CN108918627A - 一种基于MOFs材料竞争型电化学免疫传感器的制备方法及应用 - Google Patents

一种基于MOFs材料竞争型电化学免疫传感器的制备方法及应用 Download PDF

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Abstract

本发明涉及一种竞争型免疫传感器的制备与应用，具体说是一种以UiO‑66，金纳米粒子（UiO‑66/Au）的复合材料为传感平台，以NH2‑MIL‑125为标记物的竞争型免疫传感器，本发明属于新型功能材料、生物传感技术领域。UiO‑66/Au具有优异的导电性，大的比表面积，可以有效促进电子传递过程，起到放大电流信号，提高传感器灵敏度的作用。并且利用一锅法合成了NH2‑MIL‑125，NH2‑MIL‑125拥有较大的空间位阻从而可以阻碍电子传递，使电流信号降低，从而增加电流信号变化值，使得传感器可利用电化学信号变化来检测目标的含量，显著提高免疫传感器的稳定性和灵敏度，扩大检出范围，降低检出限。

Description

一种基于MOFs材料竞争型电化学免疫传感器的制备方法及 应用
技术领域
本发明涉及一种电化学免疫传感器的制备与应用，具体说是一种以UiO-66/Au为传感平台，以NH2-MIL-125为共轭标记物的竞争型免疫传感器，本发明属于新型功能材料、生物传感技术领域。
背景技术
癌胚抗原（CEA）是属于肿瘤细胞表面结构的抗原[6]，它形成于细胞浆中，可以通过细胞膜渗透到细胞外进入周围体液中，因此可以在多种体液中检出。CEA作为最常见的一种肿瘤标记物，以及被广泛用作各种消化系肿瘤的诊断及监测中，在生物体中凡是内胚层产生的恶性肿瘤如结肠、直肠、食道、胃、肝和胰腺等的癌肿病人的血清中均有CEA存在，并含量明显的高于非肿瘤的病人，因此CEA的检测至关重要。不仅如此，CEA对治疗效果的观察上同样有着不可忽略的作用。所以CEA在临床中对于肿瘤疾病的诊断、治疗效果的判定和预后情况，都有非常重要的临床意义。
电化学免疫传感器是将免疫技术与电化学传感技术相结合，同时具有高灵敏性、高选择性、高专一性和检出限低等优点。
金属有机骨架材料（MOFs）是指由金属离子或金属簇与有机配体组装而来的一种多孔材料，选择不同的金属或者不同性质的有机配体可以改变MOFs的结构，从而使得MOFs具有结构多样化，功能可调和比表面积大等优点；UiO系列材料是以Zr基通过有机配体连接而成重现立方体结构的的具有12配位的MOFs材料，且是为数不多的具有优异导电性的MOFs材料之一；除此之外UiO-66还具有比表面积大，化学稳定性和热稳定高等优点，通过原位还原的方法结合大量金纳米粒子（Au）。Au不仅拥有良好的电子转移性能而且可以与抗体通过Au-NH2结合；因此将具有优良导电性和生物相容性的UiO-66与Au（UiO-66/Au）作为传感平台，显著提高了传感器的灵敏度。
与UiO系列不同，MILs系列虽然也具有较大的孔径和比表面积，但是MILs的电子转移能力差，不利于电子传递。因此该发明利用一锅法合成NH2-MIL-125，形成共轭体系，阻碍电子传递，增加电流信号值的变化，而且NH2-MIL-125具有丰富的NH2基团可以连接抗原抗体，从而增加传感器的灵敏度，降低检出限，扩大检测范围。
发明内容
本发明的目的之一是制备一种以UiO-66/Au为传感平台，以NH2-MIL-125为标记物的竞争型免疫传感器。
本发明的目的之二是将该传感器用于CEA的高灵敏、特异性检测。
本发明的技术方案如下：
1.一种基于MOFs材料竞争型免疫传感器制备方法如下：
（1）将玻碳电极用抛光粉打磨，再使用去离子水清洗，将电极置于5 mmol/L 铁氰化钾溶液中，并在 -0.2~0.6 V 电位下进行扫描，使峰电位的差值小于110 mV；
（2）将6 μL，1~2 mg/mL UiO-66/Au纳米复合物溶液滴加在电极上，室温下干燥；
（3）将6 μL，10~20 μg/mL CEA的抗体滴加在电极上，室温下干燥之后，用PBS清洗，除去多余抗体，室温下干燥；
（4）将3 μL，质量分数为1~2 % BSA溶液滴加于电极上，用以封闭非特异性结合位点，干燥之后使用PBS洗去多余BSA；
（5）将6 μL不同浓度的CEA滴加到电极上，室温下干燥并用PBS洗涤；
