CN109953945B - 一种含有灯盏花乙素的注射液的制备方法 - Google Patents

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Abstract

本发明提供了一种含有灯盏花乙素的注射液的制备方法，以灯盏细辛为原料，依次采用了水回流提取，强碱、弱碱、强酸、乙醇沉淀，快速得到高纯度的灯盏花乙素，整个过程精确控制温度和pH的范围，仅采用乙醇一种有机溶剂，提高了制备方法的安全性和灯盏花乙素的质量；本发明还采用一种所述灯盏花乙素配制的注射液，制备成本低、操作简单等优点，适合工业化生产。

Description

一种含有灯盏花乙素的注射液的制备方法
技术领域
本发明涉及一种含有灯盏花乙素的注射液制备方法，属于植物提取领域和制剂领域。
技术背景
灯盏花素是从灯盏花Erigeron breviscapus(Vant.)Hand-Mazz中分离出的黄酮类有效成分，主要成分为灯盏花乙素(又名灯盏乙素，野黄芩苷，以下简称乙素)，化学命名为4’，5，6-三羟基黄酮-7-O-葡萄糖酸苷。根据药典委2013年8月公示的灯盏花素质量标准修订，用于注射级的灯盏花乙素含量需大于91％。
以往的授权发明专利精制灯盏花乙素多是由灯盏花素粗品经过精制后获得，而灯盏花素粗品又多是用醇提、碱溶、酸沉或者直接碱泡、渗漉、酸沉等方式获得，绝大多数都要使用丙酮等有机试剂。精制后成品常常无法达到注射级灯盏花素的水平。
现有的灯盏花素注射液，无论是执行卫生部标准(WS3-B-3822-98)，还是企业标注，都要加入乙二胺四醋酸二钠(依地酸二钠)、碳酸氢钠溶液、甘油、维生素C、亚硫酸钠等调节辅料，乙二胺四醋酸二钠(EDTA-2NA)收载于FDA《非活性组分指南》，可用于非注射和注射给药，会与人体内的钙离子形成螯合物，引起低血钙等症状，《中华人民共和国药典》2015版收载了依地酸二钠为药用辅料，但尚未收录注射剂中依地酸二钠的控制标准。由于辅料的加入，通常灯盏花乙素注射剂的安全有效的浓度为5-100μg/ml。辅料的使用不当也会使药物的安全性受到影响，例如中药注射液中吐温-80的加入引起的大范围不良反应发生。维生素C，亚硫酸钠等试剂加入注射液中也会增加注射液的用药安全问题。因而对于药物而言，没有必要的辅料添加越少越好。
因此工业上需求一种不需要丙酮加入，且能直接获得注射级灯盏花乙素的制备方法，并且使用该成品，不需要加各种药物辅料，仅需调节pH值充氮保护即可获得在完全最终灭菌(121℃，15分钟)稳定的灯盏花乙素注射液。
发明内容
针对上述技术问题，发明人提供了一种含有灯盏花乙素的注射液的制备方法，其中，该制备方法由以下步骤组成：
1)称取灯盏细辛，水回流，得到提取液，浓缩为浸膏；
2)将步骤1)所述浸膏在50-60℃下用稀强碱溶液溶解至pH6.0-7.5，加入滑石粉，搅拌，过滤，得到滤液，滤液加稀强酸调pH值至1-3，静置后过滤，得到沉淀，水洗沉淀，过滤至滤液中性；
3)将步骤2)所得沉淀用3-4倍质量的水制成混悬液，加入弱碱溶液，加热至50-60℃，搅拌溶解；待沉淀溶解完全，加入乙醇，使乙醇浓度达到60％-70％，降温，静置，过滤，得到醇沉沉淀；
4)将步骤3)所述醇沉沉淀中，加入30-40倍质量的60％-70％乙醇，加热至50-60℃，加入弱碱溶液溶解沉淀，加入稀强酸，调节pH至2.0-3.0，降温，过滤，得到沉淀，水洗沉淀，过滤至滤液中性，得到二次酸沉沉淀；
5)将步骤4)所述二次酸沉沉淀加8-12倍质量的水制备为混悬液，加入稀强碱溶液，调节pH值至6.5-7.5，加热至50-60℃，过滤，得到滤液，将滤液升温至50-60℃，向滤液中加入稀强酸，调节pH至4.0-5.0，过滤得到沉淀，水洗沉淀，过滤至滤液中性，得到三次酸沉沉淀；
