CN109394802A - 锁阳提取物在制备抗疲劳药物中的应用 - Google Patents

Abstract

本发明涉及锁阳提取物在制备抗疲劳药物中的应用，通过探索锁阳提取物对实验小鼠的抗疲劳作用机制，得出锁阳提取物具有良好的抗疲劳作用。该作用可能与提高小鼠代谢能力和增强应激能力有关。该发明可能为克服传统抗疲劳药物的不良反应及成瘾性、发展新型抗疲劳药物方面提供一个新的思路。

Description

锁阳提取物在制备抗疲劳药物中的应用

技术领域

本发明属于药物制备技术领域，尤其涉及一种锁阳提取物在制备抗疲劳药物中的应用。

背景技术

疲劳又可称其为疲乏，是一种乏力的不舒服的感觉，在生理上表现为因乳酸及其它代谢产物的累积，而导致肌肉的张力减低，运动的持续时间缩短，且因为二氧化碳在运动时的蓄积，引起呼吸中枢的反应，就表现为呵欠；而这种疲惫感也可能在种种病症发展到某个程度的时候浮现，当人感受到压力时会更容易感到疲劳感。当人们达到过度疲劳时，会导致身体筋疲力尽呈亚健康状态，此时身体则有巨大的隐患，如身体潜在疾病易急速恶化等等。

而当代社会为主张健康生活，减少在办公室持续工作带来的身体负面影响，多数人会抽出时间进行运动，那么不可避免的造成运动后的身体疲劳，在高密度工作下积累了高度的精神疲劳及身体疲劳，若没有及时恢复，又通过运动加剧身体的疲惫感，此时如过度训练症候群或者慢性疲劳症候群一类的疾病，就会因为疲劳的过度积累而对人们的身体健康造成侵害，如造成人体内分泌系统的混乱、抵抗力减弱、乃至会产生器质性病变造成器官或组织系统的永久性损害，对人类生命形成威胁。

由此，近年来国内外大量专家学者都致力于研究疲劳的产生机制，从而探索消除疲劳如躯体性疲劳、精神性疲劳等等的方式方法。而中医学作为中华民族的拥有丰富临床经验的文化遗产，被炎黄子孙世代视为珍宝，不断发展。从古便有类似疲劳之证的说法，至今已有两千多年的历史。《金匮要略》(汉代张仲景)一书之中首次提出“疲劳”这个概念，其它还像《黄帝内经》、《诸病源候论》中都对“疲劳”有不一样的说法，如“罢极”、“倦怠”、“困薄”、“五劳”、“六极”和“七伤”这样的描述。

中医认为，在元气耗伤和心绪不宁两者一起的影响下使得“疲劳”产生，特别是高强度或是近临界强度的锻炼，都会影响到人体的筋骨、肌肉和五脏六腑，还会大量消磨人的精力和能量，所以中医认为运动耗伤脾肾元气，精神的焦虑扰乱了身体的均衡。要消减疲劳带来的身体损伤和劳累感，需要针对各个脏腑联合调理，调养时不单只是扶正祛邪，亦要消疲安神，即身心两管齐下。总而言之，我们不能忽视中药对于治疗疲劳的重要作用。

历史和临床经验告诉我们中医药在消解疲劳这一领域有着能够调整身体状态各个方面的独到成效。现在临床上常用的消疲药材包括：人参、刺五加、红景天、当归、麦芽、熟地、龙眼肉、灵芝、冬虫夏草、党参、大枣等等。这些药物有的具有抗缺氧作用，有的具有抗自由基氧化作用，有的具有增补血红蛋白含量作用，而翻阅过目前对于锁阳的研究文献，这些特性在锁阳身上也一一体现，且因其常用做补益之用，那锁阳对机体的抗疲劳作用也很值得研究。

现在我们常常使用复方中药作为抗疲劳中药，以补益和调理作为治疗原则，提升运动持久性，消解运动后的倦累，为运动保健医学做出巨大贡献，希望本篇对锁阳的研究能为复方中药方提供更多的配伍选择。

