CN109706239A - 一种miR-1976在防治细菌性阴道病中的应用 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种miR‑1976在防治细菌性阴道病中的应用,包括以下三种应用方式:应用方式一:miR‑1976应用于老年女性的阴道黏膜组织中,为阴道炎的防治提供新靶标;应用方式二:miR‑1976应用于小鼠阴道内,再接种大肠埃希菌;应用方式三:miR‑1976应用于小鼠阴道内,再接种金黄色葡萄球菌。本发明将miR‑1976加入含有促进miR‑1976表达量的有效成分的药物中,制备成新的药物,为防治细菌性阴道病的药物提供新靶点,具有防御阴道黏膜感染、细菌性阴道病中致病性大肠埃希菌和金黄色葡萄球菌感染的功能。
Description
技术领域
本发明涉及miR-1976在防治细菌性阴道病中的应用领域,特别涉及一种miR-1976在防治细菌性阴道病中的应用。
背景技术
细菌性阴道病是妇女育龄期最常见的阴道感染性疾病之一,导致阴道炎症外,还可引起其他诸多不良结局,如不孕不育和流产、子宫内膜炎、盘腔炎等,其发病率居阴道炎症之首,是一种严重威胁女性生殖健康的疾病;目前常用于治疗阴道病的药物有环丙沙星、氟嗪酸、头孢菌素等,但使用一段时间停药后,各种细菌迅速滋生,不能防御细菌性阴道病中致病细菌感染,并且不能防御细菌性阴道病中致病性大肠埃希菌和金黄色葡萄球菌的感染。
女性阴道内寄生着多种微生物群,菌群之间相互制约,相互依赖,共同维持阴道内微生态平衡。健康育龄女性阴道分泌物中厌氧菌与需氧菌的比例约为5:1,高度有序地定植在阴道黏膜上皮和分布于阴道分泌液之中。一旦阴道的微生态平衡被破坏,失调的阴道菌群可引起多种疾病,下生殖道感染是生育年龄妇女常见的感染性疾病,可导致输卵管炎、输卵管积水、子宫粘连、盆腔粘连、盆腔炎、继发不孕等不良后果。通过对临床患者阴道分泌物的微生物检测,发现下生殖道感染患者多伴有阴道菌群的紊乱,常并发细菌性阴道病,表现为乳杆菌受抑制而厌氧及需氧致病菌生长过盛。其中主要的致病菌包括加德纳菌、白色念珠菌、大肠埃希菌、粪肠球菌、金黄色葡萄球菌等。
从宏观上看,阴道感染是阴道黏膜防御与病原体入侵之间相互拮抗、相互适应的结局,最关键第一步是病原体定植于黏膜表面:黏膜上皮细胞的迅速脱落(剥离)是黏膜保护机体免受感染的主要防御机制;大多数致病病原体可通过改变黏膜上皮细胞的黏着能力,阻断细胞的迁移与脱落,从而定植于黏膜、破坏其防御。已有研究发现TGF-β、IL-6、IL-7、整合素等分子可能与这一过程的调控相关。
近年来,一类在进化上高度保守的非编码小分子单链RNA(microRNA,miRNA)的作用愈发引人关注,在哺乳动物基因组中,30%以上基因的mRNA都受到miRNA的调节,miRNA影响着几乎所有的信号通路。对miRNA在黏膜感染与防御中的功能与机制研究也正在兴起,如口腔黏膜感染与免疫;小肠黏膜感染与免疫,提示miRNA在黏膜感染与防御中具有重要作用。然而,目前关于miRNA与阴道黏膜感染及防御的研究尚未见报道,因此积极寻找阴道黏膜感染与防御相关的miRNA并开发基于其功能与机制的药物是潮流所趋。
因此,发明一种miR-1976在防治细菌性阴道病中的应用来解决上述问题很有必要。
发明内容
