CN1100256C - 生物检测样品的固定支持方法及其固定支持剂和包埋盒 - Google Patents
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Abstract
本发明是医师为了用显微镜检查从人体采集的生物检测样品,而将生物检测样品进行包埋的过程中作为其中一个工序的生物检测样品的固定支持方法,即将生物检测样品装入包埋盒里,在生物检测样品与包埋盒之间的空间内注入固定支持剂,使生物检测样品包埋入其中,再将这一状态的固定支持剂浸渍入由甘露聚糖的凝胶化剂组成的溶液中进行凝胶化。其中使用的固定支持剂,是用在水中加了防腐剂的溶剂溶解甘露聚糖精粉制得的。另外,同时使用的包埋盒是由盖和容器构成的,平面状的框体的中央部朝向该平面状框体的一个侧面凸出,形成扁平的容器,该盖和容器的底面至少有一方是用透明的多孔板制成的,同时朝向同容器的开口部的周围边缘处的该平面状框体的其它侧面设置凸出的条形边缘,而且位于上述容器周围的平面状框体处形成透过其两侧面的连通孔。
Description
本发明涉及一种生物检测样品的固定支持方法及用于该方法的必要的包埋盒以及固定支持剂,该方法可应用在将采自人体的生物检测样品经包埋处理直至制成可供病理检查室显微镜检查的切片标本的几个处理工序中,在固定生物检测样品的同时将生物检测样品支持在包埋盒内,并且不会使生物检测样品变质,便于临床医生诊断疾病和决定治疗方法。
以前,在进行这类操作时,临床医生将生物检测样品装在用不透明的多孔板作成的带盖的扁平的包埋盒中,盖上盖,再把这个包埋盒放到加了防止生物检测样品变质的试剂的小盒中送到病理检查室等检查场所。
在病理检查室等地方,将包埋盒从上述小盒中取出,打开包埋盒盖,核对装在里面的生物检测样品和附带的传票记载的事项,确认两者的同一性。然后,再将生物检测样品装入包埋盒中,再将包埋盒分别放入装有乙醇或二甲苯等的各个容器中,对上述生物检测样品依次进行脱水、脱脂、透澈和浸入由石蜡或树脂构成的包埋剂里等各种处理。
然后,打开包埋容器的盖用镊子将生物检测样品从包埋容器内取出,转换到事先准备好的别的包埋皿上。在该包埋皿上的生物检测样品的上方对向配置上述包埋盒,生物检测样品在由多孔板形成的底板部分上相隔一定空间放置。然后从其上面浇注融化的石蜡或树脂等组成的包埋剂,将生物检测样品与该包埋盒的一部分一起用上述的包埋剂包埋。在此状态下冷却上述的包埋剂,通过上述包埋剂使包埋盒与生物检测样品固形化成一个整体,形成一个包埋块。
病理医生每隔一段包埋剂将该包埋块中的生物检测样品用切片机切成薄片,然后用显微镜检查切片。
使用以前的包埋盒进行的上述处理在以下方面需要改进。
第一,进行包埋作业时,在将生物检测样品转载到包埋皿上时,由于直接用镊子挟取,会局部地损伤生物检测样品,其结果,担心会对生物检测样品的检查带来不良影响。
第二,在一个包埋盒中装入多个生物检测样品,例如,按取样的顺序或取样的位置的顺序排列时,在将这些生物检测样品转载到别的包埋皿时,担心会弄错排列的顺序。另外在进行转载操作时,担心有时会与别的包埋盒中的生物检测样品混淆,有时会装错。发生这样的情况时,会对后来进行的生物检测样品的显微镜检查的结果产生重大的影响。
第三,生物检测样品包埋后通过病理医生用切片机将必需检查的部分切成薄片,用显微镜检查。然而,进行生物检测样品包埋作业的人不是上述的医师,所以很难把握临床医生希望检查的部分,因此,很难象临床医生所希望的那样将想要切得很薄的生物检测样品配置在包埋皿上。即,要想将病理医生需要检查的生物检测样品的部位很合适地切成薄片是非常困难的。
