CN109125591A - 一种治疗脓毒症心衰的中药组合物及其制备方法 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及脓毒症心衰治疗领域，具体而言，涉及一种治疗脓毒症心衰的中药组合物及其制备方法。所述的中药组合物由黄芪25‑35份，茯苓15‑25份，丹参15‑25份，五味子5‑15份，麦冬10‑20份，葶苈子10‑20份，益母草15‑25份，水红花子和枳壳一共35‑55份，其中水红花子与枳壳的加入质量比例为1.25‑3.5:1组成，可降低脓毒症致死率、减少心肌损伤、抗炎症和抑制心肌细胞凋亡等，对于脓毒症心衰有较好的治疗效果。
Description
技术领域
本发明涉及脓毒症心衰治疗领域，具体而言，涉及一种治疗脓毒症心衰的中药组合物及其制备方法。
背景技术
脓毒症(sepsis)是指由感染引起的全身炎症反应综合征(systemicinflammatory response syndrome,SIRS)。脓毒症发生率高，全球每年有超过1800万严重脓毒症病例。脓毒症的病情凶险，病死率高达30％～50％，全球每天约14,000人死于其并发症。其主要的并发症有心功能衰竭、严重脓毒症、脓毒症休克、多器官功能障碍综合征等，其中心功能衰竭是脓毒症的最常见的死亡原因之一。脓毒症时，细菌毒素、细胞因子等可以通过不同途径造成心肌灌注不足、心肌能量代谢障碍及心肌细胞凋亡等，导致心肌功能抑制，最终引起心衰。脓毒症心衰是致使病情急剧恶化和影响预后的主要因素，因此病覆盖人群广、致死率高、治疗费用昂贵，已经引起医学界及社会各界人士的高度重视。
临床上，目前以西医早期液体复苏、抗生素治疗、使用血管活性药物等为主，因为其发病机制仍不明确，在改善临床并发症上并未见明显提高。
现有技术中虽然公开了一些治疗心衰的中药组分，河北医科大学张怡昕课题组(“慢性心衰大鼠心肌MMP-9、TIMP-1的表达及葶苈生脉方对其影响的研究”，张志良，《河北医科大学硕士研究生毕业论文》；“葶苈生脉方对心衰大鼠An份II及其受体新号传导的影响”，周桦，《河北医科大学硕士研究生毕业论文》)公开了一种用于治疗心衰葶苈生脉方，由红参、生黄芪、丹参，红花、赤芍、葶苈子、益母草、麦冬、五味子组成，并进行了大鼠心肌实验，但是其公开的治疗心衰葶苈生脉方只能治疗一般的慢性心衰，对于脓毒症导致的心衰治疗效果不明显；杨友军等(“中药汤剂联合西医常规治疗慢性心力衰竭45例”，《临床研究》，杨友军，第28卷第4期提出一种用于治疗心衰的中药，其组成为：红参10份，麦冬30份，五味子30份、黄芪30份，丹参20份，红花12份，葶苈子15份，益母草30份，桂枝10份，炙甘草30份。但是也是治疗一般的慢性心衰，而且需要结合西医才能达到相应的疗效；王如侠提出了一种可用于治疗慢性心力衰竭的芪苈强心汤，组成为：黄芪、葶苈子、炒苏子、白生术、茯苓、香加皮、泽泻、泽兰、水红花子、熟附片、桂枝。但是其只适应与治疗一般的慢性心衰。
基于现有技术中目前尚未存在对脓毒症导致的心衰具有良好的疗效的中药配方，申请人通过长时间的研究、试验，开发出一种对治疗脓毒症心衰具有良好效果的中药组合物及其制备方法。
发明内容
本发明提供一种治疗脓毒症心衰的中药组合物，其特征在于，由以下原料制成：黄芪25-35份，茯苓15-25份，丹参15-25份，五味子5-15份，麦冬10-20份，葶苈子10-20份，益母草15-25份，水红花子和枳壳一共35-55份，其中水红花子与枳壳的加入质量比例为1.25-3.5:1。
进一步地，所述的治疗脓毒症心衰的中药组合物，其特征在于，由以下原料制成：黄芪：30份，茯苓：20份，丹参：20份，五味子：10份，麦冬15份，葶苈子15份，益母草20份，水红花子和枳壳一共45份，其中水红花子与枳壳的加入质量比例为2:1。
进一步地，所述中药组合物的剂型为茶剂、丸剂、颗粒剂、胶囊剂和片剂的一种。
一种治疗脓毒症心衰的中药组合物的制备方法，其特征在于，包括一下步骤：
