CN109549883A - 一种植物抗敏舒缓剂的制备方法 - Google Patents

Abstract

本发明实施例提供一种植物抗敏舒缓剂的制备方法，涉及化妆品领域，能够从不同的机理抗击过敏反应，根据不同抗敏途径，确定各天然产物的添加量，实现多层次多途径抗敏。该植物抗敏舒缓剂的制备方法包括：将五种植物提取物包括马齿苋提取物、苦参提取物、竹叶提取物、黄芩提取物、虎杖白藜芦醇按照质量比40:10:10:1:1混合，于万级制备车间，0.22μm过滤除菌后，得到植物抗敏舒缓剂。

Description

一种植物抗敏舒缓剂的制备方法

技术领域

本发明涉及化妆品领域，尤其涉及一种植物抗敏舒缓剂的制备方法。

背景技术

过敏反应是指人体对抗原物质接触后的不正常反应。皮肤过敏一般表现为干燥、瘙痒、红肿和色素沉着等，皮肤是人体中最大的器官，是机体的主要保护屏障，机体的异常情况也可以在皮肤上反应出来，因此皮肤对机体的健康至关重要。当今世界范围的美容热，尤其是肌肤的美容热深受关注。而回归自然的理念使人们在选择护肤品时更倾向于选择天然植物提取物，因此天然的护肤品深受广大消费者的青睐。

马齿苋( Portulaca oleracea L.)，又名马舌菜、长命菜等，为马齿苋科马齿苋属一年生肉质草本植物。多以其干燥地上部分入药，盛产于四川，遍布全国。马齿苋的营养价值和药用价值极高，是我国卫生部划定的 78 种药食同源的野生植物之一 。具有清热解毒、 凉血止血的功能，现代药理研究表明:马齿苋具有显著的抗敏、抗菌、 抗氧化、 抗衰老、 抗缺氧、 镇痛、 抗炎和神经保护等作用。

黄芩(Scutellaria baicalensis Georgi)为唇形科(Labiatae)黄芩属多年生草本植物，以根入药，属我国大宗中药材，药用历史悠久，传统中医认为黄芩具有清热燥湿、泻火解毒、 止血安胎等功效。现代研究表明黄芩中的主要成分为黄芩苷、黄芩素、汉黄芩苷、汉黄芩素等黄酮类成分，且为其主要的药效成分，具有抗敏、抗炎、抗菌、抗氧化、抗过敏等多种功效。

苦参为豆科槐属植物苦参的干燥根，又名水槐、地槐、白茎，始载于《神农本草经》，列为中品，是我国常用传统中药。李时珍谓:“苦以味名，参以功名。”临床研究也证实，苦参含有多种化学成分并具有广泛的生物活性。其传统药理作用以抑菌、抗心律失常为主。其所含化学成分主要为生物碱和黄酮类化合物，其次还含有二烷基色原酮、醌类和三萜皂苷等。

虎杖为我国的传统中药，为蓼科(Polygonaceae)蓼属植物虎杖（Polygonumcuspidatum）的干燥根和根状茎。虎杖具有悠久的用药历史，其性微寒，味微苦，归肝、胆、肺经。具有袪风利湿，散瘀定痛，止咳化痰等功能，主要用于关节痹痛，水火烫伤，跌扑损伤，痈肿疮毒等症状的治疗。虎杖中的主要化学成分为白藜芦醇、大黄素、大黄酚，且为主要药效成分。

我国是世界竹子的主要产区之一，在广东、广西、福建、浙江、湖南、江西、四川、江苏、贵州和云南等省均有大规模的种植，作为竹子加工利用后的废弃物，竹叶虽然在我国有悠久的药用和食用历史，但是对其开发利用相对滞后，近年来，随着生物衰老学说及自由基生命科学的发展，使得具有较强抗氧化和清除自由基作用的黄酮类物质受到重视，对竹叶中黄酮类物质的研究也引起关注，大量的研究表明，竹叶黄酮类化合物有类似超氧化物歧化酶和谷胱甘肽过氧化物酶的作用具有优良的清除自由基、抗氧化抗衰老，美化肌肤等功效，因此，竹叶黄酮是一种非常有应用前途的天然食品抗氧化剂，在多个领域有着广泛的应用潜力。

本发明旨在提供一种植物抗敏舒缓剂，主要包括五种植物提取物的复合，包括黄芩提取物、马齿苋提取物、苦参提取物、竹叶提取物、虎杖提取物。并阐明植物抗敏舒缓剂的制备方法。

