CN108982709A - 一种奥美拉唑干混悬剂中有关物质的检测方法 - Google Patents

Abstract

本发明属于化学药物分析方法技术领域，具体涉及一种奥美拉唑干混悬剂中有关物质的分析方法。本发明采用高效液相色谱法，其色谱条件包括：色谱柱采用辛烷基硅烷键合硅胶；采用流动相A和流动相B为混合流动相进行梯度洗脱；流动相A采用磷酸氢二钠溶液；流动相B采用乙腈；溶解样品包括如下步骤，以溶剂1溶解样品后，再以溶剂2溶解；溶剂1采用甲醇；溶剂2采用甲醇和水的混合溶剂。采用本发明的检测方法，可以保护高效色谱仪、色谱柱，对各研究杂质均能有效分离，检测出的杂质多，能快速、有效、准确监控奥美拉唑干混悬剂中的有关物质。

Description

一种奥美拉唑干混悬剂中有关物质的检测方法

技术领域

本发明属于化学药物分析方法技术领域，具体涉及一种奥美拉唑干混悬剂中有关物质的分析方法。

背景技术

奥美拉唑干混悬剂(Omeprazole Powder for Oral Suspension)，本品规格为每袋含有奥美拉唑20mg和碳酸氢钠1680mg与每袋含有奥美拉唑40mg和碳酸氢钠1680mg。

奥美拉唑干混悬剂为质子泵抑制剂，本品适用于(1)短期治疗活跃型十二指肠溃疡，大多数患者会在4周内痊愈，少数患者需要追加4周的治疗方可痊愈。(2)短期治疗(4-8周)活跃型良性胃溃疡。(3)治疗有烧心等症状的胃食管反流症(GERD)患者。(4)于以内窥镜检查诊断为糜烂性食管炎的短期治疗(4-8周)。(5)超过8周治疗GERD的疗效尚未确定。罕有患者经过8周的治疗后没有反应，建议放弃追加治疗。如果是复发性糜烂性食管炎或GERD患者伴有烧心等症状，可以考虑追加4-8周的奥美拉唑治疗。(6)糜烂性食管炎的维持治疗。

奥美拉唑干混悬剂由美国Santarus公司研制，商品名：FDA于2004年6月15日批准其在美国上市，按照《药品注册管理办法》规定，本品属于已在国外上市销售但尚未在国内上市销售的三类新药。

为了保证药物的安全有效，需要对药物中的有关物质进行研究、检测和监控。有关物质主要为工艺副产物及降解产物，药品在放置过程中，杂质谱在发生变化，因此需要根据不同的合成路线和生产工艺、贮藏条件建立合适的分析方法，达到对奥美拉唑干混悬剂有关物质准确、有效的检测和监控。

发明内容

本发明的目的是在现有技术的基础上，提供一种奥美拉唑干混悬剂中有关物质的检测方法。

本发明的技术方案如下：

一种奥美拉唑干混悬剂中有关物质的检测方法，该检测方法采用高效液相色谱法，其色谱条件包括：色谱柱采用辛烷基硅烷键合硅胶；采用流动相A和流动相B为混合流动相进行梯度洗脱；流动相A采用磷酸氢二钠溶液；流动相B采用乙腈；溶解样品包括如下步骤，以溶剂1溶解样品后，再以溶剂2溶解；溶剂1采用甲醇；溶剂2采用甲醇和水的混合溶剂。

本发明采用溶剂1(甲醇)溶解主成分并沉淀样品中辅料，为了防止甲醇挥发造成浓度变化，采用溶剂2(甲醇和水的混合溶剂)作为第二步稀释溶剂，在其他条件的配合下，可以保护高效色谱仪、色谱柱，对各研究杂质均能有效分离，检测出的杂质多，能快速、有效、准确监控奥美拉唑干混悬剂中的有关物质。

本发明梯度洗脱包括以下步骤：(1)所述梯度在：0-30分钟内，流动相A和流动相B的体积比从90:10匀速渐变至45:55；(2)在30-40分钟内，流动相A和流动相B的体积比保持45:55等度洗脱；(3)40-41分钟内，流动相A和流动相B的体积比从45:55匀速渐变至90:10；(4)41-50分钟内，流动相A和流动相B的体积比保持90:10不变。

