CN101712968A

CN101712968A - 一种制备白藜芦醇的方法

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Publication number: CN101712968A
Application number: CN200810223580A
Authority: CN
Inventors: 罗河生
Original assignee: Individual
Current assignee: Individual
Priority date: 2008-10-08
Filing date: 2008-10-08
Publication date: 2010-05-26

Abstract

本发明涉及用虎杖制备白藜芦醇的一种工艺方法，该方法是通过虎杖提取、脱单宁、水解、分离和纯化，最终得到含量98％以上白藜芦醇纯品。本方法具有简便易行，成本低廉，提取率高，易于工业化生产的特点。

Description

一种制备白藜芦醇的方法

技术领域

本发明涉及一种用虎杖制备白藜芦醇的方法。本发明属于医药化学领域。

背景技术

虎杖含有白藜芦醇(resveratrol)及其糖苷。白藜芦醇是一种自然界存在较广的多酚类化合物，具有防癌抗癌、抗氧化、抗紫外线辐射、降血脂等生理活性，在医药食品和化妆品领域得到广泛的应用。目前除合成外，主要是从植物中提取分离。虎杖中除含有白藜芦醇和白藜芦醇苷外，还含有大黄素、大黄素甲醚及其苷类，此外，还含有大量的糅质。目前所采用的从虎杖中提取分离白藜芦醇的方法有以下一些：1.虎杖原材料用稀醇提取并将提取液浓缩后用有机溶剂萃取。有机溶剂萃取物用硅胶柱层析、聚酰胺柱层析、逆滴逆流层析等色谱技术分离得到白藜芦醇及其苷。2.虎杖原材料粉碎后加复合酶水解，水解物用有机溶剂萃取。有机溶剂萃取物用硅胶柱层析、聚酰胺柱层析、逆滴逆流层析等色谱技术分离得到白藜芦醇。3.虎杖原材料用水湿润自然保湿保温将白藜芦醇苷水解成白藜芦醇。然后再用稀醇提取并将提取液浓缩后用有机溶剂萃取，有机溶剂萃取物用硅胶柱层析、聚酰胺柱层析、逆滴逆流层析等色谱技术分离得到白藜芦醇及其苷。4.新鲜虎杖打碎成浆糊，保湿自然水解白藜芦醇苷成白藜芦醇后用有机溶剂萃取，有机溶剂萃取物用硅胶柱层析、聚酰胺柱层析、逆滴逆流层析等色谱技术分离得到白藜芦醇。这些方法都必须使用硅胶柱层析、聚酰胺柱层析、逆滴逆流层析等色谱技术才能得到白藜芦醇纯品。它们均存在工时长、占用大量的生产资源、有机溶剂消耗量大、不易劳动保护、生产成本高等缺点。本发明的目的是提供一种简单易行的用虎杖提取、分离纯化精制白藜芦醇的方法。

发明内容

本发明的目的是提供一种工艺简单、成本低、收得率和纯度均较高的用虎杖制备白藜芦醇的方法。

本发明是用中药虎杖制备白藜芦醇的生产工艺。其特征在于包括以下工艺步骤：

1、虎杖提取液浓缩回收有机溶剂后，所得虎杖提取液加单宁沉淀剂，充分搅拌下沉淀，滤取上清液。单宁沉淀剂包括蛋白质类物质、明胶、聚酰胺、三聚氰胺、尿素。

2、上清液加入纤维素酶进行水解。水解纤维素用量1-20*10⁴iu(国际单位)/公斤药材，最佳为2.5-8.0iu/公斤药材，水解温度为25度至80度，最佳水解温度为50℃-70℃，PH值为3.5-7.5，最佳PH为4.5-7.0；

3、水解完全后(用TLC进行检识)，加酸酸化，分取沉淀，沉淀即为含白藜芦醇的粗品。所用的酸可以是无机酸：盐酸、硫酸、磷酸，有机酸：甲酸、乙酸；酸化后的PH为1-3.5，最佳PH为2.0-3.0；

