CN105606556A - 马蹄蕨药材中多糖含量的紫外分光光度测定法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种马蹄蕨药材中多糖含量的紫外分光光度测定法,以无水葡萄糖为对照,使用紫外分光光度计测定马蹄蕨多糖提取物中多糖的含量。本发明完善了马蹄蕨药材的质量检测标准,为马蹄蕨药材质量标准的建立奠定了基础;而且,该法灵敏度高、操作简便、结果准确;推广和应用本发明,可以确保马蹄蕨药材质量,保障其临床用药的安全、有效、稳定。
Description
技术领域
本发明马蹄蕨药材质量控制技术领域,尤其涉及一种马蹄蕨药材中多糖含量的紫外分光光度测定法。
背景技术
马蹄蕨,观音座莲科植物福建莲座蕨(AngiopterisfokiensisHieron.),作为广西的民族特色药材,既属于壮药又属于瑶药,壮药名为Maenzdaezma,瑶药名为麻蹄涯。其通常以根茎人药,在广西主要分布于金秀、恭城、马山等地,具有消炎止痛、清热解毒、利湿、凉血止血等功效;主治肠炎、痢疾、胃痛、胃十二指肠溃疡、肺结核咯血、肾炎水肿、功能性子宫出血、风湿性关节炎、淋巴结结核、淋巴结炎、跌打损伤、痈疮肿毒、枪炮伤、毒蛇毒虫咬伤。长久以来,在广西的壮族、瑶族聚集地,马蹄蕨是当地居民的常用药材之一。由于壮、瑶人民长期生活在山区,跌打损伤和虫蛇咬伤经常发生,马蹄蕨即被作为常用药材,常备家中。近些年来,在当地的民族特色医院中,也被医生常用于各类患者,有着较好的药用价值。
马蹄蕨作为常用民族药材先后被收入《中国现代瑶药》和《壮药质量标准》(第三册),然而标准中也仅有简单的理化鉴别。
发明内容
本发明要解决的技术问题是提供一种灵敏度高、操作简便、结果准确的马蹄蕨药材中多糖含量的紫外分光光度测定法,以确保药材质量,保障其临床用药的安全、有效、稳定。
为解决上述技术问题,本发明采用以下技术方案:马蹄蕨药材中多糖含量的紫外分光光度测定法,以无水葡萄糖为对照,使用紫外分光光度计测定马蹄蕨多糖提取物中多糖的含量。
8.无水葡萄糖的浓度为5-500mg/L,马蹄蕨多糖提取物的浓度为10-200μg/ml。
上述马蹄蕨药材中多糖含量的紫外分光光度测定法,包括以下步骤:
A、将无水葡萄糖对照品用蒸馏水配制成浓度为5-500mg/L的对照品溶液;
B、将蒽酮溶解于浓硫酸溶液中,配制成1-3g/L的蒽酮-硫酸试剂;
C、将对照品溶液与蒽酮-硫酸试剂反应,放入紫外分光光度计进行检测,检测波长为620nm,所得吸光度绘制标准曲线,并按照标准曲线根据比尔朗伯定律得出回归曲线方程;
D、将马蹄蕨多糖提取物样品按对照品溶液方法制备,并进行吸光度测定,根据回归曲线方程计算样品中多糖的含量。
步骤A按以下操作进行:精密称取无水葡萄糖对照品100mg,置于100mL容量瓶中,加水适量使溶解,稀释至刻度,摇匀;精密吸取10mL置于100mL容量瓶中,加水稀释至刻度,即得0.1g/L的葡萄糖对照品溶液。
步骤B按以下操作进行:准确称取0.2g蒽酮,溶解于100mL浓硫酸溶液中,配制成0.2%蒽酮-硫酸试剂。
步骤C按以下操作进行:精密量取0.1g/L的葡萄糖对照品溶液0.05、0.1、0.2、0.3、0.4、0.6、0.8ml,分别置10ml具塞刻度试管中,各加蒸馏水至1.0ml,摇匀,分别加入0.2%蒽酮-硫酸试剂4ml,迅速浸于冰水浴中冷却,各管加完后一起浸于沸水浴中,水浴煮沸10分钟,取出,用自来水冷却,室温放置10分钟,以蒸馏水为空白,照紫外-可见分光光度法,在620mn波长处测定吸光度;以吸光度值为纵坐标,葡萄糖浓度为横坐标,绘制标准曲线。
