (d, J = 12.0 Hz, 2H), 6.69 (d, J = 7.6 Hz, 1H), 5.50 (s, 1H), 4.31 (t, J = 6.0 Hz, 2H), 3.54 - 3.47 (m, 2H), 3.39 (quin, J = 7.6 Hz, 1H), 3.19 (t, J = 6.0 Hz, 2H), 2.89 - 2.56 (m, 6H), 1.94 (quin, J = 6.0 Hz, 2H), 1.40 (s, 9H), 1.26 (s, 9H). 19F NMR (376 MHz, CD3OD) -77.24 (br s, 3F).
실시예 46, 47, 및 48은 반응식 19에 따라 제조된다
반응식 19
Figure pct00165
단계 1. 에틸 3-(5- 시아노 -2- 메톡시페닐 )-4-(1- 메틸 -5-(2-(5,6,7,8- 테트라하이드로 -1,8-나프티리딘-2-일)에톡시)-1H-피라졸-3-일)부타노에이트의 제조
Figure pct00166
마이크로파 바이알에서 DMF (5 mL) 중의 실시예 14의 합성 중에 제조된 에틸 3-(5-브로모-2-메톡시-페닐)-4-[1-메틸-5-[2-(5,6,7,8-테트라하이드로-1,8-나프티리딘-2-일)에톡시]피라졸-3-일]부타노에이트 (380 mg, 666 μmol, 1 eq)와 Zn(CN)2 (234 mg, 2 mmol, 1267 μL, 3 eq)의 혼합물을 배출시키고, N2 (3×)로 역-충전시켰다. Pd(PPh3)4 (77 mg, 67 μmol, 0.1 eq)를 첨가하였다. 반응 바이알을 밀봉하고, 상기 반응 혼합물을 다시 탈기하고, N2 (3×)로 역-충전시킨 다음, 마이크로파 조사 하에 120℃에서 1.5시간 동안 교반시켰다. 그 다음 상기 혼합물을 물 (80 mL)에 붓고, EtOAc (3*50 mL)로 추출하였다. 합한 유기층을 염수 (50 mL)로 세정하고, 황산나트륨 상에서 건조시키고, 증발시켜 잔류물을 수득하였다. 상기 잔류물을 플래시 실리카겔 크로마토그래피 (ISCO®;　12 g SepaFlash® 실리카 플래시 칼럼, 30 mL/min에서 0~100% 에틸 아세테이트/석유 에테르 구배의 용리액)로 정제하였다. 표제 화합물 (135 mg, 245 μmol, 37% 수율, 91% 순도)을 무색 오일로 수득하였고, 이를 LCMS (m/z 526.1 (M+Na))로 확인하였다.
단계 2. 실시예 46, 47 및 48의 제조
THF (5 mL) 중의 상기 단계 1로부터의 에틸 3-(5-시아노-2-메톡시-페닐)-4-[1-메틸-5-[2-(5,6,7,8-테트라하이드로-1,8-나프티리딘-2-일)에톡시]피라졸-3-일]부타노에이트 (135 mg, 245 μmol, 1 eq)의 용액에, LiOH (1 M, 8 mL, 32.69 eq)를 첨가하였다. 상기 반응 혼합물을 60℃에서 16시간 동안 교반시켰다. LC-MS는 13.8%의 3-(5-시아노-2-메톡시-페닐)-4-[1-메틸-5-[2-(5,6,7,8-테트라하이드로-1,8-나프티리딘-2-일)에톡시]피라졸-3-일]부탄산 (실시예 46), 54.2%의 3-(5-카르바모일-2-메톡시-페닐)-4-[1-메틸-5-[2-(5,6,7,8-테트라하이드로-1,8-나프티리딘-2-일)에톡시]피라졸-3-일]부탄산 (실시예 47), 22.8%의 3-[1-(카르복시메틸)-2-[1-메틸-5-[2-(5,6,7,8-테트라하이드로-1,8-나프티리딘-2-일)에톡시]피라졸-3-일]에틸]-4-메톡시-벤조산 (실시예 48)을 나타냈다. 상기 혼합물을 감압하에 농축시켜 잔류물을 수득하고, 상기 잔류물을 AcOH로 pH=5로 조정하고 에틸 아세테이트 (10 mL * 2)로 추출하였다. 합한 유기상을 진공에서 농축시켰다. 잔류물을 prep-HPLC (칼럼: Xbridge BEH C18, 250*50mm, 10μm; 이동상: [물 (0.1% TFA)-ACN]; B%: 15%-45%, 9분)로 정제하였다. 실시예 46의 화합물 (16.2 mg, 27 μmol, 11% 수율, 98% 순도, TFA)을 백색 고체로 수득하였고; 실시예 47의 화합물 (53 mg, 86 μmol, 35% 수율, 99% 순도, TFA)을 백색 고체로 수득하였고; 실시예 48의 화합물 (20 mg, 30 μmol, 12% 수율, 91% 순도, TFA)을 백색 고체로 수득하였다.
실시예 46
3-(5- 시아노 -2- 메톡시페닐 )-4-(1- 메틸 -5-(2-(5,6,7,8- 테트라하이드로 -1,8-나프티리딘-2-일)에톡시)-1H-피라졸-3-일)부탄산 트리플루오로아세테이트의 제조
Figure pct00167
실시예 46은 반응식 19에 도시된 바와 같이, 실시예 14의 합성 중에 제조된 에틸 3-(5-브로모-2-메톡시-페닐)-4-[1-메틸-5-[2-(5,6,7,8-테트라하이드로-1,8-나프티리딘-2-일)에톡시]피라졸-3-일]부타노에이트를 사용하여 제조되었고, (16.2 mg, 27 μmol, 11% 수율, 98% 순도, TFA) 백색 고체로 수득되었다.
1H NMR (CD3OD, 400MHz) δ 7.55-7.62 (m, 2H), 7.46 (d, J=2.0 Hz, 1H), 7.09 (d, J=8.4 Hz, 1H), 6.67 (d, J=7.6 Hz, 1H), 5.56 (s, 1H), 4.33-4.39 (m, 2H), 3.92 (s, 3H), 3.73-3.84 (m, 1H), 3.47-3.53 (m, 5H), 3.17 (t, J=6.0 Hz, 2H), 2.78-2.96 (m, 4H), 2.63-2.77 (m, 2H), 1.91-1.99 (m, 2H). (m/z 476.1 (M+H)).
