CN113855680B - 肉桂醛联合头孢曲松钠的应用 - Google Patents
肉桂醛联合头孢曲松钠的应用 Download PDFInfo
- Publication number
- CN113855680B CN113855680B CN202111024114.6A CN202111024114A CN113855680B CN 113855680 B CN113855680 B CN 113855680B CN 202111024114 A CN202111024114 A CN 202111024114A CN 113855680 B CN113855680 B CN 113855680B
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- cinnamaldehyde
- ceftriaxone sodium
- drug
- resistant
- bacterial
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Active
Links
- 229960000479 ceftriaxone sodium Drugs 0.000 title claims abstract description 68
- FDRNWTJTHBSPMW-GNXCPKRQSA-L disodium;(6r,7r)-7-[[(2e)-2-(2-amino-1,3-thiazol-4-yl)-2-methoxyiminoacetyl]amino]-3-[(2-methyl-6-oxido-5-oxo-1,2,4-triazin-3-yl)sulfanylmethyl]-8-oxo-5-thia-1-azabicyclo[4.2.0]oct-2-ene-2-carboxylate Chemical compound [Na+].[Na+].S([C@@H]1[C@@H](C(N1C=1C([O-])=O)=O)NC(=O)/C(=N/OC)C=2N=C(N)SC=2)CC=1CSC1=NC(=O)C([O-])=NN1C FDRNWTJTHBSPMW-GNXCPKRQSA-L 0.000 title claims abstract description 67
- KJPRLNWUNMBNBZ-QPJJXVBHSA-N (E)-cinnamaldehyde Chemical compound O=C\C=C\C1=CC=CC=C1 KJPRLNWUNMBNBZ-QPJJXVBHSA-N 0.000 title claims abstract description 65
- 229940117916 cinnamic aldehyde Drugs 0.000 title claims abstract description 65
- KJPRLNWUNMBNBZ-UHFFFAOYSA-N cinnamic aldehyde Natural products O=CC=CC1=CC=CC=C1 KJPRLNWUNMBNBZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 title claims abstract description 65
- 239000003814 drug Substances 0.000 claims abstract description 58
- 229940079593 drug Drugs 0.000 claims abstract description 43
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 claims abstract description 27
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 claims abstract description 9
- 241001354013 Salmonella enterica subsp. enterica serovar Enteritidis Species 0.000 claims abstract description 8
- 241000588626 Acinetobacter baumannii Species 0.000 claims description 5
- 241000588747 Klebsiella pneumoniae Species 0.000 claims description 5
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 abstract description 45
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 abstract description 13
- 239000012528 membrane Substances 0.000 abstract description 10
- 230000000844 anti-bacterial effect Effects 0.000 abstract description 9
- 230000002195 synergetic effect Effects 0.000 abstract description 7
- 230000014509 gene expression Effects 0.000 abstract description 6
- 230000000968 intestinal effect Effects 0.000 abstract description 6
- 230000002503 metabolic effect Effects 0.000 abstract description 4
- 238000011160 research Methods 0.000 abstract description 4
- 230000004083 survival effect Effects 0.000 abstract description 4
- 208000035143 Bacterial infection Diseases 0.000 abstract description 3
- 206010061218 Inflammation Diseases 0.000 abstract description 3
- 210000000683 abdominal cavity Anatomy 0.000 abstract description 3
- 208000022362 bacterial infectious disease Diseases 0.000 abstract description 3
- 230000004054 inflammatory process Effects 0.000 abstract description 3
- 230000035699 permeability Effects 0.000 abstract description 3
- 230000007154 intracellular accumulation Effects 0.000 abstract 1
- 241000607142 Salmonella Species 0.000 description 29
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 20
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 9
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 8
- 238000009825 accumulation Methods 0.000 description 7
- 239000003242 anti bacterial agent Substances 0.000 description 7
- 229940088710 antibiotic agent Drugs 0.000 description 7
- 229960004755 ceftriaxone Drugs 0.000 description 7
