CN110139672A - 运动调节功能提高剂 - Google Patents

Abstract

本发明提供一种提高因年龄增加或疲劳而下降的运动调节功能的运动调节功能提高剂、该运动调节功能提高剂的评价或选择方法。该运动调节功能提高剂以GIP功能抑制剂作为有效成分。

Description

运动调节功能提高剂

技术领域

本发明涉及一种运动调节功能提高剂。

背景技术

人具有如下能力：即，通过前庭器官或四肢的肌肉等感知身体的状态(体势、姿势)，经由神经将该刺激传递给脊髄或小脑、大脑皮质等，并为了保持身体的平衡性而进行必要的动作调节(非专利文献1和2)。感知这样的身体动作或重力方向的变化的感觉一般被称为平衡感，其是调节运动的重要能力之一。

关于运动调节功能，因年龄增加或疲劳会引起其能力的下降，作为其原因，考虑是由于三个半规管或前庭的灵敏度下降、视觉等感觉器官的识别能力下降、控制肌肉和骨骼等运动的部位的能力下降、神经或脊髄、脑的功能下降或者障碍等。

这样的运动调节功能的下降已成为以跌倒事故或跌落事故为代表的多发事故的主要原因，有时也导致扭伤和骨折等损伤。另外，维持立位或者直接进行动作时的摇晃和从座位起身时的摇晃等增加，有时在日常生活方面也会造成障碍。

目前，作为维持或改善该运动调节功能、特别是平衡感的方法，主要应用的是药物疗法。作为改善运动调节功能的药剂，已使用了精神身体神经安定剂(精神安定剂、自律神经安定剂、精神神经用剂、催眠镇静剂等)、循环改善剂(血管扩张剂、血流改善剂、血管收缩剂、血管强化剂、循环器官用剂、动脉硬化用剂等)、代谢改善剂(脑、组织、细胞赋活剂、代谢赋活剂等)和维生素制剂等(非专利文献3)，但都不是根本上治疗运动调节功能的药物，还不能说发挥了充分的效果。此外，还从康复的观点考虑，也应用了运动疗法(非专利文献4)，但也有维持动机上的难度或受伤的危险，在现实中非常困难，期待更有效的方法。

另一方面，GIP(肠抑胃肽(gastric inhibitory polypeptide)或葡萄糖依赖性促胰岛素多肽(glucose-dependent insulinotropic polypeptide))是胰高血糖素和促胰液素族所属的消化道激素之一。GIP与GLP-1(胰高血糖素样肽1)一起被称为肠降血糖素，在进食脂质或糖质时，由存在于小肠的K细胞分泌。

已知GIP促进从胰岛β细胞分泌胰岛素，增强胰岛素存在下的葡萄糖向脂肪细胞的进入。因此，也可以认为GIP的作用已成为肥胖的一个主要原因，实际上，已有报道指出如果抑制GIP的功能则肥胖会得到抑制(非专利文献5)。

另外，已有报道指出GIP是胰岛素抵抗性的一个原因(非专利文献1)。发生胰岛素抵抗性时，因胰岛素引起的对糖的吸收作用下降，作为其结果，引起高胰岛素血症。高胰岛素血症可以说是与发生以肥胖为代表的各种生活习惯病有关的根本原因，因此，即便是从降低生活习惯病的风险的方面考虑，胰岛素抵抗性的预防和改善也是重要的。

然而，尚没有GIP与运动调节功能存在关系这样的报告，并且也完全不知道通过抑制GIP功能而能够提高运动调节功能。

(非专利文献1)杉晴夫等，《人体功能生理学、修订第五版》南山堂，2010年

(非专利文献2)加藤元博，《平衡障碍的机制和鉴别》耳鼻，32:1097-1102，198

(非专利文献3)松永乔，《药物疗法对眩晕的选择和效果》耳鼻临床65(增1)：653～671，1972

(非专利文献4)内山靖、德增厚二，“伴随前庭迷路性疾病的眩晕和平衡障碍患者的运动疗法”，《平衡研究(Equilibrium Research)》.50(2)：199-205，1991

(非专利文献5)Miyawaki K等，《自然·医学(Nat Med.)》8(7)：738-42，2002

发明内容

本发明涉及以下的1)～6)。

1)一种运动调节功能提高剂，其以GIP功能抑制剂作为有效成分。

2)GIP功能抑制剂在用于制造运动调节功能提高剂中的用途。

3)一种用于提高运动调节功能的GIP功能抑制剂。

4)GIP功能抑制剂在用于提高运动调节功能中的用途。

5)一种运动调节功能提高方法，其中包括向对象给药GIP功能抑制剂的步骤。

6)一种运动调节功能提高剂的评价或选择方法，其中，包括下述工序，

(I)对被检验物质的GIP功能抑制活性进行测定的工序；

(II)基于(I)的结果对被检验物质的GIP功能抑制活性进行评价的工序；

(III)将增加或增强GIP功能抑制活性的被检验物质评价或选择为运动调节功能提高剂的工序。

附图说明

图1是利用使用抗活性型GIP抗体的夹心ELISA而得到的标准曲线。

图2是表示继续给药GIP或GIP结合型抗GIP抗体所产生的运动调节功能变化的图。

图3是表示血中GIP量的加龄性变化的图。

图4是表示对老龄小鼠继续给药抗GIP抗体所产生的运动调节功能变化的图。

图5是表示GIP上升抑制剂对老龄小鼠的运动调节功能改善作用的图。

具体实施方式

本发明提供一种提高因年龄增加或疲劳而下降的运动调节功能的运动调节功能提高剂和该运动调节功能提高剂的评价或选择方法。

本发明的发明人对GIP与运动调节功能的关系进行了研究，其结果发现：给药GIP时运动调节功能显著下降，并且通过抑制GIP功能，能够提高运动调节功能，另外，通过评价GIP功能抑制活性，能够筛选出运动调节功能提高剂。

本发明的运动调节功能提高剂发挥运动调节功能，例如，发挥提高因年龄增加或疲劳而下降的运动调节功能的效果。因此，对三个半规管或前庭的灵敏度下降、视觉等感觉器官的识别能力下降、控制肌肉和骨骼等运动的部位的能力下降、神经或脊髄以及脑的功能下降或者障碍等是有用的。

在本发明中，GIP(肠抑胃肽：gastric inhibitory polypeptide或葡萄糖依赖性促胰岛素多肽：glucose-dependent insulinotropic polypeptide)为包含42个氨基酸的多肽。GIP(1-42)具有生理活性(活性型GIP)，但被存在于生物体内的二肽酰肽酶-4(dipeptidyl peptidase-4(DPP-4))切断N末端的2个氨基酸后，成为非活性型的GIP(3-42)。

在本发明中，“GIP功能抑制剂”是指阻碍或抑制GIP所具有的作为消化道激素的功能的物质，即在GIP基因或GIP受体基因水平上或者在GIP自身或GIP受体水平上抑制功能的物质，具体可以列举抗GIP抗体、GIP受体拮抗剂、GIP分泌或上升抑制剂。

在本发明中，“抗GIP抗体”只要是至少抑制活性型GIP的功能的抗体即可，也可以为多克隆抗体、单克隆抗体中的任意种，优选为国际公开第2016/104439号、日本特开2013-138638号公报中所记载的与非活性型GIP实质上不结合的抗体(称为“抗活性型GIP抗体”)。另外，与活性型GIP的结合常数(Ka)优选为10⁷M^-1以上，更优选为10⁸M^-1以上，更优选为10⁹M^-1以上。

