CN100496461C - 银杏总黄酮的精制方法及制备银杏达莫注射液的方法 - Google Patents

Abstract

本发明涉及一种银杏总黄酮的精制方法及制备银杏达莫注射液的方法。现有技术中还没有能够有效提纯银杏总黄酮的方法。现有的银杏达莫注射液制备方法都是直接以银杏叶提取物为原料。收率低，易变质。为此本发明主要包括：将银杏叶提取物加入双嘧达莫并在PH3.0-6.5，温度100℃的条件下反应，低温沉淀，超滤，灭菌，制得能用于银杏达莫注射液的银杏总黄酮。在银杏总黄酮精制的过程中及制备银杏达莫注射液的过程中以NaHSO₃作为抗氧剂。本发明银杏总黄酮的精制方法及制备银杏达莫注射液的方法分别适用于银杏总黄酮的精制过程中和银杏达莫注射液的制备过程中。

Description

银杏总黄酮的精制方法及制备银杏达莫注射液的方法

技术领域

本发明涉及一种银杏总黄酮的精制方法及制备银杏达莫注射液的方法。

背景技术

银杏总黄酮是一种天然特效药物原料，从我国盛产的银杏叶中提取精制而得，具有很强的降血压、降血脂、治疗脑血栓和心血管疾病，防癌、抗衰老的功能，已广泛应用于药物、营养保健品及高档化妆品中。

双嘧达莫(Dipyridamole)(又名：潘生丁、双嘧哌胺醇、双嘧啶氨醇、哌醇定、联嘧啶氨醇、骈嘧啶氨醇)为一种选抗血小板药。具有抗血栓形成作用，它可抑制血小板的第一相聚集和第二相聚集。高浓度时(50ug/ml)可抑制血小板的释放反应。临床可用于血栓栓塞性疾病。双嘧达莫(Dipyridamole)为黄色结晶性粉末；无臭：味微苦，在氯仿中易溶，在乙醇中溶解，在丙酮中微溶，在水中几乎不溶；在稀酸中易溶但不稳定。

银杏达莫注射液是一种以银杏总黄酮与双嘧达莫配制而成的复方制剂。现有技术中还没有能够有效提纯银杏总黄酮的方法。市场上也只能买到银杏总黄酮含量为24％左右的银杏叶提取物，其余为杂质。现有的银杏达莫注射液制备方法都是直接以银杏叶提取物为原料。在生产过程中将双嘧达莫加入银杏叶提取物中，溶液立即产生大量难以滤除的沉淀。而且即使将药液过滤澄清后，在贮藏过程中，亦会慢慢产生沉淀物，使产品的澄清度达不到要求而成为废品。

银杏叶提取物中还含有导致过敏反应的大分子物质及导致热原反应的细菌内毒素。传统方法以活性炭吸附细菌内毒素，但这种方法不能除去大分子过敏物质。且同时活性炭吸附了银杏总黄酮，降低了有效成份的含量。

由于银杏总黄酮与双嘧达莫均具有明显的被氧化性，因而在没有抗氧剂的条件下即使产品充N₂保护，也会在较短的时间内颜色加深，含量下降，使产品不合格。

发明内容

本发明要解决的技术问题是如何克服现有技术的上述缺陷，提供一种银杏总黄酮的精制方法及制备银杏达莫注射液的方法。

本发明人经过长期研究发现：银杏达莫注射液在现有生产过程中产生沉淀的原因：银杏叶提取物中的一部分杂质能与双嘧达莫发生沉淀反应，尤其是在酸性条件下，而双嘧达莫必须在酸性条件下才能溶解。这就导致了在直接以银杏叶提取物、双嘧达莫为原料，生产银杏达莫注射液的过程中，不可避免地会产生大量难以滤除的沉淀。

基于上述认识，本发明人将银杏叶提取物溶解后加入双嘧达莫，在酸性条件下加热，冷藏，使之杂质沉淀除去，然后取上清液过滤，那么这种清液在酸性条件下不再与双嘧达莫发生沉淀。

