CN104798684B - 一种星油藤的组织培养快繁方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种星油藤的组织培养快繁方法，星油藤（Plukenetia volubilis L.）又名南美油藤、印加果、印加花生等，是大戟科一种多年生木质藤本油料植物，原产于南美洲安第斯山脉地区热带雨林。从星油藤种子中榨取的植物油被认为是世界上最好的植物油，可用于食品、保健、制药、化妆品等方面。目前，星油藤种苗主要通过种子和扦插方式繁育，存在周期长、成本高、效率低下等问题。因此，本发明以星油藤带节茎段为外植体，通过不定芽诱导、增殖、生根、炼苗移栽等过程成功获得了星油藤离体再植株，建立星油藤组织培养快速繁殖技术体系，对于进行星油藤优良品种的快速繁殖和大面积推广、促进星油藤的产业化发展具有重要意义。
Description
技术领域
本发明涉及农业生物技术中植物组织培养的方法，具体地说，涉及一种星油藤的组织培养快繁方法。
背景技术
星油藤（Plukenetia volubilis L.）又名南美油藤、印加果、印加花生等，是大戟科一种多年生木质藤本油料植物，原产于南美洲安第斯山脉地区热带雨林。从星油藤种子中榨取的植物油，由于其富含多元不饱和脂肪酸且以Omega脂肪酸为主，ω-3,ω-6,ω-9三种不饱和脂肪酸高达92%以上，因此被认为是世界上最好的植物油，可用于食品、保健、制药、化妆品等方面，对调整血脂、预防心血管疾病、保养肌肤等也有显著的作用。星油藤被引进中国科学院西双版纳热带植物园，由于应用前景广泛，云南、贵州等省市大力发展星油藤产业。但是，星油藤为新引进作物，资源较少,价格昂贵，不利于其大面积推广种植。
目前，星油藤种苗主要通过种子和扦插方式繁育，种子播种虽然可在短时间内获得大量幼苗，但因星油藤为雌雄同株异花授粉植物，后代易发生性状分离，遗传性状不稳定，易丢失亲本的优良性状。而扦插方式繁育需要大量的枝条，且从扦插到移栽大田需2个月，耗时较长。因此，釆用植物组织培养技术来缓解其种苗紧张压力、进行可持续开发利用是十分必要的。因此，本发明以星油藤带节茎段为外植体，通过不定芽诱导、增殖、生根、炼苗移栽等过程成功获得了星油藤离体再植株，建立星油藤组织培养快速繁殖技术体系，对于进行星油藤优良品种的快速繁殖和大面积推广、促进星油藤的产业化发展具有重要意义。
发明内容
本发明的目的在于提供一种星油藤的组织培养快繁方法，通过诱导不定芽、丛生芽增殖、试管苗生根、炼苗移栽等阶段成功获得了星油藤离体再植株，建立星油藤组织培养快速繁殖技术体系，从而实现了本发明的目的。
本发明的一种星油藤的组织培养快繁方法，包括以下的工艺步骤：
（1）诱导不定芽：选取星油藤当年生带节藤茎为外植体,经75%酒精消毒5～20秒种后，用无菌水冲洗2～5次后置于0.1%的升汞溶液中消毒10～30分钟，然后用无菌水冲洗3～6次，经无菌滤纸吸干水分后剪切成2～4cm左右的带节藤茎，并接种到诱导培养基上,于25～28℃条件下全暗培养，直至诱导形成不定芽。
（2）继代培养：将步骤（1）获得的不定芽从基部切下，接种到增殖培养基上进行继代培养，接种后置于每天光照12～15小时，光照强度为1500～2000lx，培养温度为25～28℃的条件下培养，20～30天转接一次。
（3）生根培养：将步骤（2）继代培养长至2～4cm的不定芽分切并接种到生根培养基上进行诱导生根，接种后先在25～28℃条件下全暗培养3～5天，然后置于每天光照12～15小时，光照强度为2000～3000lx，培养温度为25～28℃的条件下培养至生根。
（4）炼苗移栽：将长至6～8cm的生根试管苗的培养瓶瓶盖打开并置于自然光照下炼苗5～7天后，将试管苗从培养瓶中取出，洗掉根部培养基，栽入由泥炭土:农家肥:河沙（8：1：1）混合成的基质中并定植于大田中。
上述步骤（1）所述的诱导培养基为：MS+0.1～0.5mg/LTDZ+1.0～2.0mg/L 6-BA+0.1～0.5mg/LNAA+15～30g/L蔗糖+3.5～6.0g/L琼脂，pH为5.4～5.8;
上述步骤（2）所述的增殖培养基为：MS+1.0～2.0mg/L 6-BA+0.1～0.5mg/LNAA+15～30g/L蔗糖+3.5～6.0g/L琼脂，pH为5.4～5.8；