- VAAUVRVFOQPIGI-SPQHTLEESA-N ceftriaxone Chemical compound S([C@@H]1[C@@H](C(N1C=1C(O)=O)=O)NC(=O)\C(=N/OC)C=2N=C(N)SC=2)CC=1CSC1=NC(=O)C(=O)NN1C VAAUVRVFOQPIGI-SPQHTLEESA-N 0.000 description 7
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 7
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 7
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 7
- 206010059866 Drug resistance Diseases 0.000 description 6
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 6
- 238000012258 culturing Methods 0.000 description 6
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 5
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 5
- 108091032973 (ribonucleotides)n+m Proteins 0.000 description 4
- 241000588724 Escherichia coli Species 0.000 description 4
- 230000003115 biocidal effect Effects 0.000 description 4
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 4
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 4
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 4
- 238000000034 method Methods 0.000 description 4
- OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N Methanol Chemical compound OC OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 206010039438 Salmonella Infections Diseases 0.000 description 3
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 3
- 238000010201 enrichment analysis Methods 0.000 description 3
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 description 3
- 230000028161 membrane depolarization Effects 0.000 description 3
- 230000004060 metabolic process Effects 0.000 description 3
- 239000008188 pellet Substances 0.000 description 3
- 239000013641 positive control Substances 0.000 description 3
- 230000001105 regulatory effect Effects 0.000 description 3
- 206010039447 salmonellosis Diseases 0.000 description 3
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 3
- 239000012224 working solution Substances 0.000 description 3
- IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N Atomic nitrogen Chemical compound N#N IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 108090000204 Dipeptidase 1 Proteins 0.000 description 2
- GLZPCOQZEFWAFX-UHFFFAOYSA-N Geraniol Chemical compound CC(C)=CCCC(C)=CCO GLZPCOQZEFWAFX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 241001052560 Thallis Species 0.000 description 2
- 239000002671 adjuvant Substances 0.000 description 2
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 2
- 102000006635 beta-lactamase Human genes 0.000 description 2
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 2
- 230000015556 catabolic process Effects 0.000 description 2
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 2
- 238000011284 combination treatment Methods 0.000 description 2
- 238000006731 degradation reaction Methods 0.000 description 2
- 238000007865 diluting Methods 0.000 description 2
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 2
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 2
- 239000000975 dye Substances 0.000 description 2
- HHLFWLYXYJOTON-UHFFFAOYSA-N glyoxylic acid Chemical compound OC(=O)C=O HHLFWLYXYJOTON-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 2
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 description 2
- 238000010255 intramuscular injection Methods 0.000 description 2
- 239000007927 intramuscular injection Substances 0.000 description 2
- 239000013642 negative control Substances 0.000 description 2
- 230000037361 pathway Effects 0.000 description 2
- 239000000047 product Substances 0.000 description 2
- 230000035755 proliferation Effects 0.000 description 2
- 230000002829 reductive effect Effects 0.000 description 2
- 230000002441 reversible effect Effects 0.000 description 2
