CN109996859B - 含孢子的颗粒 - Google Patents
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Abstract
本发明提供了酶颗粒,这些酶颗粒包含酶和一种或多种孢子。
Description
技术领域
本发明涉及用于各种应用(如洗涤剂、食品和饲料)中的含酶和孢子的颗粒。
背景技术
国际专利申请WO 2012/112718描述了使用微生物来控制清洁机器和清洁过程中的恶臭。
国际专利申请WO 2011/018509披露了由包含至少25%的吸湿盐的包衣包围的脱水微生物。优选的脱水微生物是在食品和饲料中用作“益生菌”的乳酸菌。没有提到微生物孢子。
发明内容
在第一方面,本发明提供了一种包含酶和一种或多种孢子的酶颗粒。
本发明进一步提供了一种制备这些颗粒的方法、以及一种包含这些酶颗粒的(粉末)洗涤剂组合物。
本发明的其他方面和实施例在说明书和实例下是显而易见的。
具体实施方式
在WO 2012/112718中描述了使用细菌来控制清洁机器和清洁过程中的恶臭。与清洁组合物(如洗涤剂粉末、片剂或凝胶)中使用的其他成分的典型量相比,细菌的基于质量的所需量是非常小的。所需的剂量为每吨洗涤剂粉末几克细菌或孢子的量级。在正常工业条件下可以混合到洗涤剂粉末中并且仍然得到充分良好分布的粉末的最小量为0.5%至1%,或每吨5kg至10kg的量级。因此,应用该技术既是技术上的又是经济上的挑战。通过使用酶颗粒作为载体,本发明使得能够均匀地分布少量的孢子。
不仅获得少量孢子的均匀分布是一个挑战,而且通常也不希望将微生物引入到用于酶配制品的加工设备中。本发明的实施例通过制造含酶的原始颗粒(核心)并随后施用含孢子的包衣来避免这种情况。通过在两个不同位置进行两个步骤,细菌孢子不被引入到酶加工设施中。
因此,本发明既从技术和经济角度而且从环境角度出发,以有效的方式解决了上述两个问题。本发明示出,孢子形成细菌可以共颗粒化成成品酶/微生物产品,其均匀地既递送必需量的具有良好生存力的孢子而且同时递送用于相同应用中的酶。
酶颗粒
本发明的酶颗粒是包含酶和一种或多种孢子(优选一种或多种细菌(内生)孢子)的小粒子。
该颗粒由核心以及任选地包围该核心的一个或多个包衣(外层)构成。
在优选的实施例中,该核心包含该酶并且包衣包含该一种或多种孢子;或者可替代地,该核心包含该一种或多种孢子并且包衣包含该酶。
当该核心未被包衣包围时,该核心包含该酶和该一种或多种孢子。
当该核心被一个或多个包衣包围时,该核心可包含该酶和该一种或多种孢子;或者可替代地,该一个或多个包衣可包含该酶和该一种或多种孢子。
当这些包衣包含该酶和该一种或多种孢子二者时,该酶和该一种或多种孢子可以包含在单独的包衣中,例如作为离散层施用在流化床中以分离该酶和一种或多种孢子的加工。
典型地,颗粒的粒度(测量为当量球径(基于体积的平均粒度))是20μm-2000μm,具体是50μm-1500μm、100μm-1500μm或250μm-1200μm。优选地,该颗粒是(大致)球形的。
核心
该核心可以包括另外材料如填充剂、纤维材料(纤维素或合成纤维)、稳定剂、增溶剂、悬浮剂、黏度调节剂、轻球体、增塑剂、盐、润滑剂和芳香剂。
该核心可以包括粘合剂,如合成聚合物、蜡、脂肪、或碳水化合物。
该核心典型地作为均匀的共混物可以包含多价阳离子的盐、还原剂、抗氧剂、过氧化物分解催化剂和/或酸性缓冲液组分。
该核心可以由惰性粒子组成,其中该酶和/或一种或多种孢子被吸收到该惰性粒子之内,或者被施用(例如通过流化床包衣)到该惰性粒子的表面上。
该核心粒子可以具有20μm-2000μm,具体地50μm-1500μm、100μm-1500μm或250μm-1200μm的直径。
核心的制备
该核心可以通过粒化成分的共混物来制备,例如通过包括造粒技术的方法,如结晶、沉淀、锅包衣(pan-coating)、流化床包衣、流化床附聚、旋转雾化、挤出、颗粒化(prilling)、滚圆(spheronization)、粒度减小法、转鼓造粒(drum granulation)和/或高剪切造粒。
用于制备核心的方法可见于Handbook of Powder Technology[粉末技术手册];Particle size enlargement[粒度增大]C.E.Capes著;第1卷;1980;Elsevier[爱思唯尔]。制备方法包括已知的饲料和颗粒配制品技术,例如:
a)喷雾干燥的产品,其中在喷雾干燥塔中雾化液体含酶溶液以形成小液滴,在它们在沿干燥塔下降的过程中干燥形成含酶的微粒材料。可以用这种方式产生非常小的粒子(Michael S.Showell(编辑);Powdered detergents[粉状洗涤剂];Surfactant ScienceSeries[表面活性剂科学系列];1998;第71卷;第140-142页;Marcel Dekker[马塞尔德克尔出版社])。
b)层状产品,其中酶作为层包衣在预形成的惰性核心粒子周围,其中含酶的溶液被雾化,典型地在流化床装置中,其中预形成的核心粒子被流体化,并且含酶的溶液附着到核心粒子上并干燥,直到使得干的酶层留在核心粒子的表面上。如果可以发现具有期望尺寸的有用核心粒子,则通过这种方式能够获得具有期望尺寸的粒子。这种类型的产品描述于,例如,WO 97/23606中。
c)吸收的核心粒子,其中不是包衣该酶作为核心周围的层,而是在核心的表面上和/或表面中吸收该酶。这样的方法描述于WO 97/39116中。
d)挤出或粒化的(pelletized)产品,其中将含酶的糊料压成球粒或在压力下通过小的开口挤出并切割为粒子,随后干燥这些粒子。此类粒子通常具有相当大的尺寸,因为开有挤出开口的材料(通常是具有钻孔的平板)限制了通过挤出开口可允许的压力降。此外,当使用小的开口时,十分高的挤出压力增加了酶糊料中的热生成量,其对酶有害(还参见Michael S.Showell(编辑);Powdered detergents[粉状洗涤剂];Surfactant ScienceSeries[表面活性剂科学系列];1998;第71卷;第140-142页;Marcel Dekker[马塞尔德克尔出版社])。
e)颗粒化的产品,其中含酶的粉末悬浮于熔化的蜡中并且例如通过转盘喷雾器将悬浮液喷雾到冷却室中,在此液滴快速地固化(Michael S.Showell(编辑);Powdereddetergents[粉状洗涤剂];Surfactant Science Series[表面活性剂科学系列];1998;第71卷;第140-142页;Marcel Dekker[马塞尔德克尔出版社])。所获得产品是酶均匀分布遍及整个惰性材料而不是集中在其表面上的产品。此外,US 4,016,040和US 4,713,245是与此技术有关的文献。
f)混合造粒产品,其中将液体添加到例如常规粒化组分的干燥粉末组合物中,经由液体或粉末或二者引入该酶。将液体和粉末混合,并且因为液体的水分为干燥粉末所吸收,干燥粉末的组分将开始附着并附聚,并且粒子将构建,形成包含酶的颗粒。这样的方法描述于US 4,106,991和有关的文献EP 170360、EP 304332、EP 304331、WO 90/09440和WO90/09428中。在其中可以用各种高剪切混合器作为造粒机的此方法的具体产品中,将由作为酶的酶、填充剂和粘合剂等组成的颗粒与纤维素纤维混合以强化粒子,而得到所谓的T-颗粒。经强化的粒子更加坚固,酶粉尘释放更少。
g)粒度减小,其中通过碾磨或压碎含酶的较大的粒子、球粒、片剂、坯块(briquette)等产生核心。通过将碾磨或压碎的产物过筛获得所需要的核心粒子级分。可以回收尺寸过大和尺寸过小的粒子。粒度减小描述于(Martin Rhodes(编辑);Principles ofPowder Technology[粉末技术原理];1990;第10章;John Wiley&Sons[约翰威利父子公司])。
h)流化床造粒。流化床造粒涉及将微粒悬浮于空气流中并经喷嘴喷雾液体到流体化粒子上。被喷雾液滴击中的粒子湿润并发粘。发粘的粒子与其他粒子碰撞并附着于其上并形成颗粒。
i)这些核心可经受干燥,如在流化床干燥器中。技术人员可以使用其他已知的在饲料或洗涤剂工业中用于干燥颗粒的方法。干燥优选在从25℃至90℃的产物温度下进行。对于一些酶来说,重要的是包含酶的核心在包衣之前含有少量的水。如果在过量水除去之前水敏性酶被包衣,则水会截留在核心中并可能消极地影响酶的活性。干燥之后,这些核心优选含有0.1%w/w-10%w/w的水。
包衣
该酶颗粒的核心可以被至少一个包衣包围,例如,以改进储存稳定性、以减少在处理过程中的粉尘形成或用于着色该颗粒。该一个或多个任选的包衣可以包括盐包衣、或其他合适的包衣材料,如聚乙二醇(PEG)、甲基羟基-丙基纤维素(MHPC)以及聚乙烯醇(PVA)。这些包衣可包括该一种或多种孢子。具有多个包衣的酶颗粒的实例示于WO 93/07263和WO97/23606中。
可以将该包衣按该核心的重量计以至少0.1%,例如,至少0.5%、1%或5%的量施用。该量可以是至多100%、70%、50%、40%或30%。
该包衣优选是至少0.1μm厚,具体地至少0.5μm、至少1μm或至少5μm。在一个具体实施例中,该包衣的厚度是在100μm以下。在一个更具体的实施例中,该包衣的厚度是在60μm以下。在一个甚至更具体的实施例中,该包衣的总厚度是在40μm以下。
该包衣应当通过形成基本上连续的层来密封该核心单元。基本上连续的层应当理解为具有极少或没有孔洞的包衣,使得密封/封闭的核心单元具有极少或没有未包衣的区域。该层或包衣在厚度上应当特别均匀。
该包衣可以进一步含有其他如本领域已知的材料,例如,填充剂、防粘剂、颜料、染料、增塑剂和/或粘合剂,如二氧化钛、高岭土、碳酸钙或滑石。
盐包衣可以包含按重量w/w计至少60%,例如,按重量w/w计,至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少99%的盐。
该盐可以从盐溶液(其中该盐是完全溶解的)中添加,或者从盐悬浮液(其中该细粒子是少于50μm,如少于10μm或少于5μm)中添加。
该盐包衣可以包含单一盐或者两种或更多种盐的混合物。该盐可以是水溶性的,具体地具有在20℃下在100g水中至少0.1克的溶解度,优选地至少0.5g/100g水,例如,至少1g/100g水,例如,至少5g/100g水。
该盐可以是无机盐,例如,硫酸盐、亚硫酸盐、磷酸盐、膦酸盐、硝酸盐、氯盐或碳酸盐或者简单有机酸(少于10个碳原子,如6个或更少的碳原子)的盐如柠檬酸盐、丙二酸盐或乙酸盐。在这些盐中的阳离子的实例是碱或碱土金属离子、铵离子或第一过渡系的金属离子,如钠、钾、镁、钙、锌或铝。阴离子的实例包括氯离子、溴离子、碘离子、硫酸根、亚硫酸根、亚硫酸氢根、硫代硫酸根、磷酸根、磷酸二氢根、二碱式磷酸根、次磷酸根、焦磷酸二氢根、四硼酸根、硼酸根、碳酸根、碳酸氢根、硅酸根、柠檬酸根、苹果酸根、马来酸根、丙二酸根、琥珀酸根、乳酸根、甲酸根、乙酸根、丁酸根、丙酸根、苯甲酸根、酒石酸根、抗坏血酸根或葡萄糖酸根。具体而言,可以使用硫酸根、亚硫酸根、磷酸根、膦酸根、硝酸根、氯离子或碳酸根的碱或碱土金属盐或者简单有机酸的盐如柠檬酸盐、丙二酸盐或乙酸盐。
在包衣中的盐可以在20℃下具有超过60%的恒定湿度,具体地超过70%、超过80%或超过85%,或者它可以是此盐的另一种水合物形式(例如,无水物)。该盐包衣可以如在WO 00/01793或WO 2006/034710中所描述。
合适的盐的具体实例是NaCl(CH20℃=76%)、Na2CO3(CH20℃=92%)、NaNO3(CH20℃=73%)、Na2HPO4(CH20℃=95%)、Na3PO4(CH25℃=92%)、NH4Cl(CH20℃=79.5%)、(NH4)2HPO4(CH20℃=93,0%)、NH4H2PO4(CH20℃=93.1%)、(NH4)2SO4(CH20℃=81.1%)、KCl(CH20℃=85%)、K2HPO4(CH20℃=92%)、KH2PO4(CH20℃=96.5%)、KNO3(CH20℃=93.5%)、Na2SO4(CH20℃=93%)、K2SO4(CH20℃=98%)、KHSO4(CH20℃=86%)、MgSO4(CH20℃=90%)、ZnSO4(CH20℃=90%)以及柠檬酸钠(CH25℃=86%)。其他实例包括NaH2PO4、(NH4)H2PO4、CuSO4、Mg(NO3)2以及乙酸镁。