上述步骤（3）所述的生根培养基为：1/2MS+0.1～0.5mg/LIBA+1.0～2.0mg/L GGR（注：双吉尔-GGR，购自北京艾比蒂研究开发中心）+15～30g/L蔗糖+3.5～6.0g/L琼脂，pH为5.4～5.8。
本发明的优点是：星油藤（Plukenetia volubilis L.）又名南美油藤、印加果、印加花生等，是大戟科一种多年生木质藤本油料植物，原产于南美洲安第斯山脉地区热带雨林。从星油藤种子中榨取的植物油被认为是世界上最好的植物油，可用于食品、保健、制药、化妆品等方面。目前，星油藤种苗主要通过种子和扦插方式繁育，存在周期长、成本高、效率低下等问题。因此，本发明以星油藤带节茎段为外植体，通过不定芽诱导、增殖、生根、炼苗移栽等过程成功获得了星油藤离体再植株，建立星油藤组织培养快速繁殖技术体系，对于进行星油藤优良品种的快速繁殖和大面积推广、促进星油藤的产业化发展具有重要意义。本发明组织培养快繁方法，具有简单、易行、经济的特点。通过本发明育成的星本发明利用植物组织培养技术进行星油藤种苗规模化生产，建立了星油藤油藤组培苗移栽成活率达到98%以上，可以为星油藤规模化种植提供优质种苗保障。
具体实施方式
以下实施例是对本发明的进一步说明，不是对本发明的限制。
实施例1
（1）诱导不定芽：选取星油藤当年生带节藤茎为外植体,经75%酒精消毒12秒种后，用无菌水冲洗3次后置于0.1%的升汞溶液中消毒15分钟，然后用无菌水冲洗5次，经无菌滤纸吸干水分后剪切成2～4cm左右的带节藤茎，并接种到诱导培养基上,于25℃条件下全暗培养18天即可诱导形成不定芽，污染率低至5%以下，不定芽诱导率可达92.7%。所述的诱导培养基为：MS+0.2mg/LTDZ+1.2mg/L 6-BA+0.5mg/LNAA+20g/L蔗糖+4.5g/L琼脂，pH为5.5;
（2）继代培养：将步骤（1）获得的不定芽从基部切下，接种到增殖培养基上进行继代培养，接种后置于每天光照13小时，光照强度为1500lx，培养温度为25℃的条件下培养，20天转接一次，增殖系数为7.84。所述的增殖培养基为：MS+1.5mg/L 6-BA+0.2mg/LNAA+25g/L蔗糖+5.0g/L琼脂，pH为5.5；
（3）生根培养：将步骤（2）继代培养长至2～4cm的不定芽分切并接种到生根培养基上进行诱导生根，接种后先在25℃条件下全暗培养3天，然后置于每天光照14小时，光照强度为2500lx，培养温度为25℃的条件下培养10天即开始生根，生根率可达96.2%。所述的生根培养基为：1/2MS+0.3mg/LIBA+1.0mg/L GGR（注：双吉尔-GGR，购自北京艾比蒂研究开发中心）+15g/L蔗糖+3.5g/L琼脂，pH为5.5。
（4）炼苗移栽：将长至6～8cm的生根试管苗的培养瓶瓶盖打开并置于自然光照下炼苗5天后，将试管苗从培养瓶中取出，洗掉根部培养基，栽入由泥炭土:农家肥:河沙（8：1：1）混合成的基质中并定植于大田中，移栽成活率为100%。
实施例2
（1）诱导不定芽：选取星油藤当年生带节藤茎为外植体,经75%酒精消毒15秒种后，用无菌水冲洗4次后置于0.1%的升汞溶液中消毒15分钟，然后用无菌水冲洗6次，经无菌滤纸吸干水分后剪切成2～4cm左右的带节藤茎，并接种到诱导培养基上,于26℃条件下全暗培养14天即可诱导形成不定芽，污染率低至7%以下，不定芽诱导率可达95.4%。所述的诱导培养基为：MS+0.4mg/LTDZ+1.6mg/L 6-BA+0.3mg/LNAA+20g/L蔗糖+4.0g/L琼脂，pH为5.8。
（2）继代培养：将步骤（1）获得的不定芽从基部切下，接种到增殖培养基上进行继代培养，接种后置于每天光照14小时，光照强度为2000lx，培养温度为26℃的条件下培养，25天转接一次，增殖系数为8.51。所述的增殖培养基为：MS+1.0mg/L 6-BA+0.2mg/LNAA+30g/L蔗糖+5.5g/L琼脂，pH为5.8。
