CN107593451A - 红鱼眼组织培养快繁方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种红鱼眼组织培养快繁方法，包括外植体的选择与消毒；无菌试管苗获取；增殖培养；壮苗培养；生根培养；以及，炼苗与移栽等步骤。本发明具有培养基配方简单，培养流程简便，操作简单，繁殖系数高，种苗质量好等优点，可为红鱼眼的工业化育苗提供技术支持。
Description
技术领域
本发明涉及植物组织培养技术领域。更具体地说，本发明涉及一种红鱼眼组织培养快繁方法。
背景技术
红鱼眼(Phyllanthus reticulatus Poir)又名龙眼睛，烂头钵等，为分布于广东、广西等华南地区的一种大戟科、叶下珠属直立或攀援灌木。红鱼眼在广西壮族民间有较长的使用历史，为广西壮族民间重要药材，已被《广西壮族自治区壮药质量标准》(2008年版)收载，其具有祛风活血、散瘀消肿的功效，主治风湿关节炎痛，跌打损伤等痹证，并且在治疗糖尿病性腹泻、镇痛抗炎、抗肝炎病毒、体外抑菌、抗氧化等方面具有多种药理药效，且无明显毒性，具有重要的开发前景。现代研究表明，红鱼眼的药理药效以其主要活性成分为物质基础，红鱼眼茎中含有多肽、糖类、鞣质、有机酸、黄酮类、酚类、香豆素与内酯类、甾体或三萜类、皂苷、挥发油及油脂等。
尽管《广西中药材标准》(广西壮族自治区卫生厅编.广西科学技术出版社,1992.第1版)确认红鱼眼的原植物为龙眼睛(Phyllanthus reticulatus Poir)或无毛龙眼睛(Phyllanthus reticulatus Poir.var.glaber Muell.Arg)，但本专利所述红鱼眼为龙眼睛。
迄今为止，红鱼眼药材一直以采集利用野生自然资源为主。随着其药用价值、化学成分和应用范围等研究的深入和拓展，其需求量不断增加，野生自然资源受到过度采挖，储量急剧减少。因此，红鱼眼的人工种植逐渐受到重视。但至今尚未见有组织培养等繁殖相关的研究报道。
发明内容
本发明的一个目的是解决至少上述问题，并提供至少后面将说明的优点。
本发明还有一个目的是提供一种红鱼眼组织培养快繁方法，其繁殖系数高，种苗质量好，能够快速繁殖出大量适合移栽的优良红鱼眼种苗、满足生产需要。
为了实现根据本发明的这些目的和其它优点，提供了一种红鱼眼组织培养快繁方法，包括如下步骤：
步骤一、外植体的选择与消毒：取红鱼眼健壮植株新萌发的嫩芽，将嫩芽依次用2％洗洁精水溶液浸泡5min、线状自来水冲洗15-30min、添加了2-3滴/100ml吐温-20的0.1％升汞消毒8-10min、无菌水冲洗3-5次，最后用消毒滤纸除去表面水分，得外植体；
步骤二、无菌试管苗获取：将步骤一得到的外植体置于超净工作台内，用解剖刀切成长1.0-1.5cm的带有一个腋芽的茎段，接种到MS诱导培养基中，于培养室内培养30天得无菌试管苗，其中，MS诱导培养基为：MS+0.5-1.5mg/L6-BA+0.1-0.5mg/LNAA+30g/L蔗糖+5g/L琼脂，pH值为5.8；
步骤三、增殖培养：将步骤二中得到的无菌试管苗接种到MS增殖培养基中，于培养室内培养30天得丛生芽，其中，MS增殖培养为：MS+0.5-1.5mg/L6-BA+0.1-0.5mg/LIBA+0.1-0.5mg/LKT+30g/L蔗糖+5g/L琼脂，pH值为5.8；
步骤四、壮苗培养：将步骤三中得到的丛生芽接种到MS壮苗培养基中，于培养室内培养30天得健壮植株，其中，MS壮苗培养基为：MS+0.1-1.0mg/L2,4-D+0.5-1.5mg/L6-BA+0.1-1.0mg/LGA3+30g/L蔗糖+5g/L琼脂，pH值为5.8；
步骤五、生根培养：将步骤四中得到的健壮植株接种到MS生根培养基中，于培养室内培养30天得完整带根苗，其中，MS生根培养基为：MS+0.5-4.0mg/LNAA+0.5-3.0mg/L6-BA+10g/L蔗糖+5g/L琼脂，pH值为5.8；