该盐可以处于无水形式,或者它可以是水合盐,即具有结晶化的一个或多个结合水的结晶盐水合物,如描述于WO 99/32595中。具体实例包括无水硫酸钠(Na2SO4)、无水硫酸镁(MgSO4)、七水硫酸镁(MgSO4·7H2O)、七水硫酸锌(ZnSO4·7H2O)、七水磷酸氢二钠(Na2HPO4·7H2O)、六水硝酸镁(Mg(NO3)2(6H2O))、二水柠檬酸钠以及四水乙酸镁。
优选地,作为盐溶液施用该盐,例如使用流化床。
孢子
本发明的酶颗粒包含一种或多种孢子。在一个实施例中,该一种或多种孢子是一种或多种细菌(内生)孢子。
在一个更具体的实施例中,该一种或多种细菌孢子源自孢子形成细菌菌株。用于生产稳定的微生物的并且尤其是细菌孢子的方法在本领域中是已知的。参见Donnellan,J.E.,Nags,E.H.,和Levinson,H.S.(1964)“Chemically defined,synthetic media forsporulation and for germination and growth of Bacillus subtilis[用于枯草芽孢杆菌的孢子形成和萌发及生长的化学限定的、合成的培养基]”,Journal ofBacteriologyI[细菌学杂志],87(2):332-336;和Chen,Z.,Li,Q.,Liu,H.Yu,N.,Xie,T.,Yang,M.,Shen,P.,Chen,X.(2010),“Greater enhancement of Bacillus subtilis sporeyields in submerged cultures by optimization of medium composition throughstatistical experimental designs.[经统计实验设计通过培养基组分优化在深层培养中枯草芽孢杆菌孢子产量较大提高]”,Appl.Microbiol.Biotechnol.[应用微生物学和生物技术],85:1353-1360。
孢子形成细菌菌株的非限制性实例包括来自以下属的菌株:醋丝菌属(Acetonema)、碱杆菌属(Alkalibacillus)、嗜氨菌属(Ammoniphilus)、双芽孢杆菌属(Amphibacillus)、厌氧杆菌属(Anaerobacter)、厌氧孢菌属(Anaerospora)、解硫胺素芽孢杆菌属(Aneurinibacillus)、厌氧芽胞杆菌属(Anoxybacillus)、芽胞杆菌属(Bacillus)、短芽孢杆菌属(Brevibacillus)、嗜热厌氧菌属(Caldanaerobacter)、喜热菌属(Caloramator)、Caminicella、Cerasibacillus、梭菌属(Clostridium)、Clostridiisalibacter、柯恩氏菌属(Cohnella)、Dendrosporobacter、脱硫肠状菌属(Desulfotomaculum)、脱硫鼠孢菌属(Desulfosporomusa)、脱硫芽孢弯曲菌属(Desulfosporosinus)、脱硫嫩枝海绵属(Desulfovirgula)、Desulfunispora、Desulfurispora、产线菌属(Filifactor)、Filobacillus、Gelria、土芽孢杆菌属(Geobacillus)、Geosporobacter、糖球菌属(Gracilibacillus)、Halonatronum、螺杆菌属(Heliobacterium)、嗜阳菌属(Heliophilum)、莱斯菌属(Laceyella)、Lentibacillus、球形芽孢杆菌属(Lysinibacillus)、Mahella、Metabacterium、穆尔氏菌属(Moorella)、Natroniella、大洋芽孢杆菌属(Oceanobacillus)、Orenia、Ornithinibacillus、嗜草酸菌属(Oxalophagus)、产醋杆菌属(Oxobacter)、类芽孢杆菌属(Paenibacillus)、Paraliobacillus、Pelospora、Pelotomaculum、Piscibacillus、直丝菌属(Planifilum)、海芽孢杆菌属(Pontibacillus)、Propionispora、盐渍芽孢杆菌属(Salinibacillus)栖盐水芽孢杆菌属、(Salsuginibacillus)、清野氏菌属(Seinonella)、岛津氏菌属(Shimazuella)、生孢产醋杆状菌属(Sporacetigenium)、Sporoanaerobacter、孢杆菌属(Sporobacter)、Sporobacterium、螺旋盐杆菌属(Sporohalobacter)、芽孢乳杆菌属(Sporolactobacillus)、鼠孢菌鼠(Sporomusa)、芽孢八叠球菌属(Sporosarcina)、Sporotalea、香肠状芽孢菌属(Sporotomaculum)、互营单胞菌属(Syntrophomonas)、共养生孑包菌属(Syntrophospora)、Tenuibacillus、Tepidibacter、Terribacillus、Thalassobacillus、好热乙酸菌属(Thermoacetogenium)、高温放线菌属(Thermoactinomyces)、Thermoalkalibacillus、好热厌氧杆菌属(Thermoanaerobacter)、热厌氧单胞菌属(Thermoanaeromonas)、热杆菌属(Thermobacillus)、Thermoflavimicrobium、Thermovenabulum、Tuberibacillus、枝芽孢菌属(Virgibacillus)、和/或Vulcanobacillus。
在一个具体实施例中,该一种或多种孢子形成细菌是选自下属的细菌,这些属由以下各项组成:醋丝菌属(Acetonema)、碱杆菌属(Alkalibacillus)、嗜氨菌属(Ammoniphilus)、双芽孢杆菌属(Amphibacillus)、厌氧杆菌属(Anaerobacter)、厌氧孢菌属(Anaerospora)、解硫胺素芽孢杆菌属(Aneurinibacillus)、厌氧芽胞杆菌属(Anoxybacillus)、芽胞杆菌属(Bacillus)、短芽孢杆菌属(Brevibacillus)、嗜热厌氧菌属(Caldanaerobacter)、喜热菌属(Caloramator)、Caminicella、Cerasibacillus、梭菌属(Clostridium)、Clostridiisalibacter、柯恩氏菌属(Cohnella)、Dendrosporobacter、脱硫肠状菌属(Desulfotomaculum)、脱硫鼠孢菌属(Desulfosporomusa)、脱硫芽孢弯曲菌属(Desulfosporosinus)、脱硫嫩枝海绵属(Desulfovirgula)、Desulfunispora、Desulfurispora、产线菌属(Filifactor)、Filobacillus、Gelria、土芽孢杆菌属(Geobacillus)、Geosporobacter、糖球菌属(Gracilibacillus)、Halonatronum、螺杆菌属(Heliobacterium)、嗜阳菌属(Heliophilum)、莱斯菌属(Laceyella)、Lentibacillus、球形芽孢杆菌属(Lysinibacillus)、Mahella、Metabacterium、穆尔氏菌属(Moorella)、Natroniella、大洋芽孢杆菌属(Oceanobacillus)、Orenia、Ornithinibacillus、嗜草酸菌属(Oxalophagus)、产醋杆菌属(Oxobacter)、类芽孢杆菌属(Paenibacillus)、Paraliobacillus、Pelospora、Pelotomaculum、Piscibacillus、直丝菌属(Planifilum)、海芽孢杆菌属(Pontibacillus)、Propionispora、盐渍芽孢杆菌属(Salinibacillus)栖盐水芽孢杆菌属、(Salsuginibacillus)、清野氏菌属(Seinonella)、岛津氏菌属(Shimazuella)、生孢产醋杆状菌属(Sporacetigenium)、Sporoanaerobacter、孢杆菌属(Sporobacter)、Sporobacterium、螺旋盐杆菌属(Sporohalobacter)、芽孢乳杆菌属(Sporolactobacillus)、鼠孢菌鼠(Sporomusa)、芽孢八叠球菌属(Sporosarcina)、Sporotalea、香肠状芽孢菌属(Sporotomaculum)、互营单胞菌属(Syntrophomonas)、共养生孑包菌属(Syntrophospora)、Tenuibacillus、Tepidibacter、Terribacillus、Thalassobacillus、好热乙酸菌属(Thermoacetogenium)、高温放线菌属(Thermoactinomyces)、Thermoalkalibacillus、好热厌氧杆菌属(Thermoanaerobacter)、热厌氧单胞菌属(Thermoanaeromonas)、热杆菌属(Thermobacillus)、Thermoflavimicrobium、Thermovenabulum、Tuberibacillus、枝芽孢菌属(Virgibacillus)、Vulcanobacillus、及其组合。
在另一实施例中,该一种或多种细菌菌株是一种芽孢杆菌属的菌株,例如,嗜碱芽孢杆菌(Bacillus alcalophilus)、蜂房芽孢杆菌(Bacillus alvei)、噬胺芽胞杆菌(Bacillus aminovorans)、解淀粉芽孢杆菌(Bacillus amyloliquefaciens)、解硫胺素芽胞杆菌(Bacillus aneurinolyticus)、海水芽孢杆菌(Bacillus aquaemaris)、萎缩芽孢杆菌(Bacillus atrophaeus)、嗜硼芽孢杆菌(Bacillus boroniphilius)、短芽孢杆菌(Bacillus brevis)、热容芽孢杆菌(Bacillus caldolyticus)、中间芽胞杆菌(Bacilluscentrosporus)、蜡样芽孢杆菌(Bacillus cereus)、环状芽孢杆菌(Bacillus circulans)、凝结芽孢杆菌(Bacillus coagulans)、坚硬芽孢杆菌(Bacillus firmus)、黄热芽孢杆菌(Bacillus flavothermus)、纺锤芽孢杆菌(Bacillus fusiformis)、球芽孢杆菌(Bacillusglobigii)、地狱芽孢杆菌(Bacillus infernus)、幼虫芽孢杆菌(Bacillus larvae)、侧孢芽孢杆菌(Bacillus laterosporus)、迟缓芽孢杆菌(Bacillus lentus)、地衣芽孢杆菌(Bacillus licheniformis)、巨大芽孢杆菌(Bacillus megaterium)、马铃薯杆菌(Bacillus mesentericus)、胶质芽孢杆菌(Bacillus mucilaginosus)、蕈状芽孢杆菌(Bacillus mycoides)、纳豆芽孢杆菌(Bacillus natto)、泛养芽胞杆菌(Bacilluspantothenticus)、多粘芽孢杆菌(Bacillus polymyxa)、伪炭疽芽孢杆菌(Bacilluspseudoanthracis)、短小芽胞杆菌(Bacillus pumilus)、施氏芽胞杆菌(Bacillusschlegelii)、球形芽孢杆菌(Bacillus sphaericus)、耐热芽孢杆菌(Bacillussporothermodurans)、嗜热脂肪芽孢杆菌(Bacillus stearothermophillus)、枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)、嗜热葡糖苷酶芽胞杆菌(Bacillus thermoglucosidasius)、苏芸金芽胞杆菌(Bacillus thuringiensis)、Bacillus vulgatis、韦氏芽孢杆菌(Bacillusweihenstephanensis)、及其组合。
