CN110243895A - 一种基于MnxCo1-xSe2-Pd的夹心型电化学免疫传感器的制备方法及应用 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及一种夹心型电化学免疫传感器的制备与应用,具体说是一种以UiO‑67,金纳米粒子(UiO‑67/Au)的复合材料为传感平台,以MnxCo1‑xSe2‑Pd为二抗标记物的夹心型免疫传感器,本发明属于新型功能材料、生物传感技术领域。UiO‑67/Au具有大的比表面积,良好的生物相容性等优点,可以有效促进电子传递过程,是一种优良的传感材料。MnxCo1‑xSe2‑Pd对H2O2具有良好的催化作用,能够显著提高免疫传感器的灵敏度,扩大检出范围,降低检出限。
Description
技术领域
本发明涉及一种电化学免疫传感器的制备与应用,具体说是一种以UiO-67/Au为传感平台,以MnxCo1-xSe2-Pd为二抗标记物的夹心型免疫传感器,本发明属于新型功能材料、生物传感技术领域。
背景技术
胰岛素是一种由胰脏内的胰岛B细胞分泌的蛋白质激素。胰岛素的主要功能是促进人体中组织细胞对葡萄糖的摄取和利用,促进葡萄糖转化成糖原并储藏在人体内。胰岛素可以促进人体内的葡萄糖释放能量,以用于机体的生命活动,而且它可以参与调节新陈代谢,控制血糖平衡。当人体的胰岛素分泌不足时,人体的血糖浓度就失去平衡,从而导致糖尿病的出现。因此,通过检测胰岛素的含量来监测糖尿病病情,这在医学治疗方面尤为重要。
电化学免疫传感器是指将生物活性物质如酶、抗原、抗体、DNA等生物体成分作为敏感元件,电极作为转换元件,以电势或电流为特征检测信号的传感器。此类传感器具有高灵敏性、高选择性、高专一性和低检出限等优点。
UiO系列材料是Zr基通过与有机配体连接而呈现立方体结构的,同时具有12配位的金属有机框架材料,其中UiO-67由于具有比表面积和孔道结构大,化学稳定性和热稳定高等优点,被广泛应用在电化学免疫传感器中。Au纳米粒子具有优异的导电性,可以与抗体通过Au-NH2结合;因此将Au纳米粒子通过原位还原的方法负载在UiO-67上(UiO-67/Au),以此提高复合材料的导电性和生物相容性。
在催化领域,双金属催化剂一直以来都是研究的热点。两种金属的协同作用能够改变单金属催化剂的活性,提高自身的稳定性,表现出优异的选择性。将Mn掺杂进CoSe2中大大增加了催化剂的活性位点,提高了对H2O2的催化能力。另外,将Pd纳米粒子负载在MnxCo1-xSe2上,不仅可以提高标记物材料对H2O2的电催化活性,而且Pd纳米粒子可以通过Pd-NH2连接抗体提高材料的生物相容性,从而提高传感器的灵敏度,降低检出限,扩大检测范围。
发明内容
本发明的目的之一是制备一种以UiO-67/Au为传感平台,以MnxCo1-xSe2-Pd为二抗标记物的夹心型电化学免疫传感器。
本发明的目的之二是将该传感器用于胰岛素的高灵敏、特异性检测。
本发明的技术方案如下:
1.一种基于MnxCo1-xSe2-Pd的夹心型电化学免疫传感器的制备方法如下:
(1)将玻碳电极用抛光粉打磨,再使用超纯水清洗,将电极置于5 mmol/L 铁氰化钾溶液中,并在-0.2~0.6 V 电位下进行扫描,使峰电位的差值小于110 mV;
(2)将10 μL,1~2 mg/mL UiO-67/Au溶液滴加在电极上,室温下干燥;
(3)将10 μL,10~20 μg/mL胰岛素一抗滴加在电极上,室温下干燥之后,用PBS清洗,除去多余抗体;
(4)将5 μL,质量分数为1~2% BSA溶液滴加于电极上,用以封闭非特异性结合位点,干燥之后使用PBS洗去多余BSA;
