CN109876031A - 一种余甘子鞣质部位的富集方法 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及一种从余甘子药材中制备鞣质的方法,包含如下步骤:(1)将余甘子鞣质提取液浓缩至浓度相当于0.1‑0.3g生药/ml的药液,离心或过滤,得上清液;(2)将上清液经大孔吸附树脂进行动态吸附,再用乙醇水梯度洗脱;将洗脱液减压干燥。该方法质量可控且环保,利于产业化推广。
Description
技术领域
本发明涉及一种中药活性成分的制备方法,具体地是一种从余甘子药材中制备鞣质的方法。
背景技术
余甘子为双子叶植物药大戟科植物余甘子Phyllanthus emblica L. 的果实,具有化痰、生津、止咳、解毒的功效,主治感冒发热,咳嗽咽痛,白喉,烦热口干。分布福建、广东、广西、云南、贵州、四川、台湾等地。余甘子大多是野生或半野生,几乎不受工业污染,是名副其实的绿色食品加工原料。
余甘子新鲜果实含鞣质45%,未成熟果实含鞣质30%~35%,干燥果实中总鞣质含量可达到14%,其中可分离得诃子酸(chebrlinic acid)、诃黎勒酸(chebulagic acid)、鞣云实素(corilagin)、原诃子酸(terchebin)、诃子裂酸(chebulic acid)及没食子酸、鞣花酸。另含余甘子酸(phyllemblic acid)、余甘子酚(emblicol)、粘酸(mucie acid),以及丰富的维生素C(1.0~1.8g/100g)。
目前,国内对鞣质的研究较少,尚处于起步阶段,CN102327314A,2012年1月25日公开,该发明公开了余甘子鞣质的制备方法,工艺中包括了超临界二氧化碳流体萃取和超声波提取,而超临界流体萃取和超声波提取,在生产上应用不广泛,不利于产业化推广,而且制备工艺中采用了丙酮溶剂,质量不好控制,而且对环境造成污染。
发明内容
为了克服现有技术的不足,本发明提供了一种质量可控且环保,利于产业化推广的余甘子鞣质部位的富集方法。
本发明提供的一种余甘子鞣质部位的富集方法,包含如下步骤:
(1)将余甘子鞣质提取液浓缩至浓度相当于0.1-0.3g生药/ml的药液,离心或过滤,得上清液;
(2)将步骤(1)所得上清液经大孔吸附树脂进行动态吸附,再用乙醇水梯度洗脱;
(3)将洗脱液减压干燥。
作为优选,所述余甘子提取液的制备方法为:将余甘子药材在40-60℃温浸提取,采用溶剂为50-70%乙醇。
和/或,作为优选,所述余甘子提取液的制备方法为:将余甘子药材在45-55℃温浸提取,采用溶剂为55-65%乙醇。
和/或,作为优选,所用药材的粒度为5-20目,更优选为5-10目。
和/或,作为优先,所述提取溶剂用量为6-12倍量(w/w)。
和/或,作为优选,所述提取次数为1-4次。
和/或,作为优选,所述提取时间为6-12h。
和/或,作为优选,大孔吸附树脂动态吸附流速为0.5-2ml/min。
和/或,作为优选,使用的大孔吸附树脂为中等极性的苯乙烯型大孔吸附树脂,如HPD-400型。
和/或,作为优选,所述树脂柱径高比1:5-1:9。
和/或,作为优选,所述上清液按生药量与树脂的体积比为1:4-1:6上样。
和/或,作为优选,所述洗脱步骤为:
(1)用5-20%乙醇水溶液洗脱除杂;
(2)用60-80%乙醇水溶液洗脱,得洗脱液。
和/或,作为优选,所述步骤(1)的洗脱流速为0.5-2ml/min。
和/或,作为优选,所述步骤(1)的洗脱体积为1-4BV。
和/或,作为优选,所述步骤(2)的洗脱流速为0.5-3ml/min。
和/或,作为优选,所述步骤(2)的洗脱体积为4-6BV。
和/或,作为优选,余甘子鞣质部位的富集方法,包含如下步骤:
将余甘子鞣质提取液,浓缩至浓度相当于 0.1-0.3g 生药/ml的药液,离心或过滤,所得上清液按生药量与树脂体积比为 1:4-1:6上样于HPD-400 型大孔吸附树脂柱上,树脂柱径高比为 1:5-1:9,进行动态吸附,吸附流速为0.5-2ml/min,待吸附完成后,用5%-20%乙醇水溶液洗脱除杂,在用60%-80%乙醇水溶液洗脱,收集乙醇洗脱液,减压干燥。
本发明转移率的计算公式如下:
转移率(%)=(醇洗液中鞣质重量/上样液药材中鞣质重量)×100%。
本发明的有益技术效果:
1、本发明采用温浸回流提取,温浸提取生产上比较容易推广。
2、申请人通过大量的实验,筛选出合适的树脂型号、树脂用量、径高比,使得鞣质含量达到56%以上,转移率达到 65%以上。
本发明直接用水和乙醇做溶剂,既经济又环保,该方法简便,含量、转移率较高,放大工艺验证结果也表明所建立的制备工艺稳定可行,适合于工业化生产需要。
具体实施方式
下面通过实施例的方式进一步说明本发明,但并不因此将本发明限制在所述的实施例范围之中。下列实施例中未注明具体条件的实验方法,按照常规方法和条件进行选择。
实施例1:药材粒度对鞣质提取的影响
精密称取余甘子药材6份,每份约10g,分别为a:未经处理的原药材,b:粉碎过5目筛的药材粉末,c:粉碎过10目筛的药材粉末,d:粉碎过20目筛的药材粉末,以余甘子药材的10倍量(w/w) 60%乙醇温浸提取两次,每次12小时,抽滤,合并两次滤液,回收至小体积,移入蒸发皿,40℃蒸至稠膏状,真空干燥得提取物。取适量提取物测定鞣质和总酚含量,平行操作3份。结果见下表:
表1:不同粒度余甘子药材提取结果
粉碎粒度 | 鞣质含量(%) | 总酚含量(%) | 鞣质提取率(%) |
原药材 | 10.8 | 18.94 | 90.91 |
5目 | 11.26 | 19.53 | 94.78 |
10目 | 11.32 | 20.04 | 95.29 |
20目 | 11.2 | 18.94 | 94.28 |
实施例2:余甘子鞣质提取液的制备
将粒度为5目的余甘子药材10g,在45℃,60 %乙醇温浸提取 3 次,每次12 h,乙醇用量为药材的12倍(w/w),提取液过滤,所得上清液为提取液。
实施例3:余甘子鞣质提取液的制备
将粒度为10目的余甘子药材10g,在55℃,55 %乙醇温浸提取2 次,每次6 h,乙醇用量为药材的6倍(w/w),提取液过滤,所得上清液为提取液。
实施例4:余甘子鞣质提取液的制备
将粒度为20目的余甘子药材10g,在60℃,65 %乙醇温浸提取 3次,每次10h,乙醇用量为药材的10 倍(w/w),提取液离心,所得上清液为提取液。
实施例5:余甘子鞣质提取液的制备
将粒度为15目的余甘子药材10g,在55℃,70 %乙醇温浸提取 3 次,每次8 h,乙醇用量为药材的8倍(w/w),提取液离心,所得上清液为提取液。
实施例6:余甘子鞣质部位的富集
(1)将实施例2所得余甘子鞣质提取液浓缩至浓度相当于0.1g生药/ml的药液,以3000转每分钟的转速离心20min,取上清液;
(2)取步骤(1)上清液40ml(总鞣质量,415.33mg)经大孔吸附树脂HPD-400,树脂柱径高比为1:9,上清液按生药量与树脂的体积比为1:6上样,吸附流速为2ml/min,待吸附完成后,用10%乙醇洗脱2BV,除杂流速为1ml/min,洗脱剂为70%乙醇,洗脱体积为5BV,洗脱流速为0.5ml/min,收集70%乙醇洗脱液,减压浓缩干燥,检测结果为:70%洗脱物浸膏重0.556g,70%洗脱物鞣质含量为57.88%,转移率为67.71%。
实施例7:余甘子鞣质部位的富集
(1)将实施例3所得余甘子鞣质提取液浓缩至浓度相当于0.3g生药/ml的药液,以3000转每分钟的转速离心30min,取上清液;
