CN109400732A - 一种从铁皮石斛中同时制备石斛多糖和石斛菲酚的方法 - Google Patents
一种从铁皮石斛中同时制备石斛多糖和石斛菲酚的方法 Download PDFInfo
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Abstract
本发明提供一种从铁皮石斛中同时制备石斛多糖和石斛菲酚的方法,包括将粉碎后的铁皮石斛和水混合后,水浴加热后过滤,得到石斛水提液和残渣;将石斛水提液进行浓缩后调节浓缩液的乙醇浓度为80%,并冷藏24h后进行抽滤,得到石斛多糖滤渣和第一醇提液,将石斛多糖滤渣冷冻干燥,得到石斛多糖提取物;将残渣和乙醇溶液混合后,水浴后过滤,得到第二醇提液;将第一、二醇提液合并并浓缩,然后用弱极性的大孔吸附树脂进行吸附2h,接着先用蒸馏水进行洗脱,再用体积浓度为40~70%的乙醇溶液继续进行洗脱,收集用乙醇溶液洗脱时的流出液,将收集的流出液浓缩、干燥,得到石斛菲酚提取物。本发明能同时提取石斛多糖和石斛菲类化合物。
Description
技术领域
本发明涉及中药化学领域,尤其涉及一种从铁皮石斛中同时制备石斛多糖和石斛菲酚的方法。
背景技术
《中国药典》规定,中药铁皮石斛为兰科植物铁皮石斛的干燥茎;其味甘,性微寒,归胃、肾经;具有益胃生津,滋阴清热之功效;用于热病津伤,口干烦渴,胃阴不足,食少于呕,病后虚热不退,阴虚火旺,骨蒸劳热,目暗不明,筋骨痿软。《神农本草经》将其列为上品,道家养生经典《道藏》将其誉为“中华九大仙草”之首。
现代研究表明,铁皮石斛主要含有石斛多糖,石斛菲酚,石斛碱等成分,其中石斛菲酚类成分(也称石斛菲)是石斛属植物中的特征成分。药理研究发现,铁皮石斛具有调理肠胃、滋阴生津、明目清肝、补肾益气、抑制肿瘤、抗癌防癌、增强免疫、抗疲劳、抗衰老、益寿延年等药理活性。由于石斛具有多种药理活性,是补益保健佳品,已成为健康产品或保健品开发的重要原材料。但石斛生长条件严苛,导致其作为药用资源有限,故在产品开发时对石斛原材料的充分利用显得尤为重要。
传统的铁皮石斛相关产品主要是石斛鲜条、石斛细粉、石斛枫斗及石斛花茶等饮片为主,而以其提取物为主的产品大多数集中在石斛多糖,其提取工艺主要是水提或水提取物浸膏,这种水提取工艺显然不能将醇溶性的石斛菲类活性成分很好的提取出来,导致提取不充分,药理活性差,资源浪费严重。
因此,有必要发明一种从铁皮石斛中同时制备石斛多糖和石斛菲酚的方法,更充分合理利用铁皮石斛药材资源。
发明内容
有鉴于此,本发明的目的在于提供一种能从铁皮石斛中同时制备石斛多糖和石斛菲酚的方法。
为了实现上述目的,本发明采用的技术方案一为:
一种从铁皮石斛中同时制备石斛多糖和石斛菲酚的方法,包括以下步骤:
步骤1:将粉碎后的铁皮石斛和9~11倍铁皮石斛重量的水混合后,水浴加热85~95min,过滤,滤渣再用同样的方法再提取一次,过滤,得到残渣,再合并两次滤液得到石斛水提液;
步骤2:将步骤1的石斛水提液进行浓缩,得到第一浓缩液,然后加入体积浓度为95%的乙醇溶液直至第一浓缩液中的乙醇浓度为80%,再进行冷藏24h后进行抽滤,得到石斛多糖滤渣和第一醇提液,将石斛多糖滤渣冷冻干燥,得到石斛多糖提取物;