（6）将6 μL，被NH2-MIL-125（1~2 mg/mL）标记的CEA的混合溶液滴加于电极上，室温下干燥后用PBS洗去多余的抗原，室温下干燥，竞争型免疫传感器的制备完成。
2.一种基于MOFs材料竞争型免疫传感器的UiO-66/Au复合材料的制备步骤如下：
（1）UiO-66的制备
将1~2 g四氯化锆和1~2g对苯二甲酸和10~20 mL盐酸超声溶解于100 mL的N，N-二甲基甲酰胺（DMF），然后转移至高压釜，在120 ℃下反应12~24 h，反应结束后，将所得到的混合物在9000 r/min离心10 min，用DMF和甲醇分别洗涤三次，弃去上清液，将离心管放入60 oC真空干燥箱干燥，最后经过研磨得到白色固体粉末UiO-66；
（2）UiO-66/Au的制备
称取0.1~0.2 g UiO-66在室温下超声分散于10~20 mL甲醇中，得到白色均匀乳浊液，加入0.3~0.4 mL氯金酸混合，在室温下搅拌5 h得到黄色乳浊液，称取0.06~0.07 g硼氢化钠超声溶解于10~20 mL甲醇后，逐滴加入到上述黄色乳浊液后迅速变为红棕色，此时Au3+被还原为Au，继续搅拌2 h，将所得到的混合物用9000 r/min离心5 min并用乙醇洗涤3次，将离心管放入60 ℃真空干燥箱干燥12 h，最后经过研磨得到UiO-66/Au。
3.一种基于MOFs材料竞争型免疫传感器的抗原标记物NH2-MIL-125-CEA制备步骤如下：
（1）NH2-MIL-125的制备
将0. 7~0. 9 g 2-氨基对苯二甲酸溶于DMF和乙醇混合溶剂( VDMF:V乙醇= 5：5 )中。然后将0. 5~1.0 mL钛酸异丙酯加入到溶液中。通过超声波震荡10分钟搅拌后，将混合物转移到25 mL高压釜中，并在静态条件下置于150 ℃的烘箱中24 h，反应后，通过离心收集产物并用DMF和乙醇洗涤数次，然后在60 oC下干燥过夜；
（2）NH2-MIL-125-CEA的制备
将上述NH2-MIL-125取2~4 mg溶解在1~2 mL PBS缓冲液中并加入0.5 mL NHS和0.5 mLEDC，之后再加入1~2 mL CEA，在低温环境中将溶液振荡12 h以上，然后在4 oC下离心，除去上清液，将所得沉淀用PBS缓冲液离心洗涤，最后加入1~2 mL PBS缓冲液使沉淀溶解，得到NH2-MIL-125-CEA。
4.CEA的检验，步骤如下：
（1）使用电化学工作站以三电极体系进行测试，饱和甘汞电极为参比电极，铂丝电极为辅助电极，所制备的电化学免疫传感器为工作电极；
（2）使用方波伏安法，在15 mL、40~60 mmol/L、6.0~8.0 pH的铁氰化钾的PBS缓冲溶液中进行检测，输入电压为 -0.2~0.6 V，灵敏度为10-4，扫描速度为50 mV/s，绘制工作曲线；
（4）将待测样品溶液代替CEA抗原的标准溶液进行检测。
本发明的有益成果
（1）本发明将Au负载在UiO-66上，提高了传感器的导电性，而且Au与抗体形成Au-NH2键从而将抗体固定在电极表面，提高了抗体的结合率。
（2）本发明以NH2-MIL-125为标记物，阻碍电子传递，增大电流信号值的变化，显著地提高了传感器的灵敏度，降低了传感器的检出限。
（3）本发明利用抗原、抗体的免疫反应，提高了检测方法的特异性。
（4）本发明制备的双信号竞争型免疫传感器利用UiO-66/Au传感平台的导电性和NH2-MIL-125高的空间位阻进行CEA含量的检测，具有检测线低、线性范围宽、灵敏度高、操作简单、响应时间短，特异性检验等特点，对CEA的检测限可达0.34pg/mL。
具体实施方式
实施例1 一种基于MOFs材料竞争型免疫传感器的UiO-66/Au复合材料的制备步骤如下：
（1）UiO-66的制备
将1.25 g四氯化锆和1.23 g对苯二甲酸和10 mL盐酸超声溶解于100 mL的DMF，然后转移至高压釜，在120 ℃下反应24 h，反应结束后，将所得到的混合物在9000 r/min离心10min，用DMF和甲醇分别洗涤三次，弃去上清液，将离心管放入60 oC真空干燥箱干燥，最后经过研磨得到白色固体粉末UiO-66；
（2）UiO-66/Au的制备