作为抗活性型GIP抗体，可以列举：将被检验抗体对活性型GIP的结合量设为100％时，被检验抗体对非活性型GIP的结合量最多为10％以下，优选为5％以下，更优选为1％以下，更进一步优选为0.1％。通过利用蛋白质印迹、免疫沉淀、免疫组织化学染色和ELISA等方法，测定被检验抗体与活性型或非活性型GIP的结合，由此能够判断与活性型或非活性型GIP的结合量。

作为抗活性型GIP抗体，例如为识别活性型GIP(序列号5)的N末端至第8位之后的氨基酸的抗体，优选可以列举至少识别选自第8～10位(SDY)中的1个以上的氨基酸的抗体。

作为该抗活性型GIP抗体，更优选H链中包括由下述(1)所示的氨基酸序列或其保守序列改变而构成的区域。

EMNPSDGRTHFNE(1)

(1)中的字母文字是指氨基酸的一种文字标记，序列按照从N末端向C末端方向的顺序记载。其中，F表示苯丙氨酸，T表示苏氨酸，D表示天冬氨酸，E表示谷氨酸，M表示甲硫氨酸，N表示天冬酰胺，P表示脯氨酸，S表示丝氨酸，G表示甘氨酸，R表示精氨酸，H表示组氨酸。

在本说明书中，“保守序列改变”是参与抗原决定的互补性决定区域(CDR)以外的氨基酸改变，是指对由改变前的氨基酸序列而构成的抗体的反应性不产生显著的影响或不使其发生变化的氨基酸改变。这样的保守序列改变包括1～数个、优选1～3个、更优选1个氨基酸的置换、添加和缺失。作为发生了该保守序列改变的氨基酸序列，可以列举与改变前的氨基酸序列相比具有90％以上、优选95％以上、更优选99％以上的序列同一性的氨基酸序列。利用定点诱变和PCR介质诱变这样的该技术领域内公知的标准技术，能够向本发明的抗体导入该改变。作为保守氨基酸置换，可以列举氨基酸残基被置换为具有类似的侧链的氨基酸残基(氨基酸残基的族)。这样的氨基酸残基的族在该技术领域内是已被定义的，包括具有碱性侧链(例如赖氨酸、精氨酸、组氨酸)、酸性侧链(例如天冬氨酸、谷氨酸)、非带电极性侧链(例如甘氨酸、天冬酰胺、谷酰胺、丝氨酸、苏氨酸、酪氨酸、半胱氨酸、色氨酸)、非极性侧链(例如丙氨酸、缬氨酸、亮氨酸、异亮氨酸、脯氨酸、苯丙氨酸、甲硫氨酸)、β-分支侧链(例如苏氨酸、缬氨酸、异亮氨酸)和芳香族侧链(例如酪氨酸、苯丙氨酸、色氨酸、组氨酸)的氨基酸。

另外，氨基酸序列之间的同一性，是指在对2个氨基酸序列进行比对时，双方的序列中存在相同的氨基酸残基的位置数相对于全部氨基酸残基数的比率(％)。具体而言，例如，利用利普曼-皮尔森法(Lipman-Pearson法；《科学(Science)》,227,1435,(1985))进行计算，通过使用遗传信息处理软件Genetyx-Win(Ver.5.1.1；软件开发)的同源性分析(Search homology)程序，并将“要比较的单位大小(Unitsize to compare(ktup))”设为2进行分析而算出。

上述(1)所示的氨基酸序列编码由表示H链可变区域的序列号2所示的氨基酸序列的第50～62位的13个氨基酸残基而构成的区域。

因此，作为上述抗活性型GIP抗体，更优选包括由序列号2所示的氨基酸序列或其保守序列改变而构成的区域作为H链可变区域。另外，进一步优选包括由序列号2所示的氨基酸序列或其保守序列改变而构成的区域作为H链可变区域，并且包括序列号4所示的氨基酸序列或由其保守序列改变而构成的区域作为L链可变区域。

作为包括由序列号2所示的氨基酸序列而构成的区域作为H链可变区域、并且包括由序列号4所示的氨基酸序列而构成的区域作为L链可变区域的抗活性型GIP抗体，可以列举下述制造例1所示的由杂交瘤9B9H5-B9株产生的单克隆抗体。

本发明的抗GIP抗体只要具有上述反应性，就可以为该抗体的片段，例如F(ab')₂、F(ab')、单链Fv(scFv)、VH和VL中的被半胱氨酸残基置换后的氨基酸残基经由二硫键结合而成的二硫键合Fv(dsFv)或它们的聚合物、或者scFv二聚体化而成的二聚体化V区域(双链抗体(Diabody))。进一步而言，只要具有上述反应性，就可以为包含抗活性型GIP抗体的一部分的肽、即具有构成抗体的氨基酸序列的一部分的肽，并且该抗体的片段也包含具有上述反应性的肽。

另外，对于本发明的抗GIP抗体的免疫球蛋白类别没有特别限定，可以为IgG、IgM、IgA、IgE、IgD、IgY中的任意的免疫球蛋白类别，优选为IgG。另外，本发明的抗体也包含任意的同型(isotype)抗体。

另外，本发明的抗GIP抗体可以为非人动物的抗体、人型嵌合体抗体、人源化抗体和人抗体中的任意种。作为非人动物的抗体，例如可以列举小鼠、大鼠、仓鼠、豚鼠等的抗体，优选为小鼠的抗体。

其中，“人型嵌合体抗体”是利用基因工程学的方法将来自非人动物且与GIP特异结合的抗体的恒定区域改变成具有与人的抗体相同的恒定区域的抗体，优选为人-小鼠嵌合体抗体。另外，“人源化抗体”是利用基因工程学的方法将来自非人动物且与GIP特异结合的抗体的H链和L链的互补性决定区域(CDR)以外的一次结构改变成与人的抗体相对应的一次结构的抗体。另外，“人抗体”是指完全为来自人的抗体基因的表达产物的人抗体。

关于抗GIP抗体，除了可以使用市售的多克隆抗体(Bioss公司)以外，还可以使用利用公知的方法制作的单克隆抗体。作为来自哺乳动物的单克隆抗体，包含由杂交瘤产生的抗体，以及对抗体基因或抗体片段基因进行设计并利用公知的基因工程学方法生产的抗体。

例如，关于上述的抗活性型GIP抗体，可以列举通过如下方式生产具有抗原结合能力的单链重组抗体蛋白质(scFv)：将编码H链可变区域的DNA(例如，由序列号1所示的碱基序列构成的DNA)和编码L链可变区域的DNA(例如，由序列号3所示的碱基序列构成的DNA)分别插入到适当的载体的启动子下游而制造重组体载体，由将其导入宿主细胞而得到的转化体制造H链和L链，利用具有可能性的肽使它们连结；或者利用公知的编码连接肽的DNA将编码H链可变区域的DNA(例如，由序列号1所示的碱基序列构成的DNA)和编码L链可变区域的DNA(例如，由序列号3所示的碱基序列构成的DNA)连结并插入到适当的载体的启动子下游而制造重组体载体，将其在宿主细胞内表达等。(参照MacCfferty,J.et al.,《自然(Nature)》,348,552-554,1990；Tim Clackson et al,《自然(Nature)》,352,642-628,1991等)。另外，还可以生产使编码可变区域的DNA和编码恒定区域的DNA结合并表达而得到的抗体。此时，恒定区域可以与来自可变区域的抗体相同，或者也可以来自不同的抗体。

