CN110082445B - 一种同时测定葡萄糖酸氯己定和对氯苯胺含量的方法 - Google Patents

Abstract

本发明涉及药物检测领域，提出一种同时测定葡萄糖酸氯己定和对氯苯胺含量的方法。该方法包括：用高效液相色谱法测定混合对照品溶液和供试品溶液，色谱条件为：以磷酸二氢铵溶液为流动相A，甲醇为流动相B，分别对混合对照品溶液和供试品溶液进行线性梯度洗脱，并且在线性梯度洗脱的过程中控制磷酸二氢铵溶液的体积，使得流动相A的体积占流动相总量的百分比由75％‑85％降低至35％‑45％，接着升高至75％‑85％，其中，混合对照品溶液是通过将醋酸氯己定对照品和对氯苯胺对照品混合制成。本申请通过采用高效液相色谱法，通过特定的流动相组成以及线性梯度洗脱程序，实现对葡萄糖酸氯己定和对氯苯胺的含量进行同时且准确的测定。

Description

一种同时测定葡萄糖酸氯己定和对氯苯胺含量的方法

技术领域

本发明涉及药物检测领域，具体而言，涉及一种同时测定葡萄糖酸氯己定和对氯苯胺含量的方法。

背景技术

葡萄糖酸氯己定软膏是皮肤科用药类非处方药药品。本品主要成分为葡萄糖酸氯己定，其主要杂质为对氯苯胺。氯己定为阳离子型表面活性防腐剂，具有广谱抗菌作用。其作用机制是改变细菌细胞膜的通透性。用于轻度小面积烧伤、烫伤、外伤感染，也可用于湿疹、痤疮、足癣的人群。该产品质量标准依据为WS-10001-(HD-0153)-2002，通过提取后用紫外检测，该方法操作繁琐，准确性不强。也没有对有关物质(例如主要杂质对氯苯胺)的检验。

发明内容

本发明的目的在于提供一种同时测定葡萄糖酸氯己定和对氯苯胺含量的方法，其能够更准确的对葡萄糖酸氯己定软膏中的葡萄糖酸氯己定进行含量测定，同时还能对主要杂质对氯苯胺进行检测。

本发明是这样实现的：

本申请提供了一种同时测定葡萄糖酸氯己定和对氯苯胺含量的方法，其包括：用高效液相色谱法测定对照品溶液和供试品溶液，色谱条件为：以磷酸二氢铵溶液为流动相A，甲醇为流动相B，分别将对照品溶液和供试品溶液进行线性梯度洗脱，并且在线性梯度洗脱的过程中控制磷酸二氢铵溶液的体积，使得流动相A的体积占流动相总量的百分比由75％-85％降低至35％-45％，接着升高至75％-85％；

其中，混合对照品溶液是通过将醋酸氯己定对照品和对氯苯胺对照品混合制成。

本发明实施例的有益效果例如包括：本申请通过采用高效液相色谱法，通过特定的流动相组成以及线性梯度洗脱程序，实现对葡萄糖酸氯己定的含量和有害物质对氯苯胺的含量进行同时测定，可以准确检测有害物质对氯苯胺的含量。加样回收率在95％以上。可以准确检测葡萄糖酸氯己定的含量。加样回收率在98％-103％之间。

附图说明

为了更清楚地说明本发明实施例的技术方案，下面将对实施例中所需要使用的附图作简单地介绍，应当理解，以下附图仅示出了本发明的某些实施例，因此不应被看作是对范围的限定，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他相关的附图。

图1为空白溶剂的色谱图；

图2为空白基质的色谱图；

图3为葡萄糖酸氯己定软膏的色谱图。

具体实施方式

下面将结合实施例对本发明的实施方案进行详细描述，但是本领域技术人员将会理解，下列实施例仅用于说明本发明，而不应视为限制本发明的范围。实施例中未注明具体条件者，按照常规条件或制造商建议的条件进行。所用试剂或仪器未注明生产厂商者，均为可以通过市售购买获得的常规产品。

下面对本发明实施例的同时测定葡萄糖酸氯己定和对氯苯胺含量的方法进行具体说明。

本发明实施例采用的主要仪器、试药和样品信息见表1。

表1主要实验仪器、试药及样品信息表

本实施例提供的同时测定葡萄糖酸氯己定和对氯苯胺含量的方法具体包括以下步骤：

S1、配制对照品溶液

取醋酸氯己定对照品和对氯苯胺对照品适量，加稀释液溶解并定量稀释成每1ml中约含葡萄糖酸氯己定0.05-0.15mg、对氯苯胺0.2-0.3μg，形成混合对照品溶液。