步骤D按以下操作进行:将马蹄蕨多糖提取物加蒸馏水溶解,配置成浓度为50μg/ml,精密吸取1ml,加入0.2%蒽酮-硫酸试剂4ml,迅速浸于冰水浴中冷却,各管加完后一起浸于沸水浴中,水浴煮沸10分钟,取出,用自来水冷却,室温放置10分钟,依法测定吸光度值,根据标准曲线计算样品中多糖含量。
针对目前马蹄蕨药材质量控制中缺乏含量测定的问题,发明人在前期对该药材化学成分的研究中发现,马蹄蕨中含有大量多糖类成分,并对其多糖含量进行定量研究,据此建立了一种马蹄蕨药材中多糖含量的紫外分光光度测定法,以无水葡萄糖为对照,使用紫外分光光度计测定马蹄蕨多糖提取物中多糖的含量。本发明完善了马蹄蕨药材的质量检测标准,为马蹄蕨药材质量标准的建立奠定了基础;而且,该法灵敏度高、操作简便、结果准确;推广和应用本发明,可以确保马蹄蕨药材质量,保障其临床用药的安全、有效、稳定。
附图说明
图1是无水葡萄糖标准品的紫外吸收曲线图。
图2是应用本发明根据吸光度绘制的葡萄糖标准曲线图。
具体实施方式
马蹄蕨药材中多糖含量的紫外分光光度测定法的研究
1.测定原理
采用蒽酮-硫酸法进行马蹄蕨多糖含量的测定。因为糖类遇浓硫酸脱水生成糖醛或其衍生物,可与蒽酮试剂缩合产生颜色物质,反应后溶液呈蓝绿色,并于620nm处有最大吸收,显色与多糖含量呈线性关系。
2.研究过程
2.1马蹄蕨多糖提取物的制备
A将1kg马蹄蕨药材粉碎成粗粉,加60%乙醇8L加热回流2次,每次2小时,过滤,弃滤液,收集药渣,除去脂溶性成分。
B药渣加0.3mol/L稀盐酸8L加热回流提取2次,每次2小时,过滤,弃药渣,收集滤液并浓缩,得膏150g。
C浓缩液加乙醇使乙醇浓度达到80%,静置过夜,过滤,收集沉淀,加水溶解沉淀,过滤,滤液浓缩成膏,经真空冷冻干燥即得马蹄蕨多糖提取物。
2.2马蹄蕨多糖提取物中多糖含量测定
将马蹄蕨多糖提取物做为待测样品进行分析,使用紫外分光光度计(岛津UV-2550型可见-紫外分光光度计)用400-800nm的波长范围对葡萄糖标准品溶液进行扫描(图1),得出紫外吸收曲线,其最大吸收波长为λmax=620nm,因此选用波长为620nm进行测定。按照《中国药典》2015四部通则0401紫外-可见分光光度法进行:
A对照品溶液的制备
精密称取无水葡萄糖对照品(105℃干燥至恒重)100mg,置于100mL容量瓶中,加水适量使溶解,稀释至刻度,摇匀;精密吸取10mL置于100mL容量瓶中,加水稀释至刻度,即得0.1g/L的葡萄糖对照品溶液。
B蒽酮-硫酸试剂的制备
准确称取0.2g蒽酮,溶解于100mL浓硫酸溶液中,配制成0.2%(2g/L)蒽酮-硫酸试剂,当日配制使用。
C标准曲线的制备
精密量取0.1g/L的葡萄糖对照品溶液0.05、0.1、0.2、0.3、0.4、0.6、0.8ml,分别置10ml具塞刻度试管中,各加蒸馏水至1.0ml,摇匀,分别加入0.2%蒽酮-硫酸试剂4ml,迅速浸于冰水浴中冷却,各管加完后一起浸于沸水浴中,水浴煮沸10分钟,取出,用自来水冷却,室温放置10分钟,以蒸馏水为空白,照紫外-可见分光光度法(2015版中国药典),在620mn波长处测定吸光度;以吸光度值(A)为纵坐标,葡萄糖浓度(C)为横坐标,绘制标准曲线(图2)。所得回归方程为Y=0.0532X+0.0193(R=0.99906)。结果表明,标准品在0-16.00μg/ml范围内成良好的线性关系。
表1葡萄糖标准曲线
D测定法
将马蹄蕨多糖提取物加蒸馏水溶解,配制成浓度为50μg/ml左右,精密吸取1ml,加入0.2%蒽酮-硫酸试剂4ml,迅速浸于冰水浴中冷却,各管加完后一起浸于沸水浴中,水浴煮沸10分钟,取出,用自来水冷却,室温放置10分钟,依法测定吸光度值,根据标准曲线计算样品中多糖含量。结果见表2。