(5)将10 μL不同浓度的胰岛素抗原滴加到电极上,室温下干燥并用PBS洗涤;
(6)将10 μL,3~4 mg/mL MnxCo1-xSe2-Pd-Ab2溶液滴加于电极上,室温下干燥后用PBS洗涤,夹心型电化学免疫传感器的制备完成。
2.一种基于MnxCo1-xSe2-Pd的夹心型电化学免疫传感器的UiO-67/Au复合材料的制备步骤如下:
(1)UiO-67的制备
将45~55 mg 2,2-联吡啶-5,5-二羧酸溶于含有350~400 µL三乙胺的N,N-二甲基甲酰胺(DMF)中,同时,将45~50 mg四氯化锆分散在15~20 mL的DMF中,得到白色溶液,将以上两种溶液混合,然后再加入2~3 ml醋酸,将其倒入高压反应釜中,在85℃下反应24 h,反应结束后,将所得到的沉淀离心收集,用DMF、甲醇和乙醇分别洗涤三次,弃去上清液,将沉淀放入60℃真空干燥箱干燥,最后经过研磨,得到白色粉末UiO-67;
(2)UiO-67/Au的制备
称取0.1~0.2 g UiO-67在室温下超声分散于10~20 mL甲醇中,得到白色均匀乳浊液,加入0.3~0.4 mL氯金酸混合,在室温下搅拌5 h得到黄色乳浊液,称取0.06~0.07 g硼氢化钠超声溶解于10~20 mL甲醇后,逐滴加入到上述黄色乳浊液中,溶液迅速变为红棕色,继续搅拌2 h,将所得到的混合物离心5 min并用乙醇洗涤三次,将沉淀放入60℃真空干燥箱干燥12 h,最后经过研磨得到UiO-67/Au。
3.一种基于MnxCo1-xSe2-Pd的夹心型电化学免疫传感器的MnxCo1-xSe2-Pd-Ab2制备步骤如下:
(1)MnxCo1-xSe2的制备
称取4~6 mmol的Co(NO3)2·6H2O、1~3 mmol的MnCl2·4H2O和6~8 mmol尿素溶解于40~50 mL超纯水中,形成透明粉红色溶液,转移至高压反应釜,并在120℃下反应6 h,反应结束后,除去上清液,收集沉淀,并将沉淀用超纯水和乙醇分别离心洗涤三次,放入真空干燥箱中干燥6 h,最后得到紫红色粉末。将1~2 mmol的Se加入到40~50 mL乙二胺中,超声溶解2 h后加入上述紫红色粉末,再将混合液转移到的高压釜中,在180 ℃下反应12 h,反应之后冷却至室温,将所得到的沉淀离心收集用乙醇和超纯水分别洗涤三次,将产品放入60℃真空干燥箱干燥。最后把样品放在400 ℃的氮气中退火1 h;
(2)MnxCo1-xSe2-Pd的制备
将60~70 mg的MnxCo1-xSe2分散在80~90 mL乙醇水(50%)中,然后加入13~14 mLNa2PdCl4(10 mmol/L)溶液,超声混合,在搅拌下将NaBH4溶液逐滴加入用以还原金属离子,反应2 h后,将所得到的混合物离心收集,用超纯水洗涤三次,将产品放入60℃真空干燥箱干燥;
(3)MnxCo1-xSe2-Pd-Ab2的制备
用量筒量取2~3 mL的PBS溶液,加入4~6 mg的MnxCo1-xSe2-Pd标记物、1~2 mL的NHS、1~2mL的EDC和100~200 μL的Ab2,将溶液混合后放置在4℃的冷冻震荡器中,振荡24 h,然后用冷冻离心机将所得到的混合物在4℃下用4000 r/min离心分离,用PBS溶液洗涤三次,加入1mL的pH=7.38的PBS溶液配成MnxCo1-xSe2-Pd-Ab2溶液。
4胰岛素的检验,步骤如下:
(1)使用电化学工作站以三电极体系进行测试,饱和甘汞电极为参比电极,铂丝电极为辅助电极,所制备的电化学免疫传感器为工作电极;