分别取不同体积的混合对照品溶液，分别用稀释液溶解并稀释，得线性溶液。

本实施例中，稀释液为8％体积比的醋酸甲醇溶液，其制备方法为：将80mL的冰醋酸转移到1000mL容量的量瓶中，倒入色谱甲醇至标线处，摇匀即得。

S2、配制供试品溶液

精密称定样品，将样品置于容器(例如量瓶)中，加入稀释液，置于70-90℃水浴中加热，振摇使样品溶解，放冷后，用稀释液稀释至刻度，摇匀，置冰浴中冷却2小时以上，取出后过滤，续滤液放冷，作为供试品溶液。

S3、高效液相色谱分析

按每1g的醋酸氯己定相当于1.435g的C₂₂H₃₀Cl₂N₁₀·2C₆H₁₁O₇计算。取供试品溶液、混合对照品溶液，注入液相色谱仪，记录色谱图。

其中，色谱条件为：以磷酸二氢铵溶液为流动相A，甲醇为流动相B，分别将对照品溶液和供试品溶液进行线性梯度洗脱，并且在线性梯度洗脱的过程中控制磷酸二氢铵溶液的体积，使得流动相A的体积占流动相总量的百分比由75％-85％降低至35％-45％，接着升高至75％-85％。

进一步地，色谱条件还包括：在0-22min时，检测波长为240-250nm，在22-45min时，检测波长为255-265nm。

本申请采用不同时间段采用不同的检测波长进行检测，相较于现有技术中整个检测过程中采用同一检测波长而言，能够获得葡萄糖酸氯己定和对氯苯胺的特征峰的更大的峰面积。

此外，选用Waters XBridge Shield RP18色谱柱作为本申请中的色谱柱，色谱柱的理论板数按对氯苯胺峰计算不低于2000。其能够在上述特定的色谱条件下有效的分离葡萄糖酸氯己定和对氯苯胺的特征峰。应理解，在本申请的其他实施方式中，色谱柱还可以选用和Waters XBridge Shield RP18色谱柱效能相当的色谱柱。

优选地，在线性梯度洗脱混合对照品溶液和供试品溶液时：

t＝0min～20min时，流动相A为75％-85％→45％-55％，流动相B为15％-25％→45％-55％；

t＝20min～25min时，流动相A为45％-55％→35％-45％，流动相B为45％-55％→55％-65％；

t＝25min～35min时，流动相A为35％-45％→35％-45％，流动相B为55％-65％→55％-65％；

t＝35min～37min时，流动相A为35％-45％→75％-85％，流动相B为55％-65％→15％-25％；

t＝37min～45min时，流动相A为75％-85％→75％-85％，流动相B为15％-25％→15％-25％。

更优选地，在线性梯度洗脱混合对照品溶液和供试品溶液时：

t＝0min～20min时，流动相A为80％→50％，流动相B为20％→50％；

t＝20min～25min时，流动相A为50％→40％，流动相B为50％→60％；

t＝25min～35min时，流动相A为40％→40％，流动相B为60％→60％；

t＝35min～37min时，流动相A为40％→80％，流动相B为60％→20％；

t＝37min～45min时，流动相A为80％→80％，流动相B为20％→20％。

具体到本申请中，上述流动相A是通过将精确称量的磷酸二氢铵放入烧杯中；加入水，利用超声进行溶解。利用磷酸溶液将pH值调至3-4。用0.45μm的膜滤器过滤8-12分钟直至脱气。

而流动相B为色谱甲醇。

S4、计算分析

通过将混合对照品溶液制得的多个线性溶液测定的峰面积计算回归方程，按外标法以峰面积计算，计算出醋酸氯己定和对氯苯胺的含量。

需要说明的是，t＝0min～20min，本实施例中，表示为t＝[0，20)，其中，t为时间范围值，也即是，该时间段的最小值可取端点值，而最大值不包含t＝20这一端点值，以下梯度的时间范围相同，这里不再赘述。