对于银杏叶提取物中的导致过敏反应的大分子物质及导致热原反应的细菌内毒素，本发明使用了截留分子量小于一万道尔顿的超滤膜超滤，使银杏叶提取物溶液中99.9％的大于一万分子量的杂质及细菌内毒素被截留于溶液中，而透过液几乎没有分子量大于一万的物质，从而有效地解决了“银杏达莫注射液”的过敏、热原等重大临床不良反应。

银杏总黄酮与双嘧达莫均具有明显的被氧化性，因而在没有抗氧剂的条件下即使产品充N₂保护，也会在较短的时间内颜色加深，含量下降，使产品不合格。本发明加以1‰的NaHSO₃作为抗氧剂，有效地解决了上述问题。

本发明银杏总黄酮的精制方法包括下述步骤：

一、在银杏叶提取物中，加入注射用水，加热并充分搅拌至溶解；

二、将上述溶液，置于耐酸容器内，加入双嘧达莫、NaHSO₃，以盐酸将溶液PH值调至3.0—6.5，继续加热至80—100℃；

三、水浴冷却至室温，然后置于冷藏柜内，0—10℃冷藏12小时或12个小时以上，取沉降后的上清液，以0.45um微孔滤膜为介质，板框过滤；

四、将步骤三中所得滤液，用截留分子量为一万道尔顿的超滤器超滤，并将所得超滤液，充分搅拌均匀；

五、将步骤四所得超滤液以蠕动泵输送至输液袋中包装，用高频热合机封口，在108℃下，经45分钟热压灭菌。

其特殊之处在于：所述双嘧达莫、银杏叶提取物、注射用水的重量比为：1—4：50—100：800—1000。

利用步骤四中所得超滤液或步骤五中所得银杏总黄酮溶液制备银杏达莫注射液包括下述步骤：

一、按实测含量，取含银杏总黄酮10.5克的步骤四中所得超滤液或步骤五中所得溶液，加双嘧达莫4.2克，NaHSO₃5克，以注射用水稀释至10000ml；

二、所得溶液经0.22um微孔滤膜过滤，按产品规格要求分装，再经100℃、45分钟灭菌，包装。

以下是对按照上述方法生产的银杏达莫注射液的质量稳定性的考察情况

一、加速试验

加速试验的目的是通过加速药物的物理化学变化，探讨药物的稳定性，为药品的使用、包装、运输及贮存提供必要的依据，试验方法如下：

取“银杏达莫注射液”5ml规格(银杏总黄酮含量为4.5mg-5.5mg，双嘧达莫含量为1.8mg-2.2mg)和10ml(银杏总黄酮含量为9.0mg-11.0mg，双嘧达莫含量为3.6mg-4.4mg)规格各三批，按市售包装，于温度为40±2℃、相对湿度为75±5％的条件下放置6个月，分别于0、1、2、3、6月末取样一次，按重点考察项目进行测定，结果见下表：

表1  “银杏达莫注射液”(5ml)加速试验测定结果

表2  “银杏达莫注射液”(10ml)加速试验测定结果

试验结果表明，“银杏达莫注射液”(5ml规格和10ml规格各三批)在温度为40±2℃、相对湿度为75±5％条件下放置6个月，除含量略有下降外，其他质量指标无明显变化，说明本品质量相当稳定。

二、长期试验

本试验是为制定药物的有效期提供依据，试验方法为：取“银杏达莫注射液”，市售包装，于温度为25±2℃、相对湿度为60±10％放置12个月，分别于0、3、6、9、12、18、24、30、36月末取样测定，结果如下：

表3  “银杏达莫注射液”(5ml)长期试验测定结果

表4  “银杏达莫注射液”(10ml)长期试验测定结果

试验结果表明，“银杏达莫注射液”(5ml规格和10ml规格各三批)在温度为25±2℃、相对湿度为60±10％的条件下放置18个月，经取样检测，除含量略有下降外，其他质量指标基本不变，说明本品质量相当稳定。长期稳定性考察仍在继续进行。

