CN109700999A

CN109700999A - 一种具有提升白细胞含量的膏滋及其制备方法

Info

Publication number: CN109700999A
Application number: CN201910191484.5A
Authority: CN
Inventors: 戴鑫汶; 戴甲木; 孙梦锦; 龙孝金; 邹奇; 张豪; 唐心文
Original assignee: Hunan Butian Pharmaceutical Ltd By Share Ltd
Current assignee: Hunan Butian Pharmaceutical Ltd By Share Ltd
Priority date: 2019-03-14
Filing date: 2019-03-14
Publication date: 2019-05-03
Anticipated expiration: 2039-03-14
Also published as: CN109700999B

Abstract

本发明提出了一种具有提升白细胞含量的膏滋，由以下原料按重量份制备而成：羧甲基茯苓多糖10‑20份、初乳碱性蛋白12‑17份、小麦低聚肽5‑10份、桑葚35‑40份、龙眼肉5‑10份、薏苡仁10‑20份、黄精20‑25份、山药10‑20份、大枣20‑25份和蜂蜜15‑20份。本发明所述膏滋具有增强机体免疫力、提升血液中白细胞含量、提高机体耐缺氧能力等作用。对于治疗免疫功能低下、白细胞减少等疾病有确切的疗效。本发明原料来源广，制备方法简单，制得的膏滋具有良好的免疫提高的作用，能促进白细胞含量，刺激淋巴细胞增殖，降低机体发病率，具有广阔的应用前景。

Description

一种具有提升白细胞含量的膏滋及其制备方法

技术领域

本发明涉及中药保健技术领域，具体涉及一种具有提升白细胞含量的膏滋。

背景技术

近几年，世界性的环境质量的下降和人们生活压力的增加，使得处于亚健康状态的人群日渐增多，而同时随着生活水平的不断提高，人们也越来越注重个人健康问题。随着人们健康意识的增强，人们逐渐开始选择健康的食品、饮品，这种需求的产生使碳酸饮料的市场份额不断下降，茶饮料、粗粮饮料、果汁饮料和功能饮料开始受人们的青睐。增强免疫力就必须保证体力氨基酸含量，氨基酸在人体中的存在，不仅提供了合成蛋白质的重要原料，而且对于促进生长，进行正常代谢、维持生命提供了物质基础，是相当重要的一个环节。

茯苓，又称玉灵、茯灵、万灵桂、茯菟，是中药“四君八珍”之一，是拟层孔菌科真菌茯苓的干燥菌核，常寄生在松树根上，形如甘薯，球状，外皮淡棕色或黑褐色，内部粉色或白色，具有利水渗湿，健脾宁心之功效。医学研究更进一步证明茯苓具有抗肿瘤、利水消肿、增强免疫、镇定安神和抑菌等多种作用。茯苓中含有多种化学成分，其中最主要的是茯苓多糖，其含量可达茯苓干重的84％。茯苓多糖易溶于中、强碱溶液中，难溶于水，其主体结构为β-(1→3)结合的葡萄糖线性结构，同时还具有β-(1→6)结合的葡萄糖基支链的结构。科学研究表明，将羧甲基化半合成衍生化方法对茯苓多糖进行化学改性来增大其溶解度、提高生物活性，取代程度越高，在水中的溶解度就越大，生物利用度越高，生物活性则越强。

羧甲基茯苓多糖是茯苓多糖上带有羧甲基的多糖，这种多糖水溶性高，并且具有明显的抗肿瘤、提高免疫力、保肝降酶、抗病毒、减轻放射副反应、降血糖、提升白细胞含量、健胃安神、抗衰老等生理活性，将其开发成抗肿瘤、免疫增强的药物或者保健食品，效果明显，具有极好的市场前景。

申请号为CN200610163425.X的中国发明专利公开了一种高取代度羧甲基茯苓多糖及其制备方法和其应用，以水或水醇溶液为介质，茯苓多糖、氯乙酸与适当过量的氢氧化钠进行取代反应，以制得高羧甲基取代度的羧甲基茯苓多糖(CMP)，取代度＞1。该发明方法是先从茯苓中提取茯苓多糖，氯乙酸取代需保持较高的反应温度，获得羧甲基茯苓多糖后再进行脱色、纯化，为液相不振荡工艺，反应中碱液和氯乙酸溶液需要预先配制，生产总耗时长。申请号为CN101724091B的中国发明专利公开的活性羧甲基茯苓多糖及其生产工艺和应用中，先用乙醇对茯苓粉进行脱脂，在乙醇相体系中用二次碱化法(碱加入量为茯苓量的2％-10％)，氯乙酸加入量在15％-20％，获得中等取代度的羧甲基茯苓多糖。申请号为CN104387482B的发明创造采用乙醇相体系，二次碱化工艺，并利用催化剂来提升取代反应过程。上述两种工艺均需二次碱化、乙醇反应体系，操作步骤多并消耗大量的乙醇。

