CN110810246A - 一种红芽大戟繁育方法 - Google Patents
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Abstract
本发明提供了一种红芽大戟繁育方法，包括以下步骤：1)外植体灭菌：取红芽大戟植株茎秆，酒精消毒，无菌水清洗，次氯酸钠溶液消毒，无菌水冲洗；2)愈伤组织诱导培养：茎秆剪成茎段，诱导培养基为：MS+0.5‑1.5mg/L KT+0.3‑0.6mg/L 6‑BA+20g/L蔗糖+7.5g/L琼脂；3)愈伤组织分化培养：分化培养基为：MS+0.1‑0.5mg/L KT+0.5‑1mg/L 6‑BA+20g/L蔗糖+7.5g/L琼脂；4)继代培养：MS+0.5‑1mg/L NAA+1‑2mg/L 6‑BA+0.5‑1mg/L 2,4‑D+25g/L蔗糖+7.5g/L琼脂；5)生根培养：生根培养的培养基为：1/2MS+0.3‑0.6mg/L IBA+20g/L蔗糖+5g/L琼脂；6)移栽；本发明红芽大戟繁育方法可快速繁殖出品质优异的红芽大戟幼苗，并可降低红芽大戟的繁育成本。
Description
技术领域
本发明涉及植物繁殖技术领域，具体涉及一种红芽大戟繁育方法。
背景技术
红芽大戟为茜草科植物，属于名贵中药材，又叫红大戟。药用根部，有泄水逐饮、消肿散结之功效。属于中药材中的小品种，年需求量约150吨。野生资源分布于广东、广西、海南、福建、云南。中南半岛及印度也有分布。
红芽大戟主要通过种子繁殖，在自然条件下，其种子的生活力和萌发率较低，由于种子未充分成熟或胚发育不完全，自然散落在地上的种子发芽率不到1％，并且种子的储藏时间在1年以后发芽率均有所降低，常规方法贮藏1年以上的旧种，基本丧失生命力，几乎不能出苗。
目前，红芽大戟利用自然粽子繁殖的效率低，而营养繁殖大都勇气药用部位-块根进行繁殖，这就会在一定晨读上减少了其药用原料，造成药材的浪费，当药材供小于求时就会加速起野生资源灭绝。所以，采用红芽大戟的植株的各部分进行组织培养的尝试，并结合适宜的移栽，对于红芽大戟的繁育具有重要的实际意义。
红芽大戟的组织培养和快速繁殖不仅对保护野生药用植物资源有着积极的意义，且能缩短其生长周期，实现快速繁殖，满足市场对红芽大戟药材的需求。同时，广阔的市场需求空间和开发利用也必定带动了种植业、药材加工业和相关产业的发展。
发明内容
本发明的目的在于提供一种红芽大戟繁育方法，可快速繁殖出品质优异的红芽大戟幼苗，并可降低红芽大戟的繁育成本。
为实现以上目的，本发明通过以下技术方案予以实现：
一种红芽大戟繁育方法，包括以下步骤：
1)外植体灭菌：取生长健壮的红芽大戟植株，取茎秆，先用70％的酒精消毒1min，用无菌水清洗3-4遍，再用10％次氯酸钠溶液消毒15min，用无菌水冲洗5-6次；
2)愈伤组织诱导培养：将步骤1)处理后的茎秆剪成1.5±0.2cm长的茎段，然后平方于诱导培养基中培养10-12天，诱导培养基为：MS+0.5-1.5mg/L KT+0.3-0.6mg/L 6-BA+20g/L蔗糖+7.5g/L琼脂；
3)愈伤组织分化培养：将生长状态好的愈伤组织接种到分化培养基中进行继续培养28-30天，分化培养基为：MS+0.1-0.5mg/L KT+0.5-1mg/L 6-BA+20g/L蔗糖+7.5g/L琼脂；
4)继代培养：分化培养后进行继代培养30-35天，继代培养基为：MS+0.5-1mg/LNAA+1-2mg/L 6-BA+0.5-1mg/L 2,4-D+25g/L蔗糖+7.5g/L琼脂；
5)生根培养：将得到的再生绿芽置于生根培养基中生根长成完整植株，生根培养的时间为35-40天，生根培养的培养基为：1/2MS+0.3-0.6mg/L IBA+20g/L蔗糖+5g/L琼脂；
