CN110441535B - 一种基于Pd NCs功能化CuInOS检测降钙素原的电化学免疫传感器的制备方法 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及一种基于钯纳米立方体(Pd NCs)功能化氧硫铟化铜(CuInOS)纳米复合材料(Pd NCs@CuInOS)检测降钙素原的无标记电化学免疫传感器的制备方法,属于电化学传感器领域。本发明合成了Pd NCs@CuInOS为基底材料,进行传感器的层层修饰。利用Pd NCs功能化CuInOS对过氧化氢良好的催化性能,实现了对标记物的高灵敏检测,同时CuInOS大的比表面积增加了Pd NCs的负载量,进一步增强了电化学信号。本发明对降钙素原检测的线性范围为0.0001~50 ng/mL,检测限为25.8 fg/mL。
Description
技术领域
本发明属于免疫分析与生物传感技术领域,具体涉及一种基于Pd NCs@CuInOS的无标记电化学免疫传感器的制备及应用。具体是采用Pd NCs@CuInOS作为信号传感平台研制一种快速检测降钙素原的无标记电化学免疫传感器,属于电化学免疫传感器领域。
背景技术
降钙素原作为一种非常有用的激素,是由甲状腺c细胞产生的116种氨基酸蛋白,在近几十年文献中描述的170多种生物标志物中,降钙素原已被证明是一种典型的细菌感染生物标志物。健康人血清中降钙素原浓度低于0.1 ng/mL,但通过抗生素治疗控制细菌感染后,可在刺激后迅速提高循环水平。基于上述原因,降钙素原水平可广泛用于监测全身细菌感染的预后,并可作为抗生素管理项目决策的工具。随着分析技术的快速发展,基于免疫分析法的降钙素原检测方法已被报道,包括比色免疫分析法、化学发光免疫分析法、微流控免疫分析法和荧光免疫分析法。众所周知,这些广泛使用的方法通常会耗时,太繁琐以及会阻碍常规检测。因此,与上述检测方法相比,电化学免疫传感器表现出特殊的优势不仅包括快速样本分析,灵敏度高,还拥有宽动态响应范围和低浓度背景信号。与此同时,无标记免疫传感器因其操作简便、易于小型化、仪器简单等优点吸引了更多的兴趣。Pd NCs作一种贵金属纳米材料具有强的催化性能,CuInOS 是一种硫化物同时也能够催化双氧水。因此将PdNCs@CuInOS作为基底材料构建电化学免疫传感器对解决传感器的稳定性和灵敏度具有重要作用。本发明采用无标记型电化学免疫传感器,结合放大技术,提高了传感器的检测灵敏度。另外,无标记电化学免疫传感器以其选择性好、结构简单、操作简便、易于小型化、并且可以快速、连续和自动化检测等优点,实现了对降钙素原的快速高效检测。
发明内容
本发明的目的之一是合成纳米材料作为基底材料构建免疫传感器,此方法在于避免传统检测方法的检测仪器复杂、检测过程繁琐、操作人员要求高、成本高等一系列缺点,因此提供了一种灵敏度高、特异性强、重现性好、操作简便且价廉易得的检测降钙素原的无标记电化学免疫传感器的制备方法。
本发明的目的之二是以Pd NCs@CuInOS作为基底材料,对无标记免疫传感器进行层层修饰。利用不同浓度的抗原对基底材料催化性能的阻碍作用不同,实现不同浓度的抗原的催化电流不同,从而实现了对不同浓度降钙素原的高灵敏检测。
本发明的目的之三是提供一种灵敏高效的检测降钙素原的方法。将具有良好导电性,催化活性和生物相容性的Pd NCs@CuInOS作为基底材料和信号标记物来固定抗体,构建无标记电化学免疫传感器实现对降钙素原的快速高效灵敏检测。