本发明采用的流动相A的制备包括以下步骤：将磷酸氢二钠配制成浓度为0.01mol/L的溶液，再用磷酸调节pH值至7.4-7.9，即得。

在一种优选方案中，流动相A的制备包括以下步骤：将磷酸氢二钠配制成浓度为0.01mol/L的溶液，再用磷酸调节pH值至7.6-7.8，即得。

奥美拉唑干混悬剂中辅料黄原胶能在有机相中沉淀，先用有机溶剂甲醇溶解过滤，黄原胶能随辅料一起被过滤，可以有效去除样品中的黄原胶，同时奥美拉唑报道的各个杂质均溶于甲醇，通过对高浓度样品用纯甲醇溶解过滤后再用溶剂稀释至需要的浓度，样品放置一段时间，溶液依然能很快地通过滤膜，没有产生粘稠现象。

考虑纯有机溶剂作为溶剂有不同程度的挥发造成浓度变化，在一种优选方案中，溶剂2中甲醇和水的体积比为60～80:40～20，进一步优选方案中，溶剂2中甲醇和水的体积比为70:30。对高效色谱仪、色谱柱起到良好的保护作用。而用普通溶剂作为稀释剂时，普通溶剂通过0.45μm针式有机滤头过滤后，在等待进样放置过程中发生膨胀而导致溶剂粒径大于0.45μm，对高效液相及色谱柱阻塞损坏。

在一种更优选方案中，色谱条件包括：色谱柱的长度为150mm，直径为4.6mm，填料粒径为5μm。

进一步的，检测器的检测波长为300-310nm；优选为305nm。

进一步的，柱温为40℃。

更进一步的，进样量为20μl。

本发明提供的一种奥美拉唑干混悬剂中有关物质的检测方法，其中有关物质包括以下物质：

本发明提供检测方法的具体步骤为：分别配制系统适用性溶液、对照品溶液、供试品溶液并进样，通过加校正因子的主成分自身对照法进行杂质含量检测。

系统适用性溶液：取奥美拉唑对照品、杂质D对照品、杂质B对照品约1mg，置100ml量瓶中，加溶剂2(甲醇-水70:30)溶解并稀释至刻度，摇匀，精密量取1ml置10ml量瓶中，加溶剂2制成每1ml中分别含有1μg上述对照品的混合溶液。

奥美拉唑加杂质混合溶液：取奥美拉唑对照品、杂质A、B、C、D、E、F、G、H、I对照品约1mg，置100ml量瓶中，加溶剂2(甲醇-水70:30)溶解并稀释至刻度，摇匀，精密量取1ml置10ml量瓶中，加溶剂2制成每1ml中分别含有1μg上述对照品的混合溶液。

供试品溶液：取本品适量(约相当于奥美拉唑10mg)，置25ml量瓶中，加溶剂1(甲醇)溶解并稀释至刻度，摇匀，过滤，精密量取5ml置10ml量瓶中，加溶剂2(甲醇-水70:30)稀释至刻度，摇匀，即得。

其中，对照品溶液为：1％供试品溶液。(稀释剂：溶剂2(甲醇-水70:30))

本发明通过筛选合适流动相并优化流动相中各组分比例，以及供试品溶液特殊处理方式，经过梯度变化、筛选合适的其他色谱条件，对奥美拉唑干混悬剂以及上述9个杂质进行色谱分析，确定了本发明分析方法，进行了专属性(杂质与主成分分离度实验、强制降解实验)、重复性、精密度、准确的、线性范围、校正因子、耐用性验证，确证方法的可行性。

采用本发明的技术方案，优势如下:

(1)本发明提供的奥美拉唑干混悬剂中有关物质的检测方法，对各研究杂质均能有效分离，检测出的杂质多，能快速、有效、准确监控奥美拉唑干混悬剂中的有关物质。

(2)本发明采用溶剂1(甲醇)溶解主成分并沉淀样品中辅料，为了防止甲醇挥发造成浓度变化，采用溶剂2(甲醇和水的混合溶剂)作为第二步稀释溶剂，可以保护高效色谱仪、色谱柱。

