CN108593743A - 一种铂钯复合二硒化钼标记的夹心型免疫传感器的制备方法及应用 - Google Patents
一种铂钯复合二硒化钼标记的夹心型免疫传感器的制备方法及应用 Download PDFInfo
- Publication number
- CN108593743A CN108593743A CN201810437942.4A CN201810437942A CN108593743A CN 108593743 A CN108593743 A CN 108593743A CN 201810437942 A CN201810437942 A CN 201810437942A CN 108593743 A CN108593743 A CN 108593743A
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- solution
- ultra
- added
- preparation
- mose
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Granted
Links
- KDLHZDBZIXYQEI-UHFFFAOYSA-N Palladium Chemical compound [Pd] KDLHZDBZIXYQEI-UHFFFAOYSA-N 0.000 title claims abstract description 137
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 title claims abstract description 69
- BASFCYQUMIYNBI-UHFFFAOYSA-N platinum Chemical compound [Pt] BASFCYQUMIYNBI-UHFFFAOYSA-N 0.000 title claims abstract description 50
- 229910052763 palladium Inorganic materials 0.000 title claims abstract description 27
- 239000011229 interlayer Substances 0.000 title claims abstract description 25
- 229910052697 platinum Inorganic materials 0.000 title claims abstract description 25
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 title claims abstract description 22
- ZOKXTWBITQBERF-UHFFFAOYSA-N Molybdenum Chemical compound [Mo] ZOKXTWBITQBERF-UHFFFAOYSA-N 0.000 title claims abstract description 21
- 229910052750 molybdenum Inorganic materials 0.000 title claims abstract description 21
- 239000011733 molybdenum Substances 0.000 title claims abstract description 21
- PCHJSUWPFVWCPO-UHFFFAOYSA-N gold Chemical compound [Au] PCHJSUWPFVWCPO-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 50
- OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N Carbon Chemical compound [C] OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 47
- 229910021389 graphene Inorganic materials 0.000 claims abstract description 47
- 238000001514 detection method Methods 0.000 claims abstract description 39
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 claims abstract description 36
- 125000002924 primary amino group Chemical group [H]N([H])* 0.000 claims abstract description 13
- 101100043112 Homo sapiens SERPINB3 gene Proteins 0.000 claims abstract description 8
- 102100036383 Serpin B3 Human genes 0.000 claims abstract description 8
- 238000000034 method Methods 0.000 claims abstract description 7
- 239000000243 solution Substances 0.000 claims description 122
- 239000003643 water by type Substances 0.000 claims description 60
- 239000007788 liquid Substances 0.000 claims description 59
- 229910021642 ultra pure water Inorganic materials 0.000 claims description 56
- 239000012498 ultrapure water Substances 0.000 claims description 56
- 239000006185 dispersion Substances 0.000 claims description 50
- 238000005576 amination reaction Methods 0.000 claims description 38
- 238000005406 washing Methods 0.000 claims description 34
- 238000001291 vacuum drying Methods 0.000 claims description 25
- CIWBSHSKHKDKBQ-JLAZNSOCSA-N Ascorbic acid Chemical compound OC[C@H](O)[C@H]1OC(=O)C(O)=C1O CIWBSHSKHKDKBQ-JLAZNSOCSA-N 0.000 claims description 24
- 229910016001 MoSe Inorganic materials 0.000 claims description 23
- 238000011534 incubation Methods 0.000 claims description 20
- 229920001343 polytetrafluoroethylene Polymers 0.000 claims description 16
- 239000004810 polytetrafluoroethylene Substances 0.000 claims description 16
- LZZYPRNAOMGNLH-UHFFFAOYSA-M Cetrimonium bromide Chemical class [Br-].CCCCCCCCCCCCCCCC[N+](C)(C)C LZZYPRNAOMGNLH-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims description 15
- LYCAIKOWRPUZTN-UHFFFAOYSA-N Ethylene glycol Chemical compound OCCO LYCAIKOWRPUZTN-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 15
- 239000002253 acid Substances 0.000 claims description 15
- 238000007306 functionalization reaction Methods 0.000 claims description 15
- 238000013019 agitation Methods 0.000 claims description 13
- 235000010323 ascorbic acid Nutrition 0.000 claims description 12
- 229960005070 ascorbic acid Drugs 0.000 claims description 12
- 239000011668 ascorbic acid Substances 0.000 claims description 12
- 229910052737 gold Inorganic materials 0.000 claims description 12
- 239000010931 gold Substances 0.000 claims description 12
- 238000003756 stirring Methods 0.000 claims description 12
- CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N Acetone Chemical compound CC(C)=O CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 10
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 10
- FDWREHZXQUYJFJ-UHFFFAOYSA-M gold monochloride Chemical compound [Cl-].[Au+] FDWREHZXQUYJFJ-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims description 10
