CN102277255B - 灵芝银杏白果黄酒、制备方法及其功效 - Google Patents

Abstract

本发明公开了灵芝银杏白果酒，涉及生物工程技术领域。其中酒精度8～16％，总黄酮含量1～5mg/L，银杏内酯1～6mg/L，总萜类化合物含量30～800mg/L,蛋白质60~200mg/L，灵芝酸10~17mg/L，可溶性糖0~2.0%，银杏酚酸0~5ppm，氢氰酸0~0.1μg/L。采用双酶法水解银杏白果，获得银杏白果水解液，该水解液中含有银杏黄酮、萜类化合物、氨基酸和肽类、淀粉等活性化合物，其中氨基酸和肽类含量≥1％，淀粉含量≥2%，该水解液通过灵芝菌种转化，加入米饭酒曲发酵获得发酵液，该发酵液经过过滤、勾兑获得灵芝银杏白果酒。该酒含有银杏和灵芝活性成分，具有预防高血压和抗氧化等功效。

Description

灵芝银杏白果黄酒、制备方法及其功效

技术领域

本发明涉及生物工程技术领域，特指利用三种酶水解银杏白果，经过两次菌种发酵获得的发酵液经过过滤和勾兑生产灵芝银杏白果黄酒的方法和用途。

背景技术

银杏白果的主要成分是蛋白质、淀粉和脂肪，另外含有黄酮、萜类化合物、银杏酸、氢化白果酸、氢化白果亚酸、银杏醇、白果酚和多糖。我国中医古书，一直将白果列为重要药材，白果酸抑制多种杆菌及皮肤真菌，并对葡萄球菌、链球菌、白喉、炭瘟杆菌，枯草芽孢杆菌、大肠杆菌、伤寒菌等都有不同程度的抑制作用。从鲜白果中提取出来的白果酚酸，有降压作用，并且使血管的渗透性增加。近年来各地临床试验证明，经常食用白果，可治高血压、止白带、咳锹发热；心脑血管、呼吸系统、皮肤病、牙痛等疾病，还有清热扰菌、温肺益气、扩张血管、增加血流量、定痰喘、去皱纹、防衰老、润音喉、健身美容、延年益寿等功效。但是白果中由于含有微量的白果酚、白果酸，易导致人体食欲不振、脱皮、触痛，不等程度的肝损害、肾小球肾炎，白果酸有溶血作用引起惊厥和死亡。由于这些副作用阻碍了白果的大量的食用。因此采用一方面可以强化白果的药用价值，同时具有降低白果毒性的技术开发利用白果资源具有重要社会学意义，同时也会带来巨大的经济价值。

国内关于银杏白果发酵酒有部分研究和报道，已经申请发明专利共十多项，这些专利基本上采用浸泡、勾兑或者发酵，如中国专利（CN 01113680.4）介绍了一种以银杏为主要原料加入48度至52度白酒中浸渍提取有效成份后得酒液，然后再加入银杏提取物即银杏酮、蜂蜜勾兑而成；专利（CN 03131562.3）主要介绍以草莓和浸泡、蒸煮后的银杏、红枣、葡萄为原料，经糖、米曲、活性酵母发酵24～36小时，搅拌勾兑50°～60°麦酒，封存5～15天后压汁，经粗、细过滤，取汁与糖按50∶1的比例调配，该酒具有软化血管、降低血脂、补血、活血、润肺、健脾之功效和营养、医用价值；专利（CN  96115885.9）主要涉及采用银杏叶80～110克、小米70～85克、糯米50～80克、高梁45～60克、糖化酶30～40克、红曲75～95克、白酒30～45克、水15～35克等原料经过发酵获得银杏酒，该酒可预防防治由动脉硬化引起的疾病、脑血管障碍后遗症、脑受伤后遗症等；专利（ CN1376776）涉及银杏叶低温粉碎机内粉碎，白酒浸泡，脱苦以及白酒勾兑，该酒降低血清胆固醇、预防脑供血不足、脑功能性障碍提高人体耐缺氧能力、促进红细胞的生成功能。