- 210000001082 somatic cell Anatomy 0.000 description 2
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 2
- 238000011282 treatment Methods 0.000 description 2
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Chemical compound O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 108020004465 16S ribosomal RNA Proteins 0.000 description 1
- JKMHFZQWWAIEOD-UHFFFAOYSA-N 2-[4-(2-hydroxyethyl)piperazin-1-yl]ethanesulfonic acid Chemical compound OCC[NH+]1CCN(CCS([O-])(=O)=O)CC1 JKMHFZQWWAIEOD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 206010056519 Abdominal infection Diseases 0.000 description 1
- 229920001817 Agar Polymers 0.000 description 1
- 239000004475 Arginine Substances 0.000 description 1
- OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N Carbon Chemical compound [C] OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229930186147 Cephalosporin Natural products 0.000 description 1
- 208000035473 Communicable disease Diseases 0.000 description 1
- 101150027068 DEGS1 gene Proteins 0.000 description 1
- 102000007260 Deoxyribonuclease I Human genes 0.000 description 1
- 108010008532 Deoxyribonuclease I Proteins 0.000 description 1
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 1
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 1
- GLZPCOQZEFWAFX-YFHOEESVSA-N Geraniol Natural products CC(C)=CCC\C(C)=C/CO GLZPCOQZEFWAFX-YFHOEESVSA-N 0.000 description 1
- 239000005792 Geraniol Substances 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 1
- 239000007995 HEPES buffer Substances 0.000 description 1
- OUYCCCASQSFEME-QMMMGPOBSA-N L-tyrosine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=C(O)C=C1 OUYCCCASQSFEME-QMMMGPOBSA-N 0.000 description 1
- 239000006137 Luria-Bertani broth Substances 0.000 description 1
- 239000004472 Lysine Substances 0.000 description 1
- KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N Lysine Natural products NCCCCC(N)C(O)=O KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- OFOBLEOULBTSOW-UHFFFAOYSA-N Malonic acid Chemical compound OC(=O)CC(O)=O OFOBLEOULBTSOW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 1
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 208000008589 Obesity Diseases 0.000 description 1
- 206010037660 Pyrexia Diseases 0.000 description 1
- 238000010802 RNA extraction kit Methods 0.000 description 1
- 238000011529 RT qPCR Methods 0.000 description 1
- NINIDFKCEFEMDL-UHFFFAOYSA-N Sulfur Chemical compound [S] NINIDFKCEFEMDL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- AXMVYSVVTMKQSL-UHFFFAOYSA-N UNPD142122 Natural products OC1=CC=C(C=CC=O)C=C1O AXMVYSVVTMKQSL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000003187 abdominal effect Effects 0.000 description 1
- 238000002835 absorbance Methods 0.000 description 1
- 230000009471 action Effects 0.000 description 1
- 239000008272 agar Substances 0.000 description 1
- -1 aldehyde organic compound Chemical class 0.000 description 1
- 230000004075 alteration Effects 0.000 description 1
- 230000037354 amino acid metabolism Effects 0.000 description 1
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 1
- 230000008485 antagonism Effects 0.000 description 1
- 230000000845 anti-microbial effect Effects 0.000 description 1
- 239000004599 antimicrobial Substances 0.000 description 1
- ODKSFYDXXFIFQN-UHFFFAOYSA-N arginine Natural products OC(=O)C(N)CCCNC(N)=N ODKSFYDXXFIFQN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000021052 average daily weight gain Nutrition 0.000 description 1
- 230000009286 beneficial effect Effects 0.000 description 1
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 1