- 239000008055 phosphate buffer solution Substances 0.000 claims description 10
- IOLCXVTUBQKXJR-UHFFFAOYSA-M potassium bromide Chemical compound [K+].[Br-] IOLCXVTUBQKXJR-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims description 10
- 239000000843 powder Substances 0.000 claims description 10
- SQGYOTSLMSWVJD-UHFFFAOYSA-N silver(1+) nitrate Chemical compound [Ag+].[O-]N(=O)=O SQGYOTSLMSWVJD-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 10
- VWDWKYIASSYTQR-UHFFFAOYSA-N sodium nitrate Chemical compound [Na+].[O-][N+]([O-])=O VWDWKYIASSYTQR-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 10
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 9
- -1 polytetrafluoroethylene Polymers 0.000 claims description 8
- BUGBHKTXTAQXES-UHFFFAOYSA-N Selenium Chemical compound [Se] BUGBHKTXTAQXES-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 7
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 claims description 7
- 229910052711 selenium Inorganic materials 0.000 claims description 7
- 239000011669 selenium Substances 0.000 claims description 7
- 239000012491 analyte Substances 0.000 claims description 6
- NWZSZGALRFJKBT-KNIFDHDWSA-N (2s)-2,6-diaminohexanoic acid;(2s)-2-hydroxybutanedioic acid Chemical compound OC(=O)[C@@H](O)CC(O)=O.NCCCC[C@H](N)C(O)=O NWZSZGALRFJKBT-KNIFDHDWSA-N 0.000 claims description 5
- KPZGRMZPZLOPBS-UHFFFAOYSA-N 1,3-dichloro-2,2-bis(chloromethyl)propane Chemical compound ClCC(CCl)(CCl)CCl KPZGRMZPZLOPBS-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 5
- OQVYMXCRDHDTTH-UHFFFAOYSA-N 4-(diethoxyphosphorylmethyl)-2-[4-(diethoxyphosphorylmethyl)pyridin-2-yl]pyridine Chemical compound CCOP(=O)(OCC)CC1=CC=NC(C=2N=CC=C(CP(=O)(OCC)OCC)C=2)=C1 OQVYMXCRDHDTTH-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 5
- VHUUQVKOLVNVRT-UHFFFAOYSA-N Ammonium hydroxide Chemical compound [NH4+].[OH-] VHUUQVKOLVNVRT-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 5
- 108091003079 Bovine Serum Albumin Proteins 0.000 claims description 5
- 101710098119 Chaperonin GroEL 2 Proteins 0.000 claims description 5
- DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M Ilexoside XXIX Chemical compound C[C@@H]1CC[C@@]2(CC[C@@]3(C(=CC[C@H]4[C@]3(CC[C@@H]5[C@@]4(CC[C@@H](C5(C)C)OS(=O)(=O)[O-])C)C)[C@@H]2[C@]1(C)O)C)C(=O)O[C@H]6[C@@H]([C@H]([C@@H]([C@H](O6)CO)O)O)O.[Na+] DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M 0.000 claims description 5
- 239000012901 Milli-Q water Substances 0.000 claims description 5
- 150000007513 acids Chemical class 0.000 claims description 5
- 239000000908 ammonium hydroxide Substances 0.000 claims description 5
- 239000007844 bleaching agent Substances 0.000 claims description 5
- 229940098773 bovine serum albumin Drugs 0.000 claims description 5
- 125000001246 bromo group Chemical group Br* 0.000 claims description 5
- 229910052799 carbon Inorganic materials 0.000 claims description 5
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 claims description 5
- 239000002270 dispersing agent Substances 0.000 claims description 5
- 230000000694 effects Effects 0.000 claims description 5
- 235000019441 ethanol Nutrition 0.000 claims description 5
- 125000005909 ethyl alcohol group Chemical group 0.000 claims description 5
- 229910002804 graphite Inorganic materials 0.000 claims description 5
- 239000010439 graphite Substances 0.000 claims description 5
- 238000010438 heat treatment Methods 0.000 claims description 5
- IKDUDTNKRLTJSI-UHFFFAOYSA-N hydrazine monohydrate Substances O.NN IKDUDTNKRLTJSI-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 5
- 238000003760 magnetic stirring Methods 0.000 claims description 5
- 238000005498 polishing Methods 0.000 claims description 5
- 229920000036 polyvinylpyrrolidone Polymers 0.000 claims description 5
- 235000013855 polyvinylpyrrolidone Nutrition 0.000 claims description 5
- 239000012286 potassium permanganate Substances 0.000 claims description 5
- 238000001556 precipitation Methods 0.000 claims description 5
- 229910001961 silver nitrate Inorganic materials 0.000 claims description 5
- 229910052708 sodium Inorganic materials 0.000 claims description 5
- 239000011734 sodium Substances 0.000 claims description 5
- 239000012279 sodium borohydride Substances 0.000 claims description 5
- 229910000033 sodium borohydride Inorganic materials 0.000 claims description 5
- 235000015393 sodium molybdate Nutrition 0.000 claims description 5
- 235000010344 sodium nitrate Nutrition 0.000 claims description 5
- 239000004317 sodium nitrate Substances 0.000 claims description 5
- QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-N sulfuric acid group Chemical class S(O)(O)(=O)=O QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 5
