CN104237408A - 复方氯己定达克罗宁乳膏的检测方法 - Google Patents

Abstract

本发明公开了复方氯己定达克罗宁乳膏的检测方法。本发明分别对制剂中的盐酸氯已定、盐酸达克罗宁采用HPLC法进行含量测定，对冰片采用气相色谱法进行含量测定；对制剂中冰片、橄榄果水醇提取膏进行薄层色谱鉴别，盐酸氯己定、盐酸达克罗宁进行液相保留时间鉴别。与现有技术相比，方法专属、可行，重现性好，能够有效地控制复方氯己定达克罗宁乳膏的质量，经多次重复试验，确认本检测方法稳定、简便、结果准确、重现性良好，可作为复方氯己定达克罗宁乳膏的检测方法和考察工艺的稳定性的指标。

Description

复方氯己定达克罗宁乳膏的检测方法

技术领域

本发明涉及一种复方制剂的检测方法，特别涉及复方氯己定达克罗宁乳膏的检测方法。

技术背景

复方氯己定达克罗宁乳膏是由盐酸氯已定、橄榄果水醇提取膏、冰片、盐酸达克罗宁以及辅料薄荷脑、甜菊苷等均匀分散于适宜基质中制成的乳膏剂，为皮肤外用药，用于口腔黏膜溃疡、牙龈炎、咽炎。收载于化学药品地标升国标14册148页，标准号为WS-10001-(HD-1354)-2003。

原标准中，仅对盐酸氯已定采用显色鉴别，对冰片采用薄层鉴别，质控方法较为简单，有效成分含量也不清楚，鉴别方法专属性和准确度不强。在进一步研究中，我们发现，冰片薄层鉴别方法中采用水溶液水浴加热放冷、氯仿提取的方法制备供试品溶液，在水浴加热放冷后样品呈凝胶状，无法操作，且加上氯仿萃取过于繁琐，需要简单、可行、准确的鉴别方法来加以替代；复方氯己定达克罗宁乳膏处方中，盐酸氯已定、冰片和盐酸达克罗宁均为产品的主要有效成分，但现有检测方法并没有对处方中上述成分进行含量测定，因此不能很好地保证产品质量，从而影响产品的工艺稳定性考察和疗效的确定，对产品质量造成隐患。因此，需要进一步提升对产品的质量控制，获取更好的检测方法。

为全面有效控制产品的质量，保证疗效，我们提出复方氯己定达克罗宁乳膏的检测方法，在现有技术的基础上，增加盐酸氯已定、冰片和盐酸达克罗宁的含量测定，增加对盐酸氯已定和盐酸达克罗宁的液相保留时间鉴别和对橄榄果水醇提取膏的薄层鉴别，修改冰片薄层鉴别方法中供试品溶液的制备方法。本发明方法专属、可行，重现性好，保证了质量检测标准的准确性和先进性，能够有效地控制复方氯己定达克罗宁乳膏的质量。该检测方法精密度、灵敏度、稳定性均好，确保产品质量的“均一、稳定、有效、可控”。

发明内容

本发明的目的在于，提供一种操作简单、成本低廉、适合于大量使用饲用酒糟的保存方法。具体技术方案如下：

复方氯己定达克罗宁乳膏的检测方法，是对性状进行观察，根据药典的方法对内容物进行检查，对产品中盐酸氯已定、盐酸达克罗宁、冰片进行含量测定，对冰片、橄榄果水醇提取膏、盐酸氯已定、盐酸达克罗宁进行鉴别，对橄榄果水醇提取膏进行检测。

其中，含量测定的检测方法是：以盐酸氯已定、盐酸达克罗宁对照品为对照，以比例为60-70:30-40:12的0.012mmol/L庚烷磺酸钠甲醇溶液-水-冰醋酸为流动相，照HPLC法测定产品中盐酸氯已定、盐酸达克罗宁的含量；以冰片对照品为对照，以改性聚乙二醇20000FFAP为固定相，照气相色谱法测定产品中冰片的含量；鉴别的检测方法是：以冰片对照品为对照、以苯：醋酸乙酯＝5-9∶1-5为展开剂，照薄层色谱法鉴别冰片；以食子酸对照品为对照、以环己烷：乙酸乙酯：甲酸＝6-10∶4-8∶0.5-2为展开剂，照薄层色谱法鉴别橄榄果水醇提取膏中的橄榄提取物。

具体地说，含量测定的检测方法是：

(1)盐酸氯己定、盐酸达克罗宁：照中国药典2010年版二部附录ⅤD高效液相色谱法测定：

色谱条件与系统适用性试验：用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以0.012mol/L庚烷磺酸钠甲醇溶液：水：冰醋酸＝60-70:30-40:12为流动相，柱温为25℃，检测波长为285nm，理论塔板数均应不低于2000；

测定法：取本品，相当于盐酸氯己定5mg，精密称定，置100ml具塞锥形瓶中，精密加入流动相50ml，密塞，称定重量，60-70℃水浴加热30分钟，取出，放冷，用流动相补足减失的重量，摇匀，滤过，精密量取续滤液10μl，注入液相色谱仪，记录色谱图；另精密称取盐酸氯己定、盐酸达克罗宁对照品适量，用流动相溶解并定量稀释制成每1ml中分别约含0.1mg、0.015mg的溶液，同法测定；按外标法以峰面积计算，即得，出峰顺序为盐酸达克罗宁、盐酸氯己定；

(2)冰片：照中国药典2010年版二部附录ⅤE气相色谱法测定：

色谱条件与系统适用性试验：以改性聚乙二醇20000FFAP为固定相的毛细管柱，柱长为30m，内径为0.53mm，膜厚为1.0um；柱温为程序升温，初始温度为100-120℃，保持15分钟，再以每分钟50℃的速率升温至200-250℃，保持25分；分流进样，进样口温度200-240℃，检测器温度240-280℃；理论版数按龙脑峰计算应不低于3500；

校正因子的测定：取萘适量，精密称定，加乙酸乙酯溶解并稀释制成每1ml中含0.4mg的溶液，摇匀，作为内标溶液；另称取冰片对照品30mg，精密称定，置50ml量瓶中，加乙酸乙酯溶解并稀释制成每1ml中含0.6mg的溶液，摇匀，作为对照品贮备液；再精密量取对照品贮备液4ml置20ml量瓶中，精密加内标溶液5ml，用乙酸乙酯稀释至刻度，摇匀；吸取1μl注入气相色谱仪，测定，计算校正因子；

测定法：取本品1.2g，精密称定，量具塞锥形瓶中，精密加乙酸乙酯15ml，密塞，称定重量，50℃水浴加热3分钟，边加热边振摇使冰片溶解，迅速移置冰浴中冷却10分钟，取出，用乙酸乙酯补足减失的重量，再精密加入内标溶液5ml，摇匀，迅速滤过，弃去初滤液，取续滤液，即得，作为供试品溶液；吸取1μl注入气相色谱仪，测定，冰片以龙脑峰、异龙脑峰面积之和计算，即得。

