CN108802133B - 一种检测胃癌肿瘤标志物夹心型免疫传感器的制备方法及应用 - Google Patents
一种检测胃癌肿瘤标志物夹心型免疫传感器的制备方法及应用 Download PDFInfo
- Publication number
- CN108802133B CN108802133B CN201810616971.7A CN201810616971A CN108802133B CN 108802133 B CN108802133 B CN 108802133B CN 201810616971 A CN201810616971 A CN 201810616971A CN 108802133 B CN108802133 B CN 108802133B
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- solution
- tumor markers
- tio
- electrode
- ptcu
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Active
Links
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 title claims abstract description 57
- 208000005718 Stomach Neoplasms Diseases 0.000 title claims abstract description 47
- 239000011229 interlayer Substances 0.000 title claims abstract description 34
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 title claims abstract description 23
- GWEVSGVZZGPLCZ-UHFFFAOYSA-N Titan oxide Chemical group O=[Ti]=O GWEVSGVZZGPLCZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 45
- 238000001514 detection method Methods 0.000 claims abstract description 44
- BERDEBHAJNAUOM-UHFFFAOYSA-N copper(I) oxide Inorganic materials [Cu]O[Cu] BERDEBHAJNAUOM-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 21
- KRFJLUBVMFXRPN-UHFFFAOYSA-N cuprous oxide Chemical compound [O-2].[Cu+].[Cu+] KRFJLUBVMFXRPN-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 21
- 239000002105 nanoparticle Substances 0.000 claims abstract description 17
- 229910052982 molybdenum disulfide Inorganic materials 0.000 claims abstract description 10
- MHAJPDPJQMAIIY-UHFFFAOYSA-N Hydrogen peroxide Chemical compound OO MHAJPDPJQMAIIY-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 8
- 229910052961 molybdenite Inorganic materials 0.000 claims abstract description 8
- 239000000463 material Substances 0.000 claims abstract description 7
- 239000002131 composite material Substances 0.000 claims abstract description 6
- CWQXQMHSOZUFJS-UHFFFAOYSA-N molybdenum disulfide Chemical compound S=[Mo]=S CWQXQMHSOZUFJS-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 3
- 239000002086 nanomaterial Substances 0.000 claims abstract description 3
- 239000000243 solution Substances 0.000 claims description 74
- 229910021642 ultra pure water Inorganic materials 0.000 claims description 43
- 239000012498 ultrapure water Substances 0.000 claims description 43
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 31
- 238000002604 ultrasonography Methods 0.000 claims description 24
- 239000008055 phosphate buffer solution Substances 0.000 claims description 18
- 238000005406 washing Methods 0.000 claims description 18
- HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M Sodium hydroxide Chemical compound [OH-].[Na+] HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims description 15
- 238000011534 incubation Methods 0.000 claims description 15
- 238000000926 separation method Methods 0.000 claims description 15
- 239000000427 antigen Substances 0.000 claims description 13
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 claims description 13
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 claims description 13
- 229920001343 polytetrafluoroethylene Polymers 0.000 claims description 13
- 239000012491 analyte Substances 0.000 claims description 11
- 229960004756 ethanol Drugs 0.000 claims description 11
- 235000019441 ethanol Nutrition 0.000 claims description 11
- 238000000034 method Methods 0.000 claims description 11
- 239000000439 tumor marker Substances 0.000 claims description 11
- CIWBSHSKHKDKBQ-JLAZNSOCSA-N Ascorbic acid Chemical compound OC[C@H](O)[C@H]1OC(=O)C(O)=C1O CIWBSHSKHKDKBQ-JLAZNSOCSA-N 0.000 claims description 10
- 229910045601 alloy Inorganic materials 0.000 claims description 10
- 239000000956 alloy Substances 0.000 claims description 10
- 229910052799 carbon Inorganic materials 0.000 claims description 10
- 238000001548 drop coating Methods 0.000 claims description 10
- BASFCYQUMIYNBI-UHFFFAOYSA-N platinum Chemical compound [Pt] BASFCYQUMIYNBI-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 10
- 238000005498 polishing Methods 0.000 claims description 10