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 1
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 1
- 239000007853 buffer solution Substances 0.000 description 1
- 238000010804 cDNA synthesis Methods 0.000 description 1
- 229910052799 carbon Inorganic materials 0.000 description 1
- 210000004534 cecum Anatomy 0.000 description 1
- 210000000170 cell membrane Anatomy 0.000 description 1
- 229940124587 cephalosporin Drugs 0.000 description 1
- 150000001780 cephalosporins Chemical class 0.000 description 1
- 230000008859 change Effects 0.000 description 1
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 1
- 229940126678 chinese medicines Drugs 0.000 description 1
- 239000002299 complementary DNA Substances 0.000 description 1
- 230000009089 cytolysis Effects 0.000 description 1
- 230000034994 death Effects 0.000 description 1
- 230000037213 diet Effects 0.000 description 1
- 235000005911 diet Nutrition 0.000 description 1
- 238000003113 dilution method Methods 0.000 description 1
- 239000000890 drug combination Substances 0.000 description 1
- 230000005284 excitation Effects 0.000 description 1
- 230000004133 fatty acid degradation Effects 0.000 description 1
- JFUIHGAGFMFNRD-UHFFFAOYSA-N fica Chemical compound FC1=CC=C2NC(C(=O)NCCS)=CC2=C1 JFUIHGAGFMFNRD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 210000003495 flagella Anatomy 0.000 description 1
- 239000007850 fluorescent dye Substances 0.000 description 1
- 235000013305 food Nutrition 0.000 description 1
- 229940113087 geraniol Drugs 0.000 description 1
- 239000011521 glass Substances 0.000 description 1
- 239000008103 glucose Substances 0.000 description 1
- 238000004128 high performance liquid chromatography Methods 0.000 description 1
- 230000003301 hydrolyzing effect Effects 0.000 description 1
- 230000001771 impaired effect Effects 0.000 description 1
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 1
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 1
- 230000002147 killing effect Effects 0.000 description 1
- 230000000670 limiting effect Effects 0.000 description 1
- 244000144972 livestock Species 0.000 description 1
- 231100000053 low toxicity Toxicity 0.000 description 1
- 239000006166 lysate Substances 0.000 description 1
- 239000002075 main ingredient Substances 0.000 description 1
- 239000000463 material Substances 0.000 description 1
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 1
- 230000007246 mechanism Effects 0.000 description 1
- 230000037353 metabolic pathway Effects 0.000 description 1
- 239000006994 mh medium Substances 0.000 description 1
- 238000005142 microbroth dilution method Methods 0.000 description 1
- 238000002156 mixing Methods 0.000 description 1
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 1
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 1
- 210000005036 nerve Anatomy 0.000 description 1
- 229910052757 nitrogen Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000020824 obesity Nutrition 0.000 description 1
- 244000052769 pathogen Species 0.000 description 1
- 230000001717 pathogenic effect Effects 0.000 description 1
- 230000000149 penetrating effect Effects 0.000 description 1
- 230000000144 pharmacologic effect Effects 0.000 description 1
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 1
- 230000002265 prevention Effects 0.000 description 1
- 230000005180 public health Effects 0.000 description 1
- 238000011002 quantification Methods 0.000 description 1
- 238000010791 quenching Methods 0.000 description 1
- 238000003753 real-time PCR Methods 0.000 description 1
- 238000010839 reverse transcription Methods 0.000 description 1
- 238000001228 spectrum Methods 0.000 description 1
