CN106596969B - 一种电致化学发光免疫传感器的制备、产品、检测及应用 - Google Patents

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Abstract

本发明公开了一种基于CdTe@MOFs/CdTeQDs复合物的电致化学发光免疫传感器的制备方法、产品、检测方法及应用，属于电化学发光传感器领域。采用一种金属有机骨架材料来固载量子点，通过利用金属有机骨架材料的特殊结构固定量子点于金属有机骨架材料内部及表面进而用此复合材料来固载第二抗体，并在纳米金功能化的二氧化钛复合物的辅助下固载第一抗体，与金属有机骨架材料/量子点/抗体共耦复合物及抗原形成双抗夹心免疫反应模式，实现了目标物识别及检测过程，极大程度地增强了电致化学发光信号。根据对不同浓度的待测物的电致化学发光信号强度的不同，实现对生化标志物的有效检测。

Description

一种电致化学发光免疫传感器的制备、产品、检测及应用
技术领域
本发明属于电致化学发光分析免疫检测领域，具体涉及一种基于CdTe@MOFs/CdTeQDs复合物的电致化学发光免疫传感器的制备方法、产品、检测方法及应用。
背景技术
急性心肌梗死是冠状动脉急性、持续性缺血缺氧所引起的心肌坏死。此病患者可出现心痛、心律失常、心衰等临床症状，病情严重者可发生昏迷或休克，甚至危及其生命。相关的研究表明，在急性心肌梗死患者发病后的6小时内，对其进行有效的治疗，可取得良好的治疗效果。因此对此病患者进行早期的诊断和治疗对挽救其生命具有重要的意义。
心肌肌钙蛋白I(cTnI)是心肌肌钙蛋白的一种亚型，正常人血液中含量很低，当心肌细胞损伤时，cTnI在血液中的含量迅速升高，是急性心肌梗塞的特异性诊断指标。因此，检测患者的cTnI水平对于诊断急性心肌梗死具有较高的特异度和敏感度。迄今为止，检测cTnI主要依靠基于各种检测技术的标记免疫夹心法，例如，酶联免疫测定，光磁生物传感器，电化学免疫检测法。但是，由于这些方法有步骤复杂、耗费时间、破坏环境等缺点，所以依旧要求提高检测技术水平。
电致化学发光分析技术由于其低背景、高灵敏度、宽线性范围、低耗用等突出优点而倍受关注。目前研究最多的电致化学发光体系包括联吡啶钌及其衍生物、鲁米诺及其衍生物、过硫酸根和量子点体系。与传统分子发光体相比，量子点由于尺寸效应的影响，具有优良的光、电和电化学性质，而量子点的电致化学发光在生化分析是一种非常有用的技术，具有背景小、灵敏度高、线性范围宽等优点。而量子点在电致化学发光传感器的应用中，量子点的固载是基于量子点的固态电致化学发光生物传感器制造中最重要的一步。通常来说，通过将量子点包埋在一些成膜材料中来实现量子点的固载，例如Nafion或壳聚糖。然而，通过包埋法制备的量子点薄膜会受到成膜材料的溶胀性和空间位阻效应的影响，很难获得稳定和强的电致化学发光信号。引入固载基质来制备具有增强的和稳定的电致化学发光信号的量子点纳米复合材料，极有可能解决上述问题。
发明内容