- 239000002352 surface water Substances 0.000 claims description 5
- 239000000439 tumor marker Substances 0.000 claims description 4
- MHAJPDPJQMAIIY-UHFFFAOYSA-N Hydrogen peroxide Chemical compound OO MHAJPDPJQMAIIY-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- 229910019142 PO4 Inorganic materials 0.000 claims description 3
- ZOMNIUBKTOKEHS-UHFFFAOYSA-L dimercury dichloride Chemical class Cl[Hg][Hg]Cl ZOMNIUBKTOKEHS-UHFFFAOYSA-L 0.000 claims description 3
- NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K phosphate Chemical compound [O-]P([O-])([O-])=O NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K 0.000 claims description 3
- 239000010452 phosphate Substances 0.000 claims description 3
- 238000005070 sampling Methods 0.000 claims description 3
- 230000008859 change Effects 0.000 claims description 2
- 230000009514 concussion Effects 0.000 claims description 2
- 238000001035 drying Methods 0.000 claims description 2
- 238000004080 punching Methods 0.000 claims description 2
- 238000010992 reflux Methods 0.000 claims description 2
- 102000012288 Phosphopyruvate Hydratase Human genes 0.000 claims 1
- 108010022181 Phosphopyruvate Hydratase Proteins 0.000 claims 1
- 238000000354 decomposition reaction Methods 0.000 claims 1
- 108010088201 squamous cell carcinoma-related antigen Proteins 0.000 claims 1
- 239000003550 marker Substances 0.000 abstract description 7
- 239000000463 material Substances 0.000 abstract description 7
- 230000035945 sensitivity Effects 0.000 abstract description 5
- 238000003018 immunoassay Methods 0.000 abstract description 3
- 238000006555 catalytic reaction Methods 0.000 abstract description 2
- 230000012447 hatching Effects 0.000 abstract 1
- 239000002245 particle Substances 0.000 abstract 1
- 235000016768 molybdenum Nutrition 0.000 description 15
- 150000001336 alkenes Chemical class 0.000 description 4
- 201000011510 cancer Diseases 0.000 description 4
- GDSOZVZXVXTJMI-SNAWJCMRSA-N (e)-1-methylbut-1-ene-1,2,4-tricarboxylic acid Chemical compound OC(=O)C(/C)=C(C(O)=O)\CCC(O)=O GDSOZVZXVXTJMI-SNAWJCMRSA-N 0.000 description 3
- 230000003197 catalytic effect Effects 0.000 description 3
- 238000011896 sensitive detection Methods 0.000 description 3
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 2
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 2
- 238000013399 early diagnosis Methods 0.000 description 2
- 238000012544 monitoring process Methods 0.000 description 2
- BFKJFAAPBSQJPD-UHFFFAOYSA-N tetrafluoroethene Chemical compound FC(F)=C(F)F BFKJFAAPBSQJPD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 1
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 1
- 238000005054 agglomeration Methods 0.000 description 1
- 230000002776 aggregation Effects 0.000 description 1
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 1
- 239000000427 antigen Substances 0.000 description 1
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 description 1
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 description 1
- 230000005540 biological transmission Effects 0.000 description 1
- 229960000074 biopharmaceutical Drugs 0.000 description 1
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 1
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 1
- 238000011088 calibration curve Methods 0.000 description 1
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 1
- 239000011258 core-shell material Substances 0.000 description 1
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 1
- 230000007613 environmental effect Effects 0.000 description 1
- 230000036541 health Effects 0.000 description 1
- 230000001900 immune effect Effects 0.000 description 1
- 230000003053 immunization Effects 0.000 description 1
- 238000002649 immunization Methods 0.000 description 1
- 238000007689 inspection Methods 0.000 description 1
- 239000002114 nanocomposite Substances 0.000 description 1
- 229910000510 noble metal Inorganic materials 0.000 description 1
- 230000000505 pernicious effect Effects 0.000 description 1
- 230000000750 progressive effect Effects 0.000 description 1
- 239000002994 raw material Substances 0.000 description 1
- 230000028327 secretion Effects 0.000 description 1
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 1
- 238000011895 specific detection Methods 0.000 description 1
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 1
- 230000032258 transport Effects 0.000 description 1
- 210000004881 tumor cell Anatomy 0.000 description 1
- 239000002023 wood Substances 0.000 description 1
Classifications
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N27/00—Investigating or analysing materials by the use of electric, electrochemical, or magnetic means
