CN109329063A - 一种地柏枝的组织培养快繁方法 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种地柏枝的组织培养快繁方法，地柏枝为多年生草木，产于湖北、陕西、广西等长江以南大部份地区。生于山间、林荫等阴湿处味甘、辛，性平。具有止血，清热，利湿等作用。目前，地柏枝种苗主要通过种子和扦插方式繁育，存在周期长、成本高、效率低下等问题。因此，本发明以带节茎段为外植体，通过不定芽诱导、增殖、生根、炼苗移栽等过程成功获得了地柏枝离体再植株，建立地柏枝组织培养快速繁殖技术体系，对于进行优良品种的快速繁殖和大面积推广、促进的产业化发展具有重要意义。

Description

一种地柏枝的组织培养快繁方法

技术领域

本发明涉及农业生物技术中植物组织培养的方法，具体地说，涉及一种地柏枝的组织培养快繁方法。

背景技术

地柏枝为为多年生草木，产于湖北、陕西、广西等长江以南大部份地区。生于山间、林荫等阴湿处味甘、辛，性平。具有止血，清热，利湿等作用。目前，地柏枝种苗主要通过种子和扦插方式繁育，种子播种虽然可在短时间内获得大量幼苗，但因地柏枝为雌雄同株异花授粉植物，后代易发生性状分离，遗传性状不稳定，易丢失亲本的优良性状。而扦插方式繁育需要大量的枝条，且从扦插到移栽大田需耗时较长。因此，釆用植物组织培养技术来缓解其种苗紧张压力、进行可持续开发利用是十分必要的。因此，本发明以地柏枝带节茎段为外植体，通过不定芽诱导、增殖、生根、炼苗移栽等过程成功获得了离体再植株，建立组织培养快速繁殖技术体系，对于进行优良品种的快速繁殖和大面积推广，促进的产业化发展具有重要意义。

发明内容

本发明的目的在于提供一种地柏枝的组织培养快繁方法，通过诱导不定芽、丛生芽增殖、试管苗生根、炼苗移栽等阶段成功获得了离体再植株，建立组织培养快速繁殖技术体系，从而实现了本发明的目的。

本发明的一种地柏枝的组织培养快繁方法，包括以下的工艺步骤：

步骤1，诱导不定芽：选取地柏枝当年生带节藤茎为外植体,经75%酒精消毒29秒种后，用无菌水冲洗11次后置于0.1%的升汞溶液中消毒40分钟，然后用无菌水冲洗8次，经无菌滤纸吸干水分后剪切成8cm左右的带节藤茎，并接种到诱导培养基上,于25～28℃条件下全暗培养，直至诱导形成不定芽；诱导培养基为：MS+1.6mg/LTDZ+3.0mg/L 6-BA+0.8mg/LNAA+38g/L蔗糖+8.1g/L琼脂，pH为5.2；

步骤2，继代培养：将步骤1获得的不定芽从基部切下，接种到增殖培养基上进行继代培养，接种后置于每天光照16小时，光照强度为2700lx，培养温度为25～28℃的条件下培养，38天转接一次；增殖培养基为：MS+3.1mg/L 6-BA+0.9mg/LNAA+40g/L蔗糖+8.1g/L琼脂，pH为5.2；

步骤3，生根培养：将步骤2继代培养长至8cm的不定芽分切并接种到生根培养基上进行诱导生根，接种后先在25～28℃条件下全暗培养12天，然后置于每天光照12小时，光照强度为3400lx，培养温度为25～28℃的条件下培养至生根；生根培养基为：1/2MS+1.0mg/LIBA+3.0mg/L GGR+38g/L蔗糖+7.0g/L琼脂，pH为5.2；

步骤4，炼苗移栽：将长至10cm的生根试管苗的培养瓶瓶盖打开并置于自然光照下炼苗11天后，将试管苗从培养瓶中取出，洗掉根部培养基，栽入由泥炭土:农家肥:河沙=6：3：1混合成的基质中并定植于大田中。

本发明的优点是：地柏枝种苗主要通过种子和扦插方式繁育，存在周期长、成本高、效率低下等问题。因此，本发明以地柏枝带节茎段为外植体，通过不定芽诱导、增殖、生根、炼苗移栽等过程成功获得了地柏枝离体再植株，建立地柏枝组织培养快速繁殖技术体系，对于进行地柏枝优良品种的快速繁殖和大面积推广、促进地柏枝的产业化发展具有重要意义。本发明组织培养快繁方法，具有简单、易行、经济的特点。通过本发明利用植物组织培养技术进行地柏枝种苗规模化生产，建立了地柏枝组培苗移栽成活率达到98%以上，可以为地柏枝规模化种植提供优质种苗保障。

具体实施方式

以下实施例是对本发明的进一步说明，不是对本发明的限制。

实施例1：

（1）诱导不定芽：选取地柏枝当年生带节藤茎为外植体,经75%酒精消毒15秒种后，用无菌水冲洗6次后置于0.1%的升汞溶液中消毒18分钟，然后用无菌水冲洗7次，经无菌滤纸吸干水分后剪切成5cm左右的带节藤茎，并接种到诱导培养基上,于25℃条件下全暗培养21天即可诱导形成不定芽，污染率低至3%以下，不定芽诱导率可达93%。所述的诱导培养基为：MS+0.3mg/LTDZ+1.5mg/L 6-BA+1.5mg/LNAA+28g/L蔗糖+3.5g/L琼脂，pH为5.6;