有鉴于此，本发明的目的在于提供一种基于CdTe@MOFs/CdTeQDs复合物的电致化学发光免疫传感器的制备方法、产品、检测方法及应用，采用一种金属有机骨架材料来固载量子点，通过利用金属有机骨架材料的特殊结构固定量子点于金属有机骨架材料内部及表面进而用此复合材料来固载第二抗体，并在纳米金功能化的二氧化钛复合物的辅助下固载第一抗体，与金属有机骨架材料/量子点/抗体共耦复合物及抗原形成双抗夹心免疫反应模式，实现了目标物识别及检测过程，极大程度地增强了电致化学发光信号。根据对不同浓度的待测物的电致化学发光信号强度的不同，实现对生化标志物的有效检测。另外，本发明具有特异性好，灵敏度高及稳定性好等优点，能够有效地实现生化标志物的高灵敏检测分析。
为实现上述发明目的，具体提供了如下的技术方案：
1、一种基于CdTe@MOFs/CdTeQDs复合物的电致化学发光免疫传感器的制备方法，包括以下步骤：
1)依次用0.3、0.05μm的氧化铝粉末对直径为4mm的玻碳电极进行抛光，先用超纯水清洗干净，再分别在超纯水、乙醇、超纯水中超声洗涤，晾干备用；
2)在电极表面滴加5μL，质量分数为20％～25％的Au@TiO2纳米复合物，室温下晾干得修饰电极；
3)在修饰电极表面滴加15μL，质量分数为2％～5％的抗体，4℃静置孵育，用超纯水漂洗，得到免疫电极；
4)在免疫电极表面滴加质量分数为0.25％牛血清白蛋白封闭非特异性活性位点，在37℃条件下孵育30～40分钟，取出，水洗，于室温下放置晾干于4℃保存；
5)将特异性抗原蛋白滴加在电极上用于捕捉抗体，于37℃反应40～60分钟，反应完成后用磷酸盐缓冲溶液冲洗去掉未结合的蛋白样品；
6)将CdTe@MOFs/CdTeQDs复合物标记的抗体共耦合物滴在电极上与抗原特异性识别，37℃下反应80～100分钟，用磷酸盐缓冲溶液洗涤3次以除去非特异性吸咐的共耦合物，于4℃保存备用。
优选的：所述Au@TiO2纳米复合物的制备方法如下：
1)将四甲基氢氧化铵滴加到含有超纯水的两口圆底烧瓶中，将烧瓶在冰浴的条件下使溶液温度降至2℃，然后在剧烈搅拌的条件下将异丙醇钛的异丙醇溶液逐滴加至烧瓶中，滴加完后继续搅拌10～20分钟，撤去冰浴转为加热装置，在温度为90～100℃加热回流12～15小时；
2)将经步骤1)反应后的溶液转入反应釜中，在175℃条件下，反应4小时，自然冷却后离心得白色固体，用超纯水洗涤后分散于超纯水中于4℃下保存备用；
3)将1wt％的HAuCl4·4H2O稀释到步骤2)所述的超纯水中，在剧烈的搅拌下，加入1wt％柠檬酸钠，煮沸10～15分钟后继续搅拌15～20分钟，将溶液冷却并在4℃下储存得带负电荷的AuNPs；
4)将PDDA滴加到TiO2溶液并在4℃下搅拌过夜，离心洗涤除去多余的PDDA，得到PDDA功能化的TiO2溶液；
5)将步骤3)得到的带负电荷的AuNPs滴加到步骤4)得到的PDDA功能化的TiO2溶液中并搅拌制备Au@TiO2纳米复合物，将制得的Au@TiO2纳米复合物离心，用超纯水洗涤2次除去过量的试剂得Au@TiO2纳米复合物，重悬于超纯水中。
优选的：所述CdTe@MOFs/CdTeQDs复合物标记的抗体共耦合物的制备方法如下：
I、CdTe QDs的制备：
将CdCl2·2.5H2O溶于超纯水，接着将柠檬酸钠，亚碲酸钠，3-巯基丙酸和硼氢化钠依次加入上述溶液中搅拌3～5分钟混合均匀，将所得的混合溶液转移到圆底烧瓶中，并在120～130℃下加热回流8～10小时，自然冷却，得到的CdTe QDs用乙醇离心洗涤后分散于乙醇溶液或超纯水中于4℃下保存备用；
