CN109496844A - 一种常山的组织培养快繁方法 - Google Patents

一种常山的组织培养快繁方法 Download PDF

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Abstract

本发明公开了一种常山的组织培养快繁方法，常山为虎耳草科植物，产于湖南、广西、贵州、四川、江西。目前，常山种苗主要通过种子和扦插方式繁育，存在周期长、成本高、效率低下等问题。因此，本发明以带节茎段为外植体，通过不定芽诱导、增殖、生根、炼苗移栽等过程成功获得了常山离体再植株，建立常山组织培养快速繁殖技术体系，对于进行优良品种的快速繁殖和大面积推广、促进的产业化发展具有重要意义。

Description

一种常山的组织培养快繁方法
技术领域
本发明涉及农业生物技术中植物组织培养的方法，具体地说，涉及一种常山的组织培养快繁方法。
背景技术
常山为虎耳草科植物，取其干燥根，产于湖南、广西、贵州、四川、江西。秋季采挖,除去须根及地上部分，洗净晒干。无臭，味苦。主治截疟，祛痰。目前，常山种苗主要通过种子和扦插方式繁育，种子播种虽然可在短时间内获得大量幼苗，但因常山为雌雄同株异花授粉植物，后代易发生性状分离，遗传性状不稳定，易丢失亲本的优良性状。而扦插方式繁育需要大量的枝条，且从扦插到移栽大田需2个月，耗时较长。因此，釆用植物组织培养技术来缓解其种苗紧张压力、进行可持续开发利用是十分必要的。因此，本发明以常山带节茎段为外植体，通过不定芽诱导、增殖、生根、炼苗移栽等过程成功获得了离体再植株，建立组织培养快速繁殖技术体系，对于进行优良品种的快速繁殖和大面积推广，促进的产业化发展具有重要意义。对比文件1，申请号：CN201410417077，发明名称：一种常山药材鲜切加工工艺，该工艺在常山药材采收后，趁其表面粘着土壤湿润之际，抢水清洗，整理根支，摊晒12至48小时，趁鲜切制成圆片或椭圆片，晾晒至干燥后用聚乙烯塑料袋抽真空包装，并加入干燥剂和抗氧剂。本法由于对药材趁鲜洗涤加工。本案与对比文件不同。
发明内容
本发明的目的在于提供一种常山的组织培养快繁方法，通过诱导不定芽、丛生芽增殖、试管苗生根、炼苗移栽等阶段成功获得了离体再植株，建立组织培养快速繁殖技术体系，从而实现了本发明的目的。
本发明的一种常山的组织培养快繁方法，包括以下的工艺步骤：
步骤1，诱导不定芽：选取常山当年生带节藤茎为外植体,经75%酒精消毒30秒种后，用无菌水冲洗10次后置于0.1%的升汞溶液中消毒36分钟，然后用无菌水冲洗10次，经无菌滤纸吸干水分后剪切成6cm左右的带节藤茎，并接种到诱导培养基上,于25～28℃条件下全暗培养，直至诱导形成不定芽；诱导培养基为：MS+0.6～0.9mg/LTDZ+2.0～3.0mg/L 6-BA+0.6～0.8mg/LNAA+31～40g/L蔗糖+6.1～7.1g/L琼脂，pH为5.3；
步骤2，继代培养：将步骤1获得的不定芽从基部切下，接种到增殖培养基上进行继代培养，接种后置于每天光照20小时，光照强度为2500lx，培养温度为25～28℃的条件下培养，36天转接一次；增殖培养基为：MS+2.1～3.1mg/L 6-BA+0.6～0.9mg/LNAA+31～40g/L蔗糖+6.1～7.1g/L琼脂，pH为5.3；
步骤3，生根培养：将步骤2继代培养长至10cm的不定芽分切并接种到生根培养基上进行诱导生根，接种后先在25～28℃条件下全暗培养10天，然后置于每天光照20小时，光照强度为3500lx，培养温度为25～28℃的条件下培养至生根；生根培养基为：1/2MS+0.6～1.0mg/LIBA+2.1～3.0mg/L GGR+31～41g/L蔗糖+6.1～7.1g/L琼脂，pH为5.3；
步骤4，炼苗移栽：将长至12cm的生根试管苗的培养瓶瓶盖打开并置于自然光照下炼苗12天后，将试管苗从培养瓶中取出，洗掉根部培养基，栽入由泥炭土:农家肥:河沙（6：2：1）混合成的基质中并定植于大田中。
本发明的优点是：目前，常山种苗主要通过种子和扦插方式繁育，存在周期长、成本高、效率低下等问题。因此，本发明以常山带节茎段为外植体，通过不定芽诱导、增殖、生根、炼苗移栽等过程成功获得了常山离体再植株，建立常山组织培养快速繁殖技术体系，对于进行常山优良品种的快速繁殖和大面积推广、促进常山的产业化发展具有重要意义。本发明组织培养快繁方法，具有简单、易行、经济的特点。通过本发明利用植物组织培养技术进行常山种苗规模化生产，建立了常山油藤组培苗移栽成活率达到98%以上，可以为常山规模化种植提供优质种苗保障。
具体实施方式
以下实施例是对本发明的进一步说明，不是对本发明的限制。
实施例1：