本发明的目的在于提供一种miR-1976在防治细菌性阴道病中的应用,通过利用miR-1976差异低表达于阴道炎患者阴道黏膜组织,将miR-1976加入含有促进miR-1976表达量的有效成分的药物中,制备成防治细菌性阴道病的药物,此药物以miR-1976为靶点,为防治细菌性阴道病的药物提供新靶点,miR-1976具有防御细菌性阴道病中致病性大肠埃希菌和金黄色葡萄球菌感染的功能,miR-1976参与了阴道黏膜的感染与防御功能,有助于为阴道炎的防治提供新靶标,以解决上述背景技术中提出的问题。
为实现上述目的,本发明提供如下技术方案:一种miR-1976在防治细菌性阴道病中的应用,包括以下三种应用方式:
应用方式一
步骤一:采集阴道黏膜组织,采集由于子宫脱垂进行阴道成形术的老年女性的阴道黏膜组织;
步骤二:检测阴道黏膜组织,对步骤一中采集的老年女性的阴道黏膜组织进行检测,将老年健康女性和患有细菌性阴道炎的老年女性的阴道黏膜组织分开,并利用微流体芯片技术,检测老年健康女性与细菌性阴道炎女性阴道黏膜组织的miRNA表达谱,获得了诸多差异表达miRNA;
步骤三:miRNA表达谱分析,研究步骤二中得到的miRNA表达谱,其中差异高表达5倍以上的miRNA有9条,差异低表达5倍以上有8条,首批选择差异倍数较大,并且取组内差异较小的10个miRNA进行RealTimePCR验证;其中,miR-1976在阴道炎女性阴道黏膜组织中表达显著低于健康女性组,芯片数据中差异低表达4.28倍,RealTimePCR结果显示差异倍数达6.3倍,并且,miR-1976在组内各病例阴道黏膜组织中的表达差异较小,呈现较好的均一性;结果表明miR-1976参与了阴道黏膜的感染与防御功能,有助于为阴道炎的防治提供新靶标;
步骤四:将miR-1976加入含有促进miR-1976表达量的有效成分的药物中,制备成防治细菌性阴道病的药物,此药物以miR-1976为靶点,为防治细菌性阴道病的药物提供新靶点。
应用方式二
步骤一:购买SPF级别6-8周龄雌性BALB/c小鼠,每天保持12小时明暗环境,温度控制在25℃,食物与水随机喂养;
步骤二:在感染阴道前9天和感染前2天皮下注射50μg雌二醇(溶于100μL过滤无菌的芝麻油)预处理,用微量加样器取20μL大肠埃希菌接种小鼠阴道内,插入深度约1-1.5cm,注入后使菌液贮留约2小时,每日一次;
步骤三:7天后,取小鼠阴道分泌物做镜检和生化病理检查,结果显示,接种大肠埃希菌后,小鼠的外阴肿胀、分泌物增多;解剖图显示,接种大肠埃希菌后的小鼠子宫、卵巢、输卵管、阴道肿胀、充血;HE染色显示,接种大肠埃希菌后的小鼠阴道组织间质增厚疏松、甚至发生断裂,炎症症状明显,说明小鼠阴道感染大肠埃希菌致细菌性阴道病模型建立成功;
步骤四:将过表达miR-1976的腺病毒颗粒三点注射入SPF级别6-8周龄雌性BALB/c小鼠阴道,再进行大肠埃希菌接种,大肠埃希菌中有效菌种含量为109CFU/mL,与未注射过表达miR-1976腺病毒颗粒的感染小鼠进行比较,观察miR-1976过表达对小鼠感染大肠埃希菌致病率是否发生变化,结果显示,小鼠阴道感染大肠埃希菌后第4、7、14天炎症表现逐步加重,以第14天最重,第21天炎症表现减轻,而注射过表达miR-1976腺病毒颗粒的小鼠,其阴道炎症表现较轻。
应用方式三
步骤一:购买SPF级别6-8周龄雌性BALB/c小鼠,每天保持12小时明暗环境,温度控制在25℃,食物与水随机喂养;
步骤二:在感染阴道前9天和感染前2天皮下注射50μg雌二醇(溶于100μL过滤无菌的芝麻油)预处理,用微量加样器取20μL金黄色葡萄球菌接种小鼠阴道内,插入深度约1-1.5cm,注入后使菌液贮留约2小时,每日一次;