II、CdTe@MOFs的制备：
将聚乙烯吡咯烷酮充分搅拌溶解于N,N-二甲基甲酰胺和乙醇混合溶液中，所述混合溶液中N,N-二甲基甲酰胺甲基甲酰胺和乙醇的质量为18:11，聚乙烯吡咯烷酮与混合溶液的质量体积比为100:15，将CdTe QDs乙醇溶液在搅拌条件下逐滴加入在上述混合溶液中，所述CdTe QDs与混合溶液质量体积比范围3.3％～4％，将六水合硝酸锌和2-氨基-对苯二甲酸的二甲基甲酰胺溶液与上述溶液混合后，将所得混合溶液超声处理20～30分钟，然后将其转移至内衬聚四氟乙烯的不锈钢高压反应釜中密封，置于烘箱中在90～100℃温度下反应20小时，自然冷却至室温，离心，依次用二甲基甲酰胺和乙醇洗涤，得到产物CdTe@MOFs；
III、CdTe@MOFs/CdTeQDs复合物与抗体共耦合物的制备：
取制备好的CdTe QDs水溶液中加入新配置的EDC和NHS混合溶液，在4℃下搅拌并加入上述制备好的CdTe@MOFs，所述CdTe QDs与CdTe@MOFs的质量比为5:1，并在4℃下继续搅拌8～10小时，反应完成后，便制得CdTe@MOFs/CdTeQDs复合物，继续加入新配置的EDC和NHS混合溶液搅拌，将抗体蛋白加入上述CdTe@MOFs/CdTeQDs复合物混合溶液中在4℃下搅拌反应过夜，接着离心，用超纯水洗涤后，重悬于超纯水中，继续加入BSA在4℃下搅拌反应1～2小时，便制得了CdTe@MOFs/CdTeQDs复合物与抗体共耦合物，所得产物保存于4℃下。
进一步，步骤5)及6)所述磷酸盐缓冲溶液的pH值为7.4。
2、根据所述制备方法制备的基于CdTe@MOFs/CdTeQDs复合物的电致化学发光免疫传感器。
3、基于CdTe@MOFs/CdTeQDs复合物的电致化学发光免疫传感器的检测方法，步骤如下：
1)使用电化学工作站的三电极体系进行测试，Ag/AgCl电极作为参比电极，铂丝电极作为对电极，所制备的电致化学发光免疫传感器作为工作电极，将电化学工作站和化学发光检测仪连接在一起将光电倍增管高压设为800V，电位扫描速度设为200mV/s，扫描范围为-1.5～0V(vs.Ag/AgCl)；
2)在含有S2O8 2-的PBS缓冲溶液中，通过电化学发光系统对免疫电极进行连续ECL扫描，检测对不同浓度的待测物抗原产生的电化学发光信号强度，绘制工作曲线。
4、基于CdTe@MOFs/CdTeQDs复合物的电致化学发光免疫传感器用于检测cTnI的应用。
本发明的有益效果在于：
本发明涉及一种基于金属有机骨架材料内部及表面固载量子点复合材料的电致化学发光免疫传感器的构建及应用。该金属有机骨架材料固载的量子点的复合材料用于固载生物识别元件抗体，基于抗体-抗原的特异性反应将该复合物固载于电极表面进行相关电致化学发光分析检测。该检测集特异性免疫反应、信号产生与分析物检测为一体，具有特异性强、反应速度快、操作简便且能实现微型化等特点。另外，本发明具有灵敏度高、选择性好、稳定性好等优点，能够有效地实现各种目标物的检测。
附图说明
为了使本发明的目的、技术方案和有益效果更加清楚，本发明提供如下附图：
图1表示ECL响应值与cTnI浓度的对数值的标准曲线。
具体实施方式
下面对本发明的优选实施例进行详细的描述。实施例中未注明具体条件的实验方法，通常按照常规条件或按照制造厂商所建议的条件。
实施例1