如上所述，用于调制功能上等同的多肽的氨基酸变异的导入例如可以利用定点诱变法等进行。

对于抗活性型GIP抗体产生杂交瘤而言，基本上使用公知技术，并按照以下的操作而能够进行制作。

例如，可以以如下方式进行制作：根据需要，将活性型GIP或具有其N末端的氨基酸序列的肽(由序列号5的第1～15位的氨基酸序列构成的肽)与适当的载体蛋白质、例如钥孔虫戚血蓝素(KLH:keyhole limpet hemocyamin)或牛血清白蛋白等结合，由此能够进一步提高免疫原性而对非人哺乳动物免疫。另外，对于作为致敏抗原(免疫源)使用的活性型GIP或上述肽而言，还可以利用基因工程学的方法或化学合成方法进行制作。

作为被致敏抗原免疫的哺乳动物，没有特别的限定，优选考虑与在细胞融合中所使用的亲代细胞即哺乳动物的骨髓瘤细胞的亲合性而进行选择，通常使用啮齿类动物，例如小鼠、大鼠、仓鼠等。

使致敏抗原对动物免疫时，可以利用公知的方法进行。例如，可以通过向哺乳动物的腹腔内或皮下注射致敏抗原而进行。具体而言，利用PBS(磷酸盐缓冲液，Phosphate-Buffered Saline)或生理食盐水等将致敏抗原稀释至适当量，使其悬浮，根据需要适量混合通常的佐剂、例如弗罗因德完全佐剂，乳化后，向动物的皮下、皮内、腹腔等给药以进行暂时刺激后，根据需要重复进行同样的操作。抗原的给药量根据给药途径、动物种类而适当决定，通常的给药量优选每1次10μg～1mg左右。以如此方式进行免疫，并确认到在血清中的所希望的抗体水平上升了之后，从抗体水平上升后的哺乳动物中取出免疫细胞，进行细胞融合。作为进行细胞融合时的优选的免疫细胞，特别可以列举脾细胞。

作为与上述免疫细胞融合的其他的亲代细胞的哺乳动物的骨髓瘤细胞，已经适当使用的有公知的各种细胞株，例如P3X63、NS-1、MPC-11、SP2/0等。

上述免疫细胞与骨髓瘤细胞的细胞融合可以按照公知的方法，例如Kohler等的方法(Kohler et al.,《自然(Nature)》,vol,256,p495-497(1975))等进行。即，在聚乙二醇(平均分子量1000～6000的PEG、30～60％浓度)、仙台病毒(HVJ)等细胞融合促进剂的存在下，根据需要添加二甲亚砜等辅助剂，在RPMI1640培养液、MEM培养液等营养培养液中，将免疫细胞和骨髓瘤细胞混合，由此进行融合细胞(杂交瘤)的形成。

将利用融合形成的杂交瘤在含有次黄嘌呤、胸苷和氨基蝶呤的培养基(HAT培养基)等选择性培养基中培养1日～7日，与未融合细胞分离。利用其产生的抗体(与活性型GIP结合并且与非活性型GIP实质上不结合的抗体)进一步选择所得到的杂交瘤。

利用公知的有限稀释法将所选择的杂交瘤单克隆化，建立为单克隆性抗体产生杂交瘤。

作为对杂交瘤所产生的抗体的活性进行检测的方法，可以使用公知的方法。例如，可以列举ELISA法、凝聚反应法、放射免疫测定法。

由所得到的杂交瘤取得单克隆抗体时，可以采用如下方法：按照通常的方法培养该杂交瘤，作为其培养上清液而得到的方法；或者，向与杂交瘤具有亲合性的哺乳动物给药杂交瘤以使其增殖，作为其腹水而得到的方法等。

关于抗体的精制，可以利用盐析法、凝胶过滤法、离子交换色谱法或亲和色谱法等公知的精制方法来进行。

在本发明中，作为“GIP受体拮抗剂”，例如，可以列举国际公开第2003/097031号中所记载的亚甲基酰肼化合物，具体可以列举：4-羟基苯甲酸(2-溴亚苄基)酰肼、3-氰基-4-羟基苯甲酸[1-(2,3,5,6-四甲基苄基)吲哚-4-基]亚甲基酰肼、3-氯-4-羟基苯甲酸(4-甲氧基萘-1-基)亚甲基酰肼、3-氯-4-羟基苯甲酸[1-(5-氯噻吩-2-基甲基)-1H-吲哚-5-基]亚甲基酰肼等。

在本发明中，作为“GIP分泌或上升抑制剂”，例如，可以列举BMPP(3-溴-5-甲基-2-苯基吡唑并[1,5-a]嘧啶-7-醇)(国际公开第2001/87341号)、海藻酸(日本特开2013-166741号公报)、磷脂酰乙醇胺(日本特开2010-222284号公报)、聚谷氨酸(日本特开2012-144486号公报)、皂树(日本特开2012-171914号公报)、溶血磷脂酰肌醇(日本特开2012-171915号公报)、纤维素纳米纤维(日本特开2009-126837号公报)、β-甲壳质纳米纤维(日本特开2010-241713号公报)、二酰基甘油(日本特开2006-342084号公报)、羟丙基化淀粉(日本特开2006-342085号公报)、单酰基甘油(日本特开2007-290989号公报)、碳原子数为20以上的超长链脂肪酸(例如，二十烷酸、二十二烷酸、二十四烷酸、二十六烷酸、二十八烷酸、三十烷酸、三十二烷酸、鳕油酸、二高-γ-亚麻酸、二十碳四烯酸、二十碳五烯酸、芥酸、二十二碳五烯酸、二十二碳六烯酸、神经酸(nervonic acid)、二十六碳烯酸、二十八碳烯酸(octacosenoic acid)等；日本特开2011-225458号公报)、构成脂肪酸的1质量％以上为二十二碳六烯酸且1质量％以上为二十碳五烯酸的三酰基甘油(日本特开2013-063937号公报)、长链不饱和脂肪酸乙醇酰胺(例如，油酸乙醇酰胺(oleyl ethanolamide)、亚油酸乙醇酰胺(linoleyl ethanolamide)、亚麻酸乙醇酰胺(linolenyl ethanolamide)、homo-γ-亚麻酸乙醇酰胺、二十碳四烯酸乙醇酰胺(arachidonyl ethanolamide)、7,10,13,16-二十二碳四烯酸乙醇酰胺(7,10,13,16-docosatetraenyl ethanolamide)；日本特开2010-180203号公报)、米糠提取物(日本特表2012-515139号公报)、构成脂肪酸的10质量％以上为α-亚麻酸的三酰基甘油(日本特开2013-075887号公报)、C14～C18饱和脂肪酸与甘油骨架的2位结合而成的酰基甘油(例如，十二烷酸(12：0)、十四烷酸(14：0)、十六烷酸(16：0)、亚油酸(18：2)、油酸(18：1)、十八烷酸(18：0)或二十碳四烯酸(20：4)与2位结合而成的2-酰基单甘油；日本特开2016-047805号公报)、双孢蘑菇的压榨物或提取物(PCT/JP2017/043101)、小麦麸(日本特愿2016-234973)等。

如下述实施例所示，抗GIP抗体具有抑制因给药GIP而产生的运动调节功能下降、提高老龄小鼠的运动调节功能的作用。

因此，抗GIP抗体这样的GIP功能抑制剂可以成为运动调节功能提高剂，还可以用于制造运动调节功能提高剂。

另外，GIP功能抑制剂还可以用于提高运动调节功能。其中，该用途可以为在人或非人动物、或者来自这些的被检测体中的用途，另外，也可以为治疗用途，还可以为非治疗用途。另外，“非治疗”是不包括医疗行为的概念，即不包括对人进行手术、治疗或诊断的方法的概念，更具体而言，是不包括医师或接受了医师的指示的人对人实施手术、治疗或诊断的方法的概念。