目前，对白果发酵的方法主要银杏叶或其提取物或者白果加入大米、酒曲或其他辅料直接发酵。用这些方法得到的酒由于含有银杏叶或白果中果的活性成分，如黄酮和萜类因而具有一定的功效。例如胡广东，宋瑞滨曾经报道米与银杏叶或白果一同蒸煮，蒸煮冷却后加入米曲糖化发酵，经过后续压榨获得银杏果酒，发明专利（申请号：CN 201010145712.4）涉及药用真菌金耳转化银杏白果获得的白果酒，该酒同时含有金耳和银杏的活性成分具有预防糖尿病、高血脂、抗氧化和增加肌体免疫力具有特效。

由上述研究可知，银杏白果可以与米混合通过与酒曲发酵获得含有银杏活性成分的功能性白酒，但是无论银杏叶还是其提取物或者白果都含有一定量的银杏毒素，如氢氰酸、银杏酚酸，使得银杏白酒或果酒的使用量受到了一定的限制，限制了银杏酒的销售量。

发明内容

本发明提供的是一种灵芝银杏白果黄酒的酿制技术，采用三种酶水解银杏白果，获得银杏白果水解液，该水解液中含有银杏黄酮、萜类化合物、氨基酸和肽类、淀粉等活性化合物，其中氨基酸和肽类含量≥1％，淀粉含量≥2%，该水解液添加银杏叶提取物后通过灵芝菌种转化，加入米饭酒曲发酵获得发酵液，该发酵液经过过滤、勾兑获得灵芝银杏白果黄酒。

灵芝银杏白果黄酒，其特征在于酒精度8～16％，总黄酮含量1～5mg/L，银杏内酯1～6 mg/L，总萜类化合物含量30～800mg/L, 蛋白质60~200mg/L，灵芝酸10~17mg/L，可溶性糖0~2.0%，银杏酚酸0~5ppm，氢氰酸0~0.1μg/L。

本发明的目的在于提供一种灵芝银杏白果黄酒的制备方法，其特征在于灵芝银杏白果酒按下述步骤制备得到：

精确称取已经脱壳的白果，打浆加入1～5倍的水，煮沸糊化，加入0.2～5.0%（质量/体积）液化酶，80℃水浴10～50分钟，冷却到50～70℃后，加入0.1～4.0%（质量/体积）糖化酶，50～70℃水浴10～50分钟，待冷却至40～60℃以下后加入0.2～3.0%（质量/体积）蛋白酶40～60℃水解0.5～9小时，制得银杏白果水解液；白果水解液100～120℃灭菌10～60分钟，冷却后接入灵芝试管斜面菌种，在转速60～180转/分钟，温度22～33℃培养5～10天，制得灵芝液体摇瓶菌种；白果水解液经过100～120℃灭菌，以3～10％（体积比）接种量接入灵芝液体摇瓶菌种，在温度22～33℃，搅拌转速60～250转/分，通风量1：0.3～1：1.2v/v/m培养3～8天，制得灵芝银杏一级液体菌种；银杏水解液经过100～120℃灭菌10～60分钟，以3～10％（体积比）接种量接入灵芝银杏一级液体菌种，在温度22～33℃，搅拌转速60～250转/分，通风量1：0.3～1：1.2v/v/m培养3～10天，制得灵芝银杏发酵液；灵芝银杏发酵液加入0.2～5.0倍白果重的的大米和水煮成的米饭，其中以质量计大米：水＝1：1～2，以及大米重的1～10%酒曲和大米重的0.5～2％酿酒酵母，10～40℃发酵7～30天后，经过过滤，滤液加入食用酒精、蜂蜜和柠檬酸勾兑，灭菌就得到灵芝银杏白果黄酒。

