CN107981352A - 一种高抗氧化活性铁皮石斛提取物的制备方法及其应用 - Google Patents

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Abstract

本发明提供了一种高抗氧化活性铁皮石斛提取物的制备方法及其应用，本发明中以膨化工艺处理铁皮石斛，以70％乙醇、正己烷和乙酸乙酯依次萃取、分离，得到有效组分DOE、DOW、DOEA。检测每种组分中多糖、多酚、类黄酮的含量，并以三种方法评价其抗氧化能力。结果显示，膨化处理能显著提高不同组分的活性物质以及抗氧化能力，所得的铁皮石斛提取物能应用在食品组合物上。

Description

一种高抗氧化活性铁皮石斛提取物的制备方法及其应用
技术领域
本发明涉及铁皮石斛提取物的制备方法，主要是一种高抗氧化活性铁皮石斛提取物的制备方法及其应用。
背景技术
石斛属(Dendrobium Sw.)是兰科多年生草本植物，全球约有1500种，主要分布于亚洲、欧洲等。我国共有74种，分布于华南、西南地区。目前药用石斛属植物共有50余种，但在中国药典(2015版)仅收录4种，即铁皮石斛(Dendrobium officinale Caulis.)、金钗石斛(Dendrobium nobile Lindl.)、鼓槌石斛(Dendrobium chrysotoxum Lindl.)和流苏石斛(Dendrobium fimbriatum Hook.)。其中，铁皮石斛最为珍贵，因其功效价值比较突出而在药典中被单独列出。
铁皮石斛性味甘，微寒，入胃、肾经。道家经典《道藏》将铁皮石斛列为九大仙草之首，历代名医华佗、张仲景、孙思邈、李时珍更是将它视为“药中仙品”。古代医学典籍中也有很多关于石斛轻身延年、补虚强筋健骨的抗衰老功效记载。
《神农本草经》中记载：“味甘，平。主伤中，除痹，下气，补五脏虚劳，羸弱，强阴。久服厚肠胃，轻身延年。”
《本草纲目》中记载：“石斛除痹下气，补五脏虚劳羸瘦，强阴益精，久服，厚肠胃，补内绝不足，平胃气，长肌肉，逐皮肤邪热痱气，脚膝疼冷痹弱，定志除惊，轻身延年。”并且“补肾益力，壮筋骨，暖水脏，益智清气”。
《日华子本草》中有记载：“治虚损劣弱壮筋骨，暖水脏，益智，平胃气，逐虚邪。”
清代名医赵学敏所注《本草纲目拾遗》中记载石斛：“清胃除虚热，生津、已劳损，以之代茶，开胃健脾，定惊疗风，能镇涎痰，解暑，甘芳降气”，称其为滋阴补益珍品。
现代医学研究发现，人体衰老与自由基氧化息息相关。铁皮石斛多糖对肝微粒细胞脂质过氧化具有抑制作用，且具有较强的清除自由基作用。体内试验表明，铁皮石斛提取物能显著降低辐射小鼠肝组织的MDA含量，具有一定抗氧化损伤作用。除多糖外，一般植物酚类化合物也是一种天然抗氧化剂。多酚和黄酮中的酚羟基结构中的邻位酚羟基很容易被氧化成醌类结构，这使多酚和黄酮类化合物也具有较强的抗氧化性和清除自由基能力。研究表明，铁皮石斛提取物的抗氧化活性与多酚及黄酮含量有明显的相关性。
挤压膨化是在水分、机械剪切、热能和压力综合作用下形成，高温高压短时加工过程。在中药炮制过程中，使饮片的有效成分溶出率高出原药材，在对灵芝、贝母、山药、人参等应用中均取得良好的效果。但对于铁皮石斛，目前仍几乎未见对其膨化处理的技术报道。由于铁皮石斛茎质地较韧，纤维和淀粉成分较多，不利于加工及有效成分的提取，而膨化处理不仅可以改变其质地，而且还可以改善其功效作用。