在另一实施例中,该一种或多种细菌菌株是一种短芽孢杆菌属的菌株,例如,短短芽孢杆菌(Brevibacillus brevis);美丽短芽孢杆菌(Brevibacillus formosus);侧孢短芽孢杆菌(Brevibacillus laterosporus);或类短短芽孢杆菌(Brevibacillusparabrevis)、及其组合。
在另一实施例中,该一种或多种细菌菌株是一种类芽孢杆菌属的菌株,例如,蜂房芽胞杆菌(Paenibacillus alvei);解淀粉类芽孢杆菌(Paenibacillus amylolyticus);固氮类芽孢杆菌(Paenibacillus azotofixans);Paenibacillus cookii;浸麻类芽孢杆菌(Paenibacillus macerans);多粘类芽孢杆菌(Paenibacillus polymyxa);或强壮类芽孢杆菌(Paenibacillus validus)、及其组合。
在一个更具体的实施例中,该一种或多种细菌菌株是选自下组的芽胞杆菌属的菌株,该组由以下组成:短小芽孢杆菌菌株NRRL B-50016(来自诺维信生物制品公司(Novozymes Biologicals,Inc.),美国);解淀粉芽孢杆菌菌株NRRL B-50017(来自诺维信生物制品公司,美国);解淀粉芽孢杆菌菌株PTA-7792(之前分类为萎缩芽孢杆菌)(来自诺维信生物制品公司,美国);解淀粉芽孢杆菌菌株PTA-7543(之前分类为萎缩芽孢杆菌)(来自诺维信生物制品公司,美国);解淀粉芽孢杆菌菌株NRRL B-50018(来自诺维信生物制品公司,美国);解淀粉芽孢杆菌菌株PTA-7541(来自诺维信生物制品公司,美国);解淀粉芽孢杆菌菌株PTA-7544(来自诺维信生物制品公司,美国);解淀粉芽孢杆菌菌株PTA-7545(来自诺维信生物制品公司,美国);解淀粉芽孢杆菌菌株PTA-7546(来自诺维信生物制品公司,美国);枯草芽孢杆菌菌株PTA-7547(来自诺维信生物制品公司,美国);解淀粉芽孢杆菌菌株PTA-7549(来自诺维信生物制品公司,美国);解淀粉芽孢杆菌菌株PTA-7793(来自诺维信生物制品公司,美国);解淀粉芽孢杆菌菌株PTA-7790(来自诺维信生物制品公司,美国);解淀粉芽孢杆菌菌株PTA-7791(来自诺维信生物制品公司,美国);枯草芽孢杆菌菌株NRRL B-50136(也被称为DA-33R,ATCC登录号55406)(来自诺维信生物制品公司,美国);解淀粉芽孢杆菌菌株NRRL B-50141(来自诺维信生物制品公司,美国);解淀粉芽孢杆菌菌株NRRL B-50399(来自诺维信生物制品公司,美国);地衣芽孢杆菌菌株NRRL B-50014(来自诺维信生物制品公司,美国);地衣芽孢杆菌菌株NRRL B-50015(来自诺维信生物制品公司,美国);解淀粉芽孢杆菌菌株NRRL B-50607(来自诺维信生物制品公司,美国);枯草芽孢杆菌菌株NRRL B-50147(也被称为300R)(来自诺维信生物制品公司,美国);解淀粉芽孢杆菌菌株NRRL B-50150(来自诺维信生物制品公司,美国);解淀粉芽孢杆菌菌株NRRL B-50154(来自诺维信生物制品公司,美国);巨大芽孢杆菌PTA-3142(来自诺维信生物制品公司,美国);解淀粉芽孢杆菌菌株ATCC登录号55405(也被称为300)(来自诺维信生物制品公司,美国);解淀粉芽孢杆菌菌株ATCC登录号55407(也被称为PMX)(来自诺维信生物制品公司,美国);短小芽孢杆菌NRRL B-50398(也被称为ATCC 700385,PMX-1,以及NRRL B-50255)(来自诺维信生物制品公司,美国);蜡样芽胞杆菌ATCC登录号700386(来自诺维信生物制品公司,美国);苏芸金芽孢杆菌ATCC登录号700387(来自诺维信生物制品公司,美国),解淀粉芽孢杆菌FZB24(例如,来自美国诺维信生物制品公司的分离物NRRL B-50304和NRRL B-50349),枯草芽孢杆菌(例如,来自拜耳作物科学(Bayer CropScience),古斯塔夫森公司(Gustafson)的MAX和ASO中的分离物NRRL B-21661),短小芽孢杆菌(例如来自拜耳作物科学,古斯塔夫森公司的分离物NRRL B-50349),解淀粉芽孢杆菌TrigoCor(也被称为“TrigoCor 1448”;例如,分离物巴西农业研究院(Embrapa)Trigo登录号144/88.4Lev,康奈尔(Cornell)登录号Pma007BR-97、及ATCC登录号202152,来自康奈尔大学(Cornell University),美国)及其组合。
在又一个甚至更具体的实施例中,该一种或多种细菌菌株是解淀粉芽孢杆菌的菌株。在一个甚至更具体的实施例中,该细菌菌株是解淀粉芽孢杆菌菌株PTA-7543(之前分类为萎缩芽孢杆菌)(来自诺维信生物制品公司,美国),解淀粉芽孢杆菌菌株NRRL B-50154(来自诺维信生物制品公司,美国),或其组合。在一个实施例中,该细菌菌株是解淀粉芽孢杆菌菌株PTA-7543(之前分类为萎缩芽孢杆菌)(来自诺维信生物制品公司,美国)。在另一个实施例中,该细菌菌株是解淀粉芽孢杆菌菌株NRRL B-50154(来自诺维信生物制品公司,美国)。
在具体实施例中,该一种或多种细菌菌株将以在1x102与1x1012CFU/g颗粒之间的量存在,具体的是以在1x104与1x1011CFU/g颗粒之间的量存在,并且更具体的是以在1x105与5x1010CFU/g颗粒之间的量存在。在更具体的实施例中,该一种或多种细菌菌株将以在1x106与1x1010CFU/g颗粒之间的量存在。
该一种或多种细菌菌株的发酵可以使用常规的发酵过程在实验室或工业发酵罐中进行,这些常规的发酵过程例如,需氧液体培养技术、摇瓶培养、以及小规模或大规模发酵(例如,连续、分批、分批补料、固态发酵等),并且此类过程是本领域中熟知的。尽管有用于生产该一种或多种细菌菌株的生产方法,可以直接使用来自培养基的一种或多种细菌菌株,或使其经受纯化和/或进一步加工步骤(例如,干燥过程)。
在发酵之后,该一种或多种细菌菌株可以使用常规技术(例如,通过过滤、离心等)回收。可替代地,该一种或多种细菌菌株可以被干燥(例如,空气干燥、冷冻干燥、或喷雾干燥至低水分水平,并且储存在合适的温度例如室温下)。
酶
包含在根据本发明的酶颗粒中的酶在该一种或多种孢子中不包括任何细胞质酶。因此,该一种或多种孢子可含有细胞内酶,但这些酶不被认为是根据本发明的酶。
该酶颗粒以及该洗涤剂组合物包括一种或多种酶尤其是适合于包括在洗衣或餐具洗涤洗涤剂(洗涤剂酶)中的酶,例如,蛋白酶(例如,枯草杆菌蛋白酶或金属蛋白酶)、脂肪酶、角质酶、淀粉酶、糖酶、纤维素酶、果胶酶、甘露聚糖酶、阿拉伯糖酶、半乳聚糖酶、黄原胶酶(EC 4.2.2.12)、木聚糖酶、DNA酶、过水解酶(perhydrolase)、氧化还原酶(例如,漆酶、过氧化物酶、过氧合酶和/或卤代过氧化物酶)。
优选的洗涤剂酶是蛋白酶(例如,枯草杆菌蛋白酶或金属蛋白酶)、脂肪酶、淀粉酶、裂解酶、纤维素酶、果胶酶、甘露聚糖酶、DNA酶、过水解酶、和氧化还原酶(例如,漆酶、过氧化物酶、过氧合酶和/或卤代过氧化物酶);或其组合。尤其地优选的洗涤剂酶是蛋白酶(例如,枯草杆菌蛋白酶或金属蛋白酶)、脂肪酶、淀粉酶、纤维素酶、果胶酶、和甘露聚糖酶;或其组合。
该酶可以是天然存在的细菌或真菌来源的酶,或者它可以是通过基因改组和/或通过取代、缺失或插入一个或多个氨基酸从一种或多种天然存在的酶衍生的变体。包括化学修饰的突变体或蛋白工程化的突变体。
该酶颗粒可含有多于0.5%w/w并少于50%w/w活性酶蛋白;优选地,多于0.6%w/w并少于40%w/w活性酶蛋白;更优选地,多于0.75%w/w并少于30%w/w活性酶蛋白;并且最优选地,多于1%w/w并少于25%w/w活性酶蛋白。
蛋白酶
用于在本发明中使用的蛋白酶是丝氨酸蛋白酶,例如枯草杆菌蛋白酶、金属蛋白酶和/或胰蛋白酶样蛋白酶。优选地,这些蛋白酶是枯草杆菌蛋白酶或金属蛋白酶;更优选地,这些蛋白酶是枯草杆菌蛋白酶。
丝氨酸蛋白酶是催化肽键水解并且在活性位点处存在一个必需丝氨酸残基的酶(White,Handler和Smith,1973“Principles of Biochemistry[生物化学原理],”第五版,McGraw-Hill Book Company[麦格劳-希尔图书公司],纽约,第271-272页)。枯草杆菌蛋白酶包括I-S1和I-S2亚组,优选地由其构成,正如Siezen等人,Protein Engng.4(1991)719-737[蛋白工程4(1991)719-737];和Siezen等人,Protein Science 6(1997)501-523[蛋白科学6(1997)501-523]所定义。由于丝氨酸蛋白酶的活性位点的结构高度保守,根据本发明的枯草杆菌蛋白酶可以在功能上相当于由Siezen等人(同上)提出的指定亚组的枯草杆菌酶(subtilase)。
枯草杆菌蛋白酶可以是动物、植物或微生物来源的,包括化学或基因修饰的突变体(蛋白工程化的变体),优选为碱性微生物枯草杆菌蛋白酶。枯草杆菌蛋白酶的实例是衍生自芽胞杆菌属的那些,例如枯草杆菌蛋白酶Novo、枯草杆菌蛋白酶Carlsberg、枯草杆菌蛋白酶BPN’、枯草杆菌蛋白酶309、枯草杆菌蛋白酶147以及枯草杆菌蛋白酶168(描述于WO89/06279中)以及蛋白酶PD138(WO 93/18140)。实例描述于WO 98/020115、WO 01/44452、WO01/58275、WO 01/58276、WO 03/006602以及WO 04/099401中。
其他有用的蛋白酶的实例是描述于WO 92/19729、WO 96/034946、WO 98/20115、WO98/20116、WO 99/011768、WO 01/44452、WO 03/006602、WO 04/03186、WO 04/041979、WO07/006305、WO 11/036263、WO 11/036264中的变体,尤其是在以下位置的一个或多个中具有取代的变体:3、4、9、15、27、36、43、57、61、62、68、76、87、95、96、97、98、99、100、101、102、103、104、106、118、120、123、128、129、130、156、158、160、161、167、170、182、185、188、191、194、195、199、204、205、206、209、212、217、218、224、232、235、236、245、248、252、261、262、274和275(使用BPN’编号)。
蛋白酶可以在对应于WO 2004/067737的SEQ ID NO:3的171、173、175、179或180位的一个或多个位置处包含取代。
更优选的蛋白酶变体可包含一个或多个以下取代:S3T、V4I、S9R、S9E、A15T、K27R、*36D、N43R、G61E、G61D、N62D、N62E、V68A、N76D、N87S,R、*97E、A98S、S99G、S99D、S99A、S99AD、S101E、S101D、S101G、S101M、S101N、S101R、S101H、S103A、V104I、V104Y、V104N、S106A、G118V、G118R、H120D、H120N、N123S、S128L、P129Q、S130A、S156D、A158E、G160D、G160P、S161E、Y167A、R170S、Q182E、N185E、S188E、Q191N、A194P、G195E、V199M、N204D、V205I、Y209W、S212G、L217Q、L217D、N218D、N218S、A232V、K235L、Q236H、Q245R、N252K、N261W、N261D、N261E、L262E、L262D、T274A、R275H(使用BPN’编号)。
