CN109320569A - 一种从黄芩中提取高纯度黄芩苷的方法 - Google Patents

Abstract

本发明涉及一种从黄芩中提取纯化黄芩苷的方法。本发明采用闪式提取法对黄芩进行提取，提取液浓缩，浓缩液加入高分子絮凝剂进行吸附澄清，上层澄清液继续浓缩，然后加酸调酸性，从而获得高纯度的黄芩苷。该制备工艺操作简便、节能环保，产品中无有毒溶剂的残留，适于利用黄芩工业化生产高纯度黄芩苷。

Description

一种从黄芩中提取高纯度黄芩苷的方法

技术领域

本发明属于医药领域，涉及中药活性成分的提取及纯化方法，具体涉及从黄芩中提取高纯度黄芩苷及其纯化方法。

背景技术

黄芩为唇形科植物黄芩(ScutellariabaicalensisGeorgi)的干燥根，具有清热燥湿、泻火解毒、止血安胎等功效。药理研究表明其具有抗炎、抗菌、抗变态反应、利尿、利胆及解痉等药理活性，黄芩苷作为其主要活性成分，其在药材中含量达到10%及以上。

目前从黄芩中提取黄芩苷常用方法有水煎煮法、回流提取法、超声提取法、微波提取法、超临界流体提取法等。传统的提取工艺为水提、酸沉、过滤、碱溶、再酸沉，该传统工艺中两次酸沉，操作繁琐，且碱溶后溶液过滤困难，耗时费力。专利公开号CN105001285A公开了一种从黄芩中提取黄芩苷的方法，具体步骤为：黄芩药材粉碎，和溶剂一并放入超声搅拌器中搅拌，混合物回流提取3～4次，浓缩，柠檬酸调pH至1～3，得粗产品，粗产品用甲醇溶解后过硅胶柱层析，最后用甲醇重结晶。此工艺引入超声搅拌工艺并通过硅胶柱层析来提纯黄芩苷，这是其创新之处，但是甲醇溶剂残留毒性强，且上述方法采用传统回流法提取，生产时间长，能耗高。专利公开号CN103694294A就公布了一种利用闪式提取技术提取黄芩苷的方法，具体步骤为：黄芩饮片放入提取罐中闪提，过滤，浓缩制浸膏，加浸膏15倍量水，调pH至1～2，保温，过滤，沉淀碱溶，加入等量乙醇，搅拌，过滤，调pH至1～2，保温，过滤，洗涤。此工艺虽利用闪式提取代替传统提取方法，但其余纯化步骤均为繁琐耗时的传统工艺流程，尤以制备黄芩浸膏耗时长，能耗高。故，开发一种从黄芩中提取纯化黄芩苷的新型工艺是很有必要的。

闪式提取技术是一种用于植物软、硬组织破碎的新型提取技术，它能在室温下将溶剂中的药材碎至细微颗粒，有效成分在数秒钟或数分钟内扩散到溶剂中，能避免药材中活性成分受热破坏，提取时间短，效率高。近年，闪式提取法在中药有效成分提取中越来越受到研究者的青睐。

有机絮凝剂是一种高分子聚合物，它的分子量很大，由于絮凝剂是较长的线状结构，有许多官能团，通过吸附，架桥，絮凝作用，使提取液中许多不稳定的微粒连接成絮团，絮团逐渐增长变成较大的絮团，因而加快了微粒的沉降速度（服从Stokes定律），通常用于医药、食品等行业的固液分离过程，去除无效成分，提高有效成分含量。黄芩提取浓缩液是由真溶液、胶体溶液、乳浊液和混悬液组成的复杂混合分散体系，其微粒按组成分为药渣性微粒（药材组织物）、难溶性和不溶性成分的多分子聚集体、细胞碎片及其聚集物。这些微粒一般带电荷，形成的双电层相互排斥作用而保持稳定。黄芩苷的传统制备工艺中，当黄芩浓缩液加酸酸化时，药液中微粒的电荷被中和，这些微粒随黄芩苷一起沉淀析出，故沉淀物中杂质的含量偏高，仍需碱溶和二次酸沉等工艺步骤才能获得较高纯度的黄芩苷。本发明引入了吸附澄清方法，去除了碱溶与二次酸沉步骤，不仅效率更高，且所得黄芩苷纯度也高。