(2)使用计时电流法,在10~20 mL、pH为6.0~8.0并含有5 mmol/L H2O2的PBS溶液中进行检测,起始电压为-0.2~0.6 V,灵敏度为10-4,记录电流变化,绘制工作曲线;
(3)将待测样品溶液代替胰岛素的标准溶液进行检测。
本发明的有益成果
1.本发明将Au负载在UiO-67上,提高了传感器的导电性,而且Au与抗体通过Au-NH2键将抗体固定在电极表面,提高了抗体的结合率。
2.本发明以MnxCo1-xSe2-Pd为标记物,促进电子传递,显现出对H2O2优异的催化性能,增大电流信号值,显著地提高了传感器的灵敏度,降低了传感器的检出限。
3.本发明利用抗原、抗体的免疫反应,提高了检测方法的特异性。
4.本发明制备的夹心型电化学免疫传感器利用UiO-67/Au传感平台的导电性和MnxCo1-xSe2-Pd高电催化性进行胰岛素的检测,具有检测线低、线性范围宽、灵敏度高、操作简单、响应时间短,特异性检验等特点,对胰岛素的检测限可达0.34 pg/mL。
具体实施方式
实施例1 一种基于MnxCo1-xSe2-Pd的夹心型电化学免疫传感器的UiO-67/Au复合材料的制备步骤如下:
将45 mg 2,2-联吡啶-5,5-二羧酸溶于含有360 µL三乙胺的N,N-二甲基甲酰胺(DMF)中,同时,将45 mg四氯化锆分散在16 mL的DMF中,得到白色溶液,将以上两种溶液混合,然后再加入2.25 ml醋酸,将其倒入高压反应釜中,在85℃下反应24 h,反应结束后,将所得到的沉淀离心收集,用DMF、甲醇和乙醇分别洗涤三次,弃去上清液,将沉淀放入60℃真空干燥箱干燥,最后经过研磨,得到白色粉末UiO-67;
(2)UiO-67/Au的制备
称取0.1 g UiO-67在室温下超声分散于10 mL甲醇中,得到白色均匀乳浊液,加入0.3mL氯金酸混合,在室温下搅拌5 h得到黄色乳浊液,称取0.06 g硼氢化钠超声溶解于10 mL甲醇后,逐滴加入到上述黄色乳浊液中,溶液迅速变为红棕色,继续搅拌2 h,将所得到的混合物离心5 min并用乙醇洗涤三次,将沉淀放入60℃真空干燥箱干燥12 h,最后经过研磨得到UiO-67/Au。
实施例2 一种基于MnxCo1-xSe2-Pd的夹心型电化学免疫传感器的UiO-67/Au复合材料的制备步骤如下:
将50 mg 2,2-联吡啶-5,5-二羧酸溶于含有350 µL三乙胺的N,N-二甲基甲酰胺(DMF)中,同时,将47 mg四氯化锆分散在18 mL的DMF中,得到白色溶液,将以上两种溶液混合,然后再加入2.5 ml醋酸,将其倒入高压反应釜中,在85℃下反应24 h,反应结束后,将所得到的沉淀离心收集,用DMF、甲醇和乙醇分别洗涤三次,弃去上清液,将沉淀放入60℃真空干燥箱干燥,最后经过研磨,得到白色粉末UiO-67;
(2)UiO-67/Au的制备
称取0.15 g UiO-67在室温下超声分散于15 mL甲醇中,得到白色均匀乳浊液,加入0.35 mL氯金酸混合,在室温下搅拌5 h得到黄色乳浊液,称取0.065 g硼氢化钠超声溶解于15 mL甲醇后,逐滴加入到上述黄色乳浊液中,溶液迅速变为红棕色,继续搅拌2 h,将所得到的混合物离心5 min并用乙醇洗涤三次,将沉淀放入60℃真空干燥箱干燥12 h,最后经过研磨得到UiO-67/Au。
实施例3 一种基于MnxCo1-xSe2-Pd的夹心型电化学免疫传感器的UiO-67/Au复合材料的制备步骤如下:
将55 mg 2,2-联吡啶-5,5-二羧酸溶于含有400 µL三乙胺的N,N-二甲基甲酰胺(DMF)中,同时,将50 mg四氯化锆分散在20 mL的DMF中,得到白色溶液,将以上两种溶液混合,然后再加入3 ml醋酸,将其倒入高压反应釜中,在85℃下反应24 h,反应结束后,将所得到的沉淀离心收集,用DMF、甲醇和乙醇分别洗涤三次,弃去上清液,将沉淀放入60℃真空干燥箱干燥,最后经过研磨,得到白色粉末UiO-67;
(2)UiO-67/Au的制备
称取0.2 g UiO-67在室温下超声分散于20 mL甲醇中,得到白色均匀乳浊液,加入0.4mL氯金酸混合,在室温下搅拌5 h得到黄色乳浊液,称取0.07 g硼氢化钠超声溶解于20 mL甲醇后,逐滴加入到上述黄色乳浊液中,溶液迅速变为红棕色,继续搅拌2 h,将所得到的混合物离心5 min并用乙醇洗涤三次,将沉淀放入60℃真空干燥箱干燥12 h,最后经过研磨得到UiO-67/Au。
实施例4 一种基于MnxCo1-xSe2-Pd的夹心型电化学免疫传感器的MnxCo1-xSe2-Pd-Ab2制备步骤如下:
(1)MnxCo1-xSe2的制备
称取4 mmol的Co(NO3)2·6H2O、1 mmol的MnCl2·4H2O和7.5 mmol尿素溶解于40 mL超纯水中,形成透明粉红色溶液,转移至高压反应釜,并在120℃下反应6 h,反应结束后,除去上清液,收集沉淀,并将沉淀用超纯水和乙醇分别离心洗涤三次,放入真空干燥箱中干燥6h,最后得到紫红色粉末。将1 mmol的Se加入到40 mL乙二胺中,超声溶解2 h后加入上述紫红色粉末,再将混合液转移到的高压釜中,在180 ℃下反应12 h,反应之后冷却至室温,将所得到的沉淀离心收集用乙醇和超纯水分别洗涤三次,将产品放入60℃真空干燥箱干燥。最后把样品放在400 ℃的氮气中退火1 h;
(2)MnxCo1-xSe2-Pd的制备
将60 mg的MnxCo1-xSe2分散在80 mL乙醇水(50%)中,然后加入13 mL Na2PdCl4(10mmol/L)溶液,超声混合,在搅拌下将NaBH4溶液逐滴加入用以还原金属离子,反应2 h后,将所得到的混合物离心收集,用超纯水洗涤三次,将产品放入60℃真空干燥箱干燥;
(3)MnxCo1-xSe2-Pd-Ab2的制备
用量筒量取2 mL的PBS溶液,加入4 mg的MnxCo1-xSe2-Pd标记物、1 mL的NHS、1 mL的EDC和100 μL的Ab2,将溶液混合后放置在4℃的冷冻震荡器中,振荡24 h,然后用冷冻离心机将所得到的混合物在4℃下用4000 r/min离心分离,用PBS溶液洗涤三次,加入1 mL的pH=7.38的PBS溶液配成MnxCo1-xSe2-Pd-Ab2溶液。
实施例5 一种基于MnxCo1-xSe2-Pd的夹心型电化学免疫传感器的MnxCo1-xSe2-Pd-Ab2制备步骤如下:
(1)MnxCo1-xSe2的制备
称取5 mmol的Co(NO3)2·6H2O、2 mmol的MnCl2·4H2O和7 mmol尿素溶解于45 mL超纯水中,形成透明粉红色溶液,转移至高压反应釜,并在120℃下反应6 h,反应结束后,除去上清液,收集沉淀,并将沉淀用超纯水和乙醇分别离心洗涤三次,放入真空干燥箱中干燥6 h,最后得到紫红色粉末。将1.5 mmol的Se加入到45 mL乙二胺中,超声溶解2 h后加入上述紫红色粉末,再将混合液转移到的高压釜中,在180 ℃下反应12 h,反应之后冷却至室温,将所得到的沉淀离心收集用乙醇和超纯水分别洗涤三次,将产品放入60℃真空干燥箱干燥。最后把样品放在400 ℃的氮气中退火1 h;
(2)MnxCo1-xSe2-Pd的制备