称取0.1 g UiO-66在室温下超声分散于10 mL甲醇中，得到白色均匀乳浊液，加入0.3mL氯金酸混合，在室温下搅拌5 h得到黄色乳浊液，称取0.07 g硼氢化钠超声溶解于10 mL甲醇后，逐滴加入到上述黄色乳浊液后迅速变为红棕色，此时Au3+被还原为Au，继续搅拌2h，将所得到的混合物用9000 r/min离心5 min并用乙醇洗涤3次，将离心管放入60 ℃真空干燥箱干燥12 h，最后经过研磨得到UiO-66/Au。
实施例2 一种基于MOFs材料竞争型免疫传感器的UiO-66/Au复合材料的制备步骤如下：
（1）UiO-66的制备
将1.5 g四氯化锆和2.0 g对苯二甲酸和15 mL盐酸超声溶解于100 mL的DMF，然后转移至高压釜，在120 ℃下反应24 h，反应结束后，将所得到的混合物在9000 r/min离心10min，用DMF和甲醇分别洗涤三次，弃去上清液，将离心管放入60 oC真空干燥箱干燥，最后经过研磨得到白色固体粉末UiO-66；
（2）UiO-66/Au的制备
称取0.15 g UiO-66在室温下超声分散于10 mL甲醇中，得到白色均匀乳浊液，加入0.35 mL氯金酸混合，在室温下搅拌5 h得到黄色乳浊液，称取0.06 g硼氢化钠超声溶解于10 mL甲醇后，逐滴加入到上述黄色乳浊液后迅速变为红棕色，此时Au3+被还原为Au，继续搅拌2 h，将所得到的混合物用9000 r/min离心5 min并用乙醇洗涤3次，将离心管放入60 ℃真空干燥箱干燥12 h，最后经过研磨得到UiO-66/Au。
实施例3 一种基于MOFs材料竞争型免疫传感器的UiO-66/Au复合材料的制备步骤如下：
（1）UiO-66的制备
将1.5 g四氯化锆和1.0 g对苯二甲酸和20 mL盐酸超声溶解于100 mL的DMF，然后转移至高压釜，在120 ℃下反应12 h，反应结束后，将所得到的混合物在9000 r/min离心10min，用DMF和甲醇分别洗涤三次，弃去上清液，将离心管放入60 oC真空干燥箱干燥，最后经过研磨得到白色固体粉末UiO-66；
（2）UiO-66/Au的制备
称取0.2 g UiO-66在室温下超声分散于10 mL甲醇中，得到白色均匀乳浊液，加入0.4mL氯金酸混合，在室温下搅拌5 h得到黄色乳浊液，称取0.065 g硼氢化钠超声溶解于10 mL甲醇后，逐滴加入到上述黄色乳浊液后迅速变为红棕色，此时Au3+被还原为Au，继续搅拌2h，将所得到的混合物用9000 r/min离心5 min并用乙醇洗涤3次，将离心管放入60 ℃真空干燥箱干燥12 h，最后经过研磨得到UiO-66/Au。
实施例4 一种基于MOFs材料竞争型免疫传感器的抗原标记物NH2-MIL-125-CEA制备步骤如下：
（1）NH2-MIL-125的制备
将0.7 g 2-氨基对苯二甲酸溶于DMF和乙醇混合溶剂( VDMF:V乙醇= 5：5 )中。然后将0.75 mL钛酸异丙酯加入到溶液中，通过超声波震荡10分钟搅拌后，将混合物转移到25 mL高压釜中，并在静态条件下置于150 ℃的烘箱中24 h，反应后，通过离心收集产物并用DMF和乙醇洗涤数次，然后在60 oC下干燥过夜；
（2）NH2-MIL-125-CEA的制备
将上述NH2-MIL-125取2 mg溶解在1 mL PBS缓冲液中并加入0.5 mL NHS和0.5 mLEDC，之后再加入2 mL CEA，在低温环境中将溶液振荡12 h以上，然后在4 oC下离心，除去上清液，将所得沉淀用PBS缓冲液离心洗涤，最后加入1 mL PBS缓冲液使沉淀溶解，得到NH2-MIL-125-CEA。
实施例5 一种基于MOFs材料竞争型免疫传感器的抗原标记物NH2-MIL-125-CEA制备步骤如下：
（1）NH2-MIL-125的制备
将0.9 g 2-氨基对苯二甲酸溶于DMF和乙醇混合溶剂( VDMF:V乙醇= 5：5 )中。然后将1.0mL钛酸异丙酯加入到溶液中，通过超声波震荡10分钟搅拌后，将混合物转移到25 mL高压釜中，并在静态条件下置于150 ℃的烘箱中24 h，反应后，通过离心收集产物并用DMF和乙醇洗涤数次，然后在60 oC下干燥过夜；
（2）NH2-MIL-125-CEA的制备
将上述NH2-MIL-125取4 mg溶解在1 mL PBS缓冲液中并加入0.5 mL NHS和0.5 mLEDC，之后再加入1 mL CEA，在低温环境中将溶液振荡12 h以上，然后在4 oC下离心，除去上清液，将所得沉淀用PBS缓冲液离心洗涤，最后加入1 mL PBS缓冲液使沉淀溶解，得到NH2-MIL-125-CEA。