(2)取步骤(1)上清液15ml(总鞣质量,400.84mg)经大孔吸附树脂HPD-400,树脂柱径高比为1:5,上清液按生药量与树脂的体积比为1:5上样,吸附流速为2ml/min,待吸附完成后,用10%乙醇洗脱2BV,除杂流速为1ml/min,洗脱剂为70%乙醇,洗脱体积为5BV,洗脱流速为1ml/min,收集70%乙醇洗脱液,减压干燥,检测结果为:70%洗脱物浸膏重0.553g,70%洗脱物鞣质含量为56.47%,转移率为65.74%。
实施例8:余甘子鞣质部位的富集
(1)将实施例4所得余甘子鞣质提取液浓缩至浓度相当于0.2g生药/ml的药液,以3000转每分钟的转速离心30min,取上清液;
(2)取步骤(1)上清液20ml(总鞣质量,415.14mg)经大孔吸附树脂HPD-400,树脂柱径高比为1:7,上清液按生药量与树脂的体积比为1:6上样,吸附流速为1ml/min,待吸附完成后,用10%乙醇洗脱2BV,除杂流速为1ml/min,洗脱剂为70%乙醇,洗脱体积为5BV,洗脱流速为2ml/min,收集70%乙醇洗脱液,减压干燥,检测结果为:70%洗脱物浸膏重0.566g,70%洗脱物鞣质含量为56.06%,转移率为67.82%。
实施例9:余甘子鞣质部位的富集
(1)将实施例4所得余甘子鞣质提取液浓缩至浓度相当于0.2g生药/ml的药液,以3000转每分钟的转速离心20min,取上清液;
(2)取步骤(1)上清液20ml(总鞣质量,415.14mg)经大孔吸附树脂HPD-400,树脂柱径高比为1:5,上清液按生药量与树脂的体积比为1:4上样,吸附流速为1ml/min,待吸附完成后,用5%乙醇洗脱2BV,除杂流速为0.5ml/min,洗脱剂为80%乙醇,洗脱体积为5BV,洗脱流速为2ml/min,收集80%乙醇洗脱液,减压干燥,检测结果为:60%洗脱物浸膏重0.569g,60%洗脱物鞣质含量为56.61%,转移率为67.80%。
实施例10:余甘子鞣质部位的富集
(1)将实施例4所得余甘子鞣质提取液浓缩至浓度相当于0.2g生药/ml的药液,以3000转每分钟的转速离心30min,取上清液;
(2)取步骤(1)上清液20ml(总鞣质量,415.14mg)经大孔吸附树脂HPD-400,树脂柱径高比为1:9,上清液按生药量与树脂的体积比为1:5上样,吸附流速为1ml/min,待吸附完成后,用20%乙醇洗脱2BV,除杂流速为2ml/min,洗脱剂为60%乙醇,洗脱体积为5BV,洗脱流速为3ml/min,收集60%乙醇洗脱液,减压干燥,检测结果为:60%洗脱物浸膏重0.568g,60%洗脱物鞣质含量为56.49%,转移率为67.52%。
实施例11:余甘子鞣质部位的富集
取余甘子药材50kg破碎成10目,65%乙醇提取2次,每次8h,溶剂用量为药材的9倍(w/w),提取液过滤,回收溶剂,浓缩至浓度相当于0.1g生药/mL的药液,以3000转每分钟的转速离心20分钟,所得上清液;按生药量与树脂体积比为1:4上样于HPD-400型大孔树脂上,树脂柱径高比为1:7,进行动态吸附,吸附流速分别为1ml/min,待吸附完成后,用15%乙醇洗脱3BV,除杂流速分别为0.8ml/min,洗脱剂为60%乙醇,洗脱体积为5BV,洗脱流速为1ml/min,收集60 %乙醇洗脱液,减压干燥即得。检测结果为:60%洗脱物浸膏重2.84kg,60%洗脱物鞣质含量为56.30%,转移率为71.44%。
实施例12:余甘子鞣质部位的富集
取余甘子药材50kg破碎成5目,70%乙醇提取3次,每次10h,溶剂用量为药材的8倍(w/w),提取液过滤,回收溶剂,浓缩至浓度相当于0.2g生药/mL的药液,以3000转每分钟的转速离心30分钟,所得上清液。按生药量与树脂体积比为1:6上样于HPD-400型大孔树脂上,树脂柱径高比为1:6,进行动态吸附,吸附流速分别为2ml/min,待吸附完成后,用20%乙醇洗脱2BV,除杂流速分别为0.5ml/min,洗脱剂为70%乙醇,洗脱体积为5BV,洗脱流速为1ml/min,收集70 %乙醇洗脱液,减压干燥即得。检测结果为:70%洗脱物浸膏重2.83kg,70%洗脱物鞣质含量为58.1%,转移率为70.02%。