一种基于CdTe@MOFs/CdTeQDs复合物的电致化学发光免疫传感器的制备方法如下：包括以下步骤：
1)依次用0.3、0.05μm的氧化铝粉末对直径为4mm的玻碳电极进行抛光，先用超纯水清洗干净，再分别在超纯水、乙醇、超纯水中超声洗涤，晾干备用；
2)在电极表面滴加5μL，质量分数为24％的Au@TiO2纳米复合物并室温下晾干得修饰电极；
3)在修饰电极表面滴加15μL，质量分数为4％的抗体，4℃静置孵育10～12小时，用超纯水漂洗，得到免疫电极；
4)在免疫电极表面滴加质量分数为0.25％牛血清白蛋白封闭非特异性活性位点，在37℃条件下孵育30分钟，取出，水洗，于室温下放置晾干于4℃保存；
5)将特异性抗原蛋白滴加在电极上用于捕捉抗体，于37℃反应60分钟，反应完成后用pH值为7.4的磷酸盐缓冲溶液冲洗去掉未结合的蛋白样品；
6)将CdTe@MOFs/CdTeQDs复合物标记的抗体共耦合物滴在电极上与抗原特异性识别，37℃下反应80分钟，用pH值为7.4的磷酸盐缓冲溶液洗涤3次以除去非特异性吸咐的共耦合物，于4℃保存备用。
所述Au@TiO2纳米复合物的制备方法如下：
1)将四甲基氢氧化铵滴加到含有超纯水的两口圆底烧瓶中，将烧瓶在冰浴的条件下使溶液温度降至2℃，然后在剧烈搅拌的条件下将异丙醇钛的异丙醇溶液逐滴加至烧瓶中，滴加完后继续搅拌20分钟，撤去冰浴转为加热装置，在温度为90～100℃加热回流12小时；
2)将经步骤1)反应后的溶液转入反应釜中，在175℃条件下，反应4小时，自然冷却后离心得白色固体，用超纯水洗涤后分散于超纯水中于4℃下保存备用；
3)将1wt％的HAuCl4·4H2O稀释到步骤2)所述的超纯水中，在剧烈的搅拌下，加入1wt％柠檬酸钠，煮沸10～15分钟后继续搅拌15～20分钟，将溶液冷却并在4℃下储存得带负电荷的AuNPs；
4)将PDDA滴加到TiO2溶液并在4℃下搅拌过夜，离心洗涤除去多余的PDDA，得到PDDA功能化的TiO2溶液；
5)将步骤3)得到的带负电荷的AuNPs滴加到步骤4)得到的PDDA功能化的TiO2溶液中并搅拌制备Au@TiO2纳米复合物，将制得的Au@TiO2纳米复合物离心，用超纯水洗涤2次除去过量的试剂得Au@TiO2纳米复合物，重悬于超纯水中。
所述CdTe@MOFs/CdTeQDs复合物标记的anti-cTnI共耦合物的制备方法如下：
I、CdTe QDs的制备：
将CdCl2·2.5H2O溶于超纯水，接着将柠檬酸钠，亚碲酸钠，3-巯基丙酸和硼氢化钠依次加入上述溶液中搅拌3～5分钟混合均匀，将所得的混合溶液转移到圆底烧瓶中，并在120～130℃下加热回流8～10小时，自然冷却，得到的CdTe QDs用乙醇离心洗涤后分散于乙醇溶液或超纯水中于4℃下保存备用；
II、CdTe@MOFs的制备：
将0.2g聚乙烯吡咯烷酮充分搅拌溶解于18mL的N,N-二甲基甲酰胺和11mL的乙醇混合溶液中，将1mL CdTe QDs乙醇溶液在搅拌条件下逐滴加入在上述混合溶液中，将73.5mg的六水合硝酸锌和19.6mg的2-氨基-对苯二甲酸、6mL二甲基甲酰胺溶液与上述溶液混合后，将所得混合溶液超声处理20～30分钟，然后将其转移至内衬聚四氟乙烯的不锈钢高压反应釜中密封，置于烘箱中在90～100℃温度下反应20小时，自然冷却至室温，离心，依次用二甲基甲酰胺和乙醇洗涤，得到产物CdTe@MOFs；