(1)将上述的中药组合物加入到药锅内，加入水溶液，使药材能完全浸泡于水溶液中，在室温下浸泡20～60min；
(2)大火熬制至开锅后，改小火，熬煮20～60min，期间不断搅拌，防止溢锅，熬煮结束后滤出药液；
(3)在药渣中加入水溶液，以完全浸泡为准，熬煮20～60min，滤出药液，与前次药液混合均匀；
(4)将混合的药液加热浓缩，浓缩至药液的密度为1.05～1.12g/cm3即可，加入辅料制成所需剂型。
进一步地，所述中药组合物的原料在低温-20-40℃冷冻后破碎至100-200目后加入药锅。
进一步地，所述水溶液中添加有0.5-1质量％的小苏打。
进一步地，所述辅料选自糖粉、微晶纤维素、淀粉、糊精中的一种或多种。
与现有技术相比，本发明的有益效果为：方解：黄芪大补元气，振奋心阳，茯苓利水渗湿，健脾宁心，两者共为君药以温脾益气，温补肾阳，以解阳虚体质之阳气不足、阳虚里寒之证；丹参、益母草、葶苈子活血祛瘀，利水消肿，是为臣药，匡君之不迨也；五味子温脾止泻，固精缩，麦冬化痰止呕、治嗽行水，是为佐药，减缓君药，降火去燥；水红花子和枳壳是为使药，引方中诸药直达病所，合力祛邪。本发明的中药组合物经过了大量临床验证和实验验证，可降低脓毒症致死率、减少心肌损伤、抗炎症和抑制细胞凋亡，对于脓毒症心衰有较好的治疗效果，本申请中选定了特定组成的中药组成，特别是水红花子和枳壳的加入，尤其是通过限定水红花子和枳壳的加入量以及红花子和枳壳加入比例对治疗效果具有显著的提高。
附图说明
为了更清楚地说明本发明具体实施方式或现有技术中的技术方案，下面将对具体实施方式或现有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图是本发明的一些实施方式，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他的附图。
图1为实验例2的小鼠死亡存活率折线图；
图2为实验例3的小鼠心肌组织的HE染色图；
图3为实验例4的小鼠心肌细胞炎性因子的ELISA检测结果图；
图4为实验例5的小鼠心肌组织中caspase-12，JNK和HM份B1免疫组化结果图；
图5为实验例6的小鼠心肌细胞中促凋亡因子的蛋白检测结果图。
具体实施方式
下面将结合实施例对本发明的实施方案进行详细描述，但是本领域技术人员将会理解，下列实施例仅用于说明本发明，而不应视为限制本发明的范围。实施例中未注明具体条件者，按照常规条件或制造商建议的条件进行。所用试剂或仪器未注明生产厂商者，均为可以通过市购获得的常规产品。
实施例1
配方：黄芪：30份，茯苓：20份，丹参：20份，五味子：10份；麦冬15份；葶苈子15份；益母草20份，水红花子和枳壳一共45份，其中水红花子与枳壳的加入质量比例为2:1。
一种治疗脓毒症心衰的中药组合物的制备方法，其特征在于，包括一下步骤：
(1)中药组合物的原料在低温-20-40℃冷冻后破碎至150目后加入药锅，加入水溶液，使药材能完全浸泡于水溶液中，在室温下浸泡40min；
(2)大火熬制至开锅后，改小火，熬煮40min，期间不断搅拌，防止溢锅，熬煮结束后滤出药液；
(3)在药渣中加入水溶液，以完全浸泡为准，熬煮40min，滤出药液，与前次药液混合均匀；
(4)将混合的药液加热浓缩，浓缩至药液的密度为1.08g/cm3即可，加入辅料制成所需剂型。
所述水溶液中添加有0.75质量％的小苏打。所述辅料为糖粉。
实施例2
配方：黄芪：25份，茯苓：15份，丹参：25份，五味子：5份；麦冬20份；葶苈子10份；益母草15份，水红花子和枳壳一共55份，其中水红花子与枳壳的加入质量比例为1.25:1。
一种治疗脓毒症心衰的中药组合物的制备方法，其特征在于，包括一下步骤：
(1)中药组合物的原料在低温-20-40℃冷冻后破碎至100目后加入药锅，加入水溶液，使药材能完全浸泡于水溶液中，在室温下浸泡60min；
(2)大火熬制至开锅后，改小火，熬煮20min，期间不断搅拌，防止溢锅，熬煮结束后滤出药液；