附图说明

图1是实施例1奥美拉唑加杂质混合溶液高效液相色谱图；

图2是实施例1系统适用性溶液高效液相色谱图；

图3是实施例1奥美拉唑干混悬剂供试品有关物质高效液相色谱图；

图4是对比例1奥美拉唑加杂质混合溶液高效液相色谱图；

图5是对比例1系统适用性溶液高效液相色谱图；

图6是对比例1供试品溶液高效液相色谱图；

图7是对比例2奥美拉唑加杂质混合溶液高效液相色谱图；

图8是对比例3奥美拉唑加杂质混合溶液高效液相色谱图；

图9是对比例4奥美拉唑加杂质混合溶液高效液相色谱图；

图10是实施例2奥美拉唑加杂质混合溶液高效液相色谱图；

图11是实施例2奥美拉唑干混悬剂供试品有关物质高效液相色谱图；

图12是实施例3奥美拉唑加杂质混合溶液高效液相色谱图；

图13是实施例3奥美拉唑干混悬剂供试品有关物质高效液相色谱图；

图14是实施例4奥美拉唑加杂质混合溶液高效液相色谱图；

图15是实施例4奥美拉唑干混悬剂供试品有关物质高效液相色谱图。

具体实施方式

通过以下实施例并结合附图对本发明的奥美拉唑干混悬剂中有关物质的检测方法作进一步的说明，但这些实施例不对本发明构成任何限制。

实施例1：

高效液相色谱条件：

色谱柱为辛烷基硅烷键合硅胶柱，以0.01mol/L磷酸氢二钠溶液(用磷酸调节pH值至7.6)为流动相A，以乙腈为流动相B进行梯度洗脱，检测波长为305nm，柱温40℃。

梯度洗脱过程为：(1)0-30分钟内，流动相A和流动相B的体积比从90:10匀速渐变至45:55；(2)在30-40分钟内，流动相A和流动相B的体积比保持45:55等度洗脱；(3)40-41分钟内，流动相A和流动相B的体积比从45:55匀速渐变至90:10；(4)41-50分钟内，流动相A和流动相B的体积比保持90:10不变。

样品配制：

奥美拉唑加杂质混合溶液：取奥美拉唑对照品、杂质A、B、C、D、E、F、G、H、I对照品约1mg，置100ml量瓶中，加溶剂2(甲醇-水70:30)溶解并稀释至刻度，摇匀，精密量取1ml置10ml量瓶中，加溶剂2制成每1ml中分别含有1μg上述对照品的混合溶液。

系统适用性溶液：取奥美拉唑对照品、杂质D对照品、杂质B对照品约1mg，置100ml量瓶中，加溶剂2(甲醇-水70:30)溶解并稀释至刻度，摇匀，精密量取1ml置10ml量瓶中，加溶剂2制成每1ml中分别含有1μg上述对照品的混合溶液。

供试品溶液：取本品适量(约相当于奥美拉唑10mg)，置25ml量瓶中，加溶剂1(甲醇)溶解并稀释至刻度，摇匀，过滤，精密量取5ml置10ml量瓶中，加溶剂2(甲醇-水70:30)稀释至刻度，摇匀，即得。

试验操作：取上述溶液20μl进样，记录色谱图。

验证分析如下：

(1)奥美拉唑干混悬剂杂质含量测定

取奥美拉唑干混悬剂供试品溶液，进样并记录图谱，通过加校正因子的主成分自身对照法进行杂质含量检测，结果见表1和图3。

表1奥美拉唑干混悬剂杂质检测结果

由表1和图3可以看出，奥美拉唑干混悬剂供试品中杂质E、杂质D均有检出，其余杂质未检出，总杂为0.16％。

本发明通过筛选梯度变化、合适流动相并优化流动相中各组分比例，以及筛选合适的溶剂，对奥美拉唑以及9个杂质进行色谱检测，确定了本发明实施例1的检测方法。

通过配制奥美拉唑加杂质混合溶液、系统适用性溶液，通过对各杂质和奥美拉唑的峰定位试验对本发明进行专属性、检测限、定量限、线性范围、准确的、校正因子的验证。

(2)专属性

取奥美拉唑加杂质混合溶液作为各杂质定位溶液，考察杂质与主峰保留时间、分离度及各峰理论板数的相关数据，见表2。

表2专属性验证结果

由表2和图1可以看出，各杂质峰之间、奥美拉唑主峰及其相邻杂质峰之间的分离度均大于1.5，峰纯度均较好，通过与对比例1、2、3、4对比，本发明专属性结果最优。其中杂质F、杂质G两者对照品均为异构体混合物，色谱图显示为重叠的双峰。在本发明中将对两个异构体杂质共同控制限度，进行了杂质F、G响应因子对比试验。