目前，日益增长的生活工作压力使人们体力脑力透支，随着生活水平的提高，人们对于健康的要求越来越高，因此人们功能性保健品来减轻疲劳，提高免疫力，提高睡眠质量。

发明内容

为了解决上述的技术问题，本发明提供一种具有提升白细胞含量的膏滋及其制备方法，其目的在于，提供一种具有提升白细胞含量的膏滋，通过添加羧甲基茯苓多糖，有明显的抗肿瘤、提高免疫力、保肝降酶、抗病毒、减轻放射副反应、降血糖、提升白细胞含量、健胃安神、抗衰老等生理活性。

本发明提供一种具有提升白细胞含量的膏滋，由以下原料制备而成：羧甲基茯苓多糖、初乳碱性蛋白、小麦低聚肽、桑葚、龙眼肉、薏苡仁、黄精、山药、大枣和蜂蜜。

作为本发明进一步的改进，由以下原料按重量份制备而成：羧甲基茯苓多糖10-20份、初乳碱性蛋白12-17份、小麦低聚肽5-10份、桑葚35-40份、龙眼肉5-10份、薏苡仁10-20份、黄精20-25份、山药10-20份、大枣20-25份和蜂蜜15-20份。

作为本发明进一步的改进，由以下原料按重量份制备而成：羧甲基茯苓多糖12-17份、初乳碱性蛋白14-16份、小麦低聚肽7-9份、桑葚37-39份、龙眼肉7-9份、薏苡仁12-18份、黄精21-23份、山药12-17份、大枣21-24份和蜂蜜16-18份。

作为本发明进一步的改进，由以下原料按重量份制备而成：羧甲基茯苓多糖15份、初乳碱性蛋白15份、小麦低聚肽8份、桑葚38份、龙眼肉8份、薏苡仁15份、黄精22份、山药15份、大枣23份和蜂蜜17份。

作为本发明进一步的改进，所述羧甲基茯苓多糖由以下方法制备：

S1.茯苓的培养：将茯苓菌丝无菌接种在麦芽汁液体培养基中，28℃培养4-5天；

S2.茯苓多糖的制备：将培养好的茯苓培养基35℃发酵2天，加热至微沸，提取1-2h后，过滤，加入氯仿和正丁醇的混合溶剂，振荡，离心，加入3倍量的95％乙醇，过夜，过滤得沉淀，用乙醚洗涤2-3次，得到茯苓多糖；

S3.茯苓次多糖的制备：将茯苓多糖加入高碘酸钠溶液中进行选择性氧化，用三氟乙酸调pH值至3-4，适度酸解后，过滤，固体用水洗涤，得到茯苓次多糖；

S4.羧甲基茯苓多糖的制备：将茯苓次多糖溶于碱溶液中，搅拌下缓慢加入35％双氧水脱色处理，至溶液变成白色，加入氯乙酸的异丙醇和叔丁醇的混合溶液中，控制反应体系中异丙醇和叔丁醇的混合溶剂的浓度为65％-70％，60-80℃醚化反应2-3h后，反应体系呈糊状，倒出上层液体，下层加入稀盐酸溶液调节pH＝6.0，剧烈搅拌，加入95％乙醇，过滤，固体物溶解于水中，用乙醇沉淀，过滤，干燥，得白色粉末状固体物，即为羧甲基茯苓多糖。

作为本发明进一步的改进，所述酸解时间为30min-1h，所述异丙醇和叔丁醇的混合体积比为3:1，所述氯仿和正丁醇的混合体积比例为(4-6):1，所述碱溶液为KOH溶液，所述高碘酸钠溶液的物质的量的浓度为0.5mol/L-1.5mol/L。

本发明进一步保护一种上述具有提升白细胞含量的膏滋的制备方法，按照以下方法制备：

S1.中药的提取：按比例称取桑葚、龙眼肉、薏苡仁、黄精、山药和大枣，加水煎煮，微沸提取两次，180-200目过滤，合并滤液，浓缩至密度为1.2g/cm³-1.5g/cm³，得到中药浓缩液；

S2.膏滋的制备：按比例将羧甲基茯苓多糖、初乳碱性蛋白和小麦低聚肽溶于少量水中，混合搅拌均匀，加入步骤S1中制备的中药浓缩液，搅拌均匀，加入蜂蜜，常压炼膏，收膏，即得。