第四,在将包埋盒内的生物检测样品与附在包埋盒内的传票记载的内容核对时,每次都要打开盒盖进行确认操作是很费事的。而开盖时,装入的生物检测样品有脱落的危险。
第五,由于包埋盒是用多孔板作成的,所以有时会因为生物检测样品的大小不同而有从孔流失的危险。
第六,在将包埋块切薄片时,刀刃上加的力要不至于破坏样品,所以需要将包埋块作成某种程度以上的厚度。在大医院或检查场所,处理的包埋块的数目很大,为了确保有将这些包埋块再一次保管的场所,包埋块的厚度尽可能越薄越好。
本发明的第一个目的是在将生物检测样品放到包埋皿上时,用镊子等挟取不会对生物检测样品造成局部损伤。
第二个目的是在一个包埋盒中按规定配置放置多个生物检测样品的场合下,在将生物检测样品转载到包埋皿上时,不会有下列情况发生的机会:即与原来配置不同地配置到包埋皿上;以及与别的生物检测样品混淆。
第三个目的是可以很合适地将包埋的生物检测样品的病理医生想要检查的部位切成薄片,并能进行适当的检查。
第四个目的是使确认装到包埋盒中的生物检测样品与附在包埋盒里的传票上记载的事项是否一致的操作变得容易。另外,在进行确认操作时,不会弄错或丢失生物检测样品。
第五个目的是不会使该生物检测样品从包埋盒的多孔板的孔中流失。
第六个目的是在不改变包埋块的强度的前提下,使其厚度变薄。
本发明涉及如下一种将生物检测样品固定支持在包埋盒中成为一体的方法,该方法是将生物检测样品装入盖或容器的底至少有一面是用透明的多孔板作成的扁平的包埋盒的内部,在该生物检测样品的四周充填葡糖甘露聚糖和防腐剂组成的固定支持剂,在不使生物检测样品变质的前提下,在进行固定的同时将其支持在包埋盒中并且不会移动,然后将包埋盒浸入到加入到小盒中的混有变性防止剂的凝胶化剂中,所说的凝胶化剂是醇类或丙醇等。通过使该固定支持剂凝胶化而将生物检测样品以一个整体支持在上述包埋盒中。
这样固定支持在包埋盒中的生物检测样品,每一包埋盒都要浸入醇中进行脱水、脱脂,然后浸入混合二甲苯中进行脱醇(透澈)。被固定支持的生物检测样品,以埋入到固定支持剂中的凝胶状的块状从包埋盒中取出,直接载置在包埋皿上。
然后,在载置到包埋皿上的该凝胶块的上方对向配置取出生物检测样品后腾空的包埋盒容器,使容器底面对着该凝胶块放置,从凝胶块到容器之间设置若干间隙。然后从该容器的上方注入熔融状态的石蜡或树脂组成的包埋剂直至把该容器包埋起来,之后冷却固化。这样在该包埋剂中被固定支持剂固定的生物检测样品和包埋盒的容器一起被包埋。
另外,本发明涉及用水中加有防腐剂的溶剂溶解甘露聚糖的精粉得到的生物检测样品的固定支持剂。
本发明还涉及生物检测样品的包埋盒,即,由盖和容器构成的包埋盒中,平面状框体的中央部朝向该平面状框体的一个侧面凸出,形成扁平容器,至少盖和容器的底面有一方是用透明的多孔板制成的,另外,在该容器的开口部的周围的平面状框体处设置凸出的条形边缘,该突出边缘朝向该平面状框体的另一侧面凸出,另外在上述容器的周围的平面状框体处形成通过它的两侧面的连通孔。
附图的简单说明
图1是表示本发明的生物检测样品的固定支持方法的实施例中固定支持剂的注入过程的纵剖面图。
图2是表示图1的部分放大的剖面图。
图3是表示上述方法中的凝胶化过程的纵剖面图。
图4是表示上述方法中的脱水、脱脂、透澈之后浸透包埋剂的各个过程的纵剖面图。
图5是表示上述方法中被包埋到固定支持剂中的生物检测样品的状态的纵剖面图。
图6是表示利用上述方法得到的生物检测样品的包埋过程的纵剖面图。
图7是表示图6示出的包埋过程结束后的生物检测样品的状态的纵剖面图。