在本发明中，“运动调节功能”是指调节与平衡感或平衡能力、敏捷性等有关的动作的功能，“运动调节功能的提高”是指提高调节与平衡感或平衡能力、敏捷性等有关的动作的功能。

本发明的运动调节功能提高剂可以成为发挥运动调节功能的提高效果的人或动物用的药品，还可以成为与药品配合使用的原材料或制剂。

将本发明的运动调节功能提高剂作为药品使用时，该药品能够以任意的给药形态给药。作为给药形态，例如，可以列举片剂、胶囊、颗粒、粉剂、糖浆等的经口给药，或注射剂、栓剂、吸入剂、经皮吸收剂、外用剂等的非经口给药，优选的形态为非经口给药。

关于这样的各种剂型的医药制剂，可以对本发明的GIP功能抑制剂单独地进行调制，或者适当地组合其他的药学上允许的赋形剂、结合剂、增量剂、崩解剂、表面活性剂、光滑剂、分散剂、缓冲剂、保存剂、矫味剂、香料、覆膜剂、载体、稀释剂等而进行调制。

本发明的运动调节功能提高剂中的GIP功能抑制剂的含量优选为0.001质量％以上，更优选为0.01质量％以上，并且优选为10质量％以下，更优选为5质量％以下，更优选为1质量％以下，更优选为0.1质量％以下，还优选为0.001～10质量％，优选为0.001～5质量％，优选为0.001～1质量％，更优选为0.01～0.1质量％。

关于本发明的运动调节功能提高剂的给药量或摄入量，可以根据对象的状态、体重、性别、年龄或其他的主要因素而进行变动，在经口给药或摄入时，对于每1个成人，作为GIP功能抑制剂，每1日优选为1mg以上，更优选为5mg以上，并且优选为500mg以下，更优选为100mg以下，更优选为20mg以下。

另外，作为本发明的运动调节功能提高剂的给药对象，优选因运动器管的障碍而需要护理的风险高的运动器管症候群(运动障碍综合征(locomotive syndrome))的人。

本发明的运动调节功能提高剂的评价或选择方法包括：(I)对被检验物质的GIP功能抑制活性进行测定的工序；(II)基于(I)的结果对被检验物质的GIP功能抑制活性进行评价的工序；和(III)将增加或增强GIP功能抑制活性的被检验物质评价或选择为运动调节功能提高剂的工序。

其中，作为测定GIP功能抑制活性的方法，例如，可以列举以下的方法。

1)将GIP受体cDNA导入细胞内，使用所得到的GIP受体表达细胞，在被检验物质的存在下，由GIP产生cAMP。之后，提取cAMP，利用免疫分析法测定cAMP。

2)将GIP受体cDNA导入细胞内，向所得到的GIP受体表达细胞内导入使来自细菌的lac Z gene与cAMP依赖性启动子结合而成的基因。使该细胞在被检验物质的存在下与GIP反应。根据利用GIP活性产生的cAMP，测定蓄积于细胞中的β-半乳糖苷酶(β-galactosidase)活性。

3)将GIP受体cDNA导入细胞内，对于所得到的GIP受体表达细胞，将被检验物质和放射标记后的GIP加入细胞内，培养后，测定放射活性。

4)使用产生GIP的来自肠道的细胞或来自神经的细胞等，利用被检验物质进行刺激后，对细胞中或者培养上清液中所产生的GIP进行定量。

5)在被检验物质的存在下，利用ELISA法测定脂质或糖质等营养素所导致的GIP分泌量。

通过对增加或增强GIP功能抑制活性的被检验物质进行鉴定来进行被检验物质的GIP功能抑制活性的评价。

例如，可以通过对添加不同浓度的被检验物质时测得的GIP功能抑制活性进行比较而进行。作为更具体的例子，在更高浓度的被检验物质添加组与更低浓度的被检验物质添加组之间；在被检验物质添加组与安慰剂添加组之间；或者在被检验物质添加前后，对GIP功能抑制活性进行比较。由于被检验物质的添加、或者由于更高浓度的被检验物质的添加而使得GIP功能抑制活性被增加或增强时，可以将该被检验物质鉴定为增加或增强该GIP功能抑制活性的物质。

然后，被鉴定为增加或增强GIP功能抑制活性的被检验物质被评价或被选择为运动调节功能提高剂。

另外，作为被检验物质，只要是有望用于运动调节功能提高的物质，就没有特别限制，可以为天然存在的物质，也可以为利用化学或生物学的方法等人工合成的物质，另外，可以为化合物，还可以为组合物或者混合物。

关于上述的实施方式，在本发明中进一步公开以下的方式。

＜1＞一种运动调节功能提高剂，其以GIP功能抑制剂作为有效成分。

＜2＞GIP功能抑制剂在用于制造运动调节功能提高剂中的用途。

＜3＞一种用于提高运动调节功能的GIP功能抑制剂。

＜4＞GIP功能抑制剂在用于提高运动调节功能中的(非治疗性的)用途。

＜5＞一种运动调节功能提高方法，其包括向对象给药GIP功能抑制剂的步骤。

＜6＞在＜1＞～＜5＞中，GIP功能抑制剂为抗GIP抗体、GIP受体拮抗剂、或者GIP分泌或上升抑制剂。

＜7＞在＜6＞中，抗GIP抗体优选为抗活性型GIP抗体。

＜8＞在＜6＞中，GIP受体拮抗剂优选为4-羟基苯甲酸(2-溴亚苄基)酰肼、3-氰基-4-羟基苯甲酸[1-(2,3,5,6-四甲基苄基)吲哚-4-基]亚甲基酰肼、3-氯-4-羟基苯甲酸(4-甲氧基萘-1-基)亚甲基酰肼、或3-氯-4-羟基苯甲酸[1-(5-氯噻吩-2-基甲基)-1H-吲哚-5-基]亚甲基酰肼。

＜9＞在＜6＞中，GIP分泌或上升抑制剂优选为双孢蘑菇的压榨物或提取物、小麦麸、3-溴-5-甲基-2-苯基吡唑并[1,5-a]嘧啶-7-醇、海藻酸、磷脂酰乙醇胺、聚谷氨酸、皂树、溶血磷脂酰肌醇、纤维素纳米纤维、β-甲壳质纳米纤维、二酰基甘油、羟丙基化淀粉、单酰基甘油、碳原子数为20以上的超长链脂肪酸、构成脂肪酸的1质量％以上为二十二碳六烯酸且1质量％以上为二十碳五烯酸的三酰基甘油、长链不饱和脂肪酸乙醇酰胺、米糠提取物、构成脂肪酸的10质量％以上为α-亚麻酸的三酰基甘油、或C14～C18饱和脂肪酸与甘油骨架的2位结合而成的酰基甘油。

＜10＞在＜7＞中，抗活性型GIP抗体优选为：与活性型GIP结合并且与非活性型GIP实质上不结合的抗活性型GIP抗体，并且其是至少识别选自序列号5所示的氨基酸序列的第8～10位的氨基酸中的1个以上并且H链中包括由下述(1)所示的氨基酸序列或其保守序列改变而构成的区域的抗体，