6)将步骤5)所述的三次酸沉沉淀加入8-12倍质量的70-80℃水搅拌，加入稀强碱溶液，调节pH至6.5-7.5，加入乙醇使乙醇浓度达到75％-85％，加入稀强酸，调节pH至4.0-5.0，降温析出沉淀，过滤，将沉淀水洗，过滤，至滤液无色，得到醇溶酸沉沉淀；
7)将步骤6)所述的醇溶酸沉沉淀加3-4倍质量的水搅拌成混悬液，加热至60-70℃，加入弱碱缓冲盐溶液使沉淀溶解，控制pH至6.5-7.5，活性炭吸附，过滤，得到滤液，加入乙醇，使乙醇浓度达到60％-70％，保持温度在50-60℃，加入稀强酸，调节pH至2.5-3.5，降温，收集沉淀，水洗沉淀，过滤至滤液无色，用浓度90％以上的乙醇水溶液进行脱水，干燥后得到注射级别的灯盏花乙素；
8)将步骤7)得到的灯盏花乙素与注射用水混合，加入质量百分比1-2％NaOH水溶液调节pH为8.3-9，过滤溶液，充氮气保护，灌封灭菌，得到所述的含有灯盏花乙素的注射液。
所述技术方案先将灯盏细辛中黄酮类成分沉淀下来，然后利用灯盏花乙素与杂质在不同溶剂和pH条件下，自身和所成盐的溶解度不同，达到分离目的，因此需要大量实验进行验证，所需调节的实验条件非常之多。
上述方法中所述乙醇选自无水乙醇和高浓度乙醇，从成本角度，可选择高浓度乙醇，即90％-95％的乙醇水溶液。
本发明上述步骤1)-7)提供了一种只用乙醇一种有机溶剂即可从灯盏细辛草制备高纯度灯盏花乙素的方法，该高纯度的灯盏花乙素达到了注射级别的原料标准。在以上步骤1)-7)的层层优化工艺之下，以及通过进一步的限定该注射级别的灯盏花乙素与注射用水混合后加入NaOH水溶液所调节pH为8.3-9(优选8.4-8.7，更优选8.6左右)这样的条件下，才能够得到本发明预期的不需要加各种药物辅料，仅需调节pH值即可获得在完全最终灭菌(121℃，15分钟)稳定的灯盏花乙素注射液这样的有益效果。
所述乙醇溶液未特别指出时，通常为乙醇水溶液。
本发明中所述溶液，在未特别指出时，其余成份为水。
在上述的含有灯盏花乙素的注射液的制备方法，其中，步骤1)所述水回流为一次加水5-10倍灯盏细辛的质量，提取2-3次，每次1-2小时，合并提取液，所述浓缩为减压浓缩。
在上述的含有灯盏花乙素的注射液的制备方法，步骤2)所述滑石粉的质量为所述浸膏质量的1％-3％。
用以吸附杂质，由于较好的物理化学特性，可用于食品和药品，pH7-9，在中性到弱碱性之间。
在上述的含有灯盏花乙素的注射液的制备方法，步骤1-7)中的所述降温为自然降温。
在上述的含有灯盏花乙素的注射液的制备方法，步骤2)-6)中所述稀强碱为5％-10％的NaOH水溶液；更优选5％的NaOH水溶液；稀强酸为10％-25％的H2SO4水溶液或5％-10％HCl水溶液，更优选10％-15％H2SO4水溶液，该百分比为质量百分比。
在上述的含有灯盏花乙素的注射液的制备方法，步骤(3)中的所述弱碱溶液为Na2HPO4或者K2HPO4的饱和水溶液；更优选为Na2HPO4的饱和水溶液。
在上述的含有灯盏花乙素的注射液的制备方法，步骤(7)中所述弱碱性缓冲盐为Na2HPO4:NaH2PO4 5:1-15:1或者K2HPO4:KH2PO4 5:1-15:1，更优选Na2HPO4:NaH2PO410:1-15:1或者K2HPO4:KH2PO4 10:1-15:1，pH为7.8-8.0。(所述缓冲盐为固体，配置为水溶液，pH为7.8-8.0)
在上述的含有灯盏花乙素的注射液的制备方法中，所述的步骤8)中pH调节为8.38.4-8.6-8.7。