杂质F、杂质G互为同分异构，在检测过程中两个杂质在同一位置出现重叠的双峰，通过对等量杂质F、杂质G进样考察，计算两个杂质的响应因子，计算结果见表3。

表3杂质F、G响应因子数据

杂质F、G响应一致，在误差允许范围之内(0.98-1.02)，仅以杂质F进行校正因子的验证。

(3)奥美拉唑和各杂质的检测限、定量限

取奥美拉唑加杂质混合溶液20μL进样，检测限评价标准以信噪比(S/N)≈3、定量限评价标准以信噪比(S/N)≈10，分别作为检测限和定量限。结果测得各杂质及奥美拉唑的检测限和定量限，如表4所示。

表4各杂质检测限、定量限

由表4统计数值可以看出，采用本发明的检测方法，奥美拉唑和各杂质检测灵敏度均较高，其检测限和定量限均较小，充分验证了本发明的检测灵敏度高。

(4)奥美拉唑和各杂质的线性范围

分别精密称取杂质对照品(杂质A、B、C、D、E、F、H、I)以及奥美拉唑对照品约1mg，置10ml量瓶中，加溶剂2(甲醇-水70:30)溶解并稀释至刻度，摇匀，过滤，精密量取10ml置100ml量瓶中，加溶剂2制成浓度分别约为10μg/ml的溶液作为对照品线性储备液，分别取上述储备液1.5ml、2.0ml、4.5ml、2.0ml、5.5ml、3ml、3ml分别于量瓶25ml、25ml、50ml、20ml、50ml、25ml、20ml中用溶剂2(甲醇-水70：30)稀释至刻度，作为线性溶液，用上述各杂质溶液照定量限浓度制备定量限混合溶液，用溶剂2(甲醇-水70：30)定容至刻度，摇匀，得到一系列浓度的溶液；精密吸取上述系列梯度浓度溶液各20μl从定量限到高浓度依次进样分析，记录色谱图，以杂质对照品溶液浓度C(μg/ml)为横坐标，杂质对照品峰面积为纵坐标，进行线性回归并求出回归方程，试验结果见表5。

表5各杂质线性范围

由表5可见，奥美拉唑和各杂质线性范围与各杂质在较低浓度范围内线性关系良好。

(5)奥美拉唑和各杂质的溶液稳定性

在常温下，样品溶液在14小时内主药峰面积和归一化含量RSD小于2.0％，样品溶液中的已知杂质与未知杂质检出量比较小，杂质E检出含量均为0.03％，杂质D检出含量均为0.03％,未知杂质检出含量均在0.02％～0.03％之间波动，未见明显变化，经过14小时后未见其他杂质检出，考察结果表明：样品溶液稳定性良好。

(6)奥美拉唑和各杂质的准确度

取奥美拉唑干混悬剂约2.9g(相当于奥美拉唑10mg)，置25ml量瓶中，加溶剂1(甲醇)溶解超声处理5分钟后稀释至刻度，滤过，精密量取5ml上述溶液至10ml量瓶中加溶剂2(甲醇-水70：30)稀释至刻度，摇匀；制成每1ml中含奥美拉唑0.2mg的供试品溶液。作为本底溶液，另精密量取各杂质对照品，配制成浓度为10μg/ml的混合杂质母液，精密称取9份奥美拉唑干混悬剂约2.9g(相当于奥美拉唑10mg)，置25ml量瓶中，加溶剂1(甲醇)溶解超声处理5分钟后稀释至刻度，滤过，精密量取10ml上述溶液至20ml量瓶中，分别加入10μg/ml的杂质母液1.6ml三份，2.0ml三份，2.4ml三份后，加溶剂2(甲醇-水70：30)稀释至刻度，摇匀；分别作为杂质限度的80％、100％、120％，三个水平的平均回收率(n＝9)供试品溶液(限度按0.5％计)；另精密称取杂质(杂质A、B、C、D、E、F、H、I)对照品适量，加溶液稀释配制成浓度均为1μg/ml的对照品混合溶液。精密量取上述两种溶液各20μl分别注入液相色谱仪，进行回收率测定，结果见表6。