作为本发明进一步的改进，步骤S1中第一次提取加水量为中药重的5倍，提取时间为2h-3h，第二次提取加水量为中药重的4倍，提取时间为1h-2h。

作为本发明进一步的改进，步骤S2中加水量为所述羧甲基茯苓多糖、初乳碱性蛋白和小麦低聚肽总重的1-2倍。

作为本发明进一步的改进，所述搅拌转速为300r/min-500r/min。

本发明具有如下有益效果：

1.羧甲基茯苓多糖的制备中用异丙醇和叔丁醇的混合溶液代替传统的异丙醇或乙醇，异丙醇为仲醇，叔丁醇为叔醇，两者的位阻大，在该SN2取代反应中有助于降低副反应，减少氯乙酸的用量并降低生产成本，反应较温和，不仅制得的羧甲基茯苓多糖取代度较高且取代基分布均匀，而且克服了异丙醇或乙醇作为介质制备的羧甲基茯苓多糖容易结块的缺点；通过控制异丙醇和叔丁醇的浓度有利于提高羧甲基茯苓多糖的取代度；本发明采用的三氟乙酸因其酸性、氧化性弱，水解效果好并且具有对茯苓多糖结构影响小的优点，作为酸解用酸使茯苓多糖糖苷键断裂；本发明通过控制适合的醚化反应温度进一步提高取代度，研究发现，温度过低，取代度过低；醚化温度过高，取代度反而下降，通过实验发现，温度在60-80℃时取代度最高；

2.本发明的方法制备的羧甲基茯苓多糖具有良好的水溶性，20℃下溶解度为0.105-0.109mg/mL，取代度为1.55-1.59，均优于现有的羧甲基茯苓多糖，羧甲基茯苓多糖有明显的抗肿瘤、提高免疫力、保肝降酶、抗病毒、减轻放射副反应、降血糖、提升白细胞含量、健胃安神、抗衰老等生理活性；初乳碱性蛋白不仅蛋白含量高，而且含有许多其它乳制品中没有的珍稀蛋白，对提高白细胞含量具有良好的促进作用；小麦低聚肽是从小麦蛋白粉中提取的蛋白质，再经过定向酶切及特定小肽分离技术获得的小分子多肽物质，具有免疫调节、抗氧化等多种生物活性，能够刺激机体淋巴细胞增殖，增强巨噬细胞吞噬功能，提升白细胞含量，提高机体抵御外界病原体感染的能力，降低机体发病率；

3.桑葚，甘、酸，寒，归心、肝、肾经，补血滋阴，生津润燥。用于眩晕耳鸣，心悸失眠，须发早白，津伤口渴，内热消渴，血虚便秘；龙眼肉，甘，温，归心、脾经，补益心脾，养血安神，用于气血不足，心悸怔忡，健忘失眠，血虚萎黄；薏苡仁，甘、淡，凉，归脾、胃、肺经，健脾渗湿，除痹止泻，清热排浓。用于水肿，脚气，小便不利，湿痹拘挛，脾虚泄泻，肺痈，肠痈，扁平疣；黄精，甘，平，归脾、肺、肾经，补气养阴，健脾，润肺，益肾。用于脾胃虚弱，体倦乏力，口干食少，肺虚燥咳，精血不足，内热消渴；山药，甘，平，归脾、肺、肾经，补脾养胃，生津益肺，补肾涩精。用于脾虚食少，久泻不止，肺虚喘咳，肾虚遗精，带下，尿频，虚热消渴，麸炒山药补脾健胃，用于脾虚食少，泄泻便溏，白带过多；大枣，甘，温，归脾、胃经，补中益气，养血安神。用于脾虚食少，乏力便溏，妇人脏躁；

4.本发明所述膏滋具有增强机体免疫力、提升血液中白细胞含量、提高机体耐缺氧能力等作用。对于治疗免疫功能低下、白细胞减少等疾病有确切的疗效。本发明原料来源广，制备方法简单，制得的膏滋具有良好的免疫提高的作用，能促进白细胞含量，刺激淋巴细胞增殖，降低机体发病率，具有广阔的应用前景。

具体实施方式

下面将结合本发明实施例，对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整的描述，显然，所述的实施例只是本发明的部分具有代表性的实施例，而不是全部实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的其他所有实施例都属于本发明的保护范围。

实施例1

所述羧甲基茯苓多糖由以下方法制备：

S1.茯苓的培养：将茯苓菌丝无菌接种在麦芽汁液体培养基中，28℃培养4天；

S2.茯苓多糖的制备：将培养好的茯苓培养基35℃发酵2天，加热至微沸，提取1h后，过滤，加入3倍量的氯仿和正丁醇的混合溶剂，所述氯仿和正丁醇的混合体积比例为4:1，振荡，离心，加入3倍量的95％乙醇，过夜，过滤得沉淀，用乙醚洗涤2次，得到茯苓多糖；

S3.茯苓次多糖的制备：将10g茯苓多糖加入100mL0.5mol/L高碘酸钠溶液中进行选择性氧化，用三氟乙酸调pH值至3，适度酸解，酸解时间为30min，过滤，固体用水洗涤，得到茯苓次多糖；