III、CdTe@MOFs/CdTeQDs复合物与anti-cTnI共耦合物的制备：
取制备好的CdTe QDs水溶液中加入新配置的EDC和NHS混合溶液，在4℃下搅拌并加入上述制备好的CdTe@MOFs(所述CdTe QDs与CdTe@MOFs的质量比为5:1)，并在4℃下继续搅拌8～10小时，反应完成后，便制得CdTe@MOFs/CdTeQDs复合物，继续加入新配置的EDC和NHS混合溶液搅拌，将抗体蛋白加入上述CdTe@MOFs/CdTeQDs复合物混合溶液中在4℃下搅拌反应过夜，接着离心，用超纯水洗涤后，重悬于超纯水中，继续加入BSA在4℃下搅拌反应1～2小时，便制得了CdTe@MOFs/CdTeQDs复合物与抗体共耦合物，所得产物保存于4℃下。
应用实施例1采用实施例1所制备的免疫传感器对cTnI的标准溶液进行检测
1)将制备好的免疫电极分别孵育不同浓度的cTnI标准溶液，于37℃反应40～60分钟，反应完成后用PBS冲洗去掉未结合的蛋白样品；
2)将与cTnI标准溶液反应后的电极上孵育CdTe@MOFs/CdTeQDs复合物与anti-cTnI共耦合物溶液中，在37℃下反应80～100分钟。用PBS溶液洗涤3次，以除去非特异性吸咐的共耦合物；
3)电致化学发光检测采用三电极体系，免疫电极为工作电极，铂丝电极作为对电极，Ag/AgCl(饱和KCl溶液)作为参比电极。在含有S2O8 2-的PBS缓冲溶液中对免疫电极进行连续ECL扫描，并记录下稳定扫描得到的ECL响应值。电位扫描速度为200mV/s，光电倍增管设为800V，扫描范围为-1.5～0V(vs.Ag/AgCl)；
4)免疫传感器电流响应信号的检测基于夹心反应模式，固载在电极表面的抗体分子与样品溶液中的抗原分子发生免疫反应后，再与CdTe@MOFs/CdTeQDs标记的anti-cTnI共耦复合物结合。基于CdTe@MOFs/CdTeQDs标记的anti-cTnI共耦复合物的ECL特性，测得的ECL响应值随抗原浓度的增加而增强，其变化与结合的抗原蛋白的浓度的对数成正比例关系。将三次ECL连续扫描得到的稳定ECL响应峰值求平均值，与cTnI标准溶液的浓度的对数作图，得到图1所示的标准曲线，其线性响应范围为1.1fg/mL～11ng/mL。
应用实施例2采用实施例1所制备的免疫传感器对人体血清样品进行检测
1)新鲜的人体血清样本稀释cTnI溶液，配置成一系列不同浓度的cTnI样品溶液；
2)将制备好的免疫电极分别与血清样品稀释的cTnI溶液，于37℃反应40～60分钟。反应完成后用PBS冲洗去掉未结合的蛋白样品；
3)将与cTnI样品溶液反应后的电极上孵育CdTe@MOFs/CdTeQDs复合物与anti-cTnI共耦合物溶液中，在37℃下反应80～100分钟。用PBS溶液洗3次，以除去非特异性吸咐的共耦合物；
4)电致化学发光检测采用三电极体系，免疫电极为工作电极，铂丝电极作为对电极，Ag/AgCl(饱和KCl溶液)作为参比电极。在含有S2O8 2-的PBS缓冲溶液中对免疫电极进行连续ECL扫描，并记录下稳定扫描得到的ECL响应值。电位扫描速度为200mV/s，光电倍增管设为800V，扫描范围为-1.5～0V(vs.Ag/AgCl)；