实施例6 一种基于MOFs材料竞争型免疫传感器的抗原标记物NH2-MIL-125-CEA制备步骤如下：
（1）NH2-MIL-125的制备
将0.8 g 2-氨基对苯二甲酸溶于DMF和乙醇混合溶剂( VDMF:V乙醇= 5：5 )中。然后将0.8mL钛酸异丙酯加入到溶液中。通过超声波震荡10分钟搅拌后，将混合物转移到25 mL高压釜中，并在静态条件下置于150 ℃的烘箱中24 h，反应后，通过离心收集产物并用DMF和乙醇洗涤数次，然后在60 oC下干燥过夜；
（2）NH2-MIL-125-CEA的制备
将上述NH2-MIL-125取2 mg溶解在1 mL PBS缓冲液中并加入0.5 mL NHS和0.5 mLEDC，之后再加入2 mL CEA，在低温环境中将溶液振荡12 h以上，然后在4 oC下离心，除去上清液，将所得沉淀用PBS缓冲液离心洗涤，最后加入1 mL PBS缓冲液使沉淀溶解，得到NH2-MIL-125-CEA。
实施例7 一种基于MOFs材料竞争型免疫传感器制备方法：
（1）将玻碳电极用抛光粉打磨，再使用去离子水清洗，将电极置于5 mmol/L 铁氰化钾溶液中，并在 -0.2~0.6 V 电位下进行扫描，使峰电位的差值小于110 mV；
（2）将6 μL， 2 mg/mL UiO-66/Au纳米复合物溶液滴加在电极上，室温下干燥；
（3）将6 μL，10 μg/mL CEA的抗体滴加在电极上，室温下干燥之后，用PBS清洗，除去多余抗体，室温下干燥；
（4）将3 μL，质量分数为1 % BSA溶液滴加于电极上，用以封闭非特异性结合位点，干燥之后使用PBS洗去多余BSA；
（5）将6 μL不同浓度的CEA滴加到电极上，室温下干燥并用PBS洗涤；
（6）将6 μL，被NH2-MIL-125（2 mg/mL）标记的CEA的混合溶液滴加于电极上，室温下干燥后用PBS洗去多余的抗原，室温下干燥，竞争型免疫传感器的制备完成。
实施例8一种基于MOFs材料竞争型免疫传感器制备方法：
（1）将玻碳电极用抛光粉打磨，再使用去离子水清洗，将电极置于5 mmol/L 铁氰化钾溶液中，并在 -0.2~0.6 V 电位下进行扫描，使峰电位的差值小于110 mV；
（2）将6 μL，1 mg/mL UiO-66/Au纳米复合物溶液滴加在电极上，室温下干燥；
（3）将6 μL，20 μg/mL CEA的抗体滴加在电极上，室温下干燥之后，用PBS清洗，除去多余抗体，室温下干燥；
（4）将3 μL，质量分数为2 % BSA溶液滴加于电极上，用以封闭非特异性结合位点，干燥之后使用PBS洗去多余BSA；
（5）将6 μL不同浓度的CEA滴加到电极上，室温下干燥并用PBS洗涤；
（6）将6 μL，被NH2-MIL-125（1.5 mg/mL）标记的CEA的混合溶液滴加于电极上，室温下干燥后用PBS洗去多余的抗原，室温下干燥，竞争型免疫传感器的制备完成。
实施例9 一种基于MOFs材料竞争型免疫传感器制备方法：
（1）将玻碳电极用抛光粉打磨，再使用去离子水清洗，将电极置于5 mmol/L 铁氰化钾溶液中，并在 -0.2~0.6 V 电位下进行扫描，使峰电位的差值小于110 mV；
（2）将6 μL，1.5 mg/mL UiO-66/Au纳米复合物溶液滴加在电极上，室温下干燥；
（3）将6 μL，15 μg/mL CEA的抗体滴加在电极上，室温下干燥之后，用PBS清洗，除去多余抗体，室温下干燥；
（4）将3 μL，质量分数为1 % BSA溶液滴加于电极上，用以封闭非特异性结合位点，干燥之后使用PBS洗去多余BSA；
（5）将6 μL不同浓度的CEA滴加到电极上，室温下干燥并用PBS洗涤；
（6）将6 μL，被NH2-MIL-125（1.5 mg/mL）标记的CEA的混合溶液滴加于电极上，室温下干燥后用PBS洗去多余的抗原，室温下干燥，竞争型免疫传感器的制备完成。
实施例10 CEA的检验，步骤如下：
（1）使用电化学工作站以三电极体系进行测试，饱和甘汞电极为参比电极，铂丝电极为辅助电极，所制备的电化学免疫传感器为工作电极；