S4.羧甲基茯苓多糖的制备：将1g茯苓次多糖溶于20mL 0.1mol/L的KOH溶液中，搅拌下缓慢加入35％双氧水脱色处理，至溶液变成白色，加入50mL 2mol/L的氯乙酸的异丙醇和叔丁醇的混合溶液，体积比为3:1，控制反应体系中异丙醇和叔丁醇的混合溶剂的浓度为65％，60℃醚化反应2h后，反应体系呈糊状，倒出上层液体，下层加入稀盐酸溶液调节pH＝6.0，剧烈搅拌，加入95％乙醇，过滤，固体物溶解于水中，用乙醇沉淀，过滤，干燥，得白色粉末状固体物，即为羧甲基茯苓多糖。

经检测，该羧甲基茯苓多糖的取代度为1.55，20℃时的溶解度为0.105mg/mL。

实施例2

所述羧甲基茯苓多糖由以下方法制备：

S1.茯苓的培养：将茯苓菌丝无菌接种在麦芽汁液体培养基中，28℃培养5天；

S2.茯苓多糖的制备：将培养好的茯苓培养基35℃发酵2天，加热至微沸，提取2h后，过滤，加入5倍体积的氯仿和正丁醇的混合溶剂，所述氯仿和正丁醇的混合体积比例为6:1，振荡，离心，加入3倍量的95％乙醇，过夜，过滤得沉淀，用乙醚洗涤3次，得到茯苓多糖；

S3.茯苓次多糖的制备：将10g茯苓多糖加入30mL 1.5mol/L高碘酸钠溶液中进行选择性氧化，用三氟乙酸调pH值至4，适度酸解，酸解时间为1h，过滤，固体用水洗涤，得到茯苓次多糖；

S4.羧甲基茯苓多糖的制备：将1g茯苓次多糖溶于20mL 0.1mol/L的KOH溶液中，搅拌下缓慢加入35％双氧水脱色处理，至溶液变成白色，加入50mL 2mol/L氯乙酸的异丙醇和叔丁醇的混合溶液，体积比为3:1，控制反应体系中异丙醇和叔丁醇的混合溶剂的浓度为70％，80℃醚化反应3h后，反应体系呈糊状，倒出上层液体，下层加入稀盐酸溶液调节pH＝6.0，剧烈搅拌，加入95％乙醇，过滤，固体物溶解于水中，用乙醇沉淀，过滤，干燥，得白色粉末状固体物，即为羧甲基茯苓多糖。

经检测，该羧甲基茯苓多糖的取代度为1.57，20℃时的溶解度为0.106mg/mL。

实施例3

所述羧甲基茯苓多糖由以下方法制备：

S2.茯苓多糖的制备：将培养好的茯苓培养基35℃发酵2天，加热至微沸，提取2h后，过滤，加入氯仿和正丁醇的混合溶剂，所述氯仿和正丁醇的混合体积比例为5:1，振荡，离心，加入3倍量的95％乙醇，过夜，过滤得沉淀，用乙醚洗涤3次，得到茯苓多糖；

S3.茯苓次多糖的制备：将10g茯苓多糖加入50mL 1.0mol/L高碘酸钠溶液中进行选择性氧化，用三氟乙酸调pH值至3.6，适度酸解，酸解时间为45min，过滤，固体用水洗涤，得到茯苓次多糖；

S4.羧甲基茯苓多糖的制备：将1g茯苓次多糖溶于20mL 0.1mol/LKOH溶液中，搅拌下缓慢加入35％双氧水脱色处理，至溶液变成白色，加入50mL 2mol/L氯乙酸的异丙醇和叔丁醇的混合溶液中，体积比为3:1，控制反应体系中异丙醇和叔丁醇的混合溶剂的浓度为68％，70℃醚化反应2.5h后，反应体系呈糊状，倒出上层液体，下层加入稀盐酸溶液调节pH＝6.0，剧烈搅拌，加入95％乙醇，过滤，固体物溶解于水中，用乙醇沉淀，过滤，干燥，得白色粉末状固体物，即为羧甲基茯苓多糖。

经检测，该羧甲基茯苓多糖的取代度为1.59，20℃时的溶解度为0.109mg/mL。

对比实施例1

按照中国发明专利CN104188900B方法制备的羧甲基茯苓多糖。

经检验，该羧甲基茯苓多糖的取代度为1.02，20℃时的溶解度为0.085mg/mL。

测试例1抗氧化性测试

取pH为8.2的Tris-HCl缓冲液于比色管中，各自加入实施例1-3和对比实施例1制备的羧甲基茯苓多糖的样品溶液，37℃水浴，然后加入预热过的邻苯三酚溶液，混匀，处理5min后用盐酸淬灭反应，测定320nm处吸光值。对照组分别为维生素C，和对比实施例1制备的羧甲基茯苓多糖。试验结果以清除率E(％)表示。结果见表1。