실시예 47
3-(5- 카르바모일 -2- 메톡시페닐 )-4-(1- 메틸 -5-(2-(5,6,7,8- 테트라하이드로 -1,8-나프티리딘-2-일)에톡시)-1H-피라졸-3-일)부탄산 트리플루오로아세테이트의 제조
Figure pct00168
실시예 47은 반응식 19에 도시된 바와 같이, 실시예 14의 합성 중에 제조된 에틸 3-(5-브로모-2-메톡시-페닐)-4-[1-메틸-5-[2-(5,6,7,8-테트라하이드로-1,8-나프티리딘-2-일)에톡시]피라졸-3-일]부타노에이트를 사용하여 제조되었고, (53 mg, 86 μmol, 35% 수율, 99% 순도, TFA)을 백색 고체로 수득되었다.
1H NMR (DMSO-d6, 400MHz) 13.88 (br s, 1H), 8.40 (br s, 1H), 7.83 (br s, 1H), 7.70-7.77 (m, 2H), 7.62 (d, J=7.6 Hz, 1H), 7.16 (br s, 1H), 6.94-7.01 (m, 1H), 6.67 (d, J=7.2 Hz, 1H), 5.36 (s, 1H), 4.24 (br t, J=6.0 Hz, 2H), 3.82 (s, 3H), 3.68 (quin, J=7.6 Hz, 1H), 3.34-3.44 (m, 5H), 3.08 (br t, J=6.0 Hz, 2H), 2.52-2.78 (m, 6H), 1.77-1.86 (m, 2H) 19F NMR (DMSO-d6, 376MHz) -74.61 (s, 1F). LCMS (m/z 494.1 (M+H)).
실시예 48
3-(1- 카르복시 -3-(1- 메틸 -5-(2-(5,6,7,8- 테트라하이드로 -1,8- 나프티리딘 -2-일)에톡시)-1H-피라졸-3-일)프로판-2-일)-4-메톡시벤조산 트리플루오로아세테이트의 제조
Figure pct00169
실시예 48은 반응식 19에 도시된 바와 같이, 실시예 14의 합성 중에 제조된 에틸 3-(5-브로모-2-메톡시-페닐)-4-[1-메틸-5-[2-(5,6,7,8-테트라하이드로-1,8-나프티리딘-2-일)에톡시]피라졸-3-일]부타노에이트를 사용하여 제조되었고, (20 mg, 30 μmol, 12% 수율, 91% 순도, TFA)을 백색 고체로 수득되었다.
1H NMR (DMSO-d6, 400MHz) δ 13.88 (br s, 1H), 8.38 (br s, 1H), 7.79 (dd, J=8.4, 2.0 Hz, 1H), 7.72 (d, J=2.0 Hz, 1H), 7.62 (d, J=7.2 Hz, 1H), 7.04 (d, J=8.4 Hz, 1H), 6.67 (d, J=7.6 Hz, 1H), 5.38 (s, 1H), 4.25 (t, J=6.0 Hz, 2H), 3.86 (s, 3H), 3.66 (quin, J=7.6 Hz, 1H), 3.36-3.44 (m, 5H), 3.08 (t, J=6.0 Hz, 2H), 2.54-2.77 (m, 6H), 1.77-1.86 (m, 2H) 19F NMR (DMSO-d6, 376MHz) -74.74 (s, 1F). LCMS (m/z 495.1 (M+H)).
실시예 49
3-(3- tert - 부틸페닐 )-4-[1- 메틸 -5-[2-(5,6,7,8- 테트라하이드로 -1,8- 나프티리딘 -2-일)에톡시]피라졸-3-일]부탄산 트리플루오로아세테이트의 제조
Figure pct00170
실시예 49는 반응식 3에서 필요한 벤즈알데하이드로서 3-tert-부틸벤즈알데하이드를 사용하여, 실시예 1과 유사한 방식으로 제조되었다. 조 생성물을 Prep-HPLC (칼럼: Boston Green ODS 150*30 5μ; 이동상: [물 (0.1% TFA)-ACN]; B%: 25%-50%, 8분)로 정제하였다. 표제 화합물 (21.7 mg, 45 μmol, 99.7% 순도, TFA 염)을 백색 고체로 수득하였다. 1H NMR (400 MHz, CD3OD): δ 7.59 (br d, J=7.6 Hz, 1H), 7.24 - 7.13 (m, 3H), 7.04 (br d, J=6.4 Hz, 1H), 6.67 (d, J=7.2 Hz, 1H), 5.62 - 5.43 (m, 1H), 4.34 (br d, J=3.2 Hz, 2H), 3.54 - 3.45 (m, 5H), 3.44 - 3.34 (m, 1H), 3.16 (t, J=6.0 Hz, 2H), 2.96 - 2.75 (m, 4H), 2.75 - 2.56 (m, 2H), 2.02 - 1.88 (m, 2H), 1.31 - 1.19 (m, 9H). 19F NMR (376MHz, CD3OD) -77.33 (br d, J=5.6 Hz, 3F) LCMS (m/z 477.1 (M+H)).