4、所得白藜芦醇的粗品，加入35％-60％的乙醇溶液，或者40％-70％的甲醇溶液，回流使白藜芦醇完全溶解停止加热，放冷静置，析出黄色沉淀(蒽醌类衍生物)，滤去黄色沉淀，得上清液。溶剂用量是白藜芦醇粗品重量的10-30倍；

5、上述上清液加活性炭回流脱色，放冷，过滤。活性炭用量为0.5-2.0％(W/V)；

6、滤液真空浓缩至小体积或浓缩至干后，加乙醇-水或者甲醇-水的复合溶剂，或者丙酮-水复合溶剂，回流使沉淀完全溶解，静置放冷析出白藜芦醇精品。乙醇的浓度为20-40％，甲醇的浓度为30-50％，丙酮的浓度为15-35％，溶剂用量是固体重量的10-30倍；

7、白藜芦醇精品用乙醇-水或者甲醇-水的复合溶剂，或者丙酮-水复合溶剂，回流使沉淀完全溶解，静置放冷重结晶即得白藜芦醇结晶产品。乙醇的浓度为30-60％，甲醇的浓度为40-70％，丙酮的浓度为25-55％，溶剂用量是固体重量的10-30倍。

本发明提供一种工艺简单、成本低、收得率和纯度均较高的用虎杖制备白藜芦醇的方法，需要设备体积小、产品率高、分离纯化方法简便易行，产品纯度好，成本低等优点。不需要使用任何色谱方法就能达到分离和精制的目的。

实施例

以下用实施例对本发明进行论述，但本发明并不限于实施例中所包含的内容。

[实施例一]取虎杖1kg分别用70％乙醇7000ml提取3次，合并提取液，浓缩至约500ml并无乙醇味，所得虎杖提取液加5％明胶溶液，沉淀完全后，滤取上清液。加入6.0*10⁴iu纤维素酶进行水解，水解温度为60℃，PH为4.5，12小时水解完全后(用TLC进行检识)，加乙酸酸化至Ph2.0，分取沉淀，沉淀即为含白藜芦醇的粗品40克。用45％的乙醇溶液600ml溶解，回流使白藜芦醇完全溶解停止加热，放冷静置，滤去黄色沉淀，得上清液，加活性炭5克回流脱色，放冷，过滤。滤液真空浓缩至干后，加40％乙醇200ml，回流使沉淀完全溶解，静置放冷析出白藜芦醇精品。白藜芦醇精品用60％乙醇100ml，回流使沉淀完全溶解，静置放冷重结晶即得白藜芦醇产品，白藜芦醇产品4.3克。

[实施例二]取虎杖1kg分别用50％乙醇6000ml提取3次，合并提取液，浓缩至约500ml并无乙醇味，所得虎杖提取液大豆蛋白水溶液进行沉淀，沉淀完全后，滤取上清液，加入纤维素酶3.0*10⁴iu(国际单位)进行水解，水解温度为70℃，pH值为5.5，水解完全后(用TLC进行检识)，加甲酸酸化pH1.5，分取沉淀，沉淀即为含白藜芦醇的粗品35克，加入35％乙醇溶液800ml，回流使白藜芦醇完全溶解停止加热，放冷静置，滤去黄色沉淀，得上清液，加活性炭4克回流脱色，放冷，过滤，滤液真空浓缩至小体积，调节至含醇量40％总体积为300ml，回流使沉淀完全溶解，静置放冷析出白藜芦醇精品。白藜芦醇精品用40％乙醇150ml，回流使结晶完全溶解，静置放冷重结晶即得白藜芦醇产品。白藜芦醇5.15克。

[实施例三]取虎杖1kg，分别用40％乙醇6000ml回流提取3次，合并提取液，真空浓缩至约500ml并无乙醇味，所得虎杖提取液过聚酰胺柱短柱，流出液加入纤维素酶10*10⁴iu进行水解，水解温度为55℃，pH值为6.0，水解完全后(用TLC进行检识)，加甲酸酸化至pH3.0，分取沉淀，沉淀即为含白藜芦醇的粗品。加入10倍量的55％甲醇溶液，回流1小时停止加热，放冷静置，滤去黄色沉淀，得上清液，加活性炭6克回流脱色，放冷，过滤，滤液真空浓缩至小体积，调节甲醇含量为35％体积为350ml，回流使沉淀完全溶解，静置放冷析出白藜芦醇结晶精品。白藜芦醇结晶精品50％甲醇150ml回流使沉淀完全溶解，静置放冷重结晶即得白藜芦醇产品。白藜芦醇5.85克。