将65 mg的MnxCo1-xSe2分散在85 mL乙醇水(50%)中,然后加入13 mL Na2PdCl4(10mmol/L)溶液,超声混合,在搅拌下将NaBH4溶液逐滴加入用以还原金属离子,反应2 h后,将所得到的混合物离心收集,用超纯水洗涤三次,将产品放入60℃真空干燥箱干燥;
(3)MnxCo1-xSe2-Pd-Ab2的制备
用量筒量取2.5 mL的PBS溶液,加入5 mg的MnxCo1-xSe2-Pd标记物、1.5 mL的NHS、1.5mL的EDC和150 μL的Ab2,将溶液混合后放置在4℃的冷冻震荡器中,振荡24 h,然后用冷冻离心机将所得到的混合物在4℃下用4000 r/min离心分离,用PBS溶液洗涤三次,加入1 mL的pH=7.38的PBS溶液配成MnxCo1-xSe2-Pd-Ab2溶液。
实施例6 一种基于MnxCo1-xSe2-Pd的夹心型电化学免疫传感器的MnxCo1-xSe2-Pd-Ab2制备步骤如下:
(1)MnxCo1-xSe2的制备
称取6 mmol的Co(NO3)2·6H2O、3 mmol的MnCl2·4H2O和8 mmol尿素溶解于50 mL超纯水中,形成透明粉红色溶液,转移至高压反应釜,并在120℃下反应6 h,反应结束后,除去上清液,收集沉淀,并将沉淀用超纯水和乙醇分别离心洗涤三次,放入真空干燥箱中干燥6 h,最后得到紫红色粉末。将2 mmol的Se加入到50 mL乙二胺中,超声溶解2 h后加入上述紫红色粉末,再将混合液转移到的高压釜中,在180 ℃下反应12 h,反应之后冷却至室温,将所得到的沉淀离心收集用乙醇和超纯水分别洗涤三次,将产品放入60℃真空干燥箱干燥。最后把样品放在400 ℃的氮气中退火1 h;
(2)MnxCo1-xSe2-Pd的制备
将70 mg的MnxCo1-xSe2分散在90 mL乙醇水(50%)中,然后加入14 mL Na2PdCl4(10mmol/L)溶液,超声混合,在搅拌下将NaBH4溶液逐滴加入用以还原金属离子,反应2 h后,将所得到的混合物离心收集,用超纯水洗涤三次,将产品放入60℃真空干燥箱干燥;
(3)MnxCo1-xSe2-Pd-Ab2的制备
用量筒量取3 mL的PBS溶液,加入6 mg的MnxCo1-xSe2-Pd标记物、2 mL的NHS、2 mL的EDC和200 μL的Ab2,将溶液混合后放置在4℃的冷冻震荡器中,振荡24 h,然后用冷冻离心机将所得到的混合物在4℃下用4000 r/min离心分离,用PBS溶液洗涤三次,加入1 mL的pH=7.38的PBS溶液配成MnxCo1-xSe2-Pd-Ab2溶液。
实施例7 一种基于MnxCo1-xSe2-Pd的夹心型电化学免疫传感器的制备方法:
(1)将玻碳电极用抛光粉打磨,再使用超纯水清洗,将电极置于5 mmol/L 铁氰化钾溶液中,并在 -0.2~0.6 V 电位下进行扫描,使峰电位的差值小于110 mV;
(2)将10 μL,1.5 mg/mL UiO-67/Au溶液滴加在电极上,室温下干燥;
(3)将10 μL,10 μg/mL胰岛素一抗滴加在电极上,室温下干燥之后,用PBS清洗,除去多余抗体;
(4)将5 μL,质量分数为1% BSA溶液滴加于电极上,用以封闭非特异性结合位点,干燥之后使用PBS洗去多余BSA;
(5)将10 μL不同浓度的胰岛素抗原滴加到电极上,室温下干燥并用PBS洗涤;
(6)将10 μL,3 mg/mL MnxCo1-xSe2-Pd-Ab2溶液滴加于电极上,室温下干燥后用PBS洗涤,夹心型电化学免疫传感器的制备完成。
实施例8一种基于MnxCo1-xSe2-Pd的夹心型电化学免疫传感器的制备方法:
(1)将玻碳电极用抛光粉打磨,再使用超纯水清洗,将电极置于5 mmol/L 铁氰化钾溶液中,并在-0.2~0.6 V 电位下进行扫描,使峰电位的差值小于110 mV;
(2)将10 μL,1 mg/mL UiO-67/Au溶液滴加在电极上,室温下干燥;
(3)将10 μL,15 μg/mL胰岛素一抗滴加在电极上,室温下干燥之后,用PBS清洗,除去多余抗体;
(4)将5 μL,质量分数为1% BSA溶液滴加于电极上,用以封闭非特异性结合位点,干燥之后使用PBS洗去多余BSA;
(5)将10 μL不同浓度的胰岛素抗原滴加到电极上,室温下干燥并用PBS洗涤;
(6)将10 μL,3.5 mg/mL MnxCo1-xSe2-Pd-Ab2溶液滴加于电极上,室温下干燥后用PBS洗涤,夹心型电化学免疫传感器的制备完成。
实施例9 一种基于MnxCo1-xSe2-Pd的夹心型电化学免疫传感器的制备方法:
(1)将玻碳电极用抛光粉打磨,再使用超纯水清洗,将电极置于5 mmol/L 铁氰化钾溶液中,并在-0.2~0.6 V 电位下进行扫描,使峰电位的差值小于110 mV;
(2)将10 μL,2 mg/mL UiO-67/Au溶液滴加在电极上,室温下干燥;
(3)将10 μL,20 μg/mL胰岛素一抗滴加在电极上,室温下干燥之后,用PBS清洗,除去多余抗体;
(4)将5 μL,质量分数为2% BSA溶液滴加于电极上,用以封闭非特异性结合位点,干燥之后使用PBS洗去多余BSA;
(5)将10 μL不同浓度的胰岛素抗原滴加到电极上,室温下干燥并用PBS洗涤;
(6)将10 μL,4 mg/mL MnxCo1-xSe2-Pd-Ab2溶液滴加于电极上,室温下干燥后用PBS洗涤,夹心型电化学免疫传感器的制备完成。
实施例10 胰岛素的检验,步骤如下:
(1)使用电化学工作站以三电极体系进行测试,饱和甘汞电极为参比电极,铂丝电极为辅助电极,所制备的电化学免疫传感器为工作电极;
(2)使用计时电流法,在10 mL、pH为7.4并含有5 mmol/L H2O2的PBS溶液中进行检测,起始电压为-0.2~0.6 V,灵敏度为10-4,记录电流变化,绘制工作曲线;
(3)将待测样品溶液代替胰岛素的标准溶液进行检测;
(4)胰岛素检测的线性范围是10-3~100ng/mL,检测限是0.34 pg/mL。
Claims (4)
1.一种基于MnxCo1-xSe2-Pd的夹心型电化学免疫传感器的制备方法及应用,其特征在于,包括以下步骤:
(1)将玻碳电极用抛光粉打磨,再使用超纯水清洗,将电极置于5 mmol/L 铁氰化钾溶液中,并在 -0.2~0.6 V 电位下进行扫描,使峰电位的差值小于110 mV;
(2)将10 μL,1~2 mg/mL UiO-67/Au溶液滴加在电极上,室温下干燥;
(3)将10 μL,10~20 μg/mL胰岛素一抗滴加在电极上,室温下干燥之后,用PBS清洗,除去多余抗体;
(4)将5 μL,质量分数为1~2% BSA溶液滴加于电极上,用以封闭非特异性结合位点,干燥之后使用PBS洗去多余BSA;
(5)将10 μL不同浓度的胰岛素抗原滴加到电极上,室温下干燥并用PBS洗涤;
(6)将10 μL,3~4 mg/mL MnxCo1-xSe2-Pd-Ab2溶液滴加于电极上,室温下干燥后用PBS洗涤,夹心型电化学免疫传感器的制备完成。
2.如权利1所述的一种基于MnxCo1-xSe2-Pd的夹心型电化学免疫传感器的制备方法及应用,其所述的UiO-67/Au复合材料的制备步骤如下:
(1)UiO-67的制备