有专利曾报道过微波膨化技术在叠鞘石斛的破壁干燥中使用情况，与其他常规破壁技术相比，其多糖的溶出率高出12.7％-27.8％(《一种提高叠鞘石斛中多糖成分浸出率的方法》，公开号：CN105348408A)。类似的工艺处理和效果也曾出现在金钗石斛和紫皮石斛中(《一种提高金钗石斛中多糖成分浸出率的方法》，CN105348409A；《一种提高紫皮石斛中多糖成份浸出率的方法》，CN105410920A)。也曾有报道过用霍山石斛在电热爆米花机中处理后的情况，气爆后的霍山石斛的水浸泡液中多糖与生物碱的溶出率比普通对照组分别高出1.6倍和2.2倍(《一种提高霍山石斛成品有效成份水泡浸出率的方法》，公开号：CN102302156A)。但在铁皮石斛中的膨化处理却很少见，曾有专利报道将真空膨化作为一种干燥技术应用于铁皮石斛茎加工，膨化干燥后的的铁皮石斛水分含量和多糖含量均显著高于热风干燥，且与冷冻干燥效果相近(《一种石斛膨化的加工方法》，公开号：CN104432011A)。但以上专利文献仅对各种石斛膨化后的浸提物粗略检测，未对膨化处理后粗提物中的某些组分关联，而且并未对膨化处理后的提取物进行功效验证研究。
发明内容
本发明的目的在于克服现有技术和研究深度存在的不足，而提供一种高抗氧化活性铁皮石斛提取物的制备方法及其应用。
本发明的目的是通过如下技术方案来完成的。这种高抗氧化活性铁皮石斛提取物的制备方法，在一定的膨化压力下，以膨化工艺处理铁皮石斛，分离得到抗氧化活性增强的不同组分的铁皮石斛提取物。
作为优选的，所述的膨化压力为5.0-10.0kgf，此条件下制备的铁皮石斛提取物的抗氧化活性有显著的提升，最佳膨化压力为7.5kgf或9.0kgf。
作为优选的，膨化处理后的铁皮石斛，以溶剂萃取，根据溶剂极性，得到不同抗氧化活性组分的提取物。
作为优选的，膨化处理后的铁皮石斛，以70％乙醇、正己烷和乙酸乙酯依次萃取、分离，得到抗氧化活性增强的不同组分的铁皮石斛提取物。
作为优选的，主要包括如下步骤：
(1)、将铁皮石斛放入挤压膨化机，调节膨化压力5.0-10.0kgf处理，压力释放后，得到相应的膨化铁皮石斛；
(2)、将膨化或未膨化的铁皮石斛粉碎，过筛40-60目，得到铁皮石斛粉；
(3)、以乙醇萃取，分离得到乙醇粗提物：将铁皮石斛粉与70％乙醇按照重量比1:1-1:4比例混合，离心，去除底层沉淀物，得到上层乙醇提取液，将其浓缩、干燥、粉碎后得到铁皮石斛粗提物粉末DOE。
更进一步的，以正己烷萃取，分离得到粗提物在该溶剂萃取下的水溶性组分：将步骤(3)中的提取液与正己烷按照重量比1:2—2:1比例混合，静置萃取，得到最上层的正己烷层、中间层和最下层的水层，去除中间层，收集正己烷层和最下层的水层，分别浓缩、干燥、粉碎后得到粉末DOH和DOW1。
更进一步的，以乙酸乙酯萃取，分离得到在该溶剂萃取下的非水溶性组分：将水层DOW1与乙酸乙酯按照重量比1:2-2:1比例混合，静置萃取，得到上层的乙酸乙酯层和下层的水层，分别浓缩、干燥、粉碎后得到粉末DOEA、DOW2。
本发明通过上述高抗氧化活性铁皮石斛提取物的制备方法，所得的铁皮石斛提取物在食品组合物上的应用。
本发明的有益效果为：铁皮石斛经膨化处理能显著提高不同组分的活性物质以及抗氧化能力，所得的铁皮石斛提取物能应用在食品组合物上。
附图说明
图1膨化或未膨化铁皮石斛提取物及各组分的提取分离流程图；
图2膨化处理对铁皮石斛提取物各组分抗氧化能力的影响(A.DPPH自由基清除能力实验；B.ABTS自由基清除实验；C.铁还原力实验)；
图3.铁皮石斛的70％乙醇提取物(DOE)HPLC色谱图(λ＝230nm)
(A.未膨化组N-DO；B.7.5kgf压力膨化组(7.5-DO)；C.9.0kgf压力膨化组(9.0-DO))
图4.铁皮石斛正己烷萃取物中正己烷层(DOH)的HPLC色谱图(λ＝230nm)
(A.未膨化组N-DO；B.7.5kgf压力膨化组(7.5-DO)；C.9.0kgf压力膨化组(9.0-DO))