- G01N27/26—Investigating or analysing materials by the use of electric, electrochemical, or magnetic means by investigating electrochemical variables; by using electrolysis or electrophoresis
- G01N27/28—Electrolytic cell components
- G01N27/30—Electrodes, e.g. test electrodes; Half-cells
- G01N27/327—Biochemical electrodes, e.g. electrical or mechanical details for in vitro measurements
- G01N27/3275—Sensing specific biomolecules, e.g. nucleic acid strands, based on an electrode surface reaction
- G01N27/3278—Sensing specific biomolecules, e.g. nucleic acid strands, based on an electrode surface reaction involving nanosized elements, e.g. nanogaps or nanoparticles
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N27/00—Investigating or analysing materials by the use of electric, electrochemical, or magnetic means
- G01N27/26—Investigating or analysing materials by the use of electric, electrochemical, or magnetic means by investigating electrochemical variables; by using electrolysis or electrophoresis
- G01N27/28—Electrolytic cell components
- G01N27/30—Electrodes, e.g. test electrodes; Half-cells
- G01N27/308—Electrodes, e.g. test electrodes; Half-cells at least partially made of carbon
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
- G01N33/574—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor for cancer
- G01N33/57484—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor for cancer involving compounds serving as markers for tumor, cancer, neoplasia, e.g. cellular determinants, receptors, heat shock/stress proteins, A-protein, oligosaccharides, metabolites
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Immunology (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Pathology (AREA)
- General Physics & Mathematics (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Hematology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Urology & Nephrology (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- Electrochemistry (AREA)
- Oncology (AREA)
- Hospice & Palliative Care (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Nanotechnology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Spectroscopy & Molecular Physics (AREA)
- Food Science & Technology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
- Medicinal Preparation (AREA)
Abstract
本发明属于免疫分析和生物传感技术领域,提供了一种铂钯复合二硒化钼标记的夹心型免疫传感器的制备方法及应用。本发明利用双金属Pd@Pt纳米粒子负载氨基功能化MoSe2作为催化材料,与检测抗体孵化后作为标记物,同时利用金纳米棒负载氨基功能化石墨烯作为电极修饰材料,成功构建了夹心型免疫传感器,从而实现了对肿瘤标志物NSE、SCCA的检测,具备灵敏度高,特异性强,检测限低等优势,对肿瘤的早期检测具有重要的科学意义和应用价值。
Description
技术领域
本发明属于纳米功能材料、免疫分析以及生物传感技术领域,涉及一种铂钯复合二硒化钼标记的夹心型免疫传感器的制备方法及应用。具体是采用Pd@Pt/MoSe2为检测抗体标记物,实现了对肿瘤标志物NSE、SCCA的灵敏检测。
背景技术
癌症是严重威胁人类健康的高发病率和高死亡率的疾病。虽然恶性肿瘤的治疗技术在不断进步,但迄今为止,恶性肿瘤的早期发现、早期诊断和早期治疗仍然是治疗恶性肿瘤最有效的手段。肿瘤标志物是肿瘤细胞本身存在或分泌的特异性物质,绝大多数存在于恶性肿瘤中,血清中肿瘤标志物的检测对肿瘤预警及早期诊断具有重要的科学意义和应用前景。因此,降低肿瘤死亡率的主要途径是实现早期对肿瘤标志物的灵敏检测。目前临床血清肿瘤标志物的免疫检测方法主要有放射免疫法、酶联免疫法、时间分辨荧光免疫法等,但无法避免放射污染、耗时、灵敏度不够等缺点。因此,发明一种特异性强,灵敏度高,检测速度快,操作简便的免疫传感器十分重要。
电化学免疫传感器主要利用抗原与抗体间高度特异性结合的特性,将免疫分析法和电化学传感器相结合,具有分析灵敏度高、特异性强、使用简便及成本低等独特优势,已广泛用于各种肿瘤标志物的检测,同时在环境监测、食品安全控制、生物监测、临床检验等领域发挥重要作用。
金纳米棒负载氨基功能化石墨烯具有大的比表面积和良好的生物相容性,可以显著提高捕获Ab1的固载量;石墨烯良好的电子传递能力可以增强电极的导电性。Pd@Pt/MoSe2能够提供良好的催化作用,MoSe2具有较大的比表面积能够提高Pd@Pt NPs的负载量从而提高捕获Ab2的固载量,同时减少贵金属的团聚作用。本发明采用金纳米棒负载氨基功能化石墨烯作为基底材料,Pd@Pt/MoSe2作为催化材料与检测抗体进行孵化作为标记物,构建了用于肿瘤标志物检测的夹心型电化学免疫传感器。
发明内容
本发明提供了一种铂钯复合二硒化钼标记的夹心型免疫传感器的制备方法及应用,实现了对肿瘤标志物的灵敏检测。
本发明的目的之一是提供一种铂钯复合二硒化钼标记的夹心型免疫传感器的制备方法。
本发明的目的之二是将所制备的铂钯复合二硒化钼标记的夹心型免疫传感器应用于肿瘤标志物NSE、SCCA的高灵敏、特异性检测。
本发明的技术方案,包括以下步骤。
1. 一种铂钯复合二硒化钼标记的夹心型免疫传感器的制备方法,步骤如下:
(1)将直径为4 mm的玻碳电极用Al2O3抛光粉打磨成镜面,超纯水清洗干净;
(2)取6 µL、1.0 ~ 3.0 mg/mL的金纳米棒负载氨基化石墨烯分散液滴涂到电极表面,室温下晾干,超纯水冲洗电极表面,晾干;
(3)将6 µL、8.0 ~ 12.0 µg/mL的肿瘤标志物捕获抗体Ab1滴加到电极表面,超纯水冲洗,4 °C冰箱中干燥;
(4)继续将3 µL、0.5 ~ 2.0 mg/mL的牛血清白蛋白BSA溶液滴加到电极表面,用以封闭电极上非特异性活性位点,超纯水冲洗电极表面,4 °C冰箱中晾干;
(5)滴加6 µL、0.1 pg/mL ~ 100 ng/mL的一系列不同浓度的肿瘤标志物抗原Ag溶液,超纯水冲洗电极表面,4 °C冰箱中晾干;
(6)将6 µL、1.5 ~ 3.5 mg/mL检测抗体孵化物Pd@Pt/MoSe2-Ab2溶液滴至电极表面,置于4 °C冰箱中孵化40 min,超纯水冲洗电极表面,4 °C冰箱中晾干,制得一种铂钯复合二硒化钼标记的夹心型免疫传感器。
2.所述金纳米棒负载氨基化石墨烯分散液的制备,步骤如下:
(1)金纳米棒溶液的制备
将95 ~ 105μL、质量分数为1%的氯金酸和350 ~ 370 mg十六烷基三甲基溴化铵加入到10 mL超纯水中,超声震荡15 ~ 20 min;磁力搅拌下快速加入50 ~ 70μL、0.1 mol/L新制备的硼氢化钠溶液,搅拌2 ~ 4 min,得到棕黄色的金纳米种子溶液;
将380 ~ 420 μL、质量分数为1%的氯金酸和700 ~ 780 mg十六烷基三甲基溴化铵及15~ 25 μL、0.1 mol/L硝酸银溶液加入到20 mL超纯水中,超声震荡25 ~ 45min;加入90 ~120 μL、0.1 mol/L新配制的抗坏血酸溶液,溶液由黄色变无色,加入20 μL金纳米种子溶液,震荡30 ~ 40 s,静置24 h,超纯水离心洗涤3次,再分散于10 mL超纯水中,得到金纳米棒溶液;
(2)氧化石墨烯的制备
将1 ~ 2 g石墨薄片和0.5 ~ 1 g硝酸钠依次加入装有23 mL浓硫酸的烧瓶中,在冰浴中搅拌30 min;搅拌下加入3 ~ 4 g高锰酸钾,加高锰酸钾的过程中保持反应温度低于20 °C,然后升温至35 °C并保持30 min,然后升温至90°C ~ 95°C并保持15 min,后缓慢加入50mL超纯水;再依次加入140 mL超纯水和10 ~ 15 mL、质量分数为30%的H2O2溶液,溶液变成亮黄色;离心分离,分别用1 mol/L的HCl溶液和超纯水洗涤, 在50 °C真空干燥箱中干燥24h,制得氧化石墨烯;
(3)金纳米棒负载氨基化石墨烯分散液的制备