图8是表示图6示出的生物检测样品切片状态的纵剖面图。
图9是表示图8示出的包埋块的薄切片。
图10是本发明的包埋盒容器的实施例的斜面图。
图11是在本发明其它实施例中相当于图1状态的纵剖面图。
图12是其它实施例的与图10同样状态的纵剖面图。
图13是先有的包埋盒的斜面图。
图14是图13表示的包埋盒盖的斜面图。
图15是采用图13表示的包埋盒的包埋块中相当于图8状态的纵剖面图。
以下通过附图说明本发明的实施例。
首先如图1所示那样,将包埋盒4的容器42置于培养皿12上,在容器42的内部装入生物检测样品。向该生物检测样品5的上方及其四周按箭头A6所示由固定支持剂容器13充填由纯化的水溶性纤维甘露聚糖(天然多糖葡糖甘露聚糖(glucomannan))和象福尔马林那样的防腐剂构成的固定支持剂6。这样就使生物检测样品5不变质地被固定,支持在包埋盒4的容器42内。
此时,如图2所示,将生物检测样品5按临床医生所希望的那样使要检查的面16与容器42的底面1粘接放置。
包埋盒4如图3、4、以及10~12所示那样,由扁平容器42和盖3构成,扁平容器42具有由平面状框体41的中央部向该平面状框体41的下面突出形成的下缘部43,盖3和容器42的底面1中的至少一方是用透明的多孔板2作成的。
在位于该容器42的开口边缘的周围的平面状框体41的上面形成凸出的边缘44,再在位于上述容器42周围的平面状框体41处形成穿透上下两个侧面的连通孔45。
在上述容器42的一端形成前方挡片46,而在正对着的另一端形成后方挡片47,能开合自如地将上述盖3与它们嵌合在一起。
上述固定支持剂6是将很厚的黑皮部分剥去的鬼芋的粗粉磨碎风选后得到的精制甘露聚糖8.4g溶解于由福尔马林原液100ml、NaH2PO4·H2O 4.0g、无水Na2HPO4 6.5g、蒸馏水900ml组成的10%中性缓冲福尔马林1000ml溶液中制得的。
这样制备的固定支持剂的成分之一是水溶性食物纤维,其原来的结构及性状是通液性的,由于很多染色色素不能将它染色,所以在对生物检测样品染色时可以很明确地与生物检测样品分开,不妨碍染色状态的生物检测标本的观察。
所谓固定支持剂的固定是利用蛋白质的凝固作用,为了使生物组织随时间推移不变质而将其状态凝固固定,使生物检测样品的各个成分的状态保持在处于生物体内时的状态。而所谓支持是使生物检测样品在包埋盒中不移动而将它与包埋盒容器的底面上部紧密粘合,保持其位置。
使盖3嵌合进图1所示的容器42中,象图3那样将它浸入加到容器14和它的盖15内的由50%甲醇和福尔马林组成的凝胶化剂7中,使固定支持剂6凝胶化。这样就可使生物检测样品与上述包埋盒4的容器42成为一个整体,以这样的状态通过邮送等可从临床室送到病理检查室。
作为上述的葡糖甘露聚糖凝胶化剂7例如有醇福尔马林、乙醇、丙酮、聚乙二醇、甘油等。
在病理检查室,从容器14取出固定有生物检测样品的包埋盒4,如图4那样,浸入到预先准备的处理容器9内的乙醇等高脱水处理剂8a中。然后再依次浸入别的处理容器内的脱脂剂8b、透澈剂8c中,进行脱水、脱脂和透澈处理,使石蜡或树脂等组成的包埋剂浸透入凝胶化的固定支持剂和生物检测样品中。
然后从处理容器9中取出包埋盒4,再从包埋盒4中取出生物检测样品5,取出的状态如图5所示那样,生物检测样品是被埋在固定支持剂6中呈凝胶块36的状态,再如图6所示那样,使生物检测样品的检查面向下面向包埋皿10那样放置。