发明内容

本发明旨在开发一种节能环保、能够迅速高效地从黄芩中提取纯化黄芩苷的方法。

本发明目的通过以下技术方案实现，包括以下步骤：

（A）黄芩粗粉，乙醇浸泡，闪式提取法提取；

（B）将步骤（A）所得提取液浓缩；

（C）将步骤（B）所得浓缩液用高分子絮凝剂进行吸附澄清；

（D）将步骤（C）所得上层澄清液浓缩回收乙醇、加酸调酸性析出沉淀、干燥，即得。

本发明进一步提供上述技术方案的优选技术方案。

步骤（A）中浸泡30min～60min，乙醇浓度为50%～90%，溶剂用量为药材量的6～12ml/g，提取次数为2～3次，提取时间为2～3min。

步骤（B）中所述的浓缩方法可为常温或减压浓缩，优选为减压浓缩，药液浓缩至含黄芩0.1～0.5g/ml。

步骤（C）所述高分子絮凝剂包括明胶类、海藻酸钠、甲壳素及其衍生物、壳聚糖、101果汁澄清剂、聚凝净、ZTC天然澄清剂、丹宁、蛋清中的一种，优选絮凝剂为壳聚糖；具体加入量：每100ml浓缩液加入1%壳聚糖的乙酸溶液（1g壳聚糖溶解于100ml1%的乙酸溶液中）10～50ml，优选10～20ml；絮凝温度为20～90℃；吸附澄清时间为30～300分钟。

步骤（D）所述酸是无机酸，包括硫酸，盐酸、硝酸和冰醋酸，浓度为5%～50%，优选为8%～10%盐酸。

本发明的有益效果：

本发明选用闪式提取法提取黄芩，提取迅速，缩短生产周期，提取过程中无需加热，减少了能耗。同时本发明制备产品仅需乙醇为溶剂，不污染环境，产品中无有毒的有机溶剂残留；吸附澄清所用的壳聚糖无毒无味，可生物降解，不污染环境，且澄清药液的成本低廉。吸附澄清在中药制剂通常用于去除药液中混悬的杂质以获得澄清的药液，本发明发现黄芩药液经吸附澄清减少药液的杂质后，再加酸酸化即可获得高纯度的黄芩苷。因此，本发明作为一个全新、整体的方案，是一种节能环保、迅速高效地从黄芩中提取纯化黄芩苷的新方法。

具体实施方式

下面通过实施例进一步说明本发明。应该理解的是，本发明的实施例是用于说明而不是对本发明的限制。根据本发明的实质对本发明进行的简单改进都属于本发明要求保护的范围。

本发明各实施例均采用高效液相色谱法测定样品中黄芩苷的含量，色谱条件如下：色谱柱InertSustain C18色谱柱(4.6mm×250mm，5μm)；流动相：甲醇-0.1%磷酸溶液(57:43)；流速：1 ml·min^-1；检测波长：280 nm；柱温：40℃；进样量：10μl。

实施例1：

称取黄芩粗粉50g，加9倍量50％乙醇浸泡1h，闪式提取法提取2次，提取液用四层纱布滤过。于上述色谱条件下测定提取液中黄芩苷含量并计算提取率。

实施例2：

称取黄芩粗粉50g，加9倍量70％乙醇浸泡1h，闪式提取法提取2次，提取液用四层纱布滤过。于上述色谱条件下测定提取液中黄芩苷含量并计算提取率。

实施例3：

称取黄芩粗粉50g，加9倍量90％乙醇浸泡1h，闪式提取法提取2次，提取液用四层纱布滤过。于上述色谱条件下测定提取液中黄芩苷含量并计算提取率。

实施例4：

称取黄芩粗粉50g，加9倍量70％乙醇浸泡1h，回流提取法提取2次，提取液用四层纱布滤过。于上述色谱条件下测定提取液中黄芩苷含量并计算提取率。

实施例5：

称取黄芩粗粉50g，加9倍量70％乙醇浸泡1h，超声提取法提取2次，提取液用四层纱布滤过。于上述色谱条件下测定提取液中黄芩苷含量并计算提取率。

表1不同提取方法与不同浓度乙醇提取黄芩苷

实施例	黄芩苷提取量（mg/g）	提取率（%）
			1	78.3114	77.53
2	68.5799	67.90
			3	25.2154	24.96
4	38.1852	37.80
			5	42.5339	42.11

表1可见，随着乙醇浓度从50%增大到90%，黄芩苷的两次提取率由77.53%减小至24.96%；在70％乙醇溶剂下，采用闪式提取法，黄芩苷的两次提取率达到67.90%左右，明显高于回流法（37.80%）与超声法（42.11%）。

实施例6：

称取黄芩粗粉50g，加10倍量70％乙醇，闪式提取2次，每次90s，提取液过滤。将提取液减压浓缩至药液浓缩至含黄芩0.16g/ml时，每100ml浓缩液加10ml1%壳聚糖乙酸溶液进行吸附澄清，澄清液加盐酸调pH至1～2，抽滤得产品，烘干，得固体物质量为1.0073g，测得固体物黄芩苷的含量为95.89%。