步骤三:7天后,取小鼠阴道分泌物做镜检和生化病理检查,结果显示,接种金黄色葡萄球菌后,小鼠的外阴肿胀、分泌物增多;解剖图显示,接种金黄色葡萄球菌后的小鼠子宫、卵巢、输卵管、阴道肿胀、充血;HE染色显示,接种金黄色葡萄球菌后的小鼠阴道组织间质增厚疏松、甚至发生断裂,炎症症状明显。说明小鼠阴道感染金黄色葡萄球菌致细菌性阴道病模型建立成功;
步骤四:将过表达miR-1976的腺病毒颗粒三点注射入SPF级别6-8周龄雌性BALB/c小鼠阴道,再进行金黄色葡萄球菌接种,与未注射过表达miR-1976腺病毒颗粒的感染小鼠进行比较,观察miR-1976过表达对小鼠感染金黄色葡萄球菌致病率是否发生变化,结果显示,小鼠阴道感染金黄色葡萄球菌后第4、7、14天炎症表现逐步加重,以第14天最重,第21天炎症表现减轻,而注射过表达miR-1976腺病毒颗粒的小鼠,其阴道炎症表现较轻。
优选的,所述步骤一中采集的由于子宫脱垂进行阴道成形术的老年女性包括健康老年女性和患有细菌性阴道炎的老年女性。
优选的,所述应用方式一、二和三中用到的miR-1976前体序列为AGCAAGTCACCTGACCTCTCTGGGCCTTAGCTTCCTCCTGAGTGTCATGGGGGTGATGCCTTCTGGCCTCTGGGCACGGGGGTTGGGTGTGCAAAGGGTGGCAGCAAGGAAGGCAGGGGTCCTAAGGTGTGTCCTCCTGCCCTCCTTGCTGTAGACTTTGGCCTGAGCAAAGAGGCCATTGACCACGAGAAGAAGGCCTATTCTTTCTGCGGGACAGTGGAGTACATGGCCCCTGAGGTCGTCAACCGCCAGTTTTTT,miR-1976成熟序列为CCTCCTGCCCTCCTTGCTGT。
本发明的技术效果和优点:
本发明利用miR-1976差异低表达于阴道炎患者阴道黏膜组织,将miR-1976加入含有促进miR-1976表达量的有效成分的药物中,制备成防治细菌性阴道病的药物,此药物以miR-1976为靶点,为防治细菌性阴道病的药物提供新靶点,miR-1976具有防御细菌性阴道病中致病性大肠埃希菌和金黄色葡萄球菌感染的功能,miR-1976参与了阴道黏膜的感染与防御功能,有助于为阴道炎的防治提供新靶标。
附图说明
图1为本发明的老年健康女性与细菌性阴道炎女性阴道黏膜组织差异miRNA的表达验证结果图。
图2为本发明的动物实验验证miR-1976在阴道黏膜感染大肠埃希菌中的防御功能。
图3为本发明的动物实验验证miR-1976在阴道黏膜感染金黄色葡萄球菌中的防御功能。
具体实施方式
下面将结合本发明实施例中的附图,对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述,显然,所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例,而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例,本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例,都属于本发明保护的范围。
实施例1:
本发明提供了一种miR-1976在防治细菌性阴道病中的应用,包括以下应用方式:
应用方式一
步骤一:采集阴道黏膜组织,采集由于子宫脱垂进行阴道成形术的老年女性的阴道黏膜组织;