步骤3:将步骤1的残渣和7~9倍残渣重量的乙醇溶液混合后,水浴加热35~45min,过滤,滤渣再用同样的方法再提取一次,过滤,合并两次滤液,得到第二醇提液;
步骤4:将步骤2中的第一醇提液和步骤3中的第二醇提液合并后进行浓缩,得到第二浓缩液,将第二浓缩液用大孔吸附树脂进行吸附2h后,用蒸馏水进行洗脱4~6个柱体积后,再用体积浓度为40~70%的乙醇溶液对大孔吸附树脂继续进行洗脱,洗脱3~4个柱体积,收集用乙醇溶液洗脱时的流出液,将收集的流出液依次进行浓缩、干燥,得到石斛菲酚提取物,其中所述大孔吸附树脂为弱极性树脂。
上述技术方案的关键构思在于:将铁皮石斛先用水加热提取、过滤得到水提液和残渣,再水提液浓缩后和乙醇混合并依次进行冷藏、抽滤,得到石斛多糖滤渣和第一醇提液,将石斛多糖滤渣冻干得到石斛多糖提取物;再残渣用乙醇溶液提取后过滤的滤液与第一醇提液合并、浓缩再用大孔吸附树脂吸附再依次用水和体积浓度为40~70%的乙醇溶液进行洗脱,并收集乙醇溶液洗脱时的流出液,将流出液浓缩、干燥得到石斛菲酚提取物。
进一步的,步骤1中水浴加热的温度为75~85℃;步骤3中水浴加热的温度为53~57℃。
进一步的,步骤3中所用乙醇溶液的体积浓度为95%。
进一步的,步骤2中冷藏的温度为0~5℃。
进一步的,步骤4中第二浓缩液的体积为0.9~1.1个柱体积。
进一步的,步骤4中干燥的方法为真空干燥或冷冻干燥。
进一步的,所述石斛菲酚提取物中菲类化合物的含量为40%以上。
进一步的,所述石斛菲酚提取物中含有对羟基苯甲酸和香草酸。
本发明的有益效果是:本发明通过将铁皮石斛先用水加热提取、过滤得到水提液和残渣,再水提液浓缩后和乙醇混合并依次进行冷藏、抽滤,得到石斛多糖滤渣和第一醇提液,将石斛多糖滤渣冻干得到石斛多糖提取物;再残渣用乙醇溶液提取后过滤的滤液与第一醇提液合并、浓缩再用大孔吸附树脂吸附再依次用水和体积浓度为40~70%的乙醇溶液进行洗脱,并收集乙醇溶液洗脱时的流出液,将流出液浓缩、干燥得到石斛菲酚提取物,上述制备工艺能同时制备出石斛多糖提取物和石斛菲酚提取物,有效提高了提取效率,有效利用了铁皮石斛资源,且制备工艺简单方便工业化生产;本发明制备得到的石斛多糖提取物和石斛菲酚提取物的纯度更高,药理活性更佳,尤其是石斛菲酚提取物中的菲类化合物含量高达40%以上相比现有技术中乙醇总提取物中菲类化合物含量4.0%而言,纯度提高了10倍以上。
附图说明
图1所示为提取工艺流程图。
图2所示为阿魏酸对照品的标准曲线。
图3所示为为石斛菲酚提取物以及对照品(对羟基苯甲酸和香草酸)的HPLC图谱。
具体实施方式
下面结合附图和具体实施例对本发明做进一步的说明如下:
如图1及图2所示,本发明提供的一种从铁皮石斛中同时制备石斛多糖和石斛菲酚的方法,包括以下步骤:
步骤1:将粉碎后的铁皮石斛和9~11倍铁皮石斛重量的水混合后,水浴加热85~95min,过滤,滤渣再用同样的方法再提取一次,过滤,得到残渣,再合并两次滤液得到石斛水提液;
步骤2:将步骤1的石斛水提液进行浓缩,得到第一浓缩液,然后加入体积浓度为95%的乙醇溶液直至第一浓缩液中的乙醇浓度为80%,再进行冷藏24h后进行抽滤,得到石斛多糖滤渣和第一醇提液,将石斛多糖滤渣冷冻干燥,得到石斛多糖提取物;