具体地说，鉴别的检测方法是：

(1)取本品3g，置具塞锥形瓶中，加正己烷20ml，置65℃热水浴中使溶解，放冷，置冰箱中冷冻20分钟，取出，立即滤过，滤液置65℃上水浴挥干，残渣加乙醇5ml使溶解作为供试溶液；另取冰片对照品适量加乙醇制成每1ml中含1mg的溶液作为对照品溶液；照薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各10μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，用苯：醋酸乙酯＝5-9∶1-5作展开剂，展开后晾干，喷以香草醛硫酸试液，晾干，在105℃下加热至斑点显色清晰；供试品色谱中，在与对照品色谱相应位置上显相同颜色的斑点；

(2)取本品10g，加50％乙醇100ml，置65℃水浴中使溶解，放冷，4000转/分钟的条件下离心10分钟，上清液加5％硫酸溶液30ml，水浴水解30分钟，滤过，滤液转移至分液漏斗中，用乙酸乙酯提取3次，每次30ml，合并乙酸乙酯液，水浴蒸干，残渣加乙醇1ml溶解，作为供试品溶液；另取没食子酸对照品适量，加乙醇制成每1ml含0.5mg的溶液，作为对照品溶液；照薄层色谱法试验，吸取上述三种溶液各10μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以环己烷：乙酸乙酯：甲酸＝6-10∶4-8∶0.5-2为展开剂，展开，取出，晾干，喷以2％三氯化铁乙醇溶液，在105℃的烘箱中加热至斑点显色清晰；供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上显相同颜色的斑点；

(3)在含量测定项下记录的色谱图中，供试品溶液中盐酸氯己定、盐酸达克罗宁的保留时间应与对照品溶液中盐酸氯己定、盐酸达克罗宁的保留时间一致。

具体地说，橄榄果水醇提取膏的检测方法为：

(1)橄榄果水醇提取膏的制备：取橄榄果1000g，破碎，浸润1h，加6-8倍量的50-60％乙醇回流提取2-4次，每次1-2小时，过滤，合并滤液，回收乙醇至无醇味，浓缩至80℃相对密度为1.20-1.25的稠膏，放冷，即得；

(2)性状：本品为棕色至棕褐色的稠膏，气香，味酸；

(3)鉴别：取本品1g，加5％硫酸溶液30ml,水浴水解30分钟，用乙酸乙酯提取3次，每次20ml，合并乙酸乙酯液，水浴蒸干，残渣加乙醇1ml溶解，作为供试品溶液；另取没食子酸对照品适量，加乙醇制成每1ml含0.5mg的溶液，作为对照品溶液；照薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各10μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以环己烷：乙酸乙酯：甲酸＝6-10∶4-8∶0.5-2为展开剂，展开，取出，晾干，喷以2％三氯化铁乙醇溶液，在105℃的烘箱中加热至斑点显色清晰；供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上显相同颜色的斑点；

(4)检查：相对密度：取本品，搅匀，精密称取10g，加水2倍，精密称定，混匀，作为供试品溶液；照中国药典2010版附录ⅦA相对密度测定法测定，应在1.10-1.30之间；

总固体：取本品，搅匀，精密称取2g，置已干燥至恒重的蒸发皿中，在105℃的烘箱中干燥3小时，移置干燥器中，冷却30分钟，迅速称定重量，遗留残渣不得少于45.0％。

本发明技术方案具有以下有益效果：

1、在鉴别方法中，原标准中采用显色反应来鉴别盐酸氯已定，本发明采用液相保留时间鉴别，提高了鉴别的专属性；另外在冰片的鉴别中，原标准供试品溶液的制备采用水浴加热溶解，但放冷后样品呈凝胶状，无法操作，本发明改为正己烷水浴加热，放冷后置于冰箱冷冻，过滤、水浴挥干、乙醇溶解等制备步骤，既简化了操作步骤，又使得鉴别方法稳定、重现性良好。

2、原标准中仅对盐酸氯己定、冰片进行定性鉴别控制，没有对产品的有效成分进行含量测定控制。本发明增加橄榄果水醇提取膏的薄层鉴别，对盐酸氯己定、盐酸达克罗宁、冰片的含量测定，提高了产品质量标准，更加全面有效地对产品进行质量检验。

3、本发明方法与现有技术相比，方法专属、可行，重现性好，能够有效地控制复方氯己定达克罗宁乳膏的质量，经多次重复试验，确认本检测方法稳定、简便、结果准确、重现性良好，可作为复方氯己定达克罗宁乳膏的检测方法和考察工艺的稳定性的指标。

下面通过试验对本发明进行进一步的说明，所述实验方法和试剂、材料，如无特殊说明，均为常规方法和商业途径可以获得。

实验1、含量测定方法研究

1.1盐酸氯己定、盐酸达克罗宁

1.1.1仪器与试药

仪器：岛津20AT高效液相色谱仪，岛津UV1700紫外分光光度计；赛多利斯CPA225D电子天平(十万分之一)。

试剂与试药：盐酸氯己定对照品(中国药品生物制品检定所，批号：100400-201001，含量99.0％)、盐酸达克罗宁(中国药品生物制品检定所，批号：100423-200901，含量99.7％)，复方氯己定达克罗宁乳膏样品为本公司试制产品。甲醇(色谱纯)，冰醋酸、庚烷磺酸钠(分析纯)。

1.1.2参数的选择

①流动相的选择

A：以乙腈-0.05mol/L磷酸二氢钾溶液(含0.7％庚烷磺酸钠、0.4％三乙胺，用磷酸调pH3.0)(35∶65)为流动相，试验发现盐酸氯己定峰仅在经惰性处理的C18柱上出峰，在普通C18柱上洗脱不下来；B：以0.012mol/L庚烷磺酸钠甲醇溶液-水-冰醋酸(60∶40∶12)为流动相，试验发现适用于普通C18柱，且峰型对称，出峰时间短；C：以乙腈-水-三乙胺-冰醋酸(35:65:0.5:0.25)为流动相，试验发现峰形有拖尾，分离效果不好。

故选择0.012mol/L庚烷磺酸钠甲醇溶液-水-冰醋酸为测定盐酸氯己定、盐酸达克罗宁含量用流动相。

②流动相比例的选择

分别以(63∶37∶12)、(66∶34∶12)、(68∶32∶12)、(70∶30∶12)、(73∶37∶12)、(60∶40∶12)不同比例对本品含量测定进行考察，实验发现(73∶37∶12)为流动相杂质峰分离度不合规定，在(60-70：30-40:12)范围内效果良好，其中(66∶34∶12)比例流动相杂质峰分离度最好。

③提取溶剂的选择

分别以乙腈-2％磷酸溶液(50∶50)、流动相为溶剂对样品含量进行测定，试验结果表明以流动相为提取溶剂，盐酸氯己定、盐酸达克罗宁测定含量较高，滤过速度快，故选择流动相位本品含量测定提取溶剂。结果见表1：

表1提取溶剂的选择

1.1.3色谱条件的选择、系统适用性试验

采用AgilentZORBAXSBC18(4.6×125mm)色谱柱，以0.012mol/L庚烷磺酸钠甲醇溶液-水-冰醋酸(66∶34∶12)为流动相，检测波长为285nm，柱温为25℃，测定效果较好。紫外扫描光谱表明：盐酸氯己定在200～300nm有紫外吸收，最大吸收波长为259.5nm；盐酸达克罗宁在250～350nm紫外吸收，最大吸收波长为285.8nm，由于盐酸达克罗宁在本品种含量较低，故选择盐酸达克罗宁的最大吸收波长作为本品的测定波长。按上述色谱条件测定制剂中盐酸氯己定、盐酸达克罗宁的含量，盐酸氯己定、盐酸达克罗宁峰拖尾因子、分离度符合要求。理论板数均不得低于3000。