为了实现上述目的,本发明采用的技术方案如下:
1. 本发明所述的一种基于Pd NCs功能化CuInOS检测降钙素原的电化学免疫传感器的制备方法,其特征在于,步骤如下:
(1)将直径4 mm 的玻碳电极用三氧化二铝抛光粉抛光处理,乙醇超声清洗,再用超纯水冲洗干净,然后将电极置于5 mmol/L铁氰化钾溶液中,在﹣0.2 ~ 0.6 V电位下扫描,使峰电位差小于110 mV;
(2)将6 µL、浓度为0.4 ~ 2.0 mg/mL的Pd NCs功能化CuInOS复合物(Pd NCs@CuInOS)的水溶液滴涂到电极表面,室温保存至干燥;
(3)继续滴涂6 µL、浓度为10.0 µg/mL的降钙素原捕获抗体标准溶液于玻碳电极表面,4 ºC冰箱中保存至干燥,超纯水清洗;
(4)继续滴涂3 µL、质量分数为1%的牛血清白蛋白溶液至电极表面,封闭非特异性活性位点,4 ºC冰箱中保存至干燥,超纯水清洗;
(5)继续滴涂6 µL、0.0001 ~ 50.0 ng/mL不同浓度的降钙素原标准溶液至电极表面,4 ºC冰箱中保存至干燥,超纯水清洗,即制得检测降钙素原的无标记电化学免疫传感器。
2. 本发明所述的一种基于Pd NCs功能化CuInOS检测降钙素原的电化学免疫传感器的制备方法,所述 CuInOS 纳米粒子和Pd NCs以及Pd NCs@CuInOS的制备方法,步骤如下,步骤如下:
(1)CuInOS 纳米粒子的制备
在磁力搅拌的条件下,4.84 g 三水合硝酸铜和4.42 g 氯化铟加入到500 mL的水溶液中。1.5 g 硫代乙酰胺加入到上述的500 mL的溶液中。30 min后,该溶液被加热到90℃。接下来再加入0.15 mL肼搅拌2 h 后得到沉淀固体,用去离子水洗涤直至洗涤液的pH为7后再用乙醇清洗数次去除有机物。将所得的固体样品放在真空干燥箱干燥24 h,研磨后得到CuInOS 纳米材料;
(2)Pd NCs的制备
Pd NCs是通过将四氯钯酸钠溶液加入到抗环血酸和溴化钾的溶液中制备的。将105 mg的聚乙烯吡咯烷酮,60 mg 的抗坏血酸和600 mg的溴化钾溶解在去离子水中, 将该溶液用油浴加热到80 ℃,并且保持10 min。然后用滴管加入含四氯钯酸钠(57 mg)的3.0mL水溶液,并且将这一反应在80 ℃保持3 h,洗涤离心后将其溶解在10 mL的去离子水中;
(3)Pd NCs@CuInOS的制备
将400 μL的Pd NCs溶液加入到 2 mL的2 mg/mL的CuInOS溶液中,在室温下振荡24h, 离心分离后的产物经多次水洗去除多余的Pd NCs,再分散于去离子水中(2mL)得到PdNCs@CuInOS溶液。
3. 本发明所述的0.0001 ~ 50.0 ng/mL的一系列不同浓度的降钙素原标准溶液为从南京金斯瑞生物科技有限公司购得的1 mg/mL的降钙素原溶液用磷酸盐缓冲溶液稀释得到。
4. 本发明所述的一种基于Pd NCs功能化CuInOS检测降钙素原的电化学免疫传感器的制备方法其特征在于,包括如下步骤:
(1)使用电化学工作站以三电极体系进行测试,饱和甘汞电极为参比电极,铂丝电极为对电极,所制备的一种基于Pd NCs功能化CuInOS检测降钙素原的电化学免疫传感器为工作电极,在10 mL的pH 为4.0~9.0磷酸盐缓冲溶液中测定其电流变化;