表1

样品\浓度mg/mL

0.1

0.5

1.0

2.0

5.0

10.0

实施例1

14.1±1.6

17.4±1.1

28.3±2.2

38.4±1.6

48.3±3.7

60.3±1.5

实施例2

14.5±1.3

16.7±1.7

27.3±0.8

36.9±1.8

47.7±2.4

59.1±1.2

实施例3

15.6±0.7

18.1±1.4

29.3±1.2

39.6±1.6

51.1±0.9

63.6±1.8

维生素C

42.3±0.8

91.7±1.3

92.1±1.5

91.8±1.7

91.8±1.3

92.1±1.6

对比实施例1

9.3±1.3

12.4±0.8

16.6±1.1

25.4±1.8

33.6±3.7

38.3±2.5

由上表可知，本发明实施例1-3制备的羧甲基茯苓多糖具有良好的抗氧化活性，活性明显优于对比实施例1。

测试例2羧甲基茯苓多糖的取代度(D·S)测试

将实施例1-3和对比实施例1制备的羧甲基茯苓多糖进行取代度测试，具体方法如下：

精密称取羧甲基茯苓多糖样品0.4g(精确到小数点后4位)，置于150ml的烧杯中，80℃水浴加热，搅拌使溶解，冷却后，用2molL的盐酸溶液调pH至4.0，加入无水乙醇100ml，搅拌均匀，静置过夜，离心分离醇析物，醇析物用95％的乙醇反复洗涤，至洗涤液中不含氯离子。洗净醇析物用0.1000mol/L的NaOH标准溶液40.00ml溶解，待溶液呈透明状后，立即用0.1000mol/L的标准盐酸溶液反滴定，至酚酞指示剂的红色刚退去，记录反滴定所消耗的0.1000mol/L的盐酸标准液的体积为V_HCl。

按照下式计算羧甲基茯苓多糖的取代度(D·S)：

式中：

A为中和1g酸式羧甲基茯苓多糖样品所消耗的NaOH的m mol数；

C_NaOH为NaOH标准溶液的浓度(0.1000mol/L)；

V_NaOH为加入0.1000mol/L的NaOH标准溶液的体积数(40.00ml)；

C_HCl为反滴定用的盐酸标准溶液的浓度(0.1000mol/L)；

V_HCl为反滴定所消耗0.1000mol/L的盐酸标准溶液的体积数。

结果见表2。

表2

组别	取代度
		实施例1	1.55
实施例2	1.57
		实施例3	1.59
对比实施例1	1.02

从结果可知，本发明实施例1-3制备的羧甲基茯苓多糖具有较高的取代度(1.55-1.59)，明显优于对比实施例1。

实施例4

原料组成(重量份)：羧甲基茯苓多糖10份、初乳碱性蛋白12份、小麦低聚肽5份、桑葚35份、龙眼肉5份、薏苡仁10份、黄精20份、山药10份、大枣20份和蜂蜜15份。

一种具有提升白细胞含量的膏滋的制备方法，按照以下方法制备：

S1.中药的提取：按比例称取桑葚、龙眼肉、薏苡仁、黄精、山药和大枣，加水煎煮，微沸提取两次，第一次提取加水量为中药重的5倍，提取时间为2h，第二次提取加水量为中药重的4倍，提取时间为1h，180目过滤，合并滤液，浓缩至密度为1.2g/cm³，得到中药浓缩液；

S2.膏滋的制备：按比例将羧甲基茯苓多糖、初乳碱性蛋白和小麦低聚肽溶于少量水中，加水量为所述羧甲基茯苓多糖、初乳碱性蛋白和小麦低聚肽总重的1倍，混合搅拌均匀，搅拌转速为300r/minr/min，加入步骤S1中制备的中药浓缩液，搅拌均匀，搅拌转速为300r/minr/min，加入蜂蜜，常压炼膏，收膏，即得。

实施例5

原料组成(重量份)：羧甲基茯苓多糖20份、初乳碱性蛋白17份、小麦低聚肽10份、桑葚40份、龙眼肉10份、薏苡仁20份、黄精25份、山药20份、大枣25份和蜂蜜15-20份。

S1.中药的提取：按比例称取桑葚、龙眼肉、薏苡仁、黄精、山药和大枣，加水煎煮，微沸提取两次，第一次提取加水量为中药重的5倍，提取时间为3h，第二次提取加水量为中药重的4倍，提取时间为2h，200目过滤，合并滤液，浓缩至密度为1.5g/cm³，得到中药浓缩液；

S2.膏滋的制备：按比例将羧甲基茯苓多糖、初乳碱性蛋白和小麦低聚肽溶于少量水中，加水量为所述羧甲基茯苓多糖、初乳碱性蛋白和小麦低聚肽总重的2倍，混合搅拌均匀，搅拌转速为500r/min，加入步骤S1中制备的中药浓缩液，搅拌均匀，搅拌转速为500r/min，加入蜂蜜，常压炼膏，收膏，即得。