在目前关于中药抗运动性疲劳研究中，已经证明拥有抗运动性疲劳作用的中药成分有人参皂苷、绞股蓝皂苷、淫羊藿苷、葛根素、姜黄素、灵芝多糖、猴头多糖、虫草多糖、红景天苷、枸杞多糖以及香菇蛋白多糖等。在现有对锁阳组成成分研究中，认为锁阳多糖可能是抗疲劳作用的重要成分。

锁阳(Herba Cynomorii)，锁阳经过采撷、加工、炮制后，得到扁圆柱形的药材，屈曲状，表面呈灰棕或褐色。实验中使用的是锁阳提取物粉末，可直接制成锁阳提取物溶液。其主要化学成分为黄酮类化合物、三萜类化合物、鞣剂、多糖和氨基酸^[11]。中药锁阳具有壮阳固精，养血强筋的功效，临床适应征为寒战、腰膝无力、四肢疼痛、乏力、失眠、健忘、脱发和胃酸溃疡等。

锁阳是常被中医用来补益补阳的中药材，锁阳具有多类生物活性物质，这些活性物质可以增进男性女性的性功能、加强机体的抵抗力，还具有消除自由基、抗氧化、抗失氧、抗应激、抗衰老、抗疲劳、保护脑部、抗血小板凝聚、滑肠通便、抗溃疡乃至有抗病毒、抗肿瘤及抑制艾滋病毒的增殖等药理作用。中医古籍如《本草纲目》记载锁阳“甘、温、无毒。大补阴气，益精血，利大便。润燥养筋，治痿弱。”大量书籍对锁阳性味功效都有记载，总结其功效，锁阳可以治疗腰膝痿软、便秘、血气亏损，且针对男性可以补肾，对女性可以治疗其生育问题。正因此人们对锁阳各类生理功能作用的关注与日俱增，但我们对于锁阳仍是知之甚少，不可否认的是，锁阳潜伏的药理功用正慢慢被人们探索开拓。

现如今快节律的生活、工作环境，对体质条件的需求越发严格。人们在运动健身后如何快速地消除身体疲劳感，投入紧张的工作当中也是许多人的一大难题，而经历了一天工作学习，在外奔波，消除身体的疲惫感也是改良生活状态的一大捷径，保健食品越来越多出现在人们视野当中，锁阳作为补益补阳的常用中药也少不了它的身影。多篇文献提及锁阳的抗疲劳效用时写道锁阳能够增加血清中LDH的活力，使体内乳酸分解增快，降低疲劳感，还可以明显的增加血液中的血红蛋白含量。并且提出降低cAMP/cGMP的比率、增加cAMP含量有关等等诸多均与锁阳抗疲劳机制有关的说法，但如今其实验依据仍存在甚少。

发明内容

本发明通过探索锁阳提取物对实验小鼠的抗疲劳作用机制，得出锁阳提取物具有良好的抗疲劳作用。该作用可能与提高小鼠代谢能力和增强应激能力有关。本发明可能为克服传统抗疲劳药物的不良反应及成瘾性、发展新型抗疲劳药物方面提供一个新的思路。

为了实现上述目的，本发明采用以下技术方案：

锁阳提取物在制备抗疲劳药物中的应用。

作为优选，应用的表现方式为制剂，该制剂包括所述锁阳提取物和药学上可接受的辅料。

作为优选，药学上可接受的辅料选自稀释剂、粘合剂、崩解剂、表面活性剂、包衣材料、胶囊材料和成膜材料中的至少一种。

锁阳提取物在制备生物制品中的应用。

作为优选，所述的锁阳提取物选自水提物、无水乙醇提取物、乙醇水溶液提取物、水蒸气蒸馏挥发油或超临界萃取提取物。

本发明的有意效果是：本发明通过探索锁阳提取物对实验小鼠的抗疲劳作用机制，得出锁阳提取物具有良好的抗疲劳作用。该作用可能与提高小鼠代谢能力和增强应激能力有关。本发明可能为克服传统抗疲劳药物的不良反应及成瘾性、发展新型抗疲劳药物方面提供一个新的思路。