本申请采用高效液相色谱法，通过特定的流动相组成以及线性梯度洗脱程序，实现对葡萄糖酸氯己定的含量和有害物质对氯苯胺的含量进行同时测定，可以准确检测有害物质对氯苯胺的含量。加样回收率在95％以上。可以准确检测葡萄糖酸氯己定的含量。加样回收率在98％-103％之间。

以下结合实施例对本发明的同时测定葡萄糖酸氯己定和对氯苯胺含量的方法进一步进行阐述。

实施例1

本实施例提供了一种同时测定葡萄糖酸氯己定和对氯苯胺含量的方法，其包括以下步骤：

S1、配制对照品溶液

分别取醋酸氯己定对照品和对氯苯胺对照品适量，加稀释液溶解，分别作为醋酸氯己定对照品溶液和氯苯胺对照品溶液，按照每1ml中约含葡萄糖酸氯己定0.1mg、对氯苯胺0.25μg的比例进行混合，形成混合对照品溶液。

S2、配制供试品溶液

精密称定样品，将样品置于量瓶中，加入稀释液，置于80℃水浴中加热，振摇使样品溶解，放冷后，用稀释液稀释至刻度，摇匀，置冰浴中冷却2小时以上，取出后过滤，续滤液放冷，作为供试品溶液。

S3、高效液相色谱分析

色谱条件：选择十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，Waters XBridge Shield RP18色谱柱(4.6×250mm，5μm)，以流动相A：磷酸二氢铵溶液，流动相B：色谱甲醇，按下表2进行线性梯度洗脱，流速1.0ml/min，检测波长：0-22min时检测波长为244nm；22-45min时检测波长259nm，柱温30℃。理论板数按对氯苯胺峰计算不低于2000。

其中，流动相A是通过将精确质量为1.4g的磷酸二氢铵置于1000mL水中，超声溶解，接着用10％磷酸溶液调节pH至3.5，接着采用0.45μm的膜滤器过滤10min，直至脱气，即得。

表2.实施例1的洗脱参数

时间(min)	流动相A(wt％)	流动相B(wt％)	梯度曲线
				0	80	20	线性
20	50	50	线性
				25	40	60	线性
35	40	60	线性
				37	80	20	线性
45	80	20	线性

分别取混合对照品溶液，0.5ml，0.6ml，0.8ml，1.0ml，1.2ml，1.5ml至10ml的容量瓶中，分别用稀释液溶解并稀释至刻度，得线性溶液。精密量取不同浓度的对照品线性溶液20μl注入液相色谱仪，记录色谱图。记录结果，请参阅表3：

表3.线性溶液的浓度和峰面积的记录结果

接着精密吸取供试品溶液20μl，注入液相色谱仪，照高效液相色谱法测定，按外标法以峰面积计算，即得。

实施例2-5

实施例2-5与实施例1基本相同，区别点在于，洗脱参数不同。

实施例2的洗脱参数请参阅表4：

表4.实施例2的洗脱参数

时间(min)	流动相A(wt％)	流动相B(wt％)	梯度曲线
				0	75	25	线性
20	45	55	线性
				25	35	65	线性
35	35	65	线性
				37	75	25	线性
45	75	25	线性

实施例3的洗脱参数请参阅表5：

表5.实施例3的洗脱参数

时间(min)	流动相A(wt％)	流动相B(wt％)	梯度曲线
				0	78	22	线性
20	48	52	线性
				25	38	62	线性
35	38	62	线性
				37	78	22	线性
45	78	22	线性

实施例4的洗脱参数请参阅表6：

表6.实施例4的洗脱参数

实施例5的洗脱参数请参阅表7：

表7.实施例5的洗脱参数

时间(min)	流动相A(wt％)	流动相B(wt％)	梯度曲线
				0	85	15	线性
20	55	45	线性
				25	45	55	线性
35	45	55	线性
				37	85	15	线性
45	85	15	线性

