CN105660412A

CN105660412A - 一种大戟的组织培养快速繁殖方法

Info

Publication number: CN105660412A
Application number: CN201610108413.0A
Authority: CN
Inventors: 李翠; 张占江; 吕惠珍; 缪剑华; 韦莹; 韦坤华; 李林轩; 王一诺; 肖冬
Original assignee: Guangxi Botanical Garden of Medicinal Plants
Current assignee: Guangxi Botanical Garden of Medicinal Plants
Priority date: 2016-02-29
Filing date: 2016-02-29
Publication date: 2016-06-15

Abstract

本发明公开了一种大戟的组织培养快速繁殖方法，包括如下步骤：（1）取大戟顶芽作为外植体进行消毒；（2）将消毒后的外植体置于MS基本培养基中诱导得到丛生芽；（3）将所述丛生芽置于MS壮苗培养基中进行壮苗培养得到健壮植株；（4）将所述健壮植株置于MS生根培养基中培养得到完整的带根苗。采用本发明所述方法得到的种苗健壮、成活率高，可在短期内提供大量大戟的优质种苗，有效解决了大戟的规模化育苗问题。<b />

Description

一种大戟的组织培养快速繁殖方法

技术领域

本发明涉及一种植物繁殖方法，特别是一种大戟组织培养快速繁殖方法。

背景技术

大戟,为大戟科植物大戟（EuphorbiapekinensisRupr.），多年生常绿草本。根圆柱状，长20-30厘米。花期5-8月，果期6-9月。广布于全国（除台湾、云南、西藏和新疆），北方尤为普遍。生于山坡、灌丛、路旁、荒地、草丛、林缘和疏林内。根入药，具有较高的药用价值，约100元/公斤，具有逐水通便，消肿散结，主治水肿，并有通经之效，用于治疗慢性肾炎，治疗晚期血吸虫病腹水或其他肝硬变腹水等症。近年来其资源遭到了严重破坏，且对生长环境要求苛刻，随着市场需求量的不断增加，野生大戟资源濒临枯竭了，生产上难以实现大面积栽培。采用生物技术组织培养技术，可以有效快速地提高大戟种苗的繁殖速度和质量，实现大戟优质种苗的工厂化育苗，以满足生产及药用上的需要。

发明内容

本发明的目的是提供一种大戟组织培养快速繁殖方法，它能够快速繁殖出大量适合移栽的优良大戟种苗。

本发明通过以下技术方案达到上述目的，

一种大戟组织培养快速繁殖方法，包括以下步骤：

（1）外植体的选择与消毒：取大戟顶芽作为外植体，依次用2%洗洁精水溶液浸泡5~10min、线状自来水冲洗5~15min、75%乙醇中表面消毒30~45s、0.1%Hgcl₂（添加了2~3滴吐温-20）消毒8~10min、无菌水冲洗3~5次，最后用消毒滤纸吸去表面水分，得到外植体，其中无菌水为经高压灭菌的蒸馏水；

（2）顶芽分化获得丛生芽快速繁殖培养：将步骤（1）得到的外植体接种到MS繁殖培养基中，在培养温度为23~26°C，光照强度1400~2000lux，光照时间为10~12小时/天的条件下培养30天，侧芽分化后获得丛生芽；其中MS繁殖培养基中含0.1~0.4mg/L的KT、1.0~2.0mg/L的6-BA、1.0~2.0mg/L的NAA、20~30g/L蔗糖和3.8~4.8g/L的琼脂，培养基的pH值为5.8；

（3）丛生芽壮苗培养：将步骤（2）中得到的试管苗丛生芽置于MS壮苗培养基中，在培养温度23~26°C，光照强度1400~2000lux，光照时间为10~12小时/天的条件下培养40天得到健壮植株。其中MS壮苗培养基中含0.5~1.5mg/L的6-BA、0.2~0.6mg/L的IAA、20~30g/L蔗糖和3.8~4.8g/L的琼脂，培养基的pH值为5.8；

（4）健壮植株生根培养：将步骤（3）中得到的健壮植株置于MS生根培养基中，在培养温度23~26°C，光照强度1400~2000lux，光照时间为10~12小时/天的条件下培养40天得到带根的完整植株。其中MS生根培养基中含0.5~1.5mg/L的IAA、1.0~2.0mg/L的IBA、25~30g/L蔗糖和3.8~4.8g/L的琼脂，培养基的pH值为5.8。