附图说明

图1是本发明锁阳提取物的红外图谱。

图2是本发明单糖标准谱图。

图3是本发明锁阳水解样品的高效液相色谱图。

图4是本发明锁阳提取物对小鼠体重的影响。

图5是本发明锁阳提取物对小鼠游泳时间的影响。

图6是本发明锁阳提取物对小鼠肝指数的影响。

图7是本发明锁阳提取物对小鼠脾指数的影响。

图8是本发明锁阳提取物对SOD的影响。

图9是本发明锁阳提取物对GSH-Px的影响。

图10是本发明锁阳提取物对CAT的影响。

具体实施方式

以下结合具体实施例与附图对本发明做进一步的解释：

实施例1

锁阳提取物粉末状，购自西安金绿生物工程技术有限公司，临用前用任氏液制成0.1mg/mL、0.5mg/mL、2.5mg/mL溶液。

体态大小、活性相似的中华大蟾蜍18只，雌雄不限，浙江海洋大学实验动物中心供应。

葡萄糖任氏液；1.15％KCl溶液(低温)；蒸馏水，由浙江海洋大学实验室提供。

仪器及器材

生物电输入电缆；肌张力换能器；RM6240生物信号采集处理系统(成都仪器厂)；蛙板；蛙钉；常用蛙类解剖器械；微调固定器；铁架台；培养皿；粗棉线；各容量烧杯若干；容量瓶若干；电子天平(顺宇恒平仪器)；D系列超声波清洗机(宁波新芝生物科技股份有限公司)；冰箱(美的)；台式高速冷冻型微量离心机(Dragonlab，型号D3024R)；红外光谱仪；Agilent1200HPLC色谱仪；EP管若干；EP管研磨杵若干；低温离心机；MDA测定试剂盒(南京建成生物工程研究所)；LD测定试剂盒(南京建成生物工程研究所)。

锁阳提取物的红外检测及单糖测定

红外检测：将锁阳提取物粉末经纯净、干燥处理，过筛，取适量粉末，经过提取纯化再干燥的步骤后，将所得的粉末与KBr粉末研磨均匀，用干净，干燥的压片机进行压片，直接放入到傅里叶红外光谱仪中检测，得锁阳提取物的红外光谱。

单糖测定：使用Agilent 1200高效液相色谱仪对锁阳(Cynomorium)进行单糖测定。采用甘露糖(Man)、氨基葡萄糖(GlcN)、鼠李糖(Rha)、葡萄糖醛酸(GlcUA)、半乳糖醛酸(GalUA)、葡萄糖(Glc)、半乳糖(Gal)、木糖(Xyl)、阿拉伯糖(Arb)、岩藻糖(Fuc)作为单糖标准品制作单糖标准图谱；将获得的锁阳单糖高效液相色谱图与获得的单糖标准图谱比对，判定锁阳的主要单糖成分。

试剂及标本制备

任氏液的配制：按20％NaCl(mL)∶10％KCl(mL)∶10％CaCl₂(mL)∶5％NaHCO₃(mL)∶1％NaH₂PO₄(mL)∶葡萄糖(g)＝32.5∶1.4∶1.2∶4.0∶1.0∶2的比例混合，然后用蒸馏水稀释至1000mL，以获得葡萄糖任氏液。

将锁阳提取物粉末溶于任氏液中，分别制成0.1mg/mL、0.5mg/mL、2.5mg/mL溶液备用，若提取物无法完全溶解，可使用超声仪帮助溶解，且超声仪可震出溶剂中多余气泡。

任选十八只体态活性相似的蟾蜍，采用双毁髓法处死蟾蜍后，制备离体腓肠肌标本，用任氏液冲洗去血污后备用。同一蟾蜍的腓肠肌标本随机分成对照组(任氏液组)和实验组(锁阳提取物组)；实验组随机均分为低浓度组(0.1mg/mL)、中浓度组(0.5mg/mL)和高浓度组(2.5mg/mL)。