实施例6-7

实施例6-7与实施例1基本相同，区别点在于，混合对照品溶液中含有的葡萄糖酸氯己定和对氯苯胺的量不同：

实施例6中，每1ml混合对照品溶液中含有葡萄糖酸氯己定0.07mg和对氯苯胺0.225μg。

实施例7中，每1ml混合对照品溶液中含有葡萄糖酸氯己定0.12mg和对氯苯胺0.275μg。

实施例8-15

实施例8-15与实施例1基本相同，区别点在于，检测波长不同：

实施例8中，在0-45min，均采用239nm的检测波长进行检测；

实施例9中，在0-45min，均采用242nm的检测波长进行检测；

实施例10中，在0-45min，均采用244nm的检测波长进行检测；

实施例11中，在0-45min，均采用248nm的检测波长进行检测；

实施例12中，在0-45min，均采用257nm的检测波长进行检测；

实施例13中，在0-45min，均采用259nm的检测波长进行检测；

实施例14中，在0-45min，均采用260nm的检测波长进行检测；

实施例15中，在0-45min，均采用264nm的检测波长进行检测；

实施例16-17

实施例16-17实施例1基本相同，区别点在于：选用的色谱柱不同。

实施例16中，色谱柱为Boston Green ODS色谱柱(4.6×200mm，5μm)；

实施例17中，色谱柱为Hypersil BDS色谱柱(4.6×150mm，5μm)。

一、对比实验

对比例1-2

对比例1-2与实施例1基本相同，区别点在于：洗脱参数不同。

对比例1的洗脱参数请参阅表8。

表8.对比例1的洗脱参数

对比例2的洗脱参数请参阅表9。

表9.对比例2的洗脱参数

时间(min)	流动相A(wt％)	流动相B(wt％)	梯度曲线
				0	75	25	线性
20	50	50	线性
				25	60	40	线性
35	60	40	线性
				37	75	25	线性
45	75	25	线性

对比例3-4

对比例3-4与实施例1基本相同，区别点在于：流动相的选择不同。

对比例3中，流动相A为磷酸二氢铵溶液，流动相B为色谱乙腈；

对比例4中，流动相A为磷酸二氢钾溶液，流动相B为色谱甲醇。

将上述实施例1-15以及对比例1-4获得的色谱图进行分析，分析结果请参阅表10。

表10.各个实施例和对比例的色谱图分析结果

分离度(R)的计算公式为：R＝2(t_R2-t_R1)/(w₁+w₂)，其中，t_R2：相邻两峰中后一峰的保留时间；t_R1：相邻两峰中前一峰的保留时间；w₁+w₂：此相邻两峰的峰宽。《中国药典》规定R应大于1.5。

从上表可以看出，对氯苯胺的测定波长以239nm，242nm，244nm，比较合适；氯己定以257nm，259nm，260nm，比较合适。

流动相的选择：以磷酸二氢钾和磷酸二氢铵溶液为水相，区别不大；但有机相若更换为色谱乙腈，氯己峰的出峰时间大提前，约13分钟，而且峰分叉；

洗脱梯度的选择：磷酸盐与色谱甲醇在25-35min的时间段为氯己定峰的时间段，此时两者的比例以(75：25)至(45：55)均可以，但当磷酸盐的比例达60％时，氯己定不能正常出峰。

色谱柱的选择：大多数都可以。

二、方法学验证

(1)专属性验证

a.空白基质、空白溶剂的干扰试验

空白基质(按软膏制备方法制备的缺葡萄糖酸氯己定溶液的软膏)、空白溶剂在对氯苯胺峰、氯己定出峰出峰时间处均无干扰峰(请参阅图1、图2和图3)。

b.破坏试验

对样品，空白基质，进行酸碱破坏，光线破坏，氧化破坏，高温破坏，主峰附近杂质峰与主峰分离度符合要求，空白基质、空白溶剂在对氯苯胺峰、氯己定出峰时间处均无干扰峰。

(2)线性

试验工作曲线绘制

取醋酸氯己定对照品和对氯苯胺对照品适量，加稀释液溶解并定量稀释制成每1ml中约含葡萄糖酸氯己定1mg、对氯苯胺2.5μg的溶液，作为储备液。分别取贮备液0.5ml，0.6ml，0.8ml，1.0ml，1.2ml，1.5ml至10ml的容量瓶中，分别用稀释液溶解并稀释至刻度，得线性溶液。精密量取对照品线性溶液20μl注入液相色谱仪，按照实施例1的洗脱梯度进行洗脱，记录色谱图，获得的工作曲线可参阅实施例1中的线性曲线。

醋酸氯己定对照品线性溶液R²＝0.9999(R²应≥0.998)，对氯苯胺对照品线性溶液R²＝0.9979(R²应≥0.990)，葡萄糖酸氯己定在溶液浓度为0.05-0.15mg/ml时应线性关系，且R²≥0.998，对氯苯胺在溶液浓度为0.125-0.375μg/ml时应线性关系，且R²≥0.990，检测限与定量限：对氯苯胺0.0025μg/ml时信噪比为4.5，设为检测限；对氯苯胺0.025μg/ml时信噪比为17.8，设为定量限。