可商购的蛋白酶的实例包括以下列商标名出售的那些:AlcalaseTM、RelaseTM、RelaseTM Ultra、SavinaseTM、SavinaseTM Ultra、DuralaseTM、DurazymTM、EverlaseTM、PrimaseTM、PolarzymeTM、KannaseTM、LiquanaseTM、LiquanaseTM Ultra、OvozymeTM、CoronaseTM、CoronaseTM Ultra、BlazeTM、Blaze EvityTM 100T、Blaze EvityTM 125T、BlazeEvityTM 150T、NeutraseTM、和EsperaseTM(诺维信公司(Novozymes A/S));以下列商标名出售的那些:MaxataseTM、MaxacalTM、PuramaxTM、FN2TM、FN3TM、FN4TM、ExcellaseTM、MaxapemTM、Purafect OxTM、Purafect OxPTM、EffectenzTMP1050、EffectenzTM P1060、ExcellenzTMP1000、ExcellenzTM P1250、EraserTM、PreferenzTM P100、Purafect PrimeTM、PreferenzTMP110、EffectenzTM P1000、PurafectTM、EffectenzTM P2000、PurafastTM、ProperaseTM、OpticleanTM和OptimaseTM(杰能科公司(Genencor)/丹斯尼克公司(Danisco)/杜邦公司(DuPont));AxapemTM(Gist-Brocases N.V.);BLAP(US 5352604的图29示出的序列)及其变体(汉高公司(Henkel AG));和来自花王株式会社(Kao)的KAP(嗜碱芽孢杆菌枯草杆菌蛋白酶)。
裂解酶
裂解酶可以是一种果胶裂解酶,衍生自芽孢杆菌属,特别的是地衣芽孢杆菌或粘琼脂芽孢杆菌(B.agaradhaerens),或衍生自这些来源中任一种的变体,例如,正如在US6124127、WO 99/027083、WO 99/027084、WO 02/006442、WO 02/092741、WO 03/095638中所述的,可商购的果胶裂解酶是XPectTM;PectawashTM和PectawayTM(诺维信公司)。
甘露聚糖酶
该甘露聚糖酶可以是家族5或26的碱性甘露聚糖酶。它可以是一种来自芽孢杆菌属或腐质霉属的野生型,特别是粘琼脂芽孢杆菌、地衣芽孢杆菌、嗜碱芽孢杆菌、克劳氏芽孢杆菌或特异腐质霉。合适的甘露聚糖酶描述于WO 99/064619中。可商购的甘露聚糖酶是MannawayTM(诺维信公司)。
纤维素酶
合适的纤维素酶包括细菌来源或真菌来源的那些。包括化学修饰的突变体或蛋白工程化的突变体。合适的纤维素酶包括来自芽孢杆菌属、假单胞菌属、腐质霉属、镰孢属、梭孢壳菌属、支顶孢属的纤维素酶,例如披露于US 4,435,307、US 5,648,263、US 5,691,178、US 5,776,757以及WO 89/09259中的由特异腐质霉、嗜热毁丝霉和尖孢镰孢产生的真菌纤维素酶。
尤其合适的纤维素酶是具有颜色护理益处的碱性或中性纤维素酶。此类纤维素酶的实例是描述于EP 0 495 257、EP 0 531 372、WO 96/11262、WO 96/29397、WO 98/08940中的纤维素酶。其他实例为纤维素酶变体,如在WO 94/07998、EP 0 531 315、US 5,457,046、US 5,686,593、US 5,763,254、WO 95/24471、WO 98/12307以及PCT/DK 98/00299中描述的那些。
可商购的纤维素酶包括CelluzymeTM、和CarezymeTM(诺维信公司)、ClazinaseTM、和Puradax HATM(杜邦公司)、以及KAC-500(B)TM(花王株式会社(Kao Corporation))。
脂肪酶和角质酶
合适的脂肪酶和角质酶包括细菌来源或真菌来源的那些。包括化学修饰的突变体或蛋白工程化的突变体。实例包括来自嗜热真菌属(Thermomyces)的脂肪酶,例如来自如在EP 258 068和EP 305 216中描述的疏棉状嗜热丝孢菌(T.lanuginosus)(之前命名为柔毛腐质霉);来自腐质霉属的角质酶,例如在WO 96/13580中描述的特异腐质霉;假单胞菌属脂肪酶,例如来自产碱假单胞菌(P.alcaligenes)或类产碱假单胞菌(P.pseudoalcaligenes)(EP 218 272)、洋葱假单胞菌(P.cepacia)(EP 331 376)、斯氏假单胞菌(P.stutzeri)(GB1,372,034)、萤光假单胞菌(P.fluorescens)、假单胞菌属菌株SD 705(WO 95/06720和WO96/27002)、威斯康星假单胞菌(P.wisconsinensis)(WO 96/12012);芽孢杆菌属脂肪酶,例如来自枯草芽孢杆菌(Dartois et al.,1993,Biochemica et Biophysica Acta,1131:253-360[Dartois等人,1993,生物化学与生物物理学学报,1131:253-360])、嗜热脂肪芽杆菌(JP 64/744992)或短小芽孢杆菌(WO 91/16422)。
其他实例是例如WO 92/05249、WO 94/01541、EP 407 225、EP 260 105、WO 95/35381、WO 96/00292、WO 95/30744、WO 94/25578、WO 95/14783、WO 95/22615、WO 97/04079、WO 97/07202、WO 00/060063、WO 2007/087508以及WO 2009/109500中所描述的那些脂肪酶变体。
优选的可商购脂肪酶包括LipolaseTM、Lipolase UltraTM、和LipexTM;LecitaseTM、LipolexTM;LipocleanTM、LipoprimeTM(诺维信公司)。其他可商购的脂肪酶包括Lumafast(杜邦公司);Lipomax(吉斯特·布罗卡德斯公司/杜邦公司)和来自苏威公司(Solvay)的芽孢杆菌属脂肪酶。
淀粉酶
合适的淀粉酶(α和/或β)包括细菌来源或真菌来源的那些。包括化学修饰的突变体或蛋白工程化的突变体。淀粉酶包括,例如从芽胞杆菌属(例如在GB 1,296,839中详细描述的地衣芽孢杆菌的一种特定菌株)获得的α淀粉酶。
合适的淀粉酶的实例包括具有WO 95/10603中的SEQ ID NO:2的淀粉酶或其与SEQID NO:3具有90%序列同一性的变体。优选的变体描述于WO 94/02597、WO 94/18314、WO97/43424以及WO 99/019467的SEQ ID NO:4中,如在以下位置中的一个或多个处具有取代的变体:15、23、105、106、124、128、133、154、156、178、179、181、188、190、197、201、202、207、208、209、211、243、264、304、305、391、408以及444。
不同的合适的淀粉酶包括具有WO 02/010355中的SEQ ID NO:6的淀粉酶或其与SEQ ID NO:6具有90%序列同一性的变体。SEQ ID NO:6的优选的变体是在位置181和182中具有缺失并且在位置193中具有取代的那些。其他合适的淀粉酶是包含示于WO 2006/066594的SEQ ID NO:6中的来源于解淀粉芽孢杆菌的α-淀粉酶的残基1-33和示于WO 2006/066594的SEQ ID NO:4中的地衣芽孢杆菌α-淀粉酶的残基36-483的杂合α-淀粉酶或其具有90%序列同一性的变体。此杂合α-淀粉酶的优选的变体是在以下位置中的一个或多个中具有取代、缺失或插入的那些:G48、T49、G107、H156、A181、N190、M197、I201、A209以及Q264。包含示于WO 2006/066594的SEQ ID NO:6中的来源于解淀粉芽孢杆菌的α-淀粉酶的残基1-33和SEQ ID NO:4的残基36-483的杂合α-淀粉酶的最优选变体是具有以下取代的那些:
M197T;
H156Y+A181T+N190F+A209V+Q264S;或者
G48A+T49I+G107A+H156Y+A181T+N190F+I201F+A209V+Q264S。
进一步的合适的淀粉酶是具有在WO 99/019467中的SEQ ID NO:6的淀粉酶或其与SEQ ID NO:6具有90%序列同一性的变体。SEQ ID NO:6的优选变体是在以下位置中的一个或多个中具有取代、缺失或插入的那些:R181、G182、H183、G184、N195、I206、E212、E216和K269。特别优选的淀粉酶是在位置R181和G182、或位置H183和G184中具有缺失的那些。
可以使用的另外的淀粉酶是具有WO 96/023873的SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:3、SEQID NO:2或SEQ ID NO:7的那些或其与SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:3或SEQ IDNO:7具有90%序列同一性的变体。SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:3或SEQ ID NO:7的优选的变体是在以下位置中的一个或多个中具有取代、缺失或插入的那些:140、181、182、183、184、195、206、212、243、260、269、304和476。更优选的变体是在位置181和182或位置183和184处具有缺失的那些。SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:2或SEQ ID NO:7的最优选的淀粉酶变体是在位置183和184中具有缺失并且在位置140、195、206、243、260、304和476中的一个或多个中具有取代的那些。
可以使用的其他淀粉酶是具有WO 08/153815的SEQ ID NO:2、WO 01/66712中的SEQ ID NO:10的淀粉酶或其与WO 08/153815的SEQ ID NO:2具有90%序列同一性或与WO01/66712中的SEQ ID NO:10具有90%序列同一性的变体。WO 01/66712中的SEQ ID NO:10的优选的变体是在以下位置中的一个或多个中具有取代、缺失或插入的那些:176、177、178、179、190、201、207、211和264。
进一步的合适的淀粉酶是具有WO 09/061380的SEQ ID NO:2的淀粉酶或其与SEQID NO:2具有90%序列同一性的变体。SEQ ID NO:2的优选的变体是在以下位置中的一个或多个中具有C-末端截短和/或取代、缺失或插入的那些:Q87、Q98、S125、N128、T131、T165、K178、R180、S181、T182、G183、M201、F202、N225、S243、N272、N282、Y305、R309、D319、Q320、Q359、K444和G475。SEQ ID NO:2的更优选的变体是在以下位置中的一个或多个中具有取代的那些:Q87E,R、Q98R、S125A、N128C、T131I、T165I、K178L、T182G、M201L、F202Y、N225E,R、N272E,R、S243Q,A,E,D、Y305R、R309A、Q320R、Q359E、K444E以及G475K,和/或在位置R180和/或S181或T182和/或G183处具有缺失的那些。SEQ ID NO:2的最优选的淀粉酶变体是具有以下取代的那些:
N128C+K178L+T182G+Y305R+G475K;
N128C+K178L+T182G+F202Y+Y305R+D319T+G475K;
S125A+N128C+K178L+T182G+Y305R+G475K;或者
S125A+N128C+T131I+T165I+K178L+T182G+Y305R+G475K,其中这些变体是C-末端截短的,并且任选地进一步包含在位置243处的取代和/或在位置180和/或位置181处的缺失。
其他合适的淀粉酶是具有WO01/66712中的SEQ ID NO:12的α-淀粉酶或与SEQ IDNO:12具有至少90%序列同一性的变体。优选的淀粉酶变体是在WO 01/66712中的SEQ IDNO:12的以下位置中的一个或多个中具有取代、缺失或插入的那些:R28、R118、N174;R181、G182、D183、G184、G186、W189、N195、M202、Y298、N299、K302、S303、N306、R310、N314;R320、H324、E345、Y396、R400、W439、R444、N445、K446、Q449、R458、N471、N484。特别优选的淀粉酶包括具有D183和G184的缺失并且具有取代R118K、N195F、R320K和R458K的变体,以及在选自下组的一个或多个位置处另外具有取代的变体:M9、G149、G182、G186、M202、T257、Y295、N299、M323、E345以及A339,最优选的是另外在所有这些位置处具有取代的变体。