再如图6所示那样,在该凝胶块36的上部相对放置将生物检测样品取出后腾空的容器42,与该凝胶块36之间留一些间隙。然后,从容器42的上方注入熔融状态的石蜡11直至将容器42包埋起来,使其冷却固化。即,在固化的石蜡11中,埋在固定支持剂中的生物检测样品5与包埋盒4的容器42成为一起被包埋的状态。
石蜡11通过多孔板2的孔和连通孔45,流入凝胶块36周围及平板状框体41下面围成的空间,填充入这部分。合成树脂与石蜡在性质上两者易于剥离,但象上面那样,石蜡11进入容器42的多孔板的孔和连通孔45就固化,通过容器42使石蜡成为一个整体,两者很难剥离。
平面状框体41的下面与包埋皿10的里面密合,而且因为在平板状框体41的上面形成了突出的边缘44,所以可以防止石蜡流入该平板状框体41的上面。因此,石蜡11不会粘附到平面状框体41的上面或边缘,之后,在将包埋块安装在切片机的支持台19时,石蜡11不与支持台接触,不妨碍安装。
石蜡11固化后,取下包埋皿10,如图7那样,在石蜡11中可获得生物检测样品5与包埋盒4的容器42一起被包埋状态的包埋块18。
然后,象图8那样,将该包埋块18放置在支持台19上,使生物检测样品要切的面朝上放置。使切片机的刀刃17沿箭头A17方向往复运动,进行切片,可获得如图9所示的生物检测样品的薄切片20。
象图8那样,合成树脂作成的包埋盒4的高度h必需要作成这样的高度,即,刀刃17在对被两侧支持台19、19支持的包埋块18进行切片时,要保证包埋块18具有实用上不变形程度的刚性。例如,包埋盒4的壁厚t0为1.5mm时,其高度必需在5mm以上。
另外,此时为了得到容器42与石蜡11不剥离那样的强度,容器42的内侧的石蜡11的厚度t1必需要在3.5mm以上。
还有,如上所述,刀刃17在切包埋块18时,要得到各生物检测样品5中特定生物检测样品5a的所希望的切面S5时,必须使刀刃17相对于箭头A17方向倾斜一定角度θ,沿箭头B17方向进行往复运动。此时,刀刃17接近支持台19的上面,在不同情况下,有时支持台19可能妨碍它的运动。为了使它不妨碍刀刃17的往复运动,必须将距离石蜡11的支持台19的上面的厚度作成6mm以上。如图所示,包埋块18的平面状框体41与支持台19的上面要成为同一高度,根据上述理由,必须要将平面状框体上部的石蜡11厚度t2作成6mm以上。
包埋块总体的厚度t可如下求出。从容器42周围的框体41上的石蜡11的厚度t2减去突出容器42的高h1,剩下的石蜡11的厚度为t3,则包埋块整体的厚度就是包埋盒4的高度h和石蜡11的厚度t3之和,可表示为:
t=h+t3即t=h+(t2-h1)… (1)
式(1)中,为了获得具有充分强度的包埋块,需要以下一些必要的数值,例如,如果h为5mm、t2为6mm、h1为2.5mm,则包埋块的厚度t为t=5mm+(6mm-2.5mm)=8.5mm。
相应的,如图15所示,在用与上述同样的条件求出用先有的包埋盒34形成包埋块38时的包埋块的厚度。该包埋块38中,如图8所示,完全没有相当于高度h1的部分,因此h1=0,则图15的包埋块38的厚度t为:t=5mm+6mm=11mm
因此,通过这个例子,将本发明的包埋块18的厚度t与先有的例子相比,其差值为11mm-8.5mm=2.5mm。即,切片时本发明的包埋块18能够保证与先有的包埋块具有同等程度的强度,但按照上述实施例所述,本发明可以比先有的包埋块薄2.5mm。
所以在要保管庞大数目的(例如上万个)包埋块时,保管场所的容积与以前相比可显著减少。
另外,图13的多孔板32以及图14的盖33分别相当于本发明上述实施例的多孔板2和盖3。
虽然用附图1到8以及10说明了本发明的实施例,但本发明并不受这些实施例的限制,在本发明的要点范围内,有时对其构成进行部分变更后再实施也是可能的。
