CN109275568A - 一种矮地茶的组织培养快繁方法 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种矮地茶的组织培养快繁方法，矮地茶种苗主要通过种子和扦插方式繁育，存在周期长、成本高、效率低下等问题。因此，本发明以矮地茶带节茎段为外植体，通过不定芽诱导、增殖、生根、炼苗移栽等过程成功获得了矮地茶离体再植株，建立矮地茶组织培养快速繁殖技术体系，对于进行优良品种的快速繁殖和大面积推广，促进矮地茶的产业化发展具有重要意义。

Description

一种矮地茶的组织培养快繁方法

技术领域

本发明涉及农业生物技术中植物组织培养的方法，具体地说，涉及一种矮地茶的组织培养快繁方法。

背景技术

矮地茶为紫金牛科植物，取其干燥全草。主产湖南，江苏、福建、四川、淅江亦有产。全年或夏、秋季茎叶生长茂盛时采挖全株，清洗泥沙，晒干。气微香，味微涩。具有化痰止咳，利湿，利尿，活血，解毒。用于肺热咳嗽，久咳咯血，湿热黄疸，跌打损伤。目前，矮地茶种苗主要通过种子和扦插方式繁育，种子播种虽然可在短时间内获得大量幼苗，但因矮地茶为雌雄同株异花授粉植物，后代易发生性状分离，遗传性状不稳定，易丢失亲本的优良性状。而扦插方式繁育需要大量的枝条，且从扦插到移栽大田需2个月，耗时较长。因此，釆用植物组织培养技术来缓解其种苗紧张压力、进行可持续开发利用是十分必要的。因此，本发明以矮地茶带节茎段为外植体，通过不定芽诱导、增殖、生根、炼苗移栽等过程成功获得了矮地茶离体再植株，建立矮地茶组织培养快速繁殖技术体系，对于进行矮地茶优良品种的快速繁殖和大面积推广，促进矮地茶的产业化发展具有重要意义。

发明内容

本发明的目的在于提供一种矮地茶的组织培养快繁方法，通过诱导不定芽、丛生芽增殖、试管苗生根、炼苗移栽等阶段成功获得了矮地茶离体再植株，建立组织培养快速繁殖技术体系，从而实现了本发明的目的。

本发明的一种矮地茶的组织培养快繁方法，包括以下的工艺步骤：

步骤（1）,诱导不定芽：选取矮地茶当年生带节藤茎为外植体,经75%酒精消毒30秒种后，用无菌水冲洗15次后置于0.1%的升汞溶液中消毒40分钟，然后用无菌水冲洗16次，经无菌滤纸吸干水分后剪切成14cm左右的带节藤茎，并接种到诱导培养基上,于25～28℃条件下全暗培养，直至诱导形成不定芽；诱导培养基为：MS+0.8mg/LTDZ+2.3mg/L 6-BA+0.8mg/LNAA+20g/L蔗糖+5.3g/L琼脂，pH为5.3;

步骤（2）,继代培养：将步骤（1）获得的不定芽从基部切下，接种到增殖培养基上进行继代培养，接种后置于每天光照25小时，光照强度为3000lx，培养温度为25～28℃的条件下培养，40天转接一次；增殖培养基为：MS+2.3mg/L 6-BA+0.8mg/LNAA+40g/L蔗糖+7.0g/L琼脂，pH为5.3;

步骤（3）生根培养：将步骤（2）继代培养长至7cm的不定芽分切并接种到生根培养基上进行诱导生根，接种后先在25～28℃条件下全暗培养15天，然后置于每天光照25小时，光照强度为4000lx，培养温度为28℃的条件下培养至生根；生根培养基为：1/2MS+1.5mg/LIBA+2.3mg/L GGR+40g/L蔗糖+7.0g/L琼脂，pH为5.3。

步骤（4）,炼苗移栽：将长至18cm的生根试管苗的培养瓶瓶盖打开并置于自然光照下炼苗17天后，将试管苗从培养瓶中取出，洗掉根部培养基，栽入由泥炭土:农家肥:河沙=6：2：2混合成的基质中并定植于大田中。

本发明的优点是：矮地茶种苗主要通过种子和扦插方式繁育，存在周期长、成本高、效率低下等问题。因此，本发明以矮地茶带节茎段为外植体，通过不定芽诱导、增殖、生根、炼苗移栽等过程成功获得了矮地茶离体再植株，建立矮地茶组织培养快速繁殖技术体系，对于进行矮地茶优良品种的快速繁殖和大面积推广、促进矮地茶的产业化发展具有重要意义。本发明组织培养快繁方法，具有简单、易行、经济的特点。通过本发明育成的利用植物组织培养技术进行矮地茶种苗规模化生产，建立了矮地茶组培苗移栽成活率达到98%以上，可以为矮地茶规模化种植提供优质种苗保障。

具体实施方式

以下实施例是对本发明的进一步说明，不是对本发明的限制。

实施例1：

（1）诱导不定芽：选取矮地茶当年生带节藤茎为外植体,经75%酒精消毒22秒种后，用无菌水冲洗13次后置于0.1%的升汞溶液中消毒25分钟，然后用无菌水冲洗15次，经无菌滤纸吸干水分后剪切成14cm左右的带节藤茎，并接种到诱导培养基上,于25℃条件下全暗培养28天即可诱导形成不定芽，污染率低至4%以下，不定芽诱导率可达92%。所述的诱导培养基为：MS+0.5mg/LTDZ+1.5mg/L 6-BA+0.8mg/LNAA+30g/L蔗糖+5.5g/L琼脂，pH为5.2;