1.1.4专属性试验

标准制备工艺条件下，制备分别缺盐酸氯己定、盐酸达克罗宁及同时缺盐酸氯己定、盐酸达克罗宁的阴性样品，按上述色谱条件检测，阴性样品在相应位置未见吸收峰；测定样品中盐酸氯己定、盐酸达克罗宁峰的保留时间，与对照品溶液中盐酸氯己定、盐酸达克罗宁峰的保留时间一致。

1.1.5线性关系的考察

精密称取盐酸达克罗宁对照品15.76mg置100ml容量瓶中，用流动相溶解并稀释至刻度，制成每1ml含盐酸达克罗宁0.1571mg的对照品储备液，备用；另精密称取盐酸氯己定对照品25.60mg置250ml容量瓶中，精密加入盐酸达克罗宁对照品储备液25ml使溶解，用流动相稀释至刻度，制成每1ml含盐酸氯己定、盐酸达克罗宁分别为0.1014mg、0.01571mg的混合对照品溶液。分别精密量取上述对照品溶液各1μl、4μl、7μl、10μl、13μl、16μl、20μl注入液相色谱仪，记录色谱图，以进样量X(μg)为横坐标，峰面积Y(mv)纵坐标，作图，盐酸氯己定回归方程Y＝1×10⁶X-13309，相关系数r＝0.99999；盐酸达克罗宁回归方程Y＝4×10⁶X-8023.6，相关系数r＝0.99999，以对照品测定所得峰面积代入前述回归方程计算含量，所得结果与真实含量平均偏差小于1％，故可认为标准曲线近似过原点。由此含量测定可采用外标一点法计算(见表2)。

试验结果表明∶盐酸氯己定在0.1014μg～2.028μg范围内有良好的线性关系；盐酸达克罗宁在0.01571μg～0.3142μg范围内有良好的线性关系。

表2盐酸氯己定、盐酸达克罗宁线性关系考察

1.1.6精密度、稳定性、重复性、加样回收试验

精密量取同一混合对照品溶液(盐酸氯己定:0.1014mg/ml、盐酸达克罗宁：0.01571mg/ml)10μl，连续进样6次，记录色谱图，峰面积相对标准偏差(RSD)分别为0.45％、0.33％，试验结果表明精密度良好；

取同一供试品溶液，分别于0h、2h、4h、6h、8h，进样5次，峰面积相对标准偏差(RSD)分别为0.41％、0.37％。试验结果表明，供试品溶液在12小时内稳定性良好；

取同一生产批次的样品6份，精密称取1g，按含量测定项下的方法进行测定，记录色谱图，计算盐酸氯己定、盐酸达克罗宁含量：平均含量分别为4.96mg/g、0.71mg/g，RSD分别为0.88％、0.99％；试验结果表明，重复性良好；

取同一生产批次的样品9份，精密量取0.5g，置100ml具塞锥形瓶中，按样品含量与加入对照品的量比例为80％、100％、120％，精密加入含盐酸氯己定、盐酸达克罗宁分别0.1014mg/ml、0.01571mg/ml的混合对照品溶液20ml、25ml、30ml，按含量测定项下的方法进行测定，记录色谱图，计算回收率：平均回收率分别为98.86％、98.82％，RSD分别为0.95％、0.88％；试验结果表明，回收率良好。

1.1.7样品含量测定

采用本发明方法测定10个批号样品的含量，见表3-4。

表3盐酸氯己定含量测定结果

表4盐酸达克罗宁含量测定结果

1.2冰片

1.2.1仪器与试药

仪器：岛津GC-14C气相色谱仪；FID检测器；Chromato-Solution Light色谱数据工作站；色谱柱(兰州中科安泰分析科技有限责任公司生产，FFAP毛细管色谱柱30m×0.53mm×1.0um)；赛多利斯CPA225D电子天平(十万分之一)。

试剂与试药：乙酸乙酯(分析纯)，萘(分析纯)；冰片对照品(中国药品生物制品检定所批号110743-200905)；复方氯己定达克罗宁乳膏样品为公司自制产品。

1.2.2参数的选择

①提取溶剂的选择

以正己烷和乙酸乙酯对同一批样品进行测定，正己烷为溶剂，样品基质不能较好的分散，有粘结现象；以乙酸乙酯为溶剂，基质容易分散，且含量比用正己烷提取时高，故选择乙酸乙酯为溶剂。结果见表5。

表5提取溶剂的选择

②前处理方法的确定

振摇提取使基质分散约需1至2小时，太耗时。所以采取短时间水浴加热的方式提取。

水浴温度的选择：45℃、50℃、55℃；加热时间的确定：3分钟、7分钟。结果见表6。

表6前处理方法的确定

故样品前处理采用50℃水浴加热3分钟。

③柱温、进样口、检测器的选择

采用恒温分析，样品高沸点物质不易流出，易污染色谱柱。故用程序升温。

初始温度在120℃时冰片及内标与相邻杂质峰分离度不理想，柱温为110℃样品中各组分的分离度较好，故初始温度选择110℃。

检测器温度260℃与280℃所出色谱峰一致，260℃时冰片峰及内标峰与基线分离良好，故选择检测器260℃。

进样口温度210℃与220℃所出色谱峰一致，220℃时冰片峰及内标峰理论塔板数较210℃时高，且不易污染进样口，故选择进样口温度220℃。

④内标物质的选择

分别以水杨酸甲酯和萘为内标，其中以水杨酸甲酯为内标，在水杨酸甲酯保留时间的相应位置有峰且与相邻杂质峰分离度不符合规定，而以萘为内标，在无内标物质的样品溶液色谱图中，萘的相应位置无干扰且与相邻杂质峰分离较好，故选择萘为内标。

1.2.3色谱条件的选择、系统适用性试验

采用聚乙二醇-2M-2-硝基对苯二甲酸酯为固定液的毛细管色谱柱(30m×0.53mm×1.0μm)；柱温：为程序升温，初始温度为110℃，保持15分钟，再以每分钟50℃的速率升温至230℃，保持25分钟。检测器：FID；检测器温度：260℃；进样口温度：220℃；载气：氮气，45kpa；氢气：55kpa,空气：45kpa；进样量1μl，分流进样，分流比4∶1。理论版数按龙脑峰计算应不低于3500。在该色谱条件下，冰片、萘与其他成分能较好的分离。阴性样品无干扰。

按上述色谱条件测定制剂中冰片的含量，冰片含量以异龙脑、龙脑峰面积之和计算，出峰顺序依次为异龙脑、龙脑、萘，保留时间分别为7.4分钟、8.6分钟、10.0分钟。冰片峰及内标峰拖尾因子、分离度均符合要求。理论板数按龙脑峰计算应不低于3500。

1.2.4专属性试验

按复方氯己定达克罗宁乳膏的标准制备工艺，制备不含冰片的阴性样品，按上述色谱条件检测，阴性样品无干扰；测定样品中冰片峰的保留时间，与对照品溶液中冰片峰的保留时间一致。

