CN106473985A - 一种马齿苋抗敏舒缓液的制备方法 - Google Patents

一种马齿苋抗敏舒缓液的制备方法 Download PDF

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Abstract

本发明涉及物质提取技术领域，具体涉及一种马齿苋抗敏舒缓液的制备方法，步骤包括，溶剂提取马齿苋的有效成分；脂溶性色素的去除；大孔树脂分离；结晶及重结晶提纯；添加溶剂形成抗敏舒缓液。本发明首次利用结晶法制备马齿苋提取物，为马齿苋提取物的制备、提纯提供了新方法。经HPLC图谱测定，结晶法相对于传统的水提或醇提法，其提取物的纯度明显提高。

Description

一种马齿苋抗敏舒缓液的制备方法
技术领域
本发明涉及物质提取技术领域，具体涉及马齿苋抗敏舒缓液的制备方法。
背景技术
化妆品使用不当就会引起皮肤过敏，瘙痒、脱屑、红肿、红血丝和色素沉着等。因化妆品而导致的接触性皮炎的患病率大大提升。化妆品接触性皮炎常见的致敏原有防腐剂、香料香精、表明活性剂、防晒剂、抗氧化剂等等，这些成分是化妆品必要添加剂。随着皮肤敏感越来越受到人们的重视，近年来化妆品行业正逐渐朝着崇尚绿色、回归自然的方向发展。研制独特的天然抗敏活性物质，并将其添加到化妆品中，已成为化妆品行业最活跃的主题之一。
马齿苋(Portulaca oleracea L.)，又名马舌菜、长命菜等，为马齿苋科马齿苋属一年生肉质草本植物。多以其干燥地上部分入药，遍布全国，盛产于四川。马齿苋的营养价值和药用价值极高，是我国卫生部划定的78种药食同源的野生植物之一。具有清热解毒、凉血止血的功能，现代药理研究表明，马齿苋具有抗菌、抗氧化、抗衰老、抗缺氧、镇痛、抗炎和神经保护等作用。
现有技术中，马齿苋提取物的制备方法多采用水提或醇提法，水提或醇提法是利用离心作用分离提取液，最后取上清液，弃去废渣，这种方法所得提取物纯度较低。目前，马齿苋提取物的制备方法中尚未涉及结晶提取工法。在提高提取物的纯度上，结晶提取工艺与水提或醇提法相比，纯度更高。
发明内容
本发明的一个目的是提供一种马齿苋抗敏舒缓液的制备方法，以解决现有技术中马齿苋提取物纯度较低的问题。
本发明还有一个目的是提供一种马齿苋抗敏舒缓液的制备方法，以提供一种利用结晶法制备马齿苋提取物的方法。
本发明提供一种马齿苋抗敏舒缓液的制备方法，包括以下步骤：
步骤一，以马齿苋全草为原料，除杂洗净后捣碎，得到捣碎物；
步骤二，将乙醇加入所述捣碎物中，过滤、减压浓缩，得到粗提取浓缩液；
步骤三，向所述粗提取浓缩液中加入去离子水，形成悬浮液，将石油醚加入所述悬浮液中，使液体分为上下两层，取下层的水相部进行减压浓缩，得到马齿苋粗提取物；
步骤四，用去离子水稀释所述马齿苋粗提取物，得到马齿苋粗提取液，将所述马齿苋粗提取液通过大孔吸附树脂，进行吸附，然后再洗脱、减压浓缩，得到浓缩液；
步骤五，稀释所述浓缩液，然后结晶提纯，得到马齿苋提取物结晶；
步骤六，向所述马齿苋提取物结晶中加入溶剂溶解，过滤，得到马齿苋抗敏舒缓提取液。
作为本发明的优选方式，所述步骤二中，将乙醇加入所述捣碎物中，过滤、减压浓缩，得到粗提取浸膏的具体步骤如下：
将加入乙醇的所述捣碎物放置在循环加热装置内，在55～65℃温度下，加热提取3～6h，重复三次上述提取过程，得到提取液；
过滤所述提取液，得到滤液；
在48～55℃和-0.09Mpa环境下减压浓缩所述滤液，得到粗提取浸膏。
作为本发明的优选方式，所述步骤二中，所述乙醇的浓度为75％，所述捣碎物与所述乙醇的质量比为1:5～1:10。
作为本发明的优选方式，所述步骤三中，所述悬浮液与所述石油醚的体积比为1:2～1:4。
作为本发明的优选方式，所述步骤四中，所述马齿苋粗提取物与所述大孔吸附树脂质量比为1:5～1:10，所述大孔吸附树脂为D-101大孔吸附树脂。
作为本发明的优选方式，所述步骤四中，洗脱采用去离子水洗脱液，洗脱流速为40～100ml/min，洗脱体积为3～4倍柱体积。