EMNPSDGRTHFNE(1)。

＜11＞在＜10＞中，抗活性型GIP抗体优选为：包括由序列号2所示的氨基酸序列或其保守序列改变而构成的区域作为H链可变区域的抗体。

＜12＞在＜11＞中，抗活性型GIP抗体优选：保守序列改变后的氨基酸序列与序列号2所示的氨基酸序列相比具有90％以上的同一性。

＜13＞在＜10＞中，抗活性型GIP抗体优选为：包括由序列号2所示的氨基酸序列或其保守序列改变而构成的区域作为H链可变区域并且包括由序列号4所示的氨基酸序列或其保守序列改变而构成的区域作为L链可变区域的抗体。

＜14＞在＜13＞中，抗活性型GIP抗体优选为：对序列号2所示的氨基酸序列进行保守序列改变后的氨基酸序列与序列号2所示的氨基酸序列相比具有90％以上的同一性，对序列号4所示的氨基酸序列进行保守序列改变后的氨基酸序列与序列号4所示的氨基酸序列相比具有90％以上的同一性。

＜15＞一种运动调节功能提高剂的评价或选择方法，其包括下述工序：

(I)对被检验物质的GIP功能抑制活性进行测定的工序；

(II)基于(I)的结果对被检验物质的GIP功能抑制活性进行评价的工序；

(III)将增加或增强GIP功能抑制活性的被检验物质评价或选择为运动调节功能提高剂的工序。

＜16＞如＜15＞所述的方法，其中，对GIP功能抑制活性进行测定是指：将GIP受体cDNA导入细胞内，使用所得到的GIP受体表达细胞，在被检验物质的存在下，由GIP产生cAMP，之后，提取cAMP，利用免疫分析法测定cAMP。

实施例

制造例1：抗活性型GIP抗体的制作

(1)免疫用肽的合成

向活性型GIP的N末端15个氨基酸(GIP(1-15))添加聚乙二醇(PEG(polyethyleneglycol)化)后，利用化学方法结合钥孔虫戚血蓝素(KLH；keyhole limpet hemocyanin)，制作KLH结合PEG化GIP(1-15)，形成免疫抗原。将使活性型GIP的N末端15个氨基酸(GIP(1-15))PEG化而得到的肽作为测定用抗原(1)，将使非活性型GIP的N末端13个氨基酸(GIP(3-15))PEG化而得到的肽作为测定用抗原(2)。

(2)免疫

使用BALB/c小鼠(东方酵母工业株式会社)，在背部皮下进行免疫。在初次免疫中，给药将上述所制作的抗原和完全弗罗因德佐剂混合而成的乳液。从初次免疫开始，每2周使用将抗原和不完全弗罗因德佐剂混合而成的乳液实施追加免疫。一次免疫的抗原量在0.1～0.2mg的范围内进行。在实施初次免疫7周后，使用从小鼠采取的血清，实施抗体值测定，确认了抗体值的上升。

(3)细胞融合

从抗体值上升后的小鼠中摘出脾脏，得到脾细胞。利用PEG法将所得到的脾细胞和小鼠骨髓瘤细胞株P3U1融合。之后，向20块96孔板进行接种(1×10⁵个细胞/孔)。

(4)筛选

对于测定用抗原(1)和(2)，利用固相化ELISA法，评价杂交瘤培养上清液与抗原(1)和(2)的反应，选择对抗原(1)显示阳性且对抗原(2)显示阴性的杂交瘤作为抗活性型GIP单克隆抗体产生杂交瘤。

(5)克隆

利用有限稀释法，以得到单菌落的方式培养上述所得到的杂交瘤，由此进行抗体产生杂交瘤的克隆，对单菌落形成孔再次进行ELISA测定，建立产生对抗原(1)显示阳性且对抗原(2)显示阴性的抗体的9B9H5-B9株(国际公开第2016/104439号)。

对于所得到的抗体产生杂交瘤的保存，以如下方式进行：培养该杂交瘤，在对数增殖期内回收后，利用含有FBS(胎牛血清，Fetal BovineSerum)的细胞冻结液进行调制，使得细胞浓度成为1×10⁶个细胞/mL后，以1×10⁶个细胞/管的方式分别注入到冻结管中，在细胞冷存杯(bicell)中以-80℃进行保存。

(6)抗体生产

将所得到的抗体产生杂交瘤的冻结管形瓶解冻，向杂交瘤-SFM(Hybridoma-SFM，其中，SFM是无血清培养基(Serum-Free Medium))进行无血清驯化。扩大培养后，在2个滚瓶(500mL×2个、1L)中培养，回收培养上清液。将所回收的培养上清液作为单克隆抗体，利用使用Protein A的亲和色谱法进行精制。

试验例1：利用ELISA法确认与活性型GIP的反应性

利用ELISA法确认制造例1中得到的单克隆抗体与活性型GIP的反应性。利用NH₂基生物素化试剂盒(Dojindo公司制造)，进行抗活性型GIP单克隆抗体的氨基的生物素化。使用所制作的生物素化抗活性型GIP单克隆抗体1μg/mL，来代替附属于人(总)GIP ELISA试剂盒(Millipore公司制造)的检测抗体’GIP检测抗体(生物素化抗总GIP单克隆抗体)，进行ELISA。将GIP(1-42)或者GIP(3-42)的2000pg/mL溶液作为最高浓度，以6个阶段(8.2～2000pg/mL)制作4倍稀释系列，利用使用抗总GIP单克隆抗体(Millipore公司制造，附属于人GIP(总)ELISA试剂盒)作为捕获抗体、使用生物素化抗活性型GIP单克隆抗体作为检测抗体、检测中使用过氧化酶-抗生蛋白链菌素结合物的夹心ELISA体系，将GIP浓度作为X轴，将吸光度450nm-590nm作为Y轴，制作标准曲线(图1)。

如图1所示，在GIP(3-42)中，即使在高浓度域吸光度也不上升，只有GIP(1-42)的吸光度以浓度依赖地上升了，因此确认了：制造例1中得到的单克隆抗体与GIP(3-42)没有交叉性，能够特异地检测GIP(1-42)的抗体。

实施例1：GIP所产生的运动调节功能下降作用和抗GIP抗体所产生的运动调节功能下降抑制作用

(1)动物和饲养方法

在6周龄引入C57BLKS/J系统的雄性、瘦素受体异常小鼠(db/db小鼠，东方酵母工业株式会社)后，在(室温23℃，湿度55±10％，光照阶段；7：00～19：00)、自由进食、自由饮水条件下进行饲养。饲料使用CE-2(日本Clea株式会社)，在上述环境下进行2周驯化后，供于试验。

(2)GIP溶液和利用抗体抗原反应的GIP结合型抗GIP抗体溶液的制作

将来自小鼠的GIP(Ana spec公司制造)以500nM的浓度溶解在生理食盐水中，形成GIP溶液。将来自小鼠的GIP(Ana spec公司制造)和制造例1中制作的抗活性型GIP抗体分别以500nM和0.1mg/mL的浓度溶解在生理食盐水中，在室温下培养1～2小时，将所得到的溶液作为GIP结合型抗GIP抗体溶液。

(3)给药量和给药方法

每天早晨(AM9：00～10：00)向小鼠(8周龄)腹腔内给药生理食盐水(对照组)、GIP溶液(5nmol/kg体重)(GIP给药组)、或GIP结合型抗GIP抗体溶液(GIP；5nmol/kg体重，抗GIP抗体；1mg/kg体重)(GIP+抗GIP抗体给药组)。给药28日后，进行转杆实验(rotarod test)，测量运动调节功能。