发明人研究发现，灯盏花乙素注射液的标准要求pH在6.3-8.3，因此pH通常调节到8.3以下，但由于加热灭菌后pH值会有一定程度的下降，如果pH低，例如8.3以下，高温灭菌后不仅pH值下降，并且可见异物大量析出，不能达到出厂标准，而当pH调节到8.6以上，又有可能造成三个月内pH降不到8.3以下，也不符合出厂标准。只有当精确调节pH8.6时所述灯盏花乙素注射液出现异物的几率最低。当pH低于8.3时，灯盏花乙素注射液出现异物的几率升高，而当pH高于8.6时，灯盏乙素的出厂pH无法降到pH8.3以下，因此灯盏花乙素注射液在配置时，pH应当调节在8.4-8.6-8.7之间，同时考虑注射液中可见异物和灭菌后放置三个月后的pH值，最优选配液过程中调节pH8.6左右。
因此，在上述的任一含有灯盏花乙素的注射液的制备方法中，所述的步骤8)中pH调节为8.6。其中所述灭菌条件进一步优选121℃，15分钟。
充氮操作优选：调节pH后充氮气保护灌注，灌注完后再充氮气，进行灌封。
本发明进一步提供一种含有灯盏花乙素的注射液，其中，所述灯盏花乙素注射液由上述制备方法制备而成。
所述灭菌条件的指导原则为完全灭菌指导，根据热学中F0值的指导定义，灭菌F0值应当大于8。
整个方法中所述饱和溶液均指常温下的饱和溶液，即一般指20-25℃。
如非特定指出，技术方案中中向A中加入X倍质量/体积的B…表述，意思为加入X倍的A质量/体积的B。
在使用本制备方法灯盏花乙素制备注射液时，发明人对于pH和灭菌条件进行了筛选(见表1)：
表1可见异物
Figure BDA0001522713300000041
Figure BDA0001522713300000051
发明人还进行了灭菌后稳定性试验，发现使用此灯盏花乙素注射液，灭菌后注射液的含量、pH和有关物质均控制在稳定范围以内。
与文献报道方法相比有如下优点：
(a)本方法是一种从灯盏细辛原料经过水提到注射级灯盏花乙素制备的全过程。
(b)仅用乙醇一种有机溶剂及常见的碱溶酸沉或醇沉过程通过使灯盏花乙素依次在醇中或者水中成强碱盐或者弱碱盐，去除杂质性成分，控制溶解沉淀过程在50-70℃条件下，精确控制pH值的方法制备高纯度的灯盏花乙素。
(c)灯盏花素注射剂的配液过程严格控制pH值，使其成为强碱盐后稳定存在，不添加任何稳定剂，抗氧化剂，络合剂就能稳定存在，并且可以最终灭菌。
步骤2：灯盏细辛提取后经过稀强碱溶解，强酸沉淀，得到的沉淀中灯盏花乙素的含量为15％-18％。
步骤3：弱碱醇沉后，沉淀中灯盏花乙素含量达到45％-48％。
步骤4：在乙醇中经过弱碱强酸沉淀后，沉淀中灯盏花乙素含量达到51％-54％。
步骤5：在水中经过强碱强酸沉淀后，沉淀中灯盏花乙素含量达到81％-84％。
步骤6：在水中经过强碱强酸沉淀后，沉淀中灯盏花乙素含量达到86％-89％。
步骤7：在水中经过弱碱缓冲液强酸沉淀后，沉淀中灯盏花乙素含量达到91％-94％。
1、以往的文献报道或者是专利报道制备高纯度的灯盏花乙素多半从灯盏花素的粗品开始，而此专利是从灯盏细辛草开始。
2、以往的报道要经过柱层析达到分离的纯度，而此专利不用柱层析，节约时间成本和制备成本。
3、以往所有报道用的有机溶剂不止一种，尤其不用丙酮能达到如此纯度不容易。
4、以往报道没有采用在10％-60％醇中碱溶的步骤来去除灯盏花乙素中的杂质。
5、以往的报道没有轮流使用强碱，弱碱在醇和水之间来达到分离的目的。
6、即使用有机溶剂例如专利200410040352.6中，也是用10％-60％与水互溶的有机溶剂，且不加碱，而本发明中醇沉的浓度为60％-70％，且还需要加入碱先溶解完全后，再加入酸进行沉淀。