肌肉收缩能力的测定

将标本的膝关节一侧固定在蛙板上，跟腱一端结扎一根棉线，并在靠跟腱一侧剪断腓肠肌与跟腱的连接备用。按组别分别在任氏液或锁阳提取物溶液中浸泡15min后，将腓肠肌靠跟腱一侧结扎的棉线与张力换能器连接，使肌肉保持垂直并处于恒定的张力状态(注意不可过度拉伸腓肠肌，也不可过度懈弛)。将换能器的信号输入到RM 6240生物信号采集处理系统，将银电极轻轻接触肌肉表面(注意不可挤压肌肉)，未受刺激的状态作为基线。

设定刺激参数为：连续单刺激，强度：DC 10V；波宽：0.30ms；频率1Hz。准备工作完成后，给予腓肠肌连续单刺激，进行实验，在实验过程中要不断使用滴管吸取相应溶液对腓肠肌进行湿润保持其活性，当肌肉收缩达到其最大值时记录时间。

继续刺激，分别记录下收缩幅度降至肌肉最大收缩幅度的90％时经历的时长，记为t_0.9；降至50％时经历的时长，记为t_0.5；降至10％时经历的时长，记为t_0.1。对照组在受到连续单刺激后30s左右，肌肉收缩幅度达到最高阈值。

实验时按分组依次进行实验，严格控制变量。

肌肉匀浆的制备

肌肉收缩能力测定实验后，取各组少量腓肠肌，用1.15％KCl溶液(经冷藏)冲洗后用眼科手术剪剪碎后移入EP管中，再加入少量冷藏后的1.15％KCl溶液，在冰浴中研磨成匀浆(研磨约6～8min)后，用经冷藏的1.15％KCl溶液稀释制成10％的匀浆，盖好摇晃均匀，做好标记后在冰浴中保存。按步骤将所有实验组及对照组取样做成匀浆保存待用。

MDA及肌乳酸含量的测定

低温离心机参数：温度：4摄氏度；转速：3000r/min

按上述参数在低温离心机中将盛有各组匀浆的EP管离心15分钟后，取上清液置于新的微型离心管中(操作过程保持低温)，冷冻保存，送往南京建成检测生化指标，获取MDA及肌乳酸含量测定结果。

统计学分析

对数据进行统计分析，每个实验组的数据采取均数±标准差的方式表示，其中对照组的十八组随机挑选六组取均值。以P＜0.05作为差异检验标准。

锁阳提取物的红外图谱

经红外检测，获得如图1的红外图谱，由图谱获得如下信息：

3421cm^-1处的吸收可推测混合物中可能含有氨基基团，混合物中可能存在氨基酸类物质。

1588cm^-1处的吸收，吸收峰较弱，不够典型，猜测可能含有羰基基团。

1400cm^-1～1500cm^-1间的吸收，是苯环结构的特征区域，推测混合物中可能含有苯环结构。

1026cm^-1，1153cm^-1的吸收峰，可推测出混合物中有环醚结构，所以在混合物中可能存在糖类和糖苷类的成分。

通过查阅文献，在马建滨等人及苏格尔等人对锁阳的化学成分的研究中，获知锁阳所含有的生物活性成分包括有机酸、黄酮类、糖类和糖苷类、三萜类化合物、甾体类、氨基酸类和多种挥发性成分以及多种元素和无机离子。

经过红外检测实验，也可断定锁阳提取物中必然存在糖类和糖苷类，可能存在氨基酸类物质，也可能存在黄酮类、甾体类化合物。

锁阳提取物的单糖组成

图2就是10种单糖标准品的HPLC色谱图，且顺序依次为Man-甘露糖、GlcN-氨基葡萄糖，Rha-鼠李糖，GlcUA-葡萄糖醛酸，GalUA-半乳糖醛酸，Glc-葡萄糖，Gal-半乳糖，Xyl-木糖，Arb-阿拉伯糖，Fuc-岩藻糖，以此作为标准谱图进行单糖组成的比对。