步骤3:将步骤1的残渣和7~9倍残渣重量的乙醇溶液混合后,水浴加热35~45min,过滤,滤渣再用同样的方法再提取一次,过滤,合并两次滤液,得到第二醇提液;
步骤4:将步骤2中的第一醇提液和步骤3中的第二醇提液合并后进行浓缩,得到第二浓缩液,将第二浓缩液用大孔吸附树脂进行吸附2h后,用蒸馏水进行洗脱4~6个柱体积后,再用体积浓度为40~70%的乙醇溶液对大孔吸附树脂继续进行洗脱,洗脱3~4个柱体积,收集用乙醇溶液洗脱时的流出液,将收集的流出液依次进行浓缩、干燥,得到石斛菲酚提取物,其中所述大孔吸附树脂为弱极性树脂。
从上述描述可知,本发明具有以下有益效果:本发明通过将铁皮石斛先用水加热提取、过滤得到水提液和残渣,再水提液浓缩后和乙醇混合并依次进行冷藏、抽滤,得到石斛多糖滤渣和第一醇提液,将石斛多糖滤渣冻干得到石斛多糖提取物;再残渣用乙醇溶液提取后过滤的滤液与第一醇提液合并、浓缩再用大孔吸附树脂吸附再依次用水和体积浓度为40~70%的乙醇溶液进行洗脱,并收集乙醇溶液洗脱时的流出液,将流出液浓缩、干燥得到石斛菲酚提取物,上述制备工艺能同时制备出石斛多糖提取物和石斛菲酚提取物,有效提高了提取效率,有效利用了铁皮石斛资源,且制备工艺简单方便工业化生产;本发明制备得到的石斛多糖提取物和石斛菲酚提取物的纯度更高,药理活性更佳,尤其是石斛菲酚提取物中的菲类化合物含量高达40%以上相比现有技术中乙醇总提取物中菲类化合物含量4.0%而言,纯度提高了10倍以上。
进一步的,步骤1中水浴加热的温度为75~85℃;步骤3中水浴加热的温度为53~57℃。
由上述描述可知,通过控制步骤1和步骤3在上述温度范围,能有效提取石斛多糖和石斛菲类化合物,同时能最大限度的避免温度破坏铁皮石斛中的功效成分,进而得到更高得率的石斛多糖提取物和石斛菲酚提取物。
进一步的,步骤3中所用乙醇溶液的体积浓度为95%。
由上述描述可知,采用上述浓度的乙醇进行石斛菲的提取,得率更高且效率更高。
进一步的,步骤2中冷藏的温度为0~5℃。
进一步的,步骤4中第二浓缩液的体积为0.9~1.1个柱体积。
进一步的,步骤4中干燥的方法为真空干燥或冷冻干燥。
由上述描述可知,采用真空干燥或冷冻干燥能最大限度保持提取物中的活性成分不被破坏,使得提取物的药理活性更佳。
进一步的,所述石斛菲酚提取物中菲类化合物的含量为40%以上。
进一步的,所述石斛菲酚提取物中含有对羟基苯甲酸和香草酸。
以下再列举出几个优选实施例或应用实施例,以帮助本领域技术人员更好的理解本发明的技术内容以及本发明相对于现有技术所做出的技术贡献:
实施例1
一种从铁皮石斛中同时制备石斛多糖和石斛菲酚的方法,包括以下步骤:
步骤1:将150g粉碎后的铁皮石斛(干品)和1.35L水混合后,于75℃的温度下水浴加热85min,过滤,滤渣再用同样的方法再提取一次,过滤,得到残渣,再合并两次滤液得到石斛水提液;
步骤2:将步骤1的石斛水提液进行浓缩,得到第一浓缩液,然后加入体积浓度为95%的乙醇溶液直至第一浓缩液中的乙醇浓度为80%,再于1℃冷藏24h后进行抽滤,得到石斛多糖滤渣(抽滤得到滤渣)和第一醇提液(抽滤得到的滤液),将石斛多糖滤渣冷冻干燥,得到石斛多糖提取物;