- 229920000036 polyvinylpyrrolidone Polymers 0.000 claims description 10
- 235000013855 polyvinylpyrrolidone Nutrition 0.000 claims description 10
- 239000012086 standard solution Substances 0.000 claims description 10
- 229910021591 Copper(I) chloride Inorganic materials 0.000 claims description 9
- OXBLHERUFWYNTN-UHFFFAOYSA-M copper(I) chloride Chemical compound [Cu]Cl OXBLHERUFWYNTN-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims description 9
- 229960000935 dehydrated alcohol Drugs 0.000 claims description 9
- NWZSZGALRFJKBT-KNIFDHDWSA-N (2s)-2,6-diaminohexanoic acid;(2s)-2-hydroxybutanedioic acid Chemical compound OC(=O)[C@@H](O)CC(O)=O.NCCCC[C@H](N)C(O)=O NWZSZGALRFJKBT-KNIFDHDWSA-N 0.000 claims description 5
- 239000004475 Arginine Substances 0.000 claims description 5
- 108091003079 Bovine Serum Albumin Proteins 0.000 claims description 5
- 229910018292 Cu2In Inorganic materials 0.000 claims description 5
- 239000012901 Milli-Q water Substances 0.000 claims description 5
- 238000013019 agitation Methods 0.000 claims description 5
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 claims description 5
- ODKSFYDXXFIFQN-UHFFFAOYSA-N arginine Natural products OC(=O)C(N)CCCNC(N)=N ODKSFYDXXFIFQN-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 5
- 229960005070 ascorbic acid Drugs 0.000 claims description 5
- 229940098773 bovine serum albumin Drugs 0.000 claims description 5
- 238000000970 chrono-amperometry Methods 0.000 claims description 5
- ZOMNIUBKTOKEHS-UHFFFAOYSA-L dimercury dichloride Chemical class Cl[Hg][Hg]Cl ZOMNIUBKTOKEHS-UHFFFAOYSA-L 0.000 claims description 5
- 238000004090 dissolution Methods 0.000 claims description 5
- 230000000694 effects Effects 0.000 claims description 5
- 238000011010 flushing procedure Methods 0.000 claims description 5
- IKDUDTNKRLTJSI-UHFFFAOYSA-N hydrazine monohydrate Substances O.NN IKDUDTNKRLTJSI-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 5
- 239000011259 mixed solution Substances 0.000 claims description 5
- 229910052697 platinum Inorganic materials 0.000 claims description 5
- 239000000843 powder Substances 0.000 claims description 5
- 230000001376 precipitating effect Effects 0.000 claims description 5
- 238000010992 reflux Methods 0.000 claims description 5
- 239000012488 sample solution Substances 0.000 claims description 5
- 238000005070 sampling Methods 0.000 claims description 5
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 claims description 5
- 239000000725 suspension Substances 0.000 claims description 5
- 238000001291 vacuum drying Methods 0.000 claims description 5
- 239000003643 water by type Substances 0.000 claims description 5
- 239000002211 L-ascorbic acid Substances 0.000 claims description 4
- 235000000069 L-ascorbic acid Nutrition 0.000 claims description 4
- 238000001035 drying Methods 0.000 claims description 4
- 239000007853 buffer solution Substances 0.000 claims description 3
- WGYKZJWCGVVSQN-UHFFFAOYSA-N propylamine Chemical group CCCN WGYKZJWCGVVSQN-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-N Phosphoric acid Chemical compound OP(O)(O)=O NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 2
- 229910000147 aluminium phosphate Inorganic materials 0.000 claims 1
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 claims 1
- 239000013078 crystal Substances 0.000 claims 1
- 239000006185 dispersion Substances 0.000 claims 1
- CWAFVXWRGIEBPL-UHFFFAOYSA-N ethoxysilane Chemical compound CCO[SiH3] CWAFVXWRGIEBPL-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 1
- 230000012447 hatching Effects 0.000 claims 1
- 238000001027 hydrothermal synthesis Methods 0.000 claims 1
- 238000002347 injection Methods 0.000 claims 1
- 239000007924 injection Substances 0.000 claims 1
- 238000007689 inspection Methods 0.000 claims 1
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 claims 1
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 claims 1
- 239000010931 gold Substances 0.000 abstract description 20
- 206010017758 gastric cancer Diseases 0.000 abstract description 12