1.2.5对照品溶液、内标溶液及供试品溶液的制备

精密称取萘100.1mg，置250ml量瓶中，加乙酸乙酯制成1ml含0.4004mg的溶液，作为内标溶液；另精密称取冰片对照品(110743-200905)60.15mg，置100ml量瓶中，加乙酸乙酯溶解制成1ml含0.6015mg的溶液，作为对照品贮备液；再精密量取对照品贮备液4ml置20ml量瓶中，加入内标溶液5ml，用乙酸乙酯稀释至刻度，摇匀，即得，制成1ml含0.1203mg的溶液，作为对照品溶液。

取本品1.2g，精密称定，量具塞锥形瓶中，精密加乙酸乙酯15ml，密塞，称定重量，50℃水浴加热3分钟，边加热边振摇使冰片溶解，迅速移置冰浴中冷却10分钟，取出，用乙酸乙酯补足减失的重量，再精密加入内标溶液5ml，摇匀，迅速滤过，弃去初滤液，取续滤液，即得，作为供试品溶液。

1.2.6线性关系的考察

分别精密量取“1.2.5”项下的对照品贮备液1ml、2ml、3ml、4ml、5ml、6ml、7ml，置20ml量瓶中，精密加入内标溶液5ml，用乙酸乙酯稀释至刻度，摇匀，备用。按上述色谱条件依次进样，分别吸取上述溶液1μl注入气相色谱仪，记录色谱图，以冰片对照品浓度X(mg/ml)为横坐标，冰片峰面积/内标峰面积的比值Y为纵坐标，作图，绘制标准曲线，得到基本过原点的直线方程，回归方程Y＝7.7496X-0.008，相关系数r＝1，以对照品测定所得峰面积/内标峰面积的比值代入前述回归方程计算含量，所得结果与真实含量平均偏差小于1％，故可认为标准曲线近似过原点。结果见表7。

表7冰片线性关系考察

结果表明：冰片在0.030075～0.210525mg/ml范围内与其峰面积/内标峰面积比值具有良好的线性关系。由此含量测定可采用内标法计算。

1.2.7精密度、稳定性、重复性、加样回收试验

精密量取“1.2.5”项下的对照品溶液1μl，连续进样6次，记录色谱图，冰片峰与内标峰比值的相对标准偏差(RSD)为0.39％，试验结果表明仪器精密度良好；

取同一供试品溶液，分别于0h、3h、6h、9h、12h，连续进样5次，冰片峰与内标峰面积的比值其相对标准偏差(RSD)为0.29％。试验结果表明，供试品溶液在12小时内稳定性良好；

取同一生产批次样品6份，分别精密称取1.2g，按含量测定项下的方法进行测定，记录色谱图，计算冰片含量：平均含量为2.0167mg/g，相对标准偏差(RSD)为1.76％；试验结果表明，重复性良好；

取同一生产批次缺冰片的阴性样品9份，精密称取取1.2g，按重复性试验样品中冰片含量，加入对照品的量比例为80％、100％、120％。精密称取冰片对照品(批号110743-200905)64.10mg置100ml量瓶中，用乙酸乙酯溶解并稀释至刻度，摇匀，作为回收率试验对照品贮备液；再精密量取贮备液20ml、25ml、30ml分别置100ml量瓶中，用乙酸乙酯稀释到刻度，摇匀，分别作为三个浓度回收率试验的对照品溶液；分别精密量取15ml加入回收率试验的样品中，按含量测定项下的方法进行测定，记录色谱图，计算平均回收率为99.94％，RSD为0.70％。试验结果表明，回收率良好。

1.2.8样品含量测定

采用本发明方法测定10个批号样品的含量，见表8。

表8冰片含量测定结果

含量测定结果表明，采用本发明所述的含量测定方法，即本发明所述的供试品制备方法、流动相、色谱参数等条件和参数，对样品中盐酸氯已定、盐酸达克罗宁、冰片的含量进行检测，方法专属性高，稳定性、重复性良好，可有效检验所需有效成分的含量，更好的控制产品质量。

实验2、鉴别方法研究

2.1盐酸氯已定、盐酸达克罗宁鉴别

盐酸氯已定可与溴进行颜色反应，质量研究初期作为乳膏中盐酸氯已定的定性检测指标，但专属性不强，且定性鉴别不如定量鉴别灵敏、准确，通过对盐酸氯已定、盐酸达克罗宁的含量测定研究，获得非常适合于本乳膏中该两种有效成分含量测定方法，同时利用HPLC法对盐酸氯已定、盐酸达克罗宁进行保留时间鉴别，即简化了鉴别操作，又可获得专属性、灵敏度、准确度更高的鉴别方法。

2.2橄榄果水醇提取膏的薄层鉴别

橄榄果水醇提取膏是由橄榄果在50-60％的乙醇溶液中回流提取而得，该橄榄果提取物作为复方氯已定达克罗宁乳膏中另一主要成分，在此前的质量标准中并未进行检测，本发明通过对橄榄果提取物的检测方法进行研究，针对单独的橄榄果水醇提取膏和乳膏中的橄榄果提取物进行鉴别研究。研究方法及结果如下：

供试品溶液制备方法一：取橄榄果水醇提取膏1g，加入5％硫酸溶液，水浴水解，用乙酸乙酯提取3次，合并提取液，水浴蒸干，残渣加乙醇溶解，作为供试品溶液。同法制得阴性样品溶液。

供试品溶液制备方法二：取橄榄果水醇提取膏1g，加入甲醇溶液，超声振荡，用乙酸乙酯提取3次，合并提取液，水浴蒸干，残渣加乙醇溶解，作为供试品溶液。同法制得阴性样品溶液。

供试品溶液制备方法三：取橄榄果水醇提取膏1g，加入甲醇溶液，超声振荡，用氯仿提取3次，合并提取液，静置分层，取上清液，作为供试品溶液。同法制得阴性样品溶液。

供试品溶液制备方法四：取橄榄果水醇提取膏1g，加入5％硫酸溶液，水浴水解，用氯仿提取3次，合并提取液，静置分层，取上清液，作为供试品溶液。同法制得阴性样品溶液。

展开剂选择：分别以乙酸乙酯、环己烷不同比例的混合溶液；以石油醚(60-90℃)、乙酸乙酯、氯仿不同比例的混合溶液；以乙酸乙酯、环己烷、甲酸不同比例的混合溶液；以乙腈、水不同比例的混合溶液为展开剂。

结果：采用方法一制备供试品溶液，以环己烷：乙酸乙酯：甲酸＝6-10：4-8：0.5-2为展开剂，分离效果好，斑点清晰，阴性对照无干扰，方法重现性好。最佳展开剂为环己烷：乙酸乙酯：甲酸＝8：6：1。

具体实施方式：

以下通过实施例进一步说明本发明，但不作为对本发明的限制。

实施例1复方氯已定达克罗宁乳膏检测方法

【性状】本品为浅棕色至棕色的乳膏；

【鉴别】(1)取本品3g，置具塞锥形瓶中，加正己烷20ml，置65℃热水浴中使溶解，放冷，置冰箱中冷冻20分钟，取出，立即滤过，滤液置65℃上水浴挥干，残渣加乙醇5ml使溶解作为供试溶液；另取冰片对照品适量加乙醇制成每1ml中含1mg的溶液作为对照品溶液；照中国药典2010年版二部附录VB薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各10μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，用苯：醋酸乙酯＝9∶1作展开剂，展开后晾干，喷以香草醛硫酸试液，晾干，在105℃下加热至斑点显色清晰；供试品色谱中，在与对照品色谱相应位置上显相同颜色的斑点；