其中银杏白果水解液制备过程中所使用的蛋白酶包括：风味蛋白酶、木瓜蛋白酶、中性蛋白酶、碱性蛋白酶、高效水解蛋白酶、小麦蛋白水解专用酶等。

用该工艺生产的灵芝银杏白果黄酒，其特征在于色质米黄色至褐色，具有淡淡白果香味和灵芝发酵的特有香味，该酒浓缩后香味浓郁持久不退。

本发明提供的灵芝银杏白果黄酒，该酒含有银杏活性成分（黄酮和萜类）和灵芝活性成分（如灵芝多糖、甘露醇和灵芝酸），具有预防高血压和抗氧化等功效。

附图说明

图1是本发明的工艺流程图。

具体实施方式

下面结合实施例对本发明做进一步阐述：

其中所述的灵芝白果酒功能性成分按下列方法测定：称取灵芝银杏白果总黄酮含量的测定采用亚硝酸钠－硝酸铝法（邓斌, 蒋刚彪, 陈六平.分光光度法测定食品包装纸用紫甘薯总黄酮的含量.包装工程,2008,29(1):27～29.）；萜类含量的测定采用王翔飞介绍的测定方法（王翔飞,潘旭东,刘雯霞,等.黄花瓦松中总三萜成分的含量的测定.中国民族民间医药,2009,18(10):11.）；银杏内酯含量测定采用分光光度法（张渝阳，王鑫， 赵丽娟，荀绍馨，田明，张新，王晓宁，邓桂春：分光光度法测定银杏萜内酯的含量.辽宁化工,2006,35(10):618～620）；蛋白质含量测定采用考马斯亮蓝（陈建勋、王晓峰：植物生理学实验指导.实验19：考马斯亮蓝G-250法测定蛋白质含量.华南理工大学出版社p54～55）：氢氰酸含量测定依据中华人民共和国国家标准GB/T15665-1995：豆类、配糖氢氰酸含量的测定;银杏酚酸采用荧光分析法测定（田亚平,尤文元,李彧娜,荧光分析法测定银杏酚酸. 分析化学研究简报.2006年特刊，s155-s157），灵芝酸测定采用紫外分光光度法（Tang YJ, Zhong JJ. Fed-batch fermentation of Ganoderma lucidum for hyperproduction of polysaccharide and ganoderic acid. Enzyme and Microbial Technology 31 (2002) 20–28）。

本发明中实施例1～3中所使用的灵芝菌种为可以购买到的任意一种灵芝菌种。灵芝斜面菌种采用PDA培养基制备。1000mLPDA培养基含 200g马铃薯提取液（去皮马铃薯切成碎片、1000mL蒸馏水煮沸30分钟，八层纱布过滤，滤液定容至1000mL，滤液即为马铃薯提取液）加入蔗糖20g、琼脂20g，煮沸待琼脂完全溶化后分装试管，塞上棉塞，121℃灭菌，制成斜面。无菌接种灵芝菌种，28℃培养7天，4℃冷藏待用。

实施例1

精确称取已经脱壳的白果200g，打浆加入200mL的水，煮沸糊化，温度降至60℃，加入0.4mL液化酶（无锡赛德生物工程有限公司，16万单位/mL）60℃水解50分钟，降温到50℃，加入0.2mL糖化酶（无锡赛德生物工程有限公司，2万单位/mL）50℃水解50分钟，降温到30℃，加入0.4g木瓜蛋白酶（广西南宁东恒华道生物科技有限公司，80万单位/g），水解9小时，制得银杏白果水解液；银杏白果水解液分装到250mL三角瓶，每瓶100mL，100℃灭菌60分钟，冷却后接入灵芝试管斜面菌种，在转速60转/分钟，温度22℃培养10天，制得灵芝液体摇瓶菌种；白果水解液经过100℃灭菌60分钟，以10％接种量接入灵芝的液体摇瓶菌种，在温度22℃，搅拌转速60转/分，通风量1：0.3v/v/m培养8天，制得灵芝银杏一级液体菌种；银杏白果水解液经过100℃灭菌60分钟，以3％接种量接入灵芝的一级液体菌种，在温度22℃，搅拌转速60转/分，通风量1：0.3v/v/m培养10天，制得灵芝银杏发酵液；灵芝银杏发酵液加入加入200g大米和200mL水煮成的米饭，以及大米重的1%（1g）白酒酒曲（购自洋河酒厂）和大米重的0.5%（1g）酿酒酵母（Saccharomyces cerevisiae，安琪酵母股份有限公司），10℃发酵30天后，离心，上清液加入食用酒精25mL,柠檬酸0.1g，蜂蜜10g，调匀后获得灵芝银杏白果黄酒。该酒为米黄色。