表6奥美拉唑各杂质回收率结果

试验	回收率	回收率
			杂质A	98.3％-102.2％	1.27
杂质B	99.7％-103.6％	1.24
			杂质C	99.6％-104.6％	1.95
杂质D	97.9％-102.7％	1.87
			杂质E	98.9％-102.9％	1.19
杂质F\G	89.3％-105.9％	5.93
			杂质H	97.3％-103.2％	1.67
杂质I	99.8％-102.9％	1.02

由表6可以看出，各个杂质回收率均在90％-108％之间，RSD≤10.0％，符合回收率试验要求；所用HPLC方法适用于本品有关物质测定。

(7)对各杂质进行校正因子试验

取杂质(杂质A、B、C、D、E、F、H、I)对照品及奥美拉唑对照品，在限量浓度(0.5％)的60％～150％内共制备6份样品，以浓度为横坐标，峰面积为纵坐标，进行线性回归并求出各杂质的标准曲线和奥美拉唑的标准曲线；奥美拉唑的标准曲线K值与各杂质的标准曲线K值之比，即为校正因子。采用不同人员、不同色谱柱和不同仪器进行测定，测定结果见表7。

表7校正因子(f)测定结果

由表7可以看出，经上校正因子试验，结果表明各杂质D与杂质B在0.9～1.1之间，故不带入校正因子计算；其余杂质按照上表得出的校正因子带入计算；本发明的校正因子检测运用两台不同高效液相色谱仪，三根色谱柱，对杂质含量加校正因子自身对照计算结果提供了科学、有效地依据。

实施例2：

效液相色谱条件：

色谱柱为辛烷基硅烷键合硅胶柱，以0.01mol/L磷酸氢二钠溶液(用磷酸调节pH值至7.6)为流动相A，以乙腈为流动相B进行梯度洗脱，检测波长为300nm，柱温40℃。

梯度洗脱过程为：(1)0-30分钟内，流动相A和流动相B的体积比从90:10匀速渐变至45:55；(2)在30-40分钟内，流动相A和流动相B的体积比保持45:55等度洗脱；(3)40-41分钟内，流动相A和流动相B的体积比从45:55匀速渐变至90:10；(4)41-50分钟内，流动相A和流动相B的体积比保持90:10不变。

样品配制：

奥美拉唑加杂质混合溶液：取奥美拉唑对照品、杂质A、B、C、D、E、F、G、H、I对照品约1mg，置100ml量瓶中，加溶剂2(甲醇-水70:30)溶解并稀释至刻度，摇匀，精密量取1ml置10ml量瓶中，加溶剂2制成每1ml中分别含有1μg上述对照品的混合溶液。

供试品溶液：取本品适量(约相当于奥美拉唑10mg)，置25ml量瓶中，加溶剂1(甲醇)溶解并稀释至刻度，摇匀，过滤，精密量取5ml置10ml量瓶中，加溶剂2(甲醇-水70:30)稀释至刻度，摇匀，即得。

试验操作：取上述溶液20μl进样，记录色谱图。

本例将波长调整300nm，考察奥美拉唑中杂质分离度及响应。结果发现，各个杂质与奥美拉唑分离度良好，检测效果同实施例1。

实施例3：

效液相色谱条件：

色谱柱为辛烷基硅烷键合硅胶柱，以0.01mol/L磷酸氢二钠溶液(用磷酸调节pH值至7.6)为流动相A，以乙腈为流动相B进行梯度洗脱，检测波长为310nm，柱温40℃。

梯度洗脱过程为：(1)0-30分钟内，流动相A和流动相B的体积比从90:10匀速渐变至45:55；(2)在30-40分钟内，流动相A和流动相B的体积比保持45:55等度洗脱；(3)40-41分钟内，流动相A和流动相B的体积比从45:55匀速渐变至90:10；(4)41-50分钟内，流动相A和流动相B的体积比保持90:10不变。

