CN112147194A - 一种电沉积金和铂-氧硫化铜检测胰岛素的电化学传感器的制备方法 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及电沉积金和铂‑氧硫化铜检测胰岛素的电化学传感器的制备方法。本发明以电沉积金作为基底材料,铂纳米粒子修饰氧硫化铜作为二抗标记物,以磷酸缓冲溶液作为底液,采用电化学传感器的层层修饰方法,构建了信号增强型电化学免疫传感器,实现了在0.5 fg/mL~50.0 ng/mL线性范围内对胰岛素的灵敏检测,检测限为0.17 fg/mL。
Description
技术领域
本发明涉及一种电沉积金和铂-氧硫化铜检测胰岛素的电化学传感器的制备方法。具体是以电沉积金作为基底,铂纳米粒子功能化的氧硫化铜作为传感平台,制备了一种检测胰岛素的信号增强型的电化学免疫传感器,属于电化学免疫传感领域。
背景技术
胰岛素在胰岛B细胞中合成,而胰岛素合成的控制基因在第11对染色体短臂上。基因正常则生成的胰岛素结构是正常的,若基因突变则生成的胰岛素结构是不正常的,为变异胰岛素。在 B细胞的细胞核中,第11对染色体短臂上胰岛素基因区DNA向mRNA转录,mRNA从细胞核移向细胞浆的内质网,转译成氨基酸相连的长肽--前胰岛素原,前胰岛素原经过蛋白水解作用除其前肽,生成胰岛素原。胰岛素原随细胞浆中的微泡进入高尔基体,由86个氨基酸组成的长肽链--胰岛素原在高尔基体中经蛋白酶水解生成胰岛素及C肽,分泌到B细胞外,进入血液循环中。未经过蛋白酶水解的胰岛素原,一小部分随着胰岛素进入血液循环,胰岛素原的生物活性仅及胰岛素的5%。胰岛素的分子量5700,由两条氨基酸肽链组成,胰岛B细胞中储备胰岛素约200U,每天分泌约40U。空腹时,血浆胰岛素浓度是5~15μU/mL,而进餐后血浆胰岛素水平可增加5~10倍。胰岛素的生物合成速度受血浆葡萄糖浓度的影响,当血糖浓度升高时,B细胞中胰岛素原含量增加,胰岛素合成加速。胰岛素是与C肽以相等分子分泌进入血液的。临床上使用胰岛素治疗的病人,血清中存在胰岛素抗体,影响放射免疫方法测定血胰岛素水平,在这种情况下可通过测定血浆C肽水平,来了解内源性胰岛素分泌状态。因此,可以检测胰岛素而实时监测糖尿病人。
电化学免疫技术是将电化学和生物学交叉起来的,能够很好的应用到分析中。利用电化学免疫传感技术检测胰岛素时可以利用抗原和抗体的特异性结合从而使理论与应用结合起来,电化学免疫传感器通常是用来检测超痕量标记物等临床上难以解决的问题。因此,在电化学免疫传感器的构建过程中,寻找高灵敏的催化材料至关重要。近年来,随着科学技术的快速发展,纳米材料得到了越来越多的青睐。铂纳米粒子由于其小尺寸,催化性能高以及生物相容性好得到了很好应用。氧硫化铜基于其催化性能和大的比表面积形成的负载能力具有增强信号的作用。
发明内容
本发明的目的之一在玻碳电极表面电沉积金和制备铂修饰的氧硫化铜纳米材料,在合成过程中通过调节氯金酸、氯铂酸钾的浓度形成不同浓度的铂纳米粒子功能化氧硫化铜的纳米材料。
本发明的目的之二是电沉积金纳米粒子基底材料,铂修饰的氧硫化铜作为二抗标记物材料;其中,电沉积金具有大比表面积和优异导电性;铂修饰的氧硫化铜具有好的催化性能,从而增大催化信号。
本发明的目的之三是电沉积金和铂修饰的氧硫化铜纳米材料,其中在合成过程中通过调节氯金酸、氯铂酸钾的浓度形成不同浓度的铂纳米粒子功能化氧硫化铜的纳米材料并且比较其性能。