(2)电化学工作站参数设置为,循环伏安扫描电位为﹣0.5 V,扫描速率设置为0.1V/s;
(3)使用含10 μL浓度为5 mmol/L的过氧化氢的10 mL磷酸盐缓冲溶液,通过计时电流方法检测不同浓度的降钙素原产生的电化学电流信号强度;所述磷酸盐缓冲溶液,其pH为7.4,用0.1 mol/L磷酸氢二钠和0.1 mol/L磷酸二氢钾配制;
(4)根据所得电流差值与降钙素原浓度呈线性关系,绘制工作曲线;
(5)依据工作曲线的绘制方法进行样品中降钙素原的检测,检测结果从工作曲线中查得。
本发明的有益成果
(1) CuInOS与普通的CuOS相比较,其保留了硫氧化物的铜和硫的不同价态,以及良好的生物相容性和稳定性。铟元素的加入能够增加其在水中的分散性,从而增加了传感器的灵敏性和稳定性;
(2)CuInOS纳米粒子具有大的比表面积从而具有大量的催化活性位点,其作为基底材料能够催化过氧化氢的分解产生更多的活性中间体,从而实现信号的放大;
(3)将CuInOS纳米粒子作为Pd NCs的载体,Pd NCs能和CuInOS通过化学键结合从而使Pd NCs分散的比较均匀,提高传感器的灵敏度。与CuOS比较,CuInOS能够负载更多的PdNCs,进而增加了抗体的负载量,从而能够增大信号;
(4)将Pd NCs@CuInOS与降钙素原标记物检测抗体直接孵化,利用贵金属的生物相容性和较高的催化性能,实现了对降钙素原的高灵敏度检测,在这种无酶的传感器中,避免了因酶的失活所带来的影响,因此对电化学免疫传感器的重现性和稳定性起到很重要的作用;
(5)本发明制备的电化学免疫传感器用于降钙素原标志物的检测,响应时间短,检测限低,线性范围宽,可以实现简单、快速、高灵敏和特异性检测,对降钙素原标志物的检测限可达25.8 fg/mL。
具体实施方式
下面结合具体实施例,进一步阐述本发明。应理解,这些实施例仅用于说明本发明而不用于限制本发明的范围。
实施例1一种基于Pd NCs功能化CuInOS检测降钙素原的电化学免疫传感器的制备方法,其特征在于,步骤如下:
(1)将直径4 mm 的玻碳电极用三氧化二铝抛光粉抛光处理,乙醇超声清洗,再用超纯水冲洗干净,然后将电极置于5 mmol/L铁氰化钾溶液中,在﹣0.2 ~ 0.6 V电位下扫描,使峰电位差小于110 mV;
(2)将6 µL、浓度为1.0 mg/mL的Pd NCs功能化CuInOS复合物(Pd NCs@CuInOS)的水溶液滴涂到电极表面,室温保存至干燥;
(3)继续滴涂6 µL、浓度为10.0 µg/mL的降钙素原捕获抗体标准溶液于玻碳电极表面,4 ºC冰箱中保存至干燥,超纯水清洗;
(4)继续滴涂3 µL、质量分数为1%的牛血清白蛋白溶液至电极表面,封闭非特异性活性位点,4 ºC冰箱中保存至干燥,超纯水清洗;
(5)继续滴涂6 µL、0.0001 ~ 50.0 ng/mL不同浓度的降钙素原标准溶液至电极表面,4 ºC冰箱中保存至干燥,超纯水清洗,即制得检测降钙素原的无标记电化学免疫传感器。
实施例2一种基于Pd NCs功能化CuInOS检测降钙素原的电化学免疫传感器的制备方法,其特征在于,步骤如下:
(1)将直径4 mm 的玻碳电极用三氧化二铝抛光粉抛光处理,乙醇超声清洗,再用超纯水冲洗干净,然后将电极置于5 mmol/L铁氰化钾溶液中,在﹣0.2 ~ 0.6 V电位下扫描,使峰电位差小于110 mV;