样品配制：

奥美拉唑加杂质混合溶液：取奥美拉唑对照品、杂质A、B、C、D、E、F、G、H、I对照品约1mg，置100ml量瓶中，加溶剂2(甲醇-水70:30)溶解并稀释至刻度，摇匀，精密量取1ml置10ml量瓶中，加溶剂2制成每1ml中分别含有1μg上述对照品的混合溶液。

供试品溶液：取本品适量(约相当于奥美拉唑10mg)，置25ml量瓶中，加溶剂1(甲醇)溶解并稀释至刻度，摇匀，过滤，精密量取5ml置10ml量瓶中，加溶剂2(甲醇-水70:30)稀释至刻度，摇匀，即得。

试验操作：取上述溶液20μl进样，记录色谱图。

本例将波长调整310nm，考察奥美拉唑中杂质分离度及响应。结果发现，各个杂质与奥美拉唑分离度良好，检测效果同实施例1。

综上所述，波长在300nm～310nm范围内，检测效果良好。

实施例4：

效液相色谱条件：

色谱柱为辛烷基硅烷键合硅胶柱，以0.01mol/L磷酸氢二钠溶液(用磷酸调节pH值至7.8)为流动相A，以乙腈为流动相B进行梯度洗脱，检测波长为305nm，柱温40℃。

梯度洗脱过程为：(1)0-30分钟内，流动相A和流动相B的体积比从90:10匀速渐变至45:55；(2)在30-40分钟内，流动相A和流动相B的体积比保持45:55等度洗脱；(3)40-41分钟内，流动相A和流动相B的体积比从45:55匀速渐变至90:10；(4)41-50分钟内，流动相A和流动相B的体积比保持90:10不变。

样品配制：

奥美拉唑加杂质混合溶液：取奥美拉唑对照品、杂质A、B、C、D、E、F、G、H、I对照品约1mg，置100ml量瓶中，加溶剂2(甲醇-水70:30)溶解并稀释至刻度，摇匀，精密量取5ml置量瓶中，加溶剂2制成每1ml中分别含有1μg上述对照品的混合溶液。

供试品溶液：取本品适量(约相当于奥美拉唑10mg)，置25ml量瓶中，加溶剂1(甲醇)溶解并稀释至刻度，摇匀，过滤，精密量取5ml置10ml量瓶中，加溶剂2(甲醇-水70:30)稀释至刻度，摇匀，即得。

试验操作：取上述溶液20μl进样，记录色谱图。

本例将流动相pH调整7.8，考察奥美拉唑中杂质分离度及响应。结果发现，各个杂质与奥美拉唑分离度良好，检测效果同实施例1。

综上所述，流动相pH在7.6～7.8范围内，检测效果良好。

对比例1：中国药典条件

高效液相色谱条件：

色谱柱为以辛烷基硅烷键合硅胶柱，以0.01mol/L磷酸氢二钠溶液(用磷酸调节pH值至7.6)-乙腈(75:25)等度，检测波长为280nm，流速：1.0ml/min，进样量：20μl。图谱保留至3倍保留时间。

样品配制：

奥美拉唑加杂质混合溶液：分别取杂质A、杂质B、杂质C、杂质D、杂质E、杂质F、杂质G、杂质H、杂质I适量以及奥美拉唑适量，精密称定，加溶剂(混合流动相)溶解并稀释制成每1ml中分别含有1μg上述对照品的混合溶液。

系统适用性溶液：分别取奥美拉唑对照品与杂质D适量，加溶剂(混合流动相)溶解并稀释制成每1ml中约含有1μg的对照品。

供试品溶液：取本品适量(约相当于奥美拉唑10mg)，置25ml量瓶中，加溶剂(混合流动相)稀释至刻度，摇匀，即得。

试验操作：

取奥美拉唑加杂质混合溶液20μl进样，记录色谱图。

对比例1为中国药典收载奥美拉唑肠溶胶囊有关物质检测方法，结果发现ChP奥美拉唑加混合杂质对照品溶液中奥美拉唑与7个杂质有响应(杂质A、I、E、D、B、H、C)。不能够将杂质F、杂质G有效检出，并且其余杂质的响应不高，存在杂质与杂质未有效分离的现象。对比本发明检测方法的分离度、灵敏度，不适用于奥美拉唑干混悬剂有关物质检测。