图5.铁皮石斛正己烷萃取物中水层(DOW1)的HPLC色谱图(λ＝230nm)
(A.未膨化组N-DO；B.7.5kgf压力膨化组(7.5-DO)；C.9.0kgf压力膨化组(9.0-DO))
图6.铁皮石斛乙酸乙酯萃取物中乙酸乙酯层(DOEA)的HPLC色谱图(λ＝230nm)
(A.未膨化组N-DO；B.7.5kgf压力膨化组(7.5-DO)；C.9.0kgf压力膨化组(9.0-DO))
图7.铁皮石斛乙酸乙酯萃取物中乙酸乙酯层(DOEA)的HPLC色谱图对比(λ＝230nm)
(A.DOEA水解前；B.DOEA水解后)
具体实施方式
下面将结合附图对本发明做详细的介绍：
本发明提供一种高抗氧化活性铁皮石斛提取物的制备方法及其应用，具体步骤如下：
1.采摘2-3年生的铁皮石斛鲜茎，切成2-3cm长度的茎条，烘干后得到铁皮石斛干茎；
2.将步骤1干燥后的铁皮石斛放入挤压膨化机，调节膨化压力5.0-10.0kgf处理，压力释放后，得到相应的膨胀铁皮石斛。膨化后的铁皮石斛茎表皮从亮黄色到深褐色，内部结构蓬松，质地或松软或较脆，有较明显的烤香味；
3.将膨化(步骤2)或未膨化(步骤1)的铁皮石斛粉碎，过筛40-60目，得到铁皮石斛粉；
4.将步骤3所得到的铁皮石斛粉与70％乙醇按照1:1-1:4比例混合，离心，去除底层沉淀物，得到上层乙醇提取液，将其浓缩、干燥、粉碎后得到铁皮石斛粗提物粉末DOE；
5.将步骤4中的提取液与正己烷按照1:2—2:1比例混合，静置萃取，得到最上层的正己烷层、中间层和最下层的水层，去除中间层，收集正己烷层和最下层的水层，分别浓缩、干燥、粉碎后得到粉末DOH和DOW1；
6.将步骤5中的水层DOW1与乙酸乙酯按照1:2-2:1比例混合，静置萃取，得到上层的乙酸乙酯层和下层的水层，分别浓缩、干燥、粉碎后得到粉末DOEA、DOW2；
7.检测膨化或未膨化铁皮石斛提取物在步骤4中的DOE、步骤5中的DOW1和步骤6中的DOEA的多糖、多酚和类黄酮化合物含量；
8.检测膨化或未膨化铁皮石斛提取物在步骤4中的DOE、步骤5中的DOW1和步骤6中的DOEA的抗氧化能力，以DPPH清除力、ABTS清除力和铁还原力三种方式评价其抗氧化活性。
实施例1.铁皮石斛的溶剂分离萃取
分别依次以70％乙醇、正己烷和乙酸乙酯溶剂静置萃取、分离，收集得到不同极性的提取物组分。
取干燥后的铁皮石斛粉末100g，添加4倍70％乙醇浸提、离心后，去除乙醇沉淀物，取上清液进行浓缩、干燥、粉碎，得到粗提物DOE粉末17.15g。
将DOE溶解于500ml蒸馏水，与正己烷按1:1充分混合后，在分液漏斗中静置萃取1小时，收集萃取液的最上层非极性萃取液与最下层的水层萃取液，分别浓缩、干燥、粉碎后，得到提取物组分DOH和DOW1，为0.04g和2.28g。
将DOW1溶解于500ml蒸馏水，与乙酸乙酯按1:1充分混合后，在分液漏斗中静置萃取1小时，收集萃取液的上层与下层，分别浓缩、干燥、粉碎后，得到提取物组分DOEA和DOW2，为0.03g和0.19g。
在7.5kgf和9.0kgf压力下膨化后的铁皮石斛，其提取物及其各组分也按照以上流程分离(图1)。
实施例2.铁皮石斛提取物及其各组分的抗氧化活性评价
为验证铁皮石斛提取物及其各组分的抗氧化效果，采取稳定性较好、灵敏度较高的三种体外抗氧化活性评价方法。
实验例2.1.DPPH自由基清除能力
利用铁皮石斛提取物中的抗氧化剂与DPPH自由基发生颜色反应。取100μL铁皮石斛提取液及各组分与等体积的0.2mM DPPH溶液充分混合，反应2小时后，在520nm下检测吸光度。样品的自由基清除率以IC50(清除50％DPPH时的提取液浓度，mg/mL)表征，IC50越低，样品的抗氧化能力越强。