在50 mL的烧杯中加入40 ~ 50 mg氧化石墨烯和10 ~ 15 mL乙二醇,超声震荡30 min,加入0.3 ~ 0.4 mL、质量分数为25%的氨水,超声震荡5 min,将溶液转移到聚四氟乙烯高压釜中,180 °C反应10 ~ 14h,冷却至室温,无水乙醇离心洗涤,在30 °C的真空干燥箱中干燥12h,制得氨基化石墨烯;
将20 ~ 30 mg氨基功能化石墨烯加至10 mL上述步骤(1)制备的金纳米棒溶液中,震荡12 h,制得金纳米棒负载氨基化石墨烯。
3.所述检测抗体孵化物Pd@Pt/MoSe2-Ab2溶液的制备,步骤如下:
(1)功能化Pd NPs分散液的制备
依次取90 ~ 110 mg聚乙烯吡咯烷酮,550 ~ 650 mg溴化钾和60 ~ 70 mg抗坏血酸溶于8 mL超纯水中,加热至80 °C保持10 min;在磁力搅拌下加入50 ~ 70 mg四氯化钯酸钠,反应3 h后,依次用超纯水和丙酮离心洗涤3次,制得Pd NPs,重新分散在10 mL超纯水中制得Pd NPs分散液;
分别取180 ~ 200 mg十六烷基三甲基溴化铵和25 ~ 30 mg溴水杨酸溶于10 mL超纯水中;加入1.0 ~ 2.0 mL的Pd NPs分散液,超声震荡5 ~ 9 min,离心,用超纯水离心洗涤三次,重新分散在10 mL超纯水中,得到功能化Pd NPs分散液;
(2)Pd@Pt NPs分散液的制备
将250 ~ 270 μL、质量分数为1%是氯铂酸溶于5 mL超纯水中,加入1 mL功能化Pd NPs分散液,超声震荡1 ~ 2 min,快速加入1 mL、0.01mol/L的抗坏血酸溶液,快速震荡10 ~ 15s,静置8 ~ 10 h,超纯水离心洗涤,重新分散于10 mL超纯水中,制得Pd@Pt NPs分散液;
(3)氨基化MoSe2的制备
将150 ~ 170 mg硒粉加入到5 mL、质量分数为85%水合肼中,磁力搅拌2 ~ 3 h,制得溶液A;将200 ~ 280 mg钼酸钠加入到20 mL超纯水中,制得溶液B;将A、B两溶液混合,磁力搅拌30 min,转移到聚四氟乙烯高压釜中,200 °C加热24 h,冷却至室温,无水乙醇和超纯水离心洗涤3次,在60 °C的真空干燥箱中干燥16 ~ 24h,制得MoSe2;
将100 mg MoSe2和160 ~ 200 μL3-氨丙基三乙氧基硅烷依次加入到10 mL无水乙醇中,70 °C回流60 ~ 70 min,离心分离,超纯水离心洗涤,60 °C真空干燥12 h,得到氨基化MoSe2;
(4)Pd@Pt/MoSe2的制备
将25 ~ 35 mg氨基化MoSe2加至10 mLPd@Pt NPs分散液中,震荡10 ~ 14 h,离心分离,在40 °C的真空干燥箱中干燥12 ~ 18h,制得Pd@Pt/MoSe2,
(5)检测抗体孵化物Pd@Pt/MoSe2-Ab2溶液的制备
将4 ~ 8 mg的Pd@Pt/MoSe2加至1 mL超纯水中,超声分散,再加入100 μL、80 ~ 120 μg/mL的肿瘤标志物检测抗体Ab2溶液和900 μL、50 mmol/L的 pH = 7.0的磷酸盐缓冲溶液,4 °C恒温振荡培养箱中振荡,孵化12 h,离心分离,将所得沉淀重新分散至1 mL、50 mmol/L的pH为7.0的磷酸盐缓冲溶液中,制得检测抗体孵化物Pd@Pt/MoSe2-Ab2溶液,4 °C下保存备用。
4.肿瘤标志物的检测,包括以下步骤:
(1)使用电化学工作站以三电极体系进行测试,饱和甘汞电极为参比电极,铂丝电极为辅助电极,所制备的传感器为工作电极,在10 mL、50 mmol/L的pH 5.00 ~ 9.00磷酸盐缓冲溶液中进行测试;
(2)用时间-电流法对分析物进行检测,输入电压为-0.4 V,取样间隔0.1 s,运行时间400 s;
(3)当背景电流趋于稳定后,每隔50 s向10 mL、50 mmol/L的 pH = 7.0的磷酸盐缓冲溶液中注入10 μL、5 mol/L的双氧水溶液,记录电流变化。
上述所述肿瘤标志物选自下列之一:NSE、SCCA。
本发明所用原材料均可在化学试剂公司或生物制药公司购买。
本发明的有益成果
(1)金纳米棒负载氨基功能化石墨烯,具有大的比表面积和良好的生物相容性,可以结合更多抗体,并且提升电极表面的电子传输能力,提高导电性。Pd@Pt为核壳型纳米复合材料,具有良好的催化性能和生物相容性,Pd@Pt/MoSe2具有大的比表面积能有效吸附并固载抗体,并具有更好的催化性能。采用金纳米棒负载氨基化石墨烯作为基底材料,Pd@Pt/MoSe2作为检测抗体标记物构建的夹心型免疫传感器,提高了传感器的灵敏度,降低了检测限;
(2)一种铂钯复合二硒化钼标记的夹心型免疫传感器实现了对肿瘤标志物NSE的检测,其线性范围15fg/mL~ 90ng/mL,检测限低至5.0fg/mL,对肿瘤标志物SCCA的检测,其线性范围15fg/mL~ 90ng/mL,检测限低至5.0fg/mL,表明一种铂钯复合二硒化钼标记的夹心型免疫传感器可以达到准确测定的目的。
具体实施方式
现将本发明通过具体实施方式进一步说明,但不限于此。
实施例1一种铂钯复合二硒化钼标记的夹心型免疫传感器的制备方法,步骤如下:
(1)将直径为4 mm的玻碳电极用Al2O3抛光粉打磨成镜面,超纯水清洗干净;
(2)取6 µL、1.0 mg/mL的金纳米棒负载氨基化石墨烯分散液滴涂到电极表面,室温下晾干,超纯水冲洗电极表面,晾干;
(3)将6 µL、8.0 µg/mL的肿瘤标志物捕获抗体Ab1滴加到电极表面,超纯水冲洗,4 °C冰箱中干燥;
(4)继续将3 µL、0.5 mg/mL的牛血清白蛋白BSA溶液滴加到电极表面,用以封闭电极上非特异性活性位点,超纯水冲洗电极表面,4 °C冰箱中晾干;
(5)滴加6 µL、10fg/mL ~ 100 ng/mL的一系列不同浓度的肿瘤标志物抗原Ag溶液,超纯水冲洗电极表面,4 °C冰箱中晾干;
(6)将6 µL、1.5 mg/mL检测抗体孵化物Pd@Pt/MoSe2-Ab2溶液滴至电极表面,置于4 °C冰箱中孵化40 min,超纯水冲洗电极表面,4 °C冰箱中晾干,制得一种铂钯复合二硒化钼标记的夹心型免疫传感器。
实施例2一种铂钯复合二硒化钼标记的夹心型免疫传感器的制备方法,步骤如下:
(1)将直径为4 mm的玻碳电极用Al2O3抛光粉打磨成镜面,超纯水清洗干净;
(2)取6 µL、2.0 mg/mL的金纳米棒负载氨基化石墨烯分散液滴涂到电极表面,室温下晾干,超纯水冲洗电极表面,晾干;
(3)将6 µL、10.0 µg/mL的肿瘤标志物捕获抗体Ab1滴加到电极表面,超纯水冲洗,4 °C冰箱中干燥;
(4)继续将3 µL、1.0 mg/mL的牛血清白蛋白BSA溶液滴加到电极表面,用以封闭电极上非特异性活性位点,超纯水冲洗电极表面,4 °C冰箱中晾干;
(5)滴加6 µL、0.1 pg/mL ~ 100 ng/mL的一系列不同浓度的肿瘤标志物抗原Ag溶液,超纯水冲洗电极表面,4 °C冰箱中晾干;
(6)将6 µL、2.5 mg/mL检测抗体孵化物Pd@Pt/MoSe2-Ab2溶液滴至电极表面,置于4 °C冰箱中孵化40 min,超纯水冲洗电极表面,4 °C冰箱中晾干,制得一种铂钯复合二硒化钼标记的夹心型免疫传感器。
实施例3一种铂钯复合二硒化钼标记的夹心型免疫传感器的制备方法,步骤如下:
(1)将直径为4 mm的玻碳电极用Al2O3抛光粉打磨成镜面,超纯水清洗干净;
(2)取6 µL、3.0 mg/mL的金纳米棒负载氨基化石墨烯分散液滴涂到电极表面,室温下晾干,超纯水冲洗电极表面,晾干;
(3)将6 µL、12.0 µg/mL的肿瘤标志物捕获抗体Ab1滴加到电极表面,超纯水冲洗,4 °C冰箱中干燥;
(4)继续将3 µL、2.0 mg/mL的牛血清白蛋白BSA溶液滴加到电极表面,用以封闭电极上非特异性活性位点,超纯水冲洗电极表面,4 °C冰箱中晾干;
(5)滴加6 µL、0.1 pg/mL ~ 100 ng/mL的一系列不同浓度的肿瘤标志物抗原Ag溶液,超纯水冲洗电极表面,4 °C冰箱中晾干;
(6)将6 µL、3.5 mg/mL检测抗体孵化物Pd@Pt/MoSe2-Ab2溶液滴至电极表面,置于4 °C冰箱中孵化40 min,超纯水冲洗电极表面,4 °C冰箱中晾干,制得一种铂钯复合二硒化钼标记的夹心型免疫传感器。
实施例4所述金纳米棒负载氨基化石墨烯分散液的制备,步骤如下:
(1)金纳米棒溶液的制备
将95 μL、质量分数为1%的氯金酸和350 mg十六烷基三甲基溴化铵加入到10 mL超纯水中,超声震荡15 min;磁力搅拌下快速加入50μL、0.1 mol/L新制备的硼氢化钠溶液,搅拌2min,得到棕黄色的金纳米种子溶液;
将380 μL、质量分数为1%的氯金酸和700 mg十六烷基三甲基溴化铵及15 μL、0.1 mol/L硝酸银溶液加入到20 mL超纯水中,超声震荡25 min;加入90μL、0.1 mol/L新配制的抗坏血酸溶液,溶液由黄色变无色,加入20 μL金纳米种子溶液,震荡30 s,静置24 h,超纯水离心洗涤3次,再分散于10 mL超纯水中,得到金纳米棒溶液;
(2)氧化石墨烯的制备
将1 g石墨薄片和0.5 g硝酸钠依次加入装有23 mL浓硫酸的烧瓶中,在冰浴中搅拌30min;搅拌下加入3 g高锰酸钾,加高锰酸钾的过程中保持反应温度低于20 °C,然后升温至35 °C并保持30 min,然后升温至90°C并保持15 min,后缓慢加入50 mL超纯水;再依次加入140 mL超纯水和10 mL、质量分数为30%的H2O2溶液,溶液变成亮黄色;离心分离,分别用1mol/L的HCl溶液和超纯水洗涤, 在50 °C真空干燥箱中干燥24 h,制得氧化石墨烯;
(3)金纳米棒负载氨基化石墨烯分散液的制备
在50 mL的烧杯中加入40 mg氧化石墨烯和10 mL乙二醇,超声震荡30 min,加入0.3mL、质量分数为25%的氨水,超声震荡5 min,将溶液转移到聚四氟乙烯高压釜中,180 °C反应10 h,冷却至室温,无水乙醇离心洗涤,在30 °C的真空干燥箱中干燥12h,制得氨基化石墨烯;
将20 mg氨基功能化石墨烯加至10 mL上述步骤(1)制备的金纳米棒溶液中,震荡12 h,制得金纳米棒负载氨基化石墨烯。
实施例5所述金纳米棒负载氨基化石墨烯分散液的制备,步骤如下:
(1)金纳米棒溶液的制备
将100 μL、质量分数为1%的氯金酸和360 mg十六烷基三甲基溴化铵加入到10 mL超纯水中,超声震荡18 min;磁力搅拌下快速加入60μL、0.1 mol/L新制备的硼氢化钠溶液,搅拌3 min,得到棕黄色的金纳米种子溶液;
将400 μL、质量分数为1%的氯金酸和740 mg十六烷基三甲基溴化铵及20 μL、0.1 mol/L硝酸银溶液加入到20 mL超纯水中,超声震荡35 min;加入105 μL、0.1 mol/L新配制的抗坏血酸溶液,溶液由黄色变无色,加入20 μL金纳米种子溶液,震荡35 s,静置24 h,超纯水离心洗涤3次,再分散于10 mL超纯水中,得到金纳米棒溶液;