(2)取本品10g，加50％乙醇100ml，置65℃水浴中使溶解，放冷，操作过程中切忌振摇，4000转/分钟离心10分钟，上清液加5％硫酸溶液30ml，水浴水解30分钟，滤过，滤液转移至分液漏斗中，用乙酸乙酯提取3次，每次30ml，合并乙酸乙酯液，水浴蒸干，残渣加乙醇1ml溶解，作为供试品溶液；另取没食子酸对照品适量，加乙醇制成每1ml含0.5mg的溶液，作为对照品溶液；照中国药典2010年版二部附录VB薄层色谱法试验，吸取上述三种溶液各10μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以环己烷：乙酸乙酯：甲酸＝8∶6∶1为展开剂，展开，取出，晾干，喷以2％三氯化铁乙醇溶液，在105℃的烘箱中加热至斑点显色清晰；供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上显相同颜色的斑点；

(3)在含量测定项下记录的色谱图中，供试品溶液中盐酸氯己定、盐酸达克罗宁的保留时间应与对照品溶液中盐酸氯己定、盐酸达克罗宁的保留时间一致；

【检查】应符合乳膏剂项下有关的各项规定；

【含量测定】

(1)盐酸氯己定、盐酸达克罗宁：照中国药典2010年版二部附录ⅤD高效液相色谱法测定：

色谱条件与系统适用性试验：用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以0.012mol/L庚烷磺酸钠甲醇溶液：水：冰醋酸＝66∶34∶12为流动相，柱温为25℃，检测波长为285nm，理论塔板数均应不低于2000；

测定法：取本品，相当于盐酸氯己定5mg，精密称定，置100ml具塞锥形瓶中，精密加入流动相50ml，密塞，称定重量，65℃水浴加热30分钟，取出，放冷，用流动相补足减失的重量，摇匀，滤过，精密量取续滤液10μl，注入液相色谱仪，记录色谱图；另精密称取盐酸氯己定、盐酸达克罗宁对照品适量，用流动相溶解并定量稀释制成每1ml中分别约含0.1mg、0.015mg的溶液，同法测定；按外标法以峰面积计算，即得，出峰顺序为盐酸达克罗宁、盐酸氯己定；

(2)冰片：照中国药典2010年版二部附录ⅤE气相色谱法测定：

色谱条件与系统适用性试验：以改性聚乙二醇20000FFAP为固定相的毛细管柱，柱长为30m，内径为0.53mm，膜厚为1.0um；柱温为程序升温，初始温度为110℃，保持15分钟，再以每分钟50℃的速率升温至230℃，保持25分；分流进样，进样口温度220℃，检测器温度260℃；理论版数按龙脑峰计算应不低于3500；

校正因子的测定：取萘适量，精密称定，加乙酸乙酯溶解并稀释制成每1ml中含0.4mg的溶液，摇匀，作为内标溶液；另称取冰片对照品30mg，精密称定，置50ml量瓶中，加乙酸乙酯溶解并稀释制成每1ml中含0.6mg的溶液，摇匀，作为对照品贮备液；再精密量取对照品贮备液4ml置20ml量瓶中，精密加内标溶液5ml，用乙酸乙酯稀释至刻度，摇匀；吸取1μl注入气相色谱仪，测定，计算校正因子；

测定法：取本品1.2g，精密称定，量具塞锥形瓶中，精密加乙酸乙酯15ml，密塞，称定重量，50℃水浴加热3分钟，边加热边振摇使冰片溶解，迅速移置冰浴中冷却10分钟，取出，用乙酸乙酯补足减失的重量，再精密加入内标溶液5ml，摇匀，迅速滤过，弃去初滤液，取续滤液，即得，作为供试品溶液；吸取1μl注入气相色谱仪，测定，冰片以龙脑峰、异龙脑峰面积之和计算，即得；

实施例2复方氯已定达克罗宁乳膏检测方法

【性状】本品为浅棕色至棕色的乳膏；

【鉴别】(1)取本品3g，置具塞锥形瓶中，加正己烷20ml，置65℃热水浴中使溶解，放冷，置冰箱中冷冻20分钟，取出，立即滤过，滤液置65℃上水浴挥干，残渣加乙醇5ml使溶解作为供试溶液；另取冰片对照品适量加乙醇制成每1ml中含1mg的溶液作为对照品溶液；照中国药典2010年版二部附录VB薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各10μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，用苯：醋酸乙酯＝5∶5作展开剂，展开后晾干，喷以香草醛硫酸试液，晾干，在105℃下加热至斑点显色清晰；供试品色谱中，在与对照品色谱相应位置上显相同颜色的斑点；

(2)取本品10g，加50％乙醇100ml，置65℃水浴中使溶解，放冷，操作过程中切忌振摇，4000转/分钟离心10分钟，上清液加5％硫酸溶液30ml，水浴水解30分钟，滤过，滤液转移至分液漏斗中，用乙酸乙酯提取3次，每次30ml，合并乙酸乙酯液，水浴蒸干，残渣加乙醇1ml溶解，作为供试品溶液；另取没食子酸对照品适量，加乙醇制成每1ml含0.5mg的溶液，作为对照品溶液；照中国药典2010年版二部附录VB薄层色谱法试验，吸取上述三种溶液各10μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以环己烷：乙酸乙酯：甲酸＝6∶4∶0.5为展开剂，展开，取出，晾干，喷以2％三氯化铁乙醇溶液，在105℃的烘箱中加热至斑点显色清晰；供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上显相同颜色的斑点；

(3)在含量测定项下记录的色谱图中，供试品溶液中盐酸氯己定、盐酸达克罗宁的保留时间应与对照品溶液中盐酸氯己定、盐酸达克罗宁的保留时间一致；

【检查】应符合乳膏剂项下有关的各项规定；

【含量测定】

(1)盐酸氯己定、盐酸达克罗宁：照中国药典2010年版二部附录ⅤD高效液相色谱法测定：

色谱条件与系统适用性试验：用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以0.012mol/L庚烷磺酸钠甲醇溶液：水：冰醋酸＝70∶30∶12为流动相，柱温为25℃，检测波长为285nm，理论塔板数均应不低于2000；

测定法：取本品，相当于盐酸氯己定5mg，精密称定，置100ml具塞锥形瓶中，精密加入流动相50ml，密塞，称定重量，60℃水浴加热30分钟，取出，放冷，用流动相补足减失的重量，摇匀，滤过，精密量取续滤液10μl，注入液相色谱仪，记录色谱图；另精密称取盐酸氯己定、盐酸达克罗宁对照品适量，用流动相溶解并定量稀释制成每1ml中分别约含0.1mg、0.015mg的溶液，同法测定；按外标法以峰面积计算，即得，出峰顺序为盐酸达克罗宁、盐酸氯己定；

