CN102188440A

CN102188440A - 一种灯盏花素针剂所用的高纯度灯盏花素原料的制备方法

Info

Publication number: CN102188440A
Application number: CN 201010125000
Authority: CN
Inventors: 时敬文
Original assignee: WANSHENG LIANHE PHARMACEUTICAL CO Ltd
Current assignee: WANSHENG LIANHE PHARMACEUTICAL CO Ltd
Priority date: 2010-03-16
Filing date: 2010-03-16
Publication date: 2011-09-21
Anticipated expiration: 2030-03-16
Also published as: CN102188440B

Abstract

本发明提供了一种灯盏花素针剂所用的高纯度灯盏花素原料的制备方法，其制备过程包括将灯盏花素粗品经过溶解、醇沉、酸沉、超滤等步骤使得到高纯度灯盏花素原料。该高纯度灯盏花素原料经高效液相色谱法检测纯度可达到98％以上，可用于制备大容量注射剂如灯盏花素氯化钠注射液或灯盏花素葡萄糖注射液。

Description

一种灯盏花素针剂所用的高纯度灯盏花素原料的制备方法

技术领域

本发明涉及一种灯盏花素的精致方法，具体地说，涉及一种由从灯盏花素中提取的灯盏乙素提取物，以及该提取物的制备方法，属于中药制剂领域。

背景技术

灯盏花素是从菊科短葶飞蓬植物灯盏花，又名灯盏细辛的干燥全草中提取的总黄酮类物质，其主要成分为黄酮苷类化合物灯盏甲素、灯盏乙素等，其中灯盏乙素是其主要活性成分。灯盏乙素(又名灯盏花乙素，野黄芩苷)化学名为4′、5、6-三羟基黄酮-7-0-葡萄糖醛酸甙，在水中不溶，在甲醇、乙醇、丙酮的溶解度也很小，酸性条件下难溶于水，能和氢氧化钠、碳酸盐、磷酸盐等无机碱或柠檬酸盐、葡甲胺等有机碱形成盐类在碱性环境下溶于水。

缺血性脑病，如脑梗塞患者，由于供应大脑或脑干的血管突然阻塞，血流中断，造成脑组织缺血、缺氧，使脑组织失去功能，故病人在数分钟或数小时内出现一侧瘫痪、或失语，严重者可出现昏迷甚至死亡。

灯盏花素具有扩张脑血管的作用。能降低血管阻力，增加脑血流量，改善微循环，并有对抗血小板聚集作用。适用于治疗缺血性脑血管疾病，如脑梗塞、脑出血后遗症所致的偏瘫；冠心病、心绞痛、心肌梗塞及高粘血症等；和其它缺血性及伴有微循环障碍性疾病。

灯盏花素粗品从检查项下用分光光度法的测定可以看出，灯盏花乙素的重量百分含量仅在90％左右。主要由于灯盏花素粗品的提取步骤简单，导致有关物质较高，所以在临床上出现使用后，偶见全身发痒、胸闷、乏力、皮疹、心悸等现象。经分析是由于纯度不高引起的。

因此，有必要寻找一种精致效果更好，纯度和安全性更高的灯盏花素制备方法。

发明内容

本发明的目的在于提供一种灯盏花素针剂所用的高纯度灯盏花素原料的制备方法。

本发明高纯度灯盏花素是以灯盏花素粗品为原料制备而成的。

上述的灯盏花素粗品中灯盏花乙素的含量在90％左右。

本发明所述的高纯度灯盏花素的制备方法，经过高效液相色谱法检测干燥品含量可达98％以上，使灯盏花素粗品的纯度有所提高，相关物质含量降低，灯盏花素注射剂如灯盏花素氯化钠或灯盏花素葡萄糖的安全性也有所提高，疗效增强。

本发明所述的高纯度灯盏花素的制备方法，其中PH调节剂优选为Na₂HPO₄，PH范围优选为6～7。

本发明所述高纯度灯盏花素的制备方法，其中使用的超滤膜优选为截留分子量为3万的超滤膜。

本发明所述的高纯度灯盏花素的制备方法，其特征在于，所述的制备方法可制备成小容量注射液、冻干粉针剂、大容量注射剂等不同剂型，如制备灯盏花素氯化钠注射液或灯盏花素葡萄糖注射液。