실시예 50
3-[2- 메톡시 -5-(4- 메톡시테트라하이드로피란 -4-일)페닐]-4-[1- 메틸 -5-[2-(5,6,7,8-테트라하이드로-1,8-나프티리딘-2-일)에톡시]피라졸-3-일]부탄산의 제조
Figure pct00171
실시예 50은 반응식 3에서 필요한 벤즈알데하이드로서 2-메톡시-5-(4-메톡시테트라하이드로-2H-피란-4-일)벤즈알데하이드를 사용하여, 실시예 1과 유사한 방식으로 제조되었다. 조 생성물을 prep-HPLC (TFA 조건: 칼럼: Boston Prime C18 150*30mm 5μm; 이동상: [물 (0.05% 수산화 암모니아 v/v)-ACN]; B%: 20%-50%,7분으로 정제하였다. 표제 화합물 (55.5 mg, 94.6 μmol, 97% 순도, 나트륨 염)을 백색 고체로 수득하였다. 1H NMR (400MHz, CD3OD) δ 7.19 (d, J=7.3 Hz, 1H), 7.15 (dd, J=2.0, 8.5 Hz, 1H), 7.11 (d, J=2.0 Hz, 1H), 6.89 (d, J=8.5 Hz, 1H), 6.41 (d, J=7.3 Hz, 1H), 5.32 (s, 1H), 4.21 (t, J=6.5 Hz, 2H), 3.82 (s, 3H), 3.80 - 3.78 (m, 1H), 3.77 - 3.64 (m, 4H), 3.38 - 3.34 (m, 2H), 3.33 (s, 3H), 2.99 - 2.80 (m, 4H), 2.79 (s, 3H), 2.70 (br t, J=6.1 Hz, 2H), 2.63 (d, J=7.3 Hz, 2H), 1.94 - 1.88 (m, 4H), 1.88 - 1.82 (m, 2H).
2-메톡시-5-(4-메톡시테트라하이드로-2H-피란-4-일)벤즈알데하이드는, 3-브로모-5-클로로-벤즈알데하이드를 5-브로모-2-메톡시벤즈알데하이드로 대체하고, 메틸 테트라하이드로피란-4-카르복실레이트를 테트라하이드로-4H-피란-4-온으로 대체하여, 반응식 12에서 벤즈알데하이드와 유사한 방식으로 합성되었다.
IX. 생물학적 검정 결과
본 개시내용의 화합물의 인테그린 억제 활성을 표 3에 나타낸 비교 화합물 1 및 2 (CC1 및 CC2)의 데이터와 함께 표 5에 나타내었다.
각각의 검정을 수행하는 방법은 하기 기재되어 있다.
[표 5] 인테그린 저해 검정 데이터
Figure pct00172
Figure pct00173
A. α 5 β 1 기능에 대한 고체상 수용체 검정 ( SPRA )
TBS+ 완충액 (25 mM Tris pH 7.4, 137 mM NaCl, 2.7 mM KCl, 1mM CaCl2, 1 mM MgCl2, 1 mM MnCl2)에서 2 μg/mL로 희석된 정제된 인간 피브로넥틴 (R&D Systems, 1918-FN)을 96웰 절반-웰 투명한 마이크로타이터 플레이트 (Costar 3690)의 웰들 (50 μL/웰)에 첨가하고 4℃에서 밤새 인큐베이션하였다. 웰들을 150 μL TBS+로 3회 세정하고 그 다음 150 μL의 차단 완충액 (1% 소 혈청 알부민을 포함한 TBS+, Sigma A7906)을 첨가하였다. 상기 플레이트를 37℃에서 1시간 동안 인큐베이션한 다음 TBS+ 완충액으로 3× 세정하였다. 재조합 인간 인테그린 α5β1 (R&D Systems, 3230-A5)을 TBS+/0.1% 소 혈청 알부민에서 0.1 μg/mL로 희석하고, 49 μL를 각 웰에 첨가하였다. 화합물을 20 μM로 희석하고 그 다음 표준 템플릿에 따라 상기 플레이트의 각 웰에 1 μL를 첨가하였고, 각 샘플은 3회 반복되었다. 실온에서 2시간 동안 인큐베이션 후, 상기 플레이트를 150 μL의 TBS+ 완충액으로 3× 세정하였다. 각 웰에 TBS+/0.1% BSA 중에서 0.5 μg/mL의 비오티닐화된 항-α5 항체 (R&D Systems, BAF1864) 50 μL를 첨가하고 상기 플레이트를 덮고 실온에서 1시간 동안 인큐베이션하였다. 상기 플레이트를 150 μL의 TBS+ 완충액으로 3× 세정한 후, TBS+ 차단 완충액으로 희석된 스트렙타비딘-접합된 호스래디시 페록시다아제 (R&D Systems, DY998) 50 μL를 웰에 첨가하고 상기 플레이트를 실온에서 20분 동안 인큐베이션하였다. 상기 플레이트를 TBS+ 완충액으로 3× 세정하고 이어서 암실에서 각 웰에 실온 TMB 기질 (Sigma, T4444) 50 μL를 첨가하고 상기 플레이트를 실온에서 25분 동안 인큐베이션하였다. 1.0 M 인산 25 μL를 정지 용액으로 첨가하고 상기 플레이트를 Spectramax 플레이트 판독기를 사용하여 450 nm에서 판독하였다. 비-선형 회귀 (최적(best fit)) 분석으로 농도-반응 곡선을 제작하고, 각 화합물의 IC50 값을 계산하였다.
B. αvβ 1 기능에 대한 고체상 수용체 검정 ( SPRA )
TBS+ 완충액 (25 mM Tris pH 7.4, 137 mM NaCl, 2.7 mM KCl, 1mM CaCl2, 1 mM MgCl2, 1 mM MnCl2)에서 5 μg/mL로 희석된 정제된 인간 피브로넥틴 (R&D Systems, 1918-FN)을 96웰 절반-웰 투명한 마이크로타이터 플레이트 (Costar 3690)의 웰들 (50 μL/웰)에 첨가하고 4℃에서 밤새 인큐베이션하였다. 웰들을 150 μL TBS+로 3회 세정하고 그 다음 150 μL의 차단 완충액 (1% 소 혈청 알부민을 포함한 TBS+, Sigma A7906)을 첨가하였다. 상기 플레이트를 37℃에서 1시간 동안 인큐베이션한 다음 TBS+ 완충액으로 3× 세정하였다. 재조합 인간 인테그린 αvβ1 (R&D Systems. 6579-AV)을 TBS+/0.1% 소 혈청 알부민에서 2.0 μg/mL로 희석하고, 49 μL를 각 웰에 첨가하였다. 화합물을 20 μM로 희석하고 표준 템플릿에 따라 상기 플레이트의 각 웰에 1 μL를 첨가하였고, 각 샘플은 3회 반복되었다. 실온에서 2시간 동안 인큐베이션 후, 상기 플레이트를 150 μL의 TBS+ 완충액으로 3× 세정하였다. 각 웰에 TBS+/0.1% BSA 중에서 1 μg/mL의 비오티닐화된 항-αv 항체 (R&D Systems, BAF1219) 50 μL를 첨가하고 상기 플레이트를 덮고 실온에서 1시간 동안 인큐베이션하였다. 상기 플레이트를 150 μL의 TBS+ 완충액으로 3× 세정한 후, TBS+ 차단 완충액으로 희석된 스트렙타비딘-접합된 호스래디시 페록시다아제 (R&D Systems, DY998) 50 μL를 웰에 첨가하고 상기 플레이트를 실온에서 20분 동안 인큐베이션하였다. 상기 플레이트를 TBS+ 완충액으로 3× 세정하고 이어서 암실에서 각 웰에 TMB 기질 (Sigma, T4444) 50 μL를 첨가하고 상기 플레이트를 실온에서 25분 동안 인큐베이션하였다. 1.0 M 인산 25 μL를 정지 용액으로 첨가하고 상기 플레이트를 Spectramax 플레이트 판독기를 사용하여 450 nm에서 판독하였다. 비-선형 회귀 (최적) 분석으로 농도-반응 곡선을 제작하고, 각 화합물의 IC50 값을 계산하였다.