(4)转杆(运动调节功能)实验

使用转杆(MK-600A，室町机械公司制造)，测定在以各种速度旋转的杆上的滞留能力，从而对运动调节功能(反映了平衡能力和敏捷性的调节能力)进行评价。将小鼠置于静止的杆上，按照6rpm(1分钟)→12rpm(1分钟)→16rpm(1分钟)→20rpm(1分钟)→24rpm(1分钟)→28rpm(1分钟)的程序测定掉下来的次数。

(5)统计分析

分析结果以平均值(Ave.)±标准误差(SE)表示。统计分析中，先进行双因素方差分析随后进行邦弗朗尼事后检验(2-way ANOVAfollowed by Bonferroni’s post hoctest)，P值为0.05以下时判定为在统计学上有显著性差异。

(6)结果

与对照组相比，在GIP给药组中，看到了显著的运动调节功能的下降(随着旋转速度的上升，掉下来的次数增加)。在GIP+抗GIP抗体给药组中，没有看到GIP给药组中看到的运动调节功能的下降，是与对照组同等程度的运动调节功能(图2)。

实施例2：血中GIP量的加龄性变化

(1)动物和饲养方法

在4周龄引入C57BL/6J雄性小鼠(日本Clea株式会社)后，在(室温23℃，湿度55±10％，光照阶段；7：00～19：00)、自由进食、自由饮水条件下进行饲养。饲料为CE-2(日本Clea株式会社)，进行1周驯化后，以通常食物(D12450K，Research Diets，Inc)或高脂肪食物(D12451，Research Diets，Inc)饲养95周。

(2)采血

对于各周龄(5、10、15、20、30、40、50、65、80、100周龄)的小鼠，在异氟烷麻醉下，从腹部大静脉采取全血。

(3)血中GIP量的测定

关于血中GIP的浓度，以如下方法进行测定：对于所采取的血液，利用离心分离调制血浆部分后，使用GIP ELISA试剂盒(Millipore公司制造)，按照常规方法测定总GIP。

(4)统计分析

分析结果以平均值(Ave.)±标准误差(SE)表示。统计分析中，先进行双因素方差分析随后进行邦弗朗尼事后检验(2-way ANOVAfollowed by Bonferroni’s post hoctest)，P值为0.05以下时判定为在统计学上有显著性差异。

(5)结果

随着年龄增加，观察到了血中GIP浓度的上升，特别是在高脂肪食物摄入组中，与通常食物组相比，看到了显著的血中GIP量的上升(图3)。已知总GIP与活性型GIP量连动地发生变化(国际公开2012-121302号)，因此可以认为活性型GIP量也上升了。

实施例3：抗GIP抗体对老龄小鼠的运动调节功能改善作用

(1)动物和饲养方法

在4周龄引入C57BL/6J雄性小鼠(日本Clea株式会社)后，在(室温23℃，湿度55±10％，光照阶段；7：00～19：00)、自由进食(D12450K，Research Diets，Inc)、自由饮水条件下饲养111周。

(2)抗GIP抗体溶液的制作

将制造例1中制作的抗活性型GIP抗体以0.05mg/mL的浓度溶解在生理食盐水中，形成抗GIP抗体溶液。

(3)给药量和给药方法

向C57BL/6J小鼠(107周龄)以1周1次(AM9：00～10：00)、合计8次(8周)向腹腔内给药生理食盐水(对照组)或抗GIP抗体溶液(0.5mg/kg体重)(抗GIP抗体给药组)。

(4)转杆(运动调节功能)实验

使用转杆(MK-600A，室町机械公司制造)，测定在以各种速度旋转的杆上的滞留能力，从而对运动调节功能(反映了平衡能力和敏捷性的调节能力)进行评价。试验使用50周龄(非给药组)和115周龄(非给药组、对照组、抗GIP抗体给药组)的小鼠。将小鼠置于静止的杆上，按照6rpm(1分钟)→12rpm(1分钟)→16rpm(1分钟)→20rpm(1分钟)→24rpm(1分钟)→28rpm(1分钟)的程序测定掉下来的次数。

(5)统计分析

分析结果以平均值(Ave.)±标准误差(SE)表示。统计分析中，先进行双因素方差分析随后进行邦弗朗尼事后检验(2-way ANOVAfollowed by Bonferroni’s post hoctest)，P值为0.05以下时判定为在统计学上有显著性差异。

(6)结果

与非给药(50周龄)组相比，在非给药(115周龄)组和对照(115周龄)组中，看到了显著的运动调节功能的下降(随着旋转速度的上升，掉下来的次数增加)。与非给药(115周龄)组和对照(115周龄)组相比，在抗GIP抗体给药(115周龄)组中，看到了运动调节功能的改善，是与非给药(50周龄)组同等程度的运动调节功能(图4)。

实施例4：GIP分泌或上升抑制剂对老龄小鼠的运动调节功能改善作用

(1)动物和饲养方法

在4周龄引入C57BL/6J雄性小鼠(日本Clea株式会社)后，在(室温23℃，湿度55±10％，光照阶段；7：00～19：00)、自由进食、自由饮水条件下进行饲养。饲料为高脂肪食物(D12451，Research Diets，Inc)，进行57周(至61周龄)饲养后，以各组体重相等的方式进行分组。作为试验食物，分别喂食含有30％的脂质的高脂肪食物(高脂肪食物组)、含有20％双孢蘑菇压榨物的30％高脂肪食物(双孢蘑菇摄入组)、或含有30％小麦麸的30％高脂肪食物(小麦麸摄入组)9周(70周龄)。饲养期内，每周测定1次体重，每周测定3次进食量。其中，饲养期内为自由进食、自由饮水。在70周龄利用转杆实验测量运动调节功能。

(2)饲料的调制和组成比

在室温条件下，利用慢速榨汁机(HUROM株式会社)对双孢蘑菇(Agaricusbisporus)的子实体(11.3kg)进行压榨后，将压榨液冻结干燥，由此调制双孢蘑菇压榨物的粉末(308.2g)。

利用挤压机(EA-20、SUEHIRO EPM CORPORATION)对从日清药业公司购入的小麦麸进行蒸煮处理后，混合相当于小麦麸重量的35％的水，利用挤压机在120℃、5.0MPa的条件下进行处理后，作为蒸煮处理小麦麸予以使用。

在食品成分分析中心测定双孢蘑菇压榨物和蒸煮处理小麦麸的成分组成。将双孢蘑菇压榨物和蒸煮处理小麦麸的组成比示于下述表1、表2中。另外，将供于试验的食物的组成比示于下述表3中。另外，关于配合有双孢蘑菇压榨物或小麦麸的饲料，在考虑各成分的组成的情况下，以对成分进行置换的方式进行混合，使其成为与作为对照组的高脂肪食物具有相同的营养组成和卡路里。

[表1]

[表2]

[表3]

利用百分率(w/w)标记试验食物中的含量。

(3)转杆(运动调节功能)实验

使用转杆(MK-600A，室町机械公司制造)，测定在以各种速度旋转的杆上的滞留能力，从而对运动调节功能(反映了平衡能力和敏捷性的调节能力)进行评价。将小鼠置于静止的杆上，按照6rpm(1分钟)→12rpm(1分钟)→16rpm(1分钟)→20rpm(1分钟)的程序，测定掉下来之前的时间和掉下来时的旋转速度。

(4)统计分析

分析结果以平均值(Ave.)±标准误差(SE)表示。统计分析中，先进行单因素方差分析随后进行邓尼特事后检验(1-way ANOVAfollowed by Dunnett’s post hoc test)，P值为0.05以下时判定为在统计学上有显著性差异。