步骤六、炼苗与移栽：将步骤五得到的完整带根苗在室温为25℃的室内打开组培瓶的瓶盖，瓶内加少量自来水，炼苗4-7天，表面角质形成后将苗取出，洗净根部培养基，并立即移栽到培养基质中培养30天，得大田移栽苗，其中，培养基质主要由蛭石和泥炭土按质量比1:1配制而成。
优选的是，所述的红鱼眼组织培养快繁方法，所述MS诱导培养基为：MS+1.0mg/L6-BA+0.25mg/LNAA+30g/L蔗糖+5g/L琼脂，pH值为5.8。
优选的是，所述的红鱼眼组织培养快繁方法，所述MS增殖培养为：MS+1.0mg/L6-BA+0.25mg/LIBA+0.25mg/LKT+30g/L蔗糖+5g/L琼脂，pH值为5.8。
优选的是，所述的红鱼眼组织培养快繁方法，所述MS壮苗培养基为：MS+0.5mg/L2,4-D+1.0mg/L6-BA+0.5mg/LGA3+30g/L蔗糖+5g/L琼脂，pH值为5.8。
优选的是，所述的红鱼眼组织培养快繁方法，所述MS生根培养基为：MS+2.0mg/LNAA+1.6mg/L6-BA+10g/L蔗糖+5g/L琼脂，pH值为5.8。
优选的是，所述的红鱼眼组织培养快繁方法，步骤二、步骤三、步骤四和步骤五中的培养室内培养条件为：培养温度23-27℃，光照强度1500lux，光照时间为8-10小时/天。
优选的是，所述的红鱼眼组织培养快繁方法，步骤六中，所述培养基质由蛭石、泥炭土、滑石粉、安息香粉和白芨粉按质量比10:10:2:1:0.6配制而成。
优选的是，所述的红鱼眼组织培养快繁方法，步骤六中，培养基质中培养条件为：第1到7天，培养温度23-27℃，空气湿度70-80％，光照强度1500lux，光照时间8-10小时/天；第8-17天，培养温度25-29℃，空气湿度70-80％，光照强度2500lux，光照时间为8-10小时/天；培养第18-30天，培养温度28-32℃，空气湿度80-90％，自然光照；培养过程中每天早晚各喷施800-1000倍促生长液一次，所述促生长液由辣木叶提取物、壳聚糖、氨基酸螯合锌、氨基酸螯合硼、氨基酸螯合钾和水按照质量比10:7:2:1:1:100配制而成，其中，所述辣木叶提取物的制备方法为：将15重量份的辣木叶粉加入100重量份的水中，于95-100℃下密闭提取30-60分钟后，经过滤、减压浓缩和喷雾干燥制得。
本发明至少包括以下有益效果：
第一、采用生物技术对红鱼眼进行组织培养快速繁殖，通过红鱼眼丛生芽的繁殖，在短时间内可培育出大量适合栽培种植的红鱼眼幼苗，保障红鱼眼种苗的增殖系数和种苗质量，实现规模化生产，满足生产上的需要；
第二、采用本发明所述的方法得到的红鱼眼丛生芽增殖系数达到10-15倍，丛生芽健壮，接种到生根培养基后容易生根，生根率可达100％；
第三、通过对培养基质配方进行筛选，控制培养基质中的培养条件，并早晚各喷施促生长液一次，可使红鱼眼移栽至培养基质中的成活率在99％以上，且所得大田移栽苗植株健壮，抗逆性高；
第四、本发明首次提供了一套完整的红鱼眼组织培养快繁方法，其使用的培养基配方简单，培养流程简便，操作简单，可为红鱼眼的工业化育苗提供技术支持。
本发明的其它优点、目标和特征将部分通过下面的说明体现，部分还将通过对本发明的研究和实践而为本领域的技术人员所理解。
具体实施方式
下面结合实施例对本发明做进一步的详细说明，以令本领域技术人员参照说明书文字能够据以实施。
需要说明的是，下述实施例中所述实验方法，如无特殊说明，均为常规方法，所述试剂和材料，如无特殊说明，均可从商业途径获得。
实施例1：
一种红鱼眼组织培养快繁方法，包括如下步骤：
步骤一、外植体的选择与消毒：取红鱼眼健壮植株新萌发的嫩芽，将嫩芽依次用2％洗洁精水溶液浸泡5min、线状自来水冲洗15-30min、添加了2-3滴/100ml吐温-20的0.1％升汞消毒8-10min、无菌水冲洗3-5次，最后用消毒滤纸除去表面水分，得外植体；