C. αvβ 3 기능에 대한 고체상 수용체 검정 ( SPRA )
TBS+ 완충액 (25 mM Tris pH 7.4, 137 mM NaCl, 2.7 mM KCl, 1mM CaCl2, 1 mM MgCl2, 1 mM MnCl2)에서 1 μg/mL로 희석된 재조합 인간 비트로넥틴 (R & D Systems, 2308-VN)을 96웰 절반-웰 투명한 마이크로타이터 플레이트 (Costar 3690)의 웰들 (50 μL/웰)에 첨가하고 4℃에서 밤새 인큐베이션하였다. 웰들을 150 μL TBS+로 3회 세정하고 그 다음 150 μL의 차단 완충액 (1% 소 혈청 알부민을 포함한 TBS+, Sigma A7906)을 첨가하였다. 상기 플레이트를 37℃에서 1시간 동안 인큐베이션한 다음 TBS+ 완충액으로 3× 세정하였다. 재조합 인간 인테그린 αvβ3 (R&D Systems, 3050-AV)을 TBS+/0.1% 소 혈청 알부민에서 1 μg/mL로 희석하고, 49 μL를 각 웰에 첨가하였다. 화합물을 20 μM로 희석하고 그 다음 표준 템플릿에 따라 상기 플레이트의 각 웰에 1 μL를 첨가하였고, 각 샘플은 3회 반복되었다. 실온에서 2시간 동안 인큐베이션 후, 상기 플레이트를 150 μL의 TBS+ 완충액으로 3× 세정하였다. 각 웰에 TBS+/0.1% BSA 중에서 0.5 μg/mL의 비오티닐화된 항-αv 항체 (R&D Systems, BAF1219) 50 μL를 첨가하고 상기 플레이트를 덮고 실온에서 1시간 동안 인큐베이션하였다. 상기 플레이트를 150 μL의 TBS+ 완충액으로 3× 세정한 후, TBS+ 차단 완충액으로 희석된 스트렙타비딘-접합된 호스래디시 페록시다아제 (R&D Systems, DY998) 50 μL를 웰에 첨가하고 상기 플레이트를 실온에서 20분 동안 인큐베이션하였다. 상기 플레이트를 TBS+ 완충액으로 3× 세정하고 이어서 암실에서 각 웰에 TMB 기질 (Sigma, T4444) 50 μL를 첨가하고 상기 플레이트를 실온에서 25분 동안 인큐베이션하였다. 1.0 M 인산 25 μL를 정지 용액으로 첨가하고 상기 플레이트를 Spectramax 플레이트 판독기를 사용하여 450 nm에서 판독하였다. 비-선형 회귀 (최적) 분석으로 농도-반응 곡선을 제작하고, 각 화합물의 IC50 값을 계산하였다.
D. αvβ 5 기능에 대한 고체상 수용체 검정 ( SPRA )
TBS+ 완충액 (25 mM Tris pH 7.4, 137 mM NaCl, 2.7 mM KCl, 1 mM CaCl2, 1 mM MgCl2, 1 mM MnCl2) 중 0.25 μg/mL의 재조합 인간 비트로넥틴 (R& D Systems, 2308-VN)을 96웰 절반-웰 투명한 마이크로타이터 플레이트 (Costar 3690)의 웰들 (50 μL/웰)에 첨가하고 4℃에서 밤새 인큐베이션하였다. 웰들을 150 μL TBS+로 3회 세정하고 그 다음 150 μL의 차단 완충액 (1% 소 혈청 알부민을 포함한 TBS+, Sigma A7906)을 첨가하였다. 상기 플레이트를 37℃에서 1시간 동안 인큐베이션한 다음 TBS+ 완충액으로 3× 세정하였다. 재조합 인간 인테그린 αvβ5 (R&D Systems, 2528-AV)를 TBS+/0.1% 소 혈청 알부민에서 0.1 μg/mL로 희석하고, 49 μL를 각 웰에 첨가하였다. 화합물을 20 μM로 희석하고 그 다음 표준 템플릿에 따라 상기 플레이트의 각 웰에 1 μL를 첨가하였고, 각 샘플은 3회 반복되었다. 실온에서 2시간 동안 인큐베이션 후, 상기 플레이트를 150 μL의 TBS+ 완충액으로 3× 세정하였다. 각 웰에 TBS+/0.1% BSA 중에서 0.5 μg/mL의 비오티닐화된 항-αv 항체 (R&D Systems, BAF1219) 50 μL를 첨가하고 상기 플레이트를 덮고 실온에서 1시간 동안 인큐베이션하였다. 상기 플레이트를 150 μL의 TBS+ 완충액으로 3× 세정한 후, TBS+ 차단 완충액으로 희석된 스트렙타비딘-접합된 호스래디시 페록시다아제 (R&D Systems, DY998) 50 μL를 웰에 첨가하고 상기 플레이트를 실온에서 20분 동안 인큐베이션하였다. 상기 플레이트를 TBS+ 완충액으로 3× 세정하고 이어서 암실에서 각 웰에 TMB 기질 (Sigma, T4444) 50 μL를 첨가하고 상기 플레이트를 실온에서 5분 동안 인큐베이션하였다. 1.0 M 인산 25 μL를 정지 용액으로 첨가하고 상기 플레이트를 Spectramax 플레이트 판독기를 사용하여 450 nm에서 판독하였다. 비-선형 회귀 (최적) 분석으로 농도-반응 곡선을 제작하고, 각 화합물의 IC50 값을 계산하였다.