实验例2.2.ABTS自由基清除能力
利用铁皮石斛提取物中的抗氧化剂与ABTS自由基发生颜色反应。以7.4mM ABTS与2.6mM过硫酸钾混合，在暗处放置12小时，制备得到ABTS+工作液，保持其溶液在734nm下吸光度范围在1.0-1.5内，稀释后，加入铁皮石斛提取液50μL，常温下反应60分钟后，在734nm处检测吸光度值。与DPPH实验相同，样品的自由基清除率以IC50(清除50％DPPH时的提取液浓度，mg/mL)表征，IC50越低，样品的抗氧化能力越强。
实验例2.3.铁还原力实验
Fe3+在抗氧化剂的作用下被还原成Fe2+，产生颜色反应。以300mM醋酸缓冲液(pH3.6)、10mM TPTZ溶液和20mM三氯化铁溶液(FeCl3·6H2O)按照10：1:1混合，制备得到FRAP试剂。取6μL铁皮石斛提取液与180μL FRAP试剂在37℃水浴中反应5分钟后，检测其在593nm处的吸光度。以适宜浓度的FeSO4·7H2O作标准品绘制标准线。铁还原力越强，样品的抗氧化能力越强。
实施例3.膨化前后活性成分的变化
实验例3.1.多糖、多酚及类黄酮的含量分析
铁皮石斛提取物及各组分的多糖含量采取苯酚-硫酸法检测。铁皮石斛提取物中的多糖在浓硫酸的作用下，水解成单糖，并迅速脱水成糖醛衍生物，与苯酚发生颜色反应，在490nm处有特征吸收。取1.00mL处理后的提取液样品，加入1.0mL苯酚溶液，然后快速加入5.0mL浓硫酸，静置10分钟。在30℃水浴中充分反应20分钟，检测其在490nm处的吸光度。以D-葡萄糖作为标准品绘制标准曲线。
铁皮石斛提取物及各组分的多酚含量采取福林酚法检测。福林酚试剂氧化提取液中的多酚中-OH基团，发生颜色反应，在765nm处有特征吸收。取处理后的提取液样品10μL，稀释80倍后，依次加入0.9N福林酚试剂50μL和20％碳酸钠溶液150μL，在常温下暗处反应2小时后，在750nm处检测其吸光度。以没食子酸作为标准品绘制标准曲线。
铁皮石斛提取液及各组分的总类黄酮含量采取DMACA法检测。取处理后的提取液10μL，加入200μL 0.1％p-对二甲氨基肉桂醛(DMACA)，充分混合，常温下在暗处反应10分钟，检测其在640nm处的吸光度。以(+)-儿茶素作标品绘制标准曲线。
实验例4.利用反相高效液相色谱分析提取物及组分的分子量
在Agilent 1200液相色谱下，采取DAD检测器、C18柱(henomenex Kinetex C18，250×4.6mm,5μ)，流动相为0.1％三氟乙酸(TFA)、5％乙腈(ACN)和纯净水。流速为1.2mL/min,DAD检测波长为230nm、280nm和330nm。进样量为20μL,柱温为30℃，洗脱50分钟。
其中，DOE和DOW1提取物组分用纯净水溶解，DOEA组分以二甲基亚砜(DMSO)溶解，过滤0.45μL滤膜后进样检测。
【具体实施例结果】
1.膨化前后得率的变化
膨化处理对提取物及各组分的得率影响结果如表1所示。未膨化的粗提物DOE得率为17.2％，而经7.5kgf和9.0kgf压力膨化后的得率分别提升为28.36％、36.99％，得率提高了65％和115％。同样类似的结果趋势也出现在DOE的分离组分DOH、DOW1、DOEA和DOW2中，各组分与N-DO组相比，7.5-DO和9.0-DO组的得率明显升高(DOEA组分膨化组间差异不显著)。
表1.膨化前后铁皮石斛提取物及各组分的得率
结果以平均值±标准偏差标示，每个数据做三次独立平行实验。根据Tukey多重样本间差异显著性分析，同一行肩标不同小写字母者差异显著(P＜0.05)。