表2
取样量(ml) | 吸光度 | 测得值(μg/ml) | 含量(%) |
1.00 | 0.2164 | 3.7041 | 37.04% |
实施例1
参照上述测定法,但使用0.1%的蒽酮-硫酸试剂进行反应并测定,得到马蹄蕨多糖提取物中多糖的含量,结果见表3。
表3
取样量(ml) | 吸光度 | 测得值(μg/ml) | 含量(%) |
1.00 | 0.2152 | 3.6821 | 36.82% |
实施例2
参照上述测定法,但使用0.3%的蒽酮-硫酸试剂进行反应并测定,得到马蹄蕨多糖提取物中多糖的含量,结果见表4。
表4
取样量(ml) | 吸光度 | 测得值(μg/ml) | 含量(%) |
1.00 | 0.2201 | 3.7740 | 37.74% |
Claims (7)
1.一种马蹄蕨药材中多糖含量的紫外分光光度测定法,其特征在于以无水葡萄糖为对照,使用紫外分光光度计测定马蹄蕨多糖提取物中多糖的含量。
2.根据权利要求1所述的马蹄蕨药材中多糖含量的紫外分光光度测定法,其特征在于:所述无水葡萄糖的浓度为5-500mg/L,所述马蹄蕨多糖提取物的浓度为10-200μg/ml。
3.根据权利要求1所述的马蹄蕨药材中多糖含量的紫外分光光度测定法,其特征在于包括以下步骤:
A、将无水葡萄糖对照品用蒸馏水配制成浓度为5-500mg/L的对照品溶液;
B、将蒽酮溶解于浓硫酸溶液中,配制成1-3g/L的蒽酮-硫酸试剂;
C、将对照品溶液与蒽酮-硫酸试剂反应,放入紫外分光光度计进行检测,检测波长为620nm,所得吸光度绘制标准曲线,并按照标准曲线根据比尔朗伯定律得出回归曲线方程;
D、将马蹄蕨多糖提取物样品按对照品溶液方法制备,并进行吸光度测定,根据回归曲线方程计算样品中多糖的含量。
4.根据权利要求1所述的马蹄蕨药材中多糖含量的紫外分光光度测定法,其特征在于步骤A按以下操作进行:精密称取无水葡萄糖对照品100mg,置于100mL容量瓶中,加水适量使溶解,稀释至刻度,摇匀;精密吸取10mL置于100mL容量瓶中,加水稀释至刻度,即得0.1g/L的葡萄糖对照品溶液。
5.根据权利要求1所述的马蹄蕨药材中多糖含量的紫外分光光度测定法,其特征在于步骤B按以下操作进行:准确称取0.2g蒽酮,溶解于100mL浓硫酸溶液中,配制成0.2%蒽酮-硫酸试剂。
6.根据权利要求1所述的马蹄蕨药材中多糖含量的紫外分光光度测定法,其特征在于步骤C按以下操作进行:精密量取0.1g/L的葡萄糖对照品溶液0.05、0.1、0.2、0.3、0.4、0.6、0.8ml,分别置10ml具塞刻度试管中,各加蒸馏水至1.0ml,摇匀,分别加入0.2%蒽酮-硫酸试剂4ml,迅速浸于冰水浴中冷却,各管加完后一起浸于沸水浴中,水浴煮沸10分钟,取出,用自来水冷却,室温放置10分钟,以蒸馏水为空白,照紫外-可见分光光度法,在620mn波长处测定吸光度;以吸光度值为纵坐标,葡萄糖浓度为横坐标,绘制标准曲线。
7.根据权利要求1所述的马蹄蕨药材中多糖含量的紫外分光光度测定法,其特征在于步骤D按以下操作进行:精密吸取浓度为50μg/ml的马蹄蕨多糖提取物1ml,加入0.2%蒽酮-硫酸试剂4ml,迅速浸于冰水浴中冷却,各管加完后一起浸于沸水浴中,水浴煮沸10分钟,取出,用自来水冷却,室温放置10分钟,依法测定吸光度值,根据标准曲线计算样品中多糖含量。
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