三、考察结论

根据上述稳定性试验结果，可以得出如下考察结论：

1、加速试验结果表明：“银杏达莫注射液”(5ml和10ml各三批)在温度为40±2℃、相对湿度为75±5％条件下放置6个月，含量略有下降，其他质量指标无明显变化，说明本品质量相当稳定。

2、长期试验结果表明：“银杏达莫注射液”(5ml和10ml各三批)在温度为25±2℃、相对湿度为60±10％的条件下放置了18个月，经取样检测，含量略有下降，其他质量指标基本不变，说明“银杏达莫注射液”质量相当稳定。

3、上述批次的“银杏达莫注射液”均为银杏叶提取物经过新的工艺方法精制后与双嘧达莫配合制成注射液的，从试验结果看，解决了市场上银杏达莫注射液长期存在的颜色变深、澄明度不合格、双嘧达莫含量下降严重的问题，保证了药品质量，维护了患者的用药安全。

综上所述，本发明具有下列优点：

①、利用双嘧达莫除去银杏叶提取物中易产生沉淀物的杂质，有效解决了产品澄明度问题以及贮存过程中产品缓慢沉淀后澄明度不合格的问题。

②、利用分子筛(超滤)技术代替传统的活性炭，即除去了细菌内毒素，也除去易导致过敏反应的大分子物质。细菌内毒素截留率达99.9％，大分子过敏物质被截留除去，而绝大部分银杏总黄酮被保留下来，收率超过95％。

③、加入NaHSO₃为抗氧剂，解决了产品易氧化、颜色变深、贮存过程中有效成份含量下降以及有效期内产品含量不合格的问题。

本发明银杏总黄酮的精制方法填补了现有技术的空白，以该方法精制的银杏总黄酮是制备银杏达莫注射液及其它银杏制剂的理想原料；本发明制备银杏达莫注射液的方法是现有银杏达莫注射液的理想替代方法。本发明银杏总黄酮的精制方法及制备银杏达莫注射液的方法分别适用于银杏总黄酮的精制过程中和银杏达莫注射液的制备过程中。