E. αvβ 6 기능에 대한 고체상 수용체 검정 ( SPRA )
TBS+ 완충액 (25 mM Tris pH 7.4, 137 mM NaCl, 2.7 mM KCl, 1 mM CaCl2, 1 mM MgCl2, 1 mM MnCl2)에서 0.25 μg/mL로 희석된 재조합 인간 LAP (R&D Systems, 246-LP)을 96웰 절반-웰 투명한 마이크로타이터 플레이트 (Costar 3690)의 웰들 (50 μL/웰)에 첨가하고 4℃에서 밤새 인큐베이션하였다. 웰들을 150 μL TBS+로 3회 세정하고 그 다음 150 μL의 차단 완충액 (1% 소 혈청 알부민을 포함한 TBS+, Sigma A7906)을 첨가하였다. 상기 플레이트를 37℃에서 1시간 동안 인큐베이션한 다음 TBS+ 완충액으로 3× 세정하였다. 재조합 인간 인테그린 αvβ6 (R&D Systems, 3817-AV)을 TBS+/0.1% 소 혈청 알부민에서 0.1 μg/mL로 희석하고, 49 μL를 각 웰에 첨가하였다. 화합물을 20 μM로 희석하고 그 다음 표준 템플릿에 따라 상기 플레이트의 각 웰에 1 μL를 첨가하였고, 각 샘플은 3회 반복되었다. 실온에서 2시간 동안 인큐베이션 후, 상기 플레이트를 150 μL의 TBS+ 완충액으로 3× 세정하였다. 각 웰에 TBS+/0.1% BSA 중에서 0.5 μg/mL의 비오티닐화된 항-αv 항체 (R&D Systems, BAF1219) 50 μL를 첨가하고 상기 플레이트를 덮고 실온에서 1시간 동안 인큐베이션하였다. 상기 플레이트를 150 μL의 TBS+ 완충액으로 3× 세정한 후, TBS+ 차단 완충액으로 희석된 스트렙타비딘-접합된 호스래디시 페록시다아제 (R&D Systems, DY998) 50 μL를 웰에 첨가하고 상기 플레이트를 실온에서 20분 동안 인큐베이션하였다. 상기 플레이트를 TBS+ 완충액으로 3× 세정하고 이어서 암실에서 각 웰에 TMB 기질 (Sigma, T4444) 50 μL를 첨가하고 상기 플레이트를 실온에서 10분 동안 인큐베이션하였다. 1.0 M 인산 25 μL를 정지 용액으로 첨가하고 상기 플레이트를 Spectramax 플레이트 판독기를 사용하여 450nm에서 판독하였다. 비-선형 회귀 (최적) 분석으로 농도-반응 곡선을 제작하고, 각 화합물의 IC50 값을 계산하였다.
F. αvβ 8 기능에 대한 고체상 수용체 검정 ( SPRA )
TBS+ 완충액 (25 mM Tris pH 7.4, 137 mM NaCl, 2.7 mM KCl, 1mM CaCl2, 1 mM MgCl2, 1 mM MnCl2)에서 0.5 μg/mL로 희석된 재조합 인간 LAP 단백질 (R&D Systems, Inc, 246-LP)을 96웰 절반-웰 투명한 마이크로타이터 플레이트 (Costar 3690)의 웰들 (50 μL/웰)에 첨가하고 4℃에서 밤새 인큐베이션하였다. 웰들을 150 μL TBS+로 3회 세정하고 그 다음 150 μL의 차단 완충액 (1% 소 혈청 알부민을 포함한 TBS+, Sigma A7906)을 첨가하였다. 상기 플레이트를 37℃에서 1시간 동안 인큐베이션한 다음 TBS+로 3× 세정하였다. 재조합 인간 인테그린 αvβ8 (R&D Systems, 4135-AV)을 TBS+/0.1% 소 혈청 알부민에서 0.1 μg/mL로 희석하고, 49 μL를 각 웰에 첨가하였다. 화합물을 20 μM로 희석하고 표준 템플릿에 따라 상기 플레이트의 각 웰에 1 μL를 첨가하였고, 각 샘플은 3회 반복되었다. 실온에서 2시간 동안 인큐베이션 후, 상기 플레이트를 150 μL의 TBS+로 3× 세정하였다. 각 웰에 TBS+/0.1% BSA 중에서 1 μg/mL의 비오티닐화된 항-αv 항체 (R&D Systems, BAF1219) 50 μL를 첨가하고 상기 플레이트를 덮고 실온에서 1시간 동안 인큐베이션하였다. 상기 플레이트를 150 μL의 TBS+ 완충액으로 3× 세정한 후, TBS+ 차단 완충액으로 희석된 스트렙타비딘-접합된 호스래디시 페록시다아제 (R&D Systems, DY998) 50 μL를 웰에 첨가하고 상기 플레이트를 실온에서 20분 동안 인큐베이션하였다. 상기 플레이트를 TBS+로 3× 세정하고 이어서 암실에서 각 웰에 TMB 기질 (Sigma, T4444) 50 μL를 첨가하고 상기 플레이트를 실온에서 10분 동안 인큐베이션하였다. 1.0 M 인산 25 μL를 정지 용액으로 첨가하고 상기 플레이트를 Spectramax 플레이트 판독기를 사용하여 450 nm에서 판독하였다. 비-선형 회귀 (최적) 분석으로 농도-반응 곡선을 제작하고, 각 화합물의 IC50 값을 계산하였다.