步骤二:检测阴道黏膜组织,对步骤一中采集的老年女性的阴道黏膜组织进行检测,将老年健康女性和患有细菌性阴道炎的老年女性的阴道黏膜组织分开,并利用微流体芯片技术,检测老年健康女性与细菌性阴道炎女性阴道黏膜组织的miRNA表达谱,获得了诸多差异表达miRNA;
步骤三:miRNA表达谱分析,研究步骤二中得到的miRNA表达谱,其中差异高表达5倍以上的miRNA有9条,差异低表达5倍以上有8条,首批选择差异倍数较大,并且取组内差异较小的10个miRNA进行RealTimePCR验证;其中,miR-1976在阴道炎女性阴道黏膜组织中表达显著低于健康女性组,芯片数据中差异低表达4.28倍,RealTimePCR结果显示差异倍数达6.3倍,并且,miR-1976在组内各病例阴道黏膜组织中的表达差异较小,呈现较好的均一性;结果表明miR-1976参与了阴道黏膜的感染与防御功能,有助于为阴道炎的防治提供新靶标;
步骤四:将miR-1976加入含有促进miR-1976表达量的有效成分的药物中,制备成防治细菌性阴道病的药物,此药物以miR-1976为靶点,为防治细菌性阴道病的药物提供新靶点,所述miR-1976前体序列为AGCAAGTCACCTGACCTCTCTGGGCCTTAGCTTCCTCCTGAGTGTCATGGGGGTGATGCCTTCTGGCCTCTGGGCACGGGGGTTGGGTGTGCAAAGGGTGGCAGCAAGGAAGGCAGGGGTCCTAAGGTGTGTCCTCCTGCCCTCCTTGCTGTAGACTTTGGCCTGAGCAAAGAGGCCATTGACCACGAGAAGAAGGCCTATTCTTTCTGCGGGACAGTGGAGTACATGGCCCCTGAGGTCGTCAACCGCCAGTTTTTT,miR-1976成熟序列为CCTCCTGCCCTCCTTGCTGT。
说明书附图1中,Y轴代表芯片数据中miRNA差异倍数,X轴代表步骤三中10个miRNA,图中可以明显看出miR-1976在阴道炎女性阴道黏膜组织中表达显著低于健康女性组,芯片数据中差异低表达4.28倍,RealTimePCR结果显示差异倍数达6.3倍,并且,miR-1976在组内各病例阴道黏膜组织中的表达差异较小,呈现较好的均一性。
实施例2:
本发明提供了一种miR-1976在防治细菌性阴道病中的应用,包括以下应用方式:
应用方式二
步骤一:购买SPF级别6-8周龄雌性BALB/c小鼠,每天保持12小时明暗环境,温度控制在25℃,食物与水随机喂养;
步骤二:在感染阴道前9天和感染前2天皮下注射50μg雌二醇(溶于100μL过滤无菌的芝麻油)预处理,用微量加样器取20μL大肠埃希菌接种小鼠阴道内,插入深度约1-1.5cm,注入后使菌液贮留约2小时,每日一次;
步骤三:7天后,取小鼠阴道分泌物做镜检和生化病理检查,结果显示,接种大肠埃希菌后,小鼠的外阴肿胀、分泌物增多;解剖图显示,接种大肠埃希菌后的小鼠子宫、卵巢、输卵管、阴道肿胀、充血;HE染色显示,接种大肠埃希菌后的小鼠阴道组织间质增厚疏松、甚至发生断裂,炎症症状明显,说明小鼠阴道感染大肠埃希菌致细菌性阴道病模型建立成功;