- 239000008223 sterile water Substances 0.000 description 1
- 229910052717 sulfur Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000011593 sulfur Substances 0.000 description 1
- 229940126680 traditional chinese medicines Drugs 0.000 description 1
- 238000011222 transcriptome analysis Methods 0.000 description 1
- OUYCCCASQSFEME-UHFFFAOYSA-N tyrosine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CC=C(O)C=C1 OUYCCCASQSFEME-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241001148471 unidentified anaerobic bacterium Species 0.000 description 1
- 230000035899 viability Effects 0.000 description 1
- 231100000747 viability assay Toxicity 0.000 description 1
- 238000003026 viability measurement method Methods 0.000 description 1
- 239000000341 volatile oil Substances 0.000 description 1
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 1
- 229940126673 western medicines Drugs 0.000 description 1
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
- A61K31/33—Heterocyclic compounds
- A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
- A61K31/54—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with at least one nitrogen and one sulfur as the ring hetero atoms, e.g. sulthiame
- A61K31/542—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with at least one nitrogen and one sulfur as the ring hetero atoms, e.g. sulthiame ortho- or peri-condensed with heterocyclic ring systems
- A61K31/545—Compounds containing 5-thia-1-azabicyclo [4.2.0] octane ring systems, i.e. compounds containing a ring system of the formula:, e.g. cephalosporins, cefaclor, or cephalexine
- A61K31/546—Compounds containing 5-thia-1-azabicyclo [4.2.0] octane ring systems, i.e. compounds containing a ring system of the formula:, e.g. cephalosporins, cefaclor, or cephalexine containing further heterocyclic rings, e.g. cephalothin
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
- A61K31/11—Aldehydes
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
- A61P31/04—Antibacterial agents
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y02—TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
- Y02A—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE
- Y02A50/00—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE in human health protection, e.g. against extreme weather
- Y02A50/30—Against vector-borne diseases, e.g. mosquito-borne, fly-borne, tick-borne or waterborne diseases whose impact is exacerbated by climate change
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Public Health (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Communicable Diseases (AREA)
- Oncology (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Acyclic And Carbocyclic Compounds In Medicinal Compositions (AREA)
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
Abstract
本发明提供一种肉桂醛联合头孢曲松钠的应用，该应用主要是制备防治耐药细菌感染的药物。肉桂醛还可以作为头孢曲松钠的增效剂制备防治肠炎沙门氏菌感染的药物。本发明的研究发现两者联用可以对耐药性革兰氏阴性耐药细菌具有协同抑菌活性，可以通过损伤细菌膜，增加膜通透性，促进头孢曲松钠细胞内积累，抑制耐药基因表达，诱导细菌进入高度代谢状态并提高小鼠耐药性肠炎沙门氏菌腹腔感染时的存活率，改善肠道炎症，阻止细菌肠道定植，并且还可以降低头孢曲松钠的用量。
Description
技术领域
本发明属于中西药联合应用技术领域，具体地说，涉及肉桂醛联合头孢曲松钠的应用。
背景技术
沙门氏菌(Salmonella)，是动物源疾病和食物源疾病中常见的病菌，能引起多种家禽家畜的传染病，也可引起人类感染，具有重要的公共卫生意义。近年来，由于抗生素的不合理使用及滥用，使得沙门氏菌的耐药性不断扩散，从而带来人用药的安全隐患问题。随着我国对兽用抗生素监管的日益严格，中兽药的研究日益获得重视，同时，中药联合抗生素抑制耐药性细菌来逆转抗生素耐药性的研究越来越多。
肉桂醛(Cinnamaldehyde)是传统中药材桂枝挥发油的主要成分，为烯醛类有机化合物，具有解热镇痛、抗炎、抗菌、抗肿瘤、降糖、抗肥胖和神经保护等多种药理作用，而其良好的抗菌作用在近年来引发了广泛研究。
头孢曲松钠(Ceftriaxone sodium)通常用于治疗严重沙门氏菌病，属于第三代头孢菌素类抗生素，具有抗菌活性强，抗菌谱广的特点，对厌氧菌、革兰阴性菌的灭杀效果强，对多种β-内酰胺酶有更好的水解稳定性，对细胞外膜和组织有较强的穿透力。
然而，目前关于肉桂醛与抗生素联合抗耐药性沙门氏菌，尚未见任何报道和研究。
发明内容
针对现有技术存在的问题，本发明提供肉桂醛联合头孢曲松钠的应用。本发明的技术方案为：
第一方面，本发明提供肉桂醛联合头孢曲松钠在制备防治耐药细菌感染的药物上的应用。
进一步地，所述耐药细菌包括肠炎沙门氏菌、大肠杆菌、肺炎克雷伯菌或鲍曼不动杆菌。