본 개시내용이 몇몇 구현예에 집중되어 있거나 바람직한 구현예와 관련하여 기재되었을 수 있지만, 본 발명의 정신, 범위 및 개념을 벗어나지 않고 화합물, 조성물 및 방법에 변형 및 수정이 적용될 수 있음은 당해 분야의 숙련가에게 명백할 것이다. 당해 분야의 숙련가에게 명백한 모든 변형 및 수정은 첨부된 청구항들에 의해 정의된 본 발명의 정신, 범위 및 개념 내에 있는 것으로 간주된다.
참고 문헌
이하의 참고 문헌들은 이들이 본원에 제시된 것들에 예시적인 공정 또는 다른 상세 보충 사항들을 제공하는 정도로, 구체적으로 본원에 참고로서 포함된다.
Figure pct00174
Figure pct00175
Figure pct00176

Claims (74)

  1. 이하의 화학식을 갖는 화합물:
    Figure pct00177

    또는 이의 약학적으로 허용가능한 염 또는 호변이성질체:
    [여기에서:
    R1은 수소, 비치환 C1-8알킬, 치환 C1-8알킬, 비치환 C6 또는 10아릴, 치환 C6 또는 10아릴, 비치환 C7-12아랄킬, 또는 치환 C7-12아랄킬이고;
    R2은 수소, 비치환 C1-8알킬, 또는 치환 C1-8알킬이고;
    X은 수소, 할로, 시아노, 비치환 C1-12알킬, 치환 C1-12알킬, 비치환 C1-12알콕시, 치환 C1-12알콕시, 비치환 C6 또는 10아릴, 치환 C6 또는 10아릴, 비치환 C7-12아랄킬, 치환 C7-12아랄킬, 비치환 5-10 원의 헤테로아릴, 치환 5-10 원의 헤테로아릴, 비치환 3-10 원의 헤테로시클로알킬, 치환 3-10 원의 헤테로시클로알킬, 비치환 C6 또는 10아릴옥시, 치환 C6 또는 10아릴옥시, 비치환 C2-12아실옥시, 치환 C2-12아실옥시, 또는
    Figure pct00178
    이거나
    (여기에서, R4 및 R5은 각각 독립적으로 비치환 C1-8알킬 또는 치환 C1-8알킬이고, 그리고
    R6은 수소, -OH, -CN, -NH2, -CF3, -CF2H, -CH2F, -CO2H, -CO2-C1-8알킬, -C(=O)NH2, -CH2OH, -CH2O-C1-8알킬, 또는 C1-8알콕시임), 또는
    X은
    Figure pct00179
    이고,
    (여기에서, A'은 -CF2-, -O-, C1-6알칸디일, C1-8알콕시디일, 또는 공유 결합이며, 이로 인해 시클로프로판 고리를 형성하고, 그리고
    R7은 -OH, -CN, -NH2, -CO2H, -CO2-C1-8알킬, -C(=O)NH2, -CF3, -CF2H, -CH2F, -CH2OH, -CH2O-C1-8알킬, C1-8알킬 또는 C1-8알콕시임);
    Y은 t-부틸, 또는
    Figure pct00180
    이거나
    (여기에서, R8 및 R9은 각각 독립적으로 비치환 C1-8알킬 또는 치환 C1-8알킬이고,
    R10은 수소, -OH, -CN, -NH2, -CF3, -CF2H, -CFH2, -CO2H, -CO2- C1-8알킬, -C(=O)NH2, -CH2OH, CH2O-C1-8알킬, 또는 C1-8알콕시임), 또는
    Y은
    Figure pct00181
    이다 (여기에서, A"은 -CF2-, -O-, C1-6알칸디일, C1-8알콕시디일, 또는 공유 결합이고, 이로 인해 시클로프로판 고리를 형성하고; 그리고 R11은 -OH, -CN, -NH2, -CO2H, -CO2-C1-8알킬, -C(=O)NH2, -CF3, -CF2H, -CH2F, -CH2OH, -CH2O-C1-8알킬, C1-8알킬 또는 C1-8알콕시임)].
  2. 제1항에 있어서, 이하와 같이 더욱 정의된 화합물:
    Figure pct00182
    또는
    Figure pct00183

    또는 이의 약학적으로 허용가능한 염 또는 호변이성질체.
  3. 제1항에 있어서, 이하와 같이 더욱 정의된 화합물:
    Figure pct00184
    또는
    Figure pct00185

    또는 이의 약학적으로 허용가능한 염 또는 호변이성질체.
    [여기에서:
    R1은 비치환 C1-8알킬, 치환 C1-8알킬, 비치환 C6 또는 10아릴, 치환 C6 또는 10아릴, 비치환 C7-10아랄킬, 또는 치환 C7-10아랄킬이고;
    R2은 수소, 비치환 C1-6알킬, 또는 치환 C1-6알킬이고;
    X은 할로, 시아노, 비치환 C1-12알킬, 치환 C1-12알킬, 비치환 C1-12알콕시, 치환 C1-12알콕시, 비치환 C6 또는 10아릴, 치환 C6 또는 10아릴, 비치환 C7-10아랄킬, 치환 C7-10아랄킬, 비치환 5-10 원의 헤테로아릴, 치환 5-10 원의 헤테로아릴, 비치환 3-10 원의 헤테로시클로알킬, 치환 3-10 원의 헤테로시클로알킬, 비치환 C6 또는 10아릴옥시, 치환 C6 또는 10아릴옥시, 비치환 C2-12아실옥시, 치환 C2-12아실옥시, 또는
    Figure pct00186
    이거나, 또는
    X은
    Figure pct00187
    이다
    (여기에서, A'은 -CF2-, -O-, C1-6알칸디일, C1-8알콕시디일, 또는 공유 결합이며, 이로 인해 시클로프로판 고리를 형성하고;
    R8 및 R9은 각각 독립적으로 비치환 C1-6알킬 또는 치환 C1-6알킬이고; 그리고
    R10은 수소, -OH, -CN, -NH2, -CF3, -CF2H, -CFH2, -CO2H, -CO2-C1-6알킬, -C(=O)NH2, -CH2OH, CH2O-C1-6알킬, 또는 C1-6알콕시임].
  4. 제1항에 있어서, 이하와 같이 추가로 정의되는 화합물:
    Figure pct00188
    또는
    Figure pct00189

    또는 이의 약학적으로 허용가능한 염 또는 호변이성질체.