实施例2

精确称取已经脱壳的白果200g，打浆加入1000mL水，煮沸糊化，降温至70℃加入加入1.6mL液化酶（无锡赛德生物工程有限公司，16万单位/mL）70℃水解30分钟，降温到60℃，加入1.6mL糖化酶（无锡赛德生物工程有限公司，2万单位/mL）60℃水解30分钟，降温到40℃，加入0.4g木瓜蛋白酶（广西南宁东恒华道生物科技有限公司，80万单位/g），水解6小时，制得银杏白果水解液；银杏白果水解液分装到250mL三角瓶，每瓶100mL，110℃灭菌30分钟，冷却后接入灵芝试管斜面菌种，在转速120转/分钟，温度28℃培养7天，制得灵芝液体摇瓶菌种；白果水解液经过110℃灭菌30分钟，以7％接种量接入灵芝的液体摇瓶菌种，在温度28℃，搅拌转速160转/分，通风量1：0.8v/v/m培养5天，制得灵芝银杏一级液体菌种；银杏白果水解液经过110℃灭菌30分钟，以7％接种量接入灵芝的一级液体菌种，在温度28℃，搅拌转速160转/分，通风量1：0.8v/v/m培养5天，制得灵芝银杏发酵液；灵芝银杏发酵液加入加入500g大米和500mL水煮成的米饭，以及大米重的7.5g（2.5%）黄酒酒曲（购自中南食品科学研究院）和2g（0.4%）酵母，25℃发酵20天后，离心取清液加入食用酒精70mL.柠檬酸0.3g，蜂蜜20g，即为灵芝银杏白果黄酒。该酒为浅褐色。

实施例3

精确称取已经脱壳的白果200g，打浆，加入2000mL水，煮沸糊化，降温至80℃，加入100mL液化酶（无锡赛德生物工程有限公司，16万单位/mL）80℃水解10分钟，降温到70℃，加入100mL糖化酶（无锡赛德生物工程有限公司，2万单位/mL）70℃水解10分钟，降温到50℃，加入30g木瓜蛋白酶（广西南宁东恒华道生物科技有限公司，80万单位/g），水解0.5小时，制得银杏白果水解液；其中所述的摇瓶培养工艺是：银杏白果水解液分装到250mL三角瓶，每瓶100mL，120℃灭菌10分钟，冷却后接入灵芝试管斜面菌种，在转速180转/分钟，温度33℃培养5天，制得灵芝液体摇瓶菌种；白果水解液经过120℃灭菌，以10％接种量接入灵芝的液体摇瓶菌种，在温度33℃，搅拌转速250转/分，通风量1：1.2v/v/m培养3天，制得灵芝银杏一级液体菌种；银杏白果水解液经过120℃灭菌10分钟，以10％接种量接入灵芝的一级液体菌种，在温度33℃，搅拌转速250转/分，通风量1： 1.2v/v/m培养3天，制得灵芝银杏发酵液；灵芝银杏发酵液加入1000g大米和1000mL水煮成的米饭，以及大米重的5%(50g)黄酒酒曲（购自浙江力克生物科技有限公司 ）和2%（20g）酵母，40℃发酵10天后，离心取清液加入食用酒精100mL，柠檬酸0.05g，蜂蜜20g勾兑即为灵芝银杏白果黄酒。该酒为褐色。

实施例4

实施例1、实施例2和实施例3的测定结果显示在表1

表1：实施例1～3成分分析表

项目	实施例1	实施例2	实施例3
				酒精度（%）	8.4	10.9	15.9
黄酮（mg/L）	2.0	3.8	4.7
				银杏内酯(mg/L)	1.4	3.5	5.86
总萜类(mg/L)	31	431	733
				蛋白质(mg/L)	74.5	70.4	168.9
灵芝酸(mg/L)	13.8	15.1	10.7
				可溶性糖（%）	1.86	1.88	1.94
银杏酚酸（ppm）	4.12	3.67	2.91
				氢氰酸（μg/L）	0.06	0.08	0.06