其他的实例是淀粉酶变体,如在WO 2011/098531、WO 2013/001078、和WO 2013/001087中描述的那些。
可商购的淀粉酶是StainzymeTM;Stainzyme PlusTM;DuramylTM、TermamylTM、Termamyl UltraTM;NatalaseTM、FungamylTM和BANTM(诺维信公司)、RapidaseTM和PurastarTM/EffectenzTM、PoweraseTM和PreferenzTMS100(来自杜邦公司)。
脱氧核糖核酸酶(DNA酶)
合适的脱氧核糖核酸酶(DNA酶)是催化DNA骨架中的磷酸二酯键的水解切割从而降解DNA的任何酶。根据本发明,可获得自细菌的DNA酶是优选的;特别地,可获得自芽孢杆菌属的DNA酶是优选的;特别地,可获得自枯草芽孢杆菌或地衣芽孢杆菌的DNA酶是优选的。此类DNA酶的实例描述于专利申请WO 2011/098579或WO 2014/087011中。
过水解酶
合适的过水解酶能够催化过水解反应,所述反应导致在过氧化物源(例如,过氧化氢)的存在下从羧酸酯(酰)底物产生过酸。虽然许多酶以低水平进行该反应,过水解酶展示出高的过水解:水解比率,通常大于1。合适的过水解酶可以是植物、细菌或真菌来源的。包括化学修饰的突变体或蛋白工程化的突变体。
有用的过水解酶的实例包括天然存在的分枝杆菌属过水解酶或其变体。一种示例性酶来源于耻垢分枝杆菌。这种酶,其酶特性、其结构及其变体描述于WO 2005/056782、WO2008/063400、US 2008/145353以及US 2007/167344。
氧化酶/过氧化物酶
合适的氧化酶和过氧化物酶(或氧化还原酶)包括各种糖氧化酶、漆酶、过氧化物酶以及卤代过氧化物酶。
合适的过氧化物酶包括那些由国际生物化学与分子生物学联合会(IUBMB)命名委员会陈述的酶分类EC 1.11.1.7包括的过氧化物酶,或源自其中的展示出过氧化物酶活性的任何片段。
合适的过氧化物酶包括植物、细菌或真菌来源的那些。包括化学修饰的突变体或蛋白工程化的突变体。有用的过氧化物酶的实例包括来自拟鬼伞属,例如来自灰盖拟鬼伞(C.cinerea)的过氧化物酶(EP 179,486),及其变体,如在WO 93/24618、WO 95/10602以及WO 98/15257中描述的那些。
用于在本发明中使用的过氧化物酶还包括卤代过氧化物酶,例如氯过氧化物酶、溴过氧化物酶以及展示出氯过氧化物酶或溴过氧化物酶活性的化合物。根据其对卤素离子的特异性将卤代过氧化物酶进行分类。氯过氧化物酶(EC 1.11.1.10)催化从氯根离子形成次氯酸盐。
在一个实施例中,该卤代过氧化物酶是氯过氧化物酶。优选地,该卤代过氧化物酶是钒卤代过氧化物酶,即含钒酸盐的卤代过氧化物酶。在本发明的优选方法中,将含钒酸盐的卤代过氧化物酶与氯根离子来源组合。
已经从许多不同真菌,特别是从暗色丝孢菌(dematiaceous hyphomycete)真菌组中分离出了卤代过氧化物酶,例如卡尔黑霉属(Caldariomyces)(例如,煤卡尔黑霉(C.fumago))、链格孢属、弯孢属(例如,疣枝弯孢(C.verruculosa)和不等弯孢(C.inaequalis))、内脐蠕孢属、细基格孢属以及葡萄孢属。
还已经从细菌,例如假单胞菌属(例如,吡咯假单胞菌(P.pyrrocinia))和链霉菌属(例如,金色链霉菌(S.aureofaciens))中分离出了卤代过氧化物酶。
在一个优选实施例中,该卤代过氧化物酶可衍生自弯孢属,特别的是疣枝弯孢(Curvularia verruculosa)和不等弯孢,例如描述于WO 95/27046中的不等弯孢CBS102.42或描述于WO 97/04102中的疣枝弯孢CBS 147.63或疣枝弯孢CBS 444.70;或衍生自如描述于WO 01/79459中的Drechslera hartlebii,如描述于WO 01/79458中的盐沼小树状霉(Dendryphiella salina)、如描述于WO 01/79461中的Phaeotrichoconis crotalarie或如描述于WO 01/79460中的Geniculosporium sp.。
根据本发明的氧化酶具体包括由酶分类EC 1.10.3.2囊括的任何漆酶或源自其中的展示出漆酶活性的片段、或展示出类似活性的化合物,例如儿茶酚氧化酶(EC1.10.3.1)、邻氨基苯酚氧化酶(EC 1.10.3.4)或胆红素氧化酶(EC 1.3.3.5)。
优选的漆酶是微生物来源的酶。这些酶可以源自植物、细菌或真菌(包括丝状真菌和酵母)。
来自真菌的合适实例包括可源自以下的菌株的漆酶:曲霉属,脉孢菌属(例如,粗糙脉孢菌),柄孢壳菌属,葡萄孢属,金钱菌属(Collybia),层孔菌属(Fomes),香菇属,侧耳属,栓菌属(例如,长绒毛栓菌和变色栓菌),丝核菌属(例如,立枯丝核菌(R.solani)),拟鬼伞属(例如,灰盖拟鬼伞、毛头拟鬼伞(C.comatus)、弗瑞氏拟鬼伞(C.friesii)及C.plicatilis),小脆柄菇属(Psathyrella)(例如,白黄小脆柄菇(P.condelleana)),斑褶菇属(例如,蝶形斑褶菇(P.papilionaceus)),毁丝霉属(例如,嗜热毁丝霉),Schytalidium(例如,S.thermophilum),多孔菌属(例如,P.pinsitus),射脉菌属(例如,射脉侧菌(P.radiata))(WO 92/01046)或革盖菌属(例如,毛革盖菌(C.hirsutus))(JP 2238885)。
来自细菌的合适实例包括可源自芽孢杆菌属的菌株的漆酶。
优选的是源自拟鬼伞属或毁丝霉属的漆酶;特别是源自灰盖拟鬼伞的漆酶,如披露于WO 97/08325中;或源自嗜热毁丝霉,如披露于WO 95/33836中。
其他氧化酶的实例包括但不限于氨基酸氧化酶、葡萄糖氧化酶、乳酸盐氧化酶、半乳糖氧化酶、多元醇氧化酶(例如,WO2008/051491)、以及醛糖氧化酶。氧化酶及其相应的底物可以被用作过氧化氢生成酶系统,由此作为过氧化氢的一个来源。若干种酶,例如过氧化物酶、卤代过氧化物酶以及过水解酶需要一个过氧化氢的来源。通过研究EC 1.1.3._、EC1.2.3._、EC 1.4.3._、以及EC 1.5.3._或类似类别(在国际生物化学协会下),本领域的普通技术人员容易识别氧化酶和底物的这类组合的其他实例。
如上提及的,氨基酸变化可以具有微小性质,即,不会显著地影响蛋白的折叠和/或活性的保守氨基酸取代或插入;典型地为1-30个氨基酸的小缺失;小的氨基末端或羧基末端延伸,如氨基末端的甲硫氨酸残基;多至20-25个残基的小接头肽;或小的延伸,其通过改变净电荷或另一官能(例如聚组氨酸段、抗原表位或结合结构域)来促进纯化。
保守取代的实例在下组之内:碱性氨基酸(精氨酸、赖氨酸和组氨酸)、酸性氨基酸(谷氨酸和天冬氨酸)、极性氨基酸(谷氨酰胺和天冬酰胺)、疏水氨基酸(亮氨酸、异亮氨酸和缬氨酸)、芳族氨基酸(苯丙氨酸、色氨酸和酪氨酸)、以及小氨基酸(甘氨酸、丙氨酸、丝氨酸、苏氨酸以及甲硫氨酸)。一般不会改变比活性的氨基酸取代是本领域已知的并且例如由H.Neurath和R.L.Hill,1979,In,The Proteins[蛋白],Academic Press[学术出版社],纽约中描述。常见取代为Ala/Ser、Val/Ile、Asp/Glu、Thr/Ser、Ala/Gly、Ala/Thr、Ser/Asn、Ala/Val、Ser/Gly、Tyr/Phe、Ala/Pro、Lys/Arg、Asp/Asn、Leu/Ile、Leu/Val、Ala/Glu和Asp/Gly。
可以根据本领域中已知的程序,如定点诱变或丙氨酸扫描诱变(Cunningham和Wells,1989,Science[科学]244:1081-1085)来鉴定多肽中的必需氨基酸。在后一项技术中,在该分子中的每个残基处引入单个丙氨酸突变,并且对所得突变体分子的酶活性进行测试以鉴定对于该分子的活性至关重要的氨基酸残基。还参见,Hilton等人,1996,J.Biol.Chem.[生物化学杂志]271:4699-4708。酶或其他生物学相互作用的活性部位还可通过对结构的物理分析来确定,如由下述技术确定:核磁共振、晶体学(crystallography)、电子衍射、或光亲和标记,连同对推定的接触位点(contract site)氨基酸进行突变。参见,例如,de Vos等人,1992,Science[科学]255:306-312;Smith等人,1992,J.Mol.Biol.[分子生物学杂志]224:899-904;Wlodaver等人,1992,FEBS Lett.[欧洲生物化学学会联盟通讯]309:59-64。还可以从与相关多肽的比对来推断必需氨基酸的身份。
使用已知的诱变、重组和/或改组方法、随后进行一个相关的筛选程序可以做出单或多氨基酸取代、缺失和/或插入并对其进行测试,这些相关的筛选程序例如由Reidhaar-Olson和Sauer,1988,Science[科学]241:53-57;Bowie和Sauer,1989,Proc.Natl.Acad.Sci.USA[美国国家科学院院刊]86:2152-2156;WO 95/17413;或WO 95/22625。可以使用的其他方法包括易错PCR、噬菌体展示(例如,Lowman等人,1991,Biochemistry[生物化学]30:10832-10837;美国专利号5,223,409;WO 92/06204)和区定向诱变(Derbyshire等人,1986,Gene[基因]46:145;Ner等人,1988,DNA 7:127)。
两个氨基酸序列之间的关联度通过参数“序列同一性”来描述。出于本发明的目的,使用如在EMBOSS软件包(EMBOSS:The European Molecular Biology Open SoftwareSuite[欧洲分子生物学开放软件套件]),Rice等人,2000,Trends Genet.[遗传学趋势]16:276-277)(优选5.0.0版本或更新版本)的Needle程序中所实施的Needleman-Wunsch算法(Needleman和Wunsch,1970,J.Mol.Biol.[分子生物学杂志]48:443-453)来确定两个氨基酸序列之间的序列同一性。使用的参数是空位开放罚分10、空位延伸罚分0.5、以及EBLOSUM62(BLOSUM62的EMBOSS版本)取代矩阵。使用Needle标记的“最长同一性”的输出(使用-nobrief选项获得)作为同一性百分比并且计算如下:(同一的残基x 100)/(比对长度-比对中的空位总数)。
洗涤剂组合物
可以将本发明的酶颗粒添加至洗涤剂组合物中并且因此使其成为洗涤剂组合物的组分。
本发明的洗涤剂组合物可以配制为(例如)手洗或机洗洗衣洗涤剂组合物,包括适用于预处理有污迹的织物的洗衣添加剂组合物,和漂洗添加的织物软化剂组合物,或配制为用于一般家用硬表面清洁操作的洗涤剂组合物,或配制用于手洗或机洗餐具洗涤操作。
在一个特定的方面中,本发明提供了一种洗涤剂添加剂,该添加剂包含如在此描述的本发明的颗粒。
在一个实施例中,本发明针对洗涤剂组合物,该洗涤剂组合物包含结合一种或多种另外的清洁组合物组分的本发明的酶颗粒。
该洗涤剂组合物可以是固体的(粉末、颗粒)或液体的洗涤剂组合物。液体洗涤剂组合物具有物理形式,它不是固体(或气体)。它可以是可倾流的液体、可倾流的凝胶或不可倾流的凝胶。它可以是各向同性的或结构性的,优选各向同性的。
包括但不限于链烷醇、胺、二醇、醚以及多元醇的液体可以被包括在液体洗涤剂中。液体洗涤剂可以含有从0%-30%的有机溶剂。液体洗涤剂甚至可以是非水性的、或基本上是非水性的,其中水含量低于15%,优选低于10%,更优选低于6%,更优选低于4%,更优选低于2%,并且最优选低于1%。
洗涤剂成分可以通过水可溶的袋中的室彼此物理性地分开。因此,可以避免组分间的不良的储存相互作用。在洗涤溶液中,每个室的不同溶解曲线还可以引起选择的组分的延迟溶解。
该洗涤剂组合物可以采用单位剂量产品的形式。单位剂量产品是不可重复使用的容器中的单一剂量的包装。它被越来越多地用于洗衣和餐具洗涤的洗涤剂中。洗涤剂单位剂量产品是在单次洗涤中所用的洗涤剂量值的包装(例如,在由水溶性膜制得的袋中)。