优选地，所述耐药细菌为多重耐药性肠炎沙门氏菌。
第二方面，本发明提供一种复方药物，所述药物中包含肉桂醛和头孢曲松钠。
可选地，所述药物中肉桂醛和头孢曲松钠分别成为独立给药单元。
可选地，所述药物中肉桂醛和头孢曲松钠共同形成组合给药单元。
进一步地，所述独立给药单元中，肉桂醛给药剂量为30～100mg/kg，头孢曲松钠为150～300mg/kg。
优选地，所述独立给药单元中，肉桂醛按照40～60mg/kg给药，头孢曲松钠按照200～250mg/kg给药。
第三方面，肉桂醛作为头孢曲松钠的增效剂在制备防治肠炎沙门氏菌感染的药物上的应用。
本发明的有益效果为：
本发明开发了肉桂醛联合头孢曲松钠的新应用，研究发现两者联用可以对耐药性革兰氏阴性耐药细菌具有协同抑菌活性，可以通过损伤细菌膜，增加膜通透性，促进头孢曲松钠细胞内积累，抑制耐药基因表达，诱导细菌进入高度代谢状态并提高小鼠耐药性肠炎沙门氏菌腹腔感染时的存活率，改善肠道炎症，阻止细菌肠道定植，并且还可以降低头孢曲松钠的用量。此外，肉桂醛具有安全低毒的特点，可以和头孢曲松钠组成复方药物或者作为头孢曲松钠佐剂治疗耐药性沙门氏菌感染。
当然，实施本发明的任一产品并不一定需要同时达到以上所述的所有技术效果。
进一步的，肉桂醛联合头孢曲松钠对临床分离的多株革兰氏阴性耐药细菌抗菌作用显著。
附图说明
此处所说明的附图用来提供对本发明的进一步理解，构成本发明的一部分，本发明的示意性实施例及其说明用于解释本发明，并不构成对本发明的不当限定。在附图中：
图1为头孢曲松钠联合肉桂醛对不同革兰氏阴性耐药菌株的协同抑菌结果，其中，SJ2、3-30、3-65、3-93、11-49均为耐药性沙门氏菌，只不过属于不同临床株，其中SJ2为实施例1和实施例2重点研究的耐药性沙门氏菌；E.coli、Klebsiella pneumoniae、Acinetobacter baumannii分别为大肠杆菌、肺炎克雷伯菌和鲍曼不动杆菌。
图2为不同浓度头孢曲松钠与亚抑菌浓度肉桂醛联合使用时对细菌生长的抑制作用。
图3为单独使用肉桂醛，单独使用头孢曲松钠或两者联合使用时对细菌膜去极化的影响。
图4为不同浓度肉桂醛与亚抑菌浓度头孢曲松钠联合使用后相同数量细菌中死细菌数量变化。
图5为不同浓度肉桂醛与亚抑菌浓度头孢曲松钠联合使用后细菌内头孢曲松钠蓄积定量分析。
图6为单独使用肉桂醛，单独使用头孢曲松钠或两者联合使用时，细菌超广谱β-内酰胺酶耐药基因表达的变化。
图7为联合用药组与单独使用头孢曲松钠相比，上调差异基因的富集分析结果。
图8为联合用药组与单独使用头孢曲松钠相比，下调差异基因的富集分析结果。
图9为单独使用肉桂醛，单独使用头孢曲松钠或者两者同时使用对小鼠耐药性沙门氏菌腹腔感染模型保护率的影响。
图10为肉桂醛与头孢曲松钠联用时对小鼠耐药性沙门氏菌腹腔感染模型肠道定植的影响。
具体实施方式
在本发明的描述中，需要说明的是，实施例中未注明具体条件者，按照常规条件或制造商建议的条件进行。所用试剂或仪器未注明生产厂商者，均为可以通过市售购买获得的常规产品。
下面结合附图和具体的实施例对本发明做进一步详细说明，所述是对本发明的解释而不是限定。
实施例1
肉桂醛联合头孢曲松钠体外抑制耐药性沙门氏菌作用
一、最小抑菌浓度(MIC)测定：通过微量肉汤稀释法分别确定肉桂醛与头孢曲松对耐药性沙门氏菌的MIC。具体操作方法如下：向96孔板中加入肉汤培养基，A-E排第一孔200μL，剩下每孔100μL，向第一列中每一孔分别加入配好的药液(40.96mg/mL)，通过倍比稀释法使药物终质量浓度为1024、512、256、128、64、32、16、8、4、2μg/mL，然后每一孔中加入提前培养的耐药性沙门氏菌的菌液，菌液浓度为10^5CFU/mL。另设置阳性对照组只加入培养基和菌悬液，阴性对照组只加入培养基和药物，空白对照组只加入培养基。分别配制肉桂醛和头孢曲松钠的96孔板，将所有96孔板在37℃培养箱中静置培养24h后，阳性对照组应浑浊，空白对照组和阴性对照组应澄清透明。观察每组实验结果，培养液澄清透明的最小药物浓度即为MIC。
实验结果：肉桂醛对耐药性沙门氏菌的MIC＝256μg/mL，头孢曲松钠对耐药性沙门氏菌的MIC＝4mg/mL。
二、棋盘试验：肉桂醛与头孢曲松钠之间的协同活性，可以通过棋盘格研究测定抑制浓度指数。根据两种抗菌药物的MIC确定药物联合测定的稀释度，选择6个稀释度，根据单药MIC值的测定结果，每种抗菌药物的最高浓度为2MIC。在96孔板的1-6列每孔加入90μL液体培养基MH。在A-F行沿X轴方向(从左至右)每行加入50μL已经倍比稀释好的肉桂醛药液，以同样的方法在1-6列沿Y轴的方向(从上往下)每孔加入已经倍比稀释好的头孢曲松药液，然后每孔加入10μL浓度为10^6CFU/mL的菌液(每孔的菌液终浓度控制为10^5CFU/mL，与抑菌活性测定时细菌的浓度保持一致)。使得每一横排肉桂醛药液的最终浓度依次为MIC、1/2MIC、1/4MIC、1/8MIC、1/16MIC、1/32MIC，每一竖列头孢曲松的最终浓度依次为MIC、1/2MIC、1/4MIC、1/8MIC、1/16MIC、1/32MIC。在96孔板中选3孔每孔只加入100μL液体培养基MH。将孔板置于37℃恒温箱中培养18h，测定两药联合时的FIC值。试验采用FICI法对结果进行评价：
具体指标为：FICI＝FICA+FICB＝CAcomb/MIC Aalone+CBcomb/MICBalone，
FICI值>1为拮抗作用；0.5<FICI值≤1为相加作用；FICI值≤0.5为协同作用。
实验结果：肉桂醛与头孢曲松钠联合应用抗肠炎沙门氏菌时FICI＝0.375＜0.5，为协同作用(SJ2)。其余耐药性沙门氏菌和其余革兰氏阴性耐药菌(3-30、3-65、3-93、11-49、E.coli、Klebsiella pneumoniae、Acinetobacter baumannii)的FICI见图1。FICI均≤0.5，均具有一定协同作用。
三、细菌生长曲线测定：取96孔板，向孔板第一列五个孔中加入50μL用MH培养基稀释好的头孢曲松钠使其质量浓度分别为2048、1024、512、256、128μg/mL，再向每孔中加入用MH培养基稀释好的质量浓度为256μg/ml的肉桂醛50μL，MH培养基90μL和浓度稀释为10^6的菌液10μL。最终96孔板中从第一列到第五列头孢曲松钠的浓度分别为512、256、128、64、32μg/mL，每孔中肉桂醛的浓度为64μg/mL。第六列设置为肉桂醛对照组，加入50μL肉桂醛+140μL MH培养基+10μL菌液，第七列设置为阳性对照组，加入190μLMH培养基+10μL菌液，第八列设置为空白对照组只加入200μL培养基。96孔板在37℃培养箱中培养0、1、2、3、4、5、6、7、8、10、12、14、16、20和24h后用酶标仪测定每个孔600nm波长时的吸光度，以空白对照组调零绘制细菌生长曲线。
实验结果如图2所示，沙门氏菌单独菌液组生长速度较快，3h内几乎没有细菌生长，5h后细菌生长迅速，为对数生长期，此后菌株便一直保持较快的生长速度；相比于菌液对照组，单用亚抑菌浓度的肉桂醛(64μg/mL)，或亚抑菌浓度肉桂醛和亚抑菌浓度头孢曲松钠(32～256μg/mL)联用时，菌株的生长受到了一定的抑制作用，但效果不明显，无法抑制沙门氏菌的增殖。但当亚抑菌浓度的肉桂醛与512μg/mL的头孢曲松钠联用时，沙门氏菌在24小时内都基本没有生长，1/4MIC浓度的肉桂醛与1/8MIC浓度的头孢曲松钠联用时即可抑制沙门氏菌的增殖。
四、膜去极化测定：耐药性沙门氏菌提前过夜培养，取菌液100μL加入装有20mLMH培养基的锥形瓶中，锥形瓶放入37℃摇床培养至OD600nm＝0.5-0.6时取5mL菌液，在3000r/min、4℃条件下离心10min，丢弃上清液收集菌体；用5mM HEPES(含有5mM葡萄糖)的缓冲液洗涤悬浮，再同条件离心一次，去掉上清液收集菌体；用上述缓冲液再次悬浮并稀释调至OD600nm＝0.05；从中取4mL已稀释好的菌液，向其中加入事先配好的4mM DiSC3(5)工作液，使其终浓度为8μmol/L，避光条件下室温震荡1-1.5h使得荧光染料淬灭；遮光条件下加入4MKCl工作液使其终浓度为100mM，并再次室温震荡30min；最终取黑色96孔板，遮光条件下向孔板中加入菌液，不同浓度肉桂醛及头孢曲松，迅速混匀后使用酶标仪jiance，酶标仪设置激发光波长为622nm，发射光波长为670nm，检测时间间隔为3min，检测时长为30min。