本发明可通过以下方式得以实现：

取灯盏花素粗品用适量的水充分溶解，溶解调PH值4～8，使其全部溶解，然后加入乙醇溶液，使乙醇浓度达到50％～70％，静置过夜后析出沉淀过滤，再用乙醇溶液溶解，使乙醇浓度达到20％～40％，调PH值1～4，充分搅拌析出沉淀，静置后沉淀析出，过滤，沉淀物用纯化水流洗到中性，然后用截留分子量1～3万的超滤膜超滤，将超滤液减压浓缩，真空干燥，得到高纯度灯盏花素。

更具体的方法可通过以下方式得以实现：

取灯盏花素粗品用适量的水充分溶解，溶解调PH值5～7，使其全部溶解，然后加入乙醇溶液，使乙醇浓度达到55％～65％，静置过夜后析出沉淀过滤，再用乙醇溶液溶解，使乙醇的浓度达到25％～35％，调PH值1～3，充分搅拌析出沉淀，静置后沉淀析出，过滤，沉淀物用纯化水流洗到中性，然后用截留分子量1～3万的超滤膜超滤，将超滤液减压浓缩，真空干燥，得到高纯度灯盏花素。

由本发明制备得到的高纯度灯盏花素原料可与葡萄糖或氯化钠配伍，制得灯盏花素葡萄糖注射液和灯盏花素氯化钠注射液。规格均为2ml、10ml，每ml均含灯盏花素2.5mg、4mg。

临床应用：肌肉注射，一次5mg(灯盏花素)，一日2次；静脉滴注，一次10～20mg(灯盏花素)，一日1次。

灯盏花素葡萄糖注射液和灯盏花素氯化钠注射液均有活血化瘀、通络止痛之功效。用于中风后遗症，冠心病，心绞痛。

具体实施方式

实施例1

取灯盏花素粗品用适量的水充分溶解，溶解调PH值4，使其全部溶解，然后加入乙醇溶液，使乙醇浓度达到50％，静置过夜后析出沉淀过滤，再用乙醇溶液溶解，使乙醇的浓度达到20％，调PH值1，充分搅拌析出沉淀，静置后沉淀析出，过滤，沉淀物用纯化水流洗到中性，然后用截留分子量1万的超滤膜超滤，将超滤液减压浓缩，真空干燥，得到高纯度灯盏花素。

高纯度灯盏花素原料与葡萄糖或氯化钠配伍，制得灯盏花素葡萄糖注射液和灯盏花素氯化钠注射液。规格均为2ml、10ml，每ml均含灯盏花素2.5mg、4mg。

实施例2

取灯盏花素粗品用适量的水充分溶解，溶解调PH值5，使其全部溶解，然后加入乙醇溶液，使乙醇浓度达到55％，静置过夜后析出沉淀过滤，再用乙醇溶液溶解，使乙醇的浓度达到25％，调PH值1～3，充分搅拌析出沉淀，静置后沉淀析出，过滤，沉淀物用纯化水流洗到中性，然后用截留分子量2万的超滤膜超滤，将超滤液减压浓缩，真空干燥，得到高纯度灯盏花素。

实施例3

取灯盏花素粗品用适量的水充分溶解，溶解调PH值6，使其全部溶解，然后加入乙醇溶液，使乙醇浓度达到60％，静置过夜后析出沉淀过滤，再用乙醇溶液溶解，使乙醇的浓度达到30％，调PH值2，充分搅拌析出沉淀，静置后沉淀析出，过滤，沉淀物用纯化水流洗到中性，然后用截留分子量3万的超滤膜超滤，将超滤液减压浓缩，真空干燥，得到高纯度灯盏花素。

实施例4

取4盏花素粗品用适量的水充分溶解，溶解调PH值7，使其全部溶解，然后加入乙醇溶液，使乙醇浓度达到65％，静置过夜后析出沉淀过滤，再用乙醇溶液溶解，使乙醇的浓度达到35％，调PH值3，充分搅拌析出沉淀，静置后沉淀析出，过滤，沉淀物用纯化水流洗到中性，然后用截留分子量3万的超滤膜超滤，将超滤液减压浓缩，真空干燥，得到高纯度灯盏花素。