袋可以具有适合保存该组合物的任何形式、形状和材料,例如在与水接触之前,不允许该组合物从袋中释放出来。该袋由水溶性膜制成,它包含了一个内部体积。可以将所述内部体积分成袋的室。优选的膜是聚合物材料,优选地形成膜或薄片的聚合物。优选的聚合物、共聚物或其衍生物选自聚丙烯酸酯、和水溶性丙烯酸酯共聚物、甲基纤维素、羧甲基纤维素、糊精钠、乙基纤维素、羟乙基纤维素、羟丙基甲基纤维素、麦芽糊精、聚甲基丙烯酸酯,最优选地是聚乙烯醇共聚物以及羟丙基甲基纤维素(HPMC)。优选地,聚合物在膜例如PVA中的水平是至少约60%。优选的平均分子量将典型地是约20,000至约150,000。膜还可以是共混物组合物,包含可水解降解的且水溶性的聚合物共混物,例如聚乳酸和聚乙烯醇加增塑剂,像甘油、乙二醇、丙二醇、山梨醇及其混合物。这些袋可以包含固体洗衣清洁组合物或部分组分和/或液体清洁组合物或由水溶性膜分开的部分组分。组合物中,液体组分的室可以与含固体的室不同(参见例如,US 2009/0011970)。
洗涤剂组分的选择可以包括(用于纺织品护理)有待清洁的纺织品的类型、污垢的类型和/或程度、进行清洁时的温度、以及洗涤剂产品的配制的考虑。尽管根据具体的功能性对以下提及的组分由通用标题进行分类,但是这并不被解释为限制,因为如将被普通技术人员所理解,组分可以包含另外的功能性。
另外的组分的选择处于技术人员的能力范围内并且包括常规的成分,包括下文所述的示例性非限制性组分。
在本发明的一个实施例中,可以将本发明的酶颗粒以对应于以下的量添加至洗涤剂组合物中:每升的洗涤液0.001-200mg的酶蛋白,例如0.005-100mg的酶蛋白,优选0.01-50mg的酶蛋白,更优选0.05-20mg的酶蛋白,甚至更优选0.1-10mg的酶蛋白。
表面活性剂
该洗涤剂组合物可以包含一种或多种表面活性剂,它们可以是阴离子的和/或阳离子的和/或非离子的和/或半极性的和/或两性离子的、或其混合物。在一个具体的实施例中,该洗涤剂组合物包含一种或多种非离子型表面活性剂和一种或多种阴离子型表面活性剂的混合物。该一种或多种表面活性剂典型地以按重量计从约0.1%至60%(如约1%至约40%、或约3%至约20%、或约3%至约10%)的水平存在。基于所希望的清洁应用来选择该一种或多种表面活性剂,并且包括本领域中已知的任何一种或多种常规表面活性剂。可以利用本领域中已知的用于在洗涤剂中使用的任何表面活性剂。
当包含在其中时,该洗涤剂将通常含有按重量计从约1%至约40%(如从约5%至约30%,包括从约5%至约15%、或从约20%至约25%)的阴离子表面活性剂。阴离子表面活性剂的非限制性实例包括硫酸盐和磺酸盐,具体地,直链烷基苯磺酸盐(LAS)、LAS的异构体、支链烷基苯磺酸盐(BABS)、苯基链烷磺酸盐、α-烯烃磺酸盐(AOS)、烯烃磺酸盐、链烯烃磺酸盐、链烷-2,3-二基双(硫酸盐)、羟基链烷磺酸盐以及二磺酸盐、烷基硫酸盐(AS)(如十二烷基硫酸钠(SDS))、脂肪醇硫酸盐(FAS)、伯醇硫酸盐(PAS)、醇醚硫酸盐(AES或AEOS或FES,也被称为醇乙氧基硫酸盐或脂肪醇醚硫酸盐)、仲链烷磺酸盐(SAS)、石蜡烃磺酸盐(PS)、酯磺酸盐、磺化的脂肪酸甘油酯、α-磺酸基脂肪酸甲酯(α-SFMe或SES)(包括甲酯磺酸盐(MES))、烷基琥珀酸或烯基琥珀酸、十二烯基/十四烯基琥珀酸(DTSA)、氨基酸的脂肪酸衍生物、磺酸基琥珀酸或皂的二酯和单酯及其组合。
当包含在其中时,该洗涤剂将通常含有按重量计从约0.1%至约10%的阳离子表面活性剂。阳离子表面活性剂的非限制性实例包括烷基二甲基乙醇季胺(ADMEAQ)、十六烷基三甲基溴化铵(CTAB)、二甲基二硬脂酰氯化铵(DSDMAC)、以及烷基苄基二甲基铵、烷基季铵化合物、烷氧基化季铵(AQA)化合物、及其组合。
当包含在其中时,该洗涤剂将通常含有按重量计从约0.2%至约40%(例如从约0.5%至约30%,特别是从约1%至约20%、从约3%至约10%,如从约3%至约5%、或从约8%至约12%)的非离子表面活性剂。非离子表面活性剂的非限制性实例包括醇乙氧基化物(AE或AEO)、醇丙氧基化物、丙氧基化的脂肪醇(PFA)、烷氧基化的脂肪酸烷基酯(如乙氧基化的和/或丙氧基化的脂肪酸烷基酯)、烷基酚乙氧基化物(APE)、壬基酚乙氧基化物(NPE)、烷基多糖苷(APG)、烷氧基化胺、脂肪酸单乙醇酰胺(FAM)、脂肪酸二乙醇酰胺(FADA)、乙氧基化的脂肪酸单乙醇酰胺(EFAM)、丙氧基化的脂肪酸单乙醇酰胺(PFAM)、多羟基烷基脂肪酸酰胺、或葡萄糖胺的N-酰基N-烷基衍生物(葡糖酰胺(GA)、或脂肪酸葡糖酰胺(FAGA))、连同在SPAN和TWEEN商标名下可获得的产品、及其组合。
当包含在其中时,该洗涤剂将通常含有按重量计从约0.1%至约20%的半极性表面活性剂。半极性表面活性剂的非限制性实例包括氧化胺(AO)(如烷基二甲基氧化胺)、N-(椰油基烷基)-N,N-二甲基氧化胺和N-(牛油-烷基)-N,N-双(2-羟乙基)氧化胺、脂肪酸链烷醇酰胺和乙氧基化的脂肪酸链烷醇酰胺及其组合。
当包含在其中时,该洗涤剂将通常含有按重量计从约0.1%至约10%的两性离子表面活性剂。两性离子表面活性剂的非限制性实例包括甜菜碱、烷基二甲基甜菜碱、磺基甜菜碱、及其组合。
水溶助剂
水溶助剂是如下化合物,该化合物在水性溶液中使疏水化合物增溶(或相反地,在非极性环境中使极性物质增溶)。典型地,水溶助剂具有亲水和疏水两种特征(所谓的两亲特性,如由表面活性剂已知的);然而,水溶助剂的分子结构一般不利于自发性自聚集,参见例如由Hodgdon和Kaler(2007),Current Opinion in Colloid&Interface Science[胶体&界面科学新见]12:121-128的综述。水溶助剂并不显示出临界浓度,高于该浓度就会发生如对表面活性剂和脂质而言所发现的自聚集,从而形成胶束、薄层或其他定义明确的中间相。相反,许多水溶助剂显示连续类型的聚集过程,在该过程中聚集物的大小随着浓度增加而增长。然而,许多水溶助剂改变了含有极性和非极性特征的物质的体系(包括水、油、表面活性剂、和聚合物的混合物)的相行为、稳定性和胶体特性。水溶助剂常规地在从药学、个人护理、食品到技术应用的各个产业中应用。水溶助剂在洗涤剂组合物中的使用允许例如更浓的表面活性剂配制品(如在通过去除水而压缩液体洗涤剂的过程中)而不引起不希望的现象,如相分离或高黏度。
该洗涤剂可以包含按重量计0%-5%,如约0.5%至约5%,或约3%至约5%的水溶助剂。可以利用本领域中已知的用于在洗涤剂中使用的任何水溶助剂。水溶助剂的非限制性实例包括苯磺酸钠、对甲苯磺酸钠(STS)、二甲苯磺酸钠(SXS)、枯烯磺酸钠(SCS)、伞花烃磺酸钠、氧化胺、醇和聚乙二醇醚、羟基萘甲酸钠、羟基萘磺酸钠、乙基己基磺酸钠及其组合。
助洗剂和共助洗剂
该洗涤剂组合物可以含有按重量计约0-65%(如约5%至约50%)的洗涤剂助洗剂或共助洗剂、或其混合物。在餐具洗涤洗涤剂中,助洗剂的水平典型地是40%-65%、特别是50%-65%。助洗剂和/或共助洗剂可以具体是螫合剂,其与钙和镁离子形成水溶性复合物。可以利用本领域中已知的用于在洗衣洗涤剂中使用的任何助洗剂和/或共助洗剂。助洗剂的非限制性实例包括柠檬酸盐、沸石、二磷酸盐(焦磷酸盐)、三磷酸盐如三磷酸钠(STP或STPP)、碳酸盐如碳酸钠、可溶性硅酸盐如硅酸钠、层状硅酸盐(例如,来自赫斯特公司(Hoechst)的SKS-6)、乙醇胺如2-氨基乙-1-醇(MEA)、二乙醇胺(DEA,也称为亚氨基二乙醇)、三乙醇胺(TEA,也称为2,2’,2”-次氮基三乙醇)、以及羧甲基菊粉(CMI)及其组合。
该洗涤剂组合物还可以含有按重量计0-50%(如约5%至约30%)的洗涤剂共助洗剂或其混合物。该洗涤剂组合物可以包括单独的共助洗剂,或与助洗剂,例如沸石助洗剂组合。共助洗剂的非限制性实例包括聚丙烯酸酯的均聚物或其共聚物,如聚(丙烯酸)(PAA)或共聚(丙烯酸/马来酸)(PAA/PMA)。进一步的非限制性实例包括柠檬酸盐,螯合剂,例如氨基羧酸盐、氨基多羧酸盐和膦酸盐,以及烷基琥珀酸或烯基琥珀酸。另外的具体实例包括2,2’,2”-次氨基三乙酸(NTA)、乙二胺四乙酸(EDTA)、二亚乙基三胺五乙酸(DTPA)、亚氨基二琥珀酸(IDS)、乙二胺-N,N’-二丁二酸(EDDS)、甲基甘氨酸二乙酸(MGDA)、谷氨酸-N,N-二乙酸(GLDA)、1-羟基乙烷-1,1-二磷酸(HEDP)、乙二胺四-(亚甲基磷酸)(EDTMPA)、二亚乙基三胺五(亚甲基磷酸)(DTMPA或DTPMPA)、N-(2-羟乙基)亚氨基二乙酸(EDG)、天冬氨酸-N-单乙酸(ASMA)、天冬氨酸-N,N-二乙酸(ASDA)、天冬氨酸-N-单丙酸(ASMP)、亚氨基二琥珀酸(IDA)、N-(2-磺甲基)-天冬氨酸(SMAS)、N-(2-磺乙基)-天冬氨酸(SEAS)、N-(2-磺甲基)-谷氨酸(SMGL)、N-(2-磺乙基)-谷氨酸(SEGL)、N-甲基亚氨基二乙酸(MIDA)、α-丙氨酸-N,N-二乙酸(α-ALDA)、丝氨酸-N,N-二乙酸(SEDA)、异丝氨酸-N,N-二乙酸(ISDA)、苯丙氨酸-N,N-二乙酸(PHDA)、邻氨基苯甲酸-N,N-二乙酸(ANDA)、磺胺酸-N,N-二乙酸(SLDA)、牛磺酸-N,N-二乙酸(TUDA)以及磺甲基-N,N-二乙酸(SMDA)、N-(2-羟乙基)-亚乙基二胺-N,N’,N’-三乙酸盐(HEDTA)、二乙醇甘氨酸(DEG)、二亚乙基三胺五(亚甲基磷酸)(DTPMP)、氨基三(亚甲基磷酸)(ATMP)、及其组合和盐。另外的示例性助洗剂和/或共助洗剂描述于例如WO 2009/102854、US 5,977,053中。
漂白系统
该洗涤剂可以含有按重量计0-50%的漂白系统。可以利用本领域中已知的用于在洗衣洗涤剂中使用的任何漂白系统。合适的漂白系统组分包括漂白催化剂、光漂白剂、漂白活化剂、过氧化氢源如过碳酸钠和过硼酸钠、预成型过酸及其混合物。合适的预成型过酸包括但不限于:过氧羧酸及盐、过碳酸及盐、过亚氨酸(perimidic acid)及盐、过氧单硫酸及盐(例如过硫酸氢钾(Oxone(R))、及其混合物。漂白系统的非限制性实例包括与过酸形成性漂白活化剂组合的过氧化物基的漂白系统,这些系统可以包含例如无机盐,包括碱金属盐,如过硼酸盐(通常是单水合物或四水合物)、过碳酸盐、过硫酸盐、过磷酸盐、过硅酸盐的钠盐。术语漂白活化剂在本文意指与过氧化物漂白剂(像过氧化氢)反应以形成过酸的化合物。以此方式形成的过酸构成活化的漂白剂。在此将使用的适合漂白活化剂包括属于酯酰胺、酰亚胺或酸酐类别的那些。合适的实例是四乙酰基乙二胺(TAED)、4-[(3,5,5-三甲基己酰)氧基]苯磺酸钠(ISONOBS)、二过氧月桂酸、4-(十二酰基氧基)苯磺酸盐(LOBS)、4-(癸酰基氧基)苯磺酸盐、4-(癸酰基氧基)苯甲酸盐(DOBS)、4-(壬酰基氧基)-苯磺酸盐(NOBS)和/或披露于WO 98/17767中的那些。感兴趣的漂白活化剂的具体家族披露于EP 624154中并且该家族中特别优选的是乙酰柠檬酸三乙酯(ATC)。ATC或短链甘油三酸酯(像三醋汀)具有以下优点,它是环境友好的,因为它最终降解为柠檬酸和醇。此外,乙酰柠檬酸三乙酯和三醋汀在储存时在产品中具有良好的水解稳定性,并且它是有效的漂白活化剂。最后,ATC为洗衣添加剂提供良好的助洗能力。替代性地,漂白体系可以包含例如酰胺、酰亚胺或砜类型的过氧酸。漂白体系还可以包含过酸,诸如6-(苯二甲酰亚氨基)过己酸(PAP)。漂白系统还可以包括漂白催化剂。在一些实施例中,漂白组分可以是选自下组的有机催化剂,该组由以下各项组成:具有下式的有机催化剂:
及其混合物;其中每个R1独立地是包含从9至24个碳的支链烷基基团或包含从11至24个碳的直链烷基基团,优选地,每个R1独立地是包含从9至18个碳的支链烷基基团或包含从11至18个碳的直链烷基基团,更优选地,每个R1独立地选自下组,该组由以下组成:2-丙基庚基、2-丁基辛基、2-戊基壬基、2-己基癸基、正-十二烷基、正-十四烷基、正-十六烷基、正-十八烷基、异-壬基、异-癸基、异-十三基和异-十五烷基。其他示例性漂白系统描述于例如WO 2007/087258、WO 2007/087244、WO 2007/087259以及WO 2007/087242中。合适的光漂白剂可以例如是磺化的酞菁锌。
聚合物