  5. 제1항 내지 제4항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 R1은 비치환 C1-8알킬인, 화합물.
  6. 제5항에 있어서, 상기 R1은 메틸인, 화합물.
  7. 제1항 내지 제6항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 R2은 수소인, 화합물.
  8. 제1항 내지 제7항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 X은 수소, 할로, 시아노, 비치환 C1-12알킬, 치환 C1-12알킬, 비치환 C1-12알콕시, 치환 C1-12알콕시, 비치환 C6 또는 10아릴, 치환 C6 또는 10아릴, 비치환 C7-12아랄킬, 치환 C7-12아랄킬, 비치환 5-10 원의 헤테로아릴, 치환 5-10 원의 헤테로아릴, 비치환 3-10 원의 헤테로시클로알킬, 치환 3-10 원의 헤테로시클로알킬, 비치환 C6 또는 10아릴옥시, 치환 C6 또는 10아릴옥시, 비치환 C2-12아실옥시, 또는 치환 C2-12아실옥시인, 화합물.
  9. 제1항 내지 제7항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 X은 수소, 할로, 시아노, 비치환 C1-12알콕시, 치환 C1-12알콕시, 비치환 C6 또는 10아릴, 치환 C6 또는 10아릴, 비치환 C7-12아랄킬, 치환 C7-12아랄킬, 비치환 5-10 원의 헤테로아릴, 치환 5-10 원의 헤테로아릴, 비치환 3-10 원의 헤테로시클로알킬, 치환 3-10 원의 헤테로시클로알킬, 비치환 C6 또는 10아릴옥시, 치환 C6 또는 10아릴옥시, 비치환 C2-12아실옥시, 치환 C2-12아실옥시 또는
    Figure pct00190
    인, 화합물.
  10. 제1항 내지 제7항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 X은 할로인, 화합물.
  11. 제8항에 있어서, 상기 X은 브로모, 플루오로 또는 클로로인, 화합물.
  12. 제1항 내지 제7항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 X은 -CF3인, 화합물.
  13. 제1항 내지 제7항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 X은 -OH 또는 시아노인, 화합물.
  14. 제1항 내지 제7항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 X은 비치환 C1-8알킬인, 화합물.
  15. 제14항에 있어서, 상기 X은 비치환 C3-6알킬인, 화합물.
  16. 제15항에 있어서, 상기 X은 t-부틸인, 화합물.
  17. 제1항 내지 제7항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 X은 비치환 C1-8알콕시인, 화합물
  18. 제17항에 있어서, 상기 X은 메톡시 또는 이소프로폭시인, 화합물.
  19. 제1항 내지 제3항, 및 제5항 내지 제18항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 Y은 t-부틸인, 화합물.
  20. 제1항 내지 제3항, 및 제5항 내지 제18항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 Y은
    Figure pct00191
    인, 화합물.
  21. 제20항에 있어서, 상기 R8 및 R9은 각각 독립적으로 비치환 C2-8알킬인, 화합물.
  22. 제20항에 있어서, 상기 R8은 메틸이고, R9은 비치환 C2-8알킬인, 화합물.
  23. 제20항에 있어서, 상기 R8 및 R9은 각각 -CH3인, 화합물.
  24. 제20항 내지 제23항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 R10은 -CF3, -CF2H, 또는 -CFH2인, 화합물.
  25. 제24항에 있어서, 상기 R10은 -CF3인, 화합물.
  26. 제20항에 있어서, 상기 R10은 수소 또는 -CH3인, 화합물.
  27. 제1항 내지 제3항, 및 제5항 내지 제18항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 Y은
    Figure pct00192
    인, 화합물.
  28. 제27항에 있어서, 상기 A"은 C1-3알칸디일, C1-4알콕시디일, 또는 공유 결합이고, 이로 인해 시클로프로판 고리를 형성하는, 화합물.
  29. 제27항에 있어서, 상기 A"은 공유 결합이고, 이로 인해 시클로프로판 고리를 형성하는, 화합물.
  30. 제27항 내지 제29항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 R11은 -CF3, -CF2H, -CH2F, -CH2O-C1-6알킬, C1-6알킬 또는 C1-8알콕시인, 화합물.
  31. 제27항 내지 제30항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 R11은 -CF3, -CF2H, -CH2F, C1-6알킬 또는 C1-6알콕시인, 화합물.
  32. 제31항에 있어서, 상기 R11은 -CF3, -CF2H 또는 메톡시인, 화합물.
  33. 제32항에 있어서, 상기 R11은 -CF3 또는 -CF2H인, 화합물.
  34. 제32항에 있어서, 상기 R11은 -CH2O-CH3인, 화합물.
  35. 제1항 내지 제34항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 탄소 원자 21은 S 배열인, 화합물.
  36. 제1항, 및 제3항 내지 제35항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 X은 3 위치에 있는, 화합물.
  37. 제1항, 및 제5항 내지 제36항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 Y은 4 또는 5 위치에 있는, 화합물.
  38. 제1항 내지 제37항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 화합물은 인테그린 길항제인, 화합물.
  39. 제38항에 있어서, 상기 인테그린은 α5β1 인테그린 길항제인, 화합물.
  40. 제39항에 있어서, 상기 화합물은 α5β1 인테그린 기능에 대한 고체상 수용체 에세이에 의해 측정될 때, α5β1 인테그린에 대한 IC50 값이 50 nM, 40 nM, 30 nM, 20 nM, 15 nm 또는 1 nM 미만, 또는 상기 어느 것에 의해 정의되는 범위를 나타내는, 화합물.
  41. 제38항 내지 제40항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 인테그린은 αvβ1 인테그린 길항제인, 화합물.
  42. 제1항 내지 제39항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 화합물은 αvβ1 인테그린 기능에 대한 고체상 수용체 에세이에 의해 측정될 때, αvβ1 인테그린에 대한 IC50 값이 15 nM 미만을 나타내는, 화합물.
  43. 제1항 내지 제42항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 화합물은 αvβ3 인테그린 기능에 대한 고체상 수용체 에세이에 의해 측정될 때, αvβ3 인테그린에 대한 IC50 값이 10 nM 미만을 나타내는, 화합물.