[实施例四]取虎杖1kg，分别用30％甲醇6000ml回流提取3次，合并提取液，浓缩至约500ml并无甲醇味，所得虎杖提取液加3％三聚氰胺溶液，沉淀完全后，滤取上清液，加入纤维素酶2.5*10⁴iu进行水解，水解温度为40℃，PH值为5.5，水解完全后(用TLC进行检识)，加磷酸酸化pH1.0，分取沉淀，沉淀即为含白藜芦醇的粗品，加入35％丙酮溶液600ml，回流1小时后停止加热，放冷静置，滤去黄色沉淀，得上清液，加活性炭6克回流脱色，放冷，过滤，滤液真空浓缩至小体积，调节丙酮含量25％体积为300ml，回流使沉淀完全溶解，静置放冷析出白藜芦醇结晶精品。白藜芦醇结晶精品用35％丙酮150ml，回流使沉淀完全溶解，静置放冷重结晶即得白藜芦醇产品。白藜芦醇产品5.16克。

[实施例五]取虎杖1kg，分别用甲醇5000ml回流提取3次，浓缩至干，加水至约500ml，所得虎杖提取液3％尿素溶液，沉淀完全后，滤取上清液，加入纤维素酶4*10⁴iu进行水解，水解温度为55℃，PH值为5.5，水解完全后(用TLC进行检识)，加盐酸酸化Ph3.0，分取沉淀，沉淀即为含白藜芦醇的粗品，加入55％乙醇600ml溶解，放冷静置，滤去黄色沉淀，得上清液，加活性炭4.0克回流脱色，放冷，过滤，滤液真空浓缩至小体积，调节乙醇浓度45％体积200ml，静置放冷析出白藜芦醇精品。白藜芦醇精品用50％乙醇200ml，回流完全溶解，静置放冷重结晶即得白藜芦醇产品。白藜芦醇6.16克。

[实施例六]取虎杖1kg，分别用70％乙醇10000ml提取2次，合并提取液，浓缩至约500ml并无乙醇味，所得虎杖提取液用3％大豆蛋白溶液，充分搅拌下沉淀完全，滤取上清液，加入纤维素酶3.0*10⁴iu进行水解，水解温度为25度至80度，最佳水解温度为55℃，PH值为5.0，水解完全后(用TLC进行检识)，加磷酸酸化至pH2.0，分取沉淀，沉淀即为含白藜芦醇的粗品，加入45％丙酮溶液600ml，回流1小时后停止加热，放冷静置，滤去黄色沉淀，得上清液，加活性炭6克回流脱色，放冷，过滤，滤液真空浓缩至小体积后，加25％丙酮200ml回流使沉淀完全溶解，静置放冷析出白藜芦醇结晶精品。白藜芦醇结晶精品用40％丙酮回流溶解，静置放冷重结晶即得白藜芦醇产品。白藜芦醇6.35克。

[实施例七]取新鲜虎杖3kg，分别用70％乙醇15000ml提取3次，合并提取液，浓缩至约500ml并无乙醇味，所得虎杖提取液加3％三聚氰胺溶液，至无沉淀产生，滤取上清液，加入纤维素酶10.0*10⁴iu进行水解，水解温度为65℃，PH值为6.5，水解完全后(用TLC进行检识)，加乙酸酸化Ph4.0，分取沉淀，沉淀即为含白藜芦醇的粗品，加入45％乙醇溶液600ml，回流1小时后，停止加热，放冷静置，滤去黄色沉淀，得上清液，加活性炭7克回流脱色，放冷，过滤。滤液真空浓缩至小体积后，调节乙醇浓度35％体积500ml，回流使沉淀完全溶解，静置放冷析出白藜芦醇精品，白藜芦醇精品用50％乙醇250ml，回流使结晶完全溶解，静置放冷重结晶即得白藜芦醇产品，白藜芦醇产品15.2克。