本发明的目的之一是，提供一种植物抗敏舒缓剂的制备方法。

本发明的目的之二是，提供该植物抗敏舒缓剂的抗敏功效评价。

本发明的目的之三是，提供一种安全可靠的化妆品原料添加剂。

发明内容

本发明实施例提供了一种物抗敏舒缓剂的制备方法，能够采用简单快速的方法，制备一种高效抗敏舒缓剂，从不同的机理抗击过敏反应，根据不同抗敏途径，确定各天然产物的添加量，实现多层次多途径抗敏。

为达到上述目的，本发明实施例采用如下技术方案：

一种植物抗敏舒缓剂的制备方法，主要包括以下几个步骤：

（1）黄芩提取物的制备：包括药材粉碎，加入75%的乙醇提取，滤纸抽滤，减压浓缩，石油醚萃取除杂，乙酸乙酯萃取有效部位，减压浓缩，冷冻干燥，样品采用亚硝酸钠—硝酸铝法测定黄酮含量，并通过基因水平检测其抗敏活性。

其中，药材粉碎力度若过大，会影响有效成分的提取率；粉碎力度过小，则需消耗更多的能量，因此选择80目过筛。所述的提取液为75%乙醇，能够高效的提取黄芩中的有效黄酮类成分。所述料液比为1:5~1:15，提取温度为50~60℃，提取时间为5~8h，提取次数3-4次，减压浓缩温度为46~55℃，石油醚、乙酸乙酯萃取溶剂添加为2-4倍体积。

（2）苦参黄酮的制备：包括药材粉碎，加入75%酒精进行浸渍提取，滤纸抽滤，合并滤液减压浓缩，所得浓缩浸膏经过AB-8大孔吸附树脂分离，依次采用水、70%的乙醇洗脱，收集70%乙醇洗脱液，所得样品冷冻干燥，样品采用亚硝酸钠—硝酸铝法测定黄酮含量，并通过透明质酸酶抑制试验评价其抗敏效果。

其中，粉碎选择80目过筛，温度过高会导致有效成分分解变质，温度过低则耗时费力，因此浸提温度选择50-60℃；所述料液比为1：10~1:15；所述提取次数为3~4次，提取时间为5~10h每次。大孔吸附树脂上样量与树脂质量比为1:10~1:15，静态吸附6~10h，洗脱体积为柱体积的3~5倍，流速20-100ml/min。

（3）虎杖提取物白藜芦醇的制备：药材粉碎，加入95%的乙醇浸提，滤纸抽滤，滤液减压浓缩后，乙酸乙酯萃取有效成分，减压浓缩液进行中压制备，柱材为反相C-18，凝胶分离得高纯度白藜芦醇，备用，采用HPLC法测定器含量为98%。

其中，所述提取温度为50-60℃，提取次数3~4次，提取时间5~8h每次；所述中压制备洗脱条件为10%甲醇水洗脱3个柱体积（除杂）；20%甲醇水洗脱3个柱体积（富集白藜芦醇段落），柱材为反相C-18材料，流速为10-15ml/min；所述凝胶为Sephadex G-20，洗脱液为氯仿：甲醇（1:4）。

（4）马齿苋的制备：马齿苋药材加入75%的乙醇提取，滤纸抽滤，滤液减压浓缩，石油醚脱色去除脂溶性色素，AB-8大孔吸附树脂分离，富集水溶性成分，浓缩液加入去离子水重结晶，马齿苋结晶经抗组胺水平检测， 100ppm浓度可显著抑制组胺的释放。

其中，所述提取温度为50-60℃，提取次数3~4次，料液比1:10~1:15提取时间5~8h每次；AB-8大孔吸附树脂上样量与树脂质量比为1:10~1:15，静态吸附5~8h，洗脱体积为3~4倍柱体积，流速为10-30ml/min；所述重结晶条件：结晶前水溶液比重1.05-1.10，结晶温度4℃，结晶时间2~4h。

（5）竹叶提取物制备：竹叶原药材，加入50%~70%的酒精进行提取，滤纸抽滤，滤液减压浓缩，浓缩液经大孔吸附树脂分离，依次采用去离子水、70%乙醇、100%乙醇洗脱，收集70%乙醇洗脱液，冷冻干燥，采用亚硝酸钠—硝酸铝法测定黄酮含量，并通过透明质酸酶抑制试验评价其抗敏效果。

其中，所述提取温度为50~60℃，提取时间为5~8h，提取次数3~4次；所述减压浓缩温度为48~55℃；所述大孔吸附树脂为D101型；所述洗脱体积为3~5倍柱体积，流速为10-30ml/min。

（6）上述马齿苋提取物、黄芩提取物、五倍子提取物、苦参提取物、虎杖白藜芦醇五种植物提取物的复合物，各组分的质量百分比为马齿苋：苦参：竹叶：黄芩：虎杖白藜芦醇=40:10:10:1:1。