作为本发明的优选方式，所述步骤五中，稀释所述浓缩液，然后结晶提纯，得到马齿苋提取物结晶的具体步骤如下：
向所述浓缩液中加入去离子水，加热至50～60℃，使所述浓缩液充分溶解，得到浓缩液稀释液，所述浓缩液与所述去离子水的质量比为2:1；
在0—4℃条件下，将所述浓缩液稀释液静置2～4h，进行结晶，并重结晶3～5次，得到马齿苋提取物结晶。
作为本发明的优选方式，所述步骤六中，将所得马齿苋提取物结晶干燥后，加入浓度为50％的戊二醇或者33％的1,3—丁二醇的溶剂进行溶解，利用0.22um滤膜过滤，得到马齿苋抗敏舒缓提取液。
作为本发明的优选方式，所述马齿苋抗敏舒缓提取液可用于制备抗敏舒缓化妆品、护肤品。
本发明提供了一种马齿苋抗敏舒缓液的制备方法，采用溶剂提取、萃取以及大孔吸附树脂分离、结晶、重结晶的工艺方法制备马齿苋提取物。该方法首次利用结晶法制备马齿苋提取物，为马齿苋提取物的制备、提纯提供了新方法。经HPLC图谱测定，结晶法相对于传统的水提或醇提法，其提取物的纯度明显提高。
附图说明
为了更清楚地说明本发明实施例中的技术方案，下面将对实施例描述中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图仅仅是本发明的一些实施例，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他的附图。
附图1为本发明马齿苋抗敏舒缓液的制备方法流程图。
附图2为实施例1所得马齿苋抗敏提取物HPLC谱图。HPLC谱图条件：流动相：A相为去离子水；D相为乙腈；洗脱条件：0.01-30min D＝10％-100％；柱子型号：C-18，250mm*4.6mm，5μm；流速1ml/min；柱温箱：30℃；进样量：10μl。
具体实施方式
为使本发明的目的、技术方案和优点更加清楚，下面将结合附图对本发明实施方式作进一步地详细描述。
本发明公开了一种马齿苋抗敏舒缓液的制备方法，包括以下步骤：
步骤一，以马齿苋全草为原料，除杂洗净后捣碎，得到捣碎物；
步骤二，向步骤一所得的捣碎物中加入乙醇，然后放置在循环加热装置内，在55～65℃温度下，加热提取3～6h，加热提取能提高提取效率。过滤所得提取液，得到滤液，重复三次上述提取过程，然后合并滤液。
在48～55℃和-0.09Mpa环境下减压浓缩滤液，得到粗提取浸膏。
本步骤中，乙醇的浓度为75％，捣碎物与乙醇的质量比为1:5～1:10。
步骤三，向步骤二中所得的粗提取浸膏中加入去离子水，形成悬浮液。然后向悬浮液中加入石油醚，使液体分为上下两层，取下层的水相部进行减压浓缩，得到马齿苋粗提取物。本步骤中，悬浮液与石油醚的体积比为1:2～1:4。
步骤四，用去离子水稀释步骤三所得的马齿苋粗提取物，得到马齿苋粗提取液，将马齿苋粗提取液通过D-101大孔吸附树脂，进行吸附，然后再洗脱、减压浓缩，得到浓缩液。本步骤中，马齿苋粗提取物与大孔吸附树脂质量比为1:5～1:10；洗脱采用去离子水洗脱液，洗脱流速为40～100ml/min，洗脱体积为3～4倍柱体积。
步骤五，向稀释步骤四所得的浓缩液中加入去离子水，加热至50～60℃，使浓缩液充分溶解，得到浓缩液稀释液。然后在0—4℃条件下，将浓缩液稀释液静置2～4h，进行结晶。冷冻干燥上述结晶，然后再重结晶3～5次，以提高纯度，得到马齿苋提取物结晶。本步骤中，浓缩液与去离子水的质量比为2:1；
步骤六，向步骤五所得的马齿苋提取物结晶中加入溶剂溶解，溶解剂优选为浓度为50％的戊二醇或者33％的1,3—丁二醇。然后在万级工作台上利用0.22um滤膜过滤，最终得到马齿苋抗敏舒缓提取液。
利用本发明方法所得的马齿苋抗敏舒缓提取液，可用于制备抗敏舒缓化妆品、护肤品。
实施例1：
取马齿苋全草500g，除杂洗净后捣碎。
向捣碎物中加入75％的酒精2500g，然后放置在循环加热装置内，在55℃温度下，加热提取3h。过滤所得提取液，得到滤液，重复三次上述提取过程，然后合并滤液。将滤液在48℃和-0.09Mpa环境下减压浓缩滤液，得到粗提取浸膏95g。