对比例2：美国药典条件

高效液相色谱条件：

色谱柱辛烷基硅烷键合硅胶为填充剂(4.6mm*15cm，5μm，C8)，以甘氨酸6.0g至1500ml水中，加50％氢氧化钠溶液调节pH至9.0，并用水稀释至2000ml，为流动相A；以乙腈：甲醇＝(85:15)为流动相B，进行梯度洗脱，检测波长：305nm；

梯度洗脱过程为：(1)0-20分钟，流动相A与流动相B体积比从88:12匀速变至40:60；(2)20-21分钟内，流动相A与流动相B体积比从40:60匀速变至88:12；(3)21-25分钟内，流动相A与流动相B体积比为88:12等度洗脱；

样品配制：

奥美拉唑加杂质混合溶液：分别取杂质A、杂质B、杂质C、杂质D、杂质E、杂质F、杂质G、杂质H、杂质I及奥美拉唑对照品适量，精密称定，加溶剂(pH11缓冲盐)溶解并稀释制成每1ml中分别含有1μg上述对照品的混合溶液。

试验操作：

取奥美拉唑加杂质混合溶液20μl进样，记录色谱图。

对比例2为美国药典(USP38)收载奥美拉唑肠溶胶囊有关物质检测方法。结果发现USP38奥美拉唑肠溶胶囊有关物质方法除了杂质F、杂质G未分离，其余杂质分离度度均大于2；USP38奥美拉唑肠溶胶囊有关物质方法中样品处理是在PH11缓冲盐体系下，并且加热55℃/30min处理将杂质F、杂质G转换为另外一个物质进行控制，考虑本品在制备过程中无加热处理以及不含有肠溶材料等因素，奥美拉唑干混悬剂不需要上述杂质转化处理。

对比例3：

高效液相色谱条件：

色谱柱为辛烷基硅烷键合硅胶柱，以0.01mol/L磷酸氢二钠溶液(用磷酸调节pH值至7.6)为流动相A，以乙腈为流动相B进行梯度洗脱，检测波长为305nm,柱温40℃。

梯度洗脱过程为：(1)0-30分钟内，流动相A和流动相B的体积比从90:10匀速渐变至70:30；(2)30-40分钟内，流动相A和流动相B的体积比70:30等度洗脱；(3)40-41分钟内，流动相A和流动相B的体积比从70:30匀速渐变至90:10；(4)41-50分钟内，流动相A和流动相B的体积比保持90:10不变。

样品配制：

奥美拉唑加杂质混合溶液：分别取杂质A、B、C、D、E、F、G、H、I以及奥美拉唑对照品加混合流动相(流动相A与流动相B体积比为70:30)制成每1ml中分别含有1μg上述对照品的混合溶液。

试验操作：

取奥美拉唑加杂质混合溶液20μl进样，记录色谱图。

结果发现，在此梯度下杂质与主成分奥美拉唑未达到有效分离,并且试验过程中发现已过滤的样品通过放置等待进样时，仪器色谱柱压力逐渐升高。经过试验研究，发现放置的样品再次过滤困难，经过分析，奥美拉唑干混悬剂辅料中含有黄原胶，在高比例水中快速溶解，但是完成水膨胀称胶团，阻挡了水分进入里层，导致过滤后的样品放置黄原胶继续膨胀，导致进入液相的溶液大于0.45μm，发生仪器压力升高，色谱柱损坏。

对比例4：

高效液相色谱条件：

色谱柱为辛烷基硅烷键合硅胶柱，以0.01mol/L磷酸氢二钠溶液(用磷酸调节pH值至2.9)为流动相A，以乙腈为流动相B进行梯度洗脱，检测波长为305nm，柱温40℃。

梯度洗脱过程为：(1)0-30分钟内，流动相A和流动相B的体积比从90:10匀速渐变至45:55；(2)在30-40分钟内，流动相A和流动相B的体积比保持45:55等度洗脱；(3)40-41分钟内，流动相A和流动相B的体积比从45:55匀速渐变至90:10；(4)41-50分钟内，流动相A和流动相B的体积比保持90:10不变。

样品配制：

奥美拉唑加杂质混合溶液：分别取杂质A、B、C、D、E、F、G、H、I以及奥美拉唑对照品，精密称定，加溶剂2(甲醇-水70:30)制成每1ml中分别含有1μg上述对照品的混合溶液。