- 201000011549 stomach cancer Diseases 0.000 abstract description 12
- 239000003550 marker Substances 0.000 abstract description 11
- 229910052737 gold Inorganic materials 0.000 abstract description 3
- 238000003018 immunoassay Methods 0.000 abstract description 3
- 229910021397 glassy carbon Inorganic materials 0.000 abstract description 2
- 230000003197 catalytic effect Effects 0.000 abstract 1
- 239000011258 core-shell material Substances 0.000 abstract 1
- 229940112669 cuprous oxide Drugs 0.000 abstract 1
- PCHJSUWPFVWCPO-UHFFFAOYSA-N gold Chemical compound [Au] PCHJSUWPFVWCPO-UHFFFAOYSA-N 0.000 abstract 1
- 229960002163 hydrogen peroxide Drugs 0.000 abstract 1
- 239000010409 thin film Substances 0.000 abstract 1
- 239000004408 titanium dioxide Substances 0.000 abstract 1
- 229910019142 PO4 Inorganic materials 0.000 description 4
- 230000008859 change Effects 0.000 description 4
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 4
- 239000002159 nanocrystal Substances 0.000 description 4
- 230000010355 oscillation Effects 0.000 description 4
- NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K phosphate Chemical compound [O-]P([O-])([O-])=O NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 4
- 239000010452 phosphate Substances 0.000 description 4
- 238000011896 sensitive detection Methods 0.000 description 4
- 239000002352 surface water Substances 0.000 description 4
- BLRPTPMANUNPDV-UHFFFAOYSA-N Silane Chemical compound [SiH4] BLRPTPMANUNPDV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 230000003321 amplification Effects 0.000 description 3
- 238000006555 catalytic reaction Methods 0.000 description 3
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 3
- 238000003199 nucleic acid amplification method Methods 0.000 description 3
- 230000035945 sensitivity Effects 0.000 description 3
- 229910000077 silane Inorganic materials 0.000 description 3
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 2
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 2
- VGGSQFUCUMXWEO-UHFFFAOYSA-N Ethene Chemical compound C=C VGGSQFUCUMXWEO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000005977 Ethylene Substances 0.000 description 2
- OAICVXFJPJFONN-UHFFFAOYSA-N Phosphorus Chemical compound [P] OAICVXFJPJFONN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 2
- 230000005540 biological transmission Effects 0.000 description 2
- 201000011510 cancer Diseases 0.000 description 2
- 238000013399 early diagnosis Methods 0.000 description 2
- 125000001301 ethoxy group Chemical group [H]C([H])([H])C([H])([H])O* 0.000 description 2
- 238000012544 monitoring process Methods 0.000 description 2
- 229910052698 phosphorus Inorganic materials 0.000 description 2
- 239000011574 phosphorus Substances 0.000 description 2
- 230000004044 response Effects 0.000 description 2
- 210000002784 stomach Anatomy 0.000 description 2
- 229910021592 Copper(II) chloride Inorganic materials 0.000 description 1
- 208000002699 Digestive System Neoplasms Diseases 0.000 description 1
- ZOKXTWBITQBERF-UHFFFAOYSA-N Molybdenum Chemical compound [Mo] ZOKXTWBITQBERF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- NINIDFKCEFEMDL-UHFFFAOYSA-N Sulfur Chemical compound [S] NINIDFKCEFEMDL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000005864 Sulphur Substances 0.000 description 1
- 230000009471 action Effects 0.000 description 1
- 229910021529 ammonia Inorganic materials 0.000 description 1
- QGZKDVFQNNGYKY-UHFFFAOYSA-N ammonia Natural products N QGZKDVFQNNGYKY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000010323 ascorbic acid Nutrition 0.000 description 1
- 239000011668 ascorbic acid Substances 0.000 description 1
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 1
- 230000009286 beneficial effect Effects 0.000 description 1
- 229960000074 biopharmaceutical Drugs 0.000 description 1
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 1
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 1
- 238000003745 diagnosis Methods 0.000 description 1
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 1
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 1