7、使用滑石粉作为吸附剂达到吸附杂质的作用较以前报道的用絮凝剂有以下优点：滑石粉为可以食用及医用的物料，成分清楚，制备出来的物料安全性好，而絮凝剂成分复杂，无食品级或药用级。
8、所制备的注射液仅需pH调节可以保持质量的稳定，这也是以往文献所未报到和取得的技术效果。
含有灯盏花乙素的注射液(灯盏花素注射液)标准为卫生部药品标准中药成方制剂第二十册中收载，此标准中配液是加入乙二胺四醋酸二钠，用碳酸氢钠配制，并且只能在100℃，15分钟蒸汽灭菌(不能得到完全灭菌制剂)。很多企业为了使制剂稳定性增高，还加入亚硫酸钠，维生素C等抗氧化剂，因而导致此产品虽然注射级别的含量已经较高了(现药典标准注射级的为99％，但由于中检所标准品进行了重新标定，2013年8月份药典委公示的91％含量的为注射级标准)，但在标准里仍然无法如化学药品标准一样写上分子式，就是因为加入乙二胺四醋酸二钠及其他稳定剂、抗氧化剂等以后，灯盏花乙素与这些物质形成了其他络合物或其他盐，在检测含量时，也由于这些原因，只能用紫外来测定含量，而无法用高效液相来标定含量。这样为植物药的发展及国际认可度埋下大的隐患。而本发明的工艺得到的含有灯盏花乙素的注射液(灯盏花素注射液)由于在工艺过程没有添加任何辅料添加剂等成分，所以，在成品注射液中，没有引入不可控成分也没有生成络合物、衍生物和/或其他盐，有效成分只有乙素钠盐，纯度和含量标准高于现有药品规定的标准，并且完全可以用高效液相的方法进行含量标定和质量控制，为植物药的发展和争取国际化认可的程度推进了实质性的一步。
以下实施例对本发明做进一步的描述，但该实施例非用于限制本发明的保护范围。
具体实施方式
实施例1
1)试验步骤：
(1)取灯盏细辛药材1000g用水(第一次用10倍质量的水，第二次用5倍质量的水，第3次用5倍质量的水)回流提取3次，每次提取1小时，减压浓缩，得到灯盏细辛浸膏。
(2)将灯盏细辛浸膏在50-60℃用5％NaOH溶液溶解至pH 6.5，并加入浸膏量的1.5％的滑石粉，搅拌，趁热过滤；滤液加10％H2SO4调pH值至2.0，静置后过滤；得到沉淀，沉淀用水洗至中性。
(3)将沉淀用3-4倍沉淀质量的纯化水搅拌成混悬液后，缓慢加入饱和6-7倍沉淀质量的饱和Na2HPO4溶液，并加热至50-60℃搅拌溶解；沉淀溶解完全后，加入95％乙醇，使乙醇浓度达到60％，自然降温，静置，得到醇沉沉淀。
(4)将醇沉沉淀中加入35倍质量65％乙醇，搅拌加热至50-60℃，并加入饱和Na2HPO4直至沉淀完全溶解，随后缓慢加入10％H2SO4调节pH至2.5后，自然降温，析出沉淀后过滤，用水洗至中性。得到二次酸沉沉淀。
(5)将二次酸沉沉淀加10倍质量的水搅拌成混悬液后，缓慢加入5％NaOH溶液，调节pH至7.0，加热至50-60℃，趁热过滤；滤液升温至50-60℃，缓慢加入10％H2SO4，调节pH4.5，自然降温析出沉淀；滤出沉淀，沉淀用水洗至流出液无色后，得到三次酸化沉淀。
(6)将三次酸化沉淀加入10倍质量70-80℃热水搅拌，缓慢加入5％NaOH溶液，调节pH至6.5溶解；加入95％乙醇使乙醇浓度达到80％；缓慢加入10％H2SO4，调节pH4.5，自然降温析出沉淀；滤出沉淀后用水洗至滤液基本无色。得到醇溶酸沉沉淀。
(7)将醇溶酸沉沉淀加入3倍质量纯水搅拌成混悬液，加热至60-70℃，加入0.8倍质量Na2HPO4:NaH2PO4 10:1缓冲盐溶液(pH7.8-8.0)使沉淀溶解，控制pH6.5。溶解完全后加入1％倍质量的活性炭，搅拌吸附后，趁热过滤；滤液中加入95％乙醇，使乙醇浓度达到65％，保持温度在50-60℃；缓慢加入10％H2SO4，调节pH 3.0，自然降温，收集沉淀，沉淀用水洗涤至洗涤液无色为止，再用90％以上乙醇脱水，40-55℃真空干燥后得到含量为93％灯盏花乙素。(检测条件：《中国药典》2015版一部P402灯盏花素提取物的检验方法：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以甲醇-0.1％磷酸溶液(40:60)为流动相；硫酸为每分钟1.0ml；柱温40℃；检测波长335nm。)