实施例5

取灯盏花素粗品用适量的水充分溶解，溶解调PH值8，使其全部溶解，然后加入乙醇溶液，使乙醇浓度达到70％，静置过夜后析出沉淀过滤，再用乙醇溶液溶解，使乙醇的浓度达到40％，调PH值4，充分搅拌析出沉淀，静置后沉淀析出，过滤，沉淀物用纯化水流洗到中性，然后用截留分子量3万的超滤膜超滤，将超滤液减压浓缩，真空干燥，得到高纯度灯盏花素。

实验例1

本实验例为本发明最优选制备方法所得的高纯度灯盏花素原料性状、热原、过敏反应及降压物质项目的测定。

性状：本品为淡黄色至黄色粉末，有一定吸湿性；无臭，无味或味微咸。

热原：取本品，按100mg加1％碳酸氢钠溶液2.3ml的比例加入1％碳酸氢钠无热原溶液，在50℃水浴振摇使溶解，再加氯化钠注射液制成每1ml含2.5mg的溶液，依法(附录XIII A)检查，剂量按家兔体重每1kg注射1ml，应符合规定(供注射用)。

过敏反应：取本品，按100mg加1％碳酸氢钠溶液2.3ml的比例加入1％碳酸氢钠无菌溶液，在50℃水浴振摇使溶解，再加氯化钠注射液制成每1ml含3mg的溶液，依法(附录XIII G)检查，符合规定(供注射用)。

降压物质：取本品，按100mg，加1％碳酸氢钠溶液2.3ml的比例加入1％碳酸氢钠无菌溶液，在50℃水浴振摇使溶解，再加氯化钠注射液制成每1ml含10mg的溶液，依法(附录XIII F)检查，剂量按每1kg注射0.2ml，符合规定(供注射用)。

以上检测证明该高纯度灯盏花素原料能够满足注射剂标准。

实验例2

本实验例为本发明最优选制备方法所得的高纯度灯盏花素原料异常毒性、溶血与凝聚项目的测定。

异常毒性：取本品，按100mg，加1％碳酸氢钠溶液2.3ml的比例加入1％碳酸氢钠无菌溶液，在50℃水浴振摇使溶解，再加氯化钠注射液制成每1ml含12mg的溶液，依法(附录XIII E)检查，按静脉注射法给药，符合规定(供注射用)。

溶血与凝聚 2％红细胞混悬液的制备取家兔心脏血，置有玻璃珠的容器内，振摇数分钟，出去纤维蛋白原使成脱纤血。加入0.9％氯化钠溶液约10倍量，摇匀，每分钟1000～1500转离心15分钟，倾去上清液，沉淀的红细胞再用0.9％氯化钠溶液按上述方法洗涤3～4次，至上清液不显红色，将所得红细胞用0.9％氯化钠溶液制成2％的混悬液。

溶液的制备取本品，按每25mg加10％精氨酸溶液0.1ml溶解，加氯化钠注射液稀释制成每1ml含1mg的溶液。

试验方法取洁净试管5支，1、2、5号管中各加供试品溶液2.5ml，第3管加0.9％氯化钠溶液2.5ml作为阴性对照管，第4管加蒸馏水2.5ml作为阳性对照管，然后1～4号管分别加2％红细胞混悬液2.5ml，第5管加0.9％氯化钠溶液2.5ml作为供试品对照，摇匀，立即置恒温箱内，保持37℃±0.5℃，在3小时内没有溶血现象和凝聚现象。