实验结果如图3所示：单独使用亚抑菌浓度的肉桂醛(64μg/mL)或头孢曲松钠(1024μg/mL)时，对细菌膜电位的影响不如两药联用时影响显著，表明肉桂醛与头孢曲松钠联用时引起细菌膜去极化和膜损伤。
五、细菌生存力测定：使用LIVE/DEAD细菌生存力试剂盒评估肉桂醛与头孢曲松钠联合诱导的死亡细菌。将过夜培养的耐药性沙门氏菌菌液转入加有不同质量浓度药物的锥形瓶中，放在37℃培养箱中静置过夜培养至对数期，而后测定每个锥形瓶中的OD600nm值，并稀释到相近OD值；取稀释到相近OD值后的菌液2mL在10000r/min条件下离心10min后，用无菌1×PBS洗涤培养物3次，并重悬于1mL的1×PBS中。用微量离心管将1.5μL 1.67M的SYTO9和1.5μL 10mM的PI充分混合，最终体积为1mL的每个样品中加入3μL混合好的染液充分混合，在室温条件下避光孵育15分钟。在载玻片和18mm正方形盖玻片之间捕获5μL染色细菌悬液，于荧光显微镜下观察捕获染色细菌图像。
实验结果如图4所示：单独使用亚抑菌质量浓度头孢曲松钠(1024μg/mL)时，几乎没有被染成红色的死细菌，而随着肉桂醛的加入，死细菌数量逐渐增多且呈浓度依赖性，这证实了两药联用可以增加细菌膜的通透性。
六、抗生素蓄积分析：使用HPLC法检测分析耐药性沙门氏菌中的抗生素蓄积。取1mL提前过夜培养的耐药性沙门氏菌菌液稀释到100mL新鲜的TSB培养基中，在37℃条件下生长至OD600nm＝0.6(10^8CFU)左右；收集细菌菌体细胞，用新鲜的PBS定容，并分装至1.5mL离心管中；分别加入不同质量浓度肉桂醛和头孢曲松，将样品在37℃条件下震荡孵育30min左右；孵育之后，通过13000g离心2分钟使得细菌沉淀，为了裂解样品，将每一份沉淀物溶于400μL无菌水中，然后在液氮及65℃水浴中进行三个冻融循环；将裂解物以13000g条件沉淀2分钟并收集上清液1；沉淀重新悬浮于200μL甲醇中，同样离心条件离心沉淀并收集上清液2，将上清液1与上清液2混合后再次通过13000g离心10分钟去除残留物并收集上清液。
实验结果如图5所示：与只有亚抑菌浓度头孢曲松钠处理时相比，我们观察到联合应用时细菌细胞内抗生素的积累增加，且呈一定的浓度依赖性。这种积累增加的原因可能是细菌膜的完整性受损。
七、肉桂醛联合头孢曲松钠对耐药基因表达的影响：沙门氏菌在LB肉汤中过夜生长，并按1/100稀释到1mL新鲜MH中，单独添加头孢曲松钠(1024μg mL-1)或与肉桂醛(32至128μg mL-1)组合。细菌细胞在37℃生长至对数中期(OD600＝0.8)后，使用细菌总RNA提取试剂盒提取总RNA。在合成cDNA之前，将来自所有细菌细胞的RNA调整为相同的浓度。提取的RNA使用5×All-In-One MasterMix进行逆转录。在含有EvaGreen 2x qPCR MasterMix-NoDye的20μL反应体积中进行PCR。逆转录完成后，取出cDNA，-20℃保存。实时PCR在CFXConnectTM实时系统上进行，使用Primers 5.0软件设计的特异性引物。使用2-ΔΔCt方法计算目标转录物相对于16S rRNA的水平。
实验结果如图6所示：与单独使用抗生素组相比，联合肉桂醛使用时可以显著性降低所有耐药基因的表达，有趣的是，我们还发现，单独使用头孢曲松钠时，甚至可以增强一些耐药基因的表达。
八、肉桂醛帮助头孢曲松钠诱导细菌进入高度代谢状态：头孢曲松钠抗性沙门氏菌在MHB中生长至指数期。然后，将细胞与单独的头孢曲松钠(1024μg mL-1)或与肉桂醛(64μg mL-1)的组合孵育4小时。孵育后，使用试剂根据制造商的说明(Invitrogen)从组织中提取总RNA，并使用DNase I(TaKara)去除基因组DNA。而后进行后续转录组分析。
KEGG富集分析结果如图7及图8，下调的DEGs显著富集在鞭毛组装，精氨酸生物合成和硫代谢过程。而上调的差异基因则在氨基酸代谢和碳循环通路中显著富集，主要在赖氨酸降解，酪氨酸代谢，乙醛酸和二羧酸代谢，香叶醇降解和脂肪酸降解通路富集。核心代谢通路的改变可能是抗生素耐药的一种通用机制，因此我们认为，肉桂醛是通过破坏细菌细胞膜，以促进头孢曲松钠在沙门氏菌细胞内的积累来提高头孢曲松钠的有效性，迫使细菌进入高度代谢状态最终死亡。
实施例2
肉桂醛逆转体内耐药性沙门氏菌对头孢曲松钠的耐药性
一、小鼠耐药性沙门氏菌腹腔感染模型保护率：将试验小鼠分为空白对照组，攻毒组，仅给药肉桂醛组，仅给药头孢曲松钠组和联合给药治疗组，每组12只。除了空白对照组(接种等量PBS溶液)以外，各组小鼠给予1×10^8CFU的耐药性沙门氏菌0.3mL进行感染。感染3小时后，通过口服用单独的肉桂醛(50mg/kg)治疗仅给药肉桂醛组小鼠，通过肌肉注射用单独的头孢曲松钠(200mg/kg)治疗仅给药头孢曲松组，以及同时口服肉桂醛与肌注头孢曲松钠联合治疗联合给药组小鼠。连续用药5天，每日给药2次。在第1、3、5天分别每组采样。试验期间每日记录小鼠的平均日增重，活动情况，饮食情况。
实验结果如图9所示：感染之后的5天内，单独使用头孢曲松钠或肉桂醛的时候，小鼠存活率均在30％以下，而联合用药组的存活率显著提高。
二、肠道载菌量计数：盲肠菌群的检测采用平板计数法。在感染后第1/3/5天从各处理组取小鼠处死，取盲肠食糜0.2g于灭菌瓶中，加入无菌PBS缓冲液1.8mL稀释成十倍，振荡2min，静置10min后，按此方法逐级进行倍比稀释，每个稀释度设3个重复。分别接种于SS琼脂培养基上，在37℃生化培养箱中培养24h后进行平板菌落计数。
实验结果如图10所示，经过肉桂醛与头孢曲松钠联合治疗感染小鼠后，盲肠载菌量相比单独用药组显著降低。
综上所述，本发明开发了肉桂醛联合头孢曲松钠的新应用，肉桂醛可以和头孢曲松钠组成复方药物或者作为头孢曲松钠佐剂治疗耐药性沙门氏菌感染，在复方药物中，可以分别为独立给药单元给药，也可以作为组合给药单元。此外，肉桂醛联合头孢曲松钠对临床分离的多株革兰氏阴性耐药细菌抗菌作用显著，因而还有望开发成治疗这些细菌感染的复方药物。
以上所述实施例仅表达了本发明的几种实施方式，其描述较为具体和详细，但并不能因此而理解为对本发明专利范围的限制。应当指出的是，对于本领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明构思的前提下，还可以做出若干变形和改进，这些都属于本发明的保护范围。因此，本发明专利的保护范围应以所附权利要求为准。
Claims (1)
1.肉桂醛联合头孢曲松钠在制备防治耐药细菌感染的药物上的应用，所述耐药细菌为肠炎沙门氏菌、肺炎克雷伯菌或鲍曼不动杆菌。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN202111024114.6A CN113855680B (zh) | 2021-09-02 | 2021-09-02 | 肉桂醛联合头孢曲松钠的应用 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN202111024114.6A CN113855680B (zh) | 2021-09-02 | 2021-09-02 | 肉桂醛联合头孢曲松钠的应用 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN113855680A CN113855680A (zh) | 2021-12-31 |
| CN113855680B true CN113855680B (zh) | 2023-11-03 |
Family
ID=78989335
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN202111024114.6A Active CN113855680B (zh) | 2021-09-02 | 2021-09-02 | 肉桂醛联合头孢曲松钠的应用 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN113855680B (zh) |
Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN104367636A (zh) * | 2014-10-21 | 2015-02-25 | 河南牧翔动物药业有限公司 | 一种水包油型复方头孢曲松纳米乳抗菌药物 |
| CN112166109A (zh) * | 2018-03-05 | 2021-01-01 | 德诺瓦姆德有限公司 | 作为抗微生物剂的二苯基取代的噻吩-2-酰胺衍生物及其药物组合物 |