实施例6

原料组成(重量份)：羧甲基茯苓多糖12份、初乳碱性蛋白14份、小麦低聚肽7份、桑葚37份、龙眼肉7份、薏苡仁12份、黄精21份、山药12份、大枣21份和蜂蜜16份。

S1.中药的提取：按比例称取桑葚、龙眼肉、薏苡仁、黄精、山药和大枣，加水煎煮，微沸提取两次，第一次提取加水量为中药重的5倍，提取时间为2h，第二次提取加水量为中药重的4倍，提取时间为1h，180目过滤，合并滤液，浓缩至密度为1.3g/cm³，得到中药浓缩液；

S2.膏滋的制备：按比例将羧甲基茯苓多糖、初乳碱性蛋白和小麦低聚肽溶于少量水中，加水量为所述羧甲基茯苓多糖、初乳碱性蛋白和小麦低聚肽总重的1.2倍，混合搅拌均匀，搅拌转速为350r/min，加入步骤S1中制备的中药浓缩液，搅拌均匀，搅拌转速为350r/min，加入蜂蜜，常压炼膏，收膏，即得。

实施例7

原料组成(重量份)：羧甲基茯苓多糖17份、初乳碱性蛋白16份、小麦低聚肽9份、桑葚39份、龙眼肉9份、薏苡仁18份、黄精23份、山药17份、大枣24份和蜂蜜18份。

S1.中药的提取：按比例称取桑葚、龙眼肉、薏苡仁、黄精、山药和大枣，加水煎煮，微沸提取两次，第一次提取加水量为中药重的5倍，提取时间为3h，第二次提取加水量为中药重的4倍，提取时间为2h，200目过滤，合并滤液，浓缩至密度为1.4g/cm³，得到中药浓缩液；

S2.膏滋的制备：按比例将羧甲基茯苓多糖、初乳碱性蛋白和小麦低聚肽溶于少量水中，加水量为所述羧甲基茯苓多糖、初乳碱性蛋白和小麦低聚肽总重的1.8倍，混合搅拌均匀，搅拌转速为450r/min，加入步骤S1中制备的中药浓缩液，搅拌均匀，搅拌转速为450r/min，加入蜂蜜，常压炼膏，收膏，即得。

实施例8

原料组成(重量份)：羧甲基茯苓多糖15份、初乳碱性蛋白15份、小麦低聚肽8份、桑葚38份、龙眼肉8份、薏苡仁15份、黄精22份、山药15份、大枣23份和蜂蜜17份。

S1.中药的提取：按比例称取桑葚、龙眼肉、薏苡仁、黄精、山药和大枣，加水煎煮，微沸提取两次，第一次提取加水量为中药重的5倍，提取时间为2.5h，第二次提取加水量为中药重的4倍，提取时间为1.5h，200目过滤，合并滤液，浓缩至密度为1.35g/cm³，得到中药浓缩液；

S2.膏滋的制备：按比例将羧甲基茯苓多糖、初乳碱性蛋白和小麦低聚肽溶于少量水中，加水量为所述羧甲基茯苓多糖、初乳碱性蛋白和小麦低聚肽总重的1.5倍，混合搅拌均匀，搅拌转速为400r/min，加入步骤S1中制备的中药浓缩液，搅拌均匀，搅拌转速为400r/min，加入蜂蜜，常压炼膏，收膏，即得。

试验例1

1、对小鼠免疫功能的影响试验

1.1试验动物与分组：昆明种SPF级小鼠，60只，雌性，由重庆市实验动物中心提供，体质量为17-20g，放入动物房适应3d后，体质量为18-22g开始实验。

1.2试验方法

1.2.1脏器/体质量比值实验选取20只昆明种SPF小鼠，随机分成对照组和实施例组，每组10只，称量，对照组用蒸馏水灌胃(0.1ml/20g)，实施例组用实施例8制备的膏滋灌胃(0.1ml/20g，每1ml相当于0.1g膏滋)，连续灌胃30d后称量，颈椎脱臼处死，解剖动物，取出胸腺和脾脏，用滤纸吸干血迹后称量，计算脏器和体质量之间的比值。

1.2.2碳廓清实验选取20只小鼠，随机分成对照组和实施例组，每10只，将对照组和受试组的小鼠按指定给药方法连续灌胃30d后从小鼠的尾静脉按每10g体质量0.1ml注入浓度为25％墨汁，注射墨汁间隔2、10min，分别从小鼠内毗静脉丛取血20μL，加入到2ml的Na₂CO₃(w＝0.1％)溶液中。以Na₂CO₃溶液作空白对照，用722可见分光光度计在600nm下测定吸光度，分别记为A1和A2。然后将小鼠处死，取肝脏和脾脏，用滤纸吸干脏器表面血污，称量，算出吞噬指数α。