[实施例八]取新鲜虎杖3kg，分别用50％乙醇15000ml提取3次，合并提取液，真空浓缩至约500ml并无乙醇味，所得虎杖提取液加3％尿素溶液，至充分搅拌下无沉淀产生，滤取上清液，上清液加入纤维素酶9.0*10⁴iu进行水解，水解温度为55℃，PH值为4.5，水解完全后(用TLC进行检识)，加磷酸酸化Ph2.0，分取沉淀，沉淀即为含白藜芦醇的粗品，加入55％乙醇溶液600ml，回流1小时后，停止加热，放冷静置，滤去黄色沉淀，得上清液，上述上清液加活性炭12克回流脱色，放冷，过滤。滤液真空浓缩至小体积后，调节乙醇浓度45％体积300ml，回流使沉淀完全溶解，静置放冷析出白藜芦醇结晶精品，白藜芦醇结晶精品用50％乙醇250ml，回流使沉淀完全溶解，静置放冷重结晶即得白藜芦醇产品，白藜芦醇产品16.35克。

[实施例九]取新鲜虎杖3kg，分别用80％甲醇15000ml提取3次，合并提取液，真空浓缩至约500ml并无甲醇味，所得虎杖提取液加3％三聚氰胺溶液，至充分搅拌下无沉淀产生，滤取上清液，加入纤维素酶20*10⁴iu进行水解，水解温度为65℃，PH值为5.5，水解完全后(用TLC进行检识)，加磷酸酸化Ph2.0，分取沉淀，沉淀即为含白藜芦醇的粗品，加入60％甲醇溶液600ml，回流1小时后，停止加热，放冷静置，滤去黄色沉淀，得上清液，加活性炭10克回流脱色，放冷，过滤。滤液真空浓缩至小体积后，调节甲醇浓度50％体积300ml，回流使沉淀完全溶解，静置放冷析出白藜芦醇精品，白藜芦醇精品用50％乙醇250ml，回流使沉淀完全溶解，静置放冷重结晶即得白藜芦醇产品，白藜芦醇产品15.9克。

[实施例十]取虎杖1kg，分别用90％甲醇10000ml提取2次，合并提取液，真空浓缩至约500ml并无甲醇味，所得虎杖提取液用3％大豆蛋白溶液，充分搅拌下沉淀完全，滤取上清液，上清液加入纤维素酶15.0*10⁴iu进行水解，水解温度为50℃，PH值为5.0，水解完全后(用TLC进行检识)，加磷酸酸化至pH2.0，分取沉淀，沉淀即为含白藜芦醇的粗品，加入50％甲醇溶液600ml，回流1小时后停止加热，放冷静置，滤去黄色沉淀，得上清液，上清液加活性炭8克回流脱色，放冷，过滤，滤液真空浓缩至小体积后，加45％甲醇200ml回流使沉淀完全溶解，静置放冷析出白藜芦醇精品。白藜芦醇精品用45％甲醇液回流溶解，静置放冷重结晶即得白藜芦醇产品。白藜芦醇9.53克。

[实施例十一]取虎杖1kg，分别用45％甲醇7000ml提取3次，合并提取液，浓缩至约500ml并无甲醇味，所得虎杖提取液用3％明胶溶液，至沉淀完全后，滤取上清液，加入纤维素酶1.5*10⁴iu进行水解，水解温度为58℃，PH值为4.0，水解完全后(用TLC进行检识)，加磷酸酸化至pH2.0，分取沉淀，沉淀即为含白藜芦醇的粗品，加入50％甲醇溶液800ml，回流1小时后停止加热，放冷静置，滤去黄色沉淀，得上清液，加活性炭9克回流脱色，放冷，过滤，滤液真空浓缩至小体积后，加45％甲醇200ml回流使沉淀完全溶解，静置放冷析出白藜芦醇精品。白藜芦醇精品用50％甲醇回流溶解，静置放冷重结晶即得白藜芦醇产品。白藜芦醇产品7.8克。