(5)结果

与对照组相比，在继续摄入GIP分泌或上升抑制剂(双孢蘑菇或小麦麸)的组中，看到了运动调节功能的改善作用(图5)。

序列表

<110> 花王株式会社

<120> 运动调节功能提高剂

<130> KS1546

<150> JP 2016-251777

<151> 2016-12-26

<160> 5

<170> PatentIn version 3.5

<210> 1

<211> 339

<212> DNA

<213> 小鼠

<220>

<221> CDS

<222> (1)..(339)

<400> 1

cag gtc caa ctg cag cag cct ggg gct gaa ctg gtg aag cct ggg gcc 48

Gln Val Gln Leu Gln Gln Pro Gly Ala Glu Leu Val Lys Pro Gly Ala

1 5 10 15

tca gtg aag ctg tcc tgc aag gct tct ggc tac acc ttc acc agc ttc 96

Ser Val Lys Leu Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Phe

20 25 30

tgg atg cac tgg gtg att cag agg cct gga caa ggc ctt gag tgg att 144

Trp Met His Trp Val Ile Gln Arg Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile

35 40 45

gga gag atg aat cct agc gac ggt cgt act cac ttc aat gaa aag ttc 192

Gly Glu Met Asn Pro Ser Asp Gly Arg Thr His Phe Asn Glu Lys Phe

50 55 60

aag acc aag gcc aca ctg act ata gac aca tcc tcc aac aca gcc tac 240

Lys Thr Lys Ala Thr Leu Thr Ile Asp Thr Ser Ser Asn Thr Ala Tyr

65 70 75 80

atg gaa ctc aac agc ctg aca tct gag gac tct gcg gtc tat tac tgt 288

Met Glu Leu Asn Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

gca aga agg atg gag gac tgg ggc caa ggg act ctg gtc act gtt tct 336

Ala Arg Arg Met Glu Asp Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser

100 105 110

gca 339

Ala

<210> 2

<211> 113

<212> PRT

<213> 小鼠

<400> 2

Gln Val Gln Leu Gln Gln Pro Gly Ala Glu Leu Val Lys Pro Gly Ala

1 5 10 15

Ser Val Lys Leu Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Phe

20 25 30

Trp Met His Trp Val Ile Gln Arg Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile

35 40 45

Gly Glu Met Asn Pro Ser Asp Gly Arg Thr His Phe Asn Glu Lys Phe

50 55 60

Lys Thr Lys Ala Thr Leu Thr Ile Asp Thr Ser Ser Asn Thr Ala Tyr

65 70 75 80

Met Glu Leu Asn Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Arg Met Glu Asp Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser

100 105 110

Ala

<210> 3

<211> 324

<212> DNA

<213> 小鼠

<220>

<221> CDS

<222> (1)..(324)

<400> 3

gac atc aag atg acc cag tct cca tct tcc atg tat gca tct cta gga 48

Asp Ile Lys Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Met Tyr Ala Ser Leu Gly

1 5 10 15

gag aga gtc act atc act tgc aag gcg agt cag gac att aat agc tat 96

Glu Arg Val Thr Ile Thr Cys Lys Ala Ser Gln Asp Ile Asn Ser Tyr

20 25 30

tta ggc tgg ttc cag cag aaa cca ggg aaa tct cct aag acc ctg ata 144

Leu Gly Trp Phe Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ser Pro Lys Thr Leu Ile

35 40 45

tat ggt gca aac aga ttg gta gat ggg gtc cca tca agg ttc agt ggc 192

Tyr Gly Ala Asn Arg Leu Val Asp Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly

50 55 60

agt gga tct ggg caa gat tac tct ctc acc atc agc agc ctg gag tat 240

Ser Gly Ser Gly Gln Asp Tyr Ser Leu Thr Ile Ser Ser Leu Glu Tyr

65 70 75 80

gac gat atg gga ata tat tat tgt cta cag tat gat gag ttt ccg ctc 288

Asp Asp Met Gly Ile Tyr Tyr Cys Leu Gln Tyr Asp Glu Phe Pro Leu

85 90 95

acc ttc ggt gct ggg acc aag ctg gag ctg aaa cgg 324

Thr Phe Gly Ala Gly Thr Lys Leu Glu Leu Lys Arg

100 105

<210> 4

<211> 108

<212> PRT

<213> 小鼠

<400> 4

Asp Ile Lys Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Met Tyr Ala Ser Leu Gly

1 5 10 15

Glu Arg Val Thr Ile Thr Cys Lys Ala Ser Gln Asp Ile Asn Ser Tyr

20 25 30

Leu Gly Trp Phe Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ser Pro Lys Thr Leu Ile

35 40 45

Tyr Gly Ala Asn Arg Leu Val Asp Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly

50 55 60

Ser Gly Ser Gly Gln Asp Tyr Ser Leu Thr Ile Ser Ser Leu Glu Tyr

65 70 75 80

Asp Asp Met Gly Ile Tyr Tyr Cys Leu Gln Tyr Asp Glu Phe Pro Leu

85 90 95

Thr Phe Gly Ala Gly Thr Lys Leu Glu Leu Lys Arg

100 105

<210> 5

<211> 42

<212> PRT

<213> 智人

<400> 5

Tyr Ala Glu Gly Thr Phe Ile Ser Asp Tyr Ser Ile Ala Met Asp Lys

1 5 10 15

Ile His Gln Gln Asp Phe Val Asn Trp Leu Leu Ala Gln Lys Gly Lys

20 25 30

Lys Asn Asp Trp Lys His Asn Ile Thr Gln

35 40

Claims (26)

1.一种运动调节功能提高剂，其中，

以GIP功能抑制剂作为有效成分。

2.如权利要求1所述的运动调节功能提高剂，其中，

GIP功能抑制剂为抗GIP抗体、GIP受体拮抗剂、或者GIP分泌或上升抑制剂。

3.如权利要求2所述的运动调节功能提高剂，其中，

抗GIP抗体为抗活性型GIP抗体。

4.如权利要求2所述的运动调节功能提高剂，其中，

GIP受体拮抗剂为4-羟基苯甲酸(2-溴亚苄基)酰肼、或3-氰基-4-羟基苯甲酸[1-(2,3,5,6-四甲基苄基)吲哚-4-基]亚甲基酰肼、3-氯-4-羟基苯甲酸(4-甲氧基萘-1-基)亚甲基酰肼、或3-氯-4-羟基苯甲酸[1-(5-氯噻吩-2-基甲基)-1H-吲哚-5-基]亚甲基酰肼。

5.如权利要求2所述的运动调节功能提高剂，其中，

GIP分泌或上升抑制剂为双孢蘑菇的压榨物或提取物、小麦麸、3-溴-5-甲基-2-苯基吡唑并[1,5-a]嘧啶-7-醇、海藻酸、磷脂酰乙醇胺、聚谷氨酸、皂树、溶血磷脂酰肌醇、纤维素纳米纤维、β-甲壳质纳米纤维、二酰基甘油、羟丙基化淀粉、单酰基甘油、碳原子数为20以上的超长链脂肪酸、构成脂肪酸的1质量％以上为二十二碳六烯酸且1质量％以上为二十碳五烯酸的三酰基甘油、长链不饱和脂肪酸乙醇酰胺、米糠提取物、构成脂肪酸的10质量％以上为α-亚麻酸的三酰基甘油、或C14～C18饱和脂肪酸与甘油骨架的2位结合而成的酰基甘油。