步骤二、无菌试管苗获取：将步骤一得到的外植体置于超净工作台内，用解剖刀切成长1.0-1.5cm的带有一个腋芽的茎段，接种到MS诱导培养基中，于培养室内培养30天得无菌试管苗，其中，MS诱导培养基为：MS+0.5mg/L6-BA+0.1.0mg/LNAA+30g/L蔗糖+5g/L琼脂，pH值为5.8；
步骤三、增殖培养：将步骤二中得到的无菌试管苗接种到MS增殖培养基中，于培养室内培养30天得丛生芽，其中，MS增殖培养为：MS+0.5mg/L6-BA+0.1.0mg/LIBA+0.1.0mg/LKT+30g/L蔗糖+5g/L琼脂，pH值为5.8；
步骤四、壮苗培养：将步骤三中得到的丛生芽接种到MS壮苗培养基中，于培养室内培养30天得健壮植株，其中，MS壮苗培养基为：MS+0.1.0mg/L2,4-D+0.5mg/L6-BA+0.1.0mg/LGA3+30g/L蔗糖+5g/L琼脂，pH值为5.8；
步骤五、生根培养：将步骤四中得到的健壮植株接种到MS生根培养基中，于培养室内培养30天得完整带根苗，其中，MS生根培养基为：MS+0.5mg/LNAA+0.5mg/L6-BA+10g/L蔗糖+5g/L琼脂，pH值为5.8；
步骤六、炼苗与移栽：将步骤五得到的完整带根苗在室温为25℃的室内打开组培瓶的瓶盖，瓶内加少量自来水，炼苗4-7天，表面角质形成后将苗取出，洗净根部培养基，并立即移栽到培养基质中培养30天，得大田移栽苗，其中，培养基质主要由蛭石和泥炭土按质量比1:1配制而成，培养基质中培养条件为自然条件下培养。
实验过程中统计丛生芽增殖系数为10倍，生根率为91％，移栽到培养基质中的成活率为93％。
实施例2：
一种红鱼眼组织培养快繁方法，包括如下步骤：
步骤一、外植体的选择与消毒：取红鱼眼健壮植株新萌发的嫩芽，将嫩芽依次用2％洗洁精水溶液浸泡5min、线状自来水冲洗15-30min、添加了2-3滴/100ml吐温-20的0.1％升汞消毒8-10min、无菌水冲洗3-5次，最后用消毒滤纸除去表面水分，得外植体；
步骤二、无菌试管苗获取：将步骤一得到的外植体置于超净工作台内，用解剖刀切成长1.0-1.5cm的带有一个腋芽的茎段，接种到MS诱导培养基中，于培养室内培养30天得无菌试管苗，其中，MS诱导培养基为：MS+1.0mg/L6-BA+0.2mg/LNAA+30g/L蔗糖+5g/L琼脂，pH值为5.8；
步骤三、增殖培养：将步骤二中得到的无菌试管苗接种到MS增殖培养基中，于培养室内培养30天得丛生芽，其中，MS增殖培养为：MS+1.0mg/L6-BA+0.2mg/LIBA+0.2mg/LKT+30g/L蔗糖+5g/L琼脂，pH值为5.8；
步骤四、壮苗培养：将步骤三中得到的丛生芽接种到MS壮苗培养基中，于培养室内培养30天得健壮植株，其中，MS壮苗培养基为：MS+0.5mg/L2,4-D+1.0mg/L6-BA+0.5mg/LGA3+30g/L蔗糖+5g/L琼脂，pH值为5.8；
步骤五、生根培养：将步骤四中得到的健壮植株接种到MS生根培养基中，于培养室内培养30天得完整带根苗，其中，MS生根培养基为：MS+2.0mg/LNAA+2.0mg/L6-BA+10g/L蔗糖+5g/L琼脂，pH值为5.8；
步骤六、炼苗与移栽：将步骤五得到的完整带根苗在室温为25℃的室内打开组培瓶的瓶盖，瓶内加少量自来水，炼苗4-7天，表面角质形成后将苗取出，洗净根部培养基，并立即移栽到培养基质中培养30天，得大田移栽苗，其中，培养基质主要由蛭石和泥炭土按质量比1:1配制而成，培养基质中培养条件为自然条件下培养。
水中，于95-100℃下密闭提取30-60分钟后，经过滤、减压浓缩和喷雾干燥制得。
实验过程中统计丛生芽增殖系数为15倍，生根率为97％，移栽到培养基质中的成活率为92.8％。
实施例3：
一种红鱼眼组织培养快繁方法，包括如下步骤：