锁阳提取物的HPLC色谱图在图3可见，锁阳提取物中峰的保留时间与图2单糖标准谱图各峰的保留时间相比较，可以判断锁阳提取物中主要的糖基组成时葡萄糖(Glc)，而且因为葡萄糖峰面积较大也可说明其在锁阳提取物的糖基中含量较高。

锁阳提取物对肌肉收缩幅度达最大值所需时间的影响

经锁阳提取物浸泡后的腓肠肌收缩幅度达最大值时所需的时间较对照组的腓肠肌收缩幅度达最大值时所需的时间明显缩短，且浓度越高，时间越短。

锁阳提取物对肌肉收缩持续时间的影响

根据表1得出经锁阳提取物浸泡后的腓肠肌的收缩性能明显改善的结论。锁阳提取物对肌肉收缩持续时间的影响表现在，收缩幅度降至最大幅度的90％经历的时长t_0.9、降至最大幅度的50％经历的时长t_0.5、降至最大幅度的10％经历的时长t_0.1都明显延长，且随药物浓度提高，收缩性能明显改善，持续时间明显延长，与对照组相比，差异具有显著意义(P＜0.05)。

表1锁阳提取物对肌肉收缩持续时间的影响

注：不同大写字母表示同一竖列与对照组之间比较差异显著(P＜0.05)

锁阳提取物对肌肉中肌乳酸及MDA含量的影响

经南京建成检测生化指标获得如表2的数据，低、中、高三个浓度组的实验组与对照组相比，肌乳酸含量降低，MDA含量降低，且随药物浓度的增加变化显著。

表2锁阳提取物对肌肉中肌乳酸及MDA含量的影响

组别	肌乳酸(mmol/g组织)	MDA(nmol/mg组织)
			对照组	23.55	11.84
低(0.1mg/mL)	20.35	9.68
			中(0.5mg/mL)	18.60	8.60
高(2.5mg/mL)	15.72	7.35

经锁阳提取物浸泡后的腓肠肌收缩幅度达最大值所需时间较对照组的腓肠肌收缩幅度达最大值所需时间明显缩短，锁阳提取物能使肌肉持续收缩的时间延长，且随浓度增高时间延长越多(P＜0.05)，可以证明经锁阳提取物浸泡后的腓肠肌的收缩性能明显改善，同时经锁阳提取物浸泡后的肌肉中肌乳酸及MDA含量明显降低，所以锁阳能有效消除运动后产生并且能够带来疲劳感的肌乳酸及MDA。综合结果看来锁阳提取物可以直接影响骨骼肌，减少疲劳导致的原有功能不能持续工作的情况，即抗疲劳，其机制可能在于能够有效并及时地消除运动后肌肉中产生的肌乳酸及MDA。

实施例2

实验动物

本实施例所用小鼠，皆由浙江省实验动物中心提供(SCXK(浙)2014-0001)。实验开始前，首先在SPF动物实验室，室温环境下喂养一周适应环境，设定湿度为40～70％，换气频率为10～20次/小时，每日下午六点定时投喂小鼠饲料，一日一次，饮水瓶中蒸馏水两天更换一次，鼠笼每周换洗两次，并更换新的小鼠垫料。

实验试剂

锁阳提取物(西安金绿生物工程技术有限公司生产)；

SOD试剂盒、GSH-Px试剂盒、CAT试剂盒(南京建成生物工程研究所)。

表3实验仪器

锁阳提取物溶液的配制

给药剂量设置：600、200、65mg/kg(即：6、2、0.65mg/10g)；

剂量设计依据：若临床成人(体重60kg)按2g/d口服，则中剂量设为临床用量的6倍，即200mg/kg，高、低剂量分别设为600、65mg/kg。

由于小鼠灌胃体积为20mL/kg，故高、中、低剂量组所用锁阳提取物溶液浓度分别为30mg/mL、10mg/mL、3.25mg/mL。

分别精密称取锁阳提取物0.0325g，0.1g，0.3g溶解于10mL无菌水中，通过涡旋振荡和超声溶解使其充分溶解，制得浓度分别为3.25mg/mL、10mg/mL、30mg/mL的锁阳提取物溶液。