（1）诱导不定芽：选取常山当年生带节藤茎为外植体,经75%酒精消毒18秒种后，用无菌水冲洗5次后置于0.1%的升汞溶液中消毒20分钟，然后用无菌水冲洗10次，经无菌滤纸吸干水分后剪切成6cm左右的带节藤茎，并接种到诱导培养基上,于25℃条件下全暗培养22天即可诱导形成不定芽，污染率低至6%以下，不定芽诱导率可达93%。所述的诱导培养基为：MS+0.3mg/LTDZ+1.5mg/L 6-BA+1.5mg/LNAA+25g/L蔗糖+5.5g/L琼脂，pH为5.2;
（2）继代培养：将步骤（1）获得的不定芽从基部切下，接种到增殖培养基上进行继代培养，接种后置于每天光照15小时，光照强度为2200lx，培养温度为25℃的条件下培养，22天转接一次，增殖系数为8.0。所述的增殖培养基为：MS+2.0mg/L 6-BA+1.2mg/LNAA+30g/L蔗糖+8.0g/L琼脂，pH为5.2；
（3）生根培养：将步骤（2）继代培养长至6cm的不定芽分切并接种到生根培养基上进行诱导生根，接种后先在25℃条件下全暗培养6天，然后置于每天光照16小时，光照强度为3000lx，培养温度为25℃的条件下培养12天即开始生根，生根率可达97%。所述的生根培养基为：1/2MS+1.3mg/LIBA+1.5mg/L GGR+16g/L蔗糖+4.0g/L琼脂，pH为5.2。
（4）炼苗移栽：将长至9cm的生根试管苗的培养瓶瓶盖打开并置于自然光照下炼苗6天后，将试管苗从培养瓶中取出，洗掉根部培养基，栽入由泥炭土:农家肥:河沙8：2：1混合成的基质中并定植于大田中，移栽成活率为98.5%。
实施例2：
（1）诱导不定芽：选取常山当年生带节藤茎为外植体，经75%酒精消毒20秒种后，用无菌水冲洗5次后置于0.5%的升汞溶液中消毒20分钟，然后用无菌水冲洗8次，经无菌滤纸吸干水分后剪切成6cm左右的带节藤茎，并接种到诱导培养基上,于26℃条件下全暗培养18天即可诱导形成不定芽，污染率低至8%以下，不定芽诱导率可达96%。所述的诱导培养基为：MS+0.6mg/LTDZ+1.8mg/L 6-BA+0.5mg/LNAA+25g/L蔗糖+5.0g/L琼脂，pH为5.4。
（2）继代培养：将步骤（1）获得的不定芽从基部切下，接种到增殖培养基上进行继代培养，接种后置于每天光照18小时，光照强度为2500lx，培养温度为26℃的条件下培养，30天转接一次，增殖系数为8.6。所述的增殖培养基为：MS+1.5mg/L 6-BA+1.2mg/LNAA+36g/L蔗糖+6.5g/L琼脂，pH为5.4。
（3）生根培养：将步骤（2）继代培养长至6cm的不定芽分切并接种到生根培养基上进行诱导生根，接种后先在26℃条件下全暗培养5天，然后置于每天光照17小时，光照强度为3200lx，培养温度为26℃的条件下培养16天即开始生根，生根率可达98%。所述的生根培养基为：1/2MS+0.6mg/LIBA+1.5mg/L GGR+19g/L蔗糖+4.5g/L琼脂，pH为5.4。
（4）炼苗移栽：将长至9cm的生根试管苗的培养瓶瓶盖打开并置于自然光照下炼苗6天后，将试管苗从培养瓶中取出，洗掉根部培养基，栽入由泥炭土:农家肥:河沙8：2：1混合成的基质中并定植于大田中，移栽成活率为99%。
实施例3：
（1）诱导不定芽：选取常山当年生带节藤茎为外植体,经75%酒精消毒22秒种后，用无菌水冲洗5次后置于0.2%的升汞溶液中消毒33分钟，然后用无菌水冲洗7次，经无菌滤纸吸干水分后剪切成6cm左右的带节藤茎，并接种到诱导培养基上,于28℃条件下全暗培养23天即可诱导形成不定芽，污染率低至3%以下，不定芽诱导率可达88%。所述的诱导培养基为：MS+0.4mg/LTDZ+1.6mg/L 6-BA+0.5mg/LNAA+28g/L蔗糖+4.8g/L琼脂，pH为5.4。
（2）继代培养：将步骤（1）获得的不定芽从基部切下，接种到增殖培养基上进行继代培养，接种后置于每天光照16小时，光照强度为2200lx，培养温度为28℃的条件下培养，22天转接一次，增殖系数为8.2。所述的增殖培养基为：MS+1.8mg/L 6-BA+0.8mg/LNAA+38g/L蔗糖+4.8g/L琼脂，pH为5.4。
（3）生根培养：将步骤（2）继代培养长至8cm的不定芽分切并接种到生根培养基上进行诱导生根，接种后先在28℃条件下全暗培养6天，然后置于每天光照16小时，光照强度为2200lx，培养温度为28℃的条件下培养12天即开始生根，生根率可达99%。所述的生根培养基为：1/2MS+0.5mg/LIBA+2.1mg/L GGR+23g/L蔗糖+4.8g/L琼脂，pH为5.4。
（4）炼苗移栽：将长至9cm的生根试管苗的培养瓶瓶盖打开并置于自然光照下炼苗6天后，将试管苗从培养瓶中取出，洗掉根部培养基，栽入由泥炭土:农家肥:河沙8：2：1）混合成的基质中并定植于大田中，移栽成活率为99%。