((2)将6 µL、浓度为1.6 mg/mL的Pd NCs功能化CuInOS复合物(Pd NCs@CuInOS)的水溶液滴涂到电极表面,室温保存至干燥;
(3)继续滴涂6 µL、浓度为10.0 µg/mL的降钙素原捕获抗体标准溶液于玻碳电极表面,4 ºC冰箱中保存至干燥,超纯水清洗;
(4)继续滴涂3 µL、质量分数为1%的牛血清白蛋白溶液至电极表面,封闭非特异性活性位点,4 ºC冰箱中保存至干燥,超纯水清洗;
(5)继续滴涂6 µL、0.0001 ~ 50.0 ng/mL不同浓度的降钙素原标准溶液至电极表面,4 ºC冰箱中保存至干燥,超纯水清洗,即制得检测降钙素原的无标记电化学免疫传感器。
实施例3一种基于Pd NCs功能化CuInOS检测降钙素原的电化学免疫传感器的制备方法,其特征在于,步骤如下:
(1)将直径4 mm 的玻碳电极用三氧化二铝抛光粉抛光处理,乙醇超声清洗,再用超纯水冲洗干净,然后将电极置于5 mmol/L铁氰化钾溶液中,在﹣0.2 ~ 0.6 V电位下扫描,使峰电位差小于110 mV;
((2)将6 µL、浓度为2.0 mg/mL的Pd NCs功能化CuInOS复合物(Pd NCs@CuInOS)的水溶液滴涂到电极表面,室温保存至干燥;
(3)继续滴涂6 µL、浓度为10.0 µg/mL的降钙素原捕获抗体标准溶液于玻碳电极表面,4 ºC冰箱中保存至干燥,超纯水清洗;
(4)继续滴涂3 µL、质量分数为1%的牛血清白蛋白溶液至电极表面,封闭非特异性活性位点,4 ºC冰箱中保存至干燥,超纯水清洗;
(5)继续滴涂6 µL、0.0001 ~ 50.0 ng/mL不同浓度的降钙素原标准溶液至电极表面,4 ºC冰箱中保存至干燥,超纯水清洗,即制得检测降钙素原的无标记电化学免疫传感器。
实施例4 CuInOS 纳米粒子和Pd NCs以及Pd NCs@CuInOS的制备方法
(1)CuInOS 纳米粒子的制备
在磁力搅拌的条件下,4.84 g 三水合硝酸铜和4.42 g 氯化铟加入到500 mL的水溶液中。1.5 g 硫代乙酰胺加入到上述的500 mL的溶液中。30 min后,该溶液被加热到90℃。接下来再加入0.15 mL肼搅拌2 h 后得到沉淀固体,用去离子水洗涤直至洗涤液的pH为7后再用乙醇清洗数次去除有机物。将所得的固体样品放在真空干燥箱干燥24 h,研磨后得到CuInOS 纳米材料;
(2)Pd NCs的制备
Pd NCs是通过将四氯钯酸钠溶液加入到抗环血酸和溴化钾的溶液中制备的。将105 mg的聚乙烯吡咯烷酮,60 mg 的抗坏血酸和600 mg的溴化钾溶解在去离子水中, 将该溶液用油浴加热到80 ℃,并且保持10 min。然后用滴管加入含四氯钯酸钠(45 mg)的3.0mL水溶液,并且将这一反应在80 ℃保持3 h,洗涤离心后将其溶解在10 mL的去离子水中;
(3)Pd NCs@CuInOS的制备
将400 µL的Pd NCs溶液加入到 2 mL的2 mg/mL的CuInOS溶液中,在室温下振荡24h, 离心分离后的产物经多次水洗去除多余的Pd NCs,再分散于去离子水中(2mL)得到PdNCs@CuInOS溶液。
实施例5 CuInOS 纳米粒子和Pd NCs以及Pd NCs@CuInOS的制备方法
(1)CuInOS 纳米粒子的制备