(3)准确度(回收率)

a.葡萄糖酸氯己定回收率

取空白基质2.5g，精密称定，置9个50ml量瓶中，分别精密加入原料母液(精密量取葡萄糖酸氯己定溶液1.0ml，置200ml量瓶中，用水稀释至刻度，摇匀即得。)4.0ml，5.0ml，6.0ml，分别加入稀释液约25ml，置80℃水浴中加热，小心振摇使葡萄糖酸氯己定溶解，放冷，用稀释液稀释至刻度，摇匀，置冰浴中冷却2小时以上，取出后迅速滤过，制成相当于原含量80％、100％、120％的供试品溶液。依法测定含量，并计算平均回收率。(结果见表11)

计算公式：

校正因子f＝(W对×C对％×5)/(A对×100×10)

测得量＝A样×f×200×50×1.435×100

回收率＝[测得量/(葡萄糖酸氯己定溶液含量×V样)]×100％

表11：葡萄糖酸氯己定回收率结果表

平均回收率应为98.0％～105.0％，9个样的回收率RSD≤2.0％。

b.对氯苯胺回收率

取空白基质2.5g，精密称定，置9个50ml量瓶中，分别精密加入对氯苯胺对照储备液(取对氯苯胺对照品25mg，精密称定，加稀释液溶解并定量稀释至100ml,得溶液一，取溶液一2ml，加稀释液溶解并定量稀释至200ml,得溶液二，即为对氯苯胺对照储备液。)4.0ml，5.0ml，6.0ml，分别加入稀释液约25ml，置80℃水浴中加热，小心振摇使膏体分散，放冷，用稀释液稀释至刻度，摇匀，置冰浴中冷却2小时以上，取出后迅速滤过，制成相当于原含量80％、100％、120％的供试品溶液。依法测定含量，并计算平均回收率。(结果见表12)

计算公式：

校正因子f＝(W对×C对％×2×1)/(A对×100×200×10)

收得量＝A样×f×50；

回收率＝(收得量/加入量)×100％。

表12：对氯苯胺回收率结果表

平均回收率应为90.0％～110.0％，9个样的回收率RSD≤5.0％。

(4)精密度

①重复性

检验员一，取同一批号样品，制备6份供试品溶液，使用同一台仪器，在上述色谱条件下，分别精密吸取20μL，注入液相色谱仪，测定峰面积值，计算方法精密度。按对氯苯胺峰计算，理论塔板数应不低于2000，对氯苯胺峰、氯己定峰与相邻峰的分离度均符合规定。以氯己定峰计算，仪器精密度RSD≤2.0％。对氯苯胺含量RSD≤5.0％，葡萄糖酸氯己定含量RSD≤3.0％。结果请参阅表13。

表13.仪器精密度RSD

②中间精密度

由实验室的两名检验员，分别独立对相同的三批次样品，按照供试品制备方法分别处理，使用不同的两台仪器进行检验。要求两名检验员的氯己定含量RSD≤6.0％，对氯苯胺含量RSD≤10.0％。结果请参阅表14。

表14.中间精密度的测试结果

对氯苯胺RSD应≤10.0％，葡萄糖酸氯己定RSD应≤5.0％，

(5)稳定性

a.操作

取同一混合对照液和样品溶液，分别于室温下在24小时内，观察溶液性状，是否有变色沉淀等异常现象，并在不同时间点进行测定，记录峰面积和保留时间，计算峰面积和保留时间的RSD。结果记录在表1。性状处如无异常填写无异常，如有异常，则对异常情况进行描述。

b.结果

性状：混合对照液和样品溶液在24小时内均无异常。

对照液和样品溶液的稳定性结果见表15。

表15：对照液和样品溶液的稳定性结果

氯己定峰面积和保留时间RSD应≤1.0％，对氯苯胺保留时间RSD应≤1.0％，峰面积RSD应≤5.0％。

结论

本次方法验证的结果全部符合规定，因此该HPLC法适用于葡萄糖酸氯己定软膏的含量测定和杂质对氯苯胺的测定。上述所有验证参数的结果汇总于表16。

表16.各个验证参数的结果汇总表

综上所述，本申请通过采用高效液相色谱法，通过特定的流动相组成以及线性梯度洗脱程序，实现对葡萄糖酸氯己定的含量和有害物质对氯苯胺的含量进行同时测定，可以准确检测有害物质对氯苯胺的含量。加样回收率在95％以上。可以准确检测葡萄糖酸氯己定的含量。加样回收率在98％-103％之间。