6)移栽：生根后的植株先置于室温下放置4-5天，然后加入清水，3天后清洗掉附着于表面的培养基，移栽至装好育苗基质的容器中，然后置于大棚中培养；移栽后8-10天，覆盖薄膜保湿，基质湿度保持在75-85％，控制大棚内的温度为25-30℃，18天后喷施水肥。
优选地，步骤2)中，诱导培养条件为：培养温度为24-26℃，光照时间13-15h/d，光照强度800-1200Lx。
优选地，步骤3)中，分化培养条件为：培养温度为24-26℃，光照时间15-17h/d，光照强度800-1200Lx。
优选地，步骤4)中，继代培养条件为：培养温度为24-26℃，光照时间14-16h/d，光照强度1800-2200Lx。
优选地，步骤5)中，生根培养条件为：培养温度为24-26℃，光照时间8-10h/d，光照强度1800-2200Lx。
优选地，步骤6)中，育苗基质为泥炭土、珍珠岩、河沙按质量比1：0.6：0.2组成。
本发明的有益效果是：
本发明以红芽大戟的茎秆为外植体材料，材料易得且污染率低，经过表面消毒后依次进行愈伤组织诱导培养、愈伤组织分化培养、继代培养、生根培养获得完整植株，之后结合适宜的移栽步骤，有效提高了红芽大戟的繁殖率，可快速繁殖出品质优异的红芽大戟幼苗，并可降低红芽大戟的繁育成本。
本发明操作简单，适合于红芽大戟的规模化生产，实现了红芽大戟稳定高效的组培体系，为加快红芽大戟植株繁育提供了稳定的技术支持。
具体实施方式
为使本发明实施例的目的、技术方案和优点更加清楚，下面将结合本发明实施例，对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有作出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。
实施例1：
一种红芽大戟繁育方法，包括以下步骤：
1)外植体灭菌：取生长健壮的红芽大戟植株，取茎秆，先用70％的酒精消毒1min，用无菌水清洗3遍，再用10％次氯酸钠溶液消毒15min，用无菌水冲洗5次。
2)愈伤组织诱导培养：将步骤1)处理后的茎秆剪成1.5±0.2cm长的茎段，然后平方于诱导培养基中培养10天，诱导培养基为：MS+1.5mg/L KT+0.5mg/L 6-BA+20g/L蔗糖+7.5g/L琼脂；
培养条件为：培养温度为26℃，光照时间13h/d，光照强度1200Lx。
3)愈伤组织分化培养：将生长状态好的愈伤组织接种到分化培养基中进行继续培养28天，分化培养基为：MS+0.1mg/L KT+0.5mg/L 6-BA+20g/L蔗糖+7.5g/L琼脂；
分化培养条件为：培养温度为26℃，光照时间15h/d，光照强度1200Lx。
4)继代培养：分化培养后进行继代培养35天，继代培养基为：MS+1mg/L NAA+1.5mg/L 6-BA+0.5mg/L 2,4-D+25g/L蔗糖+7.5g/L琼脂；
继代培养条件为：培养温度为26℃，光照时间16h/d，光照强度2000x。
5)生根培养：将得到的再生绿芽置于生根培养基中生根长成完整植株，生根培养的时间为40天，生根培养的培养基为：1/2MS+0.4mg/L IBA+20g/L蔗糖+5g/L琼脂；
培养条件为：培养温度为26℃，光照时间8h/d，光照强度2200Lx。
6)移栽：生根后的植株先置于室温下放置5天，然后加入清水，3天后清洗掉附着于表面的培养基，移栽至装好育苗基质的容器中，然后置于大棚中培养，其中育苗基质为泥炭土、珍珠岩、河沙按质量比1：0.6：0.2组成；移栽后10天，覆盖薄膜保湿，基质湿度保持在75-80％，控制大棚内的温度为25-30℃，18天后喷施水肥。
实施例2：
一种红芽大戟繁育方法，包括以下步骤：
1)外植体灭菌：取生长健壮的红芽大戟植株，取茎秆，先用70％的酒精消毒1min，用无菌水清洗4遍，再用10％次氯酸钠溶液消毒15min，用无菌水冲洗6次。