- 238000000840 electrochemical analysis Methods 0.000 description 1
- 230000007613 environmental effect Effects 0.000 description 1
- 235000013305 food Nutrition 0.000 description 1
- 230000002779 inactivation Effects 0.000 description 1
- 230000003993 interaction Effects 0.000 description 1
- 238000004020 luminiscence type Methods 0.000 description 1
- 229910052750 molybdenum Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000011733 molybdenum Substances 0.000 description 1
- 239000002114 nanocomposite Substances 0.000 description 1
- 229910000510 noble metal Inorganic materials 0.000 description 1
- 229910000923 precious metal alloy Inorganic materials 0.000 description 1
- 230000002265 prevention Effects 0.000 description 1
- 230000008569 process Effects 0.000 description 1
- 239000002994 raw material Substances 0.000 description 1
- 230000008961 swelling Effects 0.000 description 1
- 230000002194 synthesizing effect Effects 0.000 description 1
Classifications
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N27/00—Investigating or analysing materials by the use of electric, electrochemical, or magnetic means
- G01N27/26—Investigating or analysing materials by the use of electric, electrochemical, or magnetic means by investigating electrochemical variables; by using electrolysis or electrophoresis
- G01N27/28—Electrolytic cell components
- G01N27/30—Electrodes, e.g. test electrodes; Half-cells
- G01N27/308—Electrodes, e.g. test electrodes; Half-cells at least partially made of carbon
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N27/00—Investigating or analysing materials by the use of electric, electrochemical, or magnetic means
- G01N27/26—Investigating or analysing materials by the use of electric, electrochemical, or magnetic means by investigating electrochemical variables; by using electrolysis or electrophoresis
- G01N27/28—Electrolytic cell components
- G01N27/30—Electrodes, e.g. test electrodes; Half-cells
- G01N27/327—Biochemical electrodes, e.g. electrical or mechanical details for in vitro measurements
- G01N27/3275—Sensing specific biomolecules, e.g. nucleic acid strands, based on an electrode surface reaction
- G01N27/3278—Sensing specific biomolecules, e.g. nucleic acid strands, based on an electrode surface reaction involving nanosized elements, e.g. nanogaps or nanoparticles
Abstract
本发明涉及一种检测胃癌肿瘤标志物夹心型免疫传感器的制备方法及应用，属于新型纳米功能材料、免疫分析和生物传感器领域。其制备三维多孔二硫化钼负载金纳米粒子h‑MoS2/Au NPs作为基底材料修饰裸玻碳电极，提高肿瘤标志物捕获抗体的固载量，并有效加速电极表面的电子传递速率；制备正八面体氧化亚铜/二氧化钛核壳结构负载介孔铂铜纳米粒子Cu2O@TiO2/PtCu复合纳米材料固载检测抗体，并利用其对双氧水H2O2的优异电化学催化性能制得了简单、快速、灵敏的夹心型电化学免疫传感器，用于胃癌相关肿瘤标志物的检测。
Description
技术领域
本发明属于纳米功能材料、免疫分析以及生物传感技术领域，具体涉及一种检测胃癌肿瘤标志物夹心型免疫传感器的制备方法及应用。
背景技术
胃癌已是我国常见的恶性肿瘤之一，中国每年新增胃癌病例为40.5万人，占世界新增病例的42.5%，发病率居消化系统肿瘤之首；专家介绍到：胃癌是可防可治的，只要早期发现、早期治疗，治愈率可达90%；因此早期诊断对胃癌的预防和治疗具有重要的临床意义。CA72-4是目前诊断胃癌的最佳肿瘤标志物之一，对胃癌具有较高的特异性，其敏感性可达28~80%，对胃癌的早期诊断具有重要意义。目前，对于肿瘤标志物的检测方法很多，如放射免疫分析法、免疫放射分析法、化学免疫发光分析法、时间分辨荧光免疫分析法等，但多数检测方法繁琐，操作复杂，费用昂贵，检出限高，因此，建立一种快速、简便、灵敏的检测方法有重要意义。
夹心型电化学免疫传感器将高特异性的免疫分析技术和高灵敏的电化学分析技术相结合，具有灵敏度高、制备简单、检测快速、成本低等优点，在临床检验、环境监测、食品安全控制、生物监测等领域都有重要的应用价值。而构建电化学免疫传感器的关键有两点：其一是采用简单、快速、有效的方法将抗原抗体等生物分子固定在电极表面；其二是开发传感器的信号放大技术。
三维多孔二硫化钼/金纳米粒子复合材料(h-MoS2/Au NPs)具有大的比表面积和良好的生物相容性，可以显著提高捕获抗体Ab1的固载量，并有效加速电极界面的电子传递速度；新颖复合纳米材料Cu2O@TiO2/PtCu利用各组分协同作用对H2O2的良好电催化作用，实现多重信号放大，实现对胃癌肿瘤标志物的灵敏检测。
发明内容
本发明的目的在于提供一种制备简单、灵敏度高、特异性强、检测快速的可用于胃癌相关肿瘤标志物检测的夹心型电化学免疫传感器的制备方法，所制备的传感器可用于胃癌肿瘤标志物的快速、灵敏检测等应用。基于此目的，本发明先采用一锅法制备出多孔二硫化钼/金纳米粒子复合材料h-MoS2/Au NPs对裸玻碳电极进行修饰，有效提高了电极的有效比表面积，增大了抗体的负载量；并且极大增强了电极界面的电子响应速度和对测试底液的电催化信号强度等性能；然后利用Cu2O@TiO2/PtCu固定胃癌肿瘤标志物检测抗体；进而通过Cu2O@TiO2/PtCu对H2O2的良好电催化作用以及良好的生物相容性用于固载检测抗体，构建夹心型免疫传感器，实现对胃癌肿瘤标志物的灵敏检测。
本发明的技术方案如下：
1. 一种检测胃癌肿瘤标志物夹心型免疫传感器的制备方法，其特征在于，制备步骤如下：
(1) 制备h-MoS2/Au NPs
取20~24 mg的(NH4)2MoS4和2 mL、质量分数为1% 的HAuCl4·4H2O混合溶解在20 mL的超纯水中，超声10 min；随后，加入100 µL的水合肼溶液，超声30 min，使混合液均匀分散；将混合液转移到50mL的聚四氟乙烯反应釜中，加热至180~220 ℃，反应8~12 h；冷却至室温，超纯水和乙醇依次离心洗涤2~4次；产物再次溶解在3 mL超纯水中，冻干机干燥，制得h-MoS2/Au NPs；
(2) 制备Cu2O@TiO2/PtCu-Ab2检测抗体孵化物溶液
将8~12 mL、2.0 mol/L的NaOH溶液逐滴加入到含3.33 g聚乙烯吡咯烷酮的100mL、0.01 mol/L的CuCl2溶液中，充分搅拌0.5 h；继续将8~12 mL、0.6 mol/L的抗坏血酸溶液逐滴加入到上述混合液中，55 ℃下充分搅拌2~4 h；离心分离，所得沉淀用超纯水和无水乙醇依次洗涤三次；室温下真空干燥12 h，制得Cu2O正八面体；