本发明的目的之四是以电沉积金为基底材料可以利用化学键负载大量抗体,铂修饰的氧硫化铜作为二抗标记物,以胰岛素抗原作为目标分析物,利用抗原和抗体之间的特异性结合,构建夹心型电化学免疫传感器;实现对胰岛素的准确检测。
为了实现上述目的,本发明采用的技术方案如下:
1. 本发明所述一种电沉积金和铂-氧硫化铜检测胰岛素的电化学传感器的制备方法,所述电化学免疫传感器的制备步骤如下:
(1) 将直径为4 mm的玻碳电极分别用0.05、0.3和1.0 mm氧化铝粉打磨抛光至镜面,再超纯水洗涤干净;
(2)将玻碳电极放在0.01~ 0.03 mmol/L的氯金酸电化学沉积液中,沉积过程中利用计时电流方法,在-0.6V的条件下沉积 100 s 后用超纯水清洗,在电极表面沉积金纳米粒子;
(3)继续滴涂3 µL、浓度为10 μg/mL的胰岛素抗体标准溶液于玻碳电极表面,4 ºC冰箱中孵育12 h,超纯水清洗;
(4)继续滴涂3 μL、质量分数为1%的牛血清白蛋白溶液来封闭非特异性活性位点,4 ºC冰箱中保存至干燥,超纯水清洗;
(5)继续将6 μL、浓度为0.5 fg/mL~50.0 ng/mL的一系列不同浓度的胰岛素抗原标准溶液滴涂在电极表面,4 ºC冰箱中保存至干燥,超纯水清洗;
(6)继续滴加1.0 mg/mL~3.0 mg/mL的铂修饰的硫氧化铜二抗标记物,4 ºC冰箱中保存至干燥,超纯水清洗;
2. 如权利要求书1一种电沉积金和铂-氧硫化铜检测胰岛素的电化学传感器的制备方法,所述电极表面电沉积金纳米粒子和铂修饰氧硫化铜等材料的制备方法,步骤如下:
(1)电极表面电沉积金的合成
1)将玻碳电极放在 0.01~ 0.03 mmol/L的氯金酸电化学沉积液中,沉积过程中用计时电流方法,在-0.6V的条件下沉积 100 s 后用超纯水清洗,在电极表面沉积了金纳米粒子;
(2)铂修饰氧硫化铜的制备
(1)花状氧硫化铜的制备
在磁力搅拌的条件下,将4.5 g 三水合硝酸铜加入到500 mL水溶液中;再将1.5 g硫代乙酰胺加入到上述的500 mL溶液中;30 min后,将该溶液加热到90 ºC;再加入0.12 mL肼搅拌2 h后得到沉淀固体,用去离子水洗涤直至洗涤液pH为7后再用乙醇清洗数次去除有机物;将所得固体样品放在真空干燥箱干燥24 h,研磨后得到花状氧硫化铜纳米材料;
(2)铂纳米粒子的制备
铂纳米粒子是通过将四氯铂酸钾溶液加入到抗坏血酸和溴化钾的溶液中还原制备的;将105 mg的聚乙烯吡咯烷酮,20 mg~40 mg的抗坏血酸和200 mg~400 mg的溴化钾溶解在去离子水中, 将该溶液用油浴加热到90 ºC,并且保持10 min;然后用滴管逐滴加入含四氯铂酸钾(20 mg~40 mg)的3.0 mL水溶液,并且将这一反应在80 ºC保持3 h,洗涤离心后将其溶解在10 mL的去离子水中;
(3) 铂纳米粒子功能化氧硫化铜纳米材料的制备
将100 μL~300 μL的铂纳米粒子溶液加入到 2 mL的1.0 ~ 2.0 mg/mL的氧硫化铜溶液中,在室温下振荡24 h, 离心分离后的产物经多次水洗去除多余的铂纳米粒子,再分散于去离子水中(2 mL)得到铂纳米粒子功能化花状氧硫化铜溶液;