步骤一、外植体的选择与消毒：取红鱼眼健壮植株新萌发的嫩芽，将嫩芽依次用2％洗洁精水溶液浸泡5min、线状自来水冲洗15-30min、添加了2-3滴/100ml吐温-20的0.1％升汞消毒8-10min、无菌水冲洗3-5次，最后用消毒滤纸除去表面水分，得外植体；
步骤二、无菌试管苗获取：将步骤一得到的外植体置于超净工作台内，用解剖刀切成长1.0-1.5cm的带有一个腋芽的茎段，接种到MS诱导培养基中，于培养室内培养30天得无菌试管苗，其中，MS诱导培养基为：MS+1.5mg/L6-BA+0.5mg/LNAA+30g/L蔗糖+5g/L琼脂，pH值为5.8；
步骤三、增殖培养：将步骤二中得到的无菌试管苗接种到MS增殖培养基中，于培养室内培养30天得丛生芽，其中，MS增殖培养为：MS+1.5mg/L6-BA+0.5mg/LIBA+0.5mg/LKT+30g/L蔗糖+5g/L琼脂，pH值为5.8；
步骤四、壮苗培养：将步骤三中得到的丛生芽接种到MS壮苗培养基中，于培养室内培养30天得健壮植株，其中，MS壮苗培养基为：MS+1.0mg/L2,4-D+1.5mg/L6-BA+1.0mg/LGA3+30g/L蔗糖+5g/L琼脂，pH值为5.8；
步骤五、生根培养：将步骤四中得到的健壮植株接种到MS生根培养基中，于培养室内培养30天得完整带根苗，其中，MS生根培养基为：MS+4.0mg/LNAA+3.0mg/L6-BA+10g/L蔗糖+5g/L琼脂，pH值为5.8；
步骤六、炼苗与移栽：将步骤五得到的完整带根苗在室温为25℃的室内打开组培瓶的瓶盖，瓶内加少量自来水，炼苗4-7天，表面角质形成后将苗取出，洗净根部培养基，并立即移栽到培养基质中培养30天，得大田移栽苗，其中，培养基质主要由蛭石和泥炭土按质量比1:1配制而成，培养基质中培养条件为自然条件下培养。
实验过程中统计丛生芽增殖系数为12倍，生根率为94％，移栽到培养基质中的成活率为92.5％。
实施例4：
一种红鱼眼组织培养快繁方法，包括如下步骤：
步骤一、外植体的选择与消毒：取红鱼眼健壮植株新萌发的嫩芽，将嫩芽依次用2％洗洁精水溶液浸泡5min、线状自来水冲洗15-30min、添加了2-3滴/100ml吐温-20的0.1％升汞消毒8-10min、无菌水冲洗3-5次，最后用消毒滤纸除去表面水分，得外植体；
步骤二、无菌试管苗获取：将步骤一得到的外植体置于超净工作台内，用解剖刀切成长1.0-1.5cm的带有一个腋芽的茎段，接种到MS诱导培养基中，于培养室内培养30天得无菌试管苗，其中，MS诱导培养基为：MS+1.0mg/L6-BA+0.25mg/LNAA+30g/L蔗糖+5g/L琼脂，pH值为5.8；
步骤三、增殖培养：将步骤二中得到的无菌试管苗接种到MS增殖培养基中，于培养室内培养30天得丛生芽，其中，MS增殖培养为：MS+1.0mg/L6-BA+0.25mg/LIBA+0.25mg/LKT+30g/L蔗糖+5g/L琼脂，pH值为5.8；
步骤四、壮苗培养：将步骤三中得到的丛生芽接种到MS壮苗培养基中，于培养室内培养30天得健壮植株，其中，MS壮苗培养基为：MS+0.5mg/L2,4-D+1.0mg/L6-BA+0.5mg/LGA3+30g/L蔗糖+5g/L琼脂，pH值为5.8；
步骤五、生根培养：将步骤四中得到的健壮植株接种到MS生根培养基中，于培养室内培养30天得完整带根苗，其中，MS生根培养基为：MS+2.0mg/LNAA+1.6mg/L6-BA+10g/L蔗糖+5g/L琼脂，pH值为5.8；
步骤六、炼苗与移栽：将步骤五得到的完整带根苗在室温为25℃的室内打开组培瓶的瓶盖，瓶内加少量自来水，炼苗4-7天，表面角质形成后将苗取出，洗净根部培养基，并立即移栽到培养基质中培养30天，得大田移栽苗，其中，培养基质主要由蛭石和泥炭土按质量比1:1配制而成，培养基质中培养条件为自然条件下培养。