（2）使用方波伏安法，在15 mL、40~60 mmol/L、6.0~8.0 pH的铁氰化钾的PBS缓冲溶液中进行检测，输入电压为-0.2~0.6 V，灵敏度为10-4，扫描速度为50 mV/s，绘制工作曲线；
（3）将待测样品溶液代替CEA抗原的标准溶液进行检测；
（4）CEA检测的线性范围是10-3~100ng/mL，检测限是0.34 pg/mL。

Claims (4)

1.一种基于MOFs材料竞争型免疫传感器的制备方法及应用，其特征在于，包括以下步骤：
（1）将玻碳电极用抛光粉打磨，再使用去离子水清洗，将电极置于5 mmol/L 铁氰化钾溶液中，并在 -0.2~0.6 V 电位下进行扫描，使峰电位的差值小于110 mV；
（2）将6 μL，1~2 mg/mL UiO-66/Au纳米复合物溶液滴加在电极上，室温下干燥；
（3）将6 μL，10~20 μg/mL癌胚抗原（CEA）的抗体滴加在电极上，室温下干燥之后，用PBS清洗，除去多余抗体，室温下干燥；
（4）将3 μL，质量分数为1~2 % BSA溶液滴加于电极上，用以封闭非特异性结合位点，干燥之后使用PBS洗去多余BSA；
（5）将6 μL不同浓度的CEA滴加到电极上，室温下干燥并用PBS洗涤；
（6）将6 μL，被NH2-MIL-125（1~2 mg/mL）标记的CEA的混合溶液滴加于电极上，室温下干燥后用PBS洗去多余的抗原，室温下干燥，竞争型免疫传感器的制备完成。
2.如权利1所述的一种基于MOFs材料竞争型免疫传感器的制备方法及应用，其所述的UiO-66/Au复合材料的制备步骤如下：
（1）UiO-66的制备
将1~2 g四氯化锆和1~2g对苯二甲酸和10~20 mL盐酸超声溶解于100 mL的N，N-二甲基甲酰胺（DMF），然后转移至高压釜，在120 ℃下反应12~24 h，反应结束后，将所得到的混合物在9000 r/min离心10 min，用N，N-二甲基甲酰胺和甲醇分别洗涤三次，弃去上清液，将离心管放入60 oC真空干燥箱干燥，最后经过研磨得到白色固体粉末UiO-66；
（2）UiO-66/Au的制备
称取0.1~0.2 g UiO-66在室温下超声分散于10~20 mL甲醇中，得到白色均匀乳浊液，加入0.3~0.4 mL氯金酸混合，在室温下搅拌5 h得到黄色乳浊液，称取0.06~0.07 g硼氢化钠超声溶解于10~20 mL甲醇后，逐滴加入到上述黄色乳浊液后迅速变为红棕色，此时Au3+被还原为Au，继续搅拌2 h，将所得到的混合物用9000 r/min离心5 min并用乙醇洗涤3次，将离心管放入60 ℃真空干燥箱干燥12 h，最后经过研磨得到UiO-66/Au。
3.如权利1所述的一种基于MOFs材料竞争型免疫传感器的制备方法及应用，其所述的抗原标记物NH2-MIL-125-CEA制备步骤如下：
（1）NH2-MIL-125的制备
将0.7~0.9 g 2-氨基对苯二甲酸溶于DMF和乙醇混合溶剂( VDMF:V乙醇= 5：5 )中；然后将0.5~1.0 mL钛酸异丙酯加入到溶液中，通过超声波震荡10分钟搅拌后，将混合物转移到25 mL高压釜中，并在静态条件下置于150 ℃的烘箱中24 h，反应后，通过离心收集产物并用DMF和乙醇洗涤数次，然后在60 oC下干燥过夜；
（2）NH2-MIL-125-CEA的制备
将上述NH2-MIL-125取2~4 mg溶解在1~2 mL PBS缓冲液中并加入0.5 mL NHS和0.5 mLEDC，之后再加入1~2 mL CEA，在低温环境中将溶液振荡12 h以上，然后在4 oC下离心，除去上清液，将所得沉淀用PBS缓冲液离心洗涤，最后加入1~2 mL PBS缓冲液使沉淀溶解，得到NH2-MIL-125-CEA。
4.如权利1所述一种基于MOFs材料竞争型免疫传感器的制备方法及应用，其特征在于，用于CEA的检验，检测步骤如下：
（1）使用电化学工作站以三电极体系进行测试，饱和甘汞电极为参比电极，铂丝电极为辅助电极，所制备的电化学免疫传感器为工作电极；
（2）使用方波伏安法，在15 mL、40~60 mmol/L、6.0~8.0 pH的铁氰化钾的PBS缓冲溶液中进行检测，输入电压为 -0.2~0.6 V，灵敏度为10-4，扫描速度为50 mV/s，绘制工作曲线；
（3）将待测样品溶液代替CEA的标准溶液进行检测。