在磁力搅拌的条件下,4.84 g 三水合硝酸铜和4.42 g 氯化铟加入到500 mL的水溶液中。1.5 g 硫代乙酰胺加入到上述的500 mL的溶液中。30 min后,该溶液被加热到90℃。接下来再加入0.15 mL肼搅拌2 h 后得到沉淀固体,用去离子水洗涤直至洗涤液的pH为7后再用乙醇清洗数次去除有机物。将所得的固体样品放在真空干燥箱干燥24 h,研磨后得到CuInOS 纳米材料;
(2)Pd NCs的制备
Pd NCs是通过将四氯钯酸钠溶液加入到抗环血酸和溴化钾的溶液中制备的。将105 mg的聚乙烯吡咯烷酮,60 mg 的抗坏血酸和600 mg的溴化钾溶解在去离子水中, 将该溶液用油浴加热到80 ℃,并且保持10 min。然后用滴管加入含四氯钯酸钠(57 mg)的3.0mL水溶液,并且将这一反应在80 ℃保持3 h,洗涤离心后将其溶解在10 mL的去离子水中;
(3)Pd NCs@CuInOS的制备
将400 µL的Pd NCs溶液加入到 2 mL的2 mg/mL的CuInOS溶液中,在室温下振荡24h, 离心分离后的产物经多次水洗去除多余的Pd NCs,再分散于去离子水中(2mL)得到PdNCs@CuInOS溶液。
实施例6 CuInOS 纳米粒子和Pd NCs以及Pd NCs@CuInOS的制备方法
(1)CuInOS 纳米粒子的制备
在磁力搅拌的条件下,4.84 g 三水合硝酸铜和4.42 g 氯化铟加入到500 mL的水溶液中。1.5 g 硫代乙酰胺加入到上述的500 mL的溶液中。30 min后,该溶液被加热到90℃。接下来再加入0.15 mL肼搅拌2 h 后得到沉淀固体,用去离子水洗涤直至洗涤液的pH为7后再用乙醇清洗数次去除有机物。将所得的固体样品放在真空干燥箱干燥24 h,研磨后得到CuInOS 纳米材料;
(2)Pd NCs的制备
Pd NCs是通过将四氯钯酸钠溶液加入到抗环血酸和溴化钾的溶液中制备的。将105 mg的聚乙烯吡咯烷酮,60 mg 的抗坏血酸和600 mg的溴化钾溶解在去离子水中, 将该溶液用油浴加热到80 ℃,并且保持10 min。然后用滴管加入含四氯钯酸钠(65 mg)的3.0mL水溶液,并且将这一反应在80 ℃保持3 h,洗涤离心后将其溶解在10 mL的去离子水中;
(3)Pd NCs@CuInOS的制备
将400 µL的Pd NCs溶液加入到 2 mL的2 mg/mL的CuInOS溶液中,在室温下振荡24h, 离心分离后的产物经多次水洗去除多余的Pd NCs,再分散于去离子水中(2mL)得到PdNCs@CuInOS溶液。
实施例7 CuInOS 纳米粒子和Pd NCs以及Pd NCs@CuInOS的制备方法
(1)CuInOS 纳米粒子的制备
在磁力搅拌的条件下,4.84 g 三水合硝酸铜和4.42 g 氯化铟加入到500 mL的水溶液中。1.5 g 硫代乙酰胺加入到上述的500 mL的溶液中。30 min后,该溶液被加热到90℃。接下来再加入0.15 mL肼搅拌2 h 后得到沉淀固体,用去离子水洗涤直至洗涤液的pH为7后再用乙醇清洗数次去除有机物。将所得的固体样品放在真空干燥箱干燥24 h,研磨后得到CuInOS 纳米材料;
(2)Pd NCs的制备
Pd NCs是通过将四氯钯酸钠溶液加入到抗环血酸和溴化钾的溶液中制备的。将105 mg的聚乙烯吡咯烷酮,60 mg 的抗坏血酸和600 mg的溴化钾溶解在去离子水中, 将该溶液用油浴加热到80 ℃,并且保持10 min。然后用滴管加入含四氯钯酸钠(57 mg)的3.0mL水溶液,并且将这一反应在80 ℃保持3 h,洗涤离心后将其溶解在10 mL的去离子水中;