（3）生根培养：将步骤（2）继代培养长至2～4cm的不定芽分切并接种到生根培养基上进行诱导生根，接种后先在26℃条件下全暗培养3天，然后置于每天光照15小时，光照强度为3000lx，培养温度为26℃的条件下培养14天即开始生根，生根率可达97%。所述的生根培养基为：1/2MS+0.4mg/LIBA+1.2mg/L GGR（注：双吉尔-GGR，购自北京艾比蒂研究开发中心）+18g/L蔗糖+4.0g/L琼脂，pH为5.8。
（4）炼苗移栽：将长至6～8cm的生根试管苗的培养瓶瓶盖打开并置于自然光照下炼苗4天后，将试管苗从培养瓶中取出，洗掉根部培养基，栽入由泥炭土:农家肥:河沙（8：1：1）混合成的基质中并定植于大田中，移栽成活率为100%。
实施例3
（1）诱导不定芽：选取星油藤当年生带节藤茎为外植体,经75%酒精消毒20秒种后，用无菌水冲洗4次后置于0.1%的升汞溶液中消毒30分钟，然后用无菌水冲洗6次，经无菌滤纸吸干水分后剪切成2～4cm左右的带节藤茎，并接种到诱导培养基上,于28℃条件下全暗培养20天即可诱导形成不定芽，污染率低至2%以下，不定芽诱导率可达87.9%。所述的诱导培养基为：MS+0.3mg/LTDZ+1.5mg/L 6-BA+0.3mg/LNAA+25g/L蔗糖+4.5g/L琼脂，pH为5.8。
（2）继代培养：将步骤（1）获得的不定芽从基部切下，接种到增殖培养基上进行继代培养，接种后置于每天光照15小时，光照强度为2000lx，培养温度为28℃的条件下培养，20天转接一次，增殖系数为7.23。所述的增殖培养基为：MS+1.2mg/L 6-BA+0.4mg/LNAA+30g/L蔗糖+3.8g/L琼脂，pH为5.8。
（3）生根培养：将步骤（2）继代培养长至2～4cm的不定芽分切并接种到生根培养基上进行诱导生根，接种后先在28℃条件下全暗培养3天，然后置于每天光照14小时，光照强度为2000lx，培养温度为28℃的条件下培养10天即开始生根，生根率可达100%。所述的生根培养基为：1/2MS+0.3mg/LIBA+1.8mg/L GGR（注：双吉尔-GGR，购自北京艾比蒂研究开发中心）+20g/L蔗糖+4.5g/L琼脂，pH为5.8。
（4）炼苗移栽：将长至6～8cm的生根试管苗的培养瓶瓶盖打开并置于自然光照下炼苗4天后，将试管苗从培养瓶中取出，洗掉根部培养基，栽入由泥炭土:农家肥:河沙（8：1：1）混合成的基质中并定植于大田中，移栽成活率为98%。
Claims (1)
1.一种星油藤的组织培养快繁方法，其特征在于包括以下工艺步骤：
（1）诱导不定芽：选取星油藤当年生带节藤茎为外植体,经75%酒精消毒5～20秒种后，用无菌水冲洗2～5次后置于0.1%的升汞溶液中消毒10～30分钟，然后用无菌水冲洗3～6次，经无菌滤纸吸干水分后剪切成2～4cm的带节藤茎，并接种到诱导培养基上,于25～28℃条件下全暗培养，直至诱导形成不定芽，所述的诱导培养基为：MS+0.1～0.5mg/LTDZ+1.0～2.0mg/L 6-BA+0.1～0.5mg/LNAA+15～30g/L蔗糖+3.5～6.0g/L琼脂，pH为5.4～5.8；
（2）继代培养：将步骤（1）获得的不定芽从基部切下，接种到增殖培养基上进行继代培养，接种后置于每天光照12～15小时，光照强度为1500～2000lx，培养温度为25～28℃的条件下培养，20～30天转接一次。所述的增殖培养基为：MS+1.0～2.0mg/L 6-BA+0.1～0.5mg/L NAA+15～30g/L蔗糖+3.5～6.0g/L琼脂，pH为5.4～5.8；
（3）生根培养：将步骤（2）继代培养长至2～4cm的不定芽分切并接种到生根培养基上进行诱导生根，接种后先在25～28℃条件下全暗培养3～5天，然后置于每天光照12～15小时，光照强度为2000～3000lx，培养温度为25～28℃的条件下培养至生根，所述的生根培养基为：1/2MS+0.1～0.5mg/L IBA+1.0～2.0mg/L GGR+15～30g/L蔗糖+3.5～6.0g/L，琼脂，pH为5.4～5.8；
（4）炼苗移栽：将长至6～8cm的生根试管苗的培养瓶瓶盖打开并置于自然光照下炼苗5～7天后，将试管苗从培养瓶中取出，洗掉根部培养基，栽入由比例8：1：1的泥炭土、农家肥、河沙混合成的基质中并定植于大田中。
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