取23~27 mg的Cu2O正八面体溶解于65 mL的超纯水中，超声10 min，分散均匀；将0.9~1.1 mL、0.02 mol/L的TiF4水溶液缓慢逐滴加入到Cu2O悬浮液中，充分搅拌1 h，使混合液均匀分散；将混合液转移到100 mL的聚四氟乙烯反应釜中，加热至160～200 ℃，反应0.5h；冷却至室温，超纯水和乙醇依次离心洗涤2～4次；60 ℃真空干燥，制得Cu2O@TiO2正八面体纳米晶体；
将80 ~120 mg的Cu2O@TiO2加入到8~12 mL的无水乙醇中，加入0.1~0.2 mL的3-氨丙基三乙氧基硅烷，70 ℃回流1.5 ~ 2.5 h，离心分离，超纯水洗涤，80 ℃干燥12 h，得到Cu2O@TiO2-NH2；
取0.3~0.5 g精氨酸和1.0~1.2 g聚乙烯吡咯烷酮溶解在45 mL的超纯水中，超声10 min，分散均匀；磁力搅拌下，将3.5~4.0mL、0.05 mol/L的H2PtCl6·4H2O和1.0~1.5mL、0.05 mol/L的CuCl2溶液混合加入到上述混合溶液中，超声20 min，使混合液均匀分散；将混合液转移到聚四氟乙烯反应釜中，加热至180~220 ℃，反应1.5~2.5 h；冷却至室温，得到介孔PtCu合金纳米粒子溶液；
将8~12 mg 的Cu2O@TiO2-NH2加入到30 mL的介孔PtCu合金纳米粒子溶液中，振荡12 h，离心洗涤，制得Cu2O@TiO2/PtCu；配置3 mL、2.5~3.5 mg/mL的Cu2O@TiO2/PtCu检测抗体标记物溶液，加入3 mL、100 µg/mL的肿瘤标志物检测抗体Ab2溶液，4 ℃恒温振荡培养箱中振荡孵化12 h；离心分离后，加入3 mL、pH=7.17磷酸盐缓冲溶液，得到Cu2O@TiO2/PtCu-Ab2检测抗体孵化物溶液，4 ℃下保存备用；
(3) 制备夹心型电化学免疫传感器
1) 将直径为4 mm的玻碳电极用Al2O3抛光粉打磨，超纯水清洗干净；
2) 将6 µL、1.0~3.0 mg/mL的h-MoS2/Au NPs溶液滴涂在电极表面，晾干，用超纯水冲洗，晾干；
3) 继续将6 µL、8~12 µg/mL的肿瘤标志物捕获抗体Ab1溶液滴涂到电极表面，4℃晾干；
4) 继续滴加3 µL、质量分数为0.1~1.0 %的牛血清白蛋白BSA溶液到修饰电极表面，以封闭电极表面上未结合Ab1的非特异性活性位点，用pH为7.17的磷酸盐缓冲溶液冲洗电极表面，4 ℃晾干；
5) 超纯水冲洗掉未结合的BSA后，继续滴加6 µL、10 fg/mL~200 ng/mL的一系列不同浓度的肿瘤标志物抗原标准溶液到电极表面，4 ℃晾干，超纯水冲洗；
6) 将6 µL、2.0~4.0 mg/mL的肿瘤标志物检测抗体孵化物Cu2O@TiO2/PtCu-Ab2溶液滴涂到电极表面，室温下孵化30~60 min，用pH为7.17的磷酸盐缓冲溶液冲洗电极表面，4℃晾干，制得一种检测胃癌肿瘤标志物的夹心型免疫传感器。
2. 所述的夹心型免疫传感器用于胃癌相关肿瘤标志物的检测：
(1) 使用电化学工作站以三电极体系进行测试，饱和甘汞电极为参比电极，铂丝电极为辅助电极，修饰完全的玻碳电极为工作电极，在10 mL、50 mmol/L的pH 5.29~8.04磷酸盐缓冲溶液中进行测试；
(2) 用计时电流法对胃癌肿瘤标志物进行检测，输入电压为-0.4 V，取样间隔0.1s，运行时间300 s；
(3) 当背景电流趋于稳定后，每隔50 s向10 mL、50 mmol/L的pH=7.17磷酸盐缓冲溶液中注入10 μL、5 mol/L的双氧水溶液，记录电流变化；
(4) 用血清样品溶液代替胃癌肿瘤标志物抗原标准溶液，按照工作曲线绘制的方法进行检测。
3.本发明所用原材料均可在化学试剂公司或生物制药公司购买。
本发明的有益成果
(1) 本发明使用h-MoS2/Au NPs作为基底材料修饰电极，其具有大的比表面积和良好生物相容性，可以显著提高Au NPs负载量，可以显著提高捕获抗体Ab1的固载量，并且良好的导电性可以有效加速电子传递，提高反应速率，对于实现传感器的高灵敏度以及低检测限具有重要意义；
(2) 本发明合成纳米复合材料Cu2O@TiO2/PtCu作为检测抗体标记物，构建夹心型电化学免疫传感器；正八面体Cu2O具有良好的导电性能和电催化性能；以Cu2O为核，TiO2为壳可以有效改善材料界面相互作用，加速电催化进程；
(3) 本发明PtCu纳米粒子，为介孔贵金属合金纳米粒子，相比其他贵金属，具有成本低，比表面积大，活性位点多等优点；
(4) 利用纳米复合材料Cu2O@TiO2/PtCu纳米粒子直接与肿瘤标志物检测抗体结合，构建无酶免疫传感器，避免因酶的失活或泄露引起检测误差；同时利用复合材料中各组分协同辅助作用，显著增强对过氧化氢的电催化响应速度和重现性，实现多重信号放大，极大提高了电化学传感器的检测灵敏度，具有重要的科学意义和应用价值；
(5) 本发明制备的夹心型电化学免疫传感器对胃癌肿瘤标志物糖类抗原 CA72-4的检测范围为20 fg/mL~80 ng/mL，检测限为7.8 fg/mL。
具体实施方式
现将本发明通过具体实施方式进一步说明，但不限于此。
实施例1
1. 一种检测胃癌肿瘤标志物夹心型免疫传感器的制备方法，其特征在于，制备步骤如下：
(1) 制备h-MoS2/Au NPs
取20 mg的(NH4)2MoS4和2 mL、质量分数为1% 的HAuCl4·4H2O混合溶解在20 mL的超纯水中，超声10 min；随后，加入100 µL的水合肼溶液，超声30 min，使混合液均匀分散；将混合液转移到50 mL的聚四氟乙烯反应釜中，加热至180 ℃，反应8 h；冷却至室温，超纯水和乙醇依次离心洗涤2次；产物再次溶解在3 mL超纯水中，冻干机干燥，制得h-MoS2/AuNPs；
(2) 制备Cu2O@TiO2/PtCu-Ab2检测抗体孵化物溶液
将8 mL、2.0 mol/L的NaOH溶液逐滴加入到含3.33 g聚乙烯吡咯烷酮的100 mL、0.01 mol/L的CuCl2溶液中，充分搅拌0.5 h；继续将8 mL、0.6 mol/L的抗坏血酸溶液逐滴加入到上述混合液中，55℃下充分搅拌2 h；离心分离，所得沉淀用超纯水和无水乙醇依次洗涤三次；室温下真空干燥12 h，制得Cu2O正八面体；
取23 mg的Cu2O正八面体溶解于65 mL的超纯水中，超声10 min，分散均匀；将0.9mL、0.02 mol/L的TiF4水溶液缓慢逐滴加入到Cu2O悬浮液中，充分搅拌1 h，使混合液均匀分散；将混合液转移到100 mL的聚四氟乙烯反应釜中，加热至160 ℃，反应0.5 h；冷却至室温，超纯水和乙醇依次离心洗涤2次；60 ℃真空干燥，制得Cu2O@TiO2正八面体纳米晶体；
将80 mg的Cu2O@TiO2加入到8 mL的无水乙醇中，加入0.1 mL的3-氨丙基三乙氧基硅烷，70 ℃回流1.5 h，离心分离，超纯水洗涤，80 ℃干燥12 h，得到Cu2O@TiO2-NH2；
取0.3 g精氨酸和1.0 g聚乙烯吡咯烷酮溶解在45 mL的超纯水中，超声10 min，分散均匀；磁力搅拌下，将3.5 mL、0.05 mol/L的H2PtCl6·4H2O和1.0 mL、0.05 mol/L的CuCl2溶液混合加入到上述混合溶液中，超声20 min，使混合液均匀分散；将混合液转移到聚四氟乙烯反应釜中，加热至180 ℃，反应1.5 h；冷却至室温，得到介孔PtCu合金纳米粒子溶液；
将8 mg 的Cu2O@TiO2-NH2加入到30 mL的介孔PtCu合金纳米粒子溶液中，振荡12h，离心洗涤，制得Cu2O@TiO2/PtCu；配置3 mL、2.5 mg/mL的Cu2O@TiO2/PtCu检测抗体标记物溶液，加入3 mL、100 µg/mL的肿瘤标志物检测抗体Ab2溶液，4 ℃恒温振荡培养箱中振荡孵化12 h；离心分离后，加入3 mL、pH=7.17磷酸盐缓冲溶液，得到Cu2O@TiO2/PtCu-Ab2检测抗体孵化物溶液，4 ℃下保存备用；
(3) 制备夹心型电化学免疫传感器
1) 将直径为4 mm的玻碳电极用Al2O3抛光粉打磨，超纯水清洗干净；
2) 将6 µL、1.0~3.0 mg/mL的h-MoS2/Au NPs溶液滴涂在电极表面，晾干，用超纯水冲洗，晾干；
3) 继续将6 µL、8 µg/mL的肿瘤标志物捕获抗体Ab1溶液滴涂到电极表面，4 ℃晾干；
4) 继续滴加3 µL、质量分数为0.1 %的牛血清白蛋白BSA溶液到修饰电极表面，以封闭电极表面上未结合Ab1的非特异性活性位点，用pH为7.17的磷酸盐缓冲溶液冲洗电极表面，4 ℃晾干；
5) 超纯水冲洗掉未结合的BSA后，继续滴加6 µL、10 fg/mL~200 ng/mL的一系列不同浓度的肿瘤标志物抗原标准溶液到电极表面，4 ℃晾干，超纯水冲洗；
6) 将6 µL、2.0~4.0 mg/mL的肿瘤标志物检测抗体孵化物Cu2O@TiO2/PtCu-Ab2溶液滴涂到电极表面，室温下孵化30 min，用pH为7.17的磷酸盐缓冲溶液冲洗电极表面，4 ℃晾干，制得一种检测胃癌肿瘤标志物的夹心型免疫传感器。
2. 所述的夹心型免疫传感器用于胃癌相关肿瘤标志物的检测：
(1) 使用电化学工作站以三电极体系进行测试，饱和甘汞电极为参比电极，铂丝电极为辅助电极，修饰完全的玻碳电极为工作电极，在10 mL、50 mmol/L的pH 5.29~8.04磷酸盐缓冲溶液中进行测试；
(2) 用计时电流法对胃癌肿瘤标志物进行检测，输入电压为-0.4 V，取样间隔0.1s，运行时间300 s；