该洗涤剂可以含有按重量计0-10%(如0.5%-5%、2%-5%、0.5%-2%或0.2%-1%)的聚合物。可以利用本领域已知的用于在洗涤剂中使用的任何聚合物。该聚合物可以作为如上文提到的共助洗剂起作用,或可以提供抗再沉积、纤维保护、污垢释放、染料转移抑制、油污清洁和/或抑泡特性。一些聚合物可以具有多于一种的以上提到的特性和/或多于一种的以下提到的基序。示例性聚合物包括(羧甲基)纤维素(CMC)、聚(乙烯醇)(PVA)、聚(乙烯吡咯烷酮)(PVP)、聚(乙二醇)或聚(环氧乙烷)(PEG)、乙氧基化的聚(亚乙基亚胺)、羧甲基菊粉(CMI)、和聚羧化物,如PAA、PAA/PMA、聚-天冬氨酸、和甲基丙烯酸月桂酯/丙烯酸共聚物、疏水修饰的CMC(HM-CMC)和硅酮、对苯二甲酸和低聚乙二醇的共聚物、聚(对苯二甲酸乙二酯)和聚(氧乙烯对苯二甲酸乙二酯)的共聚物(PET-POET)、PVP、聚(乙烯基咪唑)(PVI)、聚(乙烯吡啶-N-氧化物)(PVPO或PVPNO)以及聚乙烯吡咯烷酮-乙烯基咪唑(PVPVI)。进一步的示例性聚合物包括磺化的聚羧酸酯、聚环氧乙烷和聚环氧丙烷(PEO-PPO)以及乙氧基磺酸二季铵盐。其他示例性聚合物披露于例如WO 2006/130575以及US 5,955,415中。还考虑了以上提到的聚合物的盐。
织物调色剂
本发明的洗涤剂组合物还可以包括织物调色剂,例如染料或颜料,当配制在洗涤剂组合物中时,当所述织物与洗涤液接触时织物调色剂可以沉积在织物上,该洗涤液包含所述洗涤剂组合物,并且因此通过可见光的吸收/反射改变所述织物的色彩。荧光增白剂发射至少一些可见光。相比之下,当织物调色剂吸收至少部分可见光谱时,它们改变表面的色彩。合适的织物调色剂包括染料和染料-粘土轭合物,并且还可以包括颜料。合适的染料包括小分子染料和聚合物染料。合适的小分子染料包括选自下组的小分子染料,该组由落入颜色索引(Colour Index)(C.I.)分类的以下染料组成:直接蓝、直接红、直接紫、酸性蓝、酸性红、酸性紫、碱性蓝、碱性紫和碱性红、或其混合物,例如如描述于WO 2005/03274、WO2005/03275、WO 2005/03276以及EP 1876226(通过引用结合在此)中。该洗涤剂组合物优选地包含从约0.00003wt%至约0.2wt%、从约0.00008wt%至约0.05wt%、或甚至从约0.0001wt%至约0.04wt%的织物调色剂。该组合物可以包含从0.0001wt%至0.2wt%的织物调色剂,当该组合物处于单位剂量袋的形式时,这可以是尤其优选的。合适的调色剂还披露于例如WO 2007/087257和WO 2007/087243中。
一种或多种洗涤剂酶
洗涤剂添加剂连同洗涤剂组合物可以包含一种或多种(另外的)酶,如以上在“酶”标题下所提到的那些。
一般而言,所选的一种或多种酶的特性应与所选的洗涤剂相容(即,最适pH、与其他酶和非酶成分的相容性等),并且该一种或多种酶应以有效量存在。
可以通过添加含有一种或多种酶的单独添加剂、或通过添加包含所有这些酶的组合添加剂而将洗涤剂酶包含在洗涤剂组合物中。本发明的洗涤剂添加剂,即单独的添加剂或组合的添加剂,可以配制成例如颗粒、液体、浆液等。优选的洗涤剂添加剂配制品是颗粒,特别是无粉尘颗粒;液体,特别是稳定化液体;或浆液。
可以通过添加含有一种或多种酶的单独添加剂、或通过添加包含所有这些酶的组合添加剂而将洗涤剂酶包含在洗涤剂组合物中。本发明的洗涤剂添加剂,即单独的添加剂或组合的添加剂,被配制为本发明的颗粒。
辅料
还可以利用本领域中已知的用于在洗衣洗涤剂中使用的任何洗涤剂组分。其他任选的洗涤剂组分包括防腐蚀剂、防缩剂、抗污垢再沉积剂、抗皱剂、杀细菌剂、粘合剂、腐蚀抑制剂、崩解剂(disintegrant)/崩解试剂(disintegration agent)、染料、酶稳定剂(包括硼酸、硼酸盐、CMC和/或多元醇(如丙二醇))、织物调理剂(包括粘土)、填充剂/加工助剂、荧光增白剂/光学增亮剂、增泡剂、泡沫(泡)调节剂、香料、污垢悬浮剂、软化剂、抑泡剂、晦暗抑制剂、以及芯吸剂,单独或组合使用。可以利用本领域中已知的用于在洗衣洗涤剂中使用的任何成分。此类成分的选择完全在技术人员的技术范围内。
分散剂-本发明的洗涤剂组合物还可以含有分散剂。具体地说,粉状洗涤剂可以包括分散剂。合适的水溶性有机材料包括均聚合或共聚合的酸或其盐,其中聚羧酸包含被不多于两个碳原子彼此分开的至少两个羧基。合适的分散剂例如描述于PowderedDetergents[粉状洗涤剂],Surfactant Science Series[表面活性剂科学系列],第71卷,Marcel Dekker,Inc[马塞尔德克尔公司]中。
染料转移抑制剂-本发明的洗涤剂组合物还可以包括一种或多种染料转移抑制剂。合适的聚合物染料转移抑制剂包括但不局限于聚乙烯吡咯烷酮聚合物、多胺N-氧化物聚合物、N-乙烯吡咯烷酮与N-乙烯基咪唑的共聚物、聚乙烯噁唑烷酮以及聚乙烯咪唑或其混合物。当在主题组合物中存在时,染料转移抑制剂可以按该组合物的重量计以从约0.0001%至约10%、从约0.01%至约5%或甚至从约0.1%至约3%的水平存在。
荧光增白剂-本发明的洗涤剂组合物将优选还含有荧光增白剂。荧光增白剂还称为光学增亮剂、光学增白剂、或荧光增亮剂,是在电磁波谱的紫外和紫色区域(通常340-370nm)吸收光并在蓝色区域(典型地420-470nm)重新发射光的染料。这些试剂通常用以增强织物和纸的颜色的外观,引起“增白”作用,通过增加反射的蓝色光的总量使得材料看起来更少黄色。
优选的荧光剂选自以下类别:二苯乙烯联苯、三嗪基氨基芪、双(1,2,3-三唑-2-基)芪、双(苯并[b]呋喃-2-基)联苯、1,3-二苯基-2-吡唑啉、噻吩二基苯并噁唑、以及香豆素。荧光剂优选地是磺化的。
荧光剂的优选的类别是二苯乙烯联苯化合物,例如,TinopalTMCBS-X,二胺芪二磺酸化合物,例如,天来宝(Tinopal)DMS-X和BlankophorTMHRH;吡唑啉化合物,例如,Blankophor SN;以及噻吩二基苯并噁唑化合物,例如,天来宝OB。
适合用于洗涤剂组合物中的其他荧光增白剂包括属于以下类别的那些:二氨基芪-磺酸衍生物、二芳基吡唑啉衍生物和二苯基-联苯乙烯基衍生物。荧光增白剂的二氨基芪-磺酸衍生物型的实例包括以下的钠盐:4,4’-双-(2-二乙醇氨基-4-苯胺基-s-三嗪-6-基氨基)芪-2,2’-二磺酸盐、4,4’-双-(2,4-二苯胺基-s-三嗪-6-基氨基)芪-2.2’-二磺酸盐、4,4’-双-(2-苯胺基-4-(N-甲基-N-2-羟基-乙基氨基)-s-三嗪-6-基氨基)芪-2,2’-二磺酸盐、4,4’-双-(4-苯基-1,2,3-三唑-2-基)芪-2,2’-二磺酸盐以及5-(2H-萘并[1,2-d][1,2,3]三唑-2-基)-2-[(E)-2-苯基乙烯基]苯磺酸钠。优选的荧光增白剂是可从巴斯夫公司(BASF)获得的天来宝DMS和天来宝CBS以及天来宝OB。天来宝DMS是4,4’-双-(2-吗啉代-4-苯胺基-s-三嗪-6-基氨基)芪-2,2’-二磺酸盐的二钠盐。天来宝CBS是2,2’-双-(苯基-苯乙烯基)-二磺酸盐的二钠盐。天来宝OB是2,5-噻吩二基双(5-叔-丁基-1,3-苯并噁唑)。另一种优选的荧光增白剂是可商购的Parawhite KX,由派拉蒙矿物与化学品公司(ParamountMinerals and Chemicals),孟买,印度供应。适合用于本发明中使用的其他荧光剂包括1-3-二芳基吡唑啉和7-氨烷基香豆素。
合适的荧光增亮剂水平包括从约0.01wt%、从0.05wt%、从约0.1wt%或甚至从约0.2wt%的较低水平至0.5wt%或甚至0.75wt%的较高水平。优选地,该增亮剂以约0.01%至约0.5%的水平存在。
污垢释放聚合物-本发明的洗涤剂组合物还可以包括一种或多种污垢释放聚合物,这些污垢释放聚合物帮助从织物,例如棉和聚酯基织物上除去污垢,特别是从聚酯基织物上除去疏水污垢。污垢释放聚合物可以例如是基于非离子型或阴离子型对苯二甲酸的聚合物、聚乙烯基己内酰胺和相关共聚物、乙烯基接枝共聚物、聚酯聚酰胺,参见例如Powdered Detergents[粉状洗涤剂],Surfactant science series[表面活性剂科学系列],第71卷第7章Marcel Dekker,Inc[马塞尔德克尔公司]。另一种类型的污垢释放聚合物是包含核心结构和附接至该核心结构的多个烷氧基化基团的两亲性烷氧基化油污清洁聚合物。核心结构可以包含聚烷基亚胺结构或聚烷醇胺结构,例如详细描述于WO 2009/087523中(通过引用结合在此)。此外,随机接枝共聚物是合适的污垢释放聚合物。合适的接枝共聚物更详细地描述于WO 2007/138054、WO 2006/108856和WO 2006/113314中(通过引用结合在此)。其他污垢释放聚合物是取代的多糖结构,尤其是取代的纤维素结构,例如修饰的纤维素衍生物,例如EP 1867808或WO 2003/040279中描述的那些(将二者都通过引用结合在此)。合适的纤维素聚合物包括纤维素、纤维素醚、纤维素酯、纤维素酰胺以及其混合物。合适的纤维素聚合物包括阴离子修饰的纤维素、非离子修饰的纤维素、阳离子修饰的纤维素、两性离子修饰的纤维素、及其混合物。合适的纤维素聚合物包括甲基纤维素、羧甲基纤维素、乙基纤维素、羟乙基纤维素、羟丙基甲基纤维素、酯羧甲基纤维素、及其混合物。
抗再沉积剂-本发明的洗涤剂组合物还可以包括一种或多种抗再沉积剂,例如羧甲基纤维素(CMC)、聚乙烯醇(PVA)、聚乙烯吡咯烷酮(PVP)、聚环氧乙烷和/或聚乙二醇(PEG)、丙烯酸的均聚物、丙烯酸与马来酸的共聚物以及乙氧基化聚乙亚胺。以上在污垢释放聚合物下描述的基于纤维素的聚合物还可以用作抗再沉积剂。
流变改性剂是结构剂或增稠剂,不同于降粘剂。流变改性剂选自下组,该组由以下各项组成:非聚合物结晶、羟基功能材料、聚合物流变改性剂,它们为液体洗涤剂组合物的水性液相基质赋予剪切稀化特征。可以通过本领域已知的方法修饰和调整洗涤剂的流变学和粘度,例如如在EP 2169040中所示。
其他合适的辅料包括但不限于防缩剂、防皱剂、杀菌剂、粘合剂、载体、染料、酶稳定剂、织物柔软剂、填充剂、泡沫调节剂、香料、颜料、抑泡剂、以及溶剂。
洗衣皂条
本发明的颗粒可以被添加至洗衣皂条中并且用于手洗洗衣、织物和/或纺织品。术语洗衣皂条包括洗衣条、皂条、组合条(combo bar)、合成洗涤剂条以及洗涤剂条。条的类型通常区别在于他们含有的表面活性剂的类型,并且术语洗衣皂条包括含有来自脂肪酸的皂和/或合成皂的那些。洗衣皂条具有在室温下为固体而非液体、凝胶或粉末的物理形式。术语固体被定义为不随时间显著变化的物理形式,即如果固体物体(例如洗衣皂条)被放置在容器里,该固体物体不会为了填充其被放置的容器而发生改变。该条是固体时典型地是条的形式但也可能是其他的固体形状如圆形或椭圆形。
该洗衣皂条可以含有一个或多个另外的酶、蛋白酶抑制剂如肽醛类(或次硫酸盐加合物或半缩醛加合物)、硼酸、硼酸盐、硼砂和/或苯基硼酸衍生物如4-甲酸基本硼酸、一个或多个皂或合成的表面活性剂、多元醇如甘油、pH控制化合物如脂肪酸、柠檬酸、乙酸和/或甲酸、和/或一价阳离子和有机阴离子的盐,其中所述一价阳离子可以是例如Na+、K+或NH4 +并且所述有机阴离子可以是例如甲酸盐、乙酸盐、柠檬酸盐或乳酸盐,这样使得所述一价阳离子和有机阴离子的盐可以是例如甲酸钠。
洗衣皂条还可以包含络合剂像EDTA和HEDP、香料和/或不同类型的填充剂、表面活性剂例如阴离子型合成表面活性剂、助洗剂、聚合的污垢释放剂、洗涤剂螯合剂、稳定试剂、填充剂、染料、着色剂、染料转移抑制剂、烷氧基化的聚碳酸酯、抑泡剂、结构剂、粘合剂、浸出剂、漂白活化剂、黏土去污剂、抗再沉积剂、聚合分散剂、增亮剂、织物柔软剂、香料和/或本领域已知的其他化合物。
洗衣皂条可以在常规的洗衣皂条制造设备中进行加工,例如但不限制于:混合器、压条机例如双级真空压条机、挤出机、切割机、标识压模机(logo-stamper)、冷却隧道以及包装机。本发明不局限于通过任何单一方法制备洗衣皂条。可以在过程的不同阶段向肥皂中添加本发明的预混料。例如,可以制备含有肥皂、本发明的酶颗粒、任选地一种或多种另外的酶、蛋白酶抑制剂以及一价阳离子和有机阴离子的盐的预混料并且然后将该混合物压条。酶和任选的另外的酶可以同时添加作为蛋白酶抑制剂,例如以液体形式。除了混合步骤和压条步骤以外,该过程还可以进一步包含研磨、挤出、切割、压模、冷却和/或包装的步骤。
动物饲料和动物饲料添加剂
可以将本发明的酶颗粒添加至动物饲料或动物饲料添加剂中并且因此使其成为动物饲料或动物饲料添加剂的组分。
在一个方面,该动物饲料或动物饲料添加剂包含本发明的酶颗粒,和一种或多种选自由维生素、矿物质和氨基酸组成的组的组分。