实验过程中统计丛生芽增殖系数为15倍，生根率为100％，移栽到培养基质中的成活率为93％。
实施例5：
在实施例4的基础上，步骤六中，所述培养基质由蛭石、泥炭土、滑石粉、安息香粉和白芨粉按质量比10:10:2:1:0.6配制而成，其余条件同实施例4。实验过程中统计丛生芽增殖系数为15倍，生根率为100％，移栽到培养基质中的成活率为94.5％。
实施例6：
在实施例5的基础上，步骤六中，培养基质中培养条件为：第1到7天，培养温度23-27℃，空气湿度70-80％，光照强度1500lux，光照时间8-10小时/天；第8-17天，培养温度25-29℃，空气湿度70-80％，光照强度2500lux，光照时间为8-10小时/天；培养第18-30天，培养温度28-32℃，空气湿度80-90％，自然光照；培养过程中每天早晚各喷施清水一次，其余条件同实施例5。实验过程中统计丛生芽增殖系数为15倍，生根率为100％，移栽到培养基质中的成活率为97％。
实施例7：
在实施例6的基础上，步骤六中，培养过程中每天早晚各喷施800-1000倍促生长液一次，所述促生长液由辣木叶提取物、壳聚糖、氨基酸螯合锌、氨基酸螯合硼、氨基酸螯合钾和水按照质量比10:7:2:1:1:100配制而成，其中，所述辣木叶提取物的制备方法为：将15重量份的辣木叶粉加入100重量份的水中，于95-100℃下密闭提取30-60分钟后，经过滤、减压浓缩和喷雾干燥制得，其余条件同实施例6。实验过程中统计丛生芽增殖系数为15倍，生根率为100％，移栽到培养基质中的成活率为99.8％。
尽管本发明的实施方案已公开如上，但其并不仅仅限于说明书和实施方式中所列运用，它完全可以被适用于各种适合本发明的领域，对于熟悉本领域的人员而言，可容易地实现另外的修改，因此在不背离权利要求及等同范围所限定的一般概念下，本发明并不限于特定的细节。
Claims (8)
1.一种红鱼眼组织培养快繁方法，其特征在于，包括如下步骤：
步骤一、外植体的选择与消毒：取红鱼眼健壮植株新萌发的嫩芽，将嫩芽依次用2％洗洁精水溶液浸泡5min、线状自来水冲洗15-30min、添加了2-3滴/100ml吐温-20的0.1％升汞消毒8-10min、无菌水冲洗3-5次，最后用消毒滤纸除去表面水分，得外植体；
步骤二、无菌试管苗获取：将步骤一得到的外植体置于超净工作台内，用解剖刀切成长1.0-1.5cm的带有一个腋芽的茎段，接种到MS诱导培养基中，于培养室内培养30天得无菌试管苗，其中，MS诱导培养基为：MS+0.5-1.5mg/L6-BA+0.1-0.5mg/LNAA+30g/L蔗糖+5g/L琼脂，pH值为5.8；
步骤三、增殖培养：将步骤二中得到的无菌试管苗接种到MS增殖培养基中，于培养室内培养30天得丛生芽，其中，MS增殖培养为：
MS+0.5-1.5mg/L6-BA+0.1-0.5mg/LIBA+0.1-0.5mg/LKT+30g/L蔗糖+5g/L琼脂，pH值为5.8；
步骤四、壮苗培养：将步骤三中得到的丛生芽接种到MS壮苗培养基中，于培养室内培养30天得健壮植株，其中，MS壮苗培养基为：
MS+0.1-1.0mg/L2,4-D+0.5-1.5mg/L6-BA+0.1-1.0mg/LGA3+30g/L蔗糖+5g/L琼脂，pH值为5.8；
步骤五、生根培养：将步骤四中得到的健壮植株接种到MS生根培养基中，于培养室内培养30天得完整带根苗，其中，MS生根培养基为：
MS+0.5-4.0mg/LNAA+0.5-3.0mg/L6-BA+10g/L蔗糖+5g/L琼脂，pH值为5.8；
步骤六、炼苗与移栽：将步骤五得到的完整带根苗在室温为25℃的室内打开组培瓶的瓶盖，瓶内加少量自来水，炼苗4-7天，表面角质形成后将苗取出，洗净根部培养基，并立即移栽到培养基质中培养30天，得大田移栽苗，其中，培养基质主要由蛭石和泥炭土按质量比1:1配制而成。
