CN107892688A - 一种从黄柏中制备盐酸小檗碱的方法 - Google Patents

Abstract

本发明涉及一种从黄柏中提取纯化盐酸小檗碱的方法。本发明采用闪式提取法对黄柏进行提取，提取液回收部分乙醇，浓缩液加入高分子絮凝剂进行吸附澄清，上层澄清液继续浓缩，浓缩的澄清液加盐酸调至酸性而获得高纯度的盐酸小檗碱。该制备工艺操作简便、节能环保，产品中无有毒溶剂的残留，适用于利用黄柏制备高纯度盐酸小檗碱的工业化生产。

Description

一种从黄柏中制备盐酸小檗碱的方法

技术领域

本发明属于医药领域，涉及中药活性成分的提取及纯化方法，具体涉及从黄柏中提取、制备盐酸小檗碱的方法。

背景技术

黄柏为芸香科植物黄柏(PhellodendronamurenseRupr.)和川黄柏（P.chinenseSchneid.）的树皮（去栓皮）。本品性味苦、寒，具有清热解毒、泻火燥湿之功效。药理研究表明其具有抗病原微生物，抗炎、镇痛，抗心律失常，抑制血小板聚集，降血压，降血脂，降血糖，抗氧化，抗溃疡，抗毒素，抗感染，增强免疫，解热镇吐，抗癌等药理活性。小檗碱为黄柏的主要活性成分，其中川黄柏中小檗碱的含量高达3%以上。

目前从黄柏中提取盐酸小檗碱常用方法有回流提取法、超声提取法、微波提取法、超临界流体提取法等。传统的提取工艺为醇提、制浸膏、沸水溶、酸沉，该传统工艺中制浸膏步骤操作繁琐，耗时耗力。专利公开号CN101491596A公开了一种从黄柏中提取盐酸小檗碱的方法，具体步骤为：黄柏药材粉碎，提取，调pH至1～7，过滤，滤液过阳离子交换树脂得产品。但本法以离子交换树脂作为纯化手段，其一次可处理的样品少，洗脱费时。专利公开号CN105755068A公布了一种利用复合酶法提取盐酸小檗碱的方法，具体步骤为：(1)黄柏药材粉碎，加水浸泡，(2)向其中加入β葡聚糖酶、木聚糖酶、植酸酶、角质酶，用稀盐酸调节pH，酶解，煮沸，使酶失活，得到酶解产物；(3)加水，稀盐酸调pH，提取，趁热过滤，收集滤液；(4)滤渣中加入乙醇，浸提；(5)合并滤液，浓缩，用稀盐酸调pH，冷却，加入饱和NaCl溶液，4℃隔夜保存，抽滤，干燥即得。此工艺在水提过程中加入酶解步骤，但是整个工艺流程步骤多，繁琐耗时。况且两个专利提取所用方法均为热回流提取、浓缩，工艺过程需消耗大量的能源，且耗时长。

闪式提取技术是一种用于植物软、硬组织破碎的新型提取技术，它能在室温下将溶剂中的药材碎至细微颗粒，有效成分在数秒钟或数分钟内扩散到溶剂中。闪式提取法能避免药材中活性成分受热破坏，提取时间短，效率高，能减少能耗。近年来，闪式提取法在中药有效成分提取中受到越来越多研究者的青睐。

黄柏提取液是一种复杂的固液分散体系，由真溶液、胶体溶液、乳浊液和混悬液组成的混合分散体系。提取液中微粒按组成分为药渣性微粒（药材组织物）、难溶性和不溶性成分的多分子聚集体、细胞碎片及其聚集物。微粒一般具有亲水性、带有电荷和双电层、微粒之间存在范德华力作用、双电层相互排斥作用、溶剂化作用、疏水化作用、空间位阻效应等相互作用。黄柏提取液通常是浑浊的液体，且此浑浊液稳定性较强，增加了后续纯化的难度。

壳聚糖是一种高分子聚合物，它的分子量很大，具有较长的线状结构，有许多官能团，通过长碳链上的一些活性官能团可以吸附黄柏提取液的微粒。由于絮凝剂是较长的线状结构，有许多官能团，在同一个分子上可吸附多个微粒，因而它在微粒之间起了联系的作用，这种作用称为架桥作用。因此絮凝剂可以将许多微粒连结在一起形成一个絮团，絮团逐渐增长变成较大的絮团，因而加快了微粒的沉降速度。