3.如权利要求1所述的 0.5 fg/mL~50.0 ng/mL的一系列不同浓度的胰岛素标准溶液为从南京金斯瑞生物科技有限公司购得的1 mg/mL的胰岛素溶液用磷酸盐缓冲溶液稀释得到;
4.如权利要求1所述的胰岛素的检测,其特征在于,检测步骤如下:
(1)使用电化学工作站以三电极体系进行测试,饱和甘汞电极为参比电极,铂丝电极为对电极,所制备的电沉积金作为基底,铂纳米粒子功能化花状氧硫化铜电化学免疫传感器为工作电极,在10 mL的pH 为4.0~9.0磷酸盐缓冲溶液中测定其电流变化;
(2)电化学工作站参数设置为,扫描电位为-0.2~0.6 V,扫描速率设置为0.1 ~0.3 V/s;
(3)使用含10 mL的0.1 mol/L磷酸盐缓冲溶液作为底液,通过差分脉冲伏安法检测不同浓度的胰岛素产生的电化学电流信号强度;所述磷酸盐缓冲溶液,其pH为7.4,用0.1mol/L磷酸氢二钠和0.1 mol/L磷酸二氢钾配制;
(4)根据所得电流值与胰岛素浓度呈线性关系,绘制工作曲线;
(5)依据工作曲线的绘制方法进行样品中胰岛素的检测,检测结果从工作曲线中查得。
本发明的有益成果
(1)在电极表面电沉积金可以利用化学键结合接大量的抗体。
(2)氧硫化铜具有大的比表面积和催化活性位点,其作为标记材料能够催化双氧水的的分解产生更多的活性中间体,从而实现信号的放大。
(3)氧硫化铜可作为铂纳米粒子的载体同时铂纳米粒子可以通过化学键均匀的分散在氧硫化铜的表面,能够固载更多的抗体从而增强信号。
(4)将铂纳米粒子修饰的氧硫化铜与胰岛素抗体孵化作为二抗标记物,利用铂纳米粒子的生物相容性和催化性能以及氧硫化铜的大比表面积,实现了对胰岛素的高灵敏度检测,避免了因酶的失活所带来的影响,提高了免疫传感器的重现性和稳定性。
(5)本发明制备的电化学免疫传感器用于胰岛的检测,响应时间短,检测限低,线性范围宽,可以实现简单、快速、高灵敏和特异性检测。在0.5 fg/mL~50.0 ng/mL浓度范围内实现了对胰岛素的高选择性和高灵敏检测,检测限低至0.17 fg/mL。
具体实施方式
下面结合具体实施例,进一步阐述本发明。应理解,这些实施例仅用于说明本发明而不用于限制本发明的范围
实施例1一种电沉积金和铂-氧硫化铜检测胰岛素的电化学传感器的制备方法
(1) 将直径为4 mm的玻碳电极分别用0.05、0.3和1.0 mm氧化铝粉打磨抛光至镜面,再超纯水洗涤干净;
(2)将玻碳电极放在0.01 mmol/L的氯金酸电化学沉积液中,沉积过程中利用计时电流方法,在-0.6V的条件下沉积 100 s 后用超纯水清洗,在电极表面沉积金纳米粒子;
(3)继续滴涂3 µL、浓度为10 μg/mL的胰岛素抗体标准溶液于玻碳电极表面,4 ºC冰箱中孵育12 h,超纯水清洗;
(4)继续滴涂3 μL、质量分数为1%的牛血清白蛋白溶液来封闭非特异性活性位点,4 ºC冰箱中保存至干燥,超纯水清洗;
(5)继续将6 μL、浓度为0.5 fg/mL~50.0 ng/mL的一系列不同浓度的胰岛素抗原标准溶液滴涂在电极表面,4 ºC冰箱中保存至干燥,超纯水清洗;
(6)继续滴加1.0 mg/mL的铂修饰的硫氧化铜二抗标记物,4 ºC冰箱中保存至干燥,超纯水清洗。
实施例2一种电沉积金和铂-氧硫化铜检测胰岛素的电化学传感器的制备方法
(1) 将直径为4 mm的玻碳电极分别用0.05、0.3和1.0 mm氧化铝粉打磨抛光至镜面,再超纯水洗涤干净;