2)愈伤组织诱导培养：将步骤1)处理后的茎秆剪成1.5±0.2cm长的茎段，然后平方于诱导培养基中培养12天，诱导培养基为：MS+1g/L KT+0.3mg/L 6-BA+20g/L蔗糖+7.5g/L琼脂；
培养条件为：培养温度为24℃，光照时间15h/d，光照强度800Lx。
3)愈伤组织分化培养：将生长状态好的愈伤组织接种到分化培养基中进行继续培养28天，分化培养基为：MS+0.5mg/L KT+0.5mg/L 6-BA+20g/L蔗糖+7.5g/L琼脂；
分化培养条件为：培养温度为24℃，光照时间17h/d，光照强度800Lx。
4)继代培养：分化培养后进行继代培养30天，继代培养基为：MS+0.5mg/L NAA+1mg/L 6-BA+0.8mg/L 2,4-D+25g/L蔗糖+7.5g/L琼脂；
继代培养条件为：培养温度为24℃，光照时间14h/d，光照强度1800Lx。
5)生根培养：将得到的再生绿芽置于生根培养基中生根长成完整植株，生根培养的时间为38天，生根培养的培养基为：1/2MS+0.3mg/L IBA+20g/L蔗糖+5g/L琼脂；
培养条件为：培养温度为24℃，光照时间10h/d，光照强度1800Lx。
6)移栽：生根后的植株先置于室温下放置4天，然后加入清水，3天后清洗掉附着于表面的培养基，移栽至装好育苗基质的容器中，然后置于大棚中培养，其中育苗基质为泥炭土、珍珠岩、河沙按质量比1：0.6：0.2组成；移栽后8天，覆盖薄膜保湿，基质湿度保持在80-85％，控制大棚内的温度为25-30℃，18天后喷施水肥。
实施例3：
一种红芽大戟繁育方法，包括以下步骤：
1)外植体灭菌：取生长健壮的红芽大戟植株，取茎秆，先用70％的酒精消毒1min，用无菌水清洗3遍，再用10％次氯酸钠溶液消毒15min，用无菌水冲洗6次。
2)愈伤组织诱导培养：将步骤1)处理后的茎秆剪成1.5±0.2cm长的茎段，然后平方于诱导培养基中培养12天，诱导培养基为：MS+0.5mg/L KT+0.6mg/L 6-BA+20g/L蔗糖+7.5g/L琼脂；
培养条件为：培养温度为25℃，光照时间15h/d，光照强度1000Lx。
3)愈伤组织分化培养：将生长状态好的愈伤组织接种到分化培养基中进行继续培养30天，分化培养基为：MS+0.3mg/L KT+1mg/L 6-BA+20g/L蔗糖+7.5g/L琼脂；
分化培养条件为：培养温度为25℃，光照时间16h/d，光照强度1000Lx。
4)继代培养：分化培养后进行继代培养32天，继代培养基为：MS+0.8mg/L NAA+2mg/L 6-BA+1mg/L 2,4-D+25g/L蔗糖+7.5g/L琼脂；
继代培养条件为：培养温度为25℃，光照时间16h/d，光照强度2200Lx。
5)生根培养：将得到的再生绿芽置于生根培养基中生根长成完整植株，生根培养的时间为35天，生根培养的培养基为：1/2MS+0.6mg/L IBA+20g/L蔗糖+5g/L琼脂；
培养条件为：培养温度为25℃，光照时间10h/d，光照强度2200Lx。
6)移栽：生根后的植株先置于室温下放置5天，然后加入清水，3天后清洗掉附着于表面的培养基，移栽至装好育苗基质的容器中，然后置于大棚中培养，其中育苗基质为泥炭土、珍珠岩、河沙按质量比1：0.6：0.2组成；移栽后10天，覆盖薄膜保湿，基质湿度保持在80-85％，控制大棚内的温度为25-30℃，18天后喷施水肥。
对实施例1-3中不同时间的繁殖效果进行观测。
不同实施例中愈伤组织诱导培养的效果，具体如表1所示。
表1：
| 出愈率/％ | 愈组质量 | |
| 实施例1 | 100 | 好 |
| 实施例2 | 100 | 好 |
| 实施例3 | 100 | 好 |
不同实施例中愈伤组织分化培养的效果，具体如表2所示。
表2：
| 芽分化率/％ | |
| 实施例1 | 63.5 |
| 实施例2 | 60.5 |
| 实施例3 | 57.0 |
不同实施例中继代培养的效果，具体如表3所示。
表3：