例如,包埋盒4的容器42的底面1可以不用上述实施例中使用的透明材料,而代之以象图11那样在该底面1的中央部位作成带有格子22的窗口21,在窗口21上嵌合用透明的多孔材料作成的透液性的薄片31。
此时,作为透液性薄片31可以使用透液性的布或日本纸等(图中未示出)。
另外图11以及后述的图12中,与上述实施例中的符号相同的符号部分,其名称和功能也一样。
象图11实施例那样,取代装在窗孔21上的透液性的薄片31,而象图12那样,在窗孔21上嵌合多孔皿24,也可以在其周围向外伸出形成凸缘23,加挂在该窗孔21的周围边缘上。
而上述固定支持剂6除了上述的实施例之外,也可以将很厚的黑皮部分剥去的鬼芋的粗粉磨碎,经风选得到的精制的8.4g甘露聚糖溶解于由福尔马林原液200ml、生理盐水800ml组成的20%福尔马林生理盐水1000ml的溶剂中得到。
获得上述固定支持剂6时采用的防腐剂除上述实施例中采用的以外,可以使用甲醛、多聚甲醛、戊二醛、冰醋酸、百里香酚、杂酚油、甲氧甲酚等。
另外,上述实施例所述是将熔融状态的石蜡11作为凝胶状块的包埋剂注入,然后将其冷却固化进行包埋的方法,但该包埋方法也不受此实施例的限制,也可以象以下二个实施例那样进行包埋。
其中一个实施例是称之为帕拉莱斯-皮克莱特(Paraplast-piccolyte)的双重包埋法。其方法如下。由萜烯系β-蒎烯合成碳水化合物树脂,其熔点高(115℃),是白色的皮克莱特(piccolyte),用乳钵将其研细,以10%的比例溶于60℃熔化的帕拉莱斯(Paraplast)中,冷却后,以固化状态保存,将另外准备的用葡糖甘露聚糖(固定支持剂)支持的生物检测样品象上述那样脱水、石蜡浸透,在最后的包埋阶段,将生物检测样品放入熔化的混有10%的皮克莱特(piccolyte)的帕拉莱斯(paraplsst)液中进行包埋,该帕拉莱斯(paraplast)溶液是将上述固化状态的混有10%皮克莱特(piccolyte)的帕拉莱斯(paraplast)在不超过60℃以上的温度下再次熔化得到的。
另外一个实施例称为赫斯特树脂(ヒストレジンプラス)(莱卡公司(ライカ社))包埋法,由以下①~⑧工序构成。
①用凝胶化的葡糖甘露聚糖将生物检测样品固定后,用醇、丙酮或乙二醇甲基丙烯酸酯(GMA)中的任一种进行脱水。
②将0.6g过氧化苯甲酰(反应起始剂:过氧化苯甲酰CH50)与基本树脂100ml(HEMA:二羟基乙基甲基丙烯酸酯和作为可塑剂的羟基醚)混合,于4℃下冷却后得到赫斯特树脂(ヒストレジンプラス)浸渍液。
③将用该固定支持剂支持的生物检测样品在冷却至4℃的赫斯特树脂(ヒストレジンプラス)浸渍液A中进行浸渍。
④然后将1ml固化剂(hardener)于4℃下混入到30ml赫斯特树脂(ヒストレジンプラス)浸渍液A(4℃)中制成赫斯特树脂(ヒストレジンプラス)浸渍液包埋液B。
⑤将于4℃浸渍后由固定支持剂支持的生物检测样品放入赫斯特树脂(ヒストレジンプラス)浸渍液包埋液B中,于4℃下搅拌5分钟。
⑥将4℃的赫斯特树脂(ヒストレジンプラス)浸渍液包埋液B注入预先冷却的赫斯特树脂(ヒストレジンプラス)浸渍液包埋用模型盘(moldtray)中,再装入用固定支持剂支持的样品,要使检查切面朝下放置。
⑦然后尽快地用PE膜被覆在包埋有样品的包埋树脂上,完全密封。此时,赫斯特树脂(ヒストレジンプラス)由于氧妨碍聚合所以不会固化(聚合固化的时间在4℃下需3小时以上)。
⑧之后将包埋有样品的聚合固化的树脂支持固定于支持台(block holder)。