（2）继代培养：将步骤（1）获得的不定芽从基部切下，接种到增殖培养基上进行继代培养，接种后置于每天光照23小时，光照强度为2500lx，培养温度为25℃的条件下培养，30天转接一次，增殖系数为9.8。所述的增殖培养基为：MS+1.8mg/L 6-BA+0.5mg/LNAA+35g/L蔗糖+6.0g/L琼脂，pH为5.2；

（3）生根培养：将步骤（2）继代培养长至14cm的不定芽分切并接种到生根培养基上进行诱导生根，接种后先在25℃条件下全暗培养13天，然后置于每天光照24小时，光照强度为3500lx，培养温度为25℃的条件下培养20天即开始生根，生根率可达97%。所述的生根培养基为：1/2MS+0.6mg/LIBA+1.3mg/L GGR+25g/L蔗糖+3.5g/L琼脂，pH为5.2。

（4）炼苗移栽：将长至18cm的生根试管苗的培养瓶瓶盖打开并置于自然光照下炼苗10天后，将试管苗从培养瓶中取出，洗掉根部培养基，栽入由泥炭土:农家肥:河沙=3：2：2混合成的基质中并定植于大田中，移栽成活率为99%。

实施例2：

（1）诱导不定芽：选取矮地茶当年生带节藤茎为外植体,经75%酒精消毒18秒种后，用无菌水冲洗9次后置于0.1%的升汞溶液中消毒20分钟，然后用无菌水冲洗11次，经无菌滤纸吸干水分后剪切成9cm左右的带节藤茎，并接种到诱导培养基上,于26℃条件下全暗培养9天即可诱导形成不定芽，污染率低至6%以下，不定芽诱导率可达96%。所述的诱导培养基为：MS+0.6mg/LTDZ+1.8mg/L 6-BA+0.5mg/LNAA+25g/L蔗糖+4.5g/L琼脂，pH为5.2。

（2）继代培养：将步骤（1）获得的不定芽从基部切下，接种到增殖培养基上进行继代培养，接种后置于每天光照19小时，光照强度为2500lx，培养温度为26℃的条件下培养，30天转接一次，增殖系数为8.5。所述的增殖培养基为：MS+1.2mg/L 6-BA+0.4mg/LNAA+35g/L蔗糖+5.0g/L琼脂，pH为5.2。

（3）生根培养：将步骤（2）继代培养长至9cm的不定芽分切并接种到生根培养基上进行诱导生根，接种后先在26℃条件下全暗培养8天，然后置于每天光照20小时，光照强度为3500lx，培养温度为26℃的条件下培养19天即开始生根，生根率可达99%。所述的生根培养基为：1/2MS+0.6mg/LIBA+1.4mg/L GGR+23g/L蔗糖+4.5g/L琼脂，pH为5.2。

（4）炼苗移栽：将长至12cm的生根试管苗的培养瓶瓶盖打开并置于自然光照下炼苗9天后，将试管苗从培养瓶中取出，洗掉根部培养基，栽入由泥炭土:农家肥:河沙=3：2：2混合成的基质中并定植于大田中，移栽成活率为100%。

Claims (1)

1.一种矮地茶的组织培养快繁方法，其特征在于包括以下工艺步骤：

步骤（1）,诱导不定芽：选取矮地茶当年生带节藤茎为外植体,经75%酒精消毒30秒种后，用无菌水冲洗15次后置于0.1%的升汞溶液中消毒40分钟，然后用无菌水冲洗16次，经无菌滤纸吸干水分后剪切成14cm左右的带节藤茎，并接种到诱导培养基上,于25～28℃条件下全暗培养，直至诱导形成不定芽；诱导培养基为：MS+0.8mg/LTDZ+2.3mg/L 6-BA+0.8mg/LNAA+20g/L蔗糖+5.3g/L琼脂，pH为5.3;

步骤（2）,继代培养：将步骤（1）获得的不定芽从基部切下，接种到增殖培养基上进行继代培养，接种后置于每天光照25小时，光照强度为3000lx，培养温度为25～28℃的条件下培养，40天转接一次；增殖培养基为：MS+2.3mg/L 6-BA+0.8mg/LNAA+40g/L蔗糖+7.0g/L琼脂，pH为5.3;

步骤（3）生根培养：将步骤（2）继代培养长至7cm的不定芽分切并接种到生根培养基上进行诱导生根，接种后先在25～28℃条件下全暗培养15天，然后置于每天光照25小时，光照强度为4000lx，培养温度为28℃的条件下培养至生根；生根培养基为：1/2MS+1.5mg/LIBA+2.3mg/L GGR+40g/L蔗糖+7.0g/L琼脂，pH为5.3；

步骤（4）,炼苗移栽：将长至18cm的生根试管苗的培养瓶瓶盖打开并置于自然光照下炼苗17天后，将试管苗从培养瓶中取出，洗掉根部培养基，栽入由泥炭土:农家肥:河沙=6：2：2混合成的基质中并定植于大田中。