| 芽增倍数 | 芽高 | 芽素质 | |
| 实施例1 | 3.2 | 好 | 好 |
| 实施例2 | 3.1 | 好 | 好 |
| 实施例3 | 3.2 | 好 | 好 |
不同实施例中生根培养的效果，具体如表4所示。
表4：
不同实施例中移栽的效果，具体如表5所示。
表5：
| 成活率/％(15d) | 成活率/％(30d) | |
| 实施例1 | 83.5 | 76.5 |
| 实施例2 | 86.5 | 77 |
| 实施例3 | 84 | 75 |
以上实施例仅用以说明本发明的技术方案，而非对其限制；尽管参照前述实施例对本发明进行了详细的说明，本领域的普通技术人员应当理解：其依然可以对前述各实施例所记载的技术方案进行修改，或者对其中部分技术特征进行等同替换；而这些修改或者替换，并不使相应技术方案的本质脱离本发明各实施例技术方案的精神和范围。
Claims (6)
1.一种红芽大戟繁育方法，其特征在于，包括以下步骤：
1)外植体灭菌：取生长健壮的红芽大戟植株，取茎秆，先用70％的酒精消毒1min，用无菌水清洗3-4遍，再用10％次氯酸钠溶液消毒15min，用无菌水冲洗5-6次；
2)愈伤组织诱导培养：将步骤1)处理后的茎秆剪成1.5±0.2cm长的茎段，然后平方于诱导培养基中培养10-12天，诱导培养基为：MS+0.5-1.5mg/L KT+0.3-0.6mg/L 6-BA+20g/L蔗糖+7.5g/L琼脂；
3)愈伤组织分化培养：将生长状态好的愈伤组织接种到分化培养基中进行继续培养28-30天，分化培养基为：MS+0.1-0.5mg/L KT+0.5-1mg/L 6-BA+20g/L蔗糖+7.5g/L琼脂；
4)继代培养：分化培养后进行继代培养30-35天，继代培养基为：MS+0.5-1mg/L NAA+1-2mg/L 6-BA+0.5-1mg/L 2,4-D+25g/L蔗糖+7.5g/L琼脂；
5)生根培养：将得到的再生绿芽置于生根培养基中生根长成完整植株，生根培养的时间为35-40天，生根培养的培养基为：1/2MS+0.3-0.6mg/L IBA+20g/L蔗糖+5g/L琼脂；
6)移栽：生根后的植株先置于室温下放置4-5天，然后加入清水，3天后清洗掉附着于表面的培养基，移栽至装好育苗基质的容器中，然后置于大棚中培养；移栽后8-10天，覆盖薄膜保湿，基质湿度保持在75-85％，控制大棚内的温度为25-30℃，18天后喷施水肥。
2.根据权利要求1所述的红芽大戟繁育方法，其特征在于，步骤2)中，诱导培养条件为：培养温度为24-26℃，光照时间13-15h/d，光照强度800-1200Lx。
3.根据权利要求1所述的红芽大戟繁育方法，其特征在于，步骤3)中，分化培养条件为：培养温度为24-26℃，光照时间15-17h/d，光照强度800-1200Lx。
4.根据权利要求1所述的红芽大戟繁育方法，其特征在于，步骤4)中，继代培养条件为：培养温度为24-26℃，光照时间14-16h/d，光照强度1800-2200Lx。
5.根据权利要求1所述的红芽大戟繁育方法，其特征在于，步骤5)中，生根培养条件为：培养温度为24-26℃，光照时间8-10h/d，光照强度1800-2200Lx。
6.根据权利要求1所述的红芽大戟繁育方法，其特征在于，步骤6)中，育苗基质为泥炭土、珍珠岩、河沙按质量比1：0.6：0.2组成。
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| RJ01 | Rejection of invention patent application after publication |
Application publication date: 20200221 |
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