小鼠灌胃给药及饲养

每个试验小鼠随机分为四组：锁阳提取物高剂量组(给药剂量600mg/kg)，锁阳提取物中剂量组(200mg/kg)，锁阳提取物低剂量组(给药剂量65mg/kg)，及对照组，每组12只。小鼠灌胃体积为20mL/kg，高、中、低剂量组所用锁阳提取物溶液浓度分别为30mg/mL、10mg/mL、3.25mg/mL，同时对照组给予无菌水，灌胃体积与各剂量组相同。每日灌胃给药一次，连续灌胃三周后测各项指标。

小鼠标准饲料喂养，给药期间生活在浙江海洋大学海科楼动物房，保持室温(21±5)℃，小鼠自由饮水进食。

小鼠分2批，分别进行小鼠力竭游泳试验与脏器指数计算及生化指标检测。

力竭游泳运动实验

在最后一次对小鼠进行灌胃给药的30min后，分别将各组小鼠放入游泳箱(水深30cm左右，水温21±2℃)中，强迫小鼠游泳，实验时记录从下水开始至鼻孔沉入水后持续10s无法回到水面为小鼠的力竭游泳时间。

小鼠眼球采血及解剖

将小鼠通过眼球取血采血约1mL，待血液凝固后离心15min，取血清备用，用于测定血清中超氧化物歧化酶、谷胱甘肽过氧化物酶以及过氧化氢酶。

处死小鼠后，对小鼠进行解剖，取小鼠的肝脏、脾脏，经生理盐水漂洗并吸干生理盐水，用天平称重并记录。

数据处理及分析

对小鼠的体重、游泳时间、肝指数、脾指数、超氧化物歧化酶、谷胱甘肽过氧化物酶、过氧化氢酶等指标进行分析，结果以平均值±标准差表示，采用SPSS软件进行单因素方差分析(ANOVA)，统计分析各组间的各指标统计学差异，p＜0.05时有统计学意义。即抗疲劳作用明显。

锁阳提取物对小鼠体重的影响

在实验期间连续三周测量小鼠的体重，如表4、图4所示，与对照组相比，低剂量组、中剂量组和高剂量组小鼠在实验期间体重均无显著性差异(p＞0.05)；低、中、高三个剂量组之间比较，小鼠在实验期间的体重都没有显著性差异(p＞0.05)。由此可得，锁阳提取物对小鼠的体重没有显著影响，即锁阳提取物不影响小鼠的正常生长。

表4锁阳提取物对小鼠体重的影响

锁阳提取物对小鼠游泳时间的影响

各组小鼠游泳时间如表5、图5所示，与对照组相比，低剂量组、中剂量组和高剂量组的小鼠的游泳时间均比对照组小鼠的游泳时间长，且其差异均有统计学意义(P＜0.05)；而低、中、高三个剂量组之间相比，高剂量组小鼠游泳时间长于中、低剂量组，具有显著性差异(P＜0.05)。由此可得，锁阳提取物可以有效延长小鼠的游泳时间，提高小鼠的运动耐力，即锁阳提取物对小鼠具有明显的抗疲劳作用，且高剂量的锁阳提取物抗疲劳作用最好。

表5锁阳提取物对小鼠游泳时间的影响

组别	数量/只	给药剂量(mg/kg)	游泳时间(min)
				对照组	6	0	13.17±4.88
低剂量组	6	65	25.52±8.83*<sup>a</sup>
				中剂量组	6	200	38.23±12.68*<sup>a</sup>
高剂量组	6	600	57.26±13.99*