2.膨化前后多糖、多酚及类黄酮含量的变化
膨化处理对提取物及各组分的多糖、多酚及类黄酮含量的影响，结果如表2、表3、表4。表2-表4中，经过7.5kgf和9.0kgf膨化处理后的多糖、多酚及类黄酮含量明显高于未膨化组N-DO。
表2为70％乙醇提取物的各物质含量，9.0-DO和7.5-DO膨化处理组的多糖含量比N-DO提高了2.6倍和3.4倍；9.0-DO和7.5-DO膨化处理组的多酚含量比N-DO提高了1.8倍和2.3倍；9.0-DO和7.5-DO膨化处理组的类黄酮含量比N-DO提高了1.4倍和2.2倍。
表2.铁皮石斛粗提取物的多糖、多酚及类黄酮含量(DOE)
结果以平均值±标准偏差标示，每个数据做三次独立平行实验。根据Tukey多重样本间差异显著性分析，同一列肩标不同小写字母者差异显著(P＜0.05)。
表3为正己烷提取物的水层组分各物质含量，9.0-DO和7.5-DO膨化处理组的多糖含量比N-DO提高了0.2倍和0.6倍；9.0-DO和7.5-DO膨化处理组的多酚含量比N-DO提高了2.8倍和3.9倍；9.0-DO和7.5-DO膨化处理组的类黄酮含量比N-DO提高了2.6倍和3.6倍。
表3.铁皮石斛的正己烷提取物中水层组分的多糖、多酚和类黄酮含量(DOW1)
结果以平均值±标准偏差标示，每个数据做三次独立平行实验。根据Tukey多重样本间差异显著性分析，同一列肩标不同小写字母者差异显著(P＜0.05)。
表4为乙酸乙酯提取物的乙酸乙酯层组分各物质含量。除了类黄酮含量(由于该组分类黄酮含量较少，误差较大)，膨化处理组的多糖与多酚均明显高于未膨化组，但膨化组组间的差异并不显著。
表4.铁皮石斛的乙酸乙酯提取物中乙酸乙酯层组分的多糖、多酚及类黄酮含量(DOEA)
结果以平均值±标准偏差标示，每个数据做三次独立平行实验。根据Tukey多重样本间差异显著性分析，同一列肩标不同小写字母者差异显著(P＜0.05)。ns,无统计学差异。
3.膨化前后提取物及各组分的抗氧化活性变化
根据DPPH实验结果,DOE与DOW1组分下的9.0-DO和7.5-DO的IC50值均低于N-DO组，膨化组的DOE与DOW1组分明显具有更高的抗氧化力。DOEA中按照N-DO(0.78mg/mL)、7.5-DO(0.55mg/mL)、9-DO(0.32mg/mL)的顺序IC50值减少，与膨化的强度成正比，检测出了明显较高的抗氧化力(图2A)。
根据ABTS实验结果,DOE组分中，与N-DO(2.02mg/mL)相比，在7.5kgf(1.61mg/mL)与9.0kgf(1.33mg/mL)条件膨化下，抗氧化力明显更高。DOW1组分中，7.5-DO的IC50值(1.88mg/mL)明显低于N-DO组，但膨化组间对比差异并不显著。DOEA组分中，N-DO(0.30mg/mL)、7.5-DO(0.21mg/mL)、9-DO(0.18mg/mL)的IC50值依次明显减少(图2B)，抗氧化能力逐渐增强。
在FRAP结果中,DOE与DOW1中膨化组铁还原力明显高于对照的未膨化组，而DOEA组分中膨化前后的还原力无显著差异(图2C)。
图2膨化处理对铁皮石斛提取物各组分抗氧化能力的影响，其中，A.DPPH自由基清除能力实验；B.ABTS自由基清除实验；C.铁还原力实验。结果以平均值±标准偏差标示，每个数据做三次独立平行实验。根据Tukey多重样本间差异显著性分析，同一列肩标不同小写字母者差异显著(P＜0.05)。
4.利用反相高效液相色谱分析
为分析各组分在膨化前后的变化，本发明利用含C18柱的反相高效液相色谱，比较了N-DO、7.5-DO和9.0-DO的峰值模式。筛选的波长230nm、280nm、330nm中，唯有230nm处出现最大吸收峰，可推测其分子结构是非黄酮类的多酚物质：香豆素或联苄类化合物。以下是个组分在230nm处峰值模式考察结果：