(3) 当背景电流趋于稳定后，每隔50 s向10 mL、50 mmol/L的pH=7.17磷酸盐缓冲溶液中注入10 μL、5 mol/L的双氧水溶液，记录电流变化；
(4) 用血清样品溶液代替胃癌肿瘤标志物抗原标准溶液，按照工作曲线绘制的方法进行检测。
实施例2
1. 一种检测胃癌肿瘤标志物夹心型免疫传感器的制备方法，其特征在于，制备步骤如下：
(1) 制备h-MoS2/Au NPs
取22 mg的(NH4)2MoS4和2mL、质量分数为1% 的HAuCl4·4H2O混合溶解在20 mL的超纯水中，超声10 min；随后，加入100 µL的水合肼溶液，超声30 min，使混合液均匀分散；将混合液转移到50 mL的聚四氟乙烯反应釜中，加热至200 ℃，反应10 h；冷却至室温，超纯水和乙醇依次离心洗涤3次；产物再次溶解在3 mL超纯水中，冻干机干燥，制得h-MoS2/AuNPs；
(2) 制备Cu2O@TiO2/PtCu-Ab2检测抗体孵化物溶液
将10 mL、2.0 mol/L的NaOH溶液逐滴加入到含3.33 g聚乙烯吡咯烷酮的100 mL、0.01 mol/L的CuCl2溶液中，充分搅拌0.5 h；继续将10 mL、0.6 mol/L的抗坏血酸溶液逐滴加入到上述混合液中，55 ℃下充分搅拌3 h；离心分离，所得沉淀用超纯水和无水乙醇依次洗涤三次；室温下真空干燥12 h，制得Cu2O正八面体；
取25 mg的Cu2O正八面体溶解于65 mL的超纯水中，超声10 min，分散均匀；将1.0mL、0.02 mol/L的TiF4水溶液缓慢逐滴加入到Cu2O悬浮液中，充分搅拌1 h，使混合液均匀分散；将混合液转移到100 mL的聚四氟乙烯反应釜中，加热至180 ℃，反应0.5 h；冷却至室温，超纯水和乙醇依次离心洗涤3次；60 ℃真空干燥，制得Cu2O@TiO2正八面体纳米晶体；
将100 mg的Cu2O@TiO2加入到10 mL的无水乙醇中，加入0.15 mL的3-氨丙基三乙氧基硅烷，70 ℃回流2.0 h，离心分离，超纯水洗涤，80 ℃干燥12 h，得到Cu2O@TiO2-NH2；
取0.4 g精氨酸和1.1 g聚乙烯吡咯烷酮溶解在45 mL的超纯水中，超声10 min，分散均匀；磁力搅拌下，将3.75 mL、0.05 mol/L的H2PtCl6·4H2O和1.25 mL、0.05 mol/L的CuCl2溶液混合加入到上述混合溶液中，超声20 min，使混合液均匀分散；将混合液转移到聚四氟乙烯反应釜中，加热至200 ℃，反应2.0 h；冷却至室温，得到介孔PtCu合金纳米粒子溶液；
将10 mg 的Cu2O@TiO2-NH2加入到30 mL的介孔PtCu合金纳米粒子溶液中，振荡12h，离心洗涤，制得Cu2O@TiO2/PtCu；配置3 mL、3.0 mg/mL的Cu2O@TiO2/PtCu检测抗体标记物溶液，加入3 mL、100 µg/mL的肿瘤标志物检测抗体Ab2溶液，4 ℃恒温振荡培养箱中振荡孵化12 h；离心分离后，加入3 mL、pH=7.17磷酸盐缓冲溶液，得到Cu2O@TiO2/PtCu-Ab2检测抗体孵化物溶液，4 ℃下保存备用；
(3) 制备夹心型电化学免疫传感器
1) 将直径为4 mm的玻碳电极用Al2O3抛光粉打磨，超纯水清洗干净；
2) 将6 µL、1.0~3.0 mg/mL的h-MoS2/Au NPs溶液滴涂在电极表面，晾干，用超纯水冲洗，晾干；
3) 继续将6 µL、10 µg/mL的肿瘤标志物捕获抗体Ab1溶液滴涂到电极表面，4 ℃晾干；
4) 继续滴加3 µL、质量分数为0.5 %的牛血清白蛋白BSA溶液到修饰电极表面，以封闭电极表面上未结合Ab1的非特异性活性位点，用pH为7.17的磷酸盐缓冲溶液冲洗电极表面，4 ℃晾干；
5) 超纯水冲洗掉未结合的BSA后，继续滴加6 µL、10 fg/mL~200 ng/mL的一系列不同浓度的肿瘤标志物抗原标准溶液到电极表面，4 ℃晾干，超纯水冲洗；
6) 将6 µL、2.0~4.0 mg/mL的肿瘤标志物检测抗体孵化物Cu2O@TiO2/PtCu-Ab2溶液滴涂到电极表面，室温下孵化45 min，用pH为7.17的磷酸盐缓冲溶液冲洗电极表面，4 ℃晾干，制得一种检测胃癌肿瘤标志物的夹心型免疫传感器。
2. 所述的夹心型免疫传感器用于胃癌相关肿瘤标志物的检测：
(1) 使用电化学工作站以三电极体系进行测试，饱和甘汞电极为参比电极，铂丝电极为辅助电极，修饰完全的玻碳电极为工作电极，在10 mL、50 mmol/L的pH 5.29 ~ 8.04磷酸盐缓冲溶液中进行测试；
(2) 用计时电流法对胃癌肿瘤标志物进行检测，输入电压为-0.4 V，取样间隔0.1s，运行时间300 s；
(3) 当背景电流趋于稳定后，每隔50 s向10 mL、50 mmol/L的pH=7.17磷酸盐缓冲溶液中注入10 μL、5 mol/L的双氧水溶液，记录电流变化；
(4) 用血清样品溶液代替胃癌肿瘤标志物抗原标准溶液，按照工作曲线绘制的方法进行检测。
实施例3
1. 一种检测胃癌肿瘤标志物夹心型免疫传感器的制备方法，其特征在于，制备步骤如下：
(1) 制备h-MoS2/Au NPs
取24 mg的(NH4)2MoS4和2mL、质量分数为1% 的HAuCl4·4H2O混合溶解在20 mL的超纯水中，超声10 min；随后，加入100 µL的水合肼溶液，超声30 min，使混合液均匀分散；将混合液转移到50 mL的聚四氟乙烯反应釜中，加热至220 ℃，反应12 h；冷却至室温，超纯水和乙醇依次离心洗涤4次；产物再次溶解在3 mL超纯水中，冻干机干燥，制得h-MoS2/AuNPs；
(2) 制备Cu2O@TiO2/PtCu-Ab2检测抗体孵化物溶液
将12 mL、2.0 mol/L的NaOH溶液逐滴加入到含3.33 g聚乙烯吡咯烷酮的100 mL、0.01 mol/L的CuCl2溶液中，充分搅拌0.5 h；继续将12 mL、0.6 mol/L的抗坏血酸溶液逐滴加入到上述混合液中，55 ℃下充分搅拌4 h；离心分离，所得沉淀用超纯水和无水乙醇依次洗涤三次；室温下真空干燥12 h，制得Cu2O正八面体；
取27 mg的Cu2O正八面体溶解于65 mL的超纯水中，超声10 min，分散均匀；将1.1mL、0.02 mol/L的TiF4水溶液缓慢逐滴加入到Cu2O悬浮液中，充分搅拌1h，使混合液均匀分散；将混合液转移到100 mL的聚四氟乙烯反应釜中，加热至200℃，反应0.5 h；冷却至室温，超纯水和乙醇依次离心洗涤4次；60 ℃真空干燥，制得Cu2O@TiO2正八面体纳米晶体；
将120 mg的Cu2O@TiO2加入到12 mL的无水乙醇中，加入0.2 mL的3-氨丙基三乙氧基硅烷，70 ℃回流2.5 h，离心分离，超纯水洗涤，80 ℃干燥12h，得到Cu2O@TiO2-NH2；
取0.5 g精氨酸和1.2 g聚乙烯吡咯烷酮溶解在45 mL的超纯水中，超声10min，分散均匀；磁力搅拌下，将4.0 mL、0.05 mol/L的H2PtCl6·4H2O和1.5mL、0.05 mol/L的CuCl2溶液混合加入到上述混合溶液中，超声20分钟，使混合液均匀分散；将混合液转移到聚四氟乙烯反应釜中，加热至220 ℃，反应2.5 h；冷却至室温，得到介孔PtCu合金纳米粒子溶液；
将12 mg 的Cu2O@TiO2-NH2加入到30 mL的介孔PtCu合金纳米粒子溶液中，振荡12h，离心洗涤，制得Cu2O@TiO2/PtCu；配置3 mL、3.5 mg/mL的Cu2O@TiO2/PtCu检测抗体标记物溶液，加入3 mL、100 µg/mL的肿瘤标志物检测抗体Ab2溶液，4 ℃恒温振荡培养箱中振荡孵化12 h；离心分离后，加入3 mL、pH=7.17磷酸盐缓冲溶液，得到Cu2O@TiO2/PtCu-Ab2检测抗体孵化物溶液，4 ℃下保存备用；
(3) 制备夹心型电化学免疫传感器
1) 将直径为4 mm的玻碳电极用Al2O3抛光粉打磨，超纯水清洗干净；
2) 将6 µL、1.0~3.0 mg/mL的h-MoS2/Au NPs溶液滴涂在电极表面，晾干，用超纯水冲洗，晾干；
3) 继续将6 µL、12 µg/mL的肿瘤标志物捕获抗体Ab1溶液滴涂到电极表面，4 ℃晾干；
4) 继续滴加3 µL、质量分数为1.0 %的牛血清白蛋白BSA溶液到修饰电极表面，以封闭电极表面上未结合Ab1的非特异性活性位点，用pH为7.17的磷酸盐缓冲溶液冲洗电极表面，4 ℃晾干；
5) 超纯水冲洗掉未结合的BSA后，继续滴加6 µL、10 fg/mL~200 ng/mL的一系列不同浓度的肿瘤标志物抗原标准溶液到电极表面，4 ℃晾干，超纯水冲洗；
6) 将6 µL、2.0~4.0 mg/mL的肿瘤标志物检测抗体孵化物Cu2O@TiO2/PtCu-Ab2溶液滴涂到电极表面，室温下孵化30~60 min，用pH为7.17的磷酸盐缓冲溶液冲洗电极表面，4℃晾干，制得一种检测胃癌肿瘤标志物的夹心型免疫传感器。
2. 所述的夹心型免疫传感器用于胃癌相关肿瘤标志物的检测：
(1) 使用电化学工作站以三电极体系进行测试，饱和甘汞电极为参比电极，铂丝电极为辅助电极，修饰完全的玻碳电极为工作电极，在10 mL、50 mmol/L的pH 5.29 ~ 8.04磷酸盐缓冲溶液中进行测试；
(2) 用计时电流法对胃癌肿瘤标志物进行检测，输入电压为-0.4 V，取样间隔0.1s，运行时间300 s；
(3) 当背景电流趋于稳定后，每隔50 s向10 mL、50 mmol/L的pH=7.17磷酸盐缓冲溶液中注入10 μL、5 mol/L的双氧水溶液，记录电流变化；
(4) 用血清样品溶液代替胃癌肿瘤标志物抗原标准溶液，按照工作曲线绘制的方法进行检测。