(2)将玻碳电极放在0.02 mmol/L的氯金酸电化学沉积液中,沉积过程中利用计时电流方法,在-0.6V的条件下沉积 100 s 后用超纯水清洗,在电极表面沉积金纳米粒子;
(3)继续滴涂3 µL、浓度为10 μg/mL的胰岛素抗体标准溶液于玻碳电极表面,4 ºC冰箱中孵育12 h,超纯水清洗;
(4)继续滴涂3 μL、质量分数为1%的牛血清白蛋白溶液来封闭非特异性活性位点,4 ºC冰箱中保存至干燥,超纯水清洗;
(5)继续将6 μL、浓度为0.5 fg/mL~50.0 ng/mL的一系列不同浓度的胰岛素抗原标准溶液滴涂在电极表面,4 ºC冰箱中保存至干燥,超纯水清洗;
(6)继续滴加2.0 mg/mL的铂修饰的硫氧化铜二抗标记物,4 ºC冰箱中保存至干燥,超纯水清洗。
实施例3一种电沉积金和铂-氧硫化铜检测胰岛素的电化学传感器的制备方法
(1) 将直径为4 mm的玻碳电极分别用0.05、0.3和1.0 mm氧化铝粉打磨抛光至镜面,再超纯水洗涤干净;
(2)将玻碳电极放在0.03 mmol/L的氯金酸电化学沉积液中,沉积过程中利用计时电流方法,在-0.6V的条件下沉积 100 s 后用超纯水清洗,在电极表面沉积金纳米粒子;
(3)继续滴涂3 µL、浓度为10 μg/mL的胰岛素抗体标准溶液于玻碳电极表面,4 ºC冰箱中孵育12 h,超纯水清洗;
(4)继续滴涂3 μL、质量分数为1%的牛血清白蛋白溶液来封闭非特异性活性位点,4 ºC冰箱中保存至干燥,超纯水清洗;
(5)继续将6 μL、浓度为0.5 fg/mL~50.0 ng/mL的一系列不同浓度的胰岛素抗原标准溶液滴涂在电极表面,4 ºC冰箱中保存至干燥,超纯水清洗;
(6)继续滴加3.0 mg/mL的铂修饰的硫氧化铜二抗标记物,4 ºC冰箱中保存至干燥,超纯水清洗。
实施例4电沉积金、氧硫化铜以及铂纳米粒子的制备
(1)电极表面电沉积金的合成
1)将玻碳电极放在 0.01 mmol/L的氯金酸电化学沉积液中,沉积过程中用计时电流方法,在-0.6 V的条件下沉积 100 s 后用超纯水清洗,在电极表面沉积了金纳米粒子;
(2)铂修饰氧硫化铜的制备
1)花状氧硫化铜的制备
在磁力搅拌的条件下,将4.5 g 三水合硝酸铜加入到500 mL水溶液中;再将1.5 g硫代乙酰胺加入到上述的500 mL溶液中;30 min后,将该溶液加热到90 ºC;再加入0.12 mL肼搅拌2 h后得到沉淀固体,用去离子水洗涤直至洗涤液pH为7后再用乙醇清洗数次去除有机物;将所得固体样品放在真空干燥箱干燥24 h,研磨后得到花状氧硫化铜纳米材料;
2)铂纳米粒子的制备
铂纳米粒子是通过将四氯铂酸钾溶液加入到抗坏血酸和溴化钾的溶液中还原制备的;将105 mg的聚乙烯吡咯烷酮,20 mg的抗坏血酸和200 mg的溴化钾溶解在去离子水中, 将该溶液用油浴加热到90 ºC,并且保持10 min;然后用滴管逐滴加入含四氯铂酸钾(20 mg)的3.0 mL水溶液,并且将这一反应在80 ºC保持3 h,洗涤离心后将其溶解在10 mL的去离子水中;
3) 铂纳米粒子功能化氧硫化铜纳米材料的制备
将100 μL的铂纳米粒子溶液加入到 2 mL的1.0 mg/mL的氧硫化铜溶液中,在室温下振荡24 h, 离心分离后的产物经多次水洗去除多余的铂纳米粒子,再分散于去离子水中(2mL)得到铂纳米粒子功能化花状氧硫化铜溶液。