(3)Pd NCs@CuInOS的制备
将300 µL的Pd NCs溶液加入到 2 mL的2 mg/mL的CuInOS溶液中,在室温下振荡24h, 离心分离后的产物经多次水洗去除多余的Pd NCs,再分散于去离子水中(2mL)得到PdNCs@CuInOS溶液。
实施例8 CuInOS 纳米粒子和Pd NCs以及Pd NCs@CuInOS的制备方法
(1)CuInOS 纳米粒子的制备
在磁力搅拌的条件下,4.84 g 三水合硝酸铜和4.42 g 氯化铟加入到500 mL的水溶液中。1.5 g 硫代乙酰胺加入到上述的500 mL的溶液中。30 min后,该溶液被加热到90℃。接下来再加入0.15 mL肼搅拌2 h 后得到沉淀固体,用去离子水洗涤直至洗涤液的pH为7后再用乙醇清洗数次去除有机物。将所得的固体样品放在真空干燥箱干燥24 h,研磨后得到CuInOS 纳米材料;
(2)Pd NCs的制备
Pd NCs是通过将四氯钯酸钠溶液加入到抗环血酸和溴化钾的溶液中制备的。将105 mg的聚乙烯吡咯烷酮,60 mg 的抗坏血酸和600 mg的溴化钾溶解在去离子水中, 将该溶液用油浴加热到80 ℃,并且保持10 min。然后用滴管加入含四氯钯酸钠(57 mg)的3.0mL水溶液,并且将这一反应在80 ℃保持3 h,洗涤离心后将其溶解在10 mL的去离子水中;
(3)Pd NCs@CuInOS的制备
将400 µL的Pd NCs溶液加入到 2 mL的2 mg/mL的CuInOS溶液中,在室温下振荡24h, 离心分离后的产物经多次水洗去除多余的Pd NCs,再分散于去离子水中(2mL)得到PdNCs@CuInOS溶液。
实施例9 CuInOS 纳米粒子和Pd NCs以及Pd NCs@CuInOS的制备方法
(1)CuInOS 纳米粒子的制备
在磁力搅拌的条件下,4.84 g 三水合硝酸铜和4.42 g 氯化铟加入到500 mL的水溶液中。1.5 g 硫代乙酰胺加入到上述的500 mL的溶液中。30 min后,该溶液被加热到90℃。接下来再加入0.15 mL肼搅拌2 h 后得到沉淀固体,用去离子水洗涤直至洗涤液的pH为7后再用乙醇清洗数次去除有机物。将所得的固体样品放在真空干燥箱干燥24 h,研磨后得到CuInOS 纳米材料;
(2)Pd NCs的制备
Pd NCs是通过将四氯钯酸钠溶液加入到抗环血酸和溴化钾的溶液中制备的。将105 mg的聚乙烯吡咯烷酮,60 mg 的抗坏血酸和600 mg的溴化钾溶解在去离子水中, 将该溶液用油浴加热到80 ℃,并且保持10 min。然后用滴管加入含四氯钯酸钠(57 mg)的3.0mL水溶液,并且将这一反应在80 ℃保持3 h,洗涤离心后将其溶解在10 mL的去离子水中;
(3)Pd NCs@CuInOS的制备
将500 µL的Pd NCs溶液加入到 2 mL的2 mg/mL的CuInOS溶液中,在室温下振荡24h, 离心分离后的产物经多次水洗去除多余的Pd NCs,再分散于去离子水中(2mL)得到PdNCs@CuInOS溶液。
Claims (3)
1.一种基于Pd NCs功能化CuInOS检测降钙素原的无标记电化学免疫传感器的制备方法,其特征在于,步骤如下:
(1)将直径4 mm的玻碳电极用三氧化二铝抛光粉抛光处理,乙醇超声清洗,再用超纯水冲洗干净,然后将电极置于5 mmol/L铁氰化钾溶液中,在﹣0.2~+0.6 V电位下扫描,使峰电位差小于110 mV;
(2)将6 µL、浓度为0.4~2.0 mg/mL的Pd NCs@CuInOS复合物的水溶液滴涂到电极表面,室温保存至干燥;
(3)继续滴涂6 µL、浓度为10.0 µg/mL的降钙素原捕获抗体标准溶液于玻碳电极表面,4 ºC冰箱中保存至干燥,超纯水清洗;
(4)继续滴涂3 µL、质量分数为1%的牛血清白蛋白溶液至电极表面,封闭非特异性活性位点,4 ºC冰箱中保存至干燥,超纯水清洗;
(5)继续滴涂6 µL、0.0001~50.0 ng/mL不同浓度的降钙素原标准溶液至电极表面,4ºC冰箱中保存至干燥,超纯水清洗,即制得检测降钙素原的无标记电化学免疫传感器;
(6)CuInOS纳米粒子的制备,在磁力搅拌的条件下,4.84 g三水合硝酸铜和4.42 g氯化铟加入到500 mL的水溶液中,1.5 g硫代乙酰胺加入到上述的500 mL的溶液中,30 min后,该溶液被加热到90 ℃,接下来再加入0.15 mL肼搅拌2 h后得到沉淀固体,用去离子水洗涤直至洗涤液的pH为7后再用乙醇清洗数次去除有机物,将所得的固体样品放在真空干燥箱干燥24 h,研磨后得到CuInOS纳米材料;
(7)Pd NCs的制备,Pd NCs是通过将四氯钯酸钠溶液加入到抗环血酸和溴化钾的溶液中制备的,将105 mg的聚乙烯吡咯烷酮,60 mg的抗坏血酸和600 mg的溴化钾溶解在去离子水中,将该溶液用油浴加热到80℃,并且保持10 min,然后用滴管加入含57 mg四氯钯酸钠的3.0 mL水溶液,并且将这一反应在80 ℃保持3 h,洗涤离心后将其溶解在10 mL的去离子水中;
(8)Pd NCs@CuInOS的制备,将400 μL的Pd NCs溶液加入到2 mL的2 mg/mL的CuInOS溶液中,在室温下振荡24 h,离心分离后的产物经多次水洗去除多余的Pd NCs,再分散于2mL去离子水中得到Pd NCs@CuInOS溶液。
2.如权利要求1所述的0.0001~50.0 ng/mL的一系列不同浓度的降钙素原标准溶液为从南京金斯瑞生物科技有限公司购得的1 mg/mL的降钙素原溶液用磷酸盐缓冲溶液稀释得到。
3.如权利要求1所述的制备方法制备的一种基于Pd NCs@CuInOS的无标记电化学免疫传感器用于降钙素原的检测其特征在于,包括如下步骤:
(1)使用电化学工作站以三电极体系进行测试,饱和甘汞电极为参比电极,铂丝电极为对电极,所制备的一种基于Pd NCs@CuInOS的无标记电化学免疫传感器为工作电极,在10mL的pH为4.0~9.0磷酸盐缓冲溶液中测定其电流变化;
(2)电化学工作站参数设置为,循环伏安扫描电位为﹣0.5 V,扫描速率设置为0.1 V/s;
(3)使用含10 μL浓度为5 mmol/L的过氧化氢的10 mL磷酸盐缓冲溶液,通过计时电流方法检测不同浓度的降钙素原产生的电化学电流信号强度;所述磷酸盐缓冲溶液,其pH为7.4,用0.1 mol/L磷酸氢二钠和0.1 mol/L磷酸二氢钾配制;
(4)根据所得电流差值与降钙素原浓度呈线性关系,绘制工作曲线;
(5)依据工作曲线的绘制方法进行样品中降钙素原的检测,检测结果从工作曲线中查得。
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