实施例4实施例1~3所述的夹心型免疫传感器对胃癌肿瘤标志物糖类抗原 CA72-4的检测范围为20 fg/mL~80 ng/mL，检测限为7.8 fg/mL;可以实现简单、快速、高灵敏和特异性检测。
Claims (5)
1.一种检测胃癌肿瘤标志物夹心型免疫传感器的制备方法，其特征在于，制备步骤如下：
(1) 制备h-MoS2/Au NPs
取20~24 mg的(NH4)2MoS4和2 mL、质量分数为1% 的HAuCl4·4H2O混合溶解在20 mL的超纯水中，超声10 min；随后，加入100 µL的水合肼溶液，超声30 min，使混合液均匀分散；将混合液转移到50 mL的聚四氟乙烯反应釜中，加热至180~220 ℃，反应8~12 h；冷却至室温，超纯水和乙醇依次离心洗涤2~4次；产物再次溶解在3 mL超纯水中，冻干机干燥，制得h-MoS2/Au NPs；
(2) 制备Cu2O@TiO2/PtCu-Ab2检测抗体孵化物溶液
将8~12 mL、2.0 mol/L的NaOH溶液逐滴加入到含3.33 g聚乙烯吡咯烷酮的100 mL、0.01 mol/L的CuCl2溶液中，充分搅拌0.5 h；继续将8~12 mL、0.6 mol/L的抗坏血酸溶液逐滴加入到上述混合液中，55 ℃下充分搅拌2~4 h；离心分离，所得沉淀用超纯水和无水乙醇依次洗涤三次；室温下真空干燥12 h，制得Cu2O正八面体；
取23~27 mg的Cu2O正八面体溶解于65 mL的超纯水中，超声10 min，分散均匀；将0.9~1.1 mL、0.02 mol/L的TiF4水溶液缓慢逐滴加入到Cu2O悬浮液中，充分搅拌1 h，使混合液均匀分散；将混合液转移到100 mL的聚四氟乙烯反应釜中，加热至160~200 ℃，反应0.5 h；冷却至室温，超纯水和乙醇依次离心洗涤2~4次；60 ℃真空干燥，制得Cu2O@TiO2正八面体纳米晶体；
将80~120 mg的Cu2O@TiO2加入到8~12 mL的无水乙醇中，加入0.1~0.2 mL的3-氨丙基三乙氧基硅烷，70 ℃回流1.5~2.5 h，离心分离，超纯水洗涤，80 ℃干燥12 h，得到Cu2O@TiO2-NH2；
取0.3~0.5 g精氨酸和1.0~1.2 g聚乙烯吡咯烷酮溶解在45 mL的超纯水中，超声10min，分散均匀；磁力搅拌下，将3.5~4.0 mL、0.05 mol/L的H2PtCl6·4H2O和1.0~1.5 mL、0.05 mol/L的CuCl2溶液混合加入到上述混合溶液中，超声20 min，使混合液均匀分散；将混合液转移到聚四氟乙烯反应釜中，加热至180~220 ℃，反应1.5~2.5 h；冷却至室温，得到介孔PtCu合金纳米粒子溶液；
将8~12 mg 的Cu2O@TiO2-NH2加入到30 mL的介孔PtCu合金纳米粒子溶液中，振荡12 h，离心洗涤，制得Cu2O@TiO2/PtCu；配置3 mL、2.5 ~ 3.5 mg/mL的Cu2O@TiO2/PtCu检测抗体标记物溶液，加入3 mL、100 µg/mL的肿瘤标志物检测抗体Ab2溶液，4 ℃恒温振荡培养箱中振荡孵化12 h；离心分离后，加入3 mL、pH=7.17磷酸盐缓冲溶液，得到Cu2O@TiO2/PtCu-Ab2检测抗体孵化物溶液，4℃下保存备用；
(3) 制备夹心型电化学免疫传感器
1) 将直径为4 mm的玻碳电极用Al2O3抛光粉打磨，超纯水清洗干净；
2) 将6 µL、1.0~3.0 mg/mL的h-MoS2/Au NPs溶液滴涂在电极表面，晾干，用超纯水冲洗，晾干；
3) 继续将6 µL、8~12 µg/mL的肿瘤标志物捕获抗体Ab1溶液滴涂到电极表面，4℃晾干；
4) 继续滴加3 µL、质量分数为0.1~1.0 %的牛血清白蛋白BSA溶液到修饰电极表面，以封闭电极表面上未结合Ab1的非特异性活性位点，用pH为7.17的磷酸盐缓冲溶液冲洗电极表面，4 ℃晾干；
5) 超纯水冲洗掉未结合的BSA后，继续滴加6 µL、10 fg/mL~200 ng/mL的一系列不同浓度的肿瘤标志物抗原标准溶液到电极表面，4 ℃晾干，超纯水冲洗；
6) 将6 µL、2.0~4.0 mg/mL的肿瘤标志物检测抗体孵化物Cu2O@TiO2/PtCu-Ab2溶液滴涂到电极表面，室温下孵化30~60 min，用pH为7.17的磷酸盐缓冲溶液冲洗电极表面，4 ℃晾干，制得一种检测胃癌肿瘤标志物的夹心型免疫传感器。
2.根据权利要求1所述的一种检测胃癌肿瘤标志物夹心型免疫传感器的制备方法，其特征在于，所制备的基底材料h-MoS2/Au NPs采用水热法一步合成。
3.如权利要求1所述的制备方法制备的一种检测胃癌肿瘤标志物夹心型免疫传感器，基于h-MoS2/Au NPs基底材料，基于Cu2O@TiO2/PtCu复合纳米材料固载检测抗体，作为检测胃癌肿瘤标志物的应用。
4.如权利要求1所述的制备方法制备的一种检测胃癌肿瘤标志物夹心型免疫传感器，用于胃癌肿瘤标志物的检测，其特征在于，步骤如下：
(1) 使用电化学工作站以三电极体系进行测试，饱和甘汞电极为参比电极，铂丝电极为辅助电极，修饰完全的玻碳电极为工作电极，在10 mL、50 mmol/L的pH 5.29 ~ 8.04磷酸盐缓冲溶液中进行测试；
(2) 用计时电流法对胃癌肿瘤标志物进行检测，输入电压为-0.4 V，取样间隔0.1 s，运行时间300 s；
(3) 当背景电流趋于稳定后，每隔50 s向10 mL、50 mmol/L的pH=7.17磷酸盐缓冲溶液中注入10 μL、5 mol/L的双氧水溶液，记录电流变化;
(4) 用血清样品溶液代替胃癌肿瘤标志物抗原标准溶液，按照工作曲线绘制的方法进行检测。
5.如权利要求1所述的制备方法制备的一种检测胃癌肿瘤标志物夹心型免疫传感器，其特征在于，所述肿瘤标志物为糖类抗原CA72-4。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN201810616971.7A CN108802133B (zh) | 2018-06-15 | 2018-06-15 | 一种检测胃癌肿瘤标志物夹心型免疫传感器的制备方法及应用 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN201810616971.7A CN108802133B (zh) | 2018-06-15 | 2018-06-15 | 一种检测胃癌肿瘤标志物夹心型免疫传感器的制备方法及应用 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN108802133A CN108802133A (zh) | 2018-11-13 |
| CN108802133B true CN108802133B (zh) | 2019-11-15 |
Family
ID=64086502
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN201810616971.7A Active CN108802133B (zh) | 2018-06-15 | 2018-06-15 | 一种检测胃癌肿瘤标志物夹心型免疫传感器的制备方法及应用 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN108802133B (zh) |
Families Citing this family (15)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN109507409B (zh) * | 2018-11-16 | 2022-10-04 | 山东师范大学 | 一种基于二硫化钼复合纳米材料信号放大的试纸条及其制备方法和应用 |
| CN110441535B (zh) * | 2019-08-01 | 2022-06-10 | 济南大学 | 一种基于Pd NCs功能化CuInOS检测降钙素原的电化学免疫传感器的制备方法 |
| CN110554027A (zh) * | 2019-09-19 | 2019-12-10 | 济南大学 | 一种基于氧化铁阵列共反应促进金纳米簇电致发光响应的免疫传感器的制备方法及应用 |
| CN110658245A (zh) * | 2019-10-28 | 2020-01-07 | 常州大学 | 一种可应用于电化学手性识别的谷胱甘肽-双纳米金属粒子复合材料修饰电极的制备方法 |
| GB2588780A (en) * | 2019-11-06 | 2021-05-12 | Georgia Bousiakou Lida | Biocompatible electrodes for electro-chemical biosensors |
| CN111220670B (zh) * | 2019-11-14 | 2023-01-17 | 南通大学 | 一种无酶电化学适体细胞传感器、制备方法及应用 |
| CN111208177A (zh) * | 2020-01-09 | 2020-05-29 | 济南大学 | 一种基于氧化铜和纳米铂增强鲁米诺发光的信号双放大型电化学发光传感器的构建方法 |
| CN111413330B (zh) * | 2020-05-07 | 2023-04-18 | 青岛科技大学 | 一种化学发光测定脱氧雪腐镰刀菌烯醇的方法 |
| CN111721822B (zh) * | 2020-06-29 | 2022-08-19 | 山东理工大学 | 一种基于AuNPs@rGO@PS NSs的电化学传感器的制备方法及应用 |