(3)在药渣中加入水溶液，以完全浸泡为准，熬煮60min，滤出药液，与前次药液混合均匀；
(4)将混合的药液加热浓缩，浓缩至药液的密度为1.05g/cm3即可，加入辅料制成所需剂型。
所述水溶液中添加有0.75质量％的小苏打。所述辅料为淀粉。
实施例3
配方：黄芪：35份，茯苓：25份，丹参：15份，五味子：15份；麦冬10份；葶苈子20份；枳壳10份；益母草25份，水红花子和枳壳一共35份，其中水红花子与枳壳的加入质量比例为3.5：1。
一种治疗脓毒症心衰的中药组合物的制备方法，其特征在于，包括一下步骤：
(1)中药组合物的原料在低温-20-40℃冷冻后破碎至200目后加入药锅，加入水溶液，使药材能完全浸泡于水溶液中，在室温下浸泡20min；
(2)大火熬制至开锅后，改小火，熬煮60min，期间不断搅拌，防止溢锅，熬煮结束后滤出药液；
(3)在药渣中加入水溶液，以完全浸泡为准，熬煮20min，滤出药液，与前次药液混合均匀；
(4)将混合的药液加热浓缩，浓缩至药液的密度为1.12g/cm3即可，加入辅料制成所需剂型。
所述水溶液中添加有0.75质量％的小苏打。所述辅料为糊精。
对比例1
配方：黄芪：30份，茯苓：20份，丹参：20份，五味子：10份；麦冬15份；葶苈子15份；益母草20份。没有加入水红花子和枳壳。制备方法与实施例1相同。
对比例2
配方：黄芪：30份，茯苓：20份，丹参：20份，五味子：10份；麦冬15份；葶苈子15份；益母草20份，加入水红花子15份，没有加入枳壳。制备方法与实施例1相同。
对比例3
配方：黄芪：30份，茯苓：20份，丹参：20份，五味子：10份；麦冬15份；葶苈子15份；益母草20份，加入枳壳10份，没有加入水红花子。制备方法与实施例1相同。
对比例4
配方：黄芪：30份，水红花子：30份，茯苓：20份，麦冬15份；葶苈子15份；枳壳15份；益母草20份，水红花子和枳壳一共30份，其中水红花子与枳壳的加入质量比例为2：1。制备方法与实施例1相同。
对比例5
配方：黄芪：30份，水红花子：30份，茯苓：20份，麦冬15份；葶苈子15份；枳壳15份；益母草20份，水红花子和枳壳一共60份，其中水红花子与枳壳的加入质量比例为2：1。制备方法与实施例1相同。
对比例6
配方：黄芪：30份，水红花子：30份，茯苓：20份，麦冬15份；葶苈子15份；枳壳15份；益母草20份，水红花子和枳壳一共45份，其中水红花子与枳壳的加入质量比例为1：1。制备方法与实施例1相同。
对比例7
配方：黄芪：30份，水红花子：30份，茯苓：20份，麦冬15份；葶苈子15份；枳壳15份；益母草20份，水红花子和枳壳一共45份，其中水红花子与枳壳的加入质量比例为4：1。制备方法与实施例1相同。
对比例8
CON(空白组)
对比例9
CLP模型组
实验例1
模型鼠的构建和对照的设置。
共五种小鼠模型，其中，CLP是用于模拟脓毒症小鼠；
QX1为服用不同剂量的实施例1制成的中药液的小鼠，具体地，
QX1Hi份h为服用高剂量中药组合物的CLP模型鼠，按1g/k份的量每6小时灌胃一次，1d和/或2d和/或7d后观察生存情况或采样实验；
QX1Med为服用中剂量实施例中药组合物的CLP模型鼠，按0.5g/k份的量每6小时灌胃一次，1d和/或2d和/或7d后观察生存情况或采样实验；
QX1Low为服用低剂量实施例中药组合物的CLP模型鼠，按0.25g/k份的量每6小时灌胃一次，1d和/或2d和/或7d后观察生存情况或采样实验；
Sham为仅穿孔且穿孔后缝合的小鼠，作为阴性对照；
Con为正常小鼠。，
小鼠盲肠结扎穿孔术(CLP)用于模拟脓毒症。
CLP小鼠模型构建方法如下：
1.实验动物
雄性BALB/c小鼠，6-8w，20±2份，适应性饲养1周，自由进食水，室温25℃，昼夜节律为12h。术前禁食12h，自由饮水。
2.实验药物
盐酸氯胺酮注射液：速眠新Ⅱ注射液：0.9％生理盐水体积比为2:2.5:4.5；0.9％生理盐水补液用。
3.实验器械