(2)冰片：照中国药典2010年版二部附录ⅤE气相色谱法测定：

色谱条件与系统适用性试验：以改性聚乙二醇20000FFAP为固定相的毛细管柱，柱长为30m，内径为0.53mm，膜厚为1.0um；柱温为程序升温，初始温度为100℃，保持15分钟，再以每分钟50℃的速率升温至200℃，保持25分；分流进样，进样口温度200℃，检测器温度240℃；理论版数按龙脑峰计算应不低于3500；

校正因子的测定：取萘适量，精密称定，加乙酸乙酯溶解并稀释制成每1ml中含0.4mg的溶液，摇匀，作为内标溶液；另称取冰片对照品30mg，精密称定，置50ml量瓶中，加乙酸乙酯溶解并稀释制成每1ml中含0.6mg的溶液，摇匀，作为对照品贮备液；再精密量取对照品贮备液4ml置20ml量瓶中，精密加内标溶液5ml，用乙酸乙酯稀释至刻度，摇匀；吸取1μl注入气相色谱仪，测定，计算校正因子；

测定法：取本品1.2g，精密称定，量具塞锥形瓶中，精密加乙酸乙酯15ml，密塞，称定重量，50℃水浴加热3分钟，边加热边振摇使冰片溶解，迅速移置冰浴中冷却10分钟，取出，用乙酸乙酯补足减失的重量，再精密加入内标溶液5ml，摇匀，迅速滤过，弃去初滤液，取续滤液，即得，作为供试品溶液；吸取1μl注入气相色谱仪，测定，冰片以龙脑峰、异龙脑峰面积之和计算，即得；

实施例3复方氯已定达克罗宁乳膏检测方法

【性状】本品为浅棕色至棕色的乳膏；

【鉴别】(1)取本品3g，置具塞锥形瓶中，加正己烷20ml，置65℃热水浴中使溶解，放冷，置冰箱中冷冻20分钟，取出，立即滤过，滤液置65℃上水浴挥干，残渣加乙醇5ml使溶解作为供试溶液；另取冰片对照品适量加乙醇制成每1ml中含1mg的溶液作为对照品溶液；照中国药典2010年版二部附录VB薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各10μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，用苯：醋酸乙酯＝8∶2作展开剂，展开后晾干，喷以香草醛硫酸试液，晾干，在105℃下加热至斑点显色清晰；供试品色谱中，在与对照品色谱相应位置上显相同颜色的斑点；

(2)取本品10g，加50％乙醇100ml，置65℃水浴中使溶解，放冷，操作过程中切忌振摇，4000转/分钟离心10分钟，上清液加5％硫酸溶液30ml，水浴水解30分钟，滤过，滤液转移至分液漏斗中，用乙酸乙酯提取3次，每次30ml，合并乙酸乙酯液，水浴蒸干，残渣加乙醇1ml溶解，作为供试品溶液；另取没食子酸对照品适量，加乙醇制成每1ml含0.5mg的溶液，作为对照品溶液；照中国药典2010年版二部附录VB薄层色谱法试验，吸取上述三种溶液各10μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以环己烷：乙酸乙酯：甲酸＝10∶8∶2为展开剂，展开，取出，晾干，喷以2％三氯化铁乙醇溶液，在105℃的烘箱中加热至斑点显色清晰；供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上显相同颜色的斑点；

(3)在含量测定项下记录的色谱图中，供试品溶液中盐酸氯己定、盐酸达克罗宁的保留时间应与对照品溶液中盐酸氯己定、盐酸达克罗宁的保留时间一致；

【检查】应符合乳膏剂项下有关的各项规定；

【含量测定】

(1)盐酸氯己定、盐酸达克罗宁：照中国药典2010年版二部附录ⅤD高效液相色谱法测定：

色谱条件与系统适用性试验：用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以0.012mol/L庚烷磺酸钠甲醇溶液：水：冰醋酸＝60：40：12为流动相，柱温为25℃，检测波长为285nm，理论塔板数均应不低于2000；

测定法：取本品，相当于盐酸氯己定5mg，精密称定，置100ml具塞锥形瓶中，精密加入流动相50ml，密塞，称定重量，70℃水浴加热30分钟，取出，放冷，用流动相补足减失的重量，摇匀，滤过，精密量取续滤液10μl，注入液相色谱仪，记录色谱图；另精密称取盐酸氯己定、盐酸达克罗宁对照品适量，用流动相溶解并定量稀释制成每1ml中分别约含0.1mg、0.015mg的溶液，同法测定；按外标法以峰面积计算，即得，出峰顺序为盐酸达克罗宁、盐酸氯己定；

(2)冰片：照中国药典2010年版二部附录ⅤE气相色谱法测定：

色谱条件与系统适用性试验：以改性聚乙二醇20000FFAP为固定相的毛细管柱，柱长为30m，内径为0.53mm，膜厚为1.0um；柱温为程序升温，初始温度为120℃，保持15分钟，再以每分钟50℃的速率升温至250℃，保持25分；分流进样，进样口温度240℃，检测器温度280℃；理论版数按龙脑峰计算应不低于3500；

校正因子的测定：取萘适量，精密称定，加乙酸乙酯溶解并稀释制成每1ml中含0.4mg的溶液，摇匀，作为内标溶液；另称取冰片对照品30mg，精密称定，置50ml量瓶中，加乙酸乙酯溶解并稀释制成每1ml中含0.6mg的溶液，摇匀，作为对照品贮备液；再精密量取对照品贮备液4ml置20ml量瓶中，精密加内标溶液5ml，用乙酸乙酯稀释至刻度，摇匀；吸取1μl注入气相色谱仪，测定，计算校正因子；

测定法：取本品1.2g，精密称定，量具塞锥形瓶中，精密加乙酸乙酯15ml，密塞，称定重量，50℃水浴加热3分钟，边加热边振摇使冰片溶解，迅速移置冰浴中冷却10分钟，取出，用乙酸乙酯补足减失的重量，再精密加入内标溶液5ml，摇匀，迅速滤过，弃去初滤液，取续滤液，即得，作为供试品溶液；吸取1μl注入气相色谱仪，测定，冰片以龙脑峰、异龙脑峰面积之和计算，即得；

实施例4：橄榄果水醇提取膏检测方法

取橄榄果1000g，破碎，浸润1h，加50％乙醇回流提取3次，第1次加8倍量回流提取2小时，过滤；第2次加6倍量回流提取1.5小时，过滤；第3次加6倍量回流提取1.5小时，过滤；合并3次滤液，回收乙醇至无醇味，浓缩至80℃相对密度为1.20-1.25的稠膏，放冷，即得；

【性状】本品为棕色至棕褐色的稠膏，气香，味酸；

【鉴别】取本品1g，加5％硫酸溶液30ml,水浴水解30分钟，用乙酸乙酯提取3次，每次20ml，合并乙酸乙酯液，水浴蒸干，残渣加乙醇1ml溶解，作为供试品溶液；另取没食子酸对照品适量，加乙醇制成每1ml含0.5mg的溶液，作为对照品溶液；照薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各10μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以环己烷：乙酸乙酯：甲酸＝8∶6∶1为展开剂，展开，取出，晾干，喷以2％三氯化铁乙醇溶液，在105℃的烘箱中加热至斑点显色清晰；供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上显相同颜色的斑点；