实施例13:余甘子鞣质部位的富集
取余甘子药材破碎成20目,60%乙醇提取3次,每次5h,溶剂用量为药材的7倍(w/w),提取液过滤,回收溶剂,浓缩至浓度相当于0.3g生药/mL的药液,以3000转每分钟的转速离心30分钟,所得上清液。按生药量与树脂体积比为1:5上样于HPD-400型大孔树脂上,树脂柱径高比为1:5,进行动态吸附,吸附流速分别为1.5ml/min,待吸附完成后,用5%乙醇洗脱2BV,除杂流速分别为0.75ml/min,洗脱剂为80%乙醇,洗脱体积为5BV,洗脱流速为1ml/min,收集80%乙醇洗脱液,减压干燥即得。检测结果为:80%洗脱物浸膏重2.65kg,80%洗脱物鞣质含量为57.2%,转移率为68.35%。
对比例:
CN102327314A的实施例1-5,所得产物中鞣质含量和转移率如下:
实施例1 | 实施例2 | 实施例3 | 实施例4 | 实施例5 | |
鞣质转移率(%) | 46.2% | 38.5% | 49.2% | 40.8% | 43.4% |
通过与对比例进行比较,该方法简便,鞣质含量达到56%以上,转移率达到 65%以上,转移率有了显著的提高,而且放大工艺(如实施例11-13)实验结果也表明本发明的制备工艺稳定可行,质量可控,对环境污染少,适合于工业化生产需要。
Claims (9)
1.一种余甘子鞣质部位的富集方法,包含如下步骤:
(1)将余甘子鞣质提取液浓缩至浓度相当于0.1-0.3g生药/ml的药液,离心或过滤,得上清液;
(2)将步骤(1)所得上清液经大孔吸附树脂进行动态吸附,再用乙醇水梯度洗脱;
(3)将洗脱液减压干燥。
2.如权利要求1所述的方法,其特征在于,所述余甘子提取液的制备方法为:
将余甘子药材在40-60℃温浸提取,采用溶剂为50%-70%乙醇。
3.如权利要求1所述的方法,其特征在于,所述余甘子提取液的制备方法为:将余甘子药材在45-55℃温浸提取,采用溶剂为55%-65%乙醇。
4.如权利要求2所述的方法,其特征在于,
所用药材的粒度为5-20目,优选为5-10目;
和/或,所述提取溶剂乙醇用量为药材的6-12倍量(w/w);
和/或,所述提取次数为1-4次;
和/或,所述提取时间为6-12h。
5.如权利要求3所述的方法,其特征在于,
所用药材的粒度为5-20目,优选为5-10目;
和/或,所述提取溶剂乙醇用量为药材的6-12倍量(w/w);
和/或,所述提取次数为1-4次;
和/或,所述提取时间为6-12h。
6.如权利要求1所述的方法,其特征在于,
所述步骤(2)的大孔吸附树脂动态吸附流速为0.5-2ml/min;
和/或,所述步骤(2)使用的大孔吸附树脂为中等极性的苯乙烯型大孔吸附树脂,如HPD-400型;
和/或,所述步骤(2)树脂柱径高比1:5-1:9。
7.如权利要求1所述的方法,其特征在于,所述步骤(2)上清液按生药量与树脂的体积比为1:4-1:6上样。
8.如权利要求1所述的方法,其特征在于,所述洗脱步骤为:
(1)用5%-20%乙醇洗脱除杂;
(2)用60%-80%乙醇洗脱,得目标洗脱液。
9.如权利要求12所述的方法,其特征在于,
所述步骤(1)的洗脱流速为0.5-2ml/min;
和/或,所述步骤(1)的洗脱体积为1-4BV;
和/或,所述步骤(2)的洗脱流速为0.5-3ml/min;
和/或,所述步骤(2)的洗脱体积为4-6BV。
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