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Cited By (14)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN109521006A (zh) * 2018-12-24 2019-03-26 济南大学 一种基于Au@NiFe MOFs的双猝灭竞争型电致化学发光传感器的制备方法及应用
CN109954517A (zh) * 2019-04-28 2019-07-02 大连民族大学 一种Au@NH2-MIL-125纳米酶催化剂及其制备方法
CN110095596A (zh) * 2019-05-28 2019-08-06 陕西师范大学 基于Fe-MOFs的化学发光-荧光双响应免疫传感器
CN110243895A (zh) * 2019-07-02 2019-09-17 济南大学 一种基于MnxCo1-xSe2-Pd的夹心型电化学免疫传感器的制备方法及应用
CN110412259A (zh) * 2019-08-28 2019-11-05 浙江理工大学 一种基于Au@Co-MOFs复合材料的电化学免疫传感器的构建方法
CN110501487A (zh) * 2019-09-08 2019-11-26 浙江理工大学 一种基于Au@Zn-MOFs复合材料的电化学免疫传感器的构建方法
CN111721826A (zh) * 2020-05-18 2020-09-29 济南大学 一种基于镧系金属自发光Eu-MOFs的竞争型免疫传感器的制备方法
CN112986348A (zh) * 2021-03-30 2021-06-18 济南大学 一种基于过渡金属硫化物的双模式电化学生物传感器的制备与应用
CN113092548A (zh) * 2021-04-16 2021-07-09 山西师范大学 一种基于Fe2TiO5纳米盘电极的葡萄糖光电传感器的制备方法
CN113155930A (zh) * 2021-05-29 2021-07-23 福建医科大学 一种多重信号放大技术检测白血病干细胞肿瘤标志物cd123的电化学免疫传感方法
CN113311043A (zh) * 2021-06-07 2021-08-27 江西农业大学 一种检测Pb2+和Hg2+的电化学传感器及其制备方法与应用
CN114163650A (zh) * 2020-09-11 2022-03-11 中国科学院大连化学物理研究所 金属有机骨架材料mil-125及其制备方法和应用
CN114813862A (zh) * 2021-11-12 2022-07-29 重庆大学 一种电化学生物传感器及其应用
CN117626533A (zh) * 2024-01-25 2024-03-01 石家庄铁道大学 Nh2-mil-125填充介电薄膜的制备方法

Citations (8)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US20110217217A1 (en) * 2009-09-10 2011-09-08 The Research Foundation Of The City University Of New York Nanocomposite Materials Comprising Metal-Organic-Framework Units and Graphite-Based Materials, and Methods of Using Same
WO2014125383A2 (en) * 2013-02-11 2014-08-21 The American University Of Cairo Chemosensors, compositions and uses thereof
CN106018806A (zh) * 2016-05-09 2016-10-12 山东理工大学 一种基于Au-Fe3O4@Pd-ZIF-8标记的夹心型免疫传感器的制备方法及应用
CN106324060A (zh) * 2016-11-01 2017-01-11 济南大学 一种基于AuNPs/Cu‑MOF标记的PCT电化学免疫传感器的制备方法及应用
CN106442686A (zh) * 2016-09-12 2017-02-22 济南大学 一种手性金属有机框架聚合物传感器及其制备方法和应用