本发明使用的大孔吸附树脂的预处理：用95%乙醇浸泡24小时以上，用乙醇湿法装柱。继续用乙醇洗脱至洗脱液与水混合为澄清为止。接着用5%的稀盐酸洗脱柱子至7~8个柱体积，再用水洗脱至洗脱液的PH值为中性为止。并将液面放至与树脂齐平，以便上样。

本发明的有益效果：

（1）本发明的优点和效果在于采用科学先进的制备手段，包括中压、

高压液相制备、凝胶分离、大孔吸附树脂分离、重结晶技术等，分离高纯度高活性天然植物成分；

（2）本发明中涉及到天然植物提取原料，分别从不同的机理抗击过敏反应，根据不同抗敏途径，确定各天然产物的添加量，实现多层次多途径抗敏；

（3）本发明进一步拓展了植物抗敏舒缓剂在护肤品以及化妆品中的应用。

附图说明

附图1为植物抗敏舒缓剂的提取制备工艺流程图；

附图2为竹叶提取物、苦参提取物、黄芩提取物黄酮含量检测结果；

附图3为竹叶提取物、苦参提取物、黄芩提取、阳性对照甘草酸二钾物抑制透明质酸酶结果；

附图4为黄芩基因水平检测结果；

附图5为马齿苋提取物抗组胺检测结果。

具体实施方式

为使本发明实施例的目的、技术方案和优点更加清楚，下面对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。

植物抗敏舒缓剂的生产制备工艺如图1所示，具体过程如下：

1）取500g黄芩，药材粉碎，过80目筛，加入5L75%的乙醇提取3次，提取温度为60℃，每次8h，合并所得滤液，滤纸抽滤，减压浓缩，得黄芩粗提物160g；所得粗提取物粉末加入500ml去离子水形成混悬液，混悬液加入1.5L的石油醚萃取除杂，重复三次，去除脂溶性杂质；下层水相再加入1.5L的乙酸乙酯萃取有效部位，重复三次，合并上清液，减压浓缩，冷冻干燥，得黄芩抗敏活性成分共计25g，样品采用亚硝酸钠—硝酸铝法测定黄酮的含量为13%。

2）取竹叶、苦参分别500g，药材粉碎，过80目筛，加入6L75%的乙醇提取3次，提取温度为60℃，每次8h，合并所得滤液，滤纸抽滤，减压浓缩成浸膏，分别称取40g竹叶、苦参，经过D-101，AB-8大孔吸附树脂分离，依次用去离子水、70%的乙醇洗脱，收集70%乙醇洗脱富集段，大孔吸附树脂上样量与树脂质量比为1:10，静态吸附8h，流速为20ml/min，黄酮富集段经减压浓缩，冷冻干燥，得苦参提取物，竹叶提取物；样品采用亚硝酸钠—硝酸铝法测定黄酮的含量分别为苦参提取物8 %，竹叶提取物36%。

3）取马齿苋500g马齿苋药材加入75%的乙醇提取，滤纸抽滤，滤液减压浓缩，得马齿苋粗提取物77g，石油醚脱色去除脂溶性色素，AB-8大孔吸附树脂分离，富集水溶性成分，流速为40ml/min；浓缩液加入去离子水，得到比重为1.05的液体，结晶，结晶温度4℃，结晶时间2h，得马齿苋提取物8g。

4）500g虎杖，粉碎，过80目筛，加入95%的乙醇浸提，提取温度60℃，提取3次，合并三次滤液，滤纸抽滤，滤液减压浓缩后，加入100ml水使其形成混悬液，混悬液中加入400ml乙酸乙酯萃取有效成分，减压浓缩浸膏，进行中压制备，制备流速为10ml/min，分别用10%、20%、30%、100%甲醇水进行洗脱，收集20%洗脱部位，减压回收，得纯度为70%白藜芦醇，经葡聚糖凝胶分离，洗脱液氯仿：甲醇=1:4洗脱，洗脱液减压浓缩得高纯度白藜芦醇，备用，采用HPLC法测定器含量为98%。

5）上述所得提取物按照马齿苋提取物40mg/ml，竹叶提取物10 mg/ml，苦参提取物10 mg/ml，黄芩提取物1 mg/ml，虎杖白藜芦醇1 mg/ml，溶解于50%的1,3-丁二醇水中，即得植物抗敏舒缓剂。

以上所述，仅为本发明的具体实施方式，但本发明的保护范围并不局限于此，任何熟悉本技术领域的技术人员在本发明揭露的技术范围内，可轻易想到变化或替换，都应涵盖在本发明的保护范围之内。因此，本发明的保护范围应以所述权利要求的保护范围为准。