步骤四:将过表达miR-1976的腺病毒颗粒三点注射入SPF级别6-8周龄雌性BALB/c小鼠阴道,再进行大肠埃希菌接种,大肠埃希菌中有效菌种含量为109CFU/mL,与未注射过表达miR-1976腺病毒颗粒的感染小鼠进行比较,观察miR-1976过表达对小鼠感染大肠埃希菌致病率是否发生变化,结果显示,小鼠阴道感染大肠埃希菌后第4、7、14天炎症表现逐步加重,以第14天最重,第21天炎症表现减轻,而注射过表达miR-1976腺病毒颗粒的小鼠,其阴道炎症表现较轻,所述miR-1976前体序列为AGCAAGTCACCTGACCTCTCTGGGCCTTAGCTTCCTCCTGAGTGTCATGGGGGTGATGCCTTCTGGCCTCTGGGCACGGGGGTTGGGTGTGCAAAGGGTGGCAGCAAGGAAGGCAGGGGTCCTAAGGTGTGTCCTCCTGCCCTCCTTGCTGTAGACTTTGGCCTGAGCAAAGAGGCCATTGACCACGAGAAGAAGGCCTATTCTTTCTGCGGGACAGTGGAGTACATGGCCCCTGAGGTCGTCAACCGCCAGTTTTTT,miR-1976成熟序列为CCTCCTGCCCTCCTTGCTGT,具体见说明书附图2。
说明书附图2中,图2A为小鼠外观图,图2A1为对照组小鼠外观图,图2A2为接种大肠埃希菌组小鼠外观图,图2A3为接种大肠埃希菌后注射过表达miR-1976腺病毒颗粒组小鼠外观图,图2B为小鼠子宫、卵巢、阴道解剖图,图2B1为对照组小鼠子宫、卵巢、阴道解剖图,图2B2为接种大肠埃希菌组小鼠子宫、卵巢、阴道解剖图,图2B3为接种大肠埃希菌后注射过表达miR-1976腺病毒颗粒组小鼠子宫、卵巢、阴道解剖图,图2C为小鼠阴道组织HE染色图,图2C1为对照组小鼠阴道组织HE染色图,图2C2为接种大肠埃希菌组小鼠阴道组织HE染色图,图2C3为接种大肠埃希菌后注射过表达miR-1976腺病毒颗粒组小鼠阴道组织HE染色图。
实施例3:
本发明提供了一种miR-1976在防治细菌性阴道病中的应用,包括以下应用方式:
应用方式三
步骤一:购买SPF级别6-8周龄雌性BALB/c小鼠,每天保持12小时明暗环境,温度控制在25℃,食物与水随机喂养;
步骤二:在感染阴道前9天和感染前2天皮下注射50μg雌二醇(溶于100μL过滤无菌的芝麻油)预处理,用微量加样器取20μL金黄色葡萄球菌接种小鼠阴道内,插入深度约1-1.5cm,注入后使菌液贮留约2小时,每日一次;
步骤三:7天后,取小鼠阴道分泌物做镜检和生化病理检查,结果显示,接种金黄色葡萄球菌后,小鼠的外阴肿胀、分泌物增多;解剖图显示,接种金黄色葡萄球菌后的小鼠子宫、卵巢、输卵管、阴道肿胀、充血;HE染色显示,接种金黄色葡萄球菌后的小鼠阴道组织间质增厚疏松、甚至发生断裂,炎症症状明显。说明小鼠阴道感染金黄色葡萄球菌致细菌性阴道病模型建立成功;
步骤四:将过表达miR-1976的腺病毒颗粒三点注射入SPF级别6-8周龄雌性BALB/c小鼠阴道,再进行金黄色葡萄球菌接种,金黄色葡萄球菌中有效菌种含量为109CFU/mL,与未注射过表达miR-1976腺病毒颗粒的感染小鼠进行比较,观察miR-1976过表达对小鼠感染金黄色葡萄球菌致病率是否发生变化,结果显示,小鼠阴道感染金黄色葡萄球菌后第4、7、14天炎症表现逐步加重,以第14天最重,第21天炎症表现减轻,而注射过表达miR-1976腺病毒颗粒的小鼠,其阴道炎症表现较轻,所述miR-1976前体序列为AGCAAGTCACCTGACCTCTCTGGGCCTTAGCTTCCTCCTGAGTGTCATGGGGGTGATGCCTTCTGGCCTCTGGGCACGGGGGTTGGGTGTGCAAAGGGTGGCAGCAAGGAAGGCAGGGGTCCTAAGGTGTGTCCTCCTGCCCTCCTTGCTGTAGACTTTGGCCTGAGCAAAGAGGCCATTGACCACGAGAAGAAGGCCTATTCTTTCTGCGGGACAGTGGAGTACATGGCCCCTGAGGTCGTCAACCGCCAGTTTTTT,miR-1976成熟序列为CCTCCTGCCCTCCTTGCTGT,具体见说明书附图3。