DOH组分中的HPLC峰(图4)出现在40-45分钟之间，而且膨化组的7.5-DO和9.0-DO的峰值响应值明显高于N-DO组；与之相反的是，在DOEA中(图6)，峰主要出现在35-43分钟内，但在未膨化的N-DO中响应值最高，而随着膨化强度增加峰值减少；而在此保留时间段内，DOE(图3)和DOW1(图5)在膨化前后均未检测出峰值。
针对DOEA组分中峰值响应值随着膨化处理强度的增强而减弱的现象，推测可能由于DOEA组分中包含大量与糖苷结合的多酚类化合物。本研究中对N-DO组的DOEA组进行酸水解处理，分析水解前后在相同HPLC条件下的峰值对照，并对酸水解前后的还原糖含量进行检测。结果显示(图7)，在保留时间35-43分钟内，与水解前相比，水解后的响应峰出现分散。水解前后的还原糖的含量分别为139.84ug/mL和187.30ug/mL，水解后还原糖有明显的增加(P＜0.001)。
表5.铁皮石斛的乙酸乙酯萃取物的乙酸乙酯层组分的还原糖含量
结果以平均值±标准偏差标示，每个数据做三次平行实验。***表示结果差异显著(P＜0.001)。
可以理解的是，对本领域技术人员来说，对本发明的技术方案及发明构思加以等同替换或改变都应属于本发明所附的权利要求的保护范围。

Claims (9)

1.一种高抗氧化活性铁皮石斛提取物的制备方法，其特征在于：在一定的膨化压力下，以膨化工艺处理铁皮石斛，分离得到抗氧化活性增强的不同组分的铁皮石斛提取物。
2.根据权利要求1所述的高抗氧化活性铁皮石斛提取物的制备方法，其特征在于：所述的膨化压力为5.0-10.0kgf。
3.根据权利要求1或2所述的高抗氧化活性铁皮石斛提取物的制备方法，其特征在于：膨化处理后的铁皮石斛，以溶剂萃取，根据溶剂极性，得到不同抗氧化活性组分的提取物。
4.根据权利要求3所述的高抗氧化活性铁皮石斛提取物的制备方法，其特征在于：膨化处理后的铁皮石斛，以70％乙醇、正己烷和乙酸乙酯依次萃取、分离，得到抗氧化活性增强的不同组分的铁皮石斛提取物。
5.根据权利要求1所述的高抗氧化活性铁皮石斛提取物的制备方法，其特征在于：主要包括如下步骤：
(1)、将铁皮石斛放入挤压膨化机，调节膨化压力5.0-10.0kgf处理，压力释放后，得到相应的膨化铁皮石斛；
(2)、将膨化或未膨化的铁皮石斛粉碎，过筛40-60目，得到铁皮石斛粉；
(3)、将铁皮石斛粉与70％乙醇按照重量比1:1-1:4比例混合，离心，去除底层沉淀物，得到上层乙醇提取液，将其浓缩、干燥、粉碎后得到铁皮石斛粗提物粉末DOE。
6.根据权利要求5所述的高抗氧化活性铁皮石斛提取物的制备方法，其特征在于：将步骤(3)中的提取液与正己烷按照重量比1:2—2:1比例混合，静置萃取，得到最上层的正己烷层、中间层和最下层的水层，去除中间层，收集正己烷层和最下层的水层，分别浓缩、干燥、粉碎后得到粉末DOH和DOW1。
7.根据权利要求6所述的高抗氧化活性铁皮石斛提取物的制备方法，其特征在于：将水层DOW1与乙酸乙酯按照重量比1:2-2:1比例混合，静置萃取，得到上层的乙酸乙酯层和下层的水层，分别浓缩、干燥、粉碎后得到粉末DOEA、DOW2。
8.根据权利要求2或5所述的高抗氧化活性铁皮石斛提取物的制备方法，其特征在于：所述的膨化压力为7.5kgf或9.0kgf。
9.一种上述任意一项权利要求所述的高抗氧化活性铁皮石斛提取物的制备方法，所得的铁皮石斛提取物在食品组合物上的应用。
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