  44. 제1항 내지 제43항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 화합물은 αvβ5 인테그린 기능에 대한 고체상 수용체 에세이에 의해 측정될 때, αvβ5 인테그린에 대한 IC50 값이 10 nM 미만을 나타내는, 화합물.
  45. 제1항 내지 제44항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 화합물은 αvβ1, αvβ3, 및 αvβ5 인테그린 기능에 대한 고체상 수용체 에세이에 의해 측정될 때, αvβ1, αvβ3, 및 αvβ5 인테그린에 대한 IC50 값이 10 nM 미만을 나타내는, 화합물.
  46. 제1항 내지 제45항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 화합물은 αvβ6 인테그린 기능에 대한 고체상 수용체 에세이에 의해 측정될 때, αvβ6 인테그린에 대한 IC50 값이 10 nM 초과를 나타내는, 화합물.
  47. 제1항 내지 제46항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 화합물은 αvβ8 인테그린 기능에 대한 고체상 수용체 에세이에 의해 측정될 때, αvβ8 인테그린에 대한 IC50 값이 10 nM 초과를 나타내는, 화합물.
  48. 제1항 내지 제47항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 화합물은 αvβ6 및 αvβ8인테그린 기능에 대한 고체상 수용체 에세이에 의해 측정될 때, αvβ6 및 αvβ8 인테그린에 대한 IC50 값이 10 nM 초과를 나타내는, 화합물.
  49. 제1항에 있어서, 상기 화합물은 이하에 의해 추가로 정의되는, 화합물:
    Figure pct00193

    또는 이의 약학적으로 허용가능한 염.
  50. 제1항에 있어서, 상기 화합물은 이하에 의해 추가로 정의되는, 화합물:
    Figure pct00194

    Figure pct00195

    Figure pct00196

    또는 이의 약학적으로 허용가능한 염.
  51. 이하의 것들을 포함하는 약학적 조성물:
    a) 제1항 내지 제50항 중 어느 한 항에 의한 화합물; 및
    b) 부형제.
  52. 제51항에 있어서, 상기 약학적 조성물은 이하의 투여용으로 제형화되는, 약학적 조성물: 경구, 지방내, 동맥내, 관절내, 두개내, 피부내, 병변내, 근육내, 비강내, 안구내, 심장내, 복강내, 늑막내, 전립선내, 직장내, 경막내, 기관내, 종양내, 탯줄내, 질내, 정맥내, 소포내, 유리체내, 리포좀내, 국소적내(locally), 점막, 비경구적, 직장, 결막하, 피하, 설하, 국소, 볼 점막, 경피, 질내, 크림 중에(in cremes), 지질 조성물로, 카테터를 통하여, 세척을 통하여, 연속 투입을 통하여, 투입을 통하여, 흡입을 통하여, 주사를 통하여, 국소 전달을 통하여, 또는 국소화된 관류를 통한 투여.
  53. 제51항 또는 제52항에 있어, 상기 약학적 조성물은 경구, 국소, 정맥내 또는 유리체내 투여용으로 제형화되는, 약학적 조성물.
  54. 제51항 내지 제53항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 약학적 조성물은 단위 투여량으로 제형화되는, 약학적 조성물.
  55. 질병 또는 장애의 치료 및/또는 예방의 필요가 있는 환자들에게 상기 질병 또는 장애를 치료 및/또는 예방하는 방법으로서, 상기 환자에게 제1항 내지 제54항 중 어느 한 항의 화합물 또는 조성물을 상기 질병 또는 장애를 치료 및/또는 예방하는데 충분한 양으로 투여하는 단계를 포함하는, 방법.
  56. 제55항에 있어서, 상기 질병 또는 장애는 섬유증과 관련된, 방법.
  57. 제55항 또는 제56항에 있어서, 상기 질병 또는 장애는 폐, 간, 신장, 심장, 피부, 또는 췌장의 경피증 또는 섬유증인, 방법.
  58. 제57항에 있어서, 상기 질병 또는 장애는 폐의 섬유증인, 방법.
  59. 제57항에 있어서, 상기 질병 또는 장애는 간의 섬유증인, 방법.
  60. 제57항에 있어서, 상기 질병 또는 장애는 심장의 섬유증인, 방법.
  61. 제57항에 있어서, 상기 질병 또는 장애는 신장의 섬유증인, 방법.
  62. 제57항에 있어서, 상기 질병 또는 장애는 췌장의 섬유증인, 방법.
  63. 제57항에 있어서, 상기 질병 또는 장애는 피부의 섬유증인, 방법.
  64. 제57항에 있어서, 상기 질병 또는 장애는 경피증인, 방법.
  65. 제55항 내지 제64항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 환자는 인간, 원숭이, 소, 말, 양, 염소, 개, 고양이, 마우스, 래트, 기니피그, 또는 이의 형질전환 종인, 방법.
  66. 제65항에 있어서, 상기 환자는 원숭이, 소, 말, 양, 염소, 개, 고양이, 마우스, 래트, 또는 기니피그인, 방법.
  67. 제65항에 있어서, 환자는 인간인, 방법.
  68. 인테그린의 결합을 저해하는 방법으로서, 인테그린을 제1항 내지 제54항 중 어느 한 항에 따른 화합물 또는 조성물과 접촉시키는 단계를 포함하는, 방법.
  69. 제68항에 있어서, 상기 인테그린은 α5β1, αvβ1, αvβ3, 또는 αvβ5인, 방법.
  70. 제69항에 있어서, 상기 인테그린은 αvβ1인, 방법.
  71. 제69항에 있어서, 상기 인테그린은 α5β1인, 방법.
  72. 제68항 내지 제71항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 방법은 시험관 내에서 실시되는, 방법.
  73. 제68항 내지 제71항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 방법은 생체외 또는 생체내에서 실시되는, 방법.
  74. 제68항 내지 제71항, 및 제73항 중 어느 한 항에 있어서, 결합의 저해는 환자에서 질병 또는 장애의 치료 또는 예방을 위하여 충분하게 이루어지는, 방법.
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