(8)取上述灯盏花素加注射用水，在搅拌下加入2％NaOH溶液，调节pH 8.6，使每毫升水中含有4mg的灯盏花乙素，过滤后，充氮气保护进行灌注，灌注后再一次冲氮气，进行灌封，最终灭菌，制成小容量注射剂。
实施例2
1)试验步骤：
(1)取灯盏细辛药材1000g使用水回流，方法同实施例1。
(2)将灯盏细辛浸膏在50-60℃用5％KOH溶液溶解至pH 7.5，并加入浸膏量的1％的滑石粉，搅拌，趁热过滤；滤液加10％HCl调pH值至2.5，静置后过滤；得到沉淀，沉淀用水洗至中性。
(3)将沉淀用3-4倍质量的纯化水搅拌成混悬液后，缓慢加入6-7倍质量的饱和的K2HPO4溶液，并加热至50-60℃搅拌溶解；沉淀溶解完全后，加入95％乙醇，使乙醇浓度达到60％-70％，自然降温，静置，得到醇沉沉淀。
(4)将醇沉沉淀中加入30倍质量70％乙醇，搅拌加热至50-60℃，并加入饱和K2HPO4溶解，直至沉淀完全，随后缓慢加入10％HCl调节pH至2.0后，自然降温，析出沉淀后过滤，用水洗至中性。得到二次酸沉沉淀。
(5)将二次酸沉沉淀加8倍质量的水搅拌成混悬液后，缓慢加入5％KOH溶液，调节pH至7.0，加热至50-60℃，趁热过滤；滤液升温至50-60℃，缓慢加入10％H2SO4，调节pH4.5，自然降温析出沉淀；滤出沉淀，沉淀用水洗至流出液无色后，得到三次酸化沉淀。
(6)将三次酸化沉淀加入8倍质量70-80℃热水搅拌，缓慢加入5％KOH溶液，调节pH至6.5溶解；加入95％乙醇使乙醇浓度达到75％；缓慢加入10％H2SO4，调节pH4.5，自然降温析出沉淀；滤出沉淀后用水洗至滤液基本无色。得到醇溶酸沉沉淀。
(7)将醇溶酸沉沉淀加入4倍质量纯水搅拌成混悬液，加热至60-70℃，加入1.0倍质量K2HPO4:KH2PO4 12:1缓冲盐溶液(pH7.8-8.0)使沉淀溶解，控制pH6.5。溶解完全后加入1％倍质量的活性炭，搅拌吸附后，趁热过滤；滤液中加入95％乙醇，使乙醇浓度达到65％，保持温度在50-60℃；缓慢加入10％HCl，调节pH 2.5，自然降温，收集沉淀，沉淀用水洗涤至洗涤液无色为止，再用90％以上乙醇脱水，40-55℃真空干燥后得到含量为92％灯盏花乙素。(检测条件：《中国药典》2015版一部P402灯盏花素提取物的检验方法：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以甲醇-0.1％磷酸溶液(40:60)为流动相；硫酸为每分钟1.0ml；柱温40℃；检测波长335nm。)
(8)取上述灯盏花素加注射用水，在搅拌下加入1％NaOH溶液，调节pH 8.6，使每毫升注射用水中含有2.5mg灯盏花乙素，过滤后，充氮气保护进行灌注，灌注后再一次冲氮气，进行灌封，最终灭菌，制成小容量注射剂。
实施例3
1)试验步骤：
(1)取灯盏细辛药材1000g用水提取两次(第一次为10倍质量的水，第二次为8倍质量的水)。
(2)将灯盏细辛浸膏在50-60℃用8％NaOH溶液溶解至pH7.5，并加入浸膏量的2％的滑石粉，搅拌，趁热过滤；滤液加5％H2SO4调pH值至1.5，静置后过滤；得到沉淀，沉淀用水洗至中性。