发明内容

本发明旨在开发一种节能环保、能够迅速高效地从黄柏中提取纯化盐酸小檗碱的方法。

本发明目的通过以下技术方案实现，包括以下步骤：

（A）黄柏粗粉，乙醇浸泡，闪式提取法提取；

（B）将步骤（A）所得的黄柏提取液回收部分乙醇；

（C）将步骤（B）所得的黄柏浓缩液加入高分子絮凝剂进行吸附澄清；

（D）将步骤（C）所得的上层澄清液继续浓缩、加盐酸调至酸性析出结晶、干燥，即得。本发明进一步提供上述技术方案的优选技术方案。

步骤（A）黄柏粗粉用乙醇浸泡30min～60min，乙醇浓度为50%～90%，溶剂用量为药材量的8～18ml/g，提取次数为2～3次，提取时间为1～3min。

步骤（B）中所述的浓缩可为常温或减压浓缩，优选为减压浓缩，药液浓缩至含黄柏原药材0.1～0.25g/ml。

步骤（C）所述高分子絮凝剂包括明胶类、海藻酸钠、甲壳素及其衍生物、壳聚糖、101果汁澄清剂、聚凝净、ZTC天然澄清剂、丹宁、蛋清中的一种，优选絮凝剂为1%壳聚糖的乙酸溶液（1g壳聚糖溶解于100ml1%的乙酸溶液中）；100ml浓缩药液加入5～50ml壳聚糖溶液，优选用量为10～20ml；絮凝温度为20～90℃，较好温度为60～80℃。

步骤（D）所述酸是盐酸，浓度为1%～50%，优选为浓度5%～10%盐酸。

本发明的有益效果：

本发明生产过程节能环保：闪式提取法提取黄柏，提取过程中无需加热，能耗低；提取溶剂为乙醇，不污染环境，产品中无有毒的有机溶剂残留；所用的壳聚糖可生物降解，不污染环境。盐酸小檗碱经典的制备工艺为醇提、制浸膏、沸水溶、酸沉，该工艺操作繁琐，耗时、耗能。本发明采用壳聚糖吸附澄清方法来处理黄柏浓缩液，黄柏浓缩液经吸附澄清后，提取液中杂质大大减少，由混浊状态变为澄明的液体，在澄清液中加入盐酸调节pH值至酸性能直接析出纯度较高的盐酸小檗碱。本发明制备盐酸小檗碱工艺步骤简单，能耗少、生产时间短。因此，本发明作为一个全新、整体的方案，是一种节能环保、迅速高效地从黄柏中提取纯化盐酸小檗碱的新方法。

具体实施方式

下面通过实施例进一步说明本发明。应该理解的是，本发明的实施例是用于说明而不是对本发明的限制。根据本发明的实质对本发明进行的简单改进都属于本发明要求保护的范围。

本发明各实施例均采用高效液相色谱法测定样品中盐酸小檗碱的含量，色谱条件如下：色谱柱InertSustain C18色谱柱(4.6mm×250mm，5μm)；流动相：乙腈-0.1%磷酸溶液（每100ml加十二烷基磺酸钠0.1g）=60:40；流速：1 ml·min^-1；检测波长：265 nm；柱温：40℃；进样量：10μl。

实施例1：

称取黄柏粗粉101.2g，加9倍量30％乙醇浸泡1h，闪式提取法提取2次，提取液用四层纱布滤过。于上述色谱条件下测定提取液中小檗碱含量并计算提取量。

实施例2：

称取黄柏粗粉101.2g，加9倍量50％乙醇浸泡1h，闪式提取法提取2次，提取液用四层纱布滤过。于上述色谱条件下测定提取液中小檗碱含量并计算提取量。

实施例3：

称取黄柏粗粉100.4g，加9倍量70％乙醇浸泡1h，闪式提取法提取2次，提取液用四层纱布滤过。于上述色谱条件下测定提取液中小檗碱含量并计算提取量。

实施例4：

称取黄柏粗粉100.7g，加9倍量90％乙醇浸泡1h，闪式提取法提取2次，提取液用四层纱布滤过。于上述色谱条件下测定提取液中小檗碱含量并计算提取量。

实施例5：

称取黄柏粗粉102.4g，加9倍量70％乙醇浸泡1h，回流提取法提取2次，提取液用四层纱布滤过。于上述色谱条件下测定提取液中小檗碱含量并计算提取量。

实施例6：

称取黄柏粗粉100.4g，加9倍量70％乙醇浸泡1h，超声提取法提取2次，提取液用四层纱布滤过。于上述色谱条件下测定提取液中小檗碱含量并计算提取量。

表1不同提取方法与不同浓度乙醇提取小檗碱

实施例	小檗碱提取量（mg/g）
		1	11.7904
2	26.8206
		3	24.8651
4	15.5989
		5	16.7763
6	20.0744

表1可见，随着乙醇浓度从30%增大到90%，小檗碱的两次提取量再增大再减小，在50%乙醇时小檗碱提取率达到最大值；在70％乙醇溶剂下，采用闪式提取法，小檗碱的两次提取量均明显高于回流法和超声法。

实施例7：

称取黄柏粗粉50g，加10倍量70％乙醇，闪式提取2次，每次90s，提取液过滤。将提取液减压浓缩至含黄柏原药材0.25g/ml时，每100ml浓缩液加10ml1%壳聚糖乙酸溶液进行吸附澄清，澄清液继续浓缩，再加盐酸调pH至1～2，静置，抽滤得产品，干燥得固体物质量为1.0073g，测得固体物中盐酸小檗碱的含量为86.70%。