(2)氧化石墨烯的制备
将1.5 g石墨薄片和0.75 g硝酸钠依次加入装有23 mL浓硫酸的烧瓶中,在冰浴中搅拌30 min;搅拌下加入3.5 g高锰酸钾,加高锰酸钾的过程中保持反应温度低于20 °C,然后升温至35 °C并保持30 min,然后升温至93°C并保持15 min,后缓慢加入50 mL超纯水;再依次加入140 mL超纯水和12 mL、质量分数为30%的H2O2溶液,溶液变成亮黄色;离心分离,分别用1 mol/L的HCl溶液和超纯水洗涤,在50 °C真空干燥箱中干燥24 h,制得氧化石墨烯;
(3)金纳米棒负载氨基化石墨烯分散液的制备
在50 mL的烧杯中加入45 mg氧化石墨烯和12.5 mL乙二醇,超声震荡30 min,加入0.35mL、质量分数为25%的氨水,超声震荡5 min,将溶液转移到聚四氟乙烯高压釜中,180 °C反应12 h,冷却至室温,无水乙醇离心洗涤,在30 °C的真空干燥箱中干燥12h,制得氨基化石墨烯;
将25 mg氨基功能化石墨烯加至10 mL上述步骤(1)制备的金纳米棒溶液中,震荡12 h,制得金纳米棒负载氨基化石墨烯。
实施例6所述金纳米棒负载氨基化石墨烯分散液的制备,步骤如下:
(1)金纳米棒溶液的制备
将105 μL、质量分数为1%的氯金酸和370 mg十六烷基三甲基溴化铵加入到10 mL超纯水中,超声震荡20 min;磁力搅拌下快速加入70 μL、0.1 mol/L新制备的硼氢化钠溶液,搅拌4 min,得到棕黄色的金纳米种子溶液;
将420 μL、质量分数为1%的氯金酸和780 mg十六烷基三甲基溴化铵及25 μL、0.1 mol/L硝酸银溶液加入到20 mL超纯水中,超声震荡45 min;加入120 μL、0.1 mol/L新配制的抗坏血酸溶液,溶液由黄色变无色,加入20 μL金纳米种子溶液,震荡40 s,静置24 h,超纯水离心洗涤3次,再分散于10 mL超纯水中,得到金纳米棒溶液;
(2)氧化石墨烯的制备
将2 g石墨薄片和1 g硝酸钠依次加入装有23 mL浓硫酸的烧瓶中,在冰浴中搅拌30min;搅拌下加入4 g高锰酸钾,加高锰酸钾的过程中保持反应温度低于20 °C,然后升温至35 °C并保持30 min,然后升温至95°C并保持15 min,后缓慢加入50 mL超纯水;再依次加入140 mL超纯水和15 mL、质量分数为30%的H2O2溶液,溶液变成亮黄色;离心分离,分别用1mol/L的HCl溶液和超纯水洗涤, 在50 °C真空干燥箱中干燥24 h,制得氧化石墨烯;
(3)金纳米棒负载氨基化石墨烯分散液的制备
在50 mL的烧杯中加入50 mg氧化石墨烯和15 mL乙二醇,超声震荡30 min,加入0.4mL、质量分数为25%的氨水,超声震荡5 min,将溶液转移到聚四氟乙烯高压釜中,180 °C反应14 h,冷却至室温,无水乙醇离心洗涤,在30 °C的真空干燥箱中干燥12h,制得氨基化石墨烯;
将30 mg氨基功能化石墨烯加至10 mL上述步骤(1)制备的金纳米棒溶液中,震荡12 h,制得金纳米棒负载氨基化石墨烯。
实施例7所述检测抗体孵化物Pd@Pt/MoSe2-Ab2溶液的制备,步骤如下:
(1)功能化Pd NPs分散液的制备
依次取90 mg聚乙烯吡咯烷酮,550 mg溴化钾和60 mg抗坏血酸溶于8 mL超纯水中,加热至80 °C保持10 min;在磁力搅拌下加入50 mg四氯化钯酸钠,反应3 h后,依次用超纯水和丙酮离心洗涤3次,制得Pd NPs,重新分散在10 mL超纯水中制得Pd NPs分散液;
分别取180 mg十六烷基三甲基溴化铵和25 mg溴水杨酸溶于10 mL超纯水中;加入1.0mL的Pd NPs分散液,超声震荡5 min,离心,用超纯水离心洗涤三次,重新分散在10 mL超纯水中,得到功能化Pd NPs分散液;
(2)Pd@Pt NPs分散液的制备
将250 μL、质量分数为1%是氯铂酸溶于5 mL超纯水中,加入1 mL功能化Pd NPs分散液,超声震荡1 min,快速加入1 mL、0.01mol/L的抗坏血酸溶液,快速震荡10 s,静置8 h,超纯水离心洗涤,重新分散于10 mL超纯水中,制得Pd@Pt NPs分散液;
(3)氨基化MoSe2的制备
将150 mg硒粉加入到5 mL、质量分数为85%水合肼中,磁力搅拌2 h,制得溶液A;将200mg钼酸钠加入到20 mL超纯水中,制得溶液B;将A、B两溶液混合,磁力搅拌30 min,转移到聚四氟乙烯高压釜中,200 °C加热24 h,冷却至室温,无水乙醇和超纯水离心洗涤3次,在60 °C的真空干燥箱中干燥16 h,制得MoSe2;
将100 mg MoSe2和160 μL3-氨丙基三乙氧基硅烷依次加入到10 mL无水乙醇中,70 °C回流60 min,离心分离,超纯水离心洗涤,60 °C真空干燥12 h,得到氨基化MoSe2;
(4)Pd@Pt/MoSe2的制备
将25 mg氨基化MoSe2加至10 mLPd@Pt NPs分散液中,震荡10 h,离心分离,在40 °C的真空干燥箱中干燥12 h,制得Pd@Pt/MoSe2,
(5)检测抗体孵化物Pd@Pt/MoSe2-Ab2溶液的制备
将4 mg的Pd@Pt/MoSe2加至1 mL超纯水中,超声分散,再加入100 μL、80 μg/mL的肿瘤标志物检测抗体Ab2溶液和900 μL、50 mmol/L的 pH = 7.0的磷酸盐缓冲溶液,4 °C恒温振荡培养箱中振荡,孵化12 h,离心分离,将所得沉淀重新分散至1 mL、50 mmol/L的pH为7.0的磷酸盐缓冲溶液中,制得检测抗体孵化物Pd@Pt/MoSe2-Ab2溶液,4 °C下保存备用。
实施例8所述检测抗体孵化物Pd@Pt/MoSe2-Ab2溶液的制备,步骤如下:
(1)功能化Pd NPs分散液的制备
依次取100 mg聚乙烯吡咯烷酮,600 mg溴化钾和65 mg抗坏血酸溶于8 mL超纯水中,加热至80 °C保持10 min;在磁力搅拌下加入60 mg四氯化钯酸钠,反应3 h后,依次用超纯水和丙酮离心洗涤3次,制得Pd NPs,重新分散在10 mL超纯水中制得Pd NPs分散液;
分别取190 mg十六烷基三甲基溴化铵和27 mg溴水杨酸溶于10 mL超纯水中;加入1.5mL的Pd NPs分散液,超声震荡7 min,离心,用超纯水离心洗涤三次,重新分散在10 mL超纯水中,得到功能化Pd NPs分散液;
(2)Pd@Pt NPs分散液的制备
将260 μL、质量分数为1%是氯铂酸溶于5 mL超纯水中,加入1 mL功能化Pd NPs分散液,超声震荡1.5 min,快速加入1 mL、0.01mol/L的抗坏血酸溶液,快速震荡12 s,静置9 h,超纯水离心洗涤,重新分散于10 mL超纯水中,制得Pd@Pt NPs分散液;
(3)氨基化MoSe2的制备
将160 mg硒粉加入到5 mL、质量分数为85%水合肼中,磁力搅拌2.5 h,制得溶液A;将240 mg钼酸钠加入到20 mL超纯水中,制得溶液B;将A、B两溶液混合,磁力搅拌30 min,转移到聚四氟乙烯高压釜中,200 °C加热24 h,冷却至室温,无水乙醇和超纯水离心洗涤3次,在60 °C的真空干燥箱中干燥20 h,制得MoSe2;
将100 mg MoSe2和180 μL3-氨丙基三乙氧基硅烷依次加入到10 mL无水乙醇中,70 °C回流65 min,离心分离,超纯水离心洗涤,60 °C真空干燥12 h,得到氨基化MoSe2;
(4)Pd@Pt/MoSe2的制备
将30 mg氨基化MoSe2加至10 mLPd@Pt NPs分散液中,震荡12 h,离心分离,在40 °C的真空干燥箱中干燥16 h,制得Pd@Pt/MoSe2,
(5)检测抗体孵化物Pd@Pt/MoSe2-Ab2溶液的制备
将6 mg的Pd@Pt/MoSe2加至1 mL超纯水中,超声分散,再加入100 μL、100 μg/mL的肿瘤标志物检测抗体Ab2溶液和900 μL、50 mmol/L的 pH = 7.0的磷酸盐缓冲溶液,4 °C恒温振荡培养箱中振荡,孵化12 h,离心分离,将所得沉淀重新分散至1 mL、50 mmol/L的pH为7.0的磷酸盐缓冲溶液中,制得检测抗体孵化物Pd@Pt/MoSe2-Ab2溶液,4 °C下保存备用。
实施例9所述检测抗体孵化物Pd@Pt/MoSe2-Ab2溶液的制备,步骤如下:
(1)功能化Pd NPs分散液的制备
依次取110 mg聚乙烯吡咯烷酮, 650 mg溴化钾和70 mg抗坏血酸溶于8 mL超纯水中,加热至80 °C保持10 min;在磁力搅拌下加入70 mg四氯化钯酸钠,反应3 h后,依次用超纯水和丙酮离心洗涤3次,制得Pd NPs,重新分散在10 mL超纯水中制得Pd NPs分散液;
分别取200 mg十六烷基三甲基溴化铵和30 mg溴水杨酸溶于10 mL超纯水中;加入2.0mL的Pd NPs分散液,超声震荡9 min,离心,用超纯水离心洗涤三次,重新分散在10 mL超纯水中,得到功能化Pd NPs分散液;
(2)Pd@Pt NPs分散液的制备
将270 μL、质量分数为1%是氯铂酸溶于5 mL超纯水中,加入1 mL功能化Pd NPs分散液,超声震荡2 min,快速加入1 mL、0.01mol/L的抗坏血酸溶液,快速震荡15 s,静置10 h,超纯水离心洗涤,重新分散于10 mL超纯水中,制得Pd@Pt NPs分散液;
(3)氨基化MoSe2的制备
将170 mg硒粉加入到5 mL、质量分数为85%水合肼中,磁力搅拌3 h,制得溶液A;将280mg钼酸钠加入到20 mL超纯水中,制得溶液B;将A、B两溶液混合,磁力搅拌30 min,转移到聚四氟乙烯高压釜中,200 °C加热24 h,冷却至室温,无水乙醇和超纯水离心洗涤3次,在60 °C的真空干燥箱中干燥24 h,制得MoSe2;
将100 mg MoSe2和00 μL3-氨丙基三乙氧基硅烷依次加入到10 mL无水乙醇中,70 °C回流70 min,离心分离,超纯水离心洗涤,60 °C真空干燥12 h,得到氨基化MoSe2;
(4)Pd@Pt/MoSe2的制备
将35 mg氨基化MoSe2加至10 mLPd@Pt NPs分散液中,震荡14 h,离心分离,在40 °C的真空干燥箱中干燥18 h,制得Pd@Pt/MoSe2,
(5)检测抗体孵化物Pd@Pt/MoSe2-Ab2溶液的制备
将8 mg的Pd@Pt/MoSe2加至1 mL超纯水中,超声分散,再加入100 μL、120 μg/mL的肿瘤标志物检测抗体Ab2溶液和900 μL、50 mmol/L的 pH = 7.0的磷酸盐缓冲溶液,4 °C恒温振荡培养箱中振荡,孵化12 h,离心分离,将所得沉淀重新分散至1 mL、50 mmol/L的pH为7.0的磷酸盐缓冲溶液中,制得检测抗体孵化物Pd@Pt/MoSe2-Ab2溶液,4 °C下保存备用。
实施例10肿瘤标志物NSE的检测,包括以下步骤:
(1)使用电化学工作站以三电极体系进行测试,饱和甘汞电极为参比电极,铂丝电极为辅助电极,所制备的传感器为工作电极,在10 mL、50 mmol/L的pH 5.00 ~ 9.00磷酸盐缓冲溶液中进行测试;