(3)将沉淀用4倍质量纯水搅拌成混悬液后，缓慢加入6倍质量的饱和Na2HPO4溶液，并加热至50-60℃搅拌溶解；沉淀溶解完全后，加入95％乙醇，使乙醇浓度达到70％，自然降温，静置，得到醇沉沉淀。
(4)将醇沉沉淀中加入35倍质量的70％乙醇，搅拌加热至50-60℃，并加入饱和Na2HPO4溶解至沉淀完全溶解，随后缓慢加入10％H2SO4调节pH至2.5后，自然降温，析出沉淀后过滤，用水洗至中性。得到二次酸沉沉淀。
(5)将二次酸沉沉淀加10倍质量水搅拌成混悬液后，缓慢加入5％NaOH溶液，调节pH至7.5，加热至50-60℃，趁热过滤；滤液升温至50-60℃，缓慢加入10％H2SO4，调节pH4.0，自然降温析出沉淀；滤出沉淀，沉淀用水洗至流出液无色后，得到三次酸化沉淀。
(6)将三次酸化沉淀加入12倍质量70-80℃热水搅拌，缓慢加入5％NaOH溶液，调节pH至7.5溶解；加入95％乙醇使乙醇浓度达到80％；缓慢加入10％H2SO4，调节pH5.0，自然降温析出沉淀；滤出沉淀后用水洗至滤液基本无色。得到醇溶酸沉沉淀。
(7)将醇溶酸沉沉淀加4倍质量水搅拌成混悬液，加热至60-70℃，加入Na2HPO4:NaH2PO4 15:1缓冲盐溶液(pH7.8-8.0)使沉淀溶解完全，控制pH7.0。溶解完全后加入0.5％倍质量的活性炭，搅拌吸附后，趁热过滤；滤液中加入95％乙醇，使乙醇浓度达到70％，保持温度在50-60℃；缓慢加入10％H2SO4，调节pH3.5，自然降温，收集沉淀，沉淀用水洗涤至洗涤液无色为止，再用90％以上乙醇脱水，40-55℃真空干燥后得到含量为94％灯盏花乙素。(检测条件：《中国药典》2015版一部P402灯盏花素提取物的检验方法：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以甲醇-0.1％磷酸溶液(40:60)为流动相；硫酸为每分钟1.0ml；柱温40℃；检测波长335nm。)
(8)取上述灯盏花素加注射用水，在搅拌下加入1.5％NaOH溶液，调节pH 8.6，使每毫升溶液中含有灯盏花乙素4mg，过滤后，充氮气保护进行灌注，灌注后再一次冲氮气，进行灌封，最终灭菌，制成小容量注射剂。
强碱、弱碱、强酸的浓度均为质量百分比。
以上所述实施例仅表达了本发明的几种实施方式，其描述较为具体和详细，但并不能因此而理解为对本发明专利范围的限制，应当指出的是，对于本领域的技术人员来说，在不脱离本发明构思的前提下，还可以做出若干变形和改造，这些都属于本发明的保护范围，因此，本发明专利的保护范围以所附权利要求为准。

Claims (10)

1.一种含有灯盏花乙素的注射液的制备方法，其特征在于，该制备方法由以下步骤组成：
1）称取灯盏细辛，水回流，得到提取液，浓缩为浸膏；
2）将步骤1）所述浸膏在50-60℃ 下用稀强碱溶液溶解至pH6.0-7.5，加入滑石粉，搅拌，过滤，得到滤液，滤液加稀强酸调pH值至1-3，静置后过滤，得到沉淀，水洗沉淀，过滤至滤液中性；所述稀强碱为5%-10%的NaOH水溶液，稀强酸为10%-25%的H2SO4水溶液或5%-10%HCl水溶液，所述百分比为质量百分比；
3）将步骤2）所得沉淀用3-4倍质量的水制成混悬液，加入弱碱溶液，加热至50-60℃ ，搅拌溶解；待沉淀溶解完全，加入乙醇，使乙醇浓度达到60%-70%，降温，静置，过滤，得到醇沉沉淀；所述弱碱溶液为Na2HPO4或者K2HPO4的饱和水溶液；
4）将步骤3）所述醇沉沉淀中，加入30-40倍质量的60%-70%乙醇，加热至50-60℃ ，加入弱碱溶液溶解沉淀，加入稀强酸，调节pH至2.0-3.0，降温，过滤，得到沉淀，水洗沉淀，过滤至滤液中性，得到二次酸沉沉淀；所述弱碱溶液为饱和Na2HPO4溶液或者饱和K2HPO4溶液，稀强酸为10%-25%的H2SO4水溶液或5%-10%HCl水溶液，所述百分比为质量百分比；