以上仅为本发明的优选实施例而已，并不用于限制本发明，对于本领域的技术人员来说，本发明可以有各种更改和变化。凡在本发明的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。

Claims (8)

1.一种同时测定葡萄糖酸氯己定和对氯苯胺含量的方法，其特征在于，其包括：用高效液相色谱法测定混合对照品溶液和供试品溶液，色谱条件为：以磷酸二氢铵溶液为流动相A，甲醇为流动相B，分别对所述混合对照品溶液和所述供试品溶液进行线性梯度洗脱，并且在所述线性梯度洗脱的过程中控制所述磷酸二氢铵溶液的体积，使得所述流动相A的体积占流动相总量的百分比由75%-85%降低至35%-45%，接着升高至75%-85%；

其中，所述混合对照品溶液是通过将醋酸氯己定对照品和对氯苯胺对照品混合制成；

在线性梯度洗脱所述混合对照品溶液和所述供试品溶液时：

t=0min~20min时，所述流动相A为75%-85%→45%-55%，所述流动相B为15%-25%→45%-55%；

t=20min~25min时，所述流动相A为45%-55%→35%-45%，所述流动相B为45%-55%→55%-65%；

t=25min~35min时，所述流动相A为35%-45%，所述流动相B为55%-65%；

t=35min~37min时，所述流动相A为35%-45%→75%-85%，所述流动相B为55%-65%→15%-25%；

t=37min~45min时，所述流动相A为75%-85%，所述流动相B为15%-25%；

所述色谱条件还包括：在0-22min时，检测波长为240-250nm，在22-45min时，检测波长为255-265nm；所述色谱条件所用的色谱柱为Waters XBridge Shield RP18色谱柱。

2.根据权利要求1所述的同时测定葡萄糖酸氯己定和对氯苯胺含量的方法，其特征在于，在线性梯度洗脱所述混合对照品溶液和所述供试品溶液：

t=0min~20min时，所述流动相A为80%→50%，所述流动相B为20%→50%；

t=20min~25min时，所述流动相A为50%→40%，所述流动相B为50%→60%；

t=25min~35min时，所述流动相A为40%，所述流动相B为60%；

t=35min~37min时，所述流动相A为40%→80%，所述流动相B为60%→20%；

t=37min~45min时，所述流动相A为80%，所述流动相B为20%。

3.根据权利要求1所述的同时测定葡萄糖酸氯己定和对氯苯胺含量的方法，其特征在于，所述色谱柱的理论板数按对氯苯胺峰计算不低于2000。

4.根据权利要求1所述的同时测定葡萄糖酸氯己定和对氯苯胺含量的方法，其特征在于，所述流动相A的制备方法包括：取磷酸二氢铵置于水中，超声溶解，接着用磷酸溶液调节pH至3-4，接着过滤直至脱气。

5.根据权利要求4所述的同时测定葡萄糖酸氯己定和对氯苯胺含量的方法，其特征在于，所述流动相A中磷酸二氢铵的浓度为1-2g/L。

6.根据权利要求4所述的同时测定葡萄糖酸氯己定和对氯苯胺含量的方法，其特征在于，在对所述流动相A过滤时采用0.45 μm的膜滤器过滤8-12min。

7.根据权利要求1所述的同时测定葡萄糖酸氯己定和对氯苯胺含量的方法，其特征在于，所述供试品溶液的制备包括：取供试品加入稀释液，置于70-90℃水浴中加热，振摇使所述供试品溶解，放冷后，用稀释液稀释至刻度，摇匀，置冰浴中冷却2小时以上，取出后滤过，续滤液放冷，将浓度为0.08-0.12mg/ml的放冷后的续滤液作为供试品溶液。

8.根据权利要求1所述的同时测定葡萄糖酸氯己定和对氯苯胺含量的方法，其特征在于，每1ml所述混合对照品溶液中含有所述葡萄糖酸氯己定0.05-0.15mg和所述对氯苯胺0.2-0.3µg。

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