*：与对照组相比，P＜0.05；a：与高剂量组相比，P＜0.05

锁阳提取物对小鼠脏器指数的影响

对小鼠进行解剖，取小鼠的肝脏、脾脏经生理盐水漂洗并吸干，用天平称重并记录肝脾质量，通过以下公式计算出肝指数及脾指数：

表6锁阳提取物对小鼠肝脾指数的影响

	对照组	低剂量组	中剂量组	高剂量组
					小鼠体重(g)	31.8±2.6	30.4±2.5	31.1±2.8	30.6±1.7
肝脏质量(g)	1.901±0.468	1.543±0.228	1.518±0.248	1.576±0.295
					肝指数(mg/g)	59.78±14.72	50.76±7.52	48.82±7.99	51.51±9.65
脾脏质量(g)	0.111±0.040	0.136±0.035	0.319±0.036	0.150±0.042
					脾指数(mg/g)	3.47±1.29	4.46±1.14	4.46±1.16	4.89±1.38

如表6、图6以及图7所示，与对照组相比，低剂量组、中剂量组和高剂量组小鼠的肝脏质量和脾脏质量均存在差异，但差异不具有统计学意义(P＞0.05)，且肝指数与脾指数均无显著性差异(P＞0.05)；低、中、高三组剂量组之间相比，肝指数和脾指数都没有显著性差异(P＞0.05)。由此可得，锁阳提取物对小鼠的肝脾无明显影响。

锁阳提取物对小鼠各项生化指标的影响

对血清进行生化检测，测得血清中SOD、GSH-Px、CAT的活性，如表7、图8、图9、图10所示，与对照组相比，高剂量组SOD、GSH-Px、CAT的活性均显著高于对照组，差异具有统计学意义(P＞0.05)；中剂量组只有SOD的活性显著高于对照组(P＞0.05)，而GSH-Px和CAT的活性虽然高于对照组，但差异无显著性不具有统计学意义(P＞0.05)；低剂量组SOD、GSH-Px、CAT的活性与对照组相比均没有显著性差异(P＞0.05)。由此可得，高剂量的锁阳提取物能有效提高机体内SOD、GSH-Px、CAT的活性从而起到良好的抗氧化作用及抗疲劳作用，且锁阳提取物提高SOD活性的能力强于GSH-Px以及CAT。

表7锁阳提取物对SOD、GSH-PX、CAT活性的影响

	对照组	低剂量组	中剂量组	高剂量组
					SOD(U/mL)	173.88±5.57	177.88±4.85	194.27±7.45*	198.59±4.98*
GSH-Px(U/mL)	14.36±2.15	16.83±2.44	17.85±3.78	20.60±4.27*
					CAT(U/mL)	3.51±0.38	3.75±0.95	4.64±1.77	5.72±2.35*

*：与对照组相比，P＜0.05

实验分析

本实施例通过研究锁阳提取物对小鼠体重、力竭游泳时间、脏器指数、SOD、GSH-Px、CAT的影响来评价锁阳提取物对小鼠的抗疲劳作用。

小鼠在连续三周灌胃给药期间的体重变化可以反映锁阳提取物对小鼠生长状况的影响。通过研究锁阳提取物对小鼠体重的影响发现，各组小鼠在实验期间的体重均无显著性差异，表明锁阳提取物对小鼠体重无明显影响，且小鼠在饲养期间未出现死亡个例以及解剖后未发现脏器病变，即表明锁阳提取物不影响小鼠的正常生长。

运动耐力是评估抗疲劳作用的重要指标，可通过力竭游泳实验评估锁阳提取物对小鼠运动耐力的影响来评估锁阳提取物的抗疲劳效果。小鼠力竭游泳运动实验时的游泳时间可以反映小鼠的运动耐力。比较各组小鼠的游泳时间发现，锁阳提取物三个剂量组的小鼠的游泳时间与对照组小鼠的游泳时间相比，都有显著性延长；且高剂量组对比于中、低剂量组小鼠游泳时间也有显著性延长，此结果表明，高、中、低三种剂量的锁阳提取物均可有效提高小鼠运动耐力，即锁阳提取物对小鼠的抗疲劳作用效果明显，且高剂量的锁阳提取物抗疲劳效果最好。