实施例5

60只ICR小鼠随机分为5 组，每组12 只。正常对照组25 ℃ 饲养;冷激对照组，冷激果酒组每天组每天上午8:00—12:00 置于(4±2)℃ 光照培养箱中，随后取出放回25 ℃ 环境中,冷刺激果酒组分别于每日16:00 灌胃施例1、实施例2和实施例3果酒，剂量为10mL/Kg体重，正常对照组、冷激对照组每天灌胃等量生理盐水作对照；所有组别正常投喂饲料，饮自来水。18 d 后按5 mL/Kg体重腹腔注射质量分数20% 氨基甲酸乙酯将小鼠麻醉，颈动脉插管法测量并记录血压。结果（表2）所有供试药物血压和模型对照组相比，均显著降低。

表2：对照组与实验组小鼠血压值比较(1mmHg=0.133KPa，平均值±标准误)

实施例6

灵芝银杏果酒抗氧化能力评价采用采用普鲁士兰法测定抗氧化能力（赵艳红,李建科,李国秀.天然抗氧化物体外活性评价方法的优选与优化.食品科学,2008,29(6):64-69）。取1 mL灵芝银杏果酒，加入2.5 mL pH 6.6 的磷酸缓冲液和质量分数1%铁氰化钾溶液2.5 mL，混合后在50℃下放置20 min，加入质量分数10%三氯乙酸溶液2.5 mL混合，取混合液2.5 mL，加入2.5 mL蒸馏水和质量分数0.1% 氯化铁2.5 mL，混匀，静置10 min，在700 nm 处测定吸光度。以蒸馏水代替酒样重复上述操作作为对照。吸光度越高，抗氧化性越好，还原力越强。每个实施例测定重复三次，结果以平均值表示（表3）。结果显示实施例1～3的吸光度均显著高于对照组，说明实施例制得银杏果酒具有显著的降低氧化压力的作用。

表3：实施例1～3银杏果酒酒样抗氧化作用评价

试验	对照	实施例1	实施例2	实施例3
					吸光度	0.60	0.79	0.83	0.89

Claims (1)

1.灵芝银杏白果黄酒，其特征在于酒精度8～16％，总黄酮含量1～5mg/L，银杏内酯1～6 mg/L，总萜类化合物含量30～800mg/L, 蛋白质60~200mg/L，灵芝酸10~17mg/L，可溶性糖0~2.0%，银杏酚酸0~5ppm，氢氰酸0~0.1μg/L，且可溶性糖的含量不为0，银杏酚酸的含量不为0，氢氰酸的含量不为0；

按下述步骤制备得到：

精确称取已经脱壳的白果，打浆加入1～5倍的水，煮沸糊化，加入以质量与体积计为0.2～5.0%液化酶，80℃水浴10～50分钟，冷却到50～70℃后，加入以质量与体积计为0.1～4.0%糖化酶，50～70℃水浴10～50分钟，待冷却至60℃以下后加入以质量与体积计为0.2～3.0%蛋白酶40～60℃水解0.5～9小时，制得银杏白果水解液；银杏白果水解液100～120℃灭菌10～60分钟，冷却后接入灵芝试管斜面菌种，在转速60～180转/分钟，温度22～33℃培养5～10天，制得灵芝液体摇瓶菌种；银杏白果水解液经过100～120℃灭菌，以体积比3～10％接种量接入灵芝液体摇瓶菌种，在温度22～33℃，搅拌转速60～250转/分，通风量1：0.3～1：1.2v/v/m培养3～8天，制得灵芝银杏一级液体菌种；银杏白果水解液经过100～120℃灭菌10～60分钟，以体积比3～10％接种量接入灵芝银杏一级液体菌种，在温度22～33℃，搅拌转速60～250转/分，通风量1：0.3～1：1.2v/v/m培养3～10天，制得灵芝银杏发酵液；灵芝银杏发酵液加入0.2～5.0倍白果重的由大米和水煮成的米饭，其中以质量计大米：水＝1：1～2，以及大米重的1～10%酒曲和大米重的0.5～2％酿酒酵母，10～40℃发酵7～30天后，经过过滤，滤液加入食用酒精、蜂蜜和柠檬酸勾兑，灭菌就得到灵芝银杏白果黄酒；

其中所述的蛋白酶为木瓜蛋白酶。