CN107576702A (zh) * 2017-09-06 2018-01-12 重庆医科大学 一种用于血清中galectin‑3浓度检测的电化学传感器制备方法
CN108152260A (zh) * 2017-12-23 2018-06-12 福州大学 一种检测尿酸的荧光传感器及其制备方法
CN108318477A (zh) * 2018-02-05 2018-07-24 福建省妇幼保健院 基于TiO2金属有机框架制备的电致化学发光探针及其对呕吐毒素的竞争型免疫传感方法

Patent Citations (8)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US20110217217A1 (en) * 2009-09-10 2011-09-08 The Research Foundation Of The City University Of New York Nanocomposite Materials Comprising Metal-Organic-Framework Units and Graphite-Based Materials, and Methods of Using Same
WO2014125383A2 (en) * 2013-02-11 2014-08-21 The American University Of Cairo Chemosensors, compositions and uses thereof
CN106018806A (zh) * 2016-05-09 2016-10-12 山东理工大学 一种基于Au-Fe3O4@Pd-ZIF-8标记的夹心型免疫传感器的制备方法及应用
CN106442686A (zh) * 2016-09-12 2017-02-22 济南大学 一种手性金属有机框架聚合物传感器及其制备方法和应用
CN106324060A (zh) * 2016-11-01 2017-01-11 济南大学 一种基于AuNPs/Cu‑MOF标记的PCT电化学免疫传感器的制备方法及应用
CN107576702A (zh) * 2017-09-06 2018-01-12 重庆医科大学 一种用于血清中galectin‑3浓度检测的电化学传感器制备方法
CN108152260A (zh) * 2017-12-23 2018-06-12 福州大学 一种检测尿酸的荧光传感器及其制备方法
CN108318477A (zh) * 2018-02-05 2018-07-24 福建省妇幼保健院 基于TiO2金属有机框架制备的电致化学发光探针及其对呕吐毒素的竞争型免疫传感方法

Non-Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
WU TINGTING等: "A competitive photoelectrochemical immunosensor for the detection of diethylstilbestrol based on an Au/UiO-66(NH2)/CdS matrix and a direct Z-scheme Melem/CdTe heterojunction as labels", 《BIOSENSORS & BIOELECTRONICS》 *
ZHAO GUANHUI等: "Quenching Electrochemiluminescence Immunosensor Based on Resonance Energy Transfer between Ruthenium (II) Complex InCorporated in the UiO-67 Metal Organic Framework and Gold Nanoparticles for Insulin Detection", 《ACS APPLIED MATERIALS & INTERFACES》 *
ZHOU JINGRONG等: "A chemiluminescence metalloimmunoassay for sensitive detection of alpha-fetoprotein in human serum using Fe-MIL-88B-NH2 as a label", 《APPLIED SPECTROSCOPY REVIEWS》 *