-
2021
- 2021-09-02 CN CN202111024114.6A patent/CN113855680B/zh active Active
Patent Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN104367636A (zh) * | 2014-10-21 | 2015-02-25 | 河南牧翔动物药业有限公司 | 一种水包油型复方头孢曲松纳米乳抗菌药物 |
| CN112166109A (zh) * | 2018-03-05 | 2021-01-01 | 德诺瓦姆德有限公司 | 作为抗微生物剂的二苯基取代的噻吩-2-酰胺衍生物及其药物组合物 |
Non-Patent Citations (8)
| Title |
|---|
| Cinnamaldehyde Restores Ceftriaxone Susceptibility against Multidrug-Resistant Salmonella;Lizi Yin，等;Int J Mol Sci .;第24卷(第11期);9288 * |
| Nataliya Roth，等.Prevalence of antibiotic-resistant E. coli in broilers challenged with a multi-resistant E. coli strain and received ampicillin, an organic acid-based feed additive or a synbiotic preparation.《Poult Sci》.2019,第98卷(第06期),第2598页摘要，第2599页右栏第3段倒数第1-5行，第2600页右栏最后1段，第2603页右栏第2段，第2604页表4. * |
| 刘晶 ; .革兰氏阴性杆菌在呼吸道的感染特性及药敏分析.中南医学科学杂志.2016,(第03期),第111-113页. * |
| 曲梅 ; 黄瑛 ; 吕冰 ; 张新 ; 钱海坤 ; 贾蕾 ; 严寒秋 ; 王全意 ; .北京市肠道门诊腹泻儿童沙门菌感染状况和耐药性分析.现代预防医学.2017,(第22期),第65-69页. * |
| 王进，等.注射用头孢曲松钠/舒巴坦钠(4:1)健康人体单次给药药动学研究.中国抗生素杂志.2007,第32卷(第03期),第176页左栏最后1段. * |
| 肖永红 ; .细菌耐药:挑战与对策.中国执业药师.2011,(第06期),第 5-10页. * |
| 许璐 ; 喻毅 ; 曹宇 ; 李瑶 ; 谢艳华 ; 李捷 ; 王四旺 ; .牛至油及其主要成分的体外抑菌实验.世界中医药.2020,(第14期),第60-63页. * |
| 邹谨霜.头孢曲松钠杂质分析方法及致敏性研究.《中国优秀硕士学位论文全文数据库 电子期刊》.2021,(第08期),第42页最后1段. * |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| CN113855680A (zh) | 2021-12-31 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| CN110484513B (zh) | 噬菌体pAhMJG及其在治疗嗜水气单胞菌引发的鱼类疾病中的应用 | |
| IT202000003233A1 (it) | Ceppo batterico e suoi usi medici | |
| Arif et al. | In vitro and in vivo antimicrobial activities of seeds of Caesalpinia bonduc (Lin.) Roxb. | |
| Farrokhi et al. | Escherichia coli enhances the virulence factors of Candida albicans, the cause of vulvovaginal candidiasis, in a dual bacterial/fungal biofilm | |
| CN1895666A (zh) | 奶牛乳房炎多联灭活菌苗 | |
| Kholil et al. | Comparative efficiency of some commercial antibiotics against Pseudomonas infection in fish | |
| Vollaard et al. | Influence of amoxycillin, erythromycin and roxithromycin on colonization resistance and on appearance of secondary colonization in healthy volunteers | |
| CN113855680B (zh) | 肉桂醛联合头孢曲松钠的应用 | |
| CN110151761B (zh) | 一种替代抗生素的药物--褪黑素抵抗患儿脑膜炎大肠杆菌病原感染的应用 | |
| CN104471054A (zh) | 原生动物火鸡组织滴虫(h.meleagridis)培养物的生产和应用 | |
| CN111956633B (zh) | 石斛酚或其联合妥布霉素抗铜绿假单胞菌感染的制药用途 | |
| CN114480302B (zh) | 一株海藻希瓦氏菌噬菌体、其噬菌体组合物及其应用 | |
| CN115350197A (zh) | 泽泻醇A-24-醋酸酯在提高MRSA对β-内酰胺类抗生素敏感性方面的应用 | |
| Cohen et al. | Etiology of persistent tubo-ovarian abscess in Nairobi, Kenya | |
| KR20120015644A (ko) | 항암 활성을 갖는 락토바실러스 균주 및 이를 활성성분으로 포함하는 항암 활성 조성물 | |
| CN105012304A (zh) | 一种复方氟苯尼考组合物 | |
| CN115261334B (zh) | 一株葡萄球菌噬菌体、噬菌体制剂及其在防治葡萄球菌感染的疾病中的应用 | |
| CN116172986A (zh) | D-柠檬烯在制备抗耐药菌药物中应用 | |
| CN113440521B (zh) | 广藿香酮在制备mcr-1酶抑制剂中的应用 | |
| Oyagbemi et al. | Antimicrobial activity of Parquetina nigrescens on some multidrug resistant pathogens isolated from poultry and cases of otitis media in dogs from Nigeria | |
| Bauman | Analysis of the antibiotic susceptibility and culture conditions of Helicobacter cetorum, a seaborne gastric pathogen | |
| Nelson | A New All-Natural Wound Treatment Gel Shows Strong Inhibitory Activity Against Staphylococcus aureus and Other Wound Pathogens | |
| CN117025448A (zh) | 一种干酪乳杆菌及其用于制备肠易激综合症药物的用途 | |
| CN117919285A (zh) | 鼠李糖乳酪杆菌grx10后生元在改善慢性结肠炎产品中的应用 | |
| Patel et al. | Screening For Antimicrobial Activity Of Certain Medical Plant Extracts On Different Pathogenic Strains |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| PB01 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| GR01 | Patent grant | ||
| GR01 | Patent grant |