步骤3:将步骤1的残渣和7倍残渣重量的乙醇溶液(乙醇溶液的体积浓度为95%)混合后,于53℃的温度下水浴加热35min,过滤,滤渣再用同样的方法再提取一次,过滤,合并两次滤液,得到第二醇提液;
步骤4:将步骤2中的第一醇提液和步骤3中的第二醇提液合并后进行浓缩至AB-8大孔树脂柱的0.9~1.1个柱体积,得到第二浓缩液,将第二浓缩液用AB-8大孔树脂柱进行吸附2h后,用蒸馏水进行洗脱4个柱体积后,再用体积浓度为58%的乙醇溶液对大孔吸附树脂继续进行洗脱,洗脱3个柱体积,收集用乙醇溶液洗脱时的流出液,将收集的流出液依次进行浓缩、干燥(冷冻干燥),得到石斛菲酚提取物。
实施例2
一种从铁皮石斛中同时制备石斛多糖和石斛菲酚的方法,包括以下步骤:
步骤1:将150g粉碎后的铁皮石斛和1.65L水混合后,于85℃的温度下水浴加热95min,过滤,滤渣再用同样的方法再提取一次,过滤,得到残渣,再合并两次滤液得到石斛水提液;
步骤2:将步骤1的石斛水提液进行浓缩,得到第一浓缩液,然后加入体积浓度为95%的乙醇溶液直至第一浓缩液中的乙醇浓度为80%,再于5℃冷藏24h后进行抽滤,得到石斛多糖滤渣和第一醇提液,将石斛多糖滤渣冷冻干燥,得到石斛多糖提取物;
步骤3:将步骤1的残渣和9倍残渣重量的乙醇溶液(乙醇溶液的体积浓度为95%)混合后,于57℃的温度下水浴加热45min,过滤,滤渣再用同样的方法再提取一次,过滤,合并两次滤液,得到第二醇提液;
步骤4:将步骤2中的第一醇提液和步骤3中的第二醇提液合并后进行浓缩至AB-8大孔树脂柱的0.9~1.1个柱体积,得到第二浓缩液,将第二浓缩液用AB-8大孔树脂柱进行吸附2h后,用蒸馏水进行洗脱6个柱体积后,再用体积浓度为62%的乙醇溶液对大孔吸附树脂继续进行洗脱,洗脱4个柱体积,收集用乙醇溶液洗脱时的流出液,将收集的流出液依次进行浓缩、干燥(冷冻干燥),得到石斛菲酚提取物。
实施例3
一种从铁皮石斛中同时制备石斛多糖和石斛菲酚的方法,包括以下步骤:
步骤1:将150g粉碎后的铁皮石斛和1.5L水混合后,于80℃的温度下水浴加热90min,过滤,滤渣再用同样的方法再提取一次,过滤,得到残渣,再合并两次滤液得到石斛水提液;
步骤2:将步骤1的石斛水提液进行浓缩,得到第一浓缩液,然后加入体积浓度为95%的乙醇溶液直至第一浓缩液中的乙醇浓度为80%,再于4℃冷藏24h后进行抽滤,得到石斛多糖滤渣和第一醇提液,将石斛多糖滤渣冷冻干燥,得到石斛多糖提取物;
步骤3:将步骤1的残渣和8倍残渣重量的乙醇溶液(乙醇溶液的体积浓度为95%)混合后,于55℃的温度下水浴加热40min,过滤,滤渣再用同样的方法再提取一次,过滤,合并两次滤液,得到第二醇提液;
步骤4:将步骤2中的第一醇提液和步骤3中的第二醇提液合并后进行浓缩至AB-8大孔树脂柱的0.9~1.1个柱体积,得到第二浓缩液,将第二浓缩液用大孔吸附树脂(AB-8大孔树脂柱)进行吸附2h后,用蒸馏水进行洗脱5个柱体积(1000mL)后,再用体积浓度为60%的乙醇溶液对大孔吸附树脂继续进行洗脱,洗脱4个柱体积(800mL),收集用乙醇溶液洗脱时的流出液,将收集的流出液依次进行浓缩、干燥(冷冻干燥),得到石斛菲酚提取物(0.69g,得率为0.46%)。