1.2.3小鼠巨噬细胞吞噬鸡红细胞实验选取20只小鼠，随机分成对照组和实施例组，每10只，将受试组和对照组按指定给药方法连续灌胃30d后，向每只小鼠腹腔注射20％的鸡红细胞悬液lml，30min后，颈椎脱臼处死动物，解剖小鼠腹腔，注入2ml生理盐水，吸取腹腔液制作涂片，用吉姆萨工作液染色15-30min，再用蒸馏水漂洗、晾干，显微镜下计数，计算吞噬指数和吞噬百分率。

1.3结果

1.3.1对小鼠体质量，脾脏、胸腺指数影响与对照组比较，给药组小鼠体重增加差异不显著，说明本发明实施例8制备的膏滋对小鼠体质量没有影响；脾脏/体质量实验组和对照组比较差异不显著，说明本发明实施例8制备的膏滋对小鼠脾指数没有影响；显著提高小鼠胸腺指数，差异具有显著性(P＜0.05)，结果显示本发明实施例5制备的膏滋有助于增强小鼠的特异性免疫，结果见表3。

表3

组别	n	初始体重(g)	增加体重(g)	脾脏/体重(mg/g)	胸腺/体重(mg/g)
						对照组	10	21.2±0.2	7.9±0.3	5.2±0.1	3.2±0.1
实施例组	10	20.5±0.3	7.8±0.2	5.1±0.3	5.5±0.6*

注：本发明制剂组与对照组比较*P＜0.05

1.3.2对小鼠碳廓清及巨噬细胞吞噬功能影响与对照组比较，给药组可以明显提高小鼠的碳廓清能力(P＜0.05)。能明显提高小鼠巨噬细胞吞噬鸡红细胞的能力(P＜0.05)，说明虫草口服制剂对小鼠的非特异性免疫具有增强作用，结果见表4。

表4

组别	n	碳廓清吞指数	吞噬百分比(％)	吞噬指数
					对照组	10	5.0±0.2	33.4±10.2	0.48±0.11
实施例组	10	5.8±0.3	62.1±11.3	0.71±0.10

注：本发明制剂组与对照组比较*P＜0.05

2.3结论

以上实验研究结果表明，本发明制剂具有增强免疫功能。

测试例2稳定性试验

将本发明实施例4-8制备的具有降血糖功能的膏滋进行稳定性试验，结果见表5。

表5

与现有技术相比，羧甲基茯苓多糖的制备中用异丙醇和叔丁醇的混合溶液代替传统的异丙醇或乙醇，异丙醇为仲醇，叔丁醇为叔醇，两者的位阻大，在该SN2取代反应中有助于降低副反应，减少氯乙酸的用量并降低生产成本，反应较温和，不仅制得的羧甲基茯苓多糖取代度较高且取代基分布均匀，而且克服了异丙醇或乙醇作为介质制备的羧甲基茯苓多糖容易结块的缺点；通过控制异丙醇和叔丁醇的浓度有利于提高羧甲基茯苓多糖的取代度；本发明采用的三氟乙酸因其酸性、氧化性弱，水解效果好并且具有对茯苓多糖结构影响小的优点，作为酸解用酸使茯苓多糖糖苷键断裂；本发明通过控制适合的醚化反应温度进一步提高取代度，研究发现，温度过低，取代度过低；醚化温度过高，取代度反而下降，通过实验发现，温度在60-80℃时取代度最高；

本发明的方法制备的羧甲基茯苓多糖具有良好的水溶性，20℃下溶解度为0.105-0.109mg/mL，取代度为1.55-1.59，均优于现有的羧甲基茯苓多糖，羧甲基茯苓多糖有明显的抗肿瘤、提高免疫力、保肝降酶、抗病毒、减轻放射副反应、降血糖、提升白细胞含量、健胃安神、抗衰老等生理活性；初乳碱性蛋白不仅蛋白含量高，而且含有许多其它乳制品中没有的珍稀蛋白，对提高白细胞含量具有良好的促进作用；小麦低聚肽是从小麦蛋白粉中提取的蛋白质，再经过定向酶切及特定小肽分离技术获得的小分子多肽物质，具有免疫调节、抗氧化等多种生物活性，能够刺激机体淋巴细胞增殖，增强巨噬细胞吞噬功能，提升白细胞含量，提高机体抵御外界病原体感染的能力，降低机体发病率；