说明书附图3中,图3A为小鼠外观图,图3A1为对照组小鼠外观图,图3A2为接种金黄色葡萄球菌组小鼠外观图,图3A3为接种金黄色葡萄球菌后注射过表达miR-1976腺病毒颗粒组小鼠外观图,图3B为小鼠子宫、卵巢、阴道解剖图,图3B1为对照组小鼠子宫、卵巢、阴道解剖图,图3B2为接种金黄色葡萄球菌组小鼠子宫、卵巢、阴道解剖图,图3B3为接种金黄色葡萄球菌后注射过表达miR-1976腺病毒颗粒组小鼠子宫、卵巢、阴道解剖图,图3C为小鼠阴道组织HE染色图,图3C1为对照组小鼠阴道组织HE染色图,图3C2为接种金黄色葡萄球菌组小鼠阴道组织HE染色图,图3C3为接种金黄色葡萄球菌后注射过表达miR-1976腺病毒颗粒组小鼠阴道组织HE染色图。
最后应说明的是:以上所述仅为本发明的优选实施例而已,并不用于限制本发明,尽管参照前述实施例对本发明进行了详细的说明,对于本领域的技术人员来说,其依然可以对前述各实施例所记载的技术方案进行修改,或者对其中部分技术特征进行等同替换,凡在本发明的精神和原则之内,所作的任何修改、等同替换、改进等,均应包含在本发明的保护范围之内。
Claims (6)
1.一种miR-1976在防治细菌性阴道病中的应用,其特征在于:包括以下三种应用方式:
应用方式一
步骤一:采集阴道黏膜组织,采集由于子宫脱垂进行阴道成形术的老年女性的阴道黏膜组织;
步骤二:检测阴道黏膜组织,对步骤一中采集的老年女性的阴道黏膜组织进行检测,将老年健康女性和患有细菌性阴道炎的老年女性的阴道黏膜组织分开,并利用微流体芯片技术,检测老年健康女性与细菌性阴道炎女性阴道黏膜组织的miRNA表达谱,获得了诸多差异表达miRNA;
步骤三:miRNA表达谱分析,研究步骤二中得到的miRNA表达谱,其中差异高表达5倍以上的miRNA有9条,差异低表达5倍以上有8条,首批选择差异倍数较大,并且取组内差异较小的10个miRNA进行RealTimePCR验证;其中,miR-1976在阴道炎女性阴道黏膜组织中表达显著低于健康女性组,芯片数据中差异低表达4.28倍,RealTimePCR结果显示差异倍数达6.3倍,并且,miR-1976在组内各病例阴道黏膜组织中的表达差异较小,呈现较好的均一性;结果表明miR-1976参与了阴道黏膜的感染与防御功能,有助于为阴道炎的防治提供新靶标;
步骤四:将miR-1976加入含有促进miR-1976表达量的有效成分的药物中,制备成防治细菌性阴道病的药物,此药物以miR-1976为靶点,为防治细菌性阴道病的药物提供新靶点。
2.应用方式二
步骤一:购买SPF级别6-8周龄雌性BALB/c小鼠,每天保持12小时明暗环境,温度控制在25℃,食物与水随机喂养;
步骤二:在感染阴道前9天和感染前2天皮下注射50μg雌二醇(溶于100μL过滤无菌的芝麻油)预处理,用微量加样器取20μL大肠埃希菌接种小鼠阴道内,插入深度约1-1.5cm,注入后使菌液贮留约2小时,每日一次;