实施例3所得的石斛菲酚提取物以阿魏酸为对照品,用福林酚法检测发现石斛菲酚提取物中的菲类化合物含量为47.3%,相比于现有技术中乙醇总提取物中菲酚占比4.0%,其纯度提高了10.8倍。
对实施例3中的石斛菲酚提取物进行菲类化合物含量测定
菲类化合物含量的检测是以福林酚法为检测方法,以阿魏酸为对照品,具体步骤如下:
对照品溶液的制备与标准曲线的绘制:精密称取阿魏酸标准品0.8-2.0 mg,用蒸馏水配制浓度为1.0 mg/mL的阿魏酸对照品溶液。准确量取0,20,40,60,80,100,120 μL,分别置于5 mL EP管中(锡箔纸避光处理),然后分别加入0. 5 mL福林酚试剂(浓度2N),混匀后,加入2 mL 7.5%的碳酸钠溶液,加蒸馏水定容至4.0 mL,于40 ℃避光水浴30 min。以不加对照品的4.0 mL蒸馏水为空白对照,760 nm下测定其吸光值,每个样品平行测定三次取平均值。以吸光值为纵坐标,以对照品阿魏酸的含量为横坐标,绘制标准曲线。拟合阿魏酸标准曲线得到线性回归方程y=0.0128x+0.0248, 相关系数为0.9991,式中y为吸光值,x为阿魏酸的含量,标准曲线见图1。
样品溶液的制备与含量测定:准确称取实施例3所得的石斛菲酚提取物以及石斛无水乙醇总提取物并用蒸馏水配制浓度为1.0 mg/mL的供试品溶液。准确量取0 μL供试品溶液,150 μL菲类化合物提取物溶液,750 μL乙醇总提取物溶液,分别置于5 mL EP管中(锡箔纸避光处理),然后分别加入0. 5 mL福林酚试剂(浓度2N),混匀后,加入2 mL 7.5%的碳酸钠溶液,加蒸馏水定容至4.0 mL,于40 ℃避光水浴30 min。以4.0 mL蒸馏水为空白对照,760 nm下测定其吸光值,每个样品平行测定三次取平均值。根据上述回归方程,计算样品中菲类化合物的含量。
提取物的高效液相色谱法检测:利用岛津Shimadzu LC-15C仪器系统,SPD-15C紫外-可见光二极管阵列检测器以及Zorbax Extend-C18 column(4.6×250 mm, 5μm)色谱柱。流动相为A:0.2%甲酸水溶液,B:100%甲醇;梯度洗脱系统为0-10 min, 10%-30%B; 10-25 min, 30%-40%B; 25-50 min, 40%-60%B; 50-60 min, 60%-73%B。进样体积为20 μL,检测波长为254 nm, 温度25℃。检测结果如图2所示,提取物中富含菲酚类化合物,其中含有对羟基苯甲酸和香草酸。
综上所述,本发明提供的一种从铁皮石斛中同时制备石斛多糖和石斛菲酚的方法,本发明通过将铁皮石斛先用水加热提取、过滤得到水提液和残渣,再水提液浓缩后和乙醇混合并依次进行冷藏、抽滤,得到石斛多糖滤渣和第一醇提液,将石斛多糖滤渣冻干得到石斛多糖提取物;再残渣用乙醇溶液提取后过滤的滤液与第一醇提液合并、浓缩再用大孔吸附树脂吸附再依次用水和体积浓度为40~70%的乙醇溶液进行洗脱,并收集乙醇溶液洗脱时的流出液,将流出液浓缩、干燥得到石斛菲酚提取物,上述制备工艺能同时制备出石斛多糖提取物和石斛菲酚提取物,有效提高了提取效率,有效利用了铁皮石斛资源,且制备工艺简单方便工业化生产;本发明制备得到的石斛多糖提取物和石斛菲酚提取物的纯度更高,药理活性更佳,尤其是石斛菲酚提取物中的菲类化合物含量高达40%以上相比现有技术中乙醇总提取物中菲类化合物含量4.0%而言,纯度提高了10倍以上。