向粗提取浸膏中加入去离子水，形成悬浮液200ml。然后向悬浮液中加入400ml石油醚，使液体分为上下两层，取下层的水相部进行减压浓缩，得到马齿苋粗提取物85g。
用去离子水稀释马齿苋粗提取物，得到马齿苋粗提取液，将马齿苋粗提取液通过850g的D-101大孔吸附树脂，进行吸附。然后再洗脱，洗脱采用去离子水洗脱液，洗脱流速为40ml/min，洗脱体积为3倍柱体积。之后减压浓缩，然后在4℃条件下，将浓缩液静置2h，进行结晶。冷冻干燥上述结晶，然后再重结晶3次，以提高纯度，得到马齿苋提取物结晶5g。
向马齿苋提取物结晶中加入250ml溶剂溶解，溶解剂为浓度为50％的戊二醇。然后在万级工作台上利用0.22um滤膜过滤，最终得到马齿苋抗敏舒缓提取液。
实施例2：
取马齿苋全草2000g，除杂洗净后捣碎。
向捣碎物中加入75％的酒精20kg，然后放置在循环加热装置内，在65℃温度下，加热提取6h。过滤所得提取液，得到滤液，重复三次上述提取过程，然后合并滤液。将滤液在55℃和-0.09Mpa环境下减压浓缩滤液，得到粗提取浸膏437.3g。
向粗提取浸膏中加入去离子水，形成悬浮液700ml。然后向悬浮液中加入800ml石油醚，使液体分为上下两层，取下层的水相部进行减压浓缩，得到马齿苋粗提取物400g。
用去离子水稀释马齿苋粗提取物，得到马齿苋粗提取液，将马齿苋粗提取液通过3kg的D-101大孔吸附树脂，进行吸附。然后再洗脱，洗脱采用去离子水洗脱液，洗脱流速为100ml/min，洗脱体积为4倍柱体积。之后减压浓缩，然后在4℃条件下，将浓缩液静置2h，进行结晶。冷冻干燥上述结晶，然后再重结晶5次，以提高纯度，得到马齿苋提取物结晶18g。
向马齿苋提取物结晶中加入900ml溶剂溶解，溶解剂为浓度为33％的1,3—丁二醇。然后在万级工作台上利用0.22um滤膜过滤，最终得到马齿苋抗敏舒缓提取液。
实施例3：
取马齿苋全草1000g，除杂洗净后捣碎。
向捣碎物中加入75％的酒精1kg，然后放置在循环加热装置内，在55℃温度下，加热提取3h。过滤所得提取液，得到滤液，重复三次上述提取过程，然后合并滤液。将滤液在48℃和-0.09Mpa环境下减压浓缩滤液，得到粗提取浸膏210g。
向粗提取浸膏中加入去离子水，形成悬浮液400ml。然后向悬浮液中加入600ml石油醚，使液体分为上下两层，取下层的水相部进行减压浓缩，得到马齿苋粗提取物190g。
用去离子水稀释马齿苋粗提取物，得到马齿苋粗提取液，将马齿苋粗提取液通过1.5kg的D-101大孔吸附树脂，进行吸附。然后再洗脱，洗脱采用去离子水洗脱液，洗脱流速为70ml/min，洗脱体积为3倍柱体积。之后减压浓缩，然后在4℃条件下，将浓缩液静置2h，进行结晶。冷冻干燥上述结晶，然后再重结晶3次，以提高纯度，得到马齿苋提取物结晶11g。
向马齿苋提取物结晶中加入550ml溶剂溶解，溶解剂为浓度为50％的戊二醇。然后在万级工作台上利用0.22um滤膜过滤，最终得到马齿苋抗敏舒缓提取液。
取马齿苋抗敏舒缓提取液，经0.22um微孔滤膜过滤，滤液作为供试品溶液，精密吸取供试品溶液10ul进样，色谱条件如下：流动相：A相为去离子水；D相为乙腈；梯度洗脱条件：0.01-30minD＝10％-100％；柱子型号：C-18，250mm*4.6mm，5μm；流速1ml/min；柱温箱：30℃；进样量：10μl。得到马齿苋抗敏提取物HPLC谱图。
参照图2所示，取样品50mg，定容到10ml容量瓶中，浓度为5mg/ml，0.22um微孔滤膜过滤，滤液作为供试品溶液，精密吸取供试品溶液10ul进样，色谱条件如上，得到马齿苋抗敏提取物HPLC谱图。
其中有效成分的纯度为93.3％。峰表如下：
保留时间 峰面积
2.156 100325
2.521 2692727
2.984 93284
总计 2886336
以上所述仅为本发明的较佳实施例，并不用以限制本发明，凡在本发明的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。