在一个实施例中,该动物饲料或动物饲料添加剂进一步包含一种或多种另外的酶,这些酶选自下组,该组由以下各项组成:乙酰木聚糖酯酶、酰基甘油脂肪酶、淀粉酶、α-淀粉酶、β-淀粉酶、阿拉伯呋喃糖苷酶、纤维二糖水解酶、纤维素酶、阿魏酸酯酶、半乳聚糖酶、α-半乳糖苷酶、β-半乳糖苷酶、β-葡聚糖酶、β-葡糖苷酶、溶血磷脂酶、溶菌酶、α-甘露糖苷酶、β-甘露糖苷酶(甘露聚糖酶)、植酸酶、磷脂酶A1、磷脂酶A2、磷脂酶D、蛋白酶、支链淀粉酶、果胶酯酶、三酰基甘油脂肪酶、木聚糖酶、β-木糖苷酶或其任何组合。
在一个实施例中,该动物饲料或动物饲料添加剂包含一种或多种微生物,这些微生物选自下组,该组由以下各项组成:枯草芽孢杆菌、地衣芽孢杆菌、解淀粉芽孢杆菌、蜡样芽孢杆菌、短小芽孢杆菌、多粘芽孢杆菌、巨大芽孢杆菌、凝结芽孢杆菌、环状芽孢杆菌、两歧双歧杆菌、动物双歧杆菌、双歧杆菌属物种、肉食杆菌属物种、丁酸梭菌、梭菌属物种、屎肠球菌、肠球菌属物种、乳杆菌属物种、嗜酸乳杆菌、香肠乳杆菌、鼠李糖乳杆菌、罗伊氏乳杆菌、唾液乳杆菌、乳酸乳球菌、乳球菌属物种、明串珠菌属物种、埃氏巨型球菌、巨型球菌属物种、乳酸片球菌、片球菌属物种、特氏丙酸杆菌、丙酸杆菌属物种和链球菌属物种或其任何组合。
在一个实施例中,本发明涉及一种包含如本文所述的颗粒和植物基材料的动物饲料。在一个实施例中,本发明涉及一种包含如本文所描述的动物饲料添加剂以及植物基材料的动物饲料。
动物饲料组合物或饮食具有相对高的蛋白含量。家禽和猪饮食可以如WO 01/58275的表B第2-3栏所示来表征。鱼饮食可以如表B第4栏所示来表征。此外,此类鱼饮食通常具有200-310g/kg的粗脂肪含量。
根据本发明的动物饲料组合物具有的粗蛋白含量为50-800g/kg,并且此外包含如本文所要求的酶颗粒。
此外或在(上述粗蛋白含量)的替代方案中,本发明的动物饲料组合物具有10-30MJ/kg的可代谢能量;和/或0.1-200g/kg的钙含量;和/或0.1-200g/kg的有效磷含量;和/或0.1-100g/kg的甲硫氨酸含量;和/或0.1-150g/kg的甲硫氨酸加半胱氨酸含量;和/或0.5-50g/kg的赖氨酸含量。
在具体实施例中,可代谢能量、粗蛋白、钙、磷、甲硫氨酸、甲硫氨酸加半胱氨酸和/或赖氨酸的含量落入WO 01/58275表B中的范围2、3、4或5(R.2-5)中的任何一个内。
粗蛋白以氮(N)乘以系数6.25计算,即粗蛋白(g/kg)=N(g/kg)x6.25。通过凯氏定氮法(Kjeldahl method)测定氮含量(A.O.A.C.,1984,Official Methods of Analysis[官方分析方法]第14版,Association of Official Analytical Chemists[官方分析化学家集],华盛顿特区)。
可代谢能量可根据如下进行计算:NRC出版物Nutrient requirements in swine[猪的营养需求],第九次再版1988,subcommittee on swine nutrition,committee onanimal nutrition,board of agriculture,national research council[美国国家研究委员会农业部动物营养协会猪营养分会].National Academy Press[美国国家科学院出版社],华盛顿特区,第2-6页和European Table of Energy Values for Poultry Feed-stuffs[欧洲家禽饲养材料能量值表],Spelderholt centre for poultry research andextension[斯克得霍特家禽研究与推广中心],7361DA贝克贝亨,荷兰,Grafisch bedrijfPonsen&looijen公司,Wageningen[瓦赫宁恩].ISBN 90-71463-12-5。
根据诸如Veevoedertabel 1997,gegevens over chemische samenstelling,verteerbaarheid en voederwaarde van voedermiddelen,Central Veevoederbureau,Runderweg 6,8219pk Lelystad.ISBN 90-72839-13-7等饲料表计算在动物全饮食中的钙、有效磷和氨基酸的膳食含量。
在一个具体实施例中,本发明的动物饲料组合物包含如上定义的至少一种植物蛋白。
本发明的动物饲料组合物还可以含有动物蛋白,如肉和骨粉、羽毛粉和/或鱼粉,通常量为0-25%。本发明的动物饲料组合物还可以包含具有可溶物的干酒糟(DriedDistillers Grains with Solubles,DDGS),通常量为0-30%。
在再进一步具体的实施例中,本发明的动物饲料组合物含有0-80%玉蜀黍;和/或0-80%高粱;和/或0-70%小麦;和/或0-70%大麦;和/或0-30%燕麦;和/或0-40%豆粕;和/或0-25%鱼粉;和/或0-25%肉和骨粉;和/或0-20%乳清。
该动物饲料可以包含植物蛋白。在具体实施例中,这些植物蛋白的蛋白含量是至少10%、20%、30%、40%、50%、60%、70%、80%或90%(w/w)。植物蛋白可以衍生自植物蛋白来源,如豆类和谷类,例如得自蝶形花科(豆科)、十字花科、藜科和早熟禾科植物的材料,如大豆粉饼、羽扇豆粉饼、油菜籽粉饼及其组合。
在一个具体实施例中,该植物蛋白来源是来自豆科的一种或多种植物(如大豆、羽扇豆、豌豆或菜豆)的材料。在另一个具体实施例中,植物蛋白来源是得自藜科的一种或多种植物,例如甜菜、糖甜菜、菠菜或奎奴亚藜的材料。植物蛋白来源的其他实例是油菜和卷心菜。在另一个具体实施例中,大豆是优选的植物蛋白来源。植物蛋白来源的其他实例是谷物,如大麦、小麦、黑麦、燕麦、玉蜀黍(玉米)、稻和高粱。
可以将动物饮食制成例如粉状饲料(非粒化)或粒化饲料。通常,混合研磨的饲料并根据所讨论的种类的说明添加充足量的必需维生素和矿物质。
食品添加剂和食品加工助剂
可以将本发明的酶颗粒添加至食品添加剂或食品加工助剂中并因此使其成为食品添加剂或食品加工助剂的组分,其在食品工业中用于制备用于人消耗的加工食品产品。
组合物、方法以及用途
在第一方面,本发明提供了一种包含酶和一种或多种孢子(优选一种或多种细菌孢子)的酶颗粒。优选地,该酶是蛋白酶、脂肪酶、角质酶、淀粉酶、糖酶、纤维素酶、果胶酶、果胶裂解酶、甘露聚糖酶、阿拉伯糖酶、半乳聚糖酶、木聚糖酶、DNA酶、氧化酶、漆酶、过氧化物酶、或过水解酶。
在一个实施例中,该酶颗粒包含核心和包衣。
在一个实施例中,该核心包括该酶和该一种或多种孢子。
在一个实施例中,该包衣包括该酶和该一种或多种孢子。
在一个实施例中,该核心包括该酶并且该包衣包括该一种或多种孢子。
在一个实施例中,该核心包括该一种或多种孢子并且该包衣包括该酶。
在一个实施例中,该酶颗粒含有以多于0.5%w/w并少于50%w/w活性酶蛋白的量的该酶。
在一个实施例中,该酶颗粒含有以在1x102与1x1012CFU/g该颗粒之间的量的该一种或多种孢子。优选地,该一种或多种孢子源自一种或多种孢子形成细菌菌株。更优选地,该一种或多种孢子是一种或多种源自芽孢杆菌菌株的芽孢杆菌内生孢子。
在一个实施例中,该酶颗粒包含盐包衣。
在另一方面,本发明提供了一种用于制备本发明的酶颗粒的方法,如以上所描述的,该方法包括使包含该酶的共混物粒化,随后施用包含该一种或多种孢子的包衣。
在另一方面,本发明提供了一种用于制备本发明的酶颗粒的方法,如以上所描述的,该方法包括使包含该一种或多种孢子的共混物粒化,随后施用包含该酶的包衣。
在另一方面,本发明提供了一种用于制备本发明的酶颗粒的方法,如以上所描述的,该方法包括使包含该酶和该一种或多种孢子的共混物粒化,任选地随后施用包衣。
在另一方面,本发明提供了一种用于制备本发明的酶颗粒的方法,如以上所描述的,该方法包括使共混物粒化,随后施用包含该酶和该一种或多种孢子的包衣。
在另一方面,本发明提供了一种洗涤剂组合物(例如,洗衣或自动餐具洗涤洗涤剂),如以上所描述的,该洗涤剂组合物包含表面活性剂和/或洗涤剂助洗剂、和本发明的酶颗粒。优选地,洗涤剂组合物是粉末洗涤剂组合物。
进一步通过以下实例来描述本发明,所述实例不应理解为限制了本发明的范围。
实例
化学品至少是试剂等级的商品。
实例1A
根据US 4,106,991,使用以干基计约15%的水,在50L的高剪切造粒机中,将10%纤维素、5%糊精、8%碳酸钙和77%硫酸钠的粉末组合物造粒。将产物在中试规模的流化床中干燥并且随后筛选至300μm–1180μm的尺寸范围。
将4000g上述颗粒装载到配备有双流体顶喷喷嘴的中试规模流化床(GlattProcel)中。将空气流速调节至120m3/h,并且入口温度设定为80℃。
制备由溶解在400g水中的20g HPMC和20g PEG 4000组成的液体组合物。向该组合物中添加1.15g含芽孢杆菌内生孢子的浓缩物。测量该浓缩物中的孢子计数为4.6x1010CFU/g。
使用3巴的雾化压力通过双流体喷嘴将含孢子的液体组合物喷雾到流体化酶颗粒上。将喷雾速率调节至约30g/min,这导致45℃-50℃的产物温度和约30%的废气中的相对湿度。
喷雾后,将产物在排出之前干燥5分钟并冷却15分钟。
实例1B
重复实例1A中的过程,除了将添加的孢子浓缩物的量从1.15g增加到3.45g。
实例1C
重复实例1A中的过程,除了将添加的孢子浓缩物的量从1.15g增加到11.5g。
实例2A
将通过US 4,106,991中描述的方法制造的4000g可商购的酶(蛋白酶)颗粒(Savinase)装载到配备有双流体顶喷喷嘴的中试规模流化床(GlattProcel)中。将空气流速调节至120m3/h,并且入口温度设定为80℃。
制备由溶解在400g水中的20g HPMC和20g PEG 4000组成的液体组合物。向该组合物中添加1.15g含芽孢杆菌内生孢子的浓缩物。测量该浓缩物中的孢子计数为4.6x1010CFU/g。
使用3巴的雾化压力通过双流体喷嘴将含孢子的液体组合物喷雾到流体化酶颗粒上。将喷雾速率调节至约30g/min,这导致45℃-50℃的产物温度和约30%的废气中的相对湿度。
喷雾后,将产物在排出之前干燥5分钟并冷却15分钟。
实例2B
重复实例2A中的过程,除了将添加的孢子浓缩物的量从1.15g增加到3.45g。
实例2C
重复实例2A中的过程,除了将添加的孢子浓缩物的量从1.15g增加到11.5g。
表1.分析实例1A、1B、1C和实例2A、2B、2C中制造的产物的活孢子计数。
出人意料地,含酶颗粒(实例2A、2B、2C)的孢子产率比没有酶的颗粒(实例1A、1B、1C)更好。正常地,将预期活性酶-尤其是蛋白酶-的存在可能损害细菌孢子的生存力。
从技术、经济角度和环境角度两者出发,使用相同的颗粒来递送酶以及孢子的可能性是非常有吸引力的,因为减少了对原材料、加工时间和设备的要求。
Claims (8)
1.一种酶颗粒,该酶颗粒包含核心和包衣,其中所述核心包含酶,并且所述包衣包含一种或多种孢子,其中该颗粒含有至少一种酶,该酶处于多于0.5%w/w并少于50%w/w活性酶蛋白的量,该一种或多种孢子是一种或多种源自芽孢杆菌菌株的芽孢杆菌内生孢子,该颗粒含有该一种或多种孢子,该孢子处于在1x102与1x1012 CFU/g该颗粒之间的量。
2.如权利要求1所述的颗粒,其中该酶是蛋白酶、脂肪酶、角质酶、淀粉酶、糖酶、纤维素酶、果胶酶、果胶裂解酶、甘露聚糖酶、阿拉伯糖酶、半乳聚糖酶、木聚糖酶、氧化酶、漆酶、过氧化物酶、或过水解酶。
3.如权利要求1-2中任一项所述的颗粒,该颗粒包含盐包衣。
4.如权利要求1-2中任一项所述的颗粒,其中该一种或多种孢子是一种或多种细菌孢子。
5.如权利要求1-2中任一项所述的颗粒,其中该一种或多种孢子源自一种或多种孢子形成细菌菌株。
6.一种用于制备如权利要求1-5中任一项所述的酶颗粒的方法,该方法包括使包含该酶和/或该一种或多种孢子的共混物粒化,如果该酶或该一种或多种孢子不包括在该颗粒状共混物中,随后施用包含它们的包衣。
7.一种洗涤剂组合物,该洗涤剂组合物包含表面活性剂和/或洗涤剂助洗剂和如权利要求1-5中任一项所述的酶颗粒。
8.一种动物饲料或动物饲料添加剂,该动物饲料或动物饲料添加剂包含如权利要求1-5中任一项所述的酶颗粒和植物基材料。
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