将45~55 mg 2,2-联吡啶-5,5-二羧酸溶于含有350~400 µL三乙胺的N,N-二甲基甲酰胺(DMF)中,同时,将45~50 mg四氯化锆分散在15~20 mL的DMF中,得到白色溶液,将以上两种溶液混合,然后再加入2~3 ml醋酸,将其倒入高压反应釜中,在85℃下反应24 h,反应结束后,将所得到的沉淀离心收集,用DMF、甲醇和乙醇分别洗涤三次,弃去上清液,将沉淀放入60℃真空干燥箱干燥,最后经过研磨,得到白色粉末UiO-67;
(2)UiO-67/Au的制备
称取0.1~0.2 g UiO-67在室温下超声分散于10~20 mL甲醇中,得到白色均匀乳浊液,加入0.3~0.4 mL氯金酸混合,在室温下搅拌5 h得到黄色乳浊液,称取0.06~0.07 g硼氢化钠超声溶解于10~20 mL甲醇后,逐滴加入到上述黄色乳浊液中,溶液迅速变为红棕色,继续搅拌2 h,将所得到的混合物离心5 min并用乙醇洗涤三次,将沉淀放入60℃真空干燥箱干燥12 h,最后经过研磨得到UiO-67/Au。
3.如权利1所述的一种基于MnxCo1-xSe2-Pd的夹心型电化学免疫传感器的制备方法及应用,其所述的MnxCo1-xSe2-Pd-Ab2制备步骤如下:
(1)MnxCo1-xSe2的制备
称取4~6 mmol的Co(NO3)2·6H2O、1~3 mmol的MnCl2·4H2O和6~8 mmol尿素溶解于40~50mL超纯水中,形成透明粉红色溶液,转移至高压反应釜,并在120℃下反应6 h,反应结束后,除去上清液,收集沉淀,并将沉淀用超纯水和乙醇分别离心洗涤三次,放入真空干燥箱中干燥6 h,最后得到紫红色粉末,
将1~2 mmol的Se加入到40~50 mL乙二胺中,超声溶解2 h后加入上述紫红色粉末,再将混合液转移到的高压釜中,在180 ℃下反应12 h,反应之后冷却至室温,将所得到的沉淀离心收集用乙醇和超纯水分别洗涤三次,将产品放入60℃真空干燥箱干燥,
最后把样品放在400 ℃的氮气中退火1 h;
(2)MnxCo1-xSe2-Pd的制备
将60~70 mg的MnxCo1-xSe2分散在80~90 mL乙醇水(50%)中,然后加入13~14 mL Na2PdCl4(10 mmol/L)溶液,超声混合,在搅拌下将NaBH4溶液逐滴加入用以还原金属离子,反应2 h后,将所得到的混合物离心收集,用超纯水洗涤三次,将产品放入60℃真空干燥箱干燥;
(3)MnxCo1-xSe2-Pd-Ab2的制备
用量筒量取2~3 mL的PBS溶液,加入4~6 mg的MnxCo1-xSe2-Pd标记物、1~2 mL的NHS、1~2mL的EDC和100~200 μL的Ab2,将溶液混合后放置在4℃的冷冻震荡器中,振荡24 h,然后用冷冻离心机将所得到的混合物在4℃下用4000 r/min离心分离,用PBS溶液洗涤三次,加入1mL的pH=7.38的PBS溶液配成MnxCo1-xSe2-Pd-Ab2溶液。
4.如权利1所述一种基于MnxCo1-xSe2-Pd的夹心型电化学免疫传感器的制备方法及应用,其特征在于,用于胰岛素的检验,检测步骤如下:
(1)使用电化学工作站以三电极体系进行测试,饱和甘汞电极为参比电极,铂丝电极为辅助电极,所制备的电化学免疫传感器为工作电极;
(2)使用计时电流法,在10~20 mL、pH为6.0~8.0并含有5 mmol/L H2O2的PBS溶液中进行检测,起始电压为 -0.2~0.6 V,灵敏度为10-4,记录电流变化,绘制工作曲线;
(3)将待测样品溶液代替胰岛素的标准溶液进行检测。
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