供试品溶液：取本品适量(约相当于奥美拉唑10mg)，置25ml量瓶中，加溶剂1(甲醇)溶解并稀释至刻度，摇匀，过滤，精密量取5ml置10ml量瓶中，加溶剂2(甲醇-水70:30)稀释至刻度，摇匀，即得。

试验操作：取上述溶液20μl进样，记录色谱图。

结果发现，杂质B与杂质D完全重合，无法达到有效分离。其次，供试品溶液进行优化，选择溶剂1甲醇去除黄原胶后再用甲醇与水混合溶剂2稀释至所需浓度，实验发现，仪器柱压得到了有效控制。

本发明检测出的杂质多，能快速、有效、准确监控奥美拉唑干混悬剂中的有关物质；本发明具有良好的专属性、各杂质之间、奥美拉唑及其相邻杂质峰之间的分离度均大于1.5，杂质和主峰可以有效分离；本发明极性较小的杂质，通过采用梯度洗脱程序，提高了检测限、定量限，本发明的灵敏度高；回收率高，可以准确测量奥美拉唑中的有关物质，通过严谨的校正因子计算，为计算结果提供支持依据；本发明可以准确累积数据观察稳定性考察中各杂质的转换趋势。

以上所述，仅为本发明较佳的具体实施方式，但本发明的保护范围并不局限于此，任何熟悉本技术领域的技术人员在本发明揭露的技术范围内，根据本发明的技术方案及其发明构思加以等同替换或改变，都应涵盖在本发明保护范围之内。

Claims (10)

1.一种奥美拉唑干混悬剂中有关物质的检测方法，其特征在于，该检测方法采用高效液相色谱法，其色谱条件包括：色谱柱采用辛烷基硅烷键合硅胶；采用流动相A和流动相B为混合流动相进行梯度洗脱；所述流动相A采用磷酸氢二钠溶液；所述流动相B采用乙腈；溶解样品包括如下步骤，以溶剂1溶解样品后，再以溶剂2溶解；所述溶剂1采用甲醇；所述溶剂2采用甲醇和水的混合溶剂。

2.根据权利要求1所述的奥美拉唑干混悬剂中有关物质的检测方法，其特征在于，所述梯度洗脱包括以下步骤：(1)所述梯度在：0-30分钟内，流动相A和流动相B的体积比从90:10匀速渐变至45:55；(2)在30-40分钟内，流动相A和流动相B的体积比保持45:55等度洗脱；(3)40-41分钟内，流动相A和流动相B的体积比从45:55匀速渐变至90:10；(4)41-50分钟内，流动相A和流动相B的体积比保持90:10不变。

3.根据权利要求1所述的奥美拉唑干混悬剂中有关物质的检测方法，其特征在于，所述溶剂2中甲醇和水的体积比为60～80:40～20。

4.根据权利要求1所述的奥美拉唑干混悬剂中有关物质的检测方法，其特征在于，所述溶剂2中甲醇和水的体积比为70:30。

5.根据权利要求1所述的奥美拉唑干混悬剂中有关物质的检测方法，其特征在于，所述流动相A的制备包括以下步骤：将磷酸氢二钠配制成浓度为0.01mol/L的溶液，再用磷酸调节pH值至7.4-7.9，即得。

6.根据权利要求5所述的奥美拉唑干混悬剂中有关物质的检测方法，其特征在于，所述流动相A的制备包括以下步骤：将磷酸氢二钠配制成浓度为0.01mol/L的溶液，再用磷酸调节pH值至7.6-7.8，即得。

7.根据权利要求1～6中任一项所述的奥美拉唑干混悬剂中有关物质的检测方法，其特征在于，所述色谱条件包括：所述色谱柱的长度为150mm，直径为4.6mm，填料粒径为5μm。

8.根据权利要求1～6中任一项所述的奥美拉唑干混悬剂中有关物质的检测方法，其特征在于，所述色谱条件包括：检测器的检测波长为300-310nm；优选为305nm；柱温为40℃。

9.根据权利要求1～6中任一项所述的奥美拉唑干混悬剂中有关物质的检测方法，其特征在于，所述色谱条件包括：进样量为20μl。

10.根据权利要求1所述的奥美拉唑干混悬剂中有关物质的检测方法，其特征在于，所述有关物质包括以下物质：