1ml注射器2只，10ml或5ml注射器针头1个，血管钳1把，眼科剪1把，无齿眼科镊(直、弯镊子各1把)，持针器1把，小号弯针1个，3、4号线，碘伏棉球若干。
4.实验方法
4.1麻醉：左手握持小鼠，大拇指与示指捏住小鼠头部皮肤，小拇指与无名指紧捏左下肢，暴露外侧皮肤，左手持1ml空针于左侧后肢外侧斜30°进针约0.5cm，2ml/k份混合麻醉液肌肉麻醉，并按压1min，防止出血。
4.2固定：待小鼠全身麻醉后，刺激后肢无反应，固定于手术板上，双上肢压于橡皮条下，双下肢使用橡皮条捆扎后固定或者直接压在另一橡皮条下，仰卧位。
4.3消毒：碘伏棉球消毒3遍，沿腹正中呈放射状消毒或者呈“Z”状消毒。消毒范围约为手术切口外1cm。
4.4暴露：使用眼科弯镊提起腹正中线，剑突下约1cm处皮肤，眼科剪剪开约0.5cm开口，暴露腹膜，使用眼科弯镊提起腹膜，略微剪开，插入剪刀尖部扩开腹膜，提起切口暴露腹腔，多于左上腹能够发现盲肠，少数位于右侧，暴露盲肠。
4.5结扎：使用3号线结扎1/2长度盲肠(自盲肠根部到末端为总长度)，结扎时不能用力，保证肠管内容物不能回流为佳，打一方结。
4.6穿孔：使用针头于结扎段盲肠1/2处自肠系膜血管侧贯穿盲肠一次，并且挤出少许肠内容物，防止穿孔闭合。
4.7缝合：将盲肠轻柔的归纳于腹腔中，使用眼科镊提起皮肤和腹膜逐层缝合，缝合后轻柔腹部，防止肠管梗阻。
4.8补液：术毕颈部皮下予0.9％生理盐水40ml/k份抗休克治疗，术后自由进食水，保持室温恒定。
实验例2
小鼠生存实验。
按实验例1的方式构建小鼠模型并对QX1Hi份h和QX1Low小鼠进行灌胃处理，分别在0h、1d、2d和7d观察小鼠存活情况，计算死亡存活率，实验结果见图1。
从图中可以看出，由于感染了脓毒症，随着时间的延长，各组小鼠的死亡存活率均下降，但给药组小鼠死亡存活率下降缓慢，且QX1Hi份h小鼠比QX1Low小鼠下降更为缓慢，7d后QX1Hi份h小鼠的死亡存活率约为40％，而CLP小鼠死亡存活率约为20％，说明服用高剂量本发明中药组合物后，死亡存活率提高2倍。以上结果说明，本发明的中药组合物可显著提高CLP脓毒症模型小鼠的死亡存活率。
实验例3
心肌损伤实验。
按实验例1的方法对QX1Hi份h小鼠进行灌胃处理，2d后解剖心肌组织做HE染色，结果如图2所示，其中a表示Con小鼠，b表示CLP小鼠，c表示QX1Hi份h小鼠，d表示Sham小鼠。
从图2中可以看出，CLP小鼠心肌组织有较严重的心肌损伤，QX1Hi份h小鼠心肌损伤明显减少，说明本发明的中药组合物可显著减少CLP脓毒症模型小鼠心肌损伤。
实验例4
心肌细胞炎性因子检测。
按实验例1的方法对QX1Hi份h、QX1Med和QX1Low小鼠灌胃2d，ELISA检测心肌组织中IL-1β、TNF-α和IL-10的表达情况，实验结果见图3，为两次平行实验结果。
IL-1β即白介素1β，为一种致炎细胞因子，广泛参与了人体组织破坏、水肿形成等多种病理损伤过程。
TNF-α是肿瘤坏死因子α，它可以促进T细胞产生各种炎症因子，进而促进炎症反应的发生。
IL-10即白介素10，是一种多细胞源、多功能的细胞因子，参与炎性反应和免疫反应，是炎症与免疫抑制因子，发挥下调炎症反应，拮抗炎性介质的作用。
从图3中可以看出，QX1给药24小时(上图)可显著降低CLP脓毒症小鼠血清中IL-1β和IL-10的表达；QX1给药48小时(下图)显著抑制TNF-α和IL-1β的表达，说明QX1可有效抑制脓毒症小鼠机体的过度炎症反应。
实验例5
心肌组织中caspase-12，JNK和HM份B1的表达量。
按实验例1的方法对QX1Hi份h小鼠灌胃2d，免疫组化观察心肌组织中caspase-12，JNK和HM份B1的表达量，实验结果见图4。
caspase-12为含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶12(cysteinyl aspartatespecific proteinase 12)，与真核细胞凋亡密切相关。