表1

以上检测证明该高纯度灯盏花素原料能够满足注射剂标准。

实验例3

本实验例为本发明最优选制备方法所得的高纯度灯盏花素原料定性测定。

取本品约1mg，用甲醇1ml溶解，加少许镁粉及数滴盐酸，置水浴中稍加热，呈橙红色。

取本品约2mg，用甲醇2ml溶解，加0.1mol/L氯化锶甲醇溶液3滴及10％氨性甲醇溶液1～2滴，立即生成橙红色沉淀。

取【含量测定】项下的溶液，照分光光度法(中国药典2005年版一部附录VA)测定，在284±1nm和335±1nm波长处有最大吸收。

以上三种实验为本发明最优选制备方法所得的高纯度灯盏花素原料定性反应，说明本发明药物组合物中含有确定的组分。

实验例4

本实验例为本发明最优选制备方法所得的高纯度灯盏花素原料相关物质项目的测定。

照高效液相色谱法测定(附录VID)测定(供注射用)。

检查法取本品适量(相当于野黄芩苷20mg)，置50ml量瓶中，加甲醇适量，超声处理(功率300W，频率50kHz)45分钟，放至室温，加甲醇稀释至刻度，摇匀，作为供试品溶液。精密量取供试品溶液1ml，置100ml量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，作为对照溶液。照【含量测定】项下的色谱条件，取对照溶液5μl，注入液相色谱仪，调节检测灵敏度，使主成分色谱峰的峰高为满量程的10％，再精密量取供试品溶液与对照品溶液各5μl，分别注入液相色谱仪，记录色谱图至主成分峰保留时间的2.5倍。供试品溶液色谱中，其他成分峰面积的和不大于对照溶液主峰峰面积的2倍。

实验例5

本实验例为本发明最优选制备方法所得的高纯度灯盏花素原料含量的测定。

照高效液相色谱法测定(附录VD)测定。

色谱条件与系统适用性试验：用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以甲醇-0.1％磷酸溶液(40：60)为流动相；流速为每分钟1.0ml；柱温40℃；检测波长为335nm，理论板数按野黄芩苷峰计算应不低于5000。

供试品溶液的制备：取本品10mg，精密称定，置100ml量瓶中，加甲醇70ml，超声处理(功率300W，频率50kHz)45分钟，取出，放置室温，加甲醇稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得。

对照品溶液的制备：取野黄芩苷对照品10mg，精密称定，置100ml量瓶中，加甲醇70ml，超声处理(功率300W，频率50kHz)45分钟，取出，放置室温，加甲醇稀释至刻度，摇匀，即得。

测定方法：分别精密吸取供试品溶液和对照品溶液各5μl，注入液相色谱仪，测定，即得。

通过三批测定，高纯度灯盏花素原料的含量见表2

表2

批号	灯盏乙素含量
		20100201	98.5％
20100202	98.7％
		20100203	98.3％

比较例1

本比较例说明在治疗脑血管疾病中，用本发明高纯度灯盏花素原料制备的灯盏花素葡萄糖注射剂疗效优于其他同类产品，且不良反映较少。

表3

药品名称	用发明制备的灯盏花素葡萄糖注射液	常规工艺生产的灯盏花素制备的灯盏花素葡萄糖注射液
			用法用量	肌肉注射，一次5mg(灯盏花素)，一日2次；静脉滴注，一次10～20mg(灯盏花素)，一日1次。	肌肉注射，一次5mg(灯盏花素)，一日2次。静脉滴注，一次10～20mg(灯盏花素)，用500ml10％氯化钠注射液稀释后使用，一日1次。
临床应用	治疗81例冠心病患者	治疗89例冠心病患者
			不良反应观察	无全身发痒，胸闷、乏力、皮疹、心悸等现象。	有3例心悸现象，1例发痒现象
刺激性观察	3例有轻微疼痛现象	16例有疼痛现象，3例注射部位有压迫感。

经临床观察用本发明制备的灯盏花素葡萄糖注射液，无不良反应，刺激性较小，约3.7％；用常规工艺生产的灯盏花素制备的灯盏花素葡萄糖注射不良反应比例为4.5％，刺激性比例为21.3％。

Claims

1.一种灯盏花素针剂所用的高纯度灯盏花素原料的制备方法，其特征在于：

2.一种灯盏花素针剂所用的高纯度灯盏花素原料的制备，其特征在于其方法是：

3.根据权利1～2所述高纯度灯盏花素的制备方法，经过高效液相色谱法检测干燥品含量可达98％以上，可用于灯盏花素注射剂的制备。

4.根据权利1～2所述高纯度灯盏花素的制备方法，其中PH调节剂优选为Na₂HPO₄，PH范围优选为6～7。

5.根据权利1～2所述高纯度灯盏花素的制备方法，其中使用的超滤膜优选为截留分子量为3万的超滤膜。

6.根据权利1～2任意一种所述的高纯度灯盏花素的制备方法，其特征在于，所述的制备方法可制备成小容量注射液、冻干粉针剂、大容量注射剂等不同剂型，如制备灯盏花素氯化钠注射液或灯盏花素葡萄糖注射液。