实施例7：

称取黄芩粗粉50g，加10倍量70％乙醇，闪式提取2次，每次90s，提取液过滤。将提取液减压浓缩至药液浓缩至含黄芩0.16g/ml时，每100ml浓缩液加15ml1%壳聚糖乙酸溶液进行吸附澄清，澄清液加盐酸调pH至1～2，抽滤得产品，烘干，得固体物质量为0.8866g，测得固体物黄芩苷的含量为96.75%。

实施例8：

称取黄芩粗粉50g，加10倍量50％乙醇，闪式提取2次，每次90s，提取液过滤。将提取液减压浓缩至药液浓缩至含黄芩0.25g/ml时，每100ml浓缩液加10ml1%壳聚糖乙酸溶液进行吸附澄清，澄清液加盐酸调pH至1～2，抽滤得产品，烘干，得固体物质量为0.8443g，测得固体物黄芩苷的含量为96.72%。

实施例9：

称取黄芩粗粉50g，加10倍量50％乙醇，闪式提取2次，每次90s，提取液过滤。将提取液减压浓缩至药液浓缩至含黄芩0.25g/ml时，每100ml浓缩液加15ml1%壳聚糖乙酸溶液进行吸附澄清，澄清液加盐酸调pH至1～2，抽滤得产品，烘干，得固体物质量为0.9084g，测得固体物黄芩苷的含量为97.19%。

实施例10：

称取黄芩粗粉50g，加10倍量50％乙醇，闪式提取2次，每次90s，提取液过滤。将提取液减压浓缩至药液浓缩至含黄芩0.10g/ml时，每100ml浓缩液加10ml1%壳聚糖乙酸溶液进行吸附澄清，澄清液加盐酸调pH至1～2，抽滤得产品，烘干，得固体物质量为1.0174g，测得固体物黄芩苷的含量为90.34%。

实施例11：

称取黄芩粗粉50g，加10倍量50％乙醇，闪式提取2次，每次90s，提取液过滤。将提取液减压浓缩至药液浓缩至含黄芩0.10g/ml时，每100ml浓缩液加15ml1%壳聚糖乙酸溶液进行吸附澄清，澄清液加盐酸调pH至1～2，抽滤得产品，烘干，得固体物质量为0.9493g，测得固体物黄芩苷的含量为92.69%。

对照例：

称取黄芩粗粉50g，加10倍量50％乙醇，闪式提取2次，每次90s，提取液过滤。将提取液减压浓缩至制浸膏，浸膏加15倍量蒸馏水，加热到80℃，保温60min，然后往溶液中加酸调pH至1～2，60℃保温3h，过滤得黄芩苷粗产品，粗产品加入10倍量蒸馏水，20%NaOH溶液调pH至6～7，搅拌，滤液加等体积95%乙醇，再调pH至1～2，60℃保温30min，抽滤得固体物，烘干，得固体物质量为0.9974g，测得固体物黄芩苷的含量为78.16%。

Claims (8)

1.一种从黄芩中提取纯化黄芩苷的方法，其特征在于，其制备工艺包括以下步骤：

（A）黄芩粗粉，乙醇浸泡，闪式提取法提取；

（B）将步骤（A）所得提取液浓缩；

（C）将步骤（B）所得浓缩液用高分子絮凝剂进行吸附澄清；

（D）将步骤（C）所得上层澄清液浓缩回收乙醇、加酸调酸性析出沉淀、干燥，即得。

2.如权利要求1所述的一种从黄芩中提取纯化黄芩苷的方法，其特征在于，所述步骤（A）闪式提取法的溶剂选用50%～90%乙醇，溶剂用量为药材质量的6～12 mL/g。

3.如权利要求2所述的一种从黄芩中提取纯化黄芩苷的方法，其特征在于，所述闪式提取法的提取次数为1～3次。

4.如权利要求1所述的一种从黄芩中提取纯化黄芩苷的方法，其特征在于，所述步骤（B）的浓缩方法选用常温或减压浓缩，药液浓缩至含黄芩0.1g-1.0g/ml。

5.如权利要求1所述的一种从黄芩中提取纯化黄芩苷的方法，其特征在于，所述步骤（C）的高分子絮凝剂包括明胶类、海藻酸钠、甲壳素及其衍生物、壳聚糖、101果汁澄清剂、聚凝净、ZTC天然澄清剂、丹宁、蛋清中的一种。

6.如权利要求1所述的一种从黄芩中提取纯化黄芩苷的方法，其特征在于，所述步骤（D）的上层澄清液减压回收乙醇后，加酸调节pH至1～2。

7.如权利要求6所述的一种从黄芩中提取纯化黄芩苷的方法，其特征在于所用酸为无机酸。

8.如权利要求7所述的一种从黄芩中提取纯化黄芩苷的方法，其特征在于，所述无机酸选自硫酸、冰醋酸、硝酸与盐酸。