实施例5电沉积金、氧硫化铜以及铂纳米粒子的制备
1)电极表面电沉积金的合成
(1)将玻碳电极放在 0.02 mmol/L的氯金酸电化学沉积液中,沉积过程中用计时电流方法,在-0.6 V的条件下沉积 100 s 后用超纯水清洗,在电极表面沉积了金纳米粒子;
2)铂修饰氧硫化铜的制备
(1)花状氧硫化铜的制备
在磁力搅拌的条件下,将4.5 g 三水合硝酸铜加入到500 mL水溶液中;再将1.5 g硫代乙酰胺加入到上述的500 mL溶液中;30 min后,将该溶液加热到90 ºC;再加入0.12 mL肼搅拌2 h后得到沉淀固体,用去离子水洗涤直至洗涤液pH为7后再用乙醇清洗数次去除有机物;将所得固体样品放在真空干燥箱干燥24 h,研磨后得到花状氧硫化铜纳米材料;
(2)铂纳米粒子的制备
铂纳米粒子是通过将四氯铂酸钾溶液加入到抗坏血酸和溴化钾的溶液中还原制备的;将105 mg的聚乙烯吡咯烷酮,30 mg的抗坏血酸和300 mg的溴化钾溶解在去离子水中, 将该溶液用油浴加热到90 ºC,并且保持10 min;然后用滴管逐滴加入含四氯铂酸钾(30 mg)的3.0 mL水溶液,并且将这一反应在80 ºC保持3 h,洗涤离心后将其溶解在10 mL的去离子水中;
(3) 铂纳米粒子功能化氧硫化铜纳米材料的制备
将200 μL的铂纳米粒子溶液加入到 2 mL的1.5 mg/mL的氧硫化铜溶液中,在室温下振荡24 h, 离心分离后的产物经多次水洗去除多余的铂纳米粒子,再分散于去离子水中(2mL)得到铂纳米粒子功能化花状氧硫化铜溶液。
实施例6电沉积金、氧硫化铜以及铂纳米粒子的制备
1)电极表面电沉积金的合成
(1)将玻碳电极放在 0.03 mmol/L的氯金酸电化学沉积液中,沉积过程中用计时电流方法,在-0.6 V的条件下沉积 100 s 后用超纯水清洗,在电极表面沉积了金纳米粒子;
2)铂修饰氧硫化铜的制备
(1)花状氧硫化铜的制备
在磁力搅拌的条件下,将4.5 g 三水合硝酸铜加入到500 mL水溶液中;再将1.5 g硫代乙酰胺加入到上述的500 mL溶液中;30 min后,将该溶液加热到90 ºC;再加入0.12 mL肼搅拌2 h后得到沉淀固体,用去离子水洗涤直至洗涤液pH为7后再用乙醇清洗数次去除有机物;将所得固体样品放在真空干燥箱干燥24 h,研磨后得到花状氧硫化铜纳米材料;
(2)铂纳米粒子的制备
铂纳米粒子是通过将四氯铂酸钾溶液加入到抗坏血酸和溴化钾的溶液中还原制备的;将105 mg的聚乙烯吡咯烷酮,40 mg的抗坏血酸和400 mg的溴化钾溶解在去离子水中, 将该溶液用油浴加热到90 ºC,并且保持10 min;然后用滴管逐滴加入含四氯铂酸钾(40 mg)的3.0 mL水溶液,并且将这一反应在80 ºC保持3 h,洗涤离心后将其溶解在10 mL的去离子水中;
(3) 铂纳米粒子功能化氧硫化铜纳米材料的制备
将300 μL的铂纳米粒子溶液加入到 2 mL的2.0 mg/mL的氧硫化化铜溶液中,在室温下振荡24 h, 离心分离后的产物经多次水洗去除多余的铂纳米粒子,再分散于去离子水中(2mL)得到铂纳米粒子功能化花状氧硫化铜溶液。
实施例7 胰岛素的检测
(1)使用电化学工作站以三电极体系进行测试,饱和甘汞电极为参比电极,铂丝电极为对电极,所制备的电沉积金作为基底,铂纳米粒子功能化花状氧硫化铜电化学免疫传感器为工作电极,在10 mL的pH 为4.0~9.0磷酸盐缓冲溶液中测定其电流变化;