【检查】相对密度：取本品，搅匀，精密称取10g，加水2倍，精密称定，混匀，作为供试品溶液；照中国药典2010版附录ⅦA相对密度测定法测定，应在1.10-1.30之间；

总固体：取本品，搅匀，精密称取2g，置已干燥至恒重的蒸发皿中，在105℃的烘箱中干燥3小时，移置干燥器中，冷却30分钟，迅速称定重量，遗留残渣不得少于45.0％。

表9样品(批号120606)实施例1-4检测方法结果

Claims (7)

1.复方氯己定达克罗宁乳膏的检测方法，是对性状进行观察，根据药典的方法对内容物进行检查，对产品中盐酸氯已定、盐酸达克罗宁、冰片进行含量测定，对冰片、橄榄果水醇提取膏、盐酸氯已定、盐酸达克罗宁进行鉴别，对橄榄果水醇提取膏进行检测；其特征在于，含量测定的检测方法是：以盐酸氯已定、盐酸达克罗宁对照品为对照，以比例为60-70:30-40:12的0.012mmol/L庚烷磺酸钠甲醇溶液-水-冰醋酸为流动相，照HPLC法测定产品中盐酸氯已定、盐酸达克罗宁的含量；以冰片对照品为对照，以改性聚乙二醇20000FFAP为固定相，照气相色谱法测定产品中冰片的含量。

2.如权利要求1所述的复方氯己定达克罗宁乳膏的检测方法，其特征在于：鉴别的检测方法是：以冰片对照品为对照、以苯：醋酸乙酯＝5-9∶1-5为展开剂，照薄层色谱法鉴别冰片；以食子酸对照品为对照、以环己烷：乙酸乙酯：甲酸＝6-10∶4-8∶0.5-2为展开剂，照薄层色谱法鉴别橄榄果水醇提取膏中的橄榄。

3.如权利要求1或2所述的复方氯己定达克罗宁乳膏的检测方法，其特征在于：含量测定的检测方法是：

(1)盐酸氯己定、盐酸达克罗宁：照中国药典2010年版二部附录ⅤD高效液相色谱法测定：

色谱条件与系统适用性试验：用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以0.012mol/L庚烷磺酸钠甲醇溶液：水：冰醋酸＝60-70:30-40:12为流动相，柱温为25℃，检测波长为285nm，理论塔板数均应不低于2000；

测定法：取本品，相当于盐酸氯己定5mg，精密称定，置100ml具塞锥形瓶中，精密加入流动相50ml，密塞，称定重量，60-70℃水浴加热30分钟，取出，放冷，用流动相补足减失的重量，摇匀，滤过，精密量取续滤液10μl，注入液相色谱仪，记录色谱图；另精密称取盐酸氯己定、盐酸达克罗宁对照品适量，用流动相溶解并定量稀释制成每1ml中分别约含0.1mg、0.015mg的溶液，同法测定；按外标法以峰面积计算，即得，出峰顺序为盐酸达克罗宁、盐酸氯己定；

(2)冰片：照中国药典2010年版二部附录ⅤE气相色谱法测定：

色谱条件与系统适用性试验：以改性聚乙二醇20000FFAP为固定相的毛细管柱，柱长为30m，内径为0.53mm，膜厚为1.0um；柱温为程序升温，初始温度为100-120℃，保持15分钟，再以每分钟50℃的速率升温至200-250℃，保持25分；分流进样，进样口温度200-240℃，检测器温度240-280℃；理论版数按龙脑峰计算应不低于3500；

校正因子的测定：取萘适量，精密称定，加乙酸乙酯溶解并稀释制成每1ml中含0.4mg的溶液，摇匀，作为内标溶液；另称取冰片对照品30mg，精密称定，置50ml量瓶中，加乙酸乙酯溶解并稀释制成每1ml中含0.6mg的溶液，摇匀，作为对照品贮备液；再精密量取对照品贮备液4ml置20ml量瓶中，精密加内标溶液5ml，用乙酸乙酯稀释至刻度，摇匀；吸取1μl注入气相色谱仪，测定，计算校正因子；

测定法：取本品1.2g，精密称定，量具塞锥形瓶中，精密加乙酸乙酯15ml，密塞，称定重量，50℃水浴加热3分钟，边加热边振摇使冰片溶解，迅速移置冰浴中冷却10分钟，取出，用乙酸乙酯补足减失的重量，再精密加入内标溶液5ml，摇匀，迅速滤过，弃去初滤液，取续滤液，即得，作为供试品溶液；吸取1μl注入气相色谱仪，测定，冰片以龙脑峰、异龙脑峰面积之和计算，即得。

4.如权利要求1或2所述的复方氯己定达克罗宁乳膏的检测方法，其特征在于：鉴别的检测方法是：

(1)取本品3g，置具塞锥形瓶中，加正己烷20ml，置65℃热水浴中使溶解，放冷，置冰箱中冷冻20分钟，取出，立即滤过，滤液置65℃上水浴挥干，残渣加乙醇5ml使溶解作为供试溶液；另取冰片对照品适量加乙醇制成每1ml中含1mg的溶液作为对照品溶液；照薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各10μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，用苯：醋酸乙酯＝5-9∶1-5作展开剂，展开后晾干，喷以香草醛硫酸试液，晾干，在105℃下加热至斑点显色清晰；供试品色谱中，在与对照品色谱相应位置上显相同颜色的斑点；

(2)取本品10g，加50％乙醇100ml，置65℃水浴中使溶解，放冷，4000转/分钟的条件下离心10分钟，上清液加5％硫酸溶液30ml，水浴水解30分钟，滤过，滤液转移至分液漏斗中，用乙酸乙酯提取3次，每次30ml，合并乙酸乙酯液，水浴蒸干，残渣加乙醇1ml溶解，作为供试品溶液；另取没食子酸对照品适量，加乙醇制成每1ml含0.5mg的溶液，作为对照品溶液；照薄层色谱法试验，吸取上述三种溶液各10μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以环己烷：乙酸乙酯：甲酸＝6-10∶4-8∶0.5-2为展开剂，展开，取出，晾干，喷以2％三氯化铁乙醇溶液，在105℃的烘箱中加热至斑点显色清晰；供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上显相同颜色的斑点；

(3)在含量测定项下记录的色谱图中，供试品溶液中盐酸氯己定、盐酸达克罗宁的保留时间应与对照品溶液中盐酸氯己定、盐酸达克罗宁的保留时间一致。

5.如权利要求1所述的复方氯己定达克罗宁乳膏的检测方法，其特征在于：橄榄果水醇提取膏的检测方法为：

(1)橄榄果水醇提取膏的制备：取橄榄果1000g，破碎，浸润1h，加6-8倍量的50-60％乙醇回流提取2-4次，每次1-2小时，过滤，合并滤液，回收乙醇至无醇味，浓缩至80℃相对密度为1.20-1.25的稠膏，放冷，即得；

(2)性状：本品为棕色至棕褐色的稠膏，气香，味酸；

(3)鉴别：取本品1g，加5％硫酸溶液30ml,水浴水解30分钟，用乙酸乙酯提取3次，每次20ml，合并乙酸乙酯液，水浴蒸干，残渣加乙醇1ml溶解，作为供试品溶液；另取没食子酸对照品适量，加乙醇制成每1ml含0.5mg的溶液，作为对照品溶液；照薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各10μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以环己烷：乙酸乙酯：甲酸＝6-10∶4-8∶0.5-2为展开剂，展开，取出，晾干，喷以2％三氯化铁乙醇溶液，在105℃的烘箱中加热至斑点显色清晰；供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上显相同颜色的斑点；