采用本发明所述方法得到的种苗健壮、成活率高，可在短期内提供大量适合移栽的大戟优质种苗，有效解决了大戟的规模化育苗问题。

具体实施方式

下面结合实施例对本发明的技术方案进一步说明。

一种大戟组织培养快速繁殖方法，包括以下步骤：

（1）外植体的选择与消毒：取大戟顶芽作为外植体，依次用2%洗洁精水溶液浸泡5~10min、线状自来水冲洗5~15min、75%乙醇中表面消毒30~45s、0.1%Hgcl₂（添加了2~3滴吐温-20）消毒8~10min、无菌水冲洗3~5次，最后用消毒滤纸吸去表面水分，得到外植体，其中无菌水为经高压灭菌的蒸馏水。

（2）顶芽分化获得丛生芽快速繁殖培养：将步骤（1）得到的外植体接种到MS培养基中，在培养温度为23~26°C，光照强度1400~2000lux，光照时间为10~12小时/天的条件下培养30天，侧芽分化后获得丛生芽。

其中MS繁殖培养基中含0.1~0.4mg/L的KT、1.0~2.0mg/L的6-BA、1.0~2.0mg/L的NAA、20~30g/L蔗糖和3.8~4.8g/L的琼脂，培养基的pH值为5.8，观察发现，培养基中6-BA和NAA浓度增加，大戟丛生芽数均增加；结果，在培养基中添加0.2mg/L的KT、2.0mg/L的6-BA和1.5mg/L的NAA丛生芽效果最好。

注：芽增殖倍数=（30天后芽数－接种时芽数）/接种时芽数

（3）丛生芽壮苗培养：将步骤（2）中得到的试管苗丛生芽置于MS壮苗培养基中，在培养温度23~26°C，光照强度1400~2000lux，光照时间为10~12小时/天的条件下培养40天得到健壮植株。

其中MS壮苗培养基中含0.5~1.5mg/L的6-BA、0.2~0.6mg/L的IAA、20~30g/L蔗糖和3.8~4.8g/L的琼脂，培养基的pH值为5.8，观察发现，培养基中添加1.0mg/L的6-BA和0.6mg/L的IAA时壮苗效果最好，株高达到5.37cm。

（4）健壮植株生根培养：将步骤（3）中得到的健壮植株置于MS生根培养基中，在培养温度23~26°C，光照强度1400~2000lux，光照时间为10~12小时/天的条件下培养40天得到带根的完整植株。

其中MS生根培养基中含0.5~1.5mg/L的IAA、1.0~2.0mg/L的IBA、25~30g/L蔗糖和3.8~4.8g/L的琼脂，培养基的pH值为5.8，观察发现，培养基中IAA浓度增加，组培苗的生根率也增加；培养基中添加2.0mg/L的IBA和1.0mg/L的IAA生根效果最好，生根率达93.1%，平均根长达到4.49cm。

Claims

1.一种大戟的组织培养快速繁殖方法，其特征在于：该方法包括以下步骤：

（1）外植体的选择与消毒：取大戟顶芽作为外植体，依次用2%洗洁精水溶液浸泡5~10min、线状自来水冲洗5~15min、75%乙醇中表面消毒30~45s、0.1%Hgcl₂消毒8~10min、无菌水冲洗3~5次，最后用消毒滤纸吸去表面水分，得到外植体；

（2）顶芽分化获得丛生芽快速繁殖培养：将步骤（1）得到的外植体接种到MS繁殖培养基中，在培养温度为23~26°C，光照强度1400~2000lux，光照时间为10~12小时/天的条件下培养30天，侧芽分化后获得丛生芽；

（3）丛生芽壮苗培养：将步骤（2）中得到的试管苗丛生芽置于MS壮苗培养基中，在培养温度23~26°C，光照强度1400~2000lux，光照时间为10~12小时/天的条件下培养40天得到健壮植株；

2.如权利要求1所述的大戟的组织培养快速繁殖方法，其特征在于：所述无菌水为经高压灭菌的蒸馏水。

3.如权利要求1所述的大戟的组织培养快速繁殖方法，其特征在于：所述MS繁殖培养基中含0.1~0.4mg/L的KT、1.0~2.0mg/L的6-BA、1.0~2.0mg/L的NAA、20~30g/L蔗糖和3.8~4.8g/L的琼脂，培养基的pH值为5.8。

4.如权利要求1所述的大戟的组织培养快速繁殖方法，其特征在于：所述MS壮苗培养基中含0.5~1.5mg/L的6-BA、0.2~0.6mg/L的IAA、20~30g/L蔗糖和3.8~4.8g/L的琼脂，培养基的pH值为5.8。

5.如权利要求1所述的大戟的组织培养快速繁殖方法，其特征在于：所述MS生根培养基中含0.5~1.5mg/L的IAA、1.0~2.0mg/L的IBA、25~30g/L蔗糖和3.8~4.8g/L的琼脂，培养基的pH值为5.8。