Claims (9)

1.一种马齿苋抗敏舒缓液的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
步骤一，以马齿苋全草为原料，除杂洗净后捣碎，得到捣碎物；
步骤二，将乙醇加入所述捣碎物中，过滤、减压浓缩，得到粗提取浓缩液；
步骤三，向所述粗提取浓缩液中加入去离子水，形成悬浮液，将石油醚加入所述悬浮液中，使液体分为上下两层，取下层的水相部进行减压浓缩，得到马齿苋粗提取物；
步骤四，用去离子水稀释所述马齿苋粗提取物，得到马齿苋粗提取液，将所述马齿苋粗提取液通过大孔吸附树脂，进行吸附，然后再洗脱、减压浓缩，得到浓缩液；
步骤五，稀释所述浓缩液，然后结晶提纯，得到马齿苋提取物结晶；
步骤六，向所述马齿苋提取物结晶中加入溶剂溶解，过滤，得到马齿苋抗敏舒缓提取液。
2.根据权利要求1所述的马齿苋抗敏舒缓液的制备方法，其特征在于，所述步骤二中，将乙醇加入所述捣碎物中，过滤、减压浓缩，得到粗提取浸膏的具体步骤如下：
将加入乙醇的所述捣碎物放置在循环加热装置内，在55～65℃温度下，加热提取3～6h，重复三次上述提取过程，得到提取液；
过滤所述提取液，得到滤液；
在48～55℃和-0.09Mpa环境下减压浓缩所述滤液，得到粗提取浸膏。
3.根据权利要求1所述的马齿苋抗敏舒缓液的制备方法，其特征在于，所述步骤二中，所述乙醇的浓度为75％，所述捣碎物与所述乙醇的质量比为1:5～1:10。
4.根据权利要求1所述的马齿苋抗敏舒缓液的制备方法，其特征在于，所述步骤三中，所述悬浮液与所述石油醚的体积比为1:2～1:4。
5.根据权利要求1所述的马齿苋抗敏舒缓液的制备方法，其特征在于，所述步骤四中，所述马齿苋粗提取物与所述大孔吸附树脂质量比为1:5～1:10，所述大孔吸附树脂为D-101大孔吸附树脂。
6.根据权利要求1所述的马齿苋抗敏舒缓液的制备方法，其特征在于，所述步骤四中，洗脱采用去离子水洗脱液，洗脱流速为40～100ml/min，洗脱体积为3～4倍柱体积。
7.根据权利要求1所述的马齿苋抗敏舒缓液的制备方法，其特征在于，所述步骤五中，稀释所述浓缩液，然后结晶提纯，得到马齿苋提取物结晶的具体步骤如下：
向所述浓缩液中加入去离子水，加热至50～60℃，使所述浓缩液充分溶解，得到浓缩液稀释液，所述浓缩液与所述去离子水的质量比为2:1；
在0—4℃条件下，将所述浓缩液稀释液静置2～4h，进行结晶，并重结晶3～5次，得到马齿苋提取物结晶。
8.根据权利要求1所述的马齿苋抗敏舒缓液的制备方法，其特征在于，所述步骤六中，将所得马齿苋提取物结晶干燥后，加入浓度为50％的戊二醇或者33％的1,3—丁二醇的溶剂进行溶解，利用0.22um滤膜过滤，得到马齿苋抗敏舒缓提取液。
9.据权利要求1至8中任意一项所述的马齿苋抗敏舒缓液的快速制备方法，其特征在于，所述马齿苋抗敏舒缓提取液可用于制备抗敏舒缓化妆品、护肤品。
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