实施例8：

称取黄柏粗粉50g，加10倍量70％乙醇，闪式提取2次，每次90s，提取液过滤。将提取液减压浓缩至含黄柏原药材0.25g/ml时，每100ml浓缩液加15ml1%壳聚糖乙酸溶液进行吸附澄清，澄清液继续浓缩，再加盐酸调pH至1～2，静置，抽滤得产品，干燥得固体物质量为0.8866g，测得固体物中盐酸小檗碱的含量为76.37%。

实施例9：

称取黄柏粗粉50g，加10倍量50％乙醇，闪式提取2次，每次90s，提取液过滤。将提取液减压浓缩至含黄柏原药材0.20g/ml时，每100ml浓缩液加10ml1%壳聚糖乙酸溶液进行吸附澄清，澄清液继续浓缩，再加盐酸调pH至1～2，静置，抽滤得产品，干燥得固体物质量为0.8443g，测得固体物中盐酸小檗碱的含量为94.87%。

实施例10：

称取黄柏粗粉50g，加10倍量50％乙醇，闪式提取2次，每次90s，提取液过滤。将提取液减压浓缩至含黄柏原药材0.20g/ml时，每100ml浓缩液加15ml1%壳聚糖乙酸溶液进行吸附澄清，澄清液继续浓缩，再加盐酸调pH至1～2，静置，抽滤得产品，干燥得固体物质量为0.9084g，测得固体物中盐酸小檗碱的含量为90.90%。

实施例11：

称取黄柏粗粉50g，加10倍量50％乙醇，闪式提取2次，每次90s，提取液过滤。将提取液减压浓缩至含黄柏原药材0.10g/ml时，每100ml浓缩液加10ml1%壳聚糖乙酸溶液进行吸附澄清，澄清液继续浓缩，再加盐酸调pH至1～2，静置，抽滤得产品，干燥得固体物质量为1.0174g，测得固体物中盐酸小檗碱的含量为83.68%。

实施例12：

称取黄柏粗粉50g，加10倍量50％乙醇，闪式提取2次，每次90s，提取液过滤。将提取液减压浓缩至含黄柏原药材0.10g/ml时，每100ml浓缩液加15ml1%壳聚糖乙酸溶液进行吸附澄清，澄清液继续浓缩，再加盐酸调pH至1～2，静置，抽滤得产品，干燥得固体物质量为0.9493g，测得固体物中盐酸小檗碱的含量为92.25%。

对照例：

称取黄柏粗粉50g，加10倍量50％乙醇，闪式提取2次，每次90s，提取液过滤。将提取液减压浓缩至制浸膏，浸膏加10倍量沸水，搅拌，过滤，滤去不溶物，然后往溶液中加酸调pH至1～2，60℃保温3h，过滤得盐酸小檗碱粗产品，粗产品加入10倍量蒸馏水，20%NaOH，调pH至6～7，搅拌，滤液加等体积95%乙醇，再调pH至1～2，60℃保温30min，抽滤得固体物，烘干，得固体物质量为0.9974g，测得固体物中盐酸小檗碱的含量为77.65%。

Claims (8)

1.一种从黄柏中制备盐酸小檗碱的方法，其特征在于，其制备工艺包括以下步骤：

（A）黄柏粗粉，乙醇浸泡，闪式提取法提取；

（B）将步骤（A）所得的黄柏提取液回收部分乙醇；

（C）将步骤（B）所得的黄柏浓缩液加入高分子絮凝剂进行吸附澄清；

（D）将步骤（C）所得的上层澄清液继续浓缩、加盐酸调至酸性析出结晶、干燥，即得。

2.如权利要求1所述的一种从黄柏中提取纯化盐酸小檗碱的方法，其特征在于，所述步骤（A）的溶剂选用50%～90%乙醇，溶剂用量为药材质量的8～18 ml/g。

3.如权利要求2所述的一种从黄柏中提取纯化盐酸小檗碱的方法，其特征在于，所述闪式提取法的提取次数为1～3次。

4.如权利要求1所述的一种从黄柏中提取纯化盐酸小檗碱的方法，其特征在于，所述步骤（B）的浓缩方法选用常温或减压浓缩，药液浓缩至含黄柏原药材0.1～0.25g/ml。

5.如权利要求1所述的一种从黄柏中提取纯化盐酸小檗碱的方法，其特征在于，所述步骤（C）的高分子絮凝剂为絮凝剂包括明胶类、海藻酸钠、甲壳素及其衍生物、壳聚糖、101果汁澄清剂、聚凝净、ZTC天然澄清剂、丹宁、蛋清中的一种。

6.根据权利要求1或5所述的方法，其特征在于，步骤（C）的絮凝剂为壳聚糖。

7.根据权 利要求6所述的方法，其特征在于，先将1g壳聚糖溶于100 ml 1%的乙酸中，得到壳聚糖的乙酸溶液，再在每100ml浓缩液中加入所述的壳聚糖的乙酸溶液10～50ml，絮凝温度为20～90℃。

8.如权利要求1所述的一种从黄柏中提取纯化盐酸小檗碱的方法，其特征在于，所述步骤（D）的乙醇液减压回收乙醇后，加盐酸调节pH至1～3。