5)将三次ECL连续扫描得到的稳定ECL响应峰值求平均值，对照cTnI标准曲线(图1B)得到测得的每个样品的cTnI含量，来计算回收率。具体结果见表1。
表1实际样品检测数据
由表1所示数据可以看出，通过本方法检测出来的cTnI浓度与实际加入浓度非常接近，这说明本检测方法灵敏准确，能够有效地实现目标物的检测。
最后说明的是，以上优选实施例仅用以说明本发明的技术方案而非限制，尽管通过上述优选实施例已经对本发明进行了详细的描述，但本领域技术人员应当理解，可以在形式上和细节上对其作出各种各样的改变，而不偏离本发明权利要求书所限定的范围。

Claims (6)

1.一种基于CdTe@MOFs/CdTe QDs复合物的电致化学发光免疫传感器的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
1）依次用0.3、0.05 μm的氧化铝粉末对直径为4 mm的玻碳电极进行抛光，先用超纯水清洗干净，再分别在超纯水、乙醇、超纯水中超声洗涤，晾干备用；
2）在电极表面滴加5 μL，质量分数为20% ~ 25%的Au@TiO2纳米复合物，室温下晾干得修饰电极；
3）在修饰电极表面滴加15 μL，质量分数为2% ~ 5%的抗体，4 ℃静置孵育，用超纯水漂洗，得到免疫电极；
4）在免疫电极表面滴加质量分数为0.25%牛血清白蛋白封闭非特异性活性位点，在37℃条件下孵育30 ~ 40分钟，取出，水洗，于室温下放置晾干于4 ℃保存；
5）将特异性抗原蛋白滴加在电极上用于捕捉抗体，于37 ℃反应40 ~ 60分钟，反应完成后用磷酸盐缓冲溶液冲洗去掉未结合的蛋白样品；
6）将CdTe@MOFs/CdTe QDs复合物标记的抗体共耦合物滴在电极上与抗原特异性识别，37 ℃下反应80 ~ 100分钟，用磷酸盐缓冲溶液洗涤3次以除去非特异性吸咐的共耦合物，于4 ℃保存备用。
2.根据权利要求1所述一种基于CdTe@MOFs/CdTe QDs复合物的电致化学发光免疫传感器的制备方法，其特征在于：所述Au@TiO2纳米复合物的制备方法如下：
1）将四甲基氢氧化铵滴加到含有超纯水的两口圆底烧瓶中，将烧瓶在冰浴的条件下使溶液温度降至2 ℃，然后在剧烈搅拌的条件下将异丙醇钛的异丙醇溶液逐滴加至烧瓶中，滴加完后继续搅拌10 ~ 20分钟，撤去冰浴转为加热装置，在温度为90 ~ 100 ℃加热回流12 ~ 15小时；
2）将经步骤1）反应后的溶液转入反应釜中，在175 ℃条件下，反应4小时，自然冷却后离心得白色固体，用超纯水洗涤后分散于超纯水中于4 ℃下保存备用；
3）将1wt% 的HAuCl4•4H2O稀释到步骤2）制备的分散有白色固体的超纯水中，在剧烈的搅拌下，加入1wt% 柠檬酸钠，煮沸10 ~ 15分钟后继续搅拌15 ~ 20分钟，将溶液冷却并在4℃下储存得带负电荷的AuNPs；
4）将PDDA滴加到TiO2溶液并在4 ℃下搅拌过夜，离心洗涤除去多余的PDDA，得到PDDA功能化的TiO2溶液；
5）将步骤3）得到的带负电荷的AuNPs滴加到步骤4）得到的PDDA功能化的TiO2溶液中并搅拌制备Au@TiO2纳米复合物，将制得的Au@TiO2纳米复合物离心，用超纯水洗涤2次除去过量的试剂得Au@TiO2纳米复合物，重悬于超纯水中。