Claims (8)

1.一种植物抗敏舒缓剂的制备方法，其特征在于，所述植物抗敏舒缓剂的制备方法包括：将五种植物提取物包括马齿苋提取物、苦参提取物、竹叶提取物、黄芩提取物、虎杖白藜芦醇按照质量比40:10:10:1:1混合，于万级制备车间，0.22μm过滤除菌后，得到植物抗敏舒缓剂。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述植物抗敏舒缓剂的制备方法，具体包括：

（1）黄芩提取物的制备：包括药材粉碎，加入75%的乙醇提取，滤纸抽滤，减压浓缩，石油醚萃取除杂，乙酸乙酯萃取有效部位，减压浓缩，冷冻干燥；

（2）苦参黄酮的制备：包括药材粉碎，加入75%酒精进行浸渍提取，滤纸抽滤，合并滤液减压浓缩，所得浓缩浸膏经过AB-8大孔吸附树脂分离，收集70%乙醇洗脱液，所得样品冷冻干燥，备用；

（3）虎杖提取物白藜芦醇的制备：药材粉碎，加入95%的乙醇浸提，滤纸抽滤，滤液减压浓缩后，乙酸乙酯萃取有效成分，减压浓缩液进行中压制备，凝胶分离得高纯度白藜芦醇，备用，采用HPLC法测定器含量为98%；

（4）马齿苋的制备：马齿苋药材加入75%的乙醇提取，滤纸抽滤，滤液减压浓缩，石油醚脱色去除脂溶性色素，AB-8大孔吸附树脂分离，富集水溶性成分，浓缩液加入水重结晶，备用；

（5）竹叶提取物制备：竹叶原药材，加入50%~70%的酒精进行提取，滤纸抽滤，滤液减压浓缩，浓缩液经D-101大孔吸附树脂分离，收集70%乙醇洗脱液，冷冻干燥备用；

（6）将马齿苋提取物、黄芩提取物、五倍子提取物、苦参提取物、虎杖白藜芦醇提取物复合，各组分的质量百分比为马齿苋提取物：苦参提取物：竹叶提取物：黄芩提取物：虎杖白藜芦醇提取物=40:10:10:1:1。

3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，所述步骤（1）中药材粉碎力度若过大，会影响有效成分的提取率；粉碎力度过小，则需消耗更多的能量，因此选择30目过筛；所述的提取溶剂为75%乙醇，能够高效的提取黄芩中的有效黄酮类成分；所述提取料液比为1:5~1:15，提取温度为50~60℃，提取时间为5~8h，提取次数3-4次，减压浓缩温度为46~55℃，石油醚、乙酸乙酯萃取溶剂添加为2-4倍体积。

4.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，所述步骤（2）药材粉碎选择30目过筛，温度过高会导致有效成分分解变质，温度过低则耗时费力，因此浸提温度选择50-60℃；所述料液比为1：10~1:15；所述提取次数为3~4次，提取时间为5~10h每次；大孔吸附树脂上样量与树脂质量比为1:10~1:15，静态吸附6~10h，洗脱体积为柱体积的3~5倍，流速20-100ml/min。

5. 根据权利要求2所述的方法，其特征在于，步骤（3）所述提取温度为50-60℃，提取次数3~4次，提取时间5~8h每次；所述中压制备洗脱条件为10%甲醇水洗脱3个柱体积（除杂）；20%甲醇水洗脱3个柱体积（富集白藜芦醇段落），柱材为反相C-18，流速为10-15ml/min；所述凝胶为Sephadex G-20，洗脱液为氯仿：甲醇（1:4），流速为2-5ml/min。

6.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，步骤（4）所述提取温度为50-60℃，提取次数3~4次，料液比1:10~1:15提取时间5~8h每次；AB-8大孔吸附树脂上样量与树脂质量比为1:10~1:15，静态吸附5~8h，洗脱体积为3~4倍柱体积，流速为10-30ml/min；所述重结晶条件为，结晶前液体比重1.05-1.1，结晶温度4℃，结晶时间2~4h。

7.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，步骤（5）所述提取温度为50~60℃，提取时间为5~8h，提取次数3~4次；所述减压浓缩温度为48~55℃；所述大孔吸附树脂为D101型；所述洗脱体积为3~5倍柱体积，流速为10-30ml/min。

8.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，所述步骤（5）组分的质量百分比为马齿苋提取物：苦参提取物：竹叶提取物：黄芩提取物：虎杖白藜芦醇提取物=40:10:10:1:1。