6.GIP功能抑制剂在用于制造运动调节功能提高剂中的用途。

7.如权利要求6所述的用途，其中，

GIP功能抑制剂为抗GIP抗体、GIP受体拮抗剂、或者GIP分泌或上升抑制剂。

8.如权利要求7所述的用途，其中，

抗GIP抗体为抗活性型GIP抗体。

9.如权利要求7所述的用途，其中，

GIP受体拮抗剂为4-羟基苯甲酸(2-溴亚苄基)酰肼、或3-氰基-4-羟基苯甲酸[1-(2,3,5,6-四甲基苄基)吲哚-4-基]亚甲基酰肼、3-氯-4-羟基苯甲酸(4-甲氧基萘-1-基)亚甲基酰肼、或3-氯-4-羟基苯甲酸[1-(5-氯噻吩-2-基甲基)-1H-吲哚-5-基]亚甲基酰肼。

10.如权利要求7所述的用途，其中，

GIP分泌或上升抑制剂为双孢蘑菇的压榨物或提取物、小麦麸、3-溴-5-甲基-2-苯基吡唑并[1,5-a]嘧啶-7-醇、海藻酸、磷脂酰乙醇胺、聚谷氨酸、皂树、溶血磷脂酰肌醇、纤维素纳米纤维、β-甲壳质纳米纤维、二酰基甘油、羟丙基化淀粉、单酰基甘油、碳原子数为20以上的超长链脂肪酸、构成脂肪酸的1质量％以上为二十二碳六烯酸且1质量％以上为二十碳五烯酸的三酰基甘油、长链不饱和脂肪酸乙醇酰胺、米糠提取物、构成脂肪酸的10质量％以上为α-亚麻酸的三酰基甘油、或C14～C18饱和脂肪酸与甘油骨架的2位结合而成的酰基甘油。

11.一种用于提高运动调节功能的GIP功能抑制剂。

12.如权利要求11所述的GIP功能抑制剂，其中，

GIP功能抑制剂为抗GIP抗体、GIP受体拮抗剂、或者GIP分泌或上升抑制剂。

13.如权利要求12所述的GIP功能抑制剂，其中，

抗GIP抗体为抗活性型GIP抗体。

14.如权利要求12所述的GIP功能抑制剂，其中，

GIP受体拮抗剂为4-羟基苯甲酸(2-溴亚苄基)酰肼、或3-氰基-4-羟基苯甲酸[1-(2,3,5,6-四甲基苄基)吲哚-4-基]亚甲基酰肼、3-氯-4-羟基苯甲酸(4-甲氧基萘-1-基)亚甲基酰肼、或3-氯-4-羟基苯甲酸[1-(5-氯噻吩-2-基甲基)-1H-吲哚-5-基]亚甲基酰肼。

15.如权利要求12所述的GIP功能抑制剂，其中，

GIP分泌或上升抑制剂为双孢蘑菇的压榨物或提取物、小麦麸、3-溴-5-甲基-2-苯基吡唑并[1,5-a]嘧啶-7-醇、海藻酸、磷脂酰乙醇胺、聚谷氨酸、皂树、溶血磷脂酰肌醇、纤维素纳米纤维、β-甲壳质纳米纤维、二酰基甘油、羟丙基化淀粉、单酰基甘油、碳原子数为20以上的超长链脂肪酸、构成脂肪酸的1质量％以上为二十二碳六烯酸且1质量％以上为二十碳五烯酸的三酰基甘油、长链不饱和脂肪酸乙醇酰胺、米糠提取物、构成脂肪酸的10质量％以上为α-亚麻酸的三酰基甘油、或C14～C18饱和脂肪酸与甘油骨架的2位结合而成的酰基甘油。

16.GIP功能抑制剂在用于提高运动调节功能中的用途。

17.如权利要求16所述的用途，其中，

GIP功能抑制剂为抗GIP抗体、GIP受体拮抗剂、或者GIP分泌或上升抑制剂。

18.如权利要求17所述的用途，其中，

抗GIP抗体为抗活性型GIP抗体。

19.如权利要求17所述的用途，其中，

GIP受体拮抗剂为4-羟基苯甲酸(2-溴亚苄基)酰肼、或3-氰基-4-羟基苯甲酸[1-(2,3,5,6-四甲基苄基)吲哚-4-基]亚甲基酰肼、3-氯-4-羟基苯甲酸(4-甲氧基萘-1-基)亚甲基酰肼、或3-氯-4-羟基苯甲酸[1-(5-氯噻吩-2-基甲基)-1H-吲哚-5-基]亚甲基酰肼。

20.如权利要求17所述的用途，其中，

GIP分泌或上升抑制剂为双孢蘑菇的压榨物或提取物、小麦麸、3-溴-5-甲基-2-苯基吡唑并[1,5-a]嘧啶-7-醇、海藻酸、磷脂酰乙醇胺、聚谷氨酸、皂树、溶血磷脂酰肌醇、纤维素纳米纤维、β-甲壳质纳米纤维、二酰基甘油、羟丙基化淀粉、单酰基甘油、碳原子数为20以上的超长链脂肪酸、构成脂肪酸的1质量％以上为二十二碳六烯酸且1质量％以上为二十碳五烯酸的三酰基甘油、长链不饱和脂肪酸乙醇酰胺、米糠提取物、构成脂肪酸的10质量％以上为α-亚麻酸的三酰基甘油、或C14～C18饱和脂肪酸与甘油骨架的2位结合而成的酰基甘油。

21.一种运动调节功能提高方法，其中，

包括向对象给药GIP功能抑制剂的步骤。

22.如权利要求21所述的方法，其中，

GIP功能抑制剂为抗GIP抗体、GIP受体拮抗剂、或者GIP分泌或上升抑制剂。

23.如权利要求22所述的方法，其中，

抗GIP抗体为抗活性型GIP抗体。

24.如权利要求22所述的方法，其中，

GIP受体拮抗剂为4-羟基苯甲酸(2-溴亚苄基)酰肼、或3-氰基-4-羟基苯甲酸[1-(2,3,5,6-四甲基苄基)吲哚-4-基]亚甲基酰肼、3-氯-4-羟基苯甲酸(4-甲氧基萘-1-基)亚甲基酰肼、或3-氯-4-羟基苯甲酸[1-(5-氯噻吩-2-基甲基)-1H-吲哚-5-基]亚甲基酰肼。

25.如权利要求22所述的方法，其中，

GIP分泌或上升抑制剂为双孢蘑菇的压榨物或提取物、小麦麸、3-溴-5-甲基-2-苯基吡唑并[1,5-a]嘧啶-7-醇、海藻酸、磷脂酰乙醇胺、聚谷氨酸、皂树、溶血磷脂酰肌醇、纤维素纳米纤维、β-甲壳质纳米纤维、二酰基甘油、羟丙基化淀粉、单酰基甘油、碳原子数为20以上的超长链脂肪酸、构成脂肪酸的1质量％以上为二十二碳六烯酸且1质量％以上为二十碳五烯酸的三酰基甘油、长链不饱和脂肪酸乙醇酰胺、米糠提取物、构成脂肪酸的10质量％以上为α-亚麻酸的三酰基甘油、或C14～C18饱和脂肪酸与甘油骨架的2位结合而成的酰基甘油。

26.一种运动调节功能提高剂的评价或选择方法，其中，

包括下述工序：

(I)对被检验物质的GIP功能抑制活性进行测定的工序；

(II)基于(I)的结果对被检验物质的GIP功能抑制活性进行评价的工序；

(III)将增加或增强GIP功能抑制活性的被检验物质评价或选择为运动调节功能提高剂的工序。