糖原是机体运动后的主要能量来源，机体内的糖原含量可直接影响机体的运动能力，提高糖原储备量可有效抵抗疲劳的产生，因此可通过研究机体内的糖原含量来研究药物的抗疲劳作用，而肝脏指数可以反映机体内的糖原含量。脾脏是人体重要的免疫器官，当疲劳产生时，体内自由基增多，器官免疫能力下降，脾脏指数则表现为下降。因此可通过测定肝指数、脾指数来研究药物的抗疲劳作用，同时肝、脾指数还可以反映药物是否对肝脾有损害。研究锁阳提取物对小鼠肝、脾指数的影响发现，各剂量组及对照组间的肝、脾质量以及肝指数、脾指数的差异不具有统计学意义，表明锁阳提取物对小鼠的肝脾无显著的影响，即锁阳提取物对小鼠肝脾没有损害。

超氧化物歧化酶(SOD)可对抗氧自由基对细胞的损害，并具有修复受损细胞的能力。谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)中的砷能催化还原型谷胱甘肽还原脂质过氧化物，最终使其变成无毒无害的羟基化合物，从而保护细胞膜的结构及功能不受过氧化物的干扰及损坏。过氧化氢酶(CAT)可促使过氧化氢分解为分子氧和水，清除体内的过氧化氢，从而保护细胞免受过氧化氢的干扰及损坏。这三种酶在机体内的活性可有效表明机体内抗氧化系统的活力，可以此来评价锁阳提取物的抗疲劳作用。研究锁阳提取物对SOD、GSH-PX、CAT活性的影响发现，与对照组相比，高剂量组SOD、GSH-Px、CAT的活性均显著高于对照组，差异具有统计学意义(P＞0.05)；中剂量组只有SOD的活性显著高于对照组；而低剂量组SOD、GSH-Px、CAT的活性与对照组相比无显著性差异。此研究结果表明，在提高抗氧化酶的活性方面，只有高剂量的锁阳提取物有明显作用，即高剂量的锁阳提取物对小鼠的抗疲劳效果最好。

结果表明，锁阳提取物对小鼠的体重及自然生长并无明显影响，能够有效延长小鼠力竭游泳时间提高小鼠运动耐力，但对小鼠的肝脾无显著的影响，并且只有高剂量的锁阳提取物在提高抗氧化酶的活性方面有明显作用，但总体结果显示锁阳提取物对小鼠具有良好的抗疲劳作用，且高剂量的锁阳提取物对小鼠的抗疲劳效果最好。

锁阳具有许多的作用与功效，是一味极具药用价值的中药材，同时通过本发明证实了锁阳提取物对小鼠有一定的抗疲劳作用。

Claims (6)

1.锁阳提取物在制备抗疲劳药物中的应用。

2.根据权利要求1所述的锁阳提取物在制备抗疲劳药物中的应用，其特征在于，应用的表现方式为制剂，该制剂包括所述锁阳提取物和药学上可接受的辅料。

3.根据权利要求2所述的所述的锁阳提取物在制备抗疲劳药物中的应用，其特征在于，药学上可接受的辅料选自稀释剂、粘合剂、崩解剂、表面活性剂、包衣材料、胶囊材料和成膜材料中的至少一种。

4.锁阳提取物在制备生物制品中的应用。

5.根据权利要求1所述的锁阳提取物在制备抗疲劳药物中的应用，其特征在于，所述的锁阳提取物选自水提物、无水乙醇提取物、乙醇水溶液提取物、水蒸气蒸馏挥发油或超临界萃取提取物。

6.根据权利要求4所述的锁阳提取物在制备生物制品中的应用，其特征在于，所述的锁阳提取物选自水提物、无水乙醇提取物、乙醇水溶液提取物、水蒸气蒸馏挥发油或超临界萃取提取物。