桑葚，甘、酸，寒，归心、肝、肾经，补血滋阴，生津润燥。用于眩晕耳鸣，心悸失眠，须发早白，津伤口渴，内热消渴，血虚便秘；龙眼肉，甘，温，归心、脾经，补益心脾，养血安神，用于气血不足，心悸怔忡，健忘失眠，血虚萎黄；薏苡仁，甘、淡，凉，归脾、胃、肺经，健脾渗湿，除痹止泻，清热排浓。用于水肿，脚气，小便不利，湿痹拘挛，脾虚泄泻，肺痈，肠痈，扁平疣；黄精，甘，平，归脾、肺、肾经，补气养阴，健脾，润肺，益肾。用于脾胃虚弱，体倦乏力，口干食少，肺虚燥咳，精血不足，内热消渴；山药，甘，平，归脾、肺、肾经，补脾养胃，生津益肺，补肾涩精。用于脾虚食少，久泻不止，肺虚喘咳，肾虚遗精，带下，尿频，虚热消渴，麸炒山药补脾健胃，用于脾虚食少，泄泻便溏，白带过多；大枣，甘，温，归脾、胃经，补中益气，养血安神。用于脾虚食少，乏力便溏，妇人脏躁；

本发明所述膏滋具有增强机体免疫力、提升血液中白细胞含量、提高机体耐缺氧能力等作用。对于治疗免疫功能低下、白细胞减少等疾病有确切的疗效。本发明原料来源广，制备方法简单，制得的膏滋具有良好的免疫提高的作用，能促进白细胞含量，刺激淋巴细胞增殖，降低机体发病率，具有广阔的应用前景。

本领域的技术人员在不脱离权利要求书确定的本发明的精神和范围的条件下，还可以对以上内容进行各种各样的修改。因此本发明的范围并不仅限于以上的说明，而是由权利要求书的范围来确定的。

Claims

1.一种具有提升白细胞含量的膏滋，其特征在于，由以下原料制备而成：羧甲基茯苓多糖、初乳碱性蛋白、小麦低聚肽、桑葚、龙眼肉、薏苡仁、黄精、山药、大枣和蜂蜜。

2.根据权利要求1所述一种具有提升白细胞含量的膏滋，其特征在于，由以下原料按重量份制备而成：羧甲基茯苓多糖10-20份、初乳碱性蛋白12-17份、小麦低聚肽5-10份、桑葚35-40份、龙眼肉5-10份、薏苡仁10-20份、黄精20-25份、山药10-20份、大枣20-25份和蜂蜜15-20份。

3.根据权利要求2所述一种具有提升白细胞含量的膏滋，其特征在于，由以下原料按重量份制备而成：羧甲基茯苓多糖12-17份、初乳碱性蛋白14-16份、小麦低聚肽7-9份、桑葚37-39份、龙眼肉7-9份、薏苡仁12-18份、黄精21-23份、山药12-17份、大枣21-24份和蜂蜜16-18份。

4.根据权利要求3所述一种具有提升白细胞含量的膏滋，其特征在于，由以下原料按重量份制备而成：羧甲基茯苓多糖15份、初乳碱性蛋白15份、小麦低聚肽8份、桑葚38份、龙眼肉8份、薏苡仁15份、黄精22份、山药15份、大枣23份和蜂蜜17份。

5.根据权利要求1所述一种具有提升白细胞含量的膏滋，其特征在于，所述羧甲基茯苓多糖由以下方法制备：

S4.羧甲基茯苓多糖的制备：将茯苓次多糖溶于碱溶液中，搅拌下缓慢加入35％双氧水脱色处理，至溶液变成白色，加入氯乙酸的异丙醇和叔丁醇的混合溶液，控制反应体系中异丙醇和叔丁醇的混合溶剂的浓度为65％-70％，60-80℃醚化反应2-3h后，反应体系呈糊状，倒出上层液体，下层加入稀盐酸溶液调节pH＝6.0，剧烈搅拌，加入95％乙醇，过滤，固体物溶解于水中，用乙醇沉淀，过滤，干燥，得白色粉末状固体物，即为羧甲基茯苓多糖。

6.根据权利要求5所述一种具有提升白细胞含量的膏滋，其特征在于，所述酸解时间为30min-1h，所述异丙醇和叔丁醇的混合体积比为3:1，所述氯仿和正丁醇的混合体积比例为(4-6):1，所述碱溶液为KOH溶液，所述高碘酸钠溶液的物质的量的浓度为0.5mol/L-1.5mol/L。

7.根据权利要求1-6任一项权利要求所述一种具有提升白细胞含量的膏滋的制备方法，其特征在于，按照以下方法制备：

8.根据权利要求7所述一种具有提升白细胞含量的膏滋的制备方法，其特征在于，步骤S1中第一次提取加水量为中药重的5倍，提取时间为2h-3h，第二次提取加水量为中药重的4倍，提取时间为1h-2h。

9.根据权利要求7所述一种具有提升白细胞含量的膏滋的制备方法，其特征在于，步骤S2中加水量为所述羧甲基茯苓多糖、初乳碱性蛋白和小麦低聚肽总重的1-2倍。

10.根据权利要求7所述一种具有提升白细胞含量的膏滋的制备方法，其特征在于，所述搅拌转速为300r/min-500r/min。