(2)电化学工作站参数设置为,扫描电位为-0.2~0.6 V,扫描速率设置为0.1 V/s;
(3)使用含10 mL的0.1 mol/L磷酸盐缓冲溶液作为底液,通过差分脉冲伏安法检测不同浓度的胰岛素产生的电化学电流信号强度;所述磷酸盐缓冲溶液,其pH为7.4,用0.1mol/L磷酸氢二钠和0.1 mol/L磷酸二氢钾配制;
(4)根据所得电流值与胰岛素浓度呈线性关系,绘制工作曲线;
(5)依据工作曲线的绘制方法进行样品中胰岛素的检测,检测结果从工作曲线中查得。
实施例8 胰岛素的检测
(1)使用电化学工作站以三电极体系进行测试,饱和甘汞电极为参比电极,铂丝电极为对电极,所制备的电沉积金作为基底,铂纳米粒子功能化花状氧硫化铜电化学免疫传感器为工作电极,在10 mL的pH 为4.0~9.0磷酸盐缓冲溶液中测定其电流变化;
(2)电化学工作站参数设置为,扫描电位为-0.2~0.6 V,扫描速率设置为0.2 V/s;
(3)使用含10 mL的0.1 mol/L磷酸盐缓冲溶液作为底液,通过差分脉冲伏安法检测不同浓度的胰岛素产生的电化学电流信号强度;所述磷酸盐缓冲溶液,其pH为7.4,用0.1mol/L磷酸氢二钠和0.1 mol/L磷酸二氢钾配制;
(4)根据所得电流值与胰岛素浓度呈线性关系,绘制工作曲线;
(5)依据工作曲线的绘制方法进行样品中胰岛素的检测,检测结果从工作曲线中查得。
实施例9 胰岛素的检测
(1)使用电化学工作站以三电极体系进行测试,饱和甘汞电极为参比电极,铂丝电极为对电极,所制备的电沉积金作为基底,铂纳米粒子功能化花状氧硫化铜电化学免疫传感器为工作电极,在10 mL的pH 为4.0~9.0磷酸盐缓冲溶液中测定其电流变化;
(2)电化学工作站参数设置为,扫描电位为-0.2~0.6 V,扫描速率设置为0.3 V/s;
(3)使用含10 mL的0.1 mol/L磷酸盐缓冲溶液作为底液,通过差分脉冲伏安法检测不同浓度的胰岛素产生的电化学电流信号强度;所述磷酸盐缓冲溶液,其pH为7.4,用0.1mol/L磷酸氢二钠和0.1 mol/L磷酸二氢钾配制;
(4)根据所得电流值与胰岛素浓度呈线性关系,绘制工作曲线;
(5)依据工作曲线的绘制方法进行样品中胰岛素的检测,检测结果从工作曲线中查得,
应用实施例2和4构建的传感器按照实施例8的检测方法对胰岛素抗原溶液进行了检测,测得传感器的线性检测范围为0.5 fg/mL~50.0 ng/mL,检测限为0.17 fg/mL。
Claims (4)
1.一种电沉积金和铂-氧硫化铜检测胰岛素的电化学传感器的制备方法,其特征在于,电化学免疫传感器的制备包括以下步骤:
(1) 将直径为4 mm的玻碳电极分别用0.05、0.3和1.0 mm氧化铝粉打磨抛光至镜面,再超纯水洗涤干净;
(2)将玻碳电极放在0.01~ 0.03 mmol/L的氯金酸电化学沉积液中,沉积过程中利用计时电流方法,在-0.6 V的条件下沉积 100 s 后用超纯水清洗,在电极表面沉积金纳米粒子;
(3)继续滴涂3 µL、浓度为10 μg/mL的胰岛素抗体标准溶液于玻碳电极表面,4 ºC冰箱中孵育12 h,超纯水清洗;
(4)继续滴涂3 μL、质量分数为1%的牛血清白蛋白溶液来封闭非特异性活性位点,4 ºC冰箱中保存至干燥,超纯水清洗;