5）将步骤4）所述二次酸沉沉淀加8-12倍质量的水制备为混悬液，加入稀强碱溶液，调节pH值至6.5-7.5，加热至50-60℃ ，过滤，得到滤液，将滤液升温至50-60℃ ，向滤液中加入稀强酸，调节pH至4.0-5.0，过滤得到沉淀，水洗沉淀，过滤至滤液中性，得到三次酸沉沉淀；所述稀强碱为5%-10%的NaOH水溶液，稀强酸为10%-25%的H2SO4水溶液或5%-10%HCl水溶液，所述百分比为质量百分比；
6）将步骤5）所述的三次酸沉沉淀加入8-12倍质量的70-80℃ 水搅拌，加入稀强碱溶液，调节pH至6.5-7.5，加入乙醇使乙醇浓度达到75%-85%，加入稀强酸，调节pH至4.0-5.0，降温析出沉淀，过滤，将沉淀水洗，过滤，至滤液无色，得到醇溶酸沉沉淀；所述稀强碱为5%-10%的NaOH水溶液，稀强酸为10%-25%的H2SO4水溶液或5%-10%HCl水溶液，所述百分比为质量百分比；
7）将步骤6）所述的醇溶酸沉沉淀加3-4倍质量的水搅拌成混悬液，加热至60-70℃ ，加入弱碱缓冲盐溶液使沉淀溶解，控制pH至6.5-7.5，活性炭吸附，过滤，得到滤液，加入乙醇，使乙醇浓度达到60%-70%，保持温度在50-60℃ ，加入稀强酸，调节pH至2.5-3.5，降温，收集沉淀，水洗沉淀，过滤至滤液无色，用浓度90%以上的乙醇水溶液进行脱水，干燥后得到注射级别的灯盏花乙素，所述弱碱性缓冲盐为Na2HPO4:NaH2PO4 5:1-15:1 或者K2HPO4:KH2PO4 5:1-15:1，稀强酸为10%-25%的H2SO4水溶液或5%-10%HCl水溶液，所述百分比为质量百分比；
8）将步骤7）得到的灯盏花乙素与注射用水混合，加入质量百分比1-2%NaOH水溶液调节pH为8.4-8.6，过滤溶液，充氮气保护，灌封灭菌，得到所述的含有灯盏花乙素的注射液。
2.根据权利要求1所述的含有灯盏花乙素的注射液的制备方法，其特征在于，步骤1）所述水回流为一次加水5-10倍灯盏细辛的质量，提取2-3次，每次1-2小时，合并提取液，所述浓缩为减压浓缩。
3.根据权利要求1所述的含有灯盏花乙素的注射液的制备方法，其特征在于，步骤2）所述滑石粉的质量为所述浸膏质量的1%-3%。
4.根据权利要求1所述的含有灯盏花乙素的注射液的制备方法，其特征在于，所述降温为自然降温。
5.根据权利要求1所述的含有灯盏花乙素的注射液的制备方法，其特征在于，所述稀强碱为5%的NaOH水溶液；稀强酸为10-15% H2SO4水溶液，所述百分比为质量百分比。
6.根据权利要求1所述的含有灯盏花乙素的注射液的制备方法，其特征在于，步骤3）中的所述弱碱溶液为Na2HPO4的饱和水溶液。
7.根据权利要求1所述的含有灯盏花乙素的注射液的制备方法，其特征在于，步骤7）中所述弱碱性缓冲盐为Na2HPO4:NaH2PO410:1-15:1 或者K2HPO4:KH2PO4为10:1-15:1，pH 为7.8-8.0。
8.根据权利要求1-7任一项所述的含有灯盏花乙素的注射液的制备方法，其特征在于，所述的步骤8）中pH调节为8.6。
9.根据权利要求8所述的含有灯盏花乙素的注射液的制备方法，其特征在于，灭菌条件为121℃，15分钟。
10.一种含有灯盏花乙素的注射液，其特征在于，所述含有灯盏花乙素的注射液由权利要求1-7任一项制备方法制备而成。
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