（2）继代培养：将步骤（1）获得的不定芽从基部切下，接种到增殖培养基上进行继代培养，接种后置于每天光照16小时，光照强度为2100lx，培养温度为25℃的条件下培养，21天转接一次，增殖系数为8.0。所述的增殖培养基为：MS+2.0mg/L 6-BA+1.2mg/LNAA+25g/L蔗糖+7.5g/L琼脂，pH为5.6；

（3）生根培养：将步骤（2）继代培养长至8cm的不定芽分切并接种到生根培养基上进行诱导生根，接种后先在25℃条件下全暗培养5天，然后置于每天光照18小时，光照强度为2800lx，培养温度为25℃的条件下培养13天即开始生根，生根率可达97%。所述的生根培养基为：1/2MS+1.3mg/LIBA+1.5mg/L GGR+18g/L蔗糖+2.8g/L琼脂，pH为5.6。

（4）炼苗移栽：将长至9cm的生根试管苗的培养瓶瓶盖打开并置于自然光照下炼苗4天后，将试管苗从培养瓶中取出，洗掉根部培养基，栽入由泥炭土:农家肥:河沙=6：3：2混合成的基质中并定植于大田中，移栽成活率为99.5%。

实施例2：

（1）诱导不定芽：选取地柏枝当年生带节藤茎为外植体，经75%酒精消毒18秒种后，用无菌水冲洗6次后置于0.5%的升汞溶液中消毒18分钟，然后用无菌水冲洗9次，经无菌滤纸吸干水分后剪切成7cm左右的带节藤茎，并接种到诱导培养基上,于26℃条件下全暗培养15天即可诱导形成不定芽，污染率低至8%以下，不定芽诱导率可达96%。所述的诱导培养基为：MS+0.6mg/LTDZ+1.8mg/L 6-BA+0.5mg/LNAA+30g/L蔗糖+6.0g/L琼脂，pH为5.7。

（2）继代培养：将步骤（1）获得的不定芽从基部切下，接种到增殖培养基上进行继代培养，接种后置于每天光照16小时，光照强度为2800lx，培养温度为26℃的条件下培养，28天转接一次，增殖系数为8.8。所述的增殖培养基为：MS+1.5mg/L 6-BA+1.2mg/LNAA+40g/L蔗糖+8.0g/L琼脂，pH为5.7。

（3）生根培养：将步骤（2）继代培养长至8cm的不定芽分切并接种到生根培养基上进行诱导生根，接种后先在26℃条件下全暗培养4天，然后置于每天光照16小时，光照强度为3100lx，培养温度为26℃的条件下培养15天即开始生根，生根率可达98%。所述的生根培养基为：1/2MS+0.6mg/LIBA+1.5mg/L GGR20g/L蔗糖+5.6g/L琼脂，pH为5.7。

（4）炼苗移栽：将长至9cm的生根试管苗的培养瓶瓶盖打开并置于自然光照下炼苗8天后，将试管苗从培养瓶中取出，洗掉根部培养基，栽入由泥炭土:农家肥:河沙=6：3：2混合成的基质中并定植于大田中，移栽成活率为99%。

Claims (1)

1.一种地柏枝的组织培养快繁方法，其特征在于包括以下工艺步骤：

步骤1，诱导不定芽：选取地柏枝当年生带节藤茎为外植体,经75%酒精消毒29秒种后，用无菌水冲洗11次后置于0.1%的升汞溶液中消毒40分钟，然后用无菌水冲洗8次，经无菌滤纸吸干水分后剪切成8cm左右的带节藤茎，并接种到诱导培养基上,于25～28℃条件下全暗培养，直至诱导形成不定芽；诱导培养基为：MS+1.6mg/LTDZ+3.0mg/L 6-BA+0.8mg/LNAA+38g/L蔗糖+8.1g/L琼脂，pH为5.2；

步骤2，继代培养：将步骤1获得的不定芽从基部切下，接种到增殖培养基上进行继代培养，接种后置于每天光照16小时，光照强度为2700lx，培养温度为25～28℃的条件下培养，38天转接一次；增殖培养基为：MS+3.1mg/L 6-BA+0.9mg/LNAA+40g/L蔗糖+8.1g/L琼脂，pH为5.2；

步骤3，生根培养：将步骤2继代培养长至8cm的不定芽分切并接种到生根培养基上进行诱导生根，接种后先在25～28℃条件下全暗培养12天，然后置于每天光照12小时，光照强度为3400lx，培养温度为25～28℃的条件下培养至生根；生根培养基为：1/2MS+1.0mg/LIBA+3.0mg/L GGR+38g/L蔗糖+7.0g/L琼脂，pH为5.2；

步骤4，炼苗移栽：将长至10cm的生根试管苗的培养瓶瓶盖打开并置于自然光照下炼苗11天后，将试管苗从培养瓶中取出，洗掉根部培养基，栽入由泥炭土:农家肥:河沙=6：3：1混合成的基质中并定植于大田中。