Claims (1)

1.一种常山的组织培养快繁方法，其特征在于包括以下工艺步骤：
步骤1，诱导不定芽：选取常山当年生带节藤茎为外植体,经75%酒精消毒30秒种后，用无菌水冲洗10次后置于0.1%的升汞溶液中消毒36分钟，然后用无菌水冲洗10次，经无菌滤纸吸干水分后剪切成6cm左右的带节藤茎，并接种到诱导培养基上,于25～28℃条件下全暗培养，直至诱导形成不定芽；诱导培养基为：MS+0.6～0.9mg/LTDZ+2.0～3.0mg/L 6-BA+0.6～0.8mg/LNAA+31～40g/L蔗糖+6.1～7.1g/L琼脂，pH为5.3；
步骤2，继代培养：将步骤1获得的不定芽从基部切下，接种到增殖培养基上进行继代培养，接种后置于每天光照20小时，光照强度为2500lx，培养温度为25～28℃的条件下培养，36天转接一次；增殖培养基为：MS+2.1～3.1mg/L 6-BA+0.6～0.9mg/LNAA+31～40g/L蔗糖+6.1～7.1g/L琼脂，pH为5.3；
步骤3，生根培养：将步骤2继代培养长至10cm的不定芽分切并接种到生根培养基上进行诱导生根，接种后先在25～28℃条件下全暗培养10天，然后置于每天光照20小时，光照强度为3500lx，培养温度为25～28℃的条件下培养至生根；生根培养基为：1/2MS+0.6～1.0mg/LIBA+2.1～3.0mg/L GGR+31～41g/L蔗糖+6.1～7.1g/L琼脂，pH为5.3；
步骤4，炼苗移栽：将长至12cm的生根试管苗的培养瓶瓶盖打开并置于自然光照下炼苗12天后，将试管苗从培养瓶中取出，洗掉根部培养基，栽入由泥炭土:农家肥:河沙（6：2：1）混合成的基质中并定植于大田中。
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Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN114982633A (zh) * 2022-05-26 2022-09-02 桂林理工大学 一种民族药小飞扬草的快速繁殖方法

Citations (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US20040203151A1 (en) * 2003-04-10 2004-10-14 Madhuri Sharon Efficient method of in-vitro micropropagation of piper longum
CN104082138A (zh) * 2014-06-28 2014-10-08 玉林师范学院 一种通城虎的组织培养快繁方法
CN104798684A (zh) * 2015-04-25 2015-07-29 玉林师范学院 一种星油藤的组织培养快繁方法
CN105918132A (zh) * 2016-05-26 2016-09-07 南京林业大学 一种海州常山快速繁育方法
CN108703070A (zh) * 2018-05-03 2018-10-26 云南农业大学 一种利用组培快速繁殖海州常山的方法

Patent Citations (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US20040203151A1 (en) * 2003-04-10 2004-10-14 Madhuri Sharon Efficient method of in-vitro micropropagation of piper longum
CN104082138A (zh) * 2014-06-28 2014-10-08 玉林师范学院 一种通城虎的组织培养快繁方法
CN104798684A (zh) * 2015-04-25 2015-07-29 玉林师范学院 一种星油藤的组织培养快繁方法
CN105918132A (zh) * 2016-05-26 2016-09-07 南京林业大学 一种海州常山快速繁育方法
CN108703070A (zh) * 2018-05-03 2018-10-26 云南农业大学 一种利用组培快速繁殖海州常山的方法

Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN114982633A (zh) * 2022-05-26 2022-09-02 桂林理工大学 一种民族药小飞扬草的快速繁殖方法

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