JNK(c-Jun氨基末端激酶，c-Jun N-terminal kinase)又被称为应激活化蛋白激酶(stress-activated protein kinase,SAPK)，是哺乳类细胞中MAPK(mito份en-activated protein kinase，丝裂原活化蛋白激酶)信号通路的另一亚类。
HM份B1即高迁移率族蛋白1(hi份h mobility份roup box-1protein,HM份B1)，为新的潜在的晚期炎症介质参与了脓毒症的发病过程，是内毒素致死效应的晚期重要炎症介质。
从图2可以看出，CLP小鼠的caspase-12，JNK和HM份B1表达量较Con组明显增多，当服用本发明的中药组合物后，caspase-12，JNK和HM份B1的表达均有显著下降，也就是说本发明的中药组合物可显著降低脓毒症小鼠心肌组织中caspase-12，JNK和HM份B1的生成量，说明了本发明的中药组合物可抑制心肌细胞凋亡。
实验例6
促凋亡因子的表达。
按实验例1的方法对QX1Hi份h、QX1Med和QX1Low小鼠灌胃2d，Western Blot检测caspase-3/9/12的表达情况，实验结果见图5。
从图5可以看出，服用本发明的中药组合物后caspase-3/9/12的表达均有下降，且剂量越高，caspase-3/9/12的表达量下降越明显，说明本发明的中药组合物可抑制脓毒症模型小鼠心肌细胞中促凋亡因子的表达。
讲实施例和对比例的中药组合物制备后，分别按高剂量进行分组测试后，结果汇总如下。
表1
最后应说明的是：以上各实施例仅用以说明本发明的技术方案，而非对其限制；尽管参照前述各实施例对本发明进行了详细的说明，但本领域的普通技术人员应当理解：其依然可以对前述各实施例所记载的技术方案进行修改，或者对其中部分或者全部技术特征进行等同替换；而这些修改或者替换，并不使相应技术方案的本质脱离本发明各实施例技术方案的范围。
Claims (7)
1.一种治疗脓毒症心衰的中药组合物，其特征在于，由以下重量份的原料制成：黄芪25-35份，茯苓15-25份，丹参15-25份，五味子5-15份，麦冬10-20份，葶苈子10-20份，益母草15-25份，水红花子和枳壳一共35-55份，其中水红花子与枳壳的加入质量比例为1.25-3.5:1。
2.根据权利要求1所述的治疗脓毒症心衰的中药组合物，其特征在于，由以下重量份的原料制成：黄芪30份，茯苓20份，丹参20份，五味子10份，麦冬15份，葶苈子15份，益母草20份，水红花子和枳壳一共45份，其中水红花子与枳壳的加入质量比例为2:1。
3.根据权利要求1所述的治疗脓毒症心衰的中药组合物，其特征在于，所述中药组合物的剂型为茶剂、丸剂、颗粒剂、胶囊剂和片剂的一种。
4.一种治疗脓毒症心衰的中药组合物的制备方法，其特征在于，包括一下步骤：
(1)将根据权利要求1或2所述的中药组合物加入到药锅内，加入水溶液，使药材能完全浸泡于水溶液中，在室温下浸泡20～60min；
(2)大火熬制至开锅后，改小火，熬煮20～60min，期间不断搅拌，防止溢锅，熬煮结束后滤出药液；
(3)在药渣中加入水溶液，以完全浸泡为准，熬煮20～60min，滤出药液，与前次药液混合均匀；
(4)将混合的药液加热浓缩，浓缩至药液的密度为1.05～1.12g/cm3即可，加入辅料制成所需剂型。
5.根据权利要求4所述的疗脓毒症心衰的中药组合物的制备方法，其特征在于，所述中药组合物的原料在低温-20-40℃冷冻后破碎至100-200目后加入药锅。
6.根据权利要求4所述的疗脓毒症心衰的中药组合物的制备方法，其特征在于，所述水溶液中添加有0.5-1质量％的小苏打。
7.根据权利要求4所述的疗脓毒症心衰的中药组合物的制备方法，其特征在于，所述辅料选自糖粉、微晶纤维素、淀粉、糊精中的一种或多种。
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