(2)用时间-电流法对分析物进行检测,输入电压为-0.4 V,取样间隔0.1 s,运行时间400 s;
(3)当背景电流趋于稳定后,每隔50 s向10 mL、50 mmol/L的 pH = 7.0的磷酸盐缓冲溶液中注入10 μL、5 mol/L的双氧水溶液,记录电流变化;
(4)采用标准曲线法,测定肿瘤标志物NSE的线性范围为15fg/mL~90 ng/mL,检测限为5fg/mL。
实施例11肿瘤标志物SCCA的检测
按照实施例10的方法对样品中SCCA进行检测,其线性范围为15 fg/mL ~ 90 ng/mL,检测限为5.0 fg/mL。
Claims (5)
1.一种铂钯复合二硒化钼标记的夹心型免疫传感器的制备方法,其特征在于,步骤如下:
(1)将直径为4 mm的玻碳电极用Al2O3抛光粉打磨成镜面,超纯水清洗干净;
(2)取6 µL、1.0 ~ 3.0 mg/mL的金纳米棒负载氨基化石墨烯分散液滴涂到电极表面,室温下晾干,超纯水冲洗电极表面,晾干;
(3)将6 µL、8.0 ~ 12.0 µg/mL的肿瘤标志物捕获抗体Ab1滴加到电极表面,超纯水冲洗,4 °C冰箱中干燥;
(4)继续将3 µL、0.5 ~ 2.0 mg/mL的牛血清白蛋白BSA溶液滴加到电极表面,用以封闭电极上非特异性活性位点,超纯水冲洗电极表面,4 °C冰箱中晾干;
(5)滴加6 µL、10 fg/mL ~ 100 ng/mL的一系列不同浓度的肿瘤标志物抗原Ag溶液,超纯水冲洗电极表面,4 °C冰箱中晾干;
(6)将6 µL、1.5 ~ 3.5 mg/mL检测抗体孵化物Pd@Pt/MoSe2-Ab2溶液滴至电极表面,置于4 °C冰箱中孵化40 min,超纯水冲洗电极表面,4 °C冰箱中晾干,制得一种铂钯复合二硒化钼标记的夹心型免疫传感器。
2.如权利要求1所述的一种铂钯复合二硒化钼标记的夹心型免疫传感器的制备方法,所述金纳米棒负载氨基化石墨烯分散液的制备,其特征在于,步骤如下:
(1)金纳米棒溶液的制备
将95 ~ 105μL、质量分数为1%的氯金酸和350 ~ 370 mg十六烷基三甲基溴化铵加入到10 mL超纯水中,超声震荡15 ~ 20 min;磁力搅拌下快速加入50 ~ 70μL、0.1 mol/L新制备的硼氢化钠溶液,搅拌2 ~ 4 min,得到棕黄色的金纳米种子溶液;
将380 ~ 420 μL、质量分数为1%的氯金酸和700 ~ 780 mg十六烷基三甲基溴化铵及15~ 25 μL、0.1 mol/L硝酸银溶液加入到20 mL超纯水中,超声震荡25 ~ 45min;加入90 ~120 μL、0.1 mol/L新配制的抗坏血酸溶液,溶液由黄色变无色,加入20 μL金纳米种子溶液,震荡30 ~ 40 s,静置24 h,超纯水离心洗涤3次,再分散于10 mL超纯水中,得到金纳米棒溶液;
(2)氧化石墨烯的制备
将1 ~ 2 g石墨薄片和0.5 ~ 1 g硝酸钠依次加入装有23 mL浓硫酸的烧瓶中,在冰浴中搅拌30 min;搅拌下加入3 ~ 4 g高锰酸钾,加高锰酸钾的过程中保持反应温度低于20 °C,然后升温至35 °C并保持30 min,然后升温至90°C ~ 95°C并保持15 min,后缓慢加入50mL超纯水;再依次加入140 mL超纯水和10 ~ 15 mL、质量分数为30%的H2O2溶液,溶液变成亮黄色;离心分离,分别用1 mol/L的HCl溶液和超纯水洗涤, 在50 °C真空干燥箱中干燥24h,制得氧化石墨烯;
(3)金纳米棒负载氨基化石墨烯分散液的制备
在50 mL的烧杯中加入40 ~ 50 mg氧化石墨烯和10 ~ 15 mL乙二醇,超声震荡30 min,加入0.3 ~ 0.4 mL、质量分数为25%的氨水,超声震荡5 min,将溶液转移到聚四氟乙烯高压釜中,180 °C反应10 ~ 14 h,冷却至室温,无水乙醇离心洗涤,在30 °C的真空干燥箱中干燥12 h,制得氨基化石墨烯;
将20 ~ 30 mg氨基功能化石墨烯加至10 mL上述步骤(1)制备的金纳米棒溶液中,震荡12 h,制得金纳米棒负载氨基化石墨烯。
3.如权利要求1所述的一种铂钯复合二硒化钼标记的夹心型免疫传感器的制备方法,所述检测抗体孵化物Pd@Pt/MoSe2-Ab2溶液的制备,其特征在于,步骤如下:
(1)功能化Pd NPs分散液的制备
依次取90 ~ 110 mg聚乙烯吡咯烷酮,550 ~ 650 mg溴化钾和60 ~ 70 mg抗坏血酸溶于8 mL超纯水中,加热至80 °C保持10 min;在磁力搅拌下加入50 ~ 70 mg四氯化钯酸钠,反应3 h后,依次用超纯水和丙酮离心洗涤3次,制得Pd NPs,重新分散在10 mL超纯水中制得Pd NPs分散液;
分别取180 ~ 200 mg十六烷基三甲基溴化铵和25 ~ 30 mg溴水杨酸溶于10 mL超纯水中;加入1.0 ~ 2.0 mL的Pd NPs分散液,超声震荡5 ~ 9 min,离心,用超纯水离心洗涤三次,重新分散在10 mL超纯水中,得到功能化Pd NPs分散液;
(2)Pd@Pt NPs分散液的制备
将250 ~ 270 μL、质量分数为1%是氯铂酸溶于5 mL超纯水中,加入1 mL功能化Pd NPs分散液,超声震荡1 ~ 2 min,快速加入1 mL、0.01mol/L的抗坏血酸溶液,快速震荡10 ~ 15s,静置8 ~ 10 h,超纯水离心洗涤,重新分散于10 mL超纯水中,制得Pd@Pt NPs分散液;
(3)氨基化MoSe2的制备
将150 ~ 170 mg硒粉加入到5 mL、质量分数为85%水合肼中,磁力搅拌2 ~ 3 h,制得溶液A;将200 ~ 280 mg钼酸钠加入到20 mL超纯水中,制得溶液B;将A、B两溶液混合,磁力搅拌30 min,转移到聚四氟乙烯高压釜中,200 °C加热24 h,冷却至室温,无水乙醇和超纯水离心洗涤3次,在60 °C的真空干燥箱中干燥16 ~ 24h,制得MoSe2;
将100 mg MoSe2和160 ~ 200 μL3-氨丙基三乙氧基硅烷依次加入到10 mL无水乙醇中,70 °C回流60 ~ 70 min,离心分离,超纯水离心洗涤,60 °C真空干燥12 h,得到氨基化MoSe2;
(4)Pd@Pt/MoSe2的制备
将25 ~ 35 mg氨基化MoSe2加至10 mLPd@Pt NPs分散液中,震荡10 ~ 14 h,离心分离,在40 °C的真空干燥箱中干燥12 ~ 18h,制得Pd@Pt/MoSe2,
(5)检测抗体孵化物Pd@Pt/MoSe2-Ab2溶液的制备
将4 ~ 8 mg的Pd@Pt/MoSe2加至1 mL超纯水中,超声分散,再加入100 μL、80 ~ 120 μg/mL的肿瘤标志物检测抗体Ab2溶液和900 μL、50 mmol/L的 pH = 7.0的磷酸盐缓冲溶液,4°C恒温振荡培养箱中振荡,孵化12 h,离心分离,将所得沉淀重新分散至1 mL、50 mmol/L的pH为7.0的磷酸盐缓冲溶液中,制得检测抗体孵化物Pd@Pt/MoSe2-Ab2溶液,4 °C下保存备用。
4.如权利要求1所述的制备方法制备的一种铂钯复合二硒化钼标记的夹心型免疫传感器,用于肿瘤标志物的检测,包括以下步骤:
(1)使用电化学工作站以三电极体系进行测试,饱和甘汞电极为参比电极,铂丝电极为辅助电极,所制备的传感器为工作电极,在10 mL、50 mmol/L的pH 5.00 ~ 9.00磷酸盐缓冲溶液中进行测试;
(2)用时间-电流法对分析物进行检测,输入电压为-0.4 V,取样间隔0.1 s,运行时间400 s;
(3)当背景电流趋于稳定后,每隔50 s向10 mL、50 mmol/L的 pH = 7.0的磷酸盐缓冲溶液中注入10 μL、5 mol/L的双氧水溶液,记录电流变化。
5.如权利要求1、2、3、4所述的肿瘤标志物,其特征在于,所述肿瘤标志物选自下列之一:糖分解烯醇酶NSE、鳞状细胞癌抗原SCCA。
Priority Applications (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
CN201810437942.4A CN108593743B (zh) | 2018-05-09 | 2018-05-09 | 一种铂钯复合二硒化钼标记的夹心型免疫传感器的制备方法及应用 |
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
CN201810437942.4A CN108593743B (zh) | 2018-05-09 | 2018-05-09 | 一种铂钯复合二硒化钼标记的夹心型免疫传感器的制备方法及应用 |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
CN108593743A true CN108593743A (zh) | 2018-09-28 |
CN108593743B CN108593743B (zh) | 2020-01-10 |
Family
ID=63636646
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
CN201810437942.4A Expired - Fee Related CN108593743B (zh) | 2018-05-09 | 2018-05-09 | 一种铂钯复合二硒化钼标记的夹心型免疫传感器的制备方法及应用 |
Country Status (1)
Country | Link |
---|---|
CN (1) | CN108593743B (zh) |
Cited By (8)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN107505466A (zh) * | 2017-10-20 | 2017-12-22 | 山东理工大学 | 一种检测乙型肝炎表面抗原的电流型免疫传感器的制备方法及应用 |
CN109342745A (zh) * | 2018-12-21 | 2019-02-15 | 山东理工大学 | 一种基于PdCu@GO的夹心型电化学免疫传感器的构建方法及应用 |
CN109709188A (zh) * | 2019-02-27 | 2019-05-03 | 山东理工大学 | 一种氮硫双掺杂氧化石墨烯标记的夹心型免疫传感器的制备方法及应用 |
CN109738641A (zh) * | 2019-01-19 | 2019-05-10 | 山东理工大学 | 一种基于铂钯功能化二硫化钼的无酶电化学免疫传感器的制备方法及应用 |
CN109856208A (zh) * | 2019-03-07 | 2019-06-07 | 广西师范学院 | 检测溶液中过氧化氢浓度的方法 |
CN112630278A (zh) * | 2020-12-14 | 2021-04-09 | 山东理工大学 | 一种检测神经元特异性烯醇化酶的夹心型电化学免疫传感器的制备方法及应用 |