[实施例十二]取虎杖1kg分别用30％乙醇6000ml提取3次，合并提取液，浓缩至约500ml并无乙醇味，所得虎杖提取液用2％尿素溶液，至沉淀完全，滤取上清液，加入纤维素酶14*10⁴iu进行水解，水解温度为68℃，PH值为4.4，水解完全后(用TLC进行检识)，加甲酸酸化至pH2.0，分取沉淀，沉淀即为含白藜芦醇的粗品，加入45％乙醇溶液700ml，回流1小时后停止加热，放冷静置，滤去黄色沉淀，得上清液，加活性炭10克回流脱色，放冷，过滤，滤液真空浓缩至小体积后，调节乙醇浓度40％体积300ml回流使沉淀完全溶解，静置放冷析出白藜芦醇精品。白藜芦醇精品用50％乙醇回流溶解，静置放冷重结晶即得白藜芦醇产品。白藜芦醇产品7.1克。

[实施例十三]取虎杖1kg分别用55％乙醇6000ml提取3次，合并提取液，浓缩至约500ml并无乙醇味，所得虎杖提取液用3％明胶溶液，至沉淀完全，滤取上清液，加入纤维素酶1.0*10⁴iu进行水解，水解温度为68℃，PH值为4.3，水解完全后(用TLC进行检识)，加磷酸酸化至pH2.0，分取沉淀，沉淀即为含白藜芦醇的粗品，加入45％乙醇溶液800ml，回流1小时后停止加热，放冷静置，滤去黄色沉淀，得上清液，加活性炭6克回流脱色，放冷，过滤，滤液真空浓缩至小体积后，加40％乙醇300ml回流使沉淀完全溶解，静置放冷析出白藜芦醇精品。白藜芦醇精品用50％乙醇回流溶解，静置放冷重结晶即得白藜芦醇产品。白藜芦醇产品8.1克。

Claims

1.一种用虎杖制备白藜芦醇的方法，其特征包括以下工艺步骤：

①虎杖提取液浓缩回收有机溶剂后，所得虎杖提取液加单宁沉淀剂，充分搅拌下沉淀，滤取上清液；

②上清液加入纤维素酶进行水解；

③水解完全后，加酸酸化，分取沉淀，沉淀即为含白藜芦醇的粗品；

④所得含白藜芦醇的粗品，加入稀乙醇、稀甲醇或者稀丙酮，加热回流，放冷静置，滤去黄色沉淀，上清液加活性炭回流脱色，放冷，过滤；

⑤滤液真空浓缩，用稀乙醇、稀甲醇或者稀丙酮，回流使沉淀完全溶解，静置放冷析出白藜芦醇精品；

⑥白藜芦醇精品加稀乙醇、稀甲醇或者稀丙酮，回流使沉淀完全溶解，静置放冷重结晶即得白藜芦醇产品。

2.按照权利要求1所述的方法，其中步骤①中所述的单宁沉淀剂是蛋白质类物质、明胶、聚酰胺、三聚氰胺或者尿素。

3.按照权利要求1所述的方法，其中步骤②中，水解用纤维素酶的用量为1.0-20*10⁴iu/公斤药材，最佳为2.0-10.0*10⁴iu/公斤药材，水解温度为25-80℃，最佳水解温度为50-70℃，PH值为3.5-7.5，最佳PH为4.5-6.0。

4.按照权利要求1所述的方法，其中步骤③所用的酸是磷酸，甲酸、乙酸；酸化后的PH为1-3.5，最佳PH为2.0-3.0。

5.按照权利要求1所述的方法，其中步骤④中稀乙醇的浓度为35％-60％，稀甲醇浓度为40％-70％，或者稀丙酮浓度为25-55％，溶剂用量是含白藜芦醇的粗品重量的10-30倍；活性炭用量为溶剂体积的0.5-2.0％(W/V)。

6.按照权利要求1所述的方法，其中步骤⑤中稀乙醇的浓度为20-40％，稀甲醇的浓度为30-60％，稀丙酮的浓度为15-45％，溶剂用量是固体重量的10-30倍。

7.按照权利要求1所述的方法，其中步骤⑥稀乙醇的浓度为30-60％，稀甲醇的浓度为40-70％，或者稀丙酮的浓度为25-55％，溶剂用量是固体重量的10-30倍。