Cited By (21)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN109521006B (zh) * 2018-12-24 2021-03-19 济南大学 一种基于Au@NiFe MOFs的双猝灭竞争型电致化学发光传感器的制备方法及应用
CN109521006A (zh) * 2018-12-24 2019-03-26 济南大学 一种基于Au@NiFe MOFs的双猝灭竞争型电致化学发光传感器的制备方法及应用
CN109954517A (zh) * 2019-04-28 2019-07-02 大连民族大学 一种Au@NH2-MIL-125纳米酶催化剂及其制备方法
CN110095596A (zh) * 2019-05-28 2019-08-06 陕西师范大学 基于Fe-MOFs的化学发光-荧光双响应免疫传感器
CN110243895B (zh) * 2019-07-02 2022-04-05 济南大学 一种基于MnxCo1-xSe2-Pd的夹心型电化学免疫传感器的制备方法及应用
CN110243895A (zh) * 2019-07-02 2019-09-17 济南大学 一种基于MnxCo1-xSe2-Pd的夹心型电化学免疫传感器的制备方法及应用
CN110412259A (zh) * 2019-08-28 2019-11-05 浙江理工大学 一种基于Au@Co-MOFs复合材料的电化学免疫传感器的构建方法
CN110501487A (zh) * 2019-09-08 2019-11-26 浙江理工大学 一种基于Au@Zn-MOFs复合材料的电化学免疫传感器的构建方法
CN111721826A (zh) * 2020-05-18 2020-09-29 济南大学 一种基于镧系金属自发光Eu-MOFs的竞争型免疫传感器的制备方法
CN114163650B (zh) * 2020-09-11 2022-08-02 中国科学院大连化学物理研究所 金属有机骨架材料mil-125及其制备方法和应用
CN114163650A (zh) * 2020-09-11 2022-03-11 中国科学院大连化学物理研究所 金属有机骨架材料mil-125及其制备方法和应用
CN112986348A (zh) * 2021-03-30 2021-06-18 济南大学 一种基于过渡金属硫化物的双模式电化学生物传感器的制备与应用
CN112986348B (zh) * 2021-03-30 2022-10-11 济南大学 一种基于过渡金属硫化物的双模式电化学生物传感器的制备与应用
CN113092548A (zh) * 2021-04-16 2021-07-09 山西师范大学 一种基于Fe2TiO5纳米盘电极的葡萄糖光电传感器的制备方法
CN113092548B (zh) * 2021-04-16 2023-04-14 山西师范大学 一种纳米盘电极的葡萄糖光电传感器的制备方法
CN113155930A (zh) * 2021-05-29 2021-07-23 福建医科大学 一种多重信号放大技术检测白血病干细胞肿瘤标志物cd123的电化学免疫传感方法
CN113155930B (zh) * 2021-05-29 2023-05-12 福建医科大学 一种多重信号放大技术检测白血病干细胞肿瘤标志物cd123的电化学免疫传感方法
CN113311043A (zh) * 2021-06-07 2021-08-27 江西农业大学 一种检测Pb2+和Hg2+的电化学传感器及其制备方法与应用
CN114813862A (zh) * 2021-11-12 2022-07-29 重庆大学 一种电化学生物传感器及其应用
CN114813862B (zh) * 2021-11-12 2024-03-26 重庆大学 一种电化学生物传感器及其应用
CN117626533A (zh) * 2024-01-25 2024-03-01 石家庄铁道大学 Nh2-mil-125填充介电薄膜的制备方法

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