(5)继续将6 μL、浓度为0.5 fg/mL~50.0 ng/mL的一系列不同浓度的胰岛素抗原标准溶液滴涂在电极表面,4 ºC冰箱中保存至干燥,超纯水清洗;
(6)继续滴加1.0 mg/mL~3.0 mg/mL的铂修饰的硫氧化铜二抗标记物,4 ºC冰箱中保存至干燥,超纯水清洗。
2.如权利要求书1一种电沉积金和铂-氧硫化铜检测胰岛素的电化学传感器的制备方法,所述电极表面电沉积金纳米粒子和铂修饰氧硫化铜等材料的制备方法,步骤如下:
(1)电极表面电沉积金的合成
1)将玻碳电极放在 0.01~ 0.03 mmol/L的氯金酸电化学沉积液中,沉积过程中用计时电流方法,在-0.6 V的条件下沉积 100 s 后用超纯水清洗,在电极表面沉积了金纳米粒子;
(2)铂修饰氧硫化铜(Pt@CuOS)的制备
(1)花状氧硫化铜的制备
在磁力搅拌的条件下,将4.5 g 三水合硝酸铜加入到500 mL水溶液中;再将1.5 g硫代乙酰胺加入到上述的500 mL溶液中;30 min后,将该溶液加热到90 ºC;再加入0.12 mL肼搅拌2 h后得到沉淀固体,用去离子水洗涤直至洗涤液pH为7后再用乙醇清洗数次去除有机物;将所得固体样品放在真空干燥箱干燥24 h,研磨后得到花状氧硫化铜纳米材料;
(2)铂纳米粒子的制备
铂纳米粒子是通过将四氯铂酸钾溶液加入到抗坏血酸和溴化钾的溶液中还原制备的;将105 mg的聚乙烯吡咯烷酮,20 mg~40 mg的抗坏血酸和200 mg~400 mg的溴化钾溶解在去离子水中, 将该溶液用油浴加热到90 ºC,并且保持10 min;然后用滴管逐滴加入含四氯铂酸钾(20 mg~40 mg)的3.0 mL水溶液,并且将这一反应在80 ºC保持3 h,洗涤离心后将其溶解在10 mL的去离子水中;
(3) 铂纳米粒子功能化氧硫化铜纳米材料的制备
将100 μL~300 μL的铂纳米粒子溶液加入到 2 mL的1.0 ~ 2.0 mg/mL的氧硫化铜溶液中,在室温下振荡24 h, 离心分离后的产物经多次水洗去除多余的铂纳米粒子,再分散于去离子水中(2 mL)得到铂纳米粒子功能化花状氧硫化铜溶液。
3.如权利要求1所述的 0.5 fg/mL~50.0 ng/mL的一系列不同浓度的胰岛素标准溶液为从南京金斯瑞生物科技有限公司购得的1 mg/mL的胰岛素溶液用磷酸盐缓冲溶液稀释得到。
4.如权利要求1所述的胰岛素的检测,其特征在于,检测步骤如下:
(1)使用电化学工作站以三电极体系进行测试,饱和甘汞电极为参比电极,铂丝电极为对电极,所制备的电沉积金作为基底,铂纳米粒子功能化花状氧硫化铜电化学免疫传感器为工作电极,在10 mL的pH 为4.0~9.0磷酸盐缓冲溶液中测定其电流变化;
(2)电化学工作站参数设置为,扫描电位为-0.2~0.6 V,扫描速率设置为0.1 ~0.3 V/s;
(3)使用含10 mL的0.1 mol/L磷酸盐缓冲溶液作为底液,通过差分脉冲伏安法检测不同浓度的胰岛素产生的电化学电流信号强度;所述磷酸盐缓冲溶液,其pH为7.4,用0.1mol/L磷酸氢二钠和0.1 mol/L磷酸二氢钾配制;
(4)根据所得电流值与胰岛素浓度呈线性关系,绘制工作曲线;
(5)依据工作曲线的绘制方法进行样品中胰岛素的检测,检测结果从工作曲线中查得。
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