(4)检查：相对密度：取本品，搅匀，精密称取10g，加水2倍，精密称定，混匀，作为供试品溶液；照中国药典2010版附录ⅦA相对密度测定法测定，应在1.10-1.30之间；

总固体：取本品，搅匀，精密称取2g，置已干燥至恒重的蒸发皿中，在105℃的烘箱中干燥3小时，移置干燥器中，冷却30分钟，迅速称定重量，遗留残渣不得少于45.0％。

6.如权利要求1-5任一项所述的复方氯己定达克罗宁乳膏的检测方法，其特征在于：所述复方氯己定达克罗宁乳膏由如下重量份原料药制成：盐酸氯已定5份、橄榄果水醇提取膏10份、冰片2份、盐酸达克罗宁0.75份。

7.如权利要求6所述的复方氯己定达克罗宁乳膏的检测方法，其特征在于：

【性状】本品为浅棕色至棕色的乳膏；

【鉴别】(1)取本品3g，置具塞锥形瓶中，加正己烷20ml，置65℃热水浴中使溶解，放冷，置冰箱中冷冻20分钟，取出，立即滤过，滤液置65℃上水浴挥干，残渣加乙醇5ml使溶解作为供试溶液；另取冰片对照品适量加乙醇制成每1ml中含1mg的溶液作为对照品溶液；照中国药典2010年版二部附录VB薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各10μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，用苯：醋酸乙酯＝9∶1作展开剂，展开后晾干，喷以香草醛硫酸试液，晾干，在105℃下加热至斑点显色清晰；供试品色谱中，在与对照品色谱相应位置上显相同颜色的斑点；

(2)取本品10g，加50％乙醇100ml，置65℃水浴中使溶解，放冷，操作过程中切忌振摇，4000转/分钟离心10分钟，上清液加5％硫酸溶液30ml，水浴水解30分钟，滤过，滤液转移至分液漏斗中，用乙酸乙酯提取3次，每次30ml，合并乙酸乙酯液，水浴蒸干，残渣加乙醇1ml溶解，作为供试品溶液；另取没食子酸对照品适量，加乙醇制成每1ml含0.5mg的溶液，作为对照品溶液；照中国药典2010年版二部附录VB薄层色谱法试验，吸取上述三种溶液各10μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以环己烷：乙酸乙酯：甲酸＝8∶6∶1为展开剂，展开，取出，晾干，喷以2％三氯化铁乙醇溶液，在105℃的烘箱中加热至斑点显色清晰；供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上显相同颜色的斑点；

(3)在含量测定项下记录的色谱图中，供试品溶液中盐酸氯己定、盐酸达克罗宁的保留时间应与对照品溶液中盐酸氯己定、盐酸达克罗宁的保留时间一致；

【检查】应符合乳膏剂项下有关的各项规定；

【含量测定】

(1)盐酸氯己定、盐酸达克罗宁：照中国药典2010年版二部附录ⅤD高效液相色谱法测定：

色谱条件与系统适用性试验：用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以0.012mol/L庚烷磺酸钠甲醇溶液：水：冰醋酸＝66∶34∶12为流动相，柱温为25℃，检测波长为285nm，理论塔板数均应不低于2000；

测定法：取本品，相当于盐酸氯己定5mg，精密称定，置100ml具塞锥形瓶中，精密加入流动相50ml，密塞，称定重量，65℃水浴加热30分钟，取出，放冷，用流动相补足减失的重量，摇匀，滤过，精密量取续滤液10μl，注入液相色谱仪，记录色谱图；另精密称取盐酸氯己定、盐酸达克罗宁对照品适量，用流动相溶解并定量稀释制成每1ml中分别约含0.1mg、0.015mg的溶液，同法测定；按外标法以峰面积计算，即得，出峰顺序为盐酸达克罗宁、盐酸氯己定；

(2)冰片：照中国药典2010年版二部附录ⅤE气相色谱法测定：

色谱条件与系统适用性试验：以改性聚乙二醇20000FFAP为固定相的毛细管柱，柱长为30m，内径为0.53mm，膜厚为1.0um；柱温为程序升温，初始温度为100-120℃，保持15分钟，再以每分钟50℃的速率升温至200-250℃，保持25分；分流进样，进样口温度200-240℃，检测器温度240-280℃；理论版数按龙脑峰计算应不低于3500；

校正因子的测定：取萘适量，精密称定，加乙酸乙酯溶解并稀释制成每1ml中含0.4mg的溶液，摇匀，作为内标溶液；另称取冰片对照品30mg，精密称定，置50ml量瓶中，加乙酸乙酯溶解并稀释制成每1ml中含0.6mg的溶液，摇匀，作为对照品贮备液；再精密量取对照品贮备液4ml置20ml量瓶中，精密加内标溶液5ml，用乙酸乙酯稀释至刻度，摇匀；吸取1μl注入气相色谱仪，测定，计算校正因子；

测定法：取本品1.2g，精密称定，量具塞锥形瓶中，精密加乙酸乙酯15ml，密塞，称定重量，50℃水浴加热3分钟，边加热边振摇使冰片溶解，迅速移置冰浴中冷却10分钟，取出，用乙酸乙酯补足减失的重量，再精密加入内标溶液5ml，摇匀，迅速滤过，弃去初滤液，取续滤液，即得，作为供试品溶液；吸取1μl注入气相色谱仪，测定，冰片以龙脑峰、异龙脑峰面积之和计算，即得；

另：橄榄果水醇提取膏

取橄榄果1000g，破碎，浸润1h，加50％乙醇回流提取3次，第1次加8倍量回流提取2小时，过滤；第2次加6倍量回流提取1.5小时，过滤；第3次加6倍量回流提取1.5小时，过滤；合并3次滤液，回收乙醇至无醇味，浓缩至80℃相对密度为1.20-1.25的稠膏，放冷，即得；

【性状】本品为棕色至棕褐色的稠膏，气香，味酸；

【鉴别】取本品1g，加5％硫酸溶液30ml,水浴水解30分钟，用乙酸乙酯提取3次，每次20ml，合并乙酸乙酯液，水浴蒸干，残渣加乙醇1ml溶解，作为供试品溶液；另取没食子酸对照品适量，加乙醇制成每1ml含0.5mg的溶液，作为对照品溶液；照薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各10μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以环己烷：乙酸乙酯：甲酸＝8∶6∶1为展开剂，展开，取出，晾干，喷以2％三氯化铁乙醇溶液，在105℃的烘箱中加热至斑点显色清晰；供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上显相同颜色的斑点；

【检查】相对密度：取本品，搅匀，精密称取10g，加水2倍，精密称定，混匀，作为供试品溶液；照中国药典2010版附录ⅦA相对密度测定法测定，应在1.10-1.30之间；

总固体：取本品，搅匀，精密称取2g，置已干燥至恒重的蒸发皿中，在105℃的烘箱中干燥3小时，移置干燥器中，冷却30分钟，迅速称定重量，遗留残渣不得少于45.0％。