3.根据权利要求1所述一种基于CdTe@MOFs/CdTe QDs复合物的电致化学发光免疫传感器的制备方法，其特征在于：所述CdTe@MOFs/CdTe QDs复合物标记的抗体共耦合物的制备方法如下：
I、CdTe QDs的制备：
将CdCl2•2.5H2O溶于超纯水，接着将柠檬酸钠，亚碲酸钠，3-巯基丙酸和硼氢化钠依次加入上述溶液中搅拌3 ~ 5分钟混合均匀，将所得的混合溶液转移到圆底烧瓶中，并在120~130℃下加热回流8 ~ 10小时，自然冷却，得到的CdTe QDs用乙醇离心洗涤后分散于乙醇溶液或超纯水中于4 ℃下保存备用；
II、CdTe@MOFs的制备：
将聚乙烯吡咯烷酮充分搅拌溶解于N,N-二甲基甲酰胺和乙醇混合溶液中，所述混合溶液中N,N-二甲基甲酰胺甲基甲酰胺和乙醇的质量为18:11，聚乙烯吡咯烷酮与混合溶液的质量体积比为100:15，将CdTe QDs乙醇溶液在搅拌条件下逐滴加入在上述混合溶液中，所述CdTe QDs与混合溶液质量体积比为3.3% ~ 4%，2-氨基-对苯二甲酸的二甲基甲酰胺溶液和六水合硝酸锌与上述混合溶液混合后，将所得混合溶液超声处理20 ~ 30分钟，然后将其转移至内衬聚四氟乙烯的不锈钢高压反应釜中密封，置于烘箱中在90 ~ 100 ℃温度下反应20小时，自然冷却至室温，离心，依次用二甲基甲酰胺和乙醇洗涤，得到产物CdTe@MOFs；
III、CdTe@MOFs/CdTe QDs复合物与抗体共耦合物的制备：
取制备好的CdTe QDs水溶液中加入新配置的EDC和NHS混合溶液，在4 ℃下搅拌并加入上述制备好的CdTe@MOFs，所述CdTe QDs与CdTe@MOFs的质量比为5:1，并在4 °C下继续搅拌8 ~ 10小时，反应完成后，便制得CdTe@MOFs/CdTe QDs复合物，继续加入新配置的EDC和NHS混合溶液搅拌，将抗体蛋白加入上述CdTe@MOFs/CdTe QDs复合物混合溶液中在4 ℃下搅拌反应过夜，接着离心，用超纯水洗涤后，重悬于超纯水中，继续加入BSA在4 ℃下搅拌反应1~ 2小时，便制得了CdTe@MOFs/CdTe QDs复合物与抗体共耦合物，所得产物保存于4 ℃下。
4.根据权利要求1所述一种基于CdTe@MOFs/CdTe QDs复合物的电致化学发光免疫传感器的制备方法，其特征在于，步骤5）及6）所述磷酸盐缓冲溶液的pH值为7.4。
5.权利要求1~4任一项所述制备方法制备的基于CdTe@MOFs/CdTe QDs复合物的电致化学发光免疫传感器。
6.权利要求5所述的基于CdTe@MOFs/CdTe QDs复合物的电致化学发光免疫传感器的检测方法，其特征在于，步骤如下：
1）使用电化学工作站的三电极体系进行测试，Ag/AgCl电极作为参比电极，铂丝电极作为对电极，所制备的电致化学发光免疫传感器作为工作电极，将电化学工作站和化学发光检测仪连接在一起将光电倍增管高压设为800 V，电位扫描速度设为200 mV/s，扫描范围为-1.5~0 V (vs. Ag/AgCl)；
2）在含有S2O8 2−的PBS缓冲溶液中，通过电化学发光系统对免疫电极进行连续ECL扫描，检测对不同浓度的待测物抗原产生的电化学发光信号强度，绘制工作曲线。
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