步骤三:7天后,取小鼠阴道分泌物做镜检和生化病理检查,结果显示,接种大肠埃希菌后,小鼠的外阴肿胀、分泌物增多;解剖图显示,接种大肠埃希菌后的小鼠子宫、卵巢、输卵管、阴道肿胀、充血;HE染色显示,接种大肠埃希菌后的小鼠阴道组织间质增厚疏松、甚至发生断裂,炎症症状明显,说明小鼠阴道感染大肠埃希菌致细菌性阴道病模型建立成功;
步骤四:将过表达miR-1976的腺病毒颗粒三点注射入SPF级别6-8周龄雌性BALB/c小鼠阴道,再进行大肠埃希菌接种,大肠埃希菌中有效菌种含量为109CFU/mL,与未注射过表达miR-1976腺病毒颗粒的感染小鼠进行比较,观察miR-1976过表达对小鼠感染大肠埃希菌致病率是否发生变化,结果显示,小鼠阴道感染大肠埃希菌后第4、7、14天炎症表现逐步加重,以第14天最重,第21天炎症表现减轻,而注射过表达miR-1976腺病毒颗粒的小鼠,其阴道炎症表现较轻。
3.应用方式三
步骤一:购买SPF级别6-8周龄雌性BALB/c小鼠,每天保持12小时明暗环境,温度控制在25℃,食物与水随机喂养;
步骤二:在感染阴道前9天和感染前2天皮下注射50μg雌二醇(溶于100μL过滤无菌的芝麻油)预处理,用微量加样器取20μL金黄色葡萄球菌接种小鼠阴道内,插入深度约1-1.5cm,注入后使菌液贮留约2小时,每日一次;
步骤三:7天后,取小鼠阴道分泌物做镜检和生化病理检查,结果显示,接种金黄色葡萄球菌后,小鼠的外阴肿胀、分泌物增多;解剖图显示,接种金黄色葡萄球菌后的小鼠子宫、卵巢、输卵管、阴道肿胀、充血;HE染色显示,接种金黄色葡萄球菌后的小鼠阴道组织间质增厚疏松、甚至发生断裂,炎症症状明显。
4.说明小鼠阴道感染金黄色葡萄球菌致细菌性阴道病模型建立成功;
步骤四:将过表达miR-1976的腺病毒颗粒三点注射入SPF级别6-8周龄雌性BALB/c小鼠阴道,再进行金黄色葡萄球菌接种,金黄色葡萄球菌中有效菌种含量为109CFU/mL,与未注射过表达miR-1976腺病毒颗粒的感染小鼠进行比较,观察miR-1976过表达对小鼠感染金黄色葡萄球菌致病率是否发生变化,结果显示,小鼠阴道感染金黄色葡萄球菌后第4、7、14天炎症表现逐步加重,以第14天最重,第21天炎症表现减轻,而注射过表达miR-1976腺病毒颗粒的小鼠,其阴道炎症表现较轻。
5.根据权利要求1所述的一种miR-1976在防治细菌性阴道病中的应用,其特征在于:所述步骤一中采集的由于子宫脱垂进行阴道成形术的老年女性包括健康老年女性和患有细菌性阴道炎的老年女性。
6.根据权利要求1所述的一种miR-1976在防治细菌性阴道病中的应用,其特征在于:所述应用方式一、二和三中用到的miR-1976前体序列为AGCAAGTCACCTGACCTCTCTGGGCCTTAGCTTCCTCCTGAGTGTCATGGGGGTGATGCCTTCTGGCCTCTGGGCACGGGGGTTGGGTGTGCAAAGGGTGGCAGCAAGGAAGGCAGGGGTCCTAAGGTGTGTCCTCCTGCCCTCCTTGCTGTAGACTTTGGCCTGAGCAAAGAGGCCATTGACCACGAGAAGAAGGCCTATTCTTTCTGCGGGACAGTGGAGTACATGGCCCCTGAGGTCGTCAACCGCCAGTTTTTT,miR-1976成熟序列为CCTCCTGCCCTCCTTGCTGT。
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