CN114411199A (zh) * | 2021-12-23 | 2022-04-29 | 黄山学院 | 一种花状MoSe2-CuPd纳米复合材料及其合成方法与应用 |
CN115165993A (zh) * | 2022-07-26 | 2022-10-11 | 杭州师范大学 | 一种基于网状MoSe2/Pt复合材料修饰电极及其制备和应用 |
Citations (6)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN103480856A (zh) * | 2013-09-09 | 2014-01-01 | 南京邮电大学 | 一种使用二维过渡金属硫族化合物纳米片和金属制备纳米复合材料的方法 |
CN105067690A (zh) * | 2015-07-09 | 2015-11-18 | 济南大学 | 一种基于二硫化钼复合材料构建的雌二醇电化学免疫传感器的制备方法 |
CN105136977A (zh) * | 2015-07-09 | 2015-12-09 | 济南大学 | 一种二硫化钼基双金属纳米复合材料构建的气体传感器的制备方法 |
JP2016151558A (ja) * | 2015-02-19 | 2016-08-22 | 富士通株式会社 | ガスセンサ |
WO2016133570A1 (en) * | 2015-02-20 | 2016-08-25 | Northeastern University | Low noise ultrathin freestanding membranes composed of atomically-thin 2d materials |
CN106442994A (zh) * | 2016-09-14 | 2017-02-22 | 山东理工大学 | 一种基于Ag@Au纳米复合材料的电化学免疫传感器的制备方法及应用 |
-
2018
- 2018-05-09 CN CN201810437942.4A patent/CN108593743B/zh not_active Expired - Fee Related
Patent Citations (6)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN103480856A (zh) * | 2013-09-09 | 2014-01-01 | 南京邮电大学 | 一种使用二维过渡金属硫族化合物纳米片和金属制备纳米复合材料的方法 |
JP2016151558A (ja) * | 2015-02-19 | 2016-08-22 | 富士通株式会社 | ガスセンサ |
WO2016133570A1 (en) * | 2015-02-20 | 2016-08-25 | Northeastern University | Low noise ultrathin freestanding membranes composed of atomically-thin 2d materials |
CN105067690A (zh) * | 2015-07-09 | 2015-11-18 | 济南大学 | 一种基于二硫化钼复合材料构建的雌二醇电化学免疫传感器的制备方法 |
CN105136977A (zh) * | 2015-07-09 | 2015-12-09 | 济南大学 | 一种二硫化钼基双金属纳米复合材料构建的气体传感器的制备方法 |
CN106442994A (zh) * | 2016-09-14 | 2017-02-22 | 山东理工大学 | 一种基于Ag@Au纳米复合材料的电化学免疫传感器的制备方法及应用 |
Non-Patent Citations (1)
Title |
---|
LING-XIA ZUO 等: "A facile sonochemical route for the synthesis of MoS2/Pd composites for highly efficient oxygen reduction reaction", 《ULTRASONICS SONOCHEMISTRY》 * |
Cited By (11)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN107505466A (zh) * | 2017-10-20 | 2017-12-22 | 山东理工大学 | 一种检测乙型肝炎表面抗原的电流型免疫传感器的制备方法及应用 |
CN109342745A (zh) * | 2018-12-21 | 2019-02-15 | 山东理工大学 | 一种基于PdCu@GO的夹心型电化学免疫传感器的构建方法及应用 |
CN109738641A (zh) * | 2019-01-19 | 2019-05-10 | 山东理工大学 | 一种基于铂钯功能化二硫化钼的无酶电化学免疫传感器的制备方法及应用 |
CN109709188A (zh) * | 2019-02-27 | 2019-05-03 | 山东理工大学 | 一种氮硫双掺杂氧化石墨烯标记的夹心型免疫传感器的制备方法及应用 |
CN109709188B (zh) * | 2019-02-27 | 2020-08-11 | 山东理工大学 | 一种氮硫双掺杂氧化石墨烯标记的夹心型免疫传感器的制备方法及应用 |
CN109856208A (zh) * | 2019-03-07 | 2019-06-07 | 广西师范学院 | 检测溶液中过氧化氢浓度的方法 |
CN112630278A (zh) * | 2020-12-14 | 2021-04-09 | 山东理工大学 | 一种检测神经元特异性烯醇化酶的夹心型电化学免疫传感器的制备方法及应用 |
CN112630278B (zh) * | 2020-12-14 | 2022-04-29 | 山东理工大学 | 一种检测神经元特异性烯醇化酶的夹心型电化学免疫传感器的制备方法及应用 |
CN114411199A (zh) * | 2021-12-23 | 2022-04-29 | 黄山学院 | 一种花状MoSe2-CuPd纳米复合材料及其合成方法与应用 |
CN115165993A (zh) * | 2022-07-26 | 2022-10-11 | 杭州师范大学 | 一种基于网状MoSe2/Pt复合材料修饰电极及其制备和应用 |
CN115165993B (zh) * | 2022-07-26 | 2023-08-08 | 杭州师范大学 | 一种基于网状MoSe2/Pt复合材料修饰电极及其制备和应用 |
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
CN108593743B (zh) | 2020-01-10 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
CN108593743A (zh) | 一种铂钯复合二硒化钼标记的夹心型免疫传感器的制备方法及应用 | |
CN108802133B (zh) | 一种检测胃癌肿瘤标志物夹心型免疫传感器的制备方法及应用 | |
CN106442994B (zh) | 一种基于Ag@Au纳米复合材料的电化学免疫传感器的制备方法及应用 | |
CN107727858B (zh) | 一种基于Rh@Pt纳米枝晶复合材料免疫传感器的制备方法及应用 | |
CN104880456B (zh) | 一种基于GO/MWCNTs-COOH/Au@CeO2构建的电化学发光免疫传感器的制备方法及应用 | |
CN105572356B (zh) | 一种乳腺癌肿瘤标志物免疫传感器的制备方法及应用 | |
CN110794017B (zh) | 一种检测降钙素原的电化学免疫传感器的制备方法 | |
CN110376380B (zh) | 一种电化学酶联免疫传感器及其制备与检测抗原的应用 | |
CN107271518B (zh) | 一种电流型电化学传感器及其制备方法和应用 | |
CN108918853B (zh) | 一种Pd@Ag@CeO2标记的免疫传感器的制备方法及应用 | |
CN109115855A (zh) | 一种检测阿尔茨海默症标志物的电化学免疫传感器的制备方法及应用 | |
CN108469461B (zh) | 一种夹心型肺癌标志物电化学传感器的制备方法及应用 | |
CN108896638B (zh) | 一种基于二氧化钛掺杂石墨烯负载海参状金钯核壳纳米粒子的免疫传感器的制备方法及应用 | |
CN104569427A (zh) | 一种基于二氧化锰负载银纳米粒子多壁碳纳米管构建的免疫传感器的制备方法及应用 | |
CN107328930A (zh) | 一种基于双信号响应比率型丝网印刷电极免疫传感器的制备及应用 | |
CN110441528B (zh) | 一种基于核壳结构Mo2C@C纳米球的心肌钙蛋白I免疫传感器的构建 | |
CN109613244A (zh) | 一种Ag@Pt-CuS标记的免疫传感器的制备方法及应用 | |
CN106093396A (zh) | 一种基于Au‑GQD@PtPd的免疫传感器的制备方法及应用 | |
CN106442675A (zh) | 一种基于Au@Ag@Au标记的癌胚抗原电化学免疫传感器的制备及应用 | |
CN114235907B (zh) | 用于非小细胞肺癌cyfra21-1检测的电化学发光免疫传感器及检测方法 | |
CN106093390B (zh) | 一种PtCu@g‑C3N4/rGO标记的电化学免疫传感器的制备方法及应用 | |
CN106770530B (zh) | 一种鳞状细胞癌标志物夹心型免疫传感器的制备方法及应用 | |
CN108375612B (zh) | 一种复合纳米材料电化学检测甲胎蛋白的方法 | |
CN109709188B (zh) | 一种氮硫双掺杂氧化石墨烯标记的夹心型免疫传感器的制备方法及应用 | |
CN107271519A (zh) | 一种基于负载Rh@Pd纳米枝晶的磺化碳纳米管的免疫传感器的制备方法及应用 |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
PB01 | Publication | ||
PB01 | Publication | ||
SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
GR01 | Patent grant | ||
GR01 | Patent grant | ||
CF01 | Termination of patent right due to non-payment of annual fee |
Granted publication date: 20200110 |