具体实施方式

下面对本发明银杏总黄酮的精制方法及制备银杏达莫注射液的方法分别作进一步的说明：银杏总黄酮的精制方法

实施方式一：本发明银杏总黄酮的精制方法，包括下述步骤：

一、在10Kg银杏叶提取物中，加入注射用水100L，加热并充分搅拌至溶解；

二、将上述溶液，置于耐酸容器内，加入双嘧达莫400g、NaHSO₃100g，以盐酸将溶液PH值调至4.0，继续加热至100℃；

三、水浴冷却至室温，然后置于冷藏柜内，0—10℃冷藏12小时或12个小时以上，取沉降后的上清液，以0.45um微孔滤膜为介质，板框过滤；

四、将步骤三中所得滤液，用截留分子量为一万道尔顿的超滤器超滤，并将所得超滤液，充分搅拌均匀；

五、将步骤四所得超滤液以蠕动泵输送至输液袋中包装，用高频热合机封口，在108℃下，经45分钟热压灭菌。

实施方式二：本发明银杏总黄酮的精制方法，包括下述步骤：

一、在5Kg银杏叶提取物中，加入注射用水80L，加热并充分搅拌至溶解；

二、将上述溶液，置于耐酸容器内，加入双嘧达莫100g、NaHSO₃80g，以盐酸将溶液PH值调至3.0，继续加热至80℃；

三、水浴冷却至室温，然后置于冷藏柜内，OC冷藏12小时，取沉降后的上清液，以0.45um微孔滤膜为介质，板框过滤；

四、将步骤三中所得滤液，用截留分子量为一万道尔顿的超滤器超滤，并将所得超滤液，充分搅拌均匀；

五、将步骤四所得超滤液以蠕动泵输送至输液袋中包装，用高频热合机封口，在108℃下，经45分钟热压灭菌。

实施方式三：本发明银杏总黄酮的精制方法，包括下述步骤：

一、在10Kg银杏叶提取物中，加入注射用水100L，加热并充分搅拌至溶解；

二、将上述溶液，置于耐酸容器内，加入双嘧达莫400g、NaHSO₃100g，以盐酸将溶液PH值调至6.5，继续加热至100℃；

三、水浴冷却至室温，然后置于冷藏柜内，10℃冷藏12个小时以上，取沉降后的上清液，以0.45um微孔滤膜为介质，板框过滤；

四、将步骤三中所得滤液，用截留分子量为一万道尔顿的超滤器超滤，并将所得超滤液，充分搅拌均匀；

五、将步骤四所得超滤液以蠕动泵输送至输液袋中包装，用高频热合机封口，在108℃下，经45分钟热压灭菌。

实施方式四：本发明银杏总黄酮的精制方法，包括下述步骤：

一、在7.5Kg银杏叶提取物中，加入注射用水90L，加热并充分搅拌至溶解；

二、将上述溶液，置于耐酸容器内，加入双嘧达莫250g、NaHSO₃90g，以盐酸将溶液PH值调至4.0，继续加热至90℃；

三、水浴冷却至室温，然后置于冷藏柜内，5℃冷藏12个小时以上，取沉降后的上清液，以0.45um微孔滤膜为介质，板框过滤；

四、将步骤三中所得滤液，用截留分子量为一万道尔顿的超滤器超滤，并将所得超滤液，充分搅拌均匀；

五、将步骤四所得超滤液以蠕动泵输送至输液袋中包装，用高频热合机封口，在108℃下，经45分钟热压灭菌。

利用所得超滤液或所得银杏总黄酮溶液制备银杏达莫注射液包括下述步骤：

一、实测含量提取含银杏总黄酮10.5克的步骤四中所得超滤液或步骤五中所得溶液，加双嘧达莫4.2克，NaHSO₃5克，以注射用水稀释至10000ml；

二、所得溶液经0.22um微孔滤膜过滤，按产品规格要求分装，再经100℃、45分钟灭菌，包装。

所得银杏总黄酮和银杏达莫注射液应在常温下、遮光保存。

Claims (3)

1、一种银杏总黄酮的精制方法，其特征在于：包括下述步骤：

一、在银杏叶提取物中，加入注射用水，加热并充分搅拌至溶解；

二、将上述溶液置于耐酸容器内，加入双嘧达莫、NaHSO₃，以盐酸将溶液PH值调至3.0—6.5，继续加热至80—100℃；

三、水浴冷却至室温，然后置于冷藏柜内，0—10℃冷藏12小时或12个小时以上，取沉降后的上清液，以0.45um微孔滤膜为介质，板框过滤；

四、将步骤三中所得滤液，用截留分子量为一万道尔顿的超滤器超滤，并将所得超滤液，充分搅拌均匀；

五、将步骤四所得超滤液以蠕动泵输送至输液袋中包装，用高频热合机封口，在108℃下，经45分钟热压灭菌。

2、根据权利要求1所述的银杏总黄酮的精制方法，其特征在于：所述双嘧达莫、银杏叶提取物、注射用水的重量比为1—4：50—100：800—1000。

3、利用权利要求1或2所述银杏总黄酮的精制方法的步骤四中所得超滤液或步骤五中所得银杏总黄酮溶液，制备银杏达莫注射液的方法包括下述步骤：

一、按实测含量，取含银杏总黄酮10.5克的步骤四中所得超滤液或步骤五中所得溶液，加双嘧达莫4.2克，NaHSO₃5克，以注射用水稀释至10000ml；

二、将所得溶液经0.22um微孔滤膜过滤，按产品规格要求分装，再经100℃、45分钟灭菌，包装。