如上所述,本发明具有如下的效果。
第一,将生物检测样品从包埋盒中取出转载到别的包埋皿上时,镊子不直接夹取样品,而是隔着固定支持剂挟取样品,不会损伤生物检测样品,不必担心对生物检测样品的检查带来影响。
第二,从包埋盒中将很多个生物检测样品转载到包埋皿上时,不必担心弄错生物检测样品的配置,不会与别的包埋盒的生物检测样品混淆,不会给之后进行的生物检测样品的显微镜检查结果带来重大影响。
第三,病理医生可以很适当地切割包埋的生物检测样品要检查的部位,可以进行适当的检查。
第四,因为包埋盒的盖和容器的底面至少有一方是用透明的多孔板制成的,所以可以不用开盖即可进行确认操作,确认装入的生物检测样品和附带的传票记载的事项的同一性变得容易了。也不必担心生物检测样品弄错或丢失。
第五,不必担心生物检测样品从包埋盒的多孔板的孔流失。
第六,由于包埋块的厚度可作得很薄,所以保管很多个包埋块时(例如上万个),其保管场所的容积与以前相比,可以显著地减少。
如上所述,本发明适合于将生物检测样品确实可靠地装入包埋盒内。同时不会使生物检测样品丢失、损伤、以及与别的生物检测样品混淆,适合于一系列的包埋作业。因此适合于由病理医生采集生物检测样品,由别的操作人员将样品包埋,病理医生再适当地将被包埋的生物检测样品的要检查的部位切片,进行适当地检查,所以本发明是很有用的。
另外,由于在一定容积的场所可以保管比以前更多的包埋盒,所以对于减轻管理者的经济负担也是很有用的。
Claims (8)
1.生物检测样品的固定支持方法,其特征在于,
将生物检测样品装入扁平包埋盒中,所说的扁平包埋盒是用于与生物检测样品一起包埋形成包埋块的扁平包埋盒,由盖和容器构成,盖和容器的至少一方是用透明的多孔板制成的,
在所说的生物检测样品的周围的空间内注入由甘露聚糖和防腐剂组成的透明固定支持剂,将所说生物检测样品的活组织不变质地固定的同时,将生物检测样品支持在包埋盒内使之不移动,
在所说固定支持剂中埋入生物检测样品,
将埋入了生物检测样品的固定支持剂浸渍在由甘露聚糖的凝胶化剂组成的液体中,进行凝胶化。
2.权利要求1记载的生物检测样品的固定支持方法,其特征在于,是用加了防腐剂的水溶剂溶解甘露聚糖的精粉得到的。
3.权利要求2记载的生物检测样品的固定支持方法,其特征在于,加到水中的防腐剂中至少含有甲醛。
4.用于权利要求1的固定支持方法的包埋盒,其特征在于,在由盖和容器构成的用于与生物检测样品一起包埋形成包埋块的包埋盒中,平面状框体的中央部朝向该平面状框体的一个侧面凸出,形成扁平的容器,该盖和容器的底面至少有一方是用透明的多孔板制成的,另外,对着该容器的开口部的周围边缘处的平面状框体的另一侧面设置凸出的条形边缘,另外在上述容器的周围的平面状框体处形成通过它的两个侧面的连通孔。
5.权利要求4记载的包埋盒,其特征在于,用透明的多孔板制成的容器底面形成中央部带有格子的窗孔,窗孔上嵌合透液性的片状薄片。
6.权利要求4记载的包埋盒,其特征在于,扁平的容器的底面是通过在其中央部形成的带有格子的窗孔上嵌合用透明的合成树脂制的多孔片材形成的透液性片状薄片形成的。
7.权利要求4记载的包埋盒,其特征在于,扁平的容器底面是通过在其中部形成的带有格子的窗孔上嵌合用透明的织布制成的透液性片状薄片形成的。
8.权利要求6记载的包埋盒,其特征在于,嵌合在带有格子的窗孔上的透液性多孔片状薄片是用向周围伸出凸缘的多孔皿形成的。
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