2.如权利要求1所述的红鱼眼组织培养快繁方法，其特征在于，所述MS诱导培养基为：MS+1.0mg/L6-BA+0.25mg/LNAA+30g/L蔗糖+5g/L琼脂，pH值为5.8。
3.如权利要求1所述的红鱼眼组织培养快繁方法，其特征在于，所述MS增殖培养为：MS+1.0mg/L6-BA+0.25mg/LIBA+0.25mg/LKT+30g/L蔗糖+5g/L琼脂，pH值为5.8。
4.如权利要求1所述的红鱼眼组织培养快繁方法，其特征在于，所述MS壮苗培养基为：MS+0.5mg/L2,4-D+1.0mg/L6-BA+0.5mg/LGA3+30g/L蔗糖+5g/L琼脂，pH值为5.8。
5.如权利要求1所述的红鱼眼组织培养快繁方法，其特征在于，所述MS生根培养基为：MS+2.0mg/LNAA+1.6mg/L6-BA+10g/L蔗糖+5g/L琼脂，pH值为5.8。
6.如权利要求1所述的红鱼眼组织培养快繁方法，其特征在于，步骤二、步骤三、步骤四和步骤五中的培养室内培养条件为：培养温度23-27℃，光照强度1500lux，光照时间为8-10小时/天。
7.如权利要求1所述的红鱼眼组织培养快繁方法，其特征在于，步骤六中，所述培养基质由蛭石、泥炭土、滑石粉、安息香粉和白芨粉按质量比10:10:2:1:0.6配制而成。
8.如权利要求1所述的红鱼眼组织培养快繁方法，其特征在于，步骤六中，培养基质中培养条件为：第1到7天，培养温度23-27℃，空气湿度70-80％，光照强度1500lux，光照时间8-10小时/天；第8-17天，培养温度25-29℃，空气湿度70-80％，光照强度2500lux，光照时间为8-10小时/天；培养第18-30天，培养温度28-32℃，空气湿度80-90％，自然光照；培养过程中每天早晚各喷施800-1000倍促生长液一次，所述促生长液由辣木叶提取物、壳聚糖、氨基酸螯合锌、氨基酸螯合硼、氨基酸螯合钾和水按照质量比10:7:2:1:1:100配制而成，其中，所述辣木叶提取物的制备方法为：将15重量份的辣木叶粉加入100重量份的水中，于95-100℃下密闭提取30-60分钟后，经过滤、减压浓缩和喷雾干燥制得。
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| CN108391591A (zh) * | 2018-01-26 | 2018-08-14 | 长江大学 | 一种黄花风铃木组织培养快繁方法 |
Citations (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
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| CN105145358A (zh) * | 2015-09-15 | 2015-12-16 | 广西壮族自治区药用植物园 | 一种黄藤组织培养快繁方法 |
| CN105145359A (zh) * | 2015-09-15 | 2015-12-16 | 广西壮族自治区药用植物园 | 一种羊齿天冬组织培养快速繁殖方法 |
| CN105660412A (zh) * | 2016-02-29 | 2016-06-15 | 广西壮族自治区药用植物园 | 一种大戟的组织培养快速繁殖方法 |
-
2017
- 2017-10-31 CN CN201711053904.0A patent/CN107593451A/zh active Pending
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| CN108391591B (zh) * | 2018-01-26 | 2021-07-06 | 长江大学 | 一种黄花风铃木组织培养快繁方法 |
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