| CN112378970A (zh) * | 2020-11-27 | 2021-02-19 | 山东理工大学 | 一种基于树枝状铂铜合金纳米颗粒的电化学免疫传感器的制备 |
| CN112858420A (zh) * | 2021-03-30 | 2021-05-28 | 济南大学 | 一种基于硒化钒/金纳米粒子构建的夹心型电化学传感器的制备方法及应用 |
| CN113447547B (zh) * | 2021-05-28 | 2022-11-11 | 天津大学 | 基于二硫化钼/纳米铂包金三角/聚多巴胺的前列腺癌肿瘤标志物检测方法 |
| CN113492007B (zh) * | 2021-06-30 | 2022-07-19 | 武汉工程大学 | 一种铜-二氧化钛核壳结构复合材料及其制备方法和应用 |
| CN114487421B (zh) * | 2022-02-23 | 2023-03-28 | 山东大学 | 一种检测多种炎症因子的衬底及制备方法、试剂盒及应用 |
| CN115219569B (zh) * | 2022-06-22 | 2024-03-12 | 郑州大学 | 人工酶检测肿瘤细胞的传感器及其制备方法和应用 |
Citations (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN101726473A (zh) * | 2009-10-29 | 2010-06-09 | 广西师范大学 | 核酸适配体修饰纳米金催化共振散射光谱检测汞的方法 |
| CN107179342A (zh) * | 2017-05-18 | 2017-09-19 | 山东理工大学 | 一种基于GQDs‑CuO@3D‑rGO的乙肝标志物免疫传感器的制备方法及应用 |
| CN107727858A (zh) * | 2017-09-30 | 2018-02-23 | 山东理工大学 | 一种基于Rh@Pt纳米枝晶复合材料免疫传感器的制备方法及应用 |
Family Cites Families (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN108352511B (zh) * | 2015-11-13 | 2021-11-19 | 纳诺格拉夫公司 | 用于锂离子电化学电池中的石墨烯包封电活性材料 |
| KR101872484B1 (ko) * | 2016-03-31 | 2018-06-28 | 주식회사 엔디디 | 바이오 감지 장치 |
| JP2020501157A (ja) * | 2016-12-09 | 2020-01-16 | ノースイースタン ユニバーシティ | 耐久性のある酵素ベースのバイオセンサーおよび滴下堆積固定化のための方法 |
-
2018
- 2018-06-15 CN CN201810616971.7A patent/CN108802133B/zh active Active
Patent Citations (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN101726473A (zh) * | 2009-10-29 | 2010-06-09 | 广西师范大学 | 核酸适配体修饰纳米金催化共振散射光谱检测汞的方法 |
| CN107179342A (zh) * | 2017-05-18 | 2017-09-19 | 山东理工大学 | 一种基于GQDs‑CuO@3D‑rGO的乙肝标志物免疫传感器的制备方法及应用 |
| CN107727858A (zh) * | 2017-09-30 | 2018-02-23 | 山东理工大学 | 一种基于Rh@Pt纳米枝晶复合材料免疫传感器的制备方法及应用 |
Non-Patent Citations (1)
| Title |
|---|
| Ultrasensitive sandwich-type electrochemical immunosensor based on a novel signal amplification strategy using highly loaded palladium nanoparticles/carbon decorated magnetic microspheres as signal labels;Lei Ji 等;《Biosensors andBioelectronics》;20150207;第68卷;第757-762页 * |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| CN108802133A (zh) | 2018-11-13 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| CN108802133B (zh) | 一种检测胃癌肿瘤标志物夹心型免疫传感器的制备方法及应用 | |
| CN109507174B (zh) | 基于姜黄素复合ZnO纳米粒子猝灭鲁米诺电化学发光传感器的制备 | |
| CN108918627B (zh) | 一种基于MOFs材料竞争型电化学免疫传感器的制备方法 | |
| CN106442994B (zh) | 一种基于Ag@Au纳米复合材料的电化学免疫传感器的制备方法及应用 | |
| WO2019200921A1 (zh) | 一种基于二碳化三钛二维金属碳化物催化鲁米诺电化学发光探针的生物传感器及制备方法 | |
| CN104880456B (zh) | 一种基于GO/MWCNTs-COOH/Au@CeO2构建的电化学发光免疫传感器的制备方法及应用 | |
| CN107727858B (zh) | 一种基于Rh@Pt纳米枝晶复合材料免疫传感器的制备方法及应用 | |
| CN105572356B (zh) | 一种乳腺癌肿瘤标志物免疫传感器的制备方法及应用 | |
| CN109115855B (zh) | 一种检测阿尔茨海默症标志物的电化学免疫传感器的制备方法及应用 | |
| CN107085024B (zh) | 一种检测乙肝病毒标志物的免疫传感器的制备方法及应用 | |
| CN110794017B (zh) | 一种检测降钙素原的电化学免疫传感器的制备方法 | |
| CN108593743A (zh) | 一种铂钯复合二硒化钼标记的夹心型免疫传感器的制备方法及应用 | |
| CN105954339B (zh) | 一种基于CeO2@Cu2O/Au@Pt的夹心型免疫传感器的制备方法及应用 | |
| CN110687175B (zh) | 一种基于二氧化铈和纳米银双增强苝四羧酸发光的电化学发光传感器的构建方法 | |
| CN109613244B (zh) | 一种Ag@Pt-CuS标记的免疫传感器的制备方法及应用 | |
| CN108896638B (zh) | 一种基于二氧化钛掺杂石墨烯负载海参状金钯核壳纳米粒子的免疫传感器的制备方法及应用 | |
| CN107328930A (zh) | 一种基于双信号响应比率型丝网印刷电极免疫传感器的制备及应用 | |
| CN108918853B (zh) | 一种Pd@Ag@CeO2标记的免疫传感器的制备方法及应用 | |
| CN106093396A (zh) | 一种基于Au‑GQD@PtPd的免疫传感器的制备方法及应用 | |
| CN114235907B (zh) | 用于非小细胞肺癌cyfra21-1检测的电化学发光免疫传感器及检测方法 | |
| CN108469461A (zh) | 一种夹心型肺癌标志物电化学传感器的制备方法及应用 | |
| CN106770530B (zh) | 一种鳞状细胞癌标志物夹心型免疫传感器的制备方法及应用 | |
| CN108982629B (zh) | 一种利用双检测方法相互验证的电流型免疫传感器的制备方法及应用 | |
| CN109991298B (zh) | 一种Pt@MOF-GO标记的电化学传感器的制备方法及应用 | |
| CN106802314B (zh) | 一种基于负载TaC和金包覆十面体银纳米粒子的石墨烯的免疫传感器的制备方法及应用 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| PB01 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| GR01 | Patent grant | ||
| GR01 | Patent grant | ||
| TR01 | Transfer of patent right | ||
| TR01 | Transfer of patent right |
Effective date of registration: 20231101 Address after: 201499 228 Qingling Road, Qingcun Town, Fengxian District, Shanghai Patentee after: SHANGHAI YOKE INSTRUMENTS & METERS CO.,LTD. Address before: 250022 No. 336, South Xin Zhuang West Road, Shizhong District, Ji'nan, Shandong Patentee before: University of Jinan |