上述的对实施例的描述是为便于该技术领域的普通技术人员能理解和使用发明。熟悉本领域技术的人员显然可以容易地对这些实施例做出各种修改,并把在此说明的一般原理应用到其他实施例中而不必经过创造性的劳动。因此,本发明不限于上述实施例,本领域技术人员根据本发明的揭示,不脱离本发明范畴所做出的改进和修改都应该在本发明的保护范围之内。此外,上述实施例使用的是铁皮石斛,本领域的技术人员根据本发明的技术方法,从铁皮石斛同属近似种的其他石斛包括但不限于金钗石斛、鼓槌石斛、流苏石斛、马鞭石斛、环草石斛、黄草石斛、霍山石斛中提取总多糖和石斛菲酚,都应该视为在本发明的保护范围之内。
Claims (7)
1.一种从铁皮石斛中同时制备石斛多糖和石斛菲酚的方法,其特征在于,包括以下步骤:
步骤1:将粉碎后的铁皮石斛和9~11倍铁皮石斛重量的水混合后,水浴加热85~95min,过滤,滤渣再用同样的方法再提取一次,过滤,得到残渣,再合并两次滤液得到石斛水提液;
步骤2:将步骤1的石斛水提液进行浓缩,得到第一浓缩液,然后加入体积浓度为95%的乙醇溶液直至第一浓缩液中的乙醇浓度为80%,再进行冷藏24h后进行抽滤,得到石斛多糖滤渣和第一醇提液,将石斛多糖滤渣冷冻干燥,得到石斛多糖提取物;
步骤3:将步骤1的残渣和7~9倍残渣重量的乙醇溶液混合后,水浴加热35~45min,过滤,滤渣再用同样的方法再提取一次,过滤,合并两次滤液,得到第二醇提液;
步骤4:将步骤2中的第一醇提液和步骤3中的第二醇提液合并后进行浓缩,得到第二浓缩液,将第二浓缩液用大孔吸附树脂进行吸附2h后,用蒸馏水进行洗脱4~6个柱体积后,再用体积浓度为40~70%的乙醇溶液对大孔吸附树脂继续进行洗脱,洗脱3~4个柱体积,收集用乙醇溶液洗脱时的流出液,将收集的流出液依次进行浓缩、干燥,得到石斛菲酚提取物,其中所述大孔吸附树脂为弱极性树脂。
2.根据权利要求1所述的从铁皮石斛中同时制备石斛多糖和石斛菲酚的方法,其特征在于,步骤1中水浴加热的温度为75~85℃;步骤3中水浴加热的温度为53~57℃。
3.根据权利要求1所述的从铁皮石斛中同时制备石斛多糖和石斛菲酚的方法,其特征在于,步骤3中所用乙醇溶液的体积浓度为95%。
4.根据权利要求1所述的从铁皮石斛中同时制备石斛多糖和石斛菲酚的方法,其特征在于,步骤2中冷藏的温度为0~5℃。
5.根据权利要求1所述的从铁皮石斛中同时制备石斛多糖和石斛菲酚的方法,其特征在于,步骤4中干燥的方法为真空干燥或冷冻干燥。
6.根据权利要求1所述的从铁皮石斛中同时制备石斛多糖和石斛菲酚的方法,其特征在于,所述石斛菲酚提取物中菲类化合物的含量为40%以上。
7.根据权利要求1所述的从铁皮石斛中同时制备石斛多糖和石斛菲酚的方法,其